简小枪
范文一：细胞工程选择题小集合
1, 关于动物细胞内蛋白质合成与去向的叙述，正确的是（A ） A. 所有蛋白质的合成都需要能量
B. 合成的蛋白质都要运到细胞外
C. 合成的蛋白质都不能进入细胞核内
D. 合成的蛋白质都用于细胞膜蛋白的更新
2，下列有关细胞分化的叙述，正确的是（A ） A. 原肠胚的形成与囊胚细胞的分裂和分化直接有关
B. 红细胞的形成与基因表达有关而与细胞分化无关
C. 胡萝卜叶肉细胞脱分化形成瘀伤组织后不具全能性
D. 癌细胞的产生与细胞的畸形分化无直接关系
4，用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是（C ）
A. 都需用CO 2培养箱 B.都需用液体培养 C.都要在无菌条件下进行
D. 都可体现细胞的全能型
5，下列有关于细胞工程的叙述，错误的是（D ）
A. 点刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合
B. 去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理
C. 小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B 淋巴细胞融合可制备单克隆抗体 D. 某种植物甲乙两品种的体细胞杂种与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同
6，通过特定的方法，科学家将小鼠和人已分化的体细胞成功的转变成了类胚胎干细胞。有关分化的体细胞和类胚胎干细胞的描述，正确的是（A ） A. 人类胚胎干细胞都能够分化成多种细胞
B. 分化的体细胞丢失了某些基因
C. 二者功能有差异，但形态没有差异
D. 二者基因组相同，且表达基因相同
7，制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括（A ）
①细胞培养②细胞融合③胚胎移植④细胞核移植 A. ①② B.①③ C.②③ D.③④
8，下列不属于动物细胞工程应用的是（C ）
A. 大规模生产抗生素，用于抵抗病毒引起的感染
B. 为大面积烧伤的病人提供移植的皮肤 C. 大规模生产食品添加剂、香料等
D. 利用胚胎移植技术，加加快优良种畜的繁殖
9，下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（D ）
A. 培养中的人效应T 细胞产生单克隆抗体
B. 培养中的人B 细胞能无限增殖
C. 认得成熟红细胞经过培养能形成细胞株 D. 用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝脏
10，对细胞全能性表达正确的有（D ）
A. 没有离体植物细胞也能表现出全能性
B. 动物细胞融合标志着动物细胞全能性的实现
C. 单克隆抗体的制备原理是依据细胞的全能性 D. 花粉可培育成单倍体，是细胞全能性的体现
1. 单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用. 下列关于单克隆抗体的叙述, 错误的是（c ）
A. 特异性强, 灵敏度高
B. 与抗癌药物结合可制成" 生物导弹"
C. 体外培养 B 淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体
D. 由效应 B 细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌
2．用动物细胞工程技术获取单克隆抗体, 下列实验步骤中错误的是（b ）
A. 将抗原注入小鼠体内, 获得能产生抗体的 B 淋巴细胞
B. 用纤维素酶处理 B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
C. 用聚乙二醇(PEG)作诱导剂, 促使能产生抗体的 B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合
D. 筛选杂交瘤细胞, 并从中选出能产生所需抗体的细胞群, 培养后提取单克隆抗体
3. 人类寄希望于利用干细胞(人体中具有分裂, 分化能力的细胞) 的分离和体外培养, 在体外培育出组织器官, 并最终通过组织或器官移植实现对临床疾病的治疗. 能否用肌细胞代替干细胞 （b ）
A. 不能, 因为肌细胞与干细胞所含有的遗传物质不同
B. 不能, 因为肌细胞是高度分化的细胞, 没有分裂能力
C. 能, 因为肌细胞虽然是分化的细胞, 但在一定条件下也可脱分化, 实现细胞全能性
D. 能, 因为肌细胞与干细胞具有完全相同的遗传物质
4. 动物细胞工程常用的技术手段中, 最基础的是 ( a)
A. 动物细胞培养 B.动物细胞融合 C.单克隆杭体 D.胚胎, 核移植
5.. 如用动物的细胞进行克隆实验应该选择的细胞核不能是 ( b)
A, 乳腺细胞的 B,卵细胞的 C,胃腺细胞的 D,囊胚时期的胚胎细胞的
6. 用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织, 其 主要原因是这样的组织细胞 （d ）
A. 容易产生各种变异 B.具有更强的全能性C. 取材十分方便 D.分裂增殖的能力强
7. 动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中, 正确的是 (c ) ①诱导融合的方法完全相同 ②所用的技术手段不相同 ③所采用的原理完全相同 ④ 都能形成杂种细胞
A.①② B.①③ C.②④ D. ③④
8. 有关动物细胞培养的叙述中正确的是（a ）
A. 动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散
B. 动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白
C. 细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中
D. 培养至 50 代后能继续传代的传代细胞叫细胞株
9．用动物细胞培养技术使细胞传到50代以后仍能传下的传代细胞称为（c ）
Ａ．原代细胞 Ｂ．传代细胞 Ｃ．细胞系 Ｄ．细胞株
10．能提高良种家畜繁殖能力的细胞工程技术是（c ）
Ａ．组织培养 Ｂ．细胞融合 Ｃ．胚胎移植 Ｄ．细胞核移植
1、下列选项中，两类细胞的染色体数目均可呈周期性变化的是（ B ）
A 、蛙的红细胞与淋巴细胞 B 、小鼠骨髓瘤细胞与杂交瘤细胞
C 、人的胚胎干细胞与成熟红细胞 D、牛的精细胞与精原细胞
2. 下列关于哺乳动物胚胎发育和胚胎工程的叙述，正确的是（ D ）A ．卵裂期胚胎中细胞数目和有机物总量在不断增加 B．胚胎分割时需将原肠胚的内细胞团均等分割C ．胚胎干细胞具有细胞核大、核仁小和蛋白质合成旺盛等特点D ．胚胎干细胞是一类未分化细胞，可从早期胚胎中分离获取
3. 用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是（ C ）A ．都需用CO 2培养箱 B．都须用液体培养基 C．都要在无菌条件下进行 D．都可体现细胞的全能性
4. 下列有关植物细胞与组织培养的叙述中，错误的是（ A ）
A ．花药、胚不能作为组织培养的材料 B．植物细胞具有全能性
C ．外植体是指用于培养的植物组织或器官 D．外植体可诱导出愈伤组织
5. 通过特定方法，科学家将小鼠和人已分化的体细胞成功地转变成了类胚胎干细胞。有关分化的体细胞和类胚胎干细胞的描述，正确的是（ A ）
A ．人类胚胎干细胞能够分化成多种细胞 B．分化的体细胞丢失了某些基因
C ．二者功能有差异，但形态没有差异。 D．二者基因组相同，且表达的基因相同
6. 制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括（ A ）
①细胞培养 ②细胞融合 ③胚胎移植 ④细胞核移植
A ．①② B．①③ C．②③ D．③④
9. 下列有关生物大分子在细胞内转移的叙述，错误的是（ B ）
A、分泌蛋白可由核糖体进入内质网 B 、DNA 可由细胞核进入线粒体
C 、mRNA 可由细胞核进入细胞质 D、tRNA 可由细胞质基质进入核糖体
10. 下列有关细胞分化的叙述，正确的是（ A ）
A ．原肠胚的形成与囊胚细胞的分裂和分化直接有关
B ．红细胞的形成与基因表达有关而与细胞分化无关
C ．胡萝卜叶肉细胞脱分化形成愈伤组织后不具全能性
D ．癌细胞的产生与细胞的畸形分化无直接关系
1. 以下4种细胞工程技术培育出的新个体中，体内遗传物质均来自一个亲本的是
A ．细胞和组织培养 B ．细胞融合 C．动物胚胎移植 D ．细胞核移植
2. 下列哪一项属于克隆
A. 将鸡的某个DNA 片断整合到小鼠的DNA 分子中
B. 将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系
C. 将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内
D. 将鼠的骨髓细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
3. 从细胞全能性的角度看，下列叙述正确的是
A. 分化程度高，具有较高的全能性 B.分化程度低，具有较低的全能性
C. 分化程度低，具有较高的全能性 D.分化程度高低与全能性无关
4. 关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是
A. 可以制成诊断盒，用于疾病的珍断 B.可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗
C.可以利用基因工程技术生产 D. 可以在生物体内生产，不能体外生产
5 下列关于动物细胞培养的有关叙述中正确的是
A. 细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中
B. 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等
C. 动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白
D. 动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理
6. 通过细胞工程生产单克隆抗体时，要涉及到以下三个筛选过程： ① 在特定培养基中筛选出杂交瘤细胞 错误！未找到引用源。 选出能产生抗体的效应B 细胞 错误！未找到引用源。选出能产生特定抗体并能大量增殖的细胞群。这三个过程的先后次序是
A. 错误！未找到引用源。错误！未找到引用源。① B.错误！未找到引用源。①错误！未找到引用源。 C. 错误！未找到引用源。①错误！未找到引用源。 D. ①错误！未找到引用源。错误！未找到引用源。
7. 用于核移植的供体细胞一般都选用
A. 受精卵 B.传代10代以内的细胞
C. 传代10~50代以内的细胞 D.处于减数分裂第二次分裂中期的次级卵母细胞
8. 生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成为“复生”野驴的方法是
A. 将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体
B. 将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体
C. 取出野驴的体细胞的细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，再经胚胎移植孕育培养成新个体
D. 将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体
9、在动物细胞培养过程中，遗传物质肯定发生改变的细胞是
A ．传代培养至50代以后的细胞 B．原代培养细胞
C ．传代培养至10代以内的细胞 D．克隆的细胞
10、淋巴因子中的干扰素是治疗病毒引起的疾病的特效药。通常只能从人体内获得，且获得的数量非常少。为了在体外获得大量的干扰素，有人把某种淋巴细胞在体外培养，繁殖几代后，细胞分裂就会停止。选择下列哪种实验设计，既能使某种淋巴细胞在体外不断增殖，又能够获得大量干扰素
A ．用小鼠的效应B 细胞与小鼠的骨髓瘤细胞进行细胞融合
B ．用小鼠的效应B 细胞与小鼠的骨髓细胞进行细胞融合
C ．用小鼠的效应T 细胞与小鼠的骨髓瘤细胞进行细胞融合
D ．用小鼠的效应T 细胞与小鼠的骨髓细胞进行细胞融合
1、 贴附型细胞类型不包括（D ）
A 、成纤维细胞型 B、上皮型细胞型
C 、游走型细胞型 D 、悬浮型细胞型
2、细胞融合的步骤不包括 (B)
A 、制备原生质体、 B 、导入细胞受体
C 、筛选杂合细胞 D、诱导细胞融合、
3、动物细胞的超低温保存技术不包括（C ）
A 、冷冻保护剂 B、常规冷冻方法
C 、冰冻法 D、玻璃化冻存方法
4、诱导融合的方法不包括（D ）
A 、病毒诱导融合 B、化学诱导融合
C 、电诱导融合 D 、细胞诱导融合
5、融合的结果为了获得（A ）
A 、杂交瘤细胞 B、未融合的骨髓瘤细胞
C 、脾-脾杂交细胞 D、骨髓瘤-骨髓瘤杂交细胞
6、影响动物细胞培养的环境因素没有（D ）
A 温度、 B、pH 、
C 溶解氧和二氧化碳、 D 、生长因子
7、（ B ）是细胞融合最关键的一步。
A 、两原生质体或细胞互相靠近 B、细胞桥形成
C 、胞质渗透 D、细胞核融合
8、不属于细胞重组的方式（C ）
A 、胞质体与完整细胞重组形成胞质杂种
B 、微细胞与完整细胞重组形成微细胞异核体
C 、核体与完整细胞重组形成重组细胞
D 、胞质体与核体重新组合形成重组细胞
9、不属于干细胞根据分化潜能分类（D ）
A 、全能干细胞 B、多能干细胞
C 、单能干细胞 D 、成体干细胞
10、不属于造血干细胞（D ）
A 、全能造血干细胞 B、造血祖细胞
C 、造血前体细胞 D、间充质干细胞
11、不是细胞松弛素的作用的是（D ）
A 、干扰细胞质的分裂，引起细胞表面形状的改变和排出细胞核
B 、抑制细胞的运动
C 、阻碍细胞的吞噬或饮液
D 、增加细胞的粘着程度
12、单克隆抗体的制备步骤正确的是（B ）
①杂交瘤细胞筛选 ②亲本选择 ③杂交瘤细胞的生产
④细胞融合 ⑤杂交瘤细胞克隆培养
A 、⑤②④①③ B 、②④①⑤③ C、②④⑤①③D 、③④⑤②①
13、原代培养物经首次传代成功称为（B ）
A 细胞株 B 细胞系
C 细胞群 D细胞瘤
1．下列哪项不是脂质具有的生物学功能（ ） A．构成生物膜 B．调节生理代谢 C．储存能量 D．携带遗传信息2．能使植物细胞壁和细胞膜结构均破坏的一组酶是（ ）
A ．淀粉酶、纤维素酶、溶菌酶 B ．纤维素酶、果胶酶、蛋白酶
C ．果胶酶、溶菌酶、纤维素酶 D．磷脂酶、淀粉酶、蛋白酶
3、下列叙述错误的是（ ）
A. 酵母菌有核膜，而固氮菌没有 B. 酵母菌有细胞膜，而固氮菌没有
C. 黑藻细胞有线粒体，而蓝藻细胞没有 D.黑藻细胞有内质网，而蓝藻细胞没有
4、多位科学家用含3H 标记的亮氨酸培养豚鼠的胰腺腺泡细胞，下表为在腺泡细胞几种结构中最早检测到放
B ．高尔基体膜向内与内质网膜相连，向外与细胞相连
C ．高尔基体具有转运分泌蛋白的作用 D．靠近细胞膜的囊泡可由内质网形成
5．对某动物细胞进行荧光标记实验，其基本过程：错误！未找到引用源。用某种荧光材料标记该动物细胞，细胞表面出现荧光斑点。错误！未找到引用源。用激光束照射该细胞表面的某一区域，该区域荧光淬灭（消失）。错误！未找到引用源。停止激光束照射一段时间后，该区域的荧光逐渐恢复，即又出现了斑点。上述实验不能说明的是（ ）A ．细胞膜具有流动性 B．荧光染料能与细胞膜组成成分结合C ．根据荧光恢复的速率可推算出物质跨膜运输的速率
D ．根据荧光恢复的速率可推算出膜中蛋白质或脂质的流动速率
6、下列有关生物大分子在细胞内转移的叙述，错误的是（ ）
A、分泌蛋白可由核糖体进入内质网 B 、DNA 可由细胞核进入线粒体
7、下列选项中，两类细胞的染色体数目均可呈周期性变化的是（ ）
A 、蛙的红细胞与淋巴细胞 B 、小鼠骨髓瘤细胞与杂交瘤细胞
C 、人的胚胎干细胞与成熟红细胞 D、牛的精细胞与精原细胞
10、下列关于细胞工程的叙述，错误的是（ ）
A 。电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合
B 。去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理
C ．小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B 淋巴细胞融合可制备单克隆抗体
D ．某种植物甲乙两品种的体细胞杂种与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同
1、下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（ D ）
A 、培养中的人效应T 细胞能产生单克隆抗体
B 、培养中的人B 细胞能无限增殖
C 、人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株
