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范文一：植物硝态氮的比色测定
中国海洋大学实验报告
2017年11月3日星期五 姓名：郑志胜 专业年级： 2014级生物科学
学号： 140500110098 课程： 植物生理学实验 题目：植物硝态氮的比色测定
一、目的
学会植物组织中硝态氮含量的测定方法，了解植物组织中硝态氮的含量。
二、材料用具及仪器药品
花生植株、分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、试管、移液管、亚硝酸钠 20%醋酸溶液（V/V）：取20ml 分析纯冰醋酸加80ml 水。
混合粉剂配法：硫酸钡100g 、a 一萘胺2g 、锌粉2g 、对氨基苯磺酸4g 、硫酸锰10g 、柠檬酸75g 。
上述各试剂分别研细，再分别用等分的硫酸钡和其他各试剂混合成无颗粒状灰白色的均匀体，粉剂宜在黑暗干燥条件中保贮，七天后方可使用。
三、原理
硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸,a 一萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮染料，其颜色深浅与氮含量在一定范围内成正比关系，主要化学反应式如下：
四、方法步骤
1. 标准曲线绘测：
取恒重亚硝酸钠（NaNO 2）0.6071g 溶于1升水中，配成100μg/ml硝态氮溶液，随后稀释成2、4、8、10ug/ml。分别吸取2ml 转入50ml 有塞试管中，加冰醋酸溶液18ml 。并作试剂对照，再加入0.4 g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，将试管中悬浊液过量倾入离心管中，使部分流出管外，白色粉即可去除，离心5分钟（4000rpm ）。取上清液在520nm 波长下比色测定，绘制标准曲线，本方法适用范围在20ug ml以内。
2. 组织液的提取
称取花生功能叶柄0.5克，剪成1—2mm 的碎片，充分混匀置于干燥的三角瓶中，加入蒸馏水20ml ，加塞进行激烈振荡1—3分钟，放置澄清后，取上清液2 ml ，再按标准曲线制作方法测定，叶柄中硝态氮含量根据下述公式计算：
植物组织中硝态氮含量（ug/g=c.v）
式中C 为标准曲线上查得的组织提取液所含硝态氮ug/ml).V为1g 植物组织所制备的提取液的总体积（ml ），如本法为40ml 。
五、实验报告
计算植物组织中硝态氮的含量。
六、思考题
硝酸盐还原成亚硝酸盐的过程需要哪一种酶催化？
范文二：实验三 植物营养(铵态氮,硝态氮)
高级植物生理实验报告
植物营养
农学院 农药学 东保柱2013202054 2013年12月27日
实验1 植物组织铵态氮含量的测定（茚三酮比色法）
一、实验原理
植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经
同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。根据蓝紫色的深浅，在580nm波长下测定吸光值。本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。
二、仪器设备
研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计
三、试剂
1. 10%醋酸(100mL) 2. 1% 抗坏血酸（100mL）
3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）
4. pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g或三水醋酸钠27.2g 配成1000mL）。 5. 水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。
四、操作步骤
1. 标准曲线的绘制
以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管
中加蒸馏水至2mL，对照加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三
酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以铵态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
试管号 1 2 3 4 5 6 7 试剂（mL） 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 1.8
铵态氮浓度 0 0.5 1 2 3 4 5 （μg/mL）
2. 称取0.5g 新鲜植物材料，放入研钵中，加入5mL 10%醋酸，研磨后以蒸馏水稀释至100mL ，混匀，通过滤纸过滤，弃去最先滤下的一部分滤液后过滤到100mL三角瓶中。
3. 从剩下的滤液中取2mL 放入试管中，加3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。盖上试管塞，于沸水中加热15分钟。同时将盛有对照溶液（提取液用蒸馏水代替）的试管加热。
