一种在盖玻片上进行组织切片原位杂交的方法

方法

78(总78)

基础医学与临床

BASICMEDICALSCIENCESANDCLINICS1998,18(I)

escapingfromthelungsurface(APEL),amoufltofperfusate,thecellsinbreachonlveolarlavage

(BAL)andthepathologicalthangeoflungwereobservedinthepresentstudy.Theresults showedthat:1.oAchallengecouldinducebiphasicbronchocons*.ric*AoninoAsensitizedrats.

The1stpeakappearedwithin4rainandthe2ndpeakappearancevariedfrom2to4hoursafter OAchallenged.2?APELdecreasedsignificantlyinOAchallengedratscomparedwiththoseof

normalandsensitizedcontrols,anditincreasedsisnificantlyaftertheaminopllineperfusatecorn-

paredwiththatofbeforeadministrationofaminophlline.Butnoeffectofaminophllinewas foundinnormalandsensitizedcontrolrats.3.Thepathologicalfindingoflungwereepithelium

shedding,bronchialconstriction,bronchialandpulmonaryvascularedemaandmUCOUShypcr—

secretion.AtthesRmetime,theinfiammatorycells,whichincludedeosinophiis,neutrophils, lymphocytesandmacrophagcs,werealsofoundintheairwayandairwaylumenofasthmatic rats.4.TheneutrophiB,lymphocyteseosinophilsandmacrophages,werealsofouninBALof asthmaticrats.Allaboveresultsshowedthattheanimalmodelofasthmawassuccessfullycstab—

lishedinratsbyOAsensitizationandthefollowedoAchallenge.

Keywordsasthmamodelrats

*InstituteofBasicMedicalSciences.PUMCandCAMS,Beijin8100005) (上接第8O页)

4.Cephalonlnc.We~tehester.PA.USA?Detection

ofneuronaltuRNAoftheratpituitaryparsInter—

mediawithaDIG—tailedoligonucleotideprobefor

proopiomelano—cortin(POMC).Nonradioactive

InSituHybridizationApplicationMannM.Get

many;BoehringerMannheimBiochemicals,】992

52—54

InSituHybridizationofTissueSectionsonCover—slips

WangSongyanZhangShiyiSanZhimingL|uJie

(InstituteofBasicMedirmls

?.es.ChineseAc~emyofMedialSciences&PekingUnionMedJ~lCoUege,Beijin$ 100005)

Anewmethodforinsituhybridizationtotissuesectionsoncover—supswasestablished?,

Frozentissuesectionswerecutwithacryostatandmountedonroundcover-slips,thenputinto wellsofacellcultureplate,whichhadbeenpreparedandtheirsizeswereadaptedtoseCtions.In

thewells,allprocedurescouldbeinprocess,whichincludedfixation,pretreatments,hybridiza—

tionandjmmonologicaldetection.ThismethodissimIpie,efficientandeconomical? Keywordsinsiluhybridizationcover—clipcellcultureplatefrozent~sucsection

————]__?丁r

基础医学与临床

998,18(1)BASICMEDICALSCIENCESANDCLINICS79(总79)

77,7L**在盖玻片上进行组织切片原位Za交的方法?

Wang松岩张世锁志明刘洁

(中国医学科学院中国协和医科大学基础医学Yan究所,北京100005)

Zhai要划出大小合适的圆形玻片,经处理后,贴Fu上制备的冰冻组织切片并放入细胞

培养

Ban孔中.经固定及预处理后即可在板孔中进行Yuan位杂交的一切步骤本方法简便易

行,重复性好,

Bing可节省较多试剂,为组织切片原位杂交提供Liao一种经济可靠的方法.

关麓词要燮墨堕望

Mu前常用的组织切片原位杂交方法一般均在Zai玻片上进行,但是由于所耗用溶液及试剂Liang过多,不仅造成了许多浪费,而且杂交条Jian有许多不利之处.我们近年来采用在圆形Gai玻片上进行组织切片原位杂交,可以克服Shang面诸缺点,尤其操作较为简便.现以大鼠 Nao组织切片原位杂交检测mRNA为例简介 Ru下.