D 、用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞
2、单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛应用。下列关于单克隆抗体，叙述错误的是（ C ）
A 、特异性强，灵敏度高 B、与抗癌药物结合可制成“生物导弹”
C 、体外培养B 淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体
D 、由效应B 细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌
3、下列关于细胞工程的叙述，错误的是（C ）
A 、植物细胞融合必须先制备原生质体
B 、试管婴儿技术包括人工受精和胚胎移植两方面
C 、经细胞核移植培育出新个体只具有一个亲本的遗传性状
D 、用于培养的植物器官属于外植体
4、下面属于组织培养但不是克隆的是（A ）
A 、将花粉离体培养成单倍体植株 B、芽发育成枝条
C 、根尖分生区发育成成熟区 D、上皮细胞无性繁殖产生的细胞群
5、动物细胞培养液和植物组织培养液的共有成分是（D ）
A 、葡萄糖 B、蔗糖 C、动物血清 D 、维生素
6、动物细胞培养的细胞来自于（ D ）
A 、任何个体的细胞 B、只能取自动物胚胎细胞
C 、只能取自幼龄动物的组织细胞 D 、胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞
7、动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是（ A ）
A 、动物细胞培养 B 、动物细胞融合 C、单抗 D、胚胎、核移植
8、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官和组织，其主要原因是这样的组织细胞（ D ）
A 、容易产生各种变异 B、具有更强的全能性
C 、取材十分方便 D 、分裂增殖的能力强
9、关于制备单克隆抗体的叙述准确的是（ B ）
A、单克隆抗体产自淋巴细胞 B 、单克隆抗体的制备要经过细胞融合
C 、单克隆抗体的获得不需要使细胞癌变
D 、必须同时在体内和体外培养挑选出所需抗体的细胞群
10、对细胞全能性表述正确的有（ D ）
A 、没有离体植物细胞也能表现出全能性 B、动物细胞融合标志着动物细胞全能性的实现 C、单克隆抗体的制备原理是依据细胞的全能性
D 、花粉可培育成单倍体，是细胞全能性的体现
1. 下列关于动物细胞培养的叙述中，正确的是 （C ）
A. 动物细胞培养选用的培养材料大多是动物的受精卵细胞
B. 动物细胞培养液中通常只含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素
C. 动物细胞培养过程中要用胰蛋白酶处理使细胞分散
D.“海拉”细胞系在实验室中被广泛传代使用是因为其遗传物质保持了长时间的稳定
2. 小鼠骨髓瘤细胞与某种B 淋巴细胞融合成为杂交瘤细胞，这种杂交瘤细胞（D ）
A. 发生了基因突变
B. 只能在体外大量增殖
C. 只能在体内大量增殖
D. 能产生特定的抗体
3. 对比植物体细胞杂交和动物细胞融合，以下论述完全正确的是 （A ）
A. 两者都必须经过人工诱导，但方式不同
B. 两者细胞融合的基本原理都是细胞的全能性
C. 两者都必须用灭活的病毒进行诱导
D. 两者的用途都是为了培养新品种
4. 以下4种技术培育出的新个体，体内遗传物质均来自一个亲本的是(A)
A ．细胞和组织培养
B ．细胞融合
C ．动物胚胎移植
D ．细胞核移植
6．下列不属于单克隆抗体在实践上应用的实例是 （A ）
A ．将抗药菌的某基因引入小鼠细胞内
B ．利用同位素标记的单克隆抗体，定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病
C ．利用免疫毒素清除异体骨髓移植中的供体骨髓T 细胞
D ．制成“生物导弹”，将药物定向地带到癌细胞所在部位
7. 培育克隆牛的过程中，如果供体细胞来自同一头牛，培育出的这些个体在性状上也不完全相同，分析其原因，下列说法不正确的是（D ）
A ．性状变异可由环境条件引起
B. 基因可能会发生突变
C. 受体细胞的细胞质基因不同
D. 细胞核基因发生了重组
8. 关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是（D ）
A ．可以制成诊断盒，用于疾病的珍断
B ．可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗
C ．可以利用基因工程技术生产
D ．可以在生物体内生产，不能体外生产
9. 动物细胞融合的基本原理是（C ）
A ．动物细胞核全能性
B ．细胞全能性
C ．细胞膜流动性
D ．细胞分化
10．下列关于细胞工程的叙述中，正确的是 （A ）
A. 克隆羊“多莉”的培育技术主要包括核移植和胚胎移植两方面
B. 植物细胞工程中，融合叶肉细胞时，应先去掉细胞膜，制备原生质体
C. 植物细胞工程中，叶肉细胞经再分化过程可形成愈伤组织
D. 单克隆抗体制备过程中，采用不经免疫的B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合从而获得杂交瘤细胞
1. 下列哪项不属于植物细胞和动物细胞离体培养的差异（D ）
A 能进行离体培养的材料不同
B 所需的培养条件不同
C 生长形式不同
D 培养物与体内生长行为不同
2.Wilmut 领导的小组在（C ）年用体细胞核克隆出“多莉”
A1990 B1993 C1997 D1999
3. 天然培养基中最普遍的血清是（A ）
A小牛血清
B胎牛血清
C新生牛犊血清
D马血清
4.下列哪项不是单细胞克隆的方法（B ）
A 稀释铺板法
B 微载体培养法
C 饲养层克隆法
D 胶原模板法
5. 以下不是动物细胞生物制药的是(D)
A 干扰素 B单克隆抗体 C病毒疫苗 D 人工胚乳
6. 从细胞全能性的角度看，下列叙述正确的是（C ）
A. 分化程度高，具有较高的全能性 B.分化程度低，具有较低的全能性
C. 分化程度低，具有较高的全能性 D.分化程度高低与全能性无关
8. 用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是（C ）
A ．都需用CO 2培养箱 B．都须用液体培养基
C ．都要在无菌条件下进行 D．都可体现细胞的全能性
3. （ ）在细胞工程中，需要利用细胞的全能性。下列细胞中全能性最高的是
A. 胡萝卜的韧皮部细胞 B.水稻的花粉
C. 绵羊的乳腺细胞 D. 大白鼠的受精卵
9、动物细胞工程技术的基础是 （ ）
A. 动物细胞融合 B 胚胎移植 C动物细胞培养 D 核移植
10、在动物细胞培养过程中，遗传物质肯定发生改变的细胞是
A ．细胞系B ．细胞株C ．原代细胞 D ．克隆的细胞
11．在生物体的所有细胞中，全能性最高的是
A ．卵细胞 B 植物花粉 C．体细胞 D 受精卵
12．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是
A ．培养中的人效应T 细胞能产生单克隆抗体 B．培养中的人B 细胞能够无限地增殖
C ．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株 D ．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞
13．下列哪一项属于克隆?? ( )
A ．将鸡的某个DNA 片段整合到小鼠的DNA 分子中
B ．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内
C ．将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
D ．将某肿瘤细胞在体外培养成一个细胞系
14．（多选）用小白鼠的正常胚胎组织进行连续的细胞培养。在从细胞株到细胞系的过程中，细胞发生了
A ．血红蛋白基因的表达 B．遗传物质的改变 C ．染色质固缩 D．形态的改变
15．（多选）关于单克隆抗体的正确叙述是 ( )
A ．化学性质单一 B．用有性繁殖获得 C ．特异性强 D．可用于治病防病
1．拥有接触抑制的是(B)
A 原核细胞 B动物细胞 C植物细胞 D真核细胞
2．培养基中可能含有血清的是(A)
A 动物细胞培养基 B植物细胞培养基 C愈伤组织培养基 D微生物培养基
4. 关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是(D)
A. 可以制成诊断盒，用于疾病的珍断 B.可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗
C.可以利用基因工程技术生产 D. 可以在生物体内生产，不能体外生产
5. 下列关于动物细胞培养的有关叙述中正确的是(D)
A. 细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中
B. 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等
C. 动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白
D. 动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理
6. 下列关于生物工程中酶的作用的叙述，错误的是(C)
A．纤维素酶可用于植物体细胞杂交 B．胰蛋白酶可用于动物细胞培养
C ．限制酶只用于提取目的基因 D．DNA 连接酶只用于DNA 拼接重组
8. 科学家用小鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的Ｂ淋巴细胞融合，对得到的杂交细胞不正确的叙述是(B)
A. 有双亲细胞的遗传物质 B . 无增殖的本领
C. 可分泌特异性抗体 D.有大量增殖的本领
9. 关于细胞全能性的理解不正确的是(D)
A. 大量的科学事实证明，高度分化的植物体细胞仍具有全能性
B. 细胞内含有个体发育所需全部基因是细胞具有全能性的内在条件
C. 通过植物组织培养得到的试管苗或人工种子，是植物细胞在一定条件下表现全能性的结果
D. 通过动物细胞培养获得细胞株或细胞系，表明了动物体细胞也具有全能性
1. 动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于（A ）
A. 培养基不同
B. 动物细胞能够大量培养而植物细胞只能培养成植株
C. 动物细胞培养不需要在无菌条件下进行
D. 动物细胞可以传代培养而植物细胞不可以
2. 在进行动物细胞培养时，通常选用的材料是（D ）
A. 衰老退化的动物组织细胞
B. 成熟动物个体的体细胞
C. 动物的受精卵
D. 动物胚胎活幼龄的个体细胞
3. 动物细胞培养过程中，当培养至50代后这时的细胞具有癌变的特点他们属于并称为（D ）
A. 原代培养 细胞株
B. 原代培养 细胞系
C. 传代培养 细胞株
D. 传代培养 细胞系
4. 动物细胞工程技术的基础是（C ）
A. 动物细胞融合
B. 胚胎移植动物细胞培养
C ．动物细胞培养
D. 核移植
5. 在细胞工程的细胞融合过程中，能促使细胞融合的物质有（B ）
A. 病毒 B.聚乙二醇 C.乙醇 D.丙酮酸
6. 下列不是贴附型细胞的是（C ）
A. 成纤维细胞型细胞
B. 上皮型细胞
C. 颗粒性白细胞
D. 多形型细胞
7. 动物细胞融合技术最重要的途径是（A ）
A. 制备单克隆抗体
B. 制备大量动物细胞
C. 制备胚胞
D. 成功进行细胞核移植
8. 获得大量单克隆抗体必须用单个的b 细胞进行无性繁殖形成细胞群其原因是（D ）
A. 在体外培养条件下B 淋巴细胞可以无限增值
B. 每个B 细胞都参与特异性免疫反应
C. 在动物体内B 淋巴细胞可以产生多达百万种以上的抗体
D. 每一个B 淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
9. 在动物细胞培养中，有部分细胞可能在培养条件下无限地传代下去，这种传代细胞称为（D ）
A. 原代细胞 B.传代细胞 C.细胞株 D.细胞系
10. 在动物细胞培养过程中，遗传物质肯定发生改变的细胞是 （A ）
A ．传代培养至50代以后的细胞 B．原代培养细胞
C ．传代培养至10代以内的细胞 D．克隆的细胞
11. 下列叙述错误的是（D ）
A. 用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织
B. 将所取的组织先用胰蛋白酶处理分散成单个细胞
C. 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱落制成悬浮液
D. 动物细胞培养只能50代左右，所培养的细胞会衰老死亡
12. 制备单克隆抗体的叙述正确的是（B ）
A. 单克隆抗体产自淋巴细胞
B. 单克隆抗体的制备要经过细胞融合
C. 单克隆抗体的获得不需要细胞癌变
D. 诱导融合的手段唯一
14. 用于核移植的供体细胞一般都选用（B ）
A. 受精卵 B. 传代10代以内的细胞
C. 传代10~50代以内的细胞 D.处于减数分裂第二次分裂中期的次级卵母细胞
15. 下列过程中，没有发生生物膜融合的是（C ）
A ．植物体细胞杂 B．受精过程
C ．氧进入细胞中的线粒体 D ．效应B 细胞产生抗体
1. 动物细胞培养和植物细胞培养的区别不包括（ C ）
A. 离体培养的材料不同 B. 所需培养的条件不同
C. 培养的原理不同 D. 生长形式不同
2. 在进行动物细胞培养时，通常选用的培养材料是 （ D ）
A. 衰老退化的动物组织细胞 B.成熟动物个体的体细胞
C. 动物的受精卵细胞 D. 动物胚胎或幼龄个体的细胞
8. 用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（ B）
A ．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B 淋巴细胞
B ．用纤维素酶处理B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
C ．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合
D ．筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体
11. 下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是 ( A )
A. 动物细胞培养一般能够传到40～50代，但其遗传物质发生了改变
B. 原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞
C. 培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清
D. 动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞
12. 为了使用于培养的动物组织分散开来以便配制成有一定浓度的细胞悬浮液，选取来的动物组织需先用下列哪张物质处理 （ B ）
A. 胃蛋白酶 B. 胰蛋白酶
C. 盐酸 D.丙酮酸
13．按干细胞的分化潜能分类，不属于多能干细胞的是 （ C ）
A. ．骨髓造血干细胞 B骨髓间充质干细胞
C ．成肌细胞 D.神经元
14. 单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞，在含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培养基（HAT ）中无法生长；而小鼠脾细胞是正常细胞，在HAT 培养基上可正常存活。用聚乙二醇诱导细胞
融合后，经过数代培养，最终可在HAT 培养基上存活并能产生单克隆抗体的细胞是 （ C ）
A ．骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞 B．脾细胞之间形成的融合细胞 C．骨髓瘤细胞与脾细胞之间形成的融合细胞 D．脾细胞
15. 中科院动物研究所成员通过将大熊猫的体细胞核移植到去核后的兔子卵细胞中，成功培育出大熊猫的早期胚胎，这项研究成果属于 （ B ）
A. 杂交育种 B. 细胞工程
C. 基因工程 D.染色体工程
1、 不能使动物细胞融合的是（ C ）。
A 、灭活的仙台病毒 B、聚乙二醇
C 、秋水仙素 D、电诱导
2、不是合成培养基的优点的是（ A ）。
A 、营养成分丰富 B、无潜在病毒污染
C 、节省人力、物力 D、有利于定量研究代谢成分
3、原代培养常用方法不包括（ D ）
A 、组织块培养法 B、单层细胞培养法
C 、悬浮细胞培养法 D、饲养层细胞培养法
4、（ B ）是细胞融合最关键的一步。
A 、两原生质体或细胞互相靠近 B 、细胞桥形成
C 、胞质渗透 D、细胞核融合
5、不属于细胞重组的方式（ C ）
A 、胞质体与完整细胞重组形成胞质杂种
B 、微细胞与完整细胞重组形成微细胞异核体
C 、核体与完整细胞重组形成重组细胞
D 、胞质体与核体重新组合形成重组细胞
6、一下哪个不是干细胞的共同特征（ A ）