4. 取出后搅拌冷却15分钟。加热形成的红色茚三酮试剂被氧氧化而褪色，茚三酮与氨基酸形成的蓝紫色反应产物仍然存留并变得更加鲜明。冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL ，混匀。在波长580nm 处测光密度值，根据标准曲线查得数值代入以下公式计算铵态氮含量。
样品c值:1.436、1.435、1.436、1.435
（0.1×10×C）
X（100g 样品中的氨态氮毫克数）×100
（2×n）
C：比色液中氨态氮浓度（μg/mL） 10：比色液体积（mL） n：样品重量（g）
100：分析溶液总体积（mL）
0.1：μg换算成mg 并折算成100g 物质中含量的换算系数。
实验2 植物体内硝态氮含量的测定
一、原理
在浓酸条件下，ＮＯ３－与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨
酸在碱性条件下（ｐＨ１２）呈黄色，最大吸收峰在波长４１０ｎｍ处，可直接比色测定。
二、仪器和设备
分光光度计、天平、刻度试管、移液器、移液管、容量瓶、漏斗、水浴锅、滤纸
三、试剂
1. 500mg/L ＮＯ３－-N标准溶液：称取KNO3 0.3611g溶于蒸馏水中，定容至100mL。 2. 5% 水杨酸-硫酸溶液：称取5g水杨酸溶于100mL浓硫酸中，搅拌溶解后，贮藏于棕色瓶中。
3.8% NaOH溶液：8.695g NaOH溶于100mL蒸馏水中。
四、方法
1. 标准曲线的制作
（1）吸取500mg/L ＮＯ３－-N标准溶液0, 1, 2, 3, 4, 6, 8mL分别放入50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，使之成为0、10、20、30、40、60、80mg/L的系列标准溶液。
（2）吸取上述系列标准溶液0.1mL，分别放入刻度试管中，以0.1mL蒸馏水代替标准溶液作空白。再分别加入0.4mL 5%水杨酸-硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后，再加入8% NaOH溶液9.5mL，摇匀冷却至室温。显色液总体积为10mL。
（3）以空白作参比，在410nm波长下测定光密度。以ＮＯ３－-N浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。
2. 硝酸盐的测定
（1）样品液的制备：取2g植物材料切碎后放入刻度试管中，加入10mL蒸
馏水，封口。置于沸水浴中提取30分钟，冷却，将提取液过滤到25mL容量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。
（2）样品液的测定：吸取样品液0.1mL分别放入刻度试管中，加入5%水杨酸-硫酸溶液0.4mL，混匀后置室温下20分钟，再慢慢加入9.5mL 8% NaOH溶液，待冷却至室温后以空白作对照，在410nm波长下测定光密度值。在标准曲线上查得或用回归方程计算出ＮＯ３－-N浓度，再用以下公式计算其含量。
ＮＯ３－-N含量（mg/g）=（D×样品液总量）/样品鲜重 D：标准曲线上查得ＮＯ３－-N浓度（mg/L）
实验数据统计
实验四 植物营养
4.1植物体内硝态氮含量测定
硝酸根离子含量和吸光值标准曲线如下所示：
如图所示：标准曲线相关性系数为0.9344，线性关系良好
样品硝态氮含量两重复分别为：1.435、1.436，平均值为1.4355.则每100g鲜马铃薯中硝态氮含量为1.4355mg/100g
4.2 植物体内铵态氮含量测定
根据铵根离子浓度和吸光值得到的标准曲线如下：
范文三：植物体内硝态氮含量的测定
二、植物体内硝态氮含量的测定
硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理
在浓酸条件下，NO 3与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具
（1）722型分子光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20cm 26支；（4）刻度吸管0.1cm . 0.5cm . 5cm . 10cm 各1支；（5）容量瓶50cm 8个；（6）容量瓶25cm 3个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝 锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm 。
试剂：
500ppmNO3标准溶液精确称取烘至恒重的KNO 3 0.7221克溶于无离水中，定容至200cm 。
5%水杨酸一硫酸溶液 称取5克水杨酸溶于100cm3, 浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液 称取10克氢氧化纳溶于1dm 无离子水中即可。
（三）实验步骤
1. 标准曲线的制作