一

,玻片的准备和冰冻组织切片的制备: 以玻Li刀和划圆模板在盖玻片上划出大小合适的Yuan形玻片,经过泡酸,烤干并依次用 Denhart,EAA及缓冲乙酸酐等溶液处理,Zai 用梯度酒精脱水,自然晾干后保存备用.Shi验用大鼠断头处死,迅速分离目标脑组织,经液氮速冻后于一20C恒冷籍切片机中Zhi成10 ,

2m厚的脑组织切片,贴附在预先准备的圆Xing玻片上,然后放入12孔细胞培养板孔中(如组织切片直径较小,缩小圆玻片的直径 Hou也可放入2d孔培养板孔中).室温下晾干切片后,用含4多聚甲醛的磷酸缓冲液固

Ding30rain,再以磷酸缓冲液浸洗两次,Zui后待切片晾干置于一70C贮存备用(也Ke在每孔中加入含15蔗糖的磷酸缓冲液于Yi2O? ?国家自然科学基金资助项目No.39470253

组斤

贮存.

Er,杂交前切片预处理及原位杂交简要过程:杂交前取出装有切片的细胞培养板进行必Yao的预处理.先加入含0.3TritonXYi 100的磷酸缓冲液于37"C下孵育30min,接着以0.2,0.5NHCIJin片10rain,最后加入 3O,50mg/L蛋白酶K溶液于37C下孵育 30min,并以2×SSC溶液洗片.预处理完成后,加入杂交缓冲液于d2?下孵育2,3h. 杂交时用含已变性的地高辛标记的

Di加在每张切片上(每 cDNA探针的杂交Ye,

Zhang切片上约滴加30,41),使之均匀分布Yu 组织切片上(即液体薄层平摊并附着于圆Bo 片表面),再盖上盒盖并以胶条密封后水Ping静置于42?孵育温箱中杂交16,18h然后以梯度溶度SSC溶液在37?摇床Shang洗片,并用按1z500,1:2000Bi例稀释的地高辛抗体溶液进行免疫组织化Xue反应(室温下2, 3h)最后每孔加入300F1含左旋咪唑的显色液,避光水平静Zhi于暗盒中显色,完成后以 TE(pH8.0)终止显色反应,并脱水,封片. 三,本Fang法优点是:?全部过程可在细胞培养板孔Zhong进行,每孔只需加液250,300M

清洗和存放盖玻片的几点体会

Qing洗和存放盖玻片的几点体会

Du理学杂志2006年8月第2o卷第4期JToxicolAugust2006Vo1.20No.4

中围分类号:11446文献标识码:B文Zhang编号:1002—3127(2oo6)o4—0271—01

清洗和存放盖玻片的几点体会

汤鸿

(无锡市第二人民医院病理科,江苏无锡214002)

关键词:盖玻片;清洗方法;存放

在病理制片过程中,需要用到大量的不同规Ge的

盖玻片.市售盖玻片有2种,一种为免清洗De,可直接

使用;另一种为使用前需清洗处理的.但以Shang2种均

会因售前或售后保管不当和存放时间长而易Shou潮,表

面滋生霉菌,盖玻片变得模糊,从而降低组Zhi切片的清

晰度,影响制片质量.我们通过下述方法清Xi和存放

盖玻片,经多年使用,效果评估和显微镜下Zhui踪观察,

效果较佳,现具体介绍如下:

1材料与方法

1.1材料不同规格的盖玻片(24mlnX24mln,24

rainX32mm,24mmx40mm,24mmx50mm),2000ml

的平口玻瓶2个,长柄镊子,搪瓷面盆,橡Jiao手套,清洁

Ye(配方:重铬酸钾300g,浓硫酸300ml,蒸馏水3000

IIl1)?J,体积分数为95%的乙醇1000ml.