A 、具有种系传递能力，能够形成嵌合体动物
B 、具有自我更新和不同程度的多向分化潜能
C 、属非终末分化细胞，终生保持未分化或低分化特征，缺乏分化标记
D 、能无限地分裂、增殖
7、不是细胞松弛素的作用的是（ D ）
A 、干扰细胞质的分裂，引起细胞表面形状的改变和排出细胞核
B 、抑制细胞的运动
C 、阻碍细胞的吞噬或饮液
D 、增加细胞的粘着程度
9、培养板最常用的是（ C ）孔。
A 、6 B、24 C 、48 D、96
10、大规模动物细胞培养技术存在的问题不包括（ A ）
A 、细胞密度和产物浓度过高
B 、细胞群体在大规模、长时间的培养过程中分泌产物的能力易丢失，或产物的活性以降低
C 、培养成本高，产品价格昂贵
D 、对细胞代谢和生长特性的基础研究比较欠缺。
1. 下列关于动物细胞培养的叙述中，正确的是 （ C）
A. 动物细胞培养选用的培养材料大多是动物的受精卵细胞
B. 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等
C. 动物细胞培养过程中要用胰蛋白酶处理使细胞分散
D.Hela 细胞系在实验室中被广泛传代使用是因为其遗传物质保持了长时间的稳定
2. 关于细胞工程的说法不正确的是 （C ）
A. 培养动物细胞和植物细胞的重要区别在于培养基的不同
B. 单克隆抗体与血清抗体相比，前者特异性强、灵敏度高，产量大
C. 动物细胞培养不需要在无菌条件下进行，而植物细胞培养则需要在无菌条件下进行
D. 在生物体内细胞没有表现出全能性，与基因表达的选择性密切相关
7. 动物细胞培养技术的用途有（ B ）
①生产有价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素等
②生产基因工程技术中所用的受体细胞
③可以用于检测有毒物质
④培养的各种细胞可直接用于生理、病理、药理等方面的研究
A ．①② B ．①②③ C．②③④ D．①②③④
1. 从现代生物技术培育什么时候？ B
A. 1960s; B. 1970s; C. 1980s; D. 1990s.
2. 下列哪一项不使用外源基因转移到动物？ D
A.胚胎干细胞介导 B.基因转移
C.DNA显微注射 D. 基因枪
3. 以下哪一项不是在细胞工程实验室工作时必须遵守的制度 D
A. 准入制度 B.安全制度 C.卫生消毒制度 D. 保卫制度
4. 下列哪项不是干细胞的形态学特性？ C
A.圆形 B.小体积 C. 高端粒酶活性 D.核到细胞质中的比例低
1、动物细胞培养技术的用途有（ ）
①生产有价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素等
②生产基因工程技术中所用的受体细胞
③可以用于检测有毒物质
④培养的各种细胞可直接用于生理、病理、药理等方面的研究
A ．①② B ．①②③ C．②③④
9、下列现代生物技术应用过程中，一定没有使用病毒的是
A 、单克隆抗体制备 B、“白菜—甘蓝”培育
C 、基因治疗 D、禽流感疫苗制取
4．下列关于细胞工程的叙述中，错误的是 C ．．
D．①②③④
A ．植物细胞融合必须先制备原生质体
B ．试管婴儿技术包括人工受精和胚胎移植两方面
C ．经细胞核移植培育出新个体只具有一个亲本的遗传性状
D ．用于培养的植物器官或属于外植体
5．用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是B ．．
A ．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B 淋巴细胞
B ．用纤维素酶处理B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
C ．用聚乙二醇（PEG ）作诱导剂，促使能产生抗体的B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合
D ．筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体
14．研究单克隆抗体治疗癌症的思路是 （ D ）
A ．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞
B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞
C ．抗癌物质在克隆细胞中大量合成
D ．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合
15．用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样
的组织细胞 （ D ）
A. 容易产生各种变异 B．具有更强的全能性
C. 取材十分方便 D．分裂增殖的能力强
1， 平衡盐溶液内一般加入0.001%~0.005%的（ A ）作为PH 指示剂，以便观察PH 的变化。
A 酚红 B 番红 C 孔雀绿 D 苏丹红
2 ，人和多数哺乳动物细胞最适宜的温度为( B )
A 35.5℃±0.4 ℃ B 36.5℃±0.5℃
C 34.5℃±0.7 ℃ D 28.5℃±0.5℃
3，在胰蛋白酶消化法中，Ca2﹢和（ B ）对胰蛋白酶活力有一定抑制作用，故一般需用不含这些离子的BSS 配制。
A. Fe3+ B. Mg2+ C. Mn2+ D. Cu2+
4，干细胞根据分化潜能分类，分为全能干细胞、多能干细胞和（ D ）
A 原始干细胞 B 成体干细胞 C胚胎干细胞 D 单能干细胞
5，从混杂的细胞群体中获得表达与抗体相应膜抗原的细胞群，称为（ B ）
A 阴性细胞选择法 B 阳性细胞选择法 C 非阴性细胞选择法 D 非阳性细胞选择法
1. 下列有关动物细胞培养的叙述，说法正确的选项有几个？（ d ）
①动物细胞培养的原理是动物细胞的全能性
②需要对细胞进行一次脱分化处理和两次蛋白酶处理
③原代培养的细胞是指贴壁生长到发生接触抑制之前的细胞
④恒温条件下细胞周期持续时间长短不随细胞培养进程而改变
⑤传代培养的细胞因为以有丝分裂方式增殖，所以在传代过程中其遗传物质保持不变
⑥只要培养条件适宜，细胞都可在体外无限繁殖
⑦可用于检测有毒物质、构建人造皮肤、大量生产药物蛋白
⑧为防止培养过程中微生物污染，应将培养箱抽成真空并消毒灭菌
A ．1个 B．2个 C．3个 D．4个
2．只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 （a ）
A ．PEG B ．灭活的病毒 C ．电刺激 D．离心
3．用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （ b ）
A. 容易产生各种变异 B．具有更强的全能性
C. 取材十分方便 D ．分裂增殖的能力强
4．想要获得既高产又抗病毒、抗寒、抗旱、抗除草剂等多重优点的农作物，以下哪种方法能做到（ b ）
A ．细胞融合技术 B.转基因技术 C.组织培养技术 D.人工诱变
5．关于转基因技术的应用，不正确的是（ d ）
A ．可以将抗病虫害、抗除草剂等基因转入农作物使其具有相应的抗性
B. 可以使用DNA 重组的微生物，生产稀缺的基因药物
C. 可以通过转基因技术使奶牛变成生物反应器，使它们的奶中富含某种营养物质、珍贵药材或人类所需要的蛋白质
D. 将不同生物的DNA 进行转移和重组，可以创造出新物种
6．下列哪项不是转基因食物潜在的安全隐患（c ）
A．转基因植物有可能合成出对人体有直接毒性或潜在毒性的蛋白质
B．转基因植物合成的某些新的蛋白质有可能成为某些人的过敏源
C．某些转基因生物可以合成干扰素，进人人体增强相应细胞的免疫力 D．某些基因足以使植物体内某些代谢途径发生变化，导致转基因农作物营养成分的改变
7. 体细胞核移植技术可以用来（ b）
①扩大濒危动物种群数量，有效提高生物多样性 ②解决某些良种家畜自然繁殖率低的问题
③解决人体器官移植供体来源短缺的问题 ④为科学研究提供实验动物
⑤构建转基因克隆动物，作为生物反应器，大规模生产珍贵医用蛋白
A. ①②③④⑤ B. ①②③④ C. ②③④⑤ D. ③④⑤
8、下列关于体外受精技术的说法中，错误的是（ b ）
A．体外受精技术需要的温度大约为37℃
B．体外受精是从初级卵母细胞和初级精母细胞开始的
C．体外受精技术已成为一项常规的动物繁殖生物技术
D．体外受精技术可用于研究动物生殖细胞的发生机制
9、体外培养哺乳动物胚胎的培养液应用以下哪些成分（ b ）
①无机盐 ②有机盐 ③激素 ④蛋白质 ⑤葡萄糖
⑥维生素 ⑦氨基酸 ⑧核苷酸 ⑨脂肪酸 ⑩血清
A. ①②④⑤⑥⑧⑨⑩ B. ①③⑤⑥⑦⑧⑩
C. ①②③④⑥⑦⑧⑨⑩ D. ①②③⑥⑦⑩
10. 下列有关细胞全能性的含义，正确的是：（ c ）
A. 每个生物体内的所有细胞都具有相同的功能
B. 生物体内的任何一个细胞可以完成该个体的全部功能
C. 生物体的每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能
D. 生物体的每个细胞都经过产生、分裂、分化、生长、衰老、死亡的全过程
11. 在动物细胞培养过程中，遗传物质肯定发生改变的细胞是（d ）
A ．细胞系B ．细胞株C ．原代细胞 D ．克隆的细胞
12. 在生物体的所有细胞中，全能性最高的是（d ）
A ．卵细胞 B 植物花粉 C．体细胞 D 受精卵
13. 下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是(d)
A ．培养中的人效应T 细胞能产生单克隆抗体 B．培养中的人B 细胞能够无限地增殖
C ．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株 D．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞
14. 在生物体内，细胞没有表现出全能性，而是分化为不同的组织、器官，是因为： （ b ）
A. 细胞丧失了全能性 B.基因的表达有选择性
C. 不同的细胞内基因不完全相同 D.在个体发育的不同时期，细胞内的基因发生了变化
15. 一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件 ( d )
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③合成培养基需加血浆 ④温度与动物体温相近
⑤需要02，不需要 C02 ⑥能调培养液pH
A ．①②③④⑤⑥ B．①②③④
C ．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥
1、一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件 ( )
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③合成培养基需加血浆 ④温度与动物体温相近
⑤需要02，不需要 C02 ⑥能调培养液pH
A ．①②③④⑤⑥ B．①②③④
C ．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥
2、下列哪一项属于克隆 ( )
A ．将鸡的某个DNA 片段整合到小鼠的DNA 分子中
B ．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内
C ．将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
D ．将某肿瘤细胞在体外培养成一个细胞系
3、动物细胞工程技术的基础是 （ ）
A. 动物细胞融合 B 胚胎移植 C动物细胞培养 D 核移植
4、在动物细胞培养过程中，遗传物质肯定发生改变的细胞是
A ．细胞系B ．细胞株C ．原代细胞 D ．克隆的细胞
5、下列有关细胞全能性的含义，正确的是：
A. 每个生物体内的所有细胞都具有相同的功能
B. 生物体内的任何一个细胞可以完成该个体的全部功能
C. 生物体的每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能
D. 生物体的每个细胞都经过产生、分裂、分化、生长、衰老、死亡的全过程
6、要相获得大量单克隆抗体就必须用单个B 淋巴细胞进行无性繁殖，形成细胞群。原因是
A ．在体外培养条件下，B 淋巴细胞可以无限增殖
B ．在动物体内，每种B 淋巴细胞可产生多达数百万种以上的抗体
C ．每一个B 淋巴细胞都参与特异性免疫反应
D 每一个B 淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
7、动物细胞融合和植物体细胞杂交比较下列叙述中正确的是 ( )
A ．诱导融合的方法完全相同 B．所用的技术手段基本相同
C ．所采用的原理完全相同 D．都能形成杂种细胞
8、动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于 （ ）
A ．所用培养方法不同
B ．动物细胞培养不需要在无菌的条件下进行
C ．动物细胞培养需要用胰蛋白酶把组织消化形成单个细胞
D ．动物细胞可传代培养，植物细胞不能
9、下列人体细胞中分化程度最低的是 （ ）
A ．胚胎干细胞 B．造血干细胞 C．胰腺细胞 D．肌肉细胞
10、动物细胞融合和植物体细胞杂交比较下列叙述中正确的是 ( )
A ．诱导融合的方法完全相同 B．所用的技术手段基本相同
C ．所采用的原理完全相同 D．都能形成杂种细胞
1．下列关于细胞培养的叙述正确的是 （D ）
A ．培养中的人效应T 细胞能产生单克隆抗体
B ．培养中的人B 细胞能够无限地增殖
C ．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株
D ．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞
2．单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述，
错误的是 （C ） ．．
A ．特异性强、灵敏度高
B ．与抗癌药物结合可制成“生物导弹”
C ．体外培养B 淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体
D ．由效应B 细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌
3. 人类寄希望于利用干细胞（人体中具有分裂、分化能力的细胞）的分离和体外培养，在体外培育出组织
器官，并最终通过组织或器官移植实现对临床疾病的治疗。能否用肌细胞代替干细胞
（B ）
A ．不能，因为肌细胞与干细胞所含有的遗传物质不同
B ．不能，因为肌细胞是高度分化的细胞，没有分裂能力
C ．能，因为肌细胞虽然是分化的细胞，但在一定条件下也可脱分化，实现细胞全能性
D ．能，因为肌细胞与干细胞具有完全相同的遗传物质
4. 通过细胞工程生产单克隆抗体时，要涉及到以下三个筛选过程： ① 在特定培养基中筛选出杂交瘤细胞 错误！未找到引用源。 选出能产生抗体的效应B 细胞 错误！未找到引用源。选出能产生特定抗体并能大量增殖的细胞群。这三个过程的先后次序是 （C ）
A. 错误！未找到引用源。错误！未找到引用源。① B.错误！未找到引用源。①错误！未找到引用源。 C.错误！未找到引用源。①错误！未找到引用源。 D. ①错误！未找到引用源。错误！未找到引用源。
5. 动物细胞培养的细胞来自于 （ D ）
A ．任何个体的细胞 B ．只能取自动物胚胎细胞
C ．只能取自幼龄动物的组织细胞 D ．胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞
6. 关于单克隆抗体的不正确叙述是 （ A ）
A. 化学性质单一 B ．用有性繁殖获得
C．特异性强 D ．可用于治病、防病
7. 研究单克隆抗体治疗癌症的思路是 （ D ）
A ．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞
B ．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞
C ．抗癌物质在克隆细胞中大量合成
D ．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合
8．动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是 （ A ）
A. 动物细胞培养 B．动物细胞融合 C．单克隆杭体 D．胚胎、核移植
9 小鼠骨髓瘤细胞与某一种B 淋巴细胞融合成为杂交瘤细胞，这种杂交瘤细胞（D ）
A. 发生了基因突变 B.只能在体外大量增殖
C. 只能在体内大量增殖 D.能产生特定的抗体
10. 生产单克隆抗体时，在培养基中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞，该试剂的作用是
（A ）
A.能选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA 复制
B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活