（1）吸取500ppmNO 3标准溶液1cm . 2cm . 3cm . 4cm . 6cm . 8cm . 10cm . 12cm 分别放入501cm -3333333333-33333333- 容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm 的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11cm ，分别放入刻度试管中，以0.11cm 无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4cm 水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH333
溶液9. 51cm摇匀冷却至室温，显色液总体积为101cm 。
（3）以空白作参比，在410nm 波长下测定吸光度。以NO 3N 浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品中硝酸盐的测定
（1）样品液的制备，取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2-3克分别放入三支刻度试管中，加入10cm 无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分钟，到时间后取出，用自来水冷却，将是取液过滤到25cm 容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。
（2）样口液的测定 吸取样品0.1 cm 分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸一硫酸溶液0.4 cm，混匀后置室温下20分钟，再慢慢加入9. 5 cm 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm 波长下测期吸光度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出NO 3-N 浓度，再用下公式计算其含量。
-33333-33
旱作物组织中硝态氮的测定——硝酸试粉比色法
1. 目的
作物根系从土壤吸收的硝态氮，一部分很快参加蛋白质的合成但仍有相当数量的硝态氮是在向地上部分转运途中逐步转化的。特别是某些旱作物叶柄硝态氮的水平，在一定范围内反映了当时体内的氮素营养水平和土壤供氮状况。定期检测作物适当部位的硝态氮含量的水平，可以为作物的施肥和促控措施等提供一些依据。
本方法是基二锌在酸性条件下产生氢气，将硝酸根还原成亚硝酸根，亚硝酸根对氨基苯磺酸和a-萘胺作用，形成红色偶氮染料，在一定范围内可按颜色（玫瑰红）深浅估测NO 3-N 含量。
灵敏度范围为0.5-20ppm ，其反应一定要在PH5左右条件下进行，在碱性条件下不显色或显色
不明显。
2. 材料和试剂
（1）硝酸试粉 称硫酸钡50g ，分成数份，分别与硫酸锰（Mnso 4?H 2o ）5g ，锌粉1g ，对氨基苯磺酸2g ，a-萘1g ，在研钵中研细混匀，最后与37. 5g 柠檬酸一起研磨均匀，贮于暗色瓶中，防潮避光。此试粉灰白色，若变为粉红色，则不能使用。
（2）PH5柠檬酸缓冲液 称取化学纯柠檬4. 31g ，柠檬酸钠6. 86g ，溶于500ml 蒸馏水中（溶液必须新鲜酸置）。
（3）硝态氨标准溶液 称取7. 22g分析纯硝酸钾加水定容到1000ml ，即为1000ppmNo 2-N 。
3. 方法与步骤
（1）取样 清晨在待测田块中，选取有代表性的植株10-20株的敏感部位，用湿布擦净，剪碎，榨汁备用。
（2）测定 于15ml 刻度试管中，加入5mlPH5. 0的柠檬酸缓冲液，滴入一滴组织汁液，摇匀加入0.2g 硝酸试粉，塞紧，纵向摇动试管1分钟（200次/分），静置15分钟后，与硝态氮试管法比色卡或标准色阶溶液进行比较，目测硝态氮ppm 数。
（3）结果计算
其中：V1-显色溶液的ml 数；
V2-所取汁的ml 数（按每毫升20滴计）
范文四：2.植物硝态氮的比色测定
中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告 2015年11月02号
姓名：白杰 专业年级： 2014级生物科学 学号： 14050011001同组者：曹昱 课程： 植物生理学实验 题目：植物硝态氮的比色测定
一、实验目的
学会硝态氮的测定方法，学会分光光度计的使用。
二、实验原理
用蒸馏水将植物组织中的硝酸盐和亚硝酸盐提取出来，加入锌粉将硝酸根还原成亚硝酸根
后，与对氨基苯磺酸生成重氮盐，再与α-萘胺结合生成玫瑰红色的偶氮染料，在520nm波长处有吸收峰，并且在一定范围内其颜色的深浅与溶液中硝态氮含量成正比，可以用分光光度法进行测定。
三、仪器试剂
1、仪器及用品
分光光度计，研钵，容量瓶，比色管（50ml），试管，移液管，烧杯，三角瓶（100ml）。
2、试剂
（1）硝酸盐标准溶液：取恒重硝酸钠0.6071g溶于一升水中，配成100μg/ml硝态氮溶液储存于冰箱中（0oC~5oC）备用。
（2）20％冰醋酸溶液（V/V）：取20ml分析纯冰醋酸加80ml水。
（3）混合粉剂：含硫酸钡100g，α-萘胺2g，锌粉2g，对氨基苯磺酸4g，硫酸锰10g，柠檬酸75g。
3、实验材料：植物叶柄
四、实验步骤
1、标准曲线的绘制