1.2方法

(1)将同一种规格大小的盖玻片逐片放入Nei装有

1500ml清洁液的2000ml平口玻Ping中,完全浸没,时

间1.0h;(2)戴好橡胶手套,先倒出Qing洁液到另一2000

TIll平口玻瓶,且将盖玻片取出放入搪Ci面盆中,用自

来水流水冲洗,时间1.0h,并经常用长Bing镊子搅动,使

玻片上附着的黄色清洁液彻底洗净,盖玻片Qing澈,透

亮;(3)将盖玻片从水中取出,放入体积Fen数为95%的

乙醇中,时间30min,37cI=烘箱Nei,待干后驱除碎玻

片,用白色纱布擦净后,整理入盒,存放于37cI=烘箱内

备用;(4)其他规格大小的盖玻片同上述Fang法清洗处理

和存放.

2结果与讨论

经过上述方法清洗处理和存放的盖玻片,玻Pian表

面光洁明亮,无油脂,霉菌,存放数年也不Hui出现受潮

霉变现象.

作者简介:汤鸿,医学学士,研究方向:病Li学技术.

技术与方法?

制作一张优质的病理切片受到多种因素的影Xiang,

Ru果使用的盖玻片在外界环境中存放,盖玻片Nan免会

受潮,表面极易滋生霉菌,使用这种盖玻片Feng固组织切

片,显微镜下视野模糊不清呈云雾状,严重Ying响组织的

清晰度,有时影响病理诊断.

驱除盖玻片表面的霉菌和油脂通常使用化学Qing洁

液浸泡法,其内含有浓硫酸,高锰酸钾.硫Suan为强酸,

高锰酸钾为强氧化剂,能够使溶于酸和可被Yang化的物

质驱除,因此能够很容易地将盖玻片上的油Zhi,污物及

霉点和霉斑彻底清除.浸泡时间一般1h为Yi,时间

太长,会使本来小,薄及易碎的盖玻片更加Yi碎,增加

损耗.

清洁液中硫酸腐蚀性大,而且浸泡时玻片会Hu相

紧贴,会出现不易冲洗干净的问题,故需流Shui冲洗1h

以上,需经常用镊子搅动.

使用乙醇的目的在于驱除盖玻片上的水分,Bi免

盖玻片烘干后表面留有水渍,且乙醇挥发快,能够缩短

烘干盖玻片的时间.在浸泡,冲洗及烘干盖Bo片时,注

意将盖玻片分开,不要紧贴在一起,以便浸Pao和冲洗干

净及烘干后不留水渍.清洗时应将同一规格De盖玻片

处理,避免因不同规格造成清洗,整理不便.清洗整理

好的盖玻片存放于37cI=烘箱内,烘箱Nei干燥,即使长

时间存放也不会出现霉变现象.

参考文献:

[1]龚志锦,詹熔洲.病理组织制片和染Se技术.上海:上海

科学技术出版社.1994:387.

[2]黄亚凤.强欣.王玉荣.石蜡切片HE染色体会.内蒙古民

族大学(自然科学版).2004,19:436.437

(收稿日期:2006—02—08)

真菌的盖玻片培养及扫描电镜片的制作_韩利刚

Di 1卷第期 1 (2粥年 )Yue

南

京医军学院学报 a

N2or

Jng

M9 Cd oM 9l

Pe tn

9 9 1

N1 5

一 6~ 一

、、

火

二

二二二

.方与法_

一一

尸

Zhen 菌的盖玻片培养及描扫电镜的片作

制韩利刚轰宏

俊( 南京军学医院病原教学研室南

,京

,1 2

)

摘要

9介绍一种用利盖玻片制作丝状菌盖真片标本可Bing利用制成的盖片本进Biao一步制作

。扫

描

Dian 镜玻片标的方本法

关健

词

真菌盖;玻培片养 ; 扫描Dian镜

菌真的培养方有多法种目前比常用较] [的载是玻片培法养1 用利玻片盖培真

养。

要

Zhu意不要使们它此彼间 Zhi 互相叠

“压”

2。

Ti 水固琼可脂起湿室的作用供提真菌生长期间所需的湿

度。

菌

Mu前国内尚未见报道

。

Men我参在前考人

、用

Jie种针在附有培基养

。

工作

Ji 的上利础用玻盖片培养Zhi 作真菌

的

Mo薄的盖玻片中央种接菌

Jun真于无菌条件下进行, 。

Yi上各步操作,

玻

Pian 标本利并用制成盖的 Pian标进本一步

制

Shang皿盖盖平板将倒。

作

Sao 描电镜玻片标本1

。

Zhi 放于2 8 ℃ 温恒箱培中Yang

周后定期一

,材料与法材方料.