C.能抑制淋巴细胞的DNA 复制
D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成
11 从细胞全能性的角度看，下列叙述正确的是 (C)
A. 分化程度高，具有较高的全能性 B.分化程度低，具有较低的全能性
C. 分化程度低，具有较高的全能性 D.分化程度高低与全能性无关
12. 下列哪一项属于克隆 ( B )
A. 将鸡的某个DNA 片断整合到小鼠的DNA 分子中
B. 将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系
C. 将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内
D. 将鼠的骨髓细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
13. 在动物细胞培养的有关叙述中正确的是 (D)
A 、细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中
B 、动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等
C 、动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白
D 、动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理
14. 、英国科学家维尔莫特首次用羊的体细胞(乳腺细胞) 成功地培育出一只小母羊，取名“多利”，这一方
法被称之为“克隆”，以下四项中与此方法在本质上最相近的是
(A)
A ．将兔的早期胚胎分割后，分别植入两只母兔子宫内，并最终发育成两只一样的兔
B ．将人的抗病毒基因嫁接到烟草的DNA 分子上，培育出具有抗病能力的烟草新品种
C ．将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
D ．将人的精子与卵细胞在体外受精，受精卵在试管内发育
15. 有关动物细胞培养的叙述中正确的是 (A)
A ．动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散
B ．动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白
C ．细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中
D ．培养至50代后能继续传代的传代细胞叫细胞株
1. 有关全能性的叙述，不正确的是?( C )
A．受精卵在自然条件下能使后代细胞形成完整个体，因此全能性最高
B．生物体内细胞由于分化，全能性不能表达
c．卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性很高
D．植物细胞离体培养在一定条件卞能表现出全能性
2。植物细胞工程通常采用的技术手段有植物组织培养和植物体细胞杂交等，这些技术的理论基础是 ( D )
A ．植物细胞的结构是完整的 B．植物细胞能进行有丝分裂
C ．植物体的生命活动受激素调节 D．植物细胞具有全能性
3. 通过细胞杂交，获得一个杂种植株，需要的步骤是 ( C )
A．获取细胞一原生质体融合一组织培养一杂种植株
B．获取细胞一细胞融合一组织培养一杂种植株
C．分离原生质体一诱导原生质体融合一组织培养一杂种植株
D．分离原生质体一原生质体融合一组织培养一杂种植株
4. 下列有关细胞工程的叙述，不正确的是 ( C )
A ．在细胞整体水平上定向改变遗传物质 B．在细胞器水平上定向改变遗传物质
C ．在细胞器水平上定向改变细胞核的遗传物质 D．在细胞整体水平上获得细胞产品
5诱变育种. 的原理是 ( A )
A．基因突变 B．染色体变异
C．基因重组 D．体细胞杂交
6. 在动物细胞组织培养过程中，下面哪种物质不是必需的 ( B )
A ．单糖 B．核苷酸 C．氨基酸 D．无机盐
7. 一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件 ( D )
①无毒的环境②无菌的环境 ③合成培养基需加血浆 ④温度与动物体温相近⑤需要02，不需要
C02⑥C02能调培养液pH
A．①②③④⑤⑥ B．①②③④
C．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥
8. 关于动物细胞培养的错误叙述是 ( D )
A ．用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织’
B．将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞
C．在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液
D．动物细胞培养只能传50代左右。所培育的细胞会衰老死亡
9. 动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是 ( A )
A．动物细胞培养 B．动物细胞融合
C．单克隆抗体 D．胚胎、核移植
10. 动物细胞培养的主要过程是?????( D )
A．动物细胞培养基常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐和动物血清
B．动物细胞培养是单个细胞在细胞悬浮液中培养
C．动物细胞培养可以传代培养到10代左右就不能再传代下去了
D．动物细胞培养由原代培养经传代培养形成细胞株，再形成细胞系
11. 动物细胞培养一开始，处理成块的组织细胞．使其分散成单细胞所用的酶是 ( C )
A ．淀粉酶 B．脂肪酶 C．胰蛋白酶 D．胃蛋白酶
1、植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不相符的是（ ）
A ．纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性
B ．植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性
C ．原生质体融合和动物细胞融合——生物膜的流动性
D ．紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞增殖
2、以下4种细胞工程技术培育出的新个体中，体内遗传物质均来自一个亲本的是（ ）
A ．细胞和组织培养 B ．细胞融合 C．动物胚胎移植 D ．细胞核移植
3、用于核移植的供体细胞一般都选用（ ）
A. 受精卵 B.传代10代以内的细胞
C. 传代10~50代以内的细胞 D.处于减数分裂第二次分裂中期的次级卵母细胞
4、下列哪一项属于克隆（ ）
A. 将鸡的某个DNA 片断整合到小鼠的DNA 分子中
B. 将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系
C. 将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内
D. 将鼠的骨髓细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
5、植物体细胞杂交是利用不同物种的两个体细胞融合成一个杂种细胞的过程。该过程是指（
A. 不同植物的精子与卵细胞的融合 B.不同植物的原生质体的融合
C. 完整的两个体细胞的融合 D.植物花粉细胞的两两融合
6、从细胞全能性的角度看，下列叙述正确的是（ ）
A. 分化程度高，具有较高的全能性 B.分化程度低，具有较低的全能性
C. 分化程度低，具有较高的全能性 D.分化程度高低与全能性无关
7、关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是（ ）
A. 可以制成诊断盒，用于疾病的珍断 B.可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗
C.可以利用基因工程技术生产 D. 可以在生物体内生产，不能体外生产
）
8、下列关于动物细胞培养的有关叙述中正确的是（ ）
A. 细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中
B. 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等
C. 动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白
D. 动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理
9、下列关于植物体细胞杂交的叙述，错误的是（ ）
A 不同种植物原生质体融合的过程属于植物体细胞杂交过程
B 原生质体仍具有再生细胞壁，连续分裂并长成完整植株的能力
C 参与杂种细胞的细胞壁形成的细胞器主要是线粒体和核糖体
D 植物体细胞杂交技术可克服不同种植物之间的不亲和障碍
10、在动物细胞培养过程中，下列处理不恰当的是（ ）
A ．培养液和培养用具要进行无菌处理 B．提供种类齐全的营养物质
C ．提供纯氧以保证细胞的呼吸作用 D．保证提供适宜的温度和pH
11、下列有关植物细胞工程应用的叙述，错误的是（ ）
A ．利用组织培养技术培育脱毒苗，获得具有抗病毒的新品种
B ．利用组织培养技术获得人工种子，大多能保持亲本的优良性状
C ．利用细胞培养技术获得紫草素，实现了细胞产物的工厂化生产
D ．利用植物体细胞杂交技术获得“萝卜—甘蓝”，克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍
12、下列关于植物组织培养和动物细胞培养的相关叙述中，正确的是（ ）
A ．动物细胞培养的原理是细胞增殖
B ．动物细胞培养过程也需要进行脱分化处理
C ．目前利用动物细胞培养技术已能产生新的动物个体
D ．植物组织培养要用一定的方法将细胞分散开来
13、在动物细胞核移植技术的应用过程中，用于核移植的供体细胞一般都选用10代以内的培养细胞，其主要原因是（ ）
A ．传代培养的细胞一般传至10代后不易传下去
B ．10代以内的细胞一般能保持保持正常的二倍体核型，保证供体细胞正常的遗传基础
C ．10代以后细胞的核型一定会发生变化，朝着癌细胞方向发展
D ．10代以内的细胞不能产生变异，可保持细胞正常的遗传基础
14、在生物体的所有细胞中，全能性最高的是（ ）
A ．卵细胞 B 植物花粉 C．体细胞 D 受精卵
15、通过细胞杂交, 获得一个杂种植株, 需要的步骤是 ( )
A. 分离原生质 诱导原生质融合 生出细胞壁 组织培养法 得到杂种植株 B. 杂种植株
C. 杂种植株
D. 杂种植株
16、一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件 ( )
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③合成培养基需加血浆 ④温度与动物体温相近
⑤需要02，不需要 C02 ⑥能调培养液pH
A ．①②③④⑤⑥ B．①②③④
C ．①③④⑤⑥ D ．①②③④⑥
17、在细胞工程中，需要利用细胞的全能性。下列细胞中全能性最高的是
A. 胡萝卜的韧皮部细胞 B.水稻的花粉
C. 绵羊的乳腺细胞 D.大白鼠的受精卵
18、在以下四种细胞工程的技术中，培育出新个体的同时具有两个亲本遗传性状的方法是（ ）
A. 细胞和组织培养 B.细胞融合 C.动物胚胎移植 D.细胞核移植
19、下列过程中，没有发生生物膜融合的是 （ ）
A ．植物体细胞杂交 B ．受精过程
C ．氧进入细胞中的线粒体 D ．效应B 细胞产生抗体
20、下列有关植物体细胞杂交技术的描述，不正确的是（ ）
A ．利用植物体细胞杂交可以获得某种多倍体植株
B ．获得原生质体的过程中需要纤维素酶和果胶酶
C ．通常用聚乙二醇或灭活病毒诱导原生质体融合
D ．可根据细胞中染色体数目和形态的差异来鉴定杂种细胞
21、在植物细胞工程中，当原生质体融合成一个细胞后，需要诱导产生出细胞壁，参与这一过程的细胞器是：
A ．叶绿体、高尔基体 B ．线粒体、高尔基体
C ．叶绿体、线粒体 D．线粒体、内质网
22、下面哪一项生物技术与细胞全能性是无关的（ ）
A. 克隆羊的培育 B.干细胞培育出器官
C. 无籽西瓜的培育 D.胚胎分割移植
23、通过细胞工程生产单克隆抗体时，要涉及到以下三个筛选过程： ① 在特定培养基中筛选出杂交瘤细胞 错误！未找到引用源。 选出能产生抗体的效应B 细胞 错误！未找到引用源。选出能产生特定抗体并能大量增殖的细胞群。这三个过程的先后次序是（ ）
A. 错误！未找到引用源。错误！未找到引用源。① B.错误！未找到引用源。①错误！未找到引用源。 C. 错误！未找到引用源。①错误！未找到引用源。 D.①错误！未找到引用源。错误！未找到引用源。
24、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的Ｂ淋巴细胞融合，对得到的杂交细胞不正确的叙述是 （ ）
A. 有双亲细胞的遗传物质 B . 无增殖的本领
C. 可分泌特异性抗体 D.有大量增殖的本领
25、下列生理活动与生物膜无关的是 （ ）
A 、ATP 分子的形成 B、神经递质释放到突触间隙内
C 、抗体与SARS 病毒特异性结合 D、原生质体融合成杂合体细胞
1. 下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（D ）
A ．培养中的人效应T 细胞能产生单克隆抗体
B ．培养中的人B 细胞能够无限地增殖
C ．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株
D ．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞
2. 单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是（ C）
A ．特异性强、灵敏度高
B ．与抗癌药物结合可制成“生物导弹”
C ．体外培养B 淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体
D ．由效应B 细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌
3. 关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是（ D） ．
A ．可以制成诊断盒．用于疾病的珍断
B ．可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗
C ．可以利用基因工程技术生产
D ．可以在生物体内生产，不能体外生产
4. 下列关于细胞工程的叙述中，错误的是（ C ）
A ．植物细胞融合必须先制备原生质体
B ．试管婴儿技术包括人工受精和胚胎移植两方面
C ．经细胞核移植培育出新个体只具有一个亲本的遗传性状
范文二：2015届高三生物二轮复习：选择题专项训练《细胞的结构与细胞工程》
选择题专项训练 细胞的结构与细胞工程 一、 单项选择题
1. 下列关于细胞中化合物的叙述中，错误的是( )
A. 胆固醇、性激素、维生素D都属于脂质
B. 植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶
C. 核糖核苷酸是染色体的主要成分之一
D. 蛋白质的多样性与氨基酸的种类、数目、排列顺序等有关 2. 下列关于蛋白质的叙述中，正确的是( ) A. 蛋白质大多是由20种氨基酸脱水缩合而成的链状结构 B. 蛋白质在核糖体中合成后即都具有正常的功能 C. 细胞内以及细胞间传递信息的物质都是蛋白质 D. 同一生物体的不同细胞中所含的蛋白质不完全相同 3. 下列关于细胞中元素和化合物的描述，正确的是( ) A. C是活细胞中含量最多的元素，是生命的核心元素 B. 蛋白质是活细胞中含量最多的化合物，是生命活动的主要承担者 C. DNA分子携带大量遗传信息，是绝大多数生物的遗传物质 D. 糖原分子中贮存大量能量，是生命活动的直接能源物质 4. 下列关于细胞核的叙述中，不正确的是( ) A. 染色质是细胞核内易被碱性染料染成深色的物质 B. 核仁是与核糖体的形成有关的细胞器
C. 核孔是RNA、酶等大分子物质进出细胞核的通道 D. 核膜为双层膜
5. 支原体感染引起的传染性尿道炎较难治愈。下图是支原体细胞结构示意图，
相关叙述中正确的是( )
A. 支原体通过有丝分裂而增殖
B. 细胞膜和核糖体构成支原体的生物膜系统
C. 在mRNA合成的同时就会有多个核糖体结合到mRNA上 D. 青霉素能抑制细胞壁的形成，可用于治疗支原体感染引起的疾病 6. 构成细胞器的膜具有的共同点是( )
A. 结构特点相同
B. 都附着有核糖体
C. 脂质和蛋白质的比例相同
D. 都可以转化成细胞膜
7. 下图是某细胞的部分结构，有关叙述中正确的是( )
A. 结构?中的磷元素分布于DNA中
B. 结构???中都含有RNA
C. 结构???都具有双层膜
D. 结构??的基质中都能产生ATP
8. 下图是某动物细胞亚显微结构模式图，下列与该图有关的说法中，正确的是( )