将硝酸盐标准溶液稀释成0μg/ml，4μg/ml , 8μg/ml，12μg/ml,16μg/ml,20μg/ml浓度的硝态氮溶液各10ml，摇匀后分别吸取2ml转入到50ml比色管中，加冰醋酸溶液18ml，再加0.4g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，用双层滤纸过滤于洁净的试管中，以蒸馏水作对照，测定其520nm波长处的吸光光度值，以浓度为横坐标，标准样品的吸光度值为纵
坐标绘制标准曲线或做出回归曲线。 2、植物组织中硝态氮的提取
称取待测的植物功能叶柄0.5g左右，剪成1~2mm的碎片，置于干燥的100ml三角瓶中，加入蒸馏水20ml，加塞进行激烈振荡1~3分钟，放置10分钟。澄清后，取上部清液2ml，按标准曲线的步骤进行显色和必比色，测定植物样品的吸光度值。
五、数据处理
叶柄：0.533g
将y=0.084代入上式得：x=7.25
植物组织中硝态氮含量：c×V=7.25×40=290μg/g
六、思考题
1、通过你的实验你认为本实验的主要误差来源有哪些？
1）剧烈晃动因摇动的人不一样，所以可能产生一些误差 2）过滤时更换滤纸可能造成一定误差 3）植物剪得不够碎
2、在配置标准溶液时应注意哪些问题？
加液时间要大概相等，摇晃尽量让一个人去做，烧杯、试管、移液管要及时清洗干净，
过滤时应保证正常。
范文五：植物体内硝态氮含量的测定
植物体内硝态氮含量的测定
关键词: 硝态氮
植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况，常作为施肥指标。另外，蔬菜类作物特别是叶菜和根菜中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害健康。因此，硝酸盐含量又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养状况，而且对鉴定蔬菜及其加工品质也有重要的意义。 传统的硝酸盐测定方法是采用适当的还原剂先将硝酸盐还原为亚硝酸盐，再用对氨基苯磺酸与α-萘胺法测定亚硝酸盐含量。此法由于影响还原的条件不易掌握，难以得出稳定的结果，而水杨酸法则十分稳定可靠，是测定硝酸盐含量的理想选择。
一、原理
,在浓酸条件下，NO 与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。其反应式如下:3
生成的硝基水杨酸在碱性条件下(pH>12)呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。
二、仪器与用具
分光光度计;天平(感量0.1mg);20ml刻度试管;刻度吸量管0.1ml、0.5ml、5ml、10ml各1支;50ml容量瓶;小漏斗(φ5cm)3个;玻棒;洗耳球;电炉;铝锅;玻璃泡;7cm
定量滤纸若干。
三、试剂
1. 500mg/L 硝态氮标准溶液:精确称取烘至恒重的KNO 0.7221g溶于蒸馏水中，定容至3
200ml。
2. 5%水杨酸?硫酸溶液:称取5g水杨酸溶于100ml比重为1.84的浓硫酸中，搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。
3. 8%氢氧化钠溶液:80g氢氧化钠溶于1L蒸馏水中即可。
四、方法
1. 标准曲线的制作
(1)吸取500mg/L 硝态氮标准溶液1ml、2ml、3ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml分别放入50ml容量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成10、20、30、40、60、80、100、120mg/L的系列标准溶液。
(2)吸取上述系列标准溶液0.1ml，分别放入刻度试管中，以0.1ml蒸馏水代替标准溶液作空白。再分别加入0.4ml 5%水杨酸—硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min后，再加入8% NaOH溶液9.5ml，摇匀冷却至室温。显色液总体积为10ml。
(3)绘制标准曲线:以空白作参比，在410 nm波长下测定光密度。以硝态氮浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。
2. 样品中硝酸盐的测定
(1)样品液的制备 取一定量的植物材料剪碎混匀，用天平精确称取材料2g左右，重复三次，分别放入三支刻度试管中，各加入10ml无离子水，用玻璃泡封口，置入沸水浴中提取30min。到时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。
(2)样品液的测定 吸取样品液0.1ml分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸—硫酸溶液0.4ml，混匀后置室温下20min，再慢慢加入9.5ml 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测其光密度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出硝态氮浓度，再用以下公式计算其含量。
,式中 C:标准曲线上查得或回归方程计算得NO -N浓度; 3
V:提取样品液总量;
W:样品鲜重。
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