Zai倍低镜下察观接所种

,菌 ,

。菌种成熟后

在盖玻片上加 95 %酒精一

1供试

菌

种

、

-滴固定 (挥发即可 )然后小将心盖玻片

从2%

外)瓶霉菌( &人i 叩o a霉瓶菌( hP 诫叩 h

水

Qiong 脂平板中移出

。

Qu 一清洁的玻片载

。

山)

Jun为本室保存种菌主要试Ji及器

材2%

。

在其

Shang 加一乳酚滴棉兰试剂

将

盖片玻倒,

转

轻轻盖于滴有乳酚棉兰 De载玻片上注意 9

固

Ti 琼脂平水板 ( 脂琼 0

2水

仪x

〕

Bi 免气泡的产生

。

Dui 典型的材料可用加

拿

。

Er高压菌灭后使用 ); Pian2 ; 戊 %二

醛

;

、

Pei 养 ;基镊子酒

Jiao 封大固起来制成标本 Cun保1

. 制成的标本。

精灯

;接种针; 玻盖 (片 2

13 、

~PB

)~ ;载玻

;

在可通显微镜普观下察 Ji并录果

结 2 .2

、

溶

液; l% 酸饿

溶% 液5 0 7% 0 %

910 %

系

列乙醇溶液

扫电镜描片的制 t 扫描作 Dian 镜片的作制基采用本王端礼等, 。

’

]醋

酸戊异醋

121 2

. .

。

的

Fang 法有些步骤略调作整 Jun 种在

法

方.

盖

玻片上培养方法前

同

。1

菌种的盖玻片养

A培

菌

种熟成后取

Xia 玻盖片在 ,

4℃ 3,

冰箱用

中,

将 D

,体固培养溶基化使之液Cheng 体状一

戊

二醛固定

、

Zh 1%、

;

溶S 洗液

次每次1

并态保持 5

℃ 的0 度温 ;用镊子将菌Wu6 P

而

n;再浸于泡

E 溶酸液中5 %

。9、

4℃

下

Zh 左。

Gai的玻片夹起轻轻浸人化融的,

培养

基

右

; 用5 0% 水 10而步均Zai

, 0 7

%系列

乙各醇脱m

, 并迅中速抽出在盖玻片 Shang 就会粘一附层很

醋

Suan戊醋异置 2换0

下进行。

以上各

。

Bao 的养培基薄膜片刻即凝固盖将玻水平

片;