A. ?的结构特点是具有一定的流动性
B. ?和?在结构上有直接联系
C. 图中具有双层膜的结构只有?
D. ?结构只能存在于该类细胞中
9. 下图表示物质跨膜转运的一种方式。据图分析正确的是( )
A. 这种转运方式可逆浓度梯度进行
B. 水分子是以这种方式进入细胞的
C. 细胞产生的能量增加会提高物质的转运速率
D. 载体蛋白在物质转运过程中形状会发生改变
10. 在改变培养基中IAA(生长素)与KT(一种人工合成的细胞分裂素)的比例时，可改变烟草愈伤组织的分化方向，如下表所示。下列相关叙述中正确的是( )
IAA 3 3 0.03 — 激素添加量
-1 /mg?LKT 0.2 0.02 1 0.2
生长状况 愈伤组织 生根 茎叶分化 无生长
A. 愈伤组织分化为根、茎和叶的过程叫脱分化
B. 培养基中添加IAA可以促进生长和生根
C. 只要培养基中添加KT，细胞就能分裂
D. 培养基中添加的IAA与KT的比值较高时，有利于茎叶的形成 11. 辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域，其获得途径如
) 下图所示。下列叙述中错误的是(
A. 图中?和?分别表示辣椒组织培养中细胞的脱分化和再分化过程 B. 图中愈伤组织、脱毒苗和高产细胞系的获得都体现了植物细胞的全能性 C. ?过程中需用适宜配比的生长素和细胞分裂素溶液处理
D. 用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是纤维素酶和果胶酶 12. 利用细胞工程的方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述中正确的是( )
A. 体外培养单个效应B细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体 B. 用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体 C. 利用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出病毒感
染者
D. 将等量效应B细胞和骨髓瘤细胞混合，经聚乙二醇诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞
二、 多项选择题
13. 下列关于细胞内化合物功能的叙述中，错误的是( ) A. 糖原、纤维素、淀粉都是储能物质
B. 脂肪是构成生物膜的重要成分
C. 蛋白质是生命活动的主要承担者
D. DNA和RNA都是细胞内的遗传物质
14. 下列有关生物膜的叙述中，正确的是( )
A. 细胞膜、细胞器膜、核膜都是生物膜
B. 原核生物中合成的分泌蛋白不需要生物膜的加工
C. 细胞膜在细胞与外界进行能量转换的过程中起着决定性的作用 D. 真核细胞与原核细胞的根本区别是有无生物膜
15. 下列有关生物工程的叙述中，错误的是( )
A. 在筛选杂交瘤细胞的过程中需要使用特定的选择培养基 B. 应用基因诊断技术，可检测受体细胞中目的基因是否表达 C. 茎尖细胞具有很强的分裂能力，离体培养时不需要脱分化即可培养成完整植株
D. 将牛的体细胞核移植到去核卵母细胞中，获得克隆牛是一种培育新物种的方式
选择题专项训练
选择题专项训练一 细胞的结构与细胞工程
1. C
2. D
3. C
4. B
5. C
6. A
7. B
8. A
9. D
10. B 11. B 12. C 13. ABD 14. ABC 15. BCD
范文三：细胞工程细胞工程基础
第二章细胞工程基础
本章是本课程的理论基础和技术基础，重点回顾了一些重要的与细胞工程有关的理论背景知识，以及涉及的相关设施与技术，目的是为后续细胞工程各章的学习奠定基础。 内容提要：第一部分细胞工程的理论基础
第二部分细胞工程的技术基础
第一部分细胞工程的理论基础
一、细胞的基本结构及功能 四、组织与器官
二、细胞分化及细胞凋亡 五、生殖与发育
三、细胞周期及细胞分裂
一、细胞的基本结构及功能
细胞（cell ）是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成，但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。
1、由膜包围的原生质团，通过质膜与周围环境进行物质和信息交流；
2、构成有机体的基本单位，具有自我复制的能力，是有机体生长发育的基础；
3、代谢与功能的基本单位，具有完整的代谢和调节体系，不同的细胞执行不同的功能；
4、遗传的基本单位，具有发育的全能性。
（一）细胞的基本共性
1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质构成的生物膜，即细胞膜。
2、所有的细胞都含有两种核酸：即DNA 与RNA 作为遗传信息复制与转录的载体。
3、作为蛋白质合成的机器─核糖体，毫无例外地存在于一切细胞内。
4、所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。
（二）细胞世界的两大家族：原核细胞和真核细胞
1、原核细胞基本特点：遗传的信息量小，遗传信息载体仅由一个环状DNA 构成；细胞内没有分化为以膜为基础的具有专门结构与功能的
细胞器和细胞核膜。
主要代表：
支原体（最小最简单的细胞）
细菌
蓝藻（蓝细菌）
（二）真核细胞的基本结构体系
1、以脂质及蛋白质成分为基础的生物膜结构系统
2、以核酸（DNA 或RNA ）与蛋白质为主要成分的遗传信息表达系统
3、由特异蛋白分子装配构成的细胞骨架系统。
（三）动物细胞与植物细胞的比较：
相同点：都有细胞膜、细胞质、细胞核。
不同点：动物细胞、低等植物有中心体；植物细胞有细胞壁，部分细胞有叶绿体、中央
大液泡，动物细胞没有。
（三）综合原核细胞和真核细胞的特点，二者的根本区别可归纳为下面两条：
1、细胞膜系统的分化和演变
真核细胞以膜分化为基础，分化为结构更精细，功能更专一的单位——各种膜围细胞器，使细胞内部结构与职能分工。而原核细胞无此情况。
2、遗传信息量大与遗传装置的复杂化
真核细胞的遗传信息可达上万个基因，具有重复序列, 染色体功能具二倍性或多倍性。原核细胞为单倍性。仅为一条环状DNA 分子，细菌只有几千个基因。
理论基础
3、真核细胞遗传信息的转录和翻译有严格地阶段性与区域性，原核细胞则不具备这些。
假如，真核细胞是结构复杂、功能专一与自动化程度较高的“工厂”，那么，原核细胞就象结构简单、职能上却是多面手的“作坊”。前者固然结构复杂，但在特定条件下，原核细胞却比真核细胞有更强的适应性。
（四）真核细胞三大结构体系
1、生物膜系统——质膜、内膜系统（细胞器）
具有质膜，由膜围成的各种细胞器，如核膜、内质网、高尔基体、线粒体、叶绿体、溶酶体等在结构上形成了一个连续的体系，称为内膜系统。
内膜系统将细胞质分隔成不同的区域，即所谓的区隔化(compartmentalization)。区隔化使细胞内表面积增加了数十倍，代谢能力增强。
2、遗传信息表达系统——染色质(体) 、核糖体、mRNA 、tRNA 等
3、细胞骨架系统——胞质骨架、核骨架
二、细胞分化与细胞凋亡（重点）
（一）细胞分化（cell differentiation）的概念
同型的胚胎细胞，在细胞分裂、发育过程中，形态结构、生化组成、生理过程上产生专一性和特异性的现象，称细胞分化。是细胞功能和形态逐渐转化、产生稳定组织差异的过程。
（二）细胞分化的分子基础是细胞决定(determination)
细胞的分化可被识别之前，细胞沿着特定方向变化的能力已经被提前赋予了，这种现象称细胞决定。是细胞分化潜能逐渐受限的过程。
分化的本质：细胞按照一定的时空顺序差异基因表达（differential gene express）。如奢侈基因（luxury gene）, 持家基因（house-keeping gene）。
**组织特异性基因与当家基因
◆持家基因(house-keeping genes) ：是指所有细胞中均要表达的一类基因，其产物是对维持
细胞基本生命活动所必需的.
◆组织特异性基因(tissue-specific genes)，或称奢侈基因(luxury genes)：是指不同的细胞类型
进行特异性表达的基因，其产物赋予各种类型细胞特异的形态结构特征与特异的功能.
（三）影响细胞分化的因素
1、胞外信号分子的诱导作用（一部分细胞对周围细胞的分化诱导）：
如成纤维细胞生长因子（FGF ）、转化生长因子(TGF)。
2、激素的诱导：
3、细胞质的不均一性：如卵和受精卵。
4、“位置效应”：细胞在组织和机体内的位置影响其分化。
5、外部环境条件对分化的影响：如早期胚胎中，胚胎表面的细胞→滋养外胚层，内部的
细胞→内细胞团（将形成胚胎）。如动物卵细胞未经排卵而被激活，将在卵巢中异位发育成畸胎瘤。
（四）细胞分化的时空性
1、时间上的分化：指一个细胞在不同的发育阶段上可以有不同的形态和机能，不同的发育时间细胞之间的区别。
空间上的分化：指处于不同空间位置中的同一种细胞后代之间出现的差异。
2、单细胞生物仅有时间上的分化，如噬菌体的溶菌型和溶原型。
多细胞生物的细胞不但有时间上的分化，而且由于在同一个体上的各个细胞所处的位置不同，因而发生机能上的分工，于是又有空间上的分化，如一个植物个体在其顶端、根、茎、叶等不同部位具有不同的细胞。
（五）细胞分化潜能
细胞分化潜能：细胞分化能力的强弱称为发育潜能。
植物细胞的分化潜能：植物细胞在发育潜能上，高度分化的植物营养组织仍保持着发育成完整植株的能力，即具有全能性。
动物细胞分化潜能——细胞分化潜能逐渐变窄
全能细胞（totipotent cell）:单个细胞在一定条件下分化发育成为完整个体的潜能称为
细胞的全能性。
受精卵——卵细胞——卵裂至8个细胞前的细胞
多能细胞（pluripotent cell）：虽然局限，但仍有发育成多种表型细胞的能力，这种细
胞称为多能细胞。
单能细胞（unipotent cell ）：形态上、功能上专一化的终末分化细胞，被称为单能细
胞。
（六）细胞全能性（重点）
1、细胞全能性（totipotency ）：生物的每一个细胞经过分裂和分化后，仍然保持发育成完整个体的潜在能力的特性。
证明：植物单细胞培养成完整植株，哺乳动物体细胞核移植克隆。
原因：细胞具有这种潜能是因为每个细胞都包含了这个物种的所特有的全套遗传物质，具有发育成为完整个体所必需的全部基因。
细胞的全能性为开展细胞工程研究提供了广阔空间。
**问题一：为什么体内细胞没有表现出全能性，而是分化成为不同的组织、器官？
基因在特定空间和时间条件下选择性表达的结果。在个体发育的不同时期，生物体不同部位的细胞表达的基因是不同的，合成的蛋白质也不一样，从而形成了不同的组织和器官。
2、细胞表现出全能性的条件:
（1）离体状态
（2）具有一定营养物质、激素和其他外界条件
（七）细胞凋亡的概念及其生物学意义
1、概念：细胞凋亡是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程, 所以也常常被称为细胞编程死亡（programmed cell death, PCD）。凋亡细胞将被吞噬细胞吞噬。
2、生物学意义：细胞凋亡对于多细胞生物个体发育的正常进行，自稳平衡的保持以及抵御外界各种因素的干扰方面都起着非常关键的作用.