4℃

Lin 点界干燥真空金

Du人移含无有菌

的%

2固体

水琼脂的平板

Biao 制好的扫电镜描本标可Zai 扫描电子显镜微下观并Cha记结录

果面

在个一平中板最多可放置

盖块片玻但

第 2

1 第卷期3 创1 年为9 月 ,

南

Jing 医军院学学报

lM d o 1 1 JN ol J崛 M

i )e

. VO跳

le t

2 1

侧 dr

11飞珍

班1

,养

Xiang 中培直至达养到所要求的生长段阶〔〕 `

我

们经过实验认为在沾浸Gai玻片时除

PD A

Gai,玻片培与养常规的载玻片培养相比较不

Wai 可还用合符真菌生长需 Yao的他其培 ,

需

Yao细心准备湿室不必担 Xin 盖玻上少片量

De 培养基在短会时间干内Tou 而且只用一

,个

Yang基如SG A MC A等

体具哪一用种培

。

养

Ji 应视真菌生长所需条 Jian而

定%2

选用

。

培养培皿养一次便制作可枚片多子

。

因而

的

Shui琼脂培养基也能常获得满意效的果

前

Zhe 比后更者单简工作量小而且更同样可以

获满意得的效果,

水琼脂

培养基是真菌分离最为 Chang 见而

。且

。

这于需对要制作大量的 ,

效果良

Hao的培养基

,阎

Zhe 种养培基养营较,

Bo 片标本来进行观察研和Jiu 的科技人员来说

Wu 是疑十分必要的在

备制描扫电镜真的样菌本时通常是

Shao,因而丝生菌长较为稀 Shu 在显微镜更易

下察

。

观

将块真小菌从养基培上切Qu 下来然后再

Xing 样进品处理位形态改变

但

Zai 取样时容易改真变菌在

培

参

考

文

.献

基养上自的着然生态状 Wai使力造成观察部

Zhou。德庆主编微生物学实验Shou册上版海

社,

L海科学技术出

Wo们直接利用制得的盖玻标片

9 8 6

胡

一

Zhi本扫作电镜描片免去 Zai 了取样可时能对品造样 Cheng 的损

,害

王端礼

Li若瑜王晓红等裴氏着色霉的扫描电镜

研

,由于盖玻片积小体于载玻、

究

菌真报学1 肠

.: 1 54

一7

Ri〕土壤微生物研究会编叶 (维青等 ) 土译壤微 Sheng 物【实:

1 邓招验法京北学科出版社

. 9.

片

而因在固定脱水置换真Kong 镀金等骤步

、

胡1弄

05 1 侧刹 31

一

中

Suo 用药品较从而少避免了药品的浪费

。

1 (

男目 10

一

收稿9

2回修

) 枯草多夏糖取提及含量分析

徐爱莲

张魁彪

薛

陈安

(京军医南学生物院化教Xue研室南京听( 京军南Yi 学化学院教研室南京

Yi粥心2 1 0 卯 )2

新李岗顾银娜

摘要

为研

Jiu 夏枯草多糖的血降糖性对夏活枯草多糖进行 Ti取及含分量析

,一。

采用石, 醚油脱」

脂

Fei水浸泡 59 % 乙醇沉淀法从夏枯草中提取多糖用酚苯硫酸分法析量

含为1

0% ,

夏

枯草中糖多含

一

Liang水浸9 %5 乙醇沉淀法 Neng有效提取夏枯草中多糖Qi 含量可采用酚苯硫酸进行法分析

Xia 枯草多苯糖酚酸硫法

;

关词

键;

一

夏

草 (枯p

,枯

属草植物具有清火明目Qing肝散结及消肿之功效 Yong 治于疗肺核结急黄性 Ju 肝型目赤炎肿痛和血高压等症,

、

t。

咖瓜、

、

是)唇形科夏、

(

)仪 1 器:U V 5

,一

4 型外紫可见光度计 (

。

Shang海第三仪器

Chang ) 心机离 (南京市中药材公司 () AR ) ( ) AR

, ,g, 。

: ( 2)药材枯夏草

:( 3) 试剂无乙醇水

、

现

代药理学研、

葡

Tao 糖 ( A R) 浓硫。 Suan妊)毛石油

(4醚 ) 酚苯试剂配制 :Qu苯 (酚A )R 10

究表

明夏草枯有抗菌降糖血Kang 细胞毒和

Kang 滋艾病毒等作

〔用 `

]。

、

。

0据文献测推图夏枯

。

加

丝0

1 铁9

、

加酸氢钠碳。一 .