例子：蝌蚪尾的消失; 骨髓和肠的细胞凋亡; 脊椎动物的神经系统的发育；发育过程中手和足的成形过程。
三、细胞周期与细胞分裂
1、细胞周期：细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分完成所经历的一个有序过程。其间细胞遗传物质和其他内含物分配给子细胞。
细胞沿着G1→S →G2→M →G1周期性运转，在间期细胞体积增大(生长) ，在 M 期细胞先是核分裂，接着胞质分裂，完成一个细胞周期。细胞周期时间长短主要差别在G1期。
**问题二：细胞分裂的方式有几种，分别是什么？
1、无丝分裂(amitosis)：又称直接分裂，由Remark （1841）发现于鸡胚血细胞，不涉及纺锤体形成及染色体变化。胞核拉长，核中间断裂，胞质一分为二。低等动物、植物胚乳发育、动物上皮组织、疏松结缔组织、肌肉组织、肝细胞有无丝分裂。优势：分裂快、能耗少、分裂中细胞功能继续发挥——利于细胞对外界环境变化作出迅速反应。缺陷：遗传物质不能有效均等分配。
2、有丝分裂(mitosis) ：又称为间接分裂，由Fleming (1882)年首次发现于动物，Strasburger(1880)发现于植物。
3、减数分裂(meiosis）：染色体复制一次，细胞连续分裂两次。是发生于有性生殖个体生殖细胞的一种特殊的有丝分裂方式。
**有丝分裂细胞分裂间期主要完成哪些任务？前、中、后、末期都有哪些变化？
1、间期：完成组成染色体的DNA 分子的复制和有关蛋白质的合成。
2、前期：出现染色体、核膜解体、核仁消失、形成纺垂体。
3、中期：染色体排列到赤道面上。
4、后期：姐妹染色体单体分开并移向两极的时期。
5、期末：从子染色体到达两极，至形成两个新细胞为止。
**问题三：有丝分裂与减数分裂各自特点是怎样的？有怎样的区别？
减数分裂染色体经过复制一次后，要经过两次分裂，形成四个细胞，结果子细胞的染色体数目比亲代细胞减少了一半。
四、组织与器官
1、器官：由四大基本组织有机结合组成，具有一定形态结构，并执行一定生理功能。 系统：由器官联合构成，能完成某一连续性生理功能。
组织:上皮组织、结缔组织、肌组织、神经组织（四大组织类型）
2、植物的组织分为：分生组织和永久组织。
分生组织：在成长的植物体内总保留一部分未分化的细胞，他们能继续分裂、分化以补充新的细胞。由这些细胞构成的组织称为分生组织。如茎尖、根尖及形成层细胞。 永久组织：在生长发育中，细胞陆续分化而失去分裂能力，成为有特定功能的细胞组织。如筛管、导管、气孔保卫细胞等特化细胞。
3、动物组织分为：上皮组织、结缔组织、肌肉组织和神经组织。
五、生殖与发育
（一）无性生殖
一切不涉及性别、没有配子参与、没有受精过程的生殖。
裂殖（单细胞）、出芽（以酵母为代表）、孢子生殖（真菌和藻类产生孢子）、再生作用（生物自身修复损伤）。
（二）有性生殖
两个性细胞融合为一，成为合子或受精卵，再发育成为新一代个体。分：高等植物的生殖和发育和高等动物的生殖和发育。
高等动物的生殖和发育
动物受精卵的早期发育一般都要经过囊胚、原肠胚和中胚层发生等阶段。
（三）遗传与育种
培养动植物优良品种可以采用以下方法：
1、根据细胞融合、杂交等理论建立新品种；
2、人工诱发突变，即用辐射或化学诱变剂等手段改变遗传形状，诱导新品种的产生；
3、采用多倍体诱导等染色体工程技术；
4、通过转基因技术转入外源基因再体内表达，制造新物种；
5、通过组织培养、胚胎移植、克隆等技术手段实现快速育种。
第二部分细胞工程的技术基础
一、细胞培养的设施与基本条件
（一）细胞工程实验室的设置
细胞工程实验室设计
原则: 防止微生物污染和有害因素影响.
要求:
工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘；
划分不同功能区或用铝合金隔板隔开；
无菌操作区应在室内较少走动的内侧；
清洗和消毒安置在另室.
（二）植物细胞培养室的设置
◆温度：一般控制在25±2oC
◆光照：光强、光质、光照时间
（三）常用仪器与设备
1、动植物细胞工程实验室通用仪器设备
超净工作台：利用鼓风机驱动空气通过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到 净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。
荧光倒置相差显微镜：其照明系统位于镜体上方，而物镜和目镜则位于下部。在集光器和载物台之间有较大的工作距离，可以放置培养皿和细胞培养瓶等容器，辅助以相差和荧光光学系统，可以很方便地对培养或染色中的细胞和组织进行观察。
水纯化装置：自动双重纯水蒸馏器；超纯水器
冰箱：普通冰箱（4℃，－20 ℃）；低温冰箱（－20 ℃）；超低温冰箱（－80 ℃） 电热干燥箱：干热灭菌和烘干玻璃器皿；100度以下时再打开箱门；金属器械、塑料制品、橡胶等不能在干燥箱内消毒
灭菌锅：真空灭菌锅；高压灭菌锅
过滤除菌装置
细胞计数板或计数仪
其它常用仪器设备
◆离心机和离心管 ◆移液器 ◆酶标仪
◆移液管和吸管 ◆天平等
2、动物细胞工程实验室常用设备
（1）CO2培养箱：设定条件为37 ℃，5％ CO2。
使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：
1）用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。
2）保持培养箱内空气干净。定期消毒（90 ℃，14 h)。
3）箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度，避免培养液蒸发。
（2）显微操作仪
（3）细胞电融合仪
（4）细胞冷冻储存器——液氮罐（-196℃，不断挥发，及时补充）
（5）培养用器皿：玻璃器皿；塑料器皿；多孔培养板（4、6、24、96孔）；培养皿（30、
60、100毫米）；培养瓶（500毫升、250毫升、100毫升）
（6）手术器械（主要用于动物组织取材、解剖）：解剖刀；解剖剪；虹膜剪；镊子；
注意保护刀锋，钝刀对组织有伤害，不利细胞生长
3、植物细胞工程实验室常用设备
（1）光照培养箱
（2）人工气候室
（3）摇床
（4）培养瓶
（四）实验室的生物安全
1、生物安全防护水平（BSL ）
由一级防护屏障（安全设备）和二级防护屏障（实验室设施）组合构成四级生物安全水平。 生物安全防护水平（BSL ）：一级生物安全防护水平（BSL －1）P1
二级生物安全防护水平（BSL －2）P2
三级生物安全防护水平（BSL －3）P3
四级生物安全防护水平（BSL －4）P4
2、细胞培养的基本条件
无菌条件：净化工作室，高效过滤器，生物安全柜，超净工作台，紫外灯，电热干燥箱，
滤器，高压灭菌器，抗生素
细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶，CO2培养箱，培养基，血清 细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪，微孔板震荡器，高速离心机，移液器
细胞保存条件：液氮罐
实验室安全：生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全
二、清洗与消毒
2.1清洗
在培养物中无毒和无菌是保证培养细胞生存的首要条件，因此对培养器皿的清洗和灭菌是极为重要的环节。
清洗的目的是清除杂质和微生物, 使器皿内不残留任何影响细胞生长的成分(有害物质、微生物、细胞碎片及非营养性化学成分）。
2.1.1 玻璃器皿的清洗
玻璃用品包括常用的各种规格的培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。
在细胞培养中，工作量最大的是玻璃器皿的清洗。清洗后的玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹，而且不能残留任何物质。某些化学物质仅百万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。因此，玻璃器皿的清洗必须严格按照程序进行。
一般玻璃器皿的清洗包括：浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。
①浸泡
初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶掉。培养后的玻璃器皿多附有大量蛋白质，用完后应立即初步刷洗，浸泡在蒸馏水中，注意让水完全进入瓶皿中，不要留有气泡。使用新的器皿应先用自来水简单刷洗，然后用稀盐酸(5％) 浸泡过夜或煮沸30分钟，中和其中的碱性物质后再清洗。
②刷洗
浸泡后的玻璃器皿要用软毛刷和优质洗涤剂（加热）刷洗。
③浸酸
刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸泡的强氧化作用可被除掉。清洗液对玻璃器皿无腐蚀作用，去污十分有效，是清洗过程中关键环节。清洗液是由重铬酸钾、浓硫酸和水按一定比例配制而成。浸泡时器皿要充满洗液，不留气泡。浸泡时间不应少于6小时，一般应浸泡过夜。 *******************************************************************************
清洗液可根据需要，配制成不同强度. 常用的有下面3种：
强液：重铬酸钾63g ，浓硫酸1000ml ，蒸馏水200ml
次强液：重铬酸钾120g ，浓硫酸200ml ，蒸馏水1000ml
弱液：重铬酸钾l00g ，浓硫酸l00ml ，蒸馏水1000ml
配制时先将重铬酸钾完全溶解于水，然后缓慢加入浓硫酸。新配制的清洁液为棕红色，经多次使用，水份增多或遇有机溶剂时成为绿色，这时表示清洁液已失效，应废弃而重新配置。也可以使用10％～40％的硝酸溶液。
******************************************************************************* ④冲洗
玻璃器皿浸酸后必须用流水充分冲洗，每个器皿用流水灌满、倒掉，必须重复十次以上，不留任何残迹。最后用蒸馏水漂洗2-3次，用双蒸水漂洗1次，烤干备用。
玻璃滤器原则上与玻璃器皿清洗相同。无论是浸泡还是浸酸、冲洗，都需用抽滤的方法。
2.1.2 胶塞的清洗
新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自来水冲洗。胶塞类橡胶用品，每次用后先用蒸馏水浸泡，然后用2％NaOH 煮沸10-20min ，用自来水冲洗干净，再用1％稀盐酸浸泡30min ，用自来水冲洗、蒸馏水漂洗2-3次，最后双蒸或三蒸水漂洗1次，晾干后备用。 清洗
2.1.3 塑料器皿的清洗
细胞培养使用的塑料器皿主要有培养板、培养皿及培养瓶等。这些产品主要是进口的一次性商品，己消毒灭菌，打开就可使用。
如想反复使用，清洗方法如下：用后立即用流水清洗或浸泡在水中，用脱脂棉清拭掉残留附着物，用2％NaOH 浸泡过夜，流水冲净后再用5％盐酸浸泡30min ，自来水冲洗、蒸馏水漂洗2-3次，最后三蒸水漂洗2次，晾干备用。
2.1.4 金属器材的清洗
主要为镊子、剪刀、解剖刀等解剖、取材、剪切组织及接种材料等的工具。
新的金属器材：先用纸擦去表面的油脂，再用洗衣粉溶液煮沸，或用1% NaHCO3煮沸15 min，擦干后再用95%酒精纱布擦干，包装或置铝盒内于121℃高压蒸汽灭菌20 min。 已用过的金属器材：灼烧消毒或高压蒸汽灭菌消毒。
2.1.5 滤器的清洗
玻璃滤器：与玻璃器皿清洗相同。无论是水浸泡还是酸浸泡，都可用抽滤法。
不锈钢滤器：使用后弃去石棉滤膜，金属部分刷洗干净，最后用蒸馏水漂洗2～3次，
晾干备用。
微孔滤膜滤器：使用后弃去微孔滤膜，滤器用清水充分冲洗，最后用蒸馏水漂洗，晾干备用。
2.2灭菌和消毒是组织培养重要的工作之一。
灭菌(sterilization)：是指用物理或化学的方法，杀灭或清除传播媒介上的所有微生物，使之达到无菌程度。
消毒（disinfection ）：是指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。经过消毒，许多细菌芽孢、霉菌的厚垣孢子等不会完全杀死，即消毒后的环境里、物品上还有活着的微生物。
物理方法： 化学方法：
①干热灭菌法 ⑥熏蒸消毒法
②湿热灭菌法 ⑦消毒药剂消毒法
③过滤除菌法 ⑧抗菌素抑菌法
④紫外射线消毒法
⑤灼烧灭菌
1、干热灭菌法：利用烘箱进行烘烤灭菌的方法，适于玻璃器皿和金属器械的灭菌。 一般器皿：150℃，40min ，或120℃，2h 可达灭菌效果。
细菌芽孢：160℃，持续90～120min 。
2、湿热灭菌法：
利用高压蒸汽锅进行的灭菌方法。常用于培养基、蒸馏水的灭菌，也适用于各种玻璃器皿、棉塞、滤纸、金属用具等。可有效缩短灭菌时间，灭菌效果好。
一般设定为：
压力：0.1Mpa （1.0～1.1kg/cm2）
温度：121℃
时间：维持20～30min 。
培养基一般用湿热灭菌法：在制备后的24小时内完成灭菌工序。灭菌后的培养基储藏在4～10℃的条件下，2周内可使用。
对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种工具，可以延长灭菌时间或提高压
力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间。
3、过滤除菌法：利用微孔滤膜过滤除菌，用于一些遇高温高压易分解或失效的物质的除菌。 如：经高温灭菌后GA3的活性仅及不经高温灭菌的新鲜溶液的10%。
抗生素、植物组织提取物等要过滤灭菌，不能高温灭菌，否则会失去作用。
*绝大多数细菌和真菌的直径在0.5～20μm ，滤膜孔径应在0.45μm 以下，一般在0.25～0.45μm 之间。
*培养基中含有需要过滤灭菌的物质时，可将除这种化合物之外的全部培养基装于一个三角瓶中进行高压灭菌，然后置于超净工作台上的无菌条件下使之冷却至40℃左右。然后将这些化合物溶液过滤灭菌，再将之加入经高压灭菌过的培养基中。
4、紫外射线消毒法：用紫外灯照射消毒的方法，细菌吸收紫外线后，蛋白质和核酸发生结构变化，引起细菌的染色体变异，造成死亡。
适用于实验室空气、操作台面、试管受精时所用的花粉等，一般照射时间15～20min 。 灭菌与消毒
5、灼烧灭菌：用酒精灯灼烧以达到灭菌目的，常用于接种器械、瓶口等。电热灭菌器，灭菌炉加温后最高可达350℃。
金属用具放在75％的酒精中浸一下，然后放在火焰上燃烧灭菌，在无菌操作过程中要反复进行。
6、熏蒸消毒法：用加热焚烧、氧化等方法，使化学药剂变为气体状态扩散到空气中，以杀死空气和物体表面的微生物。
如：向甲醛中加入高锰酸钾，促进甲醛的快速挥发而起到灭菌；或为避免材料中毒死亡，培养间可改用乙二醇加热熏蒸的方法。
适用于接种室、培养间的灭菌。
7、消毒药剂消毒法：化学消毒剂使微生物的蛋白质变性，或竞争其酶系统，或降低其表面张力，增加菌体细胞浆膜的通透性，使细胞破裂或溶解，以至细菌死亡。
常用的有70～75％酒精、升汞、次氯酸钠、次氯酸钙、过氧化氢等。
利用不同的消毒剂可以对器皿、操作台面、皮肤、实验材料等进行消毒的方法。
8、抗菌素抑菌法：利用抗生素对实验材料进行抑菌的方法。
常用的有：青霉素、链霉素、新霉素、利福平、卡拉霉素等。
三、细胞培养的基本方法
（一）磁暴培养的现实意义：
1、生物技术上：生产各种生物技术（蛋白质）产品
如：狂犬病、小儿麻痹症等病毒疫苗，表皮生长因子及干扰素、白细胞介素等生长因子及单
克隆抗体等。
2、检测有毒物质
许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。）
3、临床医学上：胎儿的遗传性疾病分析、药物筛选、某些疾病的治疗及为烧伤病人植皮. **如何利用动物细胞培养技术，解决为烧伤病人植皮问题?
利用动物细胞培养技术中细胞的贴壁生长和接触抑制特点，可以用烧伤病人自己的健康皮肤细胞培养出大量的自身薄层皮肤细胞供植皮所需。
4、用于科学研究：在病毒学、免疫学、遗传学、肿瘤学等方面。
（二）无菌操作技术
在细胞培养中防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。由于体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以在一切操作中要努力做到最大限度的无菌，防止污染。为达到这一要求，所有工作要进行得有条不紊和安全可靠。
1、培养前的准备
要充分做好培养前的实验用品准备工作，根据研究内容的要求进行物品清点包装，注明标签后灭菌、烤干备用。在工作前移入超净工作台内。
2、培养室和超净工作台的消毒
工作面先用新洁尔灭擦拭一遍后，打开紫外线灯灭菌，用30W 紫外线灯管直接照射20—30分钟。然后关闭紫外灯，打开风机。超净工作台要用75％酒精擦拭。培养用液和培养细胞不能放在紫外线下直接照射，在操作时随手携入。
3、洗手和着装
原则上与外科手术洗手相同：先用肥皂刷洗手和前臂，再用流水冲洗，然后用0.2％新洁尔灭或75％洒精棉球擦洗。穿无菌服，戴无菌帽和口罩。
4、在无菌条件下操作时，首先要点燃酒精灯，此后一切操作，如安装吸管橡皮头、打开瓶
塞、使用吸管等都要经过火焰烧灼，或在近火焰处进行（火焰消毒）。
**注意**
金属器械不能在火焰上烧灼时间过长，以防退火。烧过的用具要待冷却后才能挟取组织，以免造成组织损伤。
进行细胞培养操作时，动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。 不能用手触及器皿的无菌部分，如已接触，要更换或用火焰烧灼触及部。
为拿取方便，工作台面上的布局要合理，原则上为右手使用方便的用品放在右侧，左手用品在左侧。
培养液等不要过早开瓶，不要长时间直立暴露开口，以免增加污染机会。
吸取不同用液时，均应分别使用不同的吸管，以防扩大污染或增加混淆不同细胞的机会。 细胞在培养过程中，要及时观察和了解生长增殖状况，包括新生、增殖、消亡等各种状态的时间参数、细胞数量、分布位置等指标，以及体外因素对这些指标的调节机制。这属于细胞动力学的研究。广义的细胞动力学还包括其它的细胞运动及其原理的研究。
（三）培养细胞的观察
1、细胞技术与活力分析
（1）细胞计数法
用血球计数板计数细胞悬液中的细胞数目，然后根据需要进行必要的调整。
（2）细胞生长曲线
生长曲线是反映培养细胞的时间与培养细胞浓度之间关系的曲线。以时间（横坐标）对细胞浓度（细胞数/ml为纵坐标）绘制，反映培养过程中细胞生长与死亡的动态变化。
（3）有丝分裂指数的测定
在一群细胞中，进入分裂期细胞所占该群细胞的百分率，即为有丝分裂指数。它反映了细胞增殖的速度。
分裂细胞数
分裂指数 = ——————×100%
细胞总数
（4）细胞贴壁率
又称接种存活率，贴壁附着生长的细胞状况直接反映细胞的生存能力。
（5）流式细胞仪检测细胞周期
细胞周期各时相控制并按一定的时间顺序予以表达的，而细胞周期各时相的分析，特别是细胞周期及其各时相时长的测定对于研究细胞群体的生长行为，尤其是对于包括DNA 复制、细胞分裂在内的细胞增殖调节控制的研究，无疑是一个很重要的前提。
***基本步骤***
*细胞培养
*消化细胞计数
*种植60 mm 培养皿（70 X104 个细胞/皿）
*药物处理细胞
*收细胞（胰蛋白酶消化----培养基终止）
*2000转/分离心 10min
*去上清液PBS 重悬，重复6的步骤
*去上清加入100 ul 1mg/mlPI 和100ul 1mg/ml RNase A, 避光处理30min
*流式细胞仪检测
****************
（6）MTT 比色法测定细胞活力
活细胞表现出线粒体脱氢酶活性，可将染料MTT 还原为难溶的紫色结晶物沉积在细胞内，经酸性异丙醇溶解后呈现的色度可反映出生活细胞的代谢水平。死细胞无此酶活性。 ***基本步骤***
*细胞培养
*消化细胞计数
*种植96孔板（1~10X 103 个细胞/孔）
*药物处理细胞，结束4小时前每孔加入20 ul 5 mg/ ml MTT
*弃上清，每孔加100 ul DMSO
*560 nm 检测
*Viability (%) = OD560, TV/OD560, control × 100
****************
（7）成集落实验（Colong-forming test）
在集落刺激因子存在下培养细胞，可刺激培养细胞分化产生大小不同的细胞集落，这样的集落形成细胞称体外培养集落形成细胞，它是检验培养细胞能否增殖的过硬指标之一。 平均集落数
集落形成率 = ——————————×100
接种的单个细胞数
（四）细胞固定与染色观察
1、细胞固定
2、细胞染色
H.E （苏木精-伊红）：样品制备、染细胞核、染细胞质、脱水、透明和封片。 Giemsa 染色法：细胞核或染色体染成紫红色或蓝紫色，细胞质染成粉红色。
考马斯亮蓝染色法：细胞骨架。
3、细胞培养中常用的染色方法
活体染色：体外对活组织或细胞进行染色，对其生理活动不产生明显影响。
*用于活体染色的染料称为活体染料或活体染色剂，分为碱性和酸性两类：
*碱性活体染料：次甲基蓝、中性红、詹纳斯绿、甲基紫等，常用于体外活体染色。 *酸性活体染料：台盼蓝、刚果红等，只用于体内活体染色，体外活细胞难以着色。
（1）台盼蓝染色
活细胞不着色，死细胞染上兰色。
（2）吖啶橙荧光染色法
直接染色观察活细胞或固定染色观察细胞。
吖啶橙是一种与DNA 和RNA 都能结合的荧光染料，在蓝光或紫外光激发下，原来的活细胞，其核呈亮绿色，核仁、RNA 呈桔红色，胞质呈淡红褐色。而原来是已经死亡的细胞，核呈暗绿色，胞质呈亮铜色。
4、染色排除检测法
以死细胞和活细胞对色素的不同吸附来鉴别。
死细胞的细胞膜透性发生变化，染料大量进入而不能排出，因此而着色。而活细胞能及时排出进入细胞的染料或染料不能进入活细胞，故不着色。这类染料大多为酸性染料，主要有：
台盼蓝、苯胺黑、赤藓红B 、伊红Y 等。
（1）台盼蓝排除检测法
（2）溴化乙锭和碘化丙锭排除检测法：EB, PI 均为荧光染料，与特异DNA 结合。死细胞显
橙红色荧光。
四、污染监测与控制
污染：一切与培养无关的杂质（微生物、化学物、细胞等）进入培养系统，影响培养物的正常生理机能。
在众多的污染源中，微生物是最突出最重要最常见的污染。
（一）微生物污染的途径：空气、器材、操作、血清和组织样本等。
（二）污染对培养细胞的影响及检测
1、细菌的污染检测与控制
当受到细菌污染时，培养液很快颜色变黄，产生大量酸性物质。显微镜下观察可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮，细胞表面和周围有大量细菌存在，细胞停止生长、中毒、崩解死亡。
采用普通肉汤培养基也可以检测到污染。
用青霉素、链霉素可预防细菌的污染。
2、真菌的污染检测与控制
常见污染真菌有烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、白念珠菌、酵母菌等。
在培养液表面会出现白色或浅黄色漂浮物。显微镜下可见细胞之间有纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝。
可用抗真菌剂防止真菌污染。
3、支原体的污染检测与控制
支原体的污染是一个常见而棘手的问题，外观上看不出明显的变化，实际上或多或少的影响到细胞的众多机能。目前尚无有效的防范措施。可通过支原体培养、PCR 及电镜观察等方法进行检测。
（1）造成支原体高污染率的原因：
1) 支原体大小0.1－0.8 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um）；
2) 支原体污染时，没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化；
3) 过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式；
4) 细胞流通间缺乏物品管理，造成实验室间的相互污染；
5) 研究或操作人员忽略污染问题；
6) 已受污染的细胞；
7) 已受污染的培养基、血清。
（2）检测：
1) 相差显微镜观察法
2) Hayflick培养基直接培养法
原理：直接培养支原体于培养基中，观察其生长及菌落生成。
特点：是目前最直接与灵敏之步骤，亦是用来评估其它侦测新步骤之标准步骤。 缺点：培养时间长，须3－5星期才能判断。有些支原体不能在培养基培养出来 (例如M. hyorhinis)。需同时培养支原体株作为正反应对照组，可能会造成污染。
3) DNA荧光染色法
原理︰利用荧光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）检测支原体污染。此染剂会结合 到DNA 之富含A-T 区域，因为支原体之DNA 中A-T 含量占多数（55～80%），所以可将其染
色而检测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之荧光小点，即为支原体之DNA ，证明有支原体之污染。
测试步骤用间接步骤，将待测细胞悬浮液或细胞培养液接种于指示细胞培养液中（indicator cell，例如Vero cell or 3T3 cell），然后培养指示细胞再作萤光染色。正负反应对照组亦可以接种于indicator cell内作为对照。
待测细胞亦可作直接测试，但需为吸附型细胞，培养后直接作荧光染色。有些细胞易有荧光背景，而干扰结果判读，则建议使用接种于指示细胞之步骤。
特点︰简单、经济与灵敏，广泛使用，可作为例行之侦测步骤。可以侦测不易培养之
支原体，例如M. hyorhinis，较直接培养法快，约一星期即可知道结果。
缺点：有时仍会有荧光背景，影响判读。
4) PCR方法
原理：利用具特殊专一性之primers ，经由PCR 反应来复制mycoplasma DNA 。所用之
primers 来自mycoplasma 之conserved 16S-23S rRNA序列，由于此段spacer 之序列依mycoplsma 种类不同而不同，因此可依所复制之DNA 大小及其restriction fragment 大小差异来作检测与鉴定。
（3）支原体污染后的抗生素处理：
1、使用泰乐菌素（tylosin ），Sigma ，120多块钱，泰乐菌素是一种兽用抗生素, 常用在鸡、猪的食料辅料，可以防止支原体感染引起的支气管哮喘，至今尚未见有耐药菌株，是治疗支原体感染的特效药。
2、M-Plasmocin ：InvivoGen 公司研究开发的新一代支原体抗生素M-Plasmocin 能有效地杀灭支原体，不影响细胞本身的代谢，并且用M-Plasmocin 处理过的培养细胞，不会重新感染支原体。
3、用BM-Cyclin-1、2，效果很好，方法如下：细胞传代同时加BM-Cyclin-1 10μg/ml，37℃培养3天，加入BM-Cyclin-2 5μg/ml，37℃培养3天；（不需传代，因为支原体污染的细胞生长非常慢！）如果细胞生长恢复正常，即可结束。否则加BM-Cyclin-1 20μg/ml，37℃培养3天，加入BM-Cyclin-2 10μg/ml，37℃培养3天。怀疑是支原体污染的就可以试试了，对细胞不会有太大影响。
4、病毒的污染检测与控制
病毒的污染主要是通过DNA 的整合，改变培养细胞的生物学性状，影响细胞的生长或干预实验结果的准确性。
对病毒的检测主要有直接观察、动物接种检查、电镜观察、免疫学及PCR 法。
5、细胞交叉污染及检测
在培养的细胞中混杂有其它细胞，从而对培养的细胞产生形态或生长特性等方面的影响。常采用形态观察或检查细胞的标记物进行检测。
有效防治采取的措施：1）严格操作，器具分明，空间隔离；2）细胞的取放严禁接触培养液瓶口；3）对培养的细胞要有充足的储备。
（三）污染的预防
培养操作前的准备(超净工作台的严格护理) ；培养操作时的注意事项；其他注意事项
（四）污染的排除
1、抗生素的应用
2、加温处理(在一定程度上可对付支原体)
3、动物体内接种除菌法(受支原体感染的肿瘤细胞接种于动物皮下或腹腔, 借助动物免疫
系统消灭支原体)
4、巨噬细胞吞噬法
五、小结
１、重点回顾的细胞工程中涉及相关理论知识（细胞生物学、分子生物学、生殖发育、遗传育种等）