g蒸馏收集

Cao的降糖作用源于夏枯草 Duo糖

为

此我们

Z℃ r 馏称分取馏分 6该 0o 至0

12n

加蒸9水稀释溜。

对夏枯

草多糖进行了提取及含量分

析

。

d 棕置色瓶内冷藏备用

仪器与试

Xia 枯剂草多糖提的取

用过的血涂片载玻片和盖玻片的清洗回收

生命科学与技术学院

自由设计性实验报告

Ke 程人体解剖生理学实验

Shi验项目用过的血涂片载玻片

和盖玻片的清洗回收

Zhuan 业生物科学

Ban 级 2012级 1 班

Zhi导老师石红艳

二O一四年十二月

Cheng 员文琳何凤侯思宇张雨清 Zhou治成

Yong过的血涂片载玻片和盖玻片的清洗回收

1．实验目的及意义

①了解和学习清洗回收盖玻片和载玻片的方法；

②将已用过的玻片回收再利用，减少实验成本；

③清洁的玻片做出的实验更具准确性。

2. 实验原理

Yi经用过的血涂片玻片简单清洗后，仍残留大Liang油脂等分子和细菌，本实验利用“相似相溶”和高温灭菌等原理对玻片进行回收再利用。洗洁精中的表面活性剂分子会强烈地降低水De表面张力，并能够快速地将污垢润湿，润湿Hou的污垢会膨胀，在膨胀的过程中，污垢与玻Li之间的结合力就会降低，借助物理外力的作Yong，表面活性剂分子会吸附玻璃表面，迫使污Gou与玻璃分离，在润湿和外力的双重作用下，Fen离下来的污垢会分解为更小的微粒，表面活Xing剂分子同时会包围污垢微粒，浮于水中，随Zhuo洗涤的泡沫浮出水面。而肥皂中所含的乳Hua剂使油脂类污渍乳化成为微小的颗粒，减小Fu着力，然后通过搓揉产生的泡沫在清洗物表Mian破裂形成的冲击将污渍从被清洗物表面去除。煮沸的肥皂水更能将玻片上的细菌杀死。

95%酒精浸泡可对玻片上的细菌进行进一步De灭菌，同时，根据相似相溶原理，酒精是非Ji性溶剂(有很弱的极性)，可以去除玻片上De一些极性分子。

3. 实验材、用具及试剂

①材料、用具：用过的载玻片和盖玻片若干；Pen子2个；肥皂1块；小刀1把；干软布2张（或擦镜纸若干）；镊子2个；干燥洁净1000ml、500ml烧杯各2个（或以上，Yi据玻片数量而定。大的装载玻片，小的装盖Bo片。）；毛刷2把；托盘天平；电炉；石棉Wang；水源。

②试剂：

Qing洁液：想盆子里导入少量洗洁精，加入清水，调匀，备用。

5%肥皂水：将一小块肥皂用小刀切碎成近粉Mo状，用托盘太平称取50g肥皂粉置于1000ml烧杯中，加入950ml清水溶解，Jiao匀，备用。（不够再配）

95%酒精：用量筒量取无水乙醇475mlYu500ml烧杯中，加入蒸馏水25ml，Yao匀，备用。（不够再配）

4. 实验步骤

①把已用过的血涂片载玻片和盖玻片在清水下Shua洗干净，再逐片轻轻放入准备好的清洁液中，泡一个晚上；

②用镊子取出后用清水清洗并分类，载玻片和Gai玻片分别放入盛装有肥皂水的大、小烧杯中，电炉煮沸10min；

③冷却后取出玻片，再用毛刷蘸肥皂粉刷洗，Bing用清水冲洗干净；

④再将洗净的载玻片和盖玻片分别浸入盛有95%酒精的大小烧杯中2min；

⑤取出玻片后，用干软布擦干，分装。

5. 注意事项

①在取拿盖玻片时，用力不能太大，且冲洗时，水不能太大；

②用电炉时要加石棉网；

③不能用手直接从95%酒精中取玻片。

【参考文献】

Qian晓祥.张维萍.2008. 基础医学与生Wu医学工程.临床医学工程，15（5）：？

【doc】介绍一种不加盖玻片的核酸原位杂交改良法

Jie绍一种不加盖玻片的核酸原位杂交改良

法

i5e中山医科大学(AcadjsUMS)1993}14(2):156~158 ?

技术交流?

Jie绍一种不加盖玻片的核酸原位杂交改良法

Wu惠茜邵建永林汉良

(病理学教研室)

She曩核酸原位杂交程序中探针和靶基因的加热Bian性和杂空为整个程序中最重要的环节,目前Guo

Nei外最常用的方法是在切片上滴加DNA探针Rong液后用盖玻片复盖组织,并加腔泥或其他封Gu荆封闭玻

Pian四周,变性杂交后需拆除盖玻片,这一操作Guo程易损坏组织切片或出现于片,脱片.作者Zhen对上述

Qing况,对传统的棱酸原位杂交方法中的部分程Xu加强改良,采用不加盖玻片直接在燕汽中变Xing方法,

Jing多次实验证明此方法稳定,可靠,简便,结Guo端意.

Guan?调棱酸}原位杂交}人乳头增病毒

中啊母R一361

He酸原位杂交技术作为分子病理学的一种

Xin方法,近年来得到广泛的开展和应用,不但

Ke应用于冰冻切片,而且可应用于石蜡切片.

He酸原位杂交程序主要有3个步骤:?切片组

Zhi内靶基因的暴露,@核酸探针和靶基因的加

Re变性和杂交j?杂交后检测显色.其中第二

Bu骤为整个程序中最重要的环节,为了保证

DNA探针和靶基因的充分变性和杂交,目前

Guo内外常甩的方法是在切片上滴加DNA探针溶液后甩盖玻片复盖组织,并甩胶泥或其他Feng 固剂封闭四周,然后将切片加热变性,再Yi入 37?温箱内杂交,杂交后需拆脒盖玻Pian转入检测显色步骤.封固及拆除盖玻片过Cheng不仅繁琐,费时,操作失误还可能会损坏Zu织切片或出现脱片.作者对传统的原位杂Jiao中的部分程序加以改良,采用不加盖玻片De方法进行杂交

变性,经1年来多次实验证明此方法稳定,Jian便,结果良好.

材料与方法

Cai料?生物素标记的广谱HPV-DNA 杂Jiao试剂盒(DAKOK602).@HPV原Wei杂交试剂盒和HPV-DNA探针试剂盒(生物素标记)均为美国LifeTechnologiesIne产品. ?蛋白酶BP(江苏无锡酶制品厂).?37?, 48?,100?水浴箱各1个.

Yuan位杂交操作步囊?常规石蜡切片,60 ?Hong片3Q~60min,@二甲苯脱蜡5min2次I ?无水酒精洗1min2次,?95酒精洗1min 2次,?蒸馏水洗3mi"j?0.01蛋白醇BP 消化组织片1O,15rain)?TBS洗5min}? Zai切片上滴加DNA探针溶液,将切片放置 Zai一个密闭的容器内(图1).容器底部应预先加入适量水并加热至100?.盖紧容器Wai 盖,继续加热使水煮沸,让切片在饱和蒸Qi浴中加热变性5rain}?变性完毕将Qie片移入37 ?温箱内杂交1hJ@T卫sXi5rainJ@切片放入预热48?的洗Di液中30rain)@TBs洗

5min)@加入碱性磷酸酶标记的链菌素(st,re--

pavidinalkalinephosphataseconjugated)溶液,室温孵育20min,@T】塔洗5minJ@滴入BCLP/NBT(5-溴一4氯-3-~1噪磷酸盐和氮蓝四唑混合液)室Wen暗处显色10~60min,@ 蒸溜水洗5mini@0.1%核固红复染切片5 min)@酒精脱水,中性树胶封片.

结果与讨论

He酸原位杂交阳性反应为靶基因存在的部

Zuo惠茜,等.介绍一种不加盖玻片的接酸原位Za交改良躅1DNA变性用永谱箱

Wei,一般为细胞核内(圈2),呈蓝色颗粒 Zhuang,若靶基因数量多或显色时间长,则整个细胞核呈一片蓝色,阴性细胞核呈红色. 一Zuo2改良棱酸原位杂交法显示HPV—DNA ^荸L头矗病毒DNA(HPV-UNA)Yang性反应见于细胞棱内

Zuol低倍×50右I高倍x200

Chuan统的核酸原位杂交方法,由于实验所用的Hong箱温度高丽干燥,在变性时探针液易蒸发 Gan片,所以在杂交前先加上盖玻片,再以胶混封周盖玻片四周.杂交后揭去胶泥和盖玻片, 这一操作易导致组织脱落及损坏,曾有文Xian报道脱片率达50….本文成功地使用不Jia盖玻片,用蒸气浴变性的方法,制片160倒,无一切片在变性杂交过程中干片或脱Pian,均获得十分满意的结果,不仅简化了杂Jiao的程序,更重

Yao的是解决了干片,脱片等问题,大大提高了

Za交的成功率和杂交结果的质量.

Wei保证组织切片上的DNA探针液在不加

Gai玻片情况下,在变性和杂交过程中不干涸,

Bi须注意:?用于加热变性的容器空间不宜太

Da,容器内的水蒸汽才能迅速饱和,从而使探

Zhen液不会蒸发;?容器外盖必须密闭,使容器

l内的水蒸汽不会溢出或仅少量溢出;?变性Shi

?以上. 可间断加温,使水蒸汽保持在90

参考文献

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cytologicalpreparation.ProcNatlAcadScl USA19663:378

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(1992-09一O1收稿1992-12-29修回)

158中山医科大学(AcadJSUMS)1993

AMODIFIEDMETH0DFORHYBRIDIZATIONINSITU WuHuixiShaoJianyongLinHanHang

tDepartmentofPathology)

Themostcriticalstepintheprocedureofhybridizationsituisdenaturationbythehca?

tillgandhybridizationaoftheprobeandthetargetgene.Theconventionalmethodfordenatur? ationincludescoveringtheprosolutionwitha~oversiip,theedgeofwhichissealedbyclay orotheradhesive.andthenheated.Thetissuesectionsareoftendamaged,drledordisIo. gedintheprocessofthisstep.Inthispaperamodifiedmethodforthestepofdena—

turationofhybridization{situisintroduced.Theprobesolutionisdirectlyheatedina steambathwithnocoverslip.Themodifiedmethodisstable,simple,andreliable.andthe fectissatisfactoryinourexperiences.

Keywordsnuclearacid;hybridizationinsftu;humanpapillomavirus ?

简讯?

Zhong澳脊柱外科研讨会暨讲习班在孙逸仙纪念医Yuan举行

Torode和Turnes两位澳大利亚脊Zhu外科专家从

1993年2一月13日至3月11日来孙遄Xian纪念医院进行了

Wei期约1十月的学术交流.在此期问与我省脊Zhu外科

Zhuan家及来白各地医院的5O多位医生举行了研Tao会及一

Xi列的讲座.与会澳大利亚专家示范了C--D棒与

Zielke链矫治脊柱翎弯的新技术.C--D棒是由法国

Yi生Cotrcl和Duboussct所发Ming.自1994年发表了他

Men盼论文之后,引起了骨科界的极大反响.这Yi技术

De优点是能够矫正脊柱侧弯的三罐畸形,而且Gu定牢

Gu,病人术后1周就可以下床活动.过去常规Ying用

Harrinton或Luque棒都只佑矫Zheng脊拄夸的一维或两维

Ji形儡人术后要求1,3个月的卧床休息及带Zhi架

Xia床活动.C—D棒技术无疑比I-Iarrington和Luque棒

Du有明显的优点.但是,由于C--D棒技术Cao作困

Nan,手术器槭又昂贵,国内只有北京,上海等Shao数医

Yuan开展这一手术.这次澳洲专家来访,首敬在Wo省开

Zhan此项手术.从已手术的1O多例患者近期结Guo观察,

Ci手术效果令人满意.Zielke链是7ONian代束发展起

Lai的前路矫正脊柱侧弯技术.目前应用Zielke加C— D技术能更有效地矫正脊柱侧Wan.本趺中澳脊柱外科研讨会暨讲习班取得Liao圆满的成功,这与医大领导的重视和医院Ge级人员的努力工作是分不开的.它将推动Cai院,我省脊柱外科的迅速发展.

(封尚札)

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