２、介绍细胞工程实验室的设置及所需的基本条件。
思考题
（1）如何理解细胞分化、细胞全能性。
（2）什么叫细胞周期？它有几个阶段组成？
（3）常用的灭菌方法有哪些，各有哪些优缺点？
（4）细胞培养实验室与一般实验室的结构区别是什么？说明理由。
（5）在无菌操作开始前，应如何处理超净工作台面？
（6）细胞培养中有哪些微生物污染？如何检测与控制？
范文四：细胞工程
细胞工程
第一章
1、细胞工程的概念及研究范畴
指应用细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来对细胞的遗传表型进行定向改造，以获得新型物种或特定的细胞、组织产品的一门综合性学科技术。
2、根据操作对象不同，细胞工程分为七大类：
器官、组织和细胞的培养；原生质体培养；植物胚胎培养；动物胚胎工程；转基因动植物；胚胎干细胞；染色体工程
3、动物细胞工程的技术
细胞培养技术、细胞融合技术、动物胚胎移植技术、体外受精技术、动物克隆技术、转基因动物技术、胚胎干细胞技术。
第二章
1、植物细胞工程实验室组成及分布要求（画图）
植物细胞工程实验室由无菌操作室、制备室、清洗灭菌室以及具备光照条件的培养
室和试管苗移栽所需的温室组成。
无菌操作室包括操作间、缓冲间、更衣间 。
无菌操作室需远离污染源，一般臵于离门最远的角落处。
2、基本设备及使用注意
超净工作台：分侧流式和外流式。通过鼓风机将外界空气从低效过滤器粗滤尘埃。紫外光、隔离罩、无菌风、消毒酒精
高压蒸汽灭菌锅：湿灭菌，121℃，灭菌20min 。使用时注意螺栓需均匀拧紧，切记不可干烧，开始前需要排气，灭菌后需等国内压力将为零后再开锅取物。优点穿透力强。
干热灭菌烘箱：主要用于烘干湿热消毒的玻璃器皿，也可用于干热灭菌。金属器械，塑料制品、橡胶等不能在干燥箱中加热。注意在烘箱内严禁烘有机溶剂。
过滤除菌装臵：用于热敏感的加热易失活变性分解的物质。
3、灭菌和消毒
灭菌是指杀灭或者去除物体表面和孔隙内的所有微生物，包括抵抗力极强的细菌芽孢在内。
消毒是指杀死物体表面上的病原微生物，但细菌芽孢和非病原微生物可能还是存活的。
物理方法：干热灭菌：干烤法、焚烧法、烧灼法，用于培养器皿的灭菌
湿热灭菌：高压蒸汽灭菌，121℃ 20-40min压力0.1Mpa ，穿透力强。
包括煮沸法、流通蒸汽消毒法、间歇灭菌法、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法
过滤除菌 ：用于对热敏感的物质
紫外线灭菌：用于接种室、操作台灭菌（干扰DNA 的复制）
化学方法：熏蒸消毒，药剂喷雾消毒
4. 植物培养基的组成和配制
培养基成分成：
无机化合物：大量N 、P 、K 、Ca 、Mg 、S （浓度高于0.5mmol/L）；微量Fe 、Mn 、Zn 、Cu （通常以
螯合物形式存在）
有机化合物：糖类、维生素（以辅酶的形式参与代谢活动）、氨基酸（主要作用合成酶类）、肌醇（构建细胞壁）
糖类的目的：作为碳源提供能量、作为渗透压调节剂、用于梯度离心
激素：(1)生长素类（促生长生根）：2,4-D 、吲哚乙酸IAA 、吲哚丁酸IBA 、α-萘乙酸NAA ；低浓度促进生根
(2)细胞分裂素类：6-BA 、激动素KT 、玉米素ZT 、2ip ；促进细胞分裂，诱导愈伤组织或器官分化。
(3)赤霉素GA ：促进幼苗茎的伸长生长，促进胚状体发育成小植株
基本培养基的种类：MS 培养基:最常用；B 5培养基:豆科、本木植物；White 培养基：无机盐数量较低，用
于生根培养；N 6培养基：成分简单，KNO 3和（NH 4）2SO 4含量高, 广泛应用于小麦水稻及其他单子叶植物的花药培养和其他组织培养；KM8P 培养基：广泛应用于原生质融合培养
铁盐母液配制：配制铁盐时，若搅拌时间过短，会造成FeSO 4和Na 2EDTA 螯合不彻底，为避免此现象，
FeSO 4和Na 2EDTA 应分别加热溶解后混合，并臵于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金
黄色（20-30min ），调PH 至5.5，室温放臵冷却后，再冷藏。
培养基配制过程：1. 配制溶液；2. 调节pH （植物培养基的范围在5.85~5.9之间，灭菌前调PH ）3. 分装；
4. 包扎（封口膜封口）；5. 培养基的灭菌与保存（121℃，0.1Mpa ，灭菌20min ，4-
5℃低温保存）
天然培养基：人们早期采用的细胞培养基，直接取自于动物组织提取液或液体作为培养基
合成培养基：人工设计、配臵的培养基，化学成分明确，组成稳定
消化液：原代培养的组织块需经过消化解离性成细胞悬液，传代培养有时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化
下来，常用的有：胰蛋白酶溶液、EDTA 溶液、胶原酶溶液
EDTA （乙二胺四乙酸）溶液：是一种化学螯合剂，对细胞毒性小，具有一定的非酶性解离作用，可以离
散贴壁细胞，是常用的细胞消化液
7、实验室生物安全的概念
生物安全（biosafety ）是指由动物、植物和微生物等生物体给人类健康和自然环境可能造成不安全的防范，主要针对病原微生物或具有潜在危害的重组DNA 等生物危险的防范。
依据生物安全水平（BSL ）分为BLS-1、2、3、4四个等级，一级对生物安全隔离的要求最低，四级最高
第三章
实生苗：在无菌状态下利用种子生长的苗；组培苗：在无菌状态下利用外植体生长的苗。
细胞分化：是指由发育起始状态的合子沿个体发育方向不断分化出形态结构、生理功能不同的细胞、组
织、器官而最终形成完整植株的过程。
合子胚：受精后形成的合子胚。
体细胞胚：遗传物质从体细胞来得胚
外植体：从健康的植株的组织或器官中获取的用于组织培养的材料称为外植体；
脱分化：细胞脱离原状态而回复到分生状态，这一变化过程叫脱分化或去分化。细胞脱分化的结果是产生愈伤组织。
再分化：脱分化的细胞即愈伤组织在特定条件诱导下再次开始新的分化发育过程，最终形成各种组
织、器官或胚状体等得过程。
愈伤组织的类型：根据组织学外观特征及其再生方式，将愈伤组织分为胚性愈伤组织（EC ）和非胚
性愈伤组织（NEC ）两大类。一般只有胚性愈伤组织有再生能力，而非胚性愈伤组
织在分化培养基上往往只能再生出不定根，很难分化出不定芽。
继代培养的最适时间：愈伤组织的生长达到高峰期之前
继代培养方法：（1）固体培养：通气性好，简便易行；营养分布不匀，有害物质在培养物附近积累，极易出现极化和分化，难以获得均一的细胞群体。
（2）液体培养：营养分布均匀，生长整齐一致，但通气性较差。
长期培养物形态发生潜力丧失的三个学说：1. 生理学说，培养物的形态发生潜力的下降可能是由于细胞或组织内激素平衡关系改变造成的；2. 遗传学说，长期培养物发生形态的丧失是是由于在培养细胞中常见自发体细胞突变，包括染色体数目变异，染色体重排以及DNA 的甲基化等。这种由遗传原因造成的形态发生潜力的丧失是不可逆的。3. 优势群体在长期的生存中不断的淘汰劣势细胞，使得劣势细胞全部死亡。
影响植物细胞脱分化和再分化的因素：培养基、外植体（年龄、基因型、类型）、植物激素、培养条件
（光照，干燥处理，温度）
影响器官发生的因素:（1）外源激素影响：高浓度的生长素和低浓度的细胞分裂素配比诱导了茎芽的发
生，而在相反配比时，则有到了根的形成
（2）物理因素：温度、光照（光质、时间、强度）
（3）外植体的生理状态:大小、发育阶段、部位（分生细胞和胚细胞再生能力强）
（4）培养物年龄 ：选幼嫩部分，尽量不选成熟植株
体细胞胚（SE ）:又叫胚状体，离体植物的细胞，也可经过胚胎发生过程形成在形态上与合子胚相似的结构 人工种子的结构（画图）：
人工种子的优点:①代替试管苗快速繁殖
②可以固定杂种优势
③使在自然条件下不结实种子或种子生产成本昂贵的植物得以繁殖
④拥有更优越的特性
控制胚性细胞同步化的方法：抑制剂法促进细胞同步分裂
低温处理促进细胞同步分裂
渗透压控制同步化法
同步胚的分段收集和筛选
通气法
人工种皮的装配：具有一定的封闭性、良好的通气性、一定的坚硬度、无毒无害，保证繁殖体顺利穿透发
芽，配臵简单易行，成本
第四章
离体无性繁殖：又称微繁殖或离体快繁，是指在离体培养条件下将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞
片等器官、组织和细胞进行无菌培养，经过不断的切割和重复培养，使其增殖并再生成
完整植株，在短期内获得大量遗传性均一的个体的方法。
离体无性繁殖过程中的三大技术难题 (1)污染:培养过程中滋生杂菌
(2)褐变:材料被多酚氧化酶氧化，需加入Vc 这样的抗氧化剂
(3)玻璃化:超水化作用
防止玻璃化苗的产生:①降低细胞分裂素浓度，调整激素配比
②提高培养基中蔗糖和琼脂的浓度或加入渗透剂，降低培养基渗透势
③降低氨态氮、提高硝态氮的含量
④改善容器的气体交换状况，降低容器内相对湿度
⑤降低培养温度，增加自然光照
⑥在培养基中添加间苯三酚、根皮苷或生长抑制剂的物质
植物脱病毒的方法：物理方法（热处理、低温处理）、化学方法、生物学方法（植物组织培养、微型嫁
接）
植物病毒的检测方法：指示植物检测法：指示植物只对某种或某一类病毒非常敏感的植物
方法：在指示植物的叶片上撒少许金刚砂，将受监测植物汁液涂于其上，适当摩擦，事业表面细胞受到侵染但又不损伤叶片，然后用清水冲洗叶片。接种后的指示植物在15~25℃下大约生长一周或几周时间，即可表现性状
血清学检测法：利用抗体和抗原在体外的特异性结合进行病毒检测的方法
分子生物学检测法：通过检测病毒核酸来证实病毒的存在
电子显微镜检测法：直接观察病毒
无毒苗的保存和繁殖
保存：离体保存（离体条件下以试管苗的形式保存）、隔离保存（与脱毒的苗分开隔离保存）
繁殖：利用一套严格的扩繁体系可以为生产上提供出大量的无毒优良种苗
第五章
植物细胞培养：指在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养并使其增值的技术 单细胞分离的方法：机械法或酶解法
单细胞的培养技术：（1）平板培养（2）悬浮培养（3）看护培养（4）微室培养
平板培养：将制备好的单细胞悬液按照一定的细胞浓度在薄层固体培养基上培养
悬浮培养：将游离的单细胞或小的细胞团按照一定的细胞密度悬浮在液体培养基中进行培养的方法。 看护培养：在培养中用一块活跃生长的愈伤组织来哺育单细胞，从而使其正常分裂、增殖的方法。（用途：诱导形成单细胞系）
微室培养：人工制造一个小室，将单细胞培养在小室中的少量培养基上，使其分裂增殖形成细胞团的方法 优点：培养基量少，可对细胞进行显微观察，了解单个细胞的生长发育状况
缺点：营养和水分难以保持，PH 变动幅度大，培养细胞仅能在短期分裂和培养
植物细胞的大规模培养：主要有悬浮培养、固定化培养技术
悬浮细胞培养的同步化：物理方法（1）分选法
（2）冷处理法：收集细胞，用4℃低温处理数天，添加新鲜培养基培
养，可提高培养体系中细胞同步化的程度
化学方法（1）饥饿法
（2）抑制法：通过加入某种（DNA 合成）抑制剂，使细胞停留在
DNA 合成前期，组织细胞完成其分裂周期
FDA （荧光素双乙酸酯）染色法机理：FDA 既不发荧光也不具有极性，能自由穿越细胞膜。再活细胞内
FDA 可以被酯酶裂解，将能发光的极性部分释放出来。荧光素不能
穿过细胞质膜，能在活细胞中积累不能再死细胞和破损细胞中积累
植物细胞固定化：指将游离的细胞包埋或吸附在一种惰性基质的特定空间或其表面上，培养液成流动状态
进行培养的技术。
优点：：细胞得到保护减小剪切力的损伤作用；有利于促进次生代谢产物的积累；便于次生代谢产物的收集；固定化细胞可重复利用；有利于物化梯度的建立。
机械搅拌式生物反应器 特点：搅拌充分，供氧和混合效果好，温度、pH 及营养物浓度较其它反应器容易调节；可直接借用微生物培养的经验进行研究及控制
气升式生物反应器： 利用通入反应器的无菌空气的上升气流带动培养液进行循环，使供氧和混合两种作用融为一体的生物反应器
鼓泡式反应器和气升式的区别：气升式有导流，无搅拌装臵
转鼓式反应器：适合于高密度植物悬浮细胞的培养
植物细胞大规模培养生产此生代谢产物的基本程序：诱导植物产生旺盛生长的愈伤组织和悬浮细胞系；筛选高产细胞系；在生物反应器中进行大规模培养，从而获得各种所需的次生代谢产物
优良细胞系的建立与筛选步骤：
愈伤组织的诱导与培养，单细胞分离，细胞无性系分离，细胞株的筛选
*提高次生代谢产物生产效率的途径与方法
筛选得到高产细胞系方法：克隆选择、抗性选择、诱导选择
*培养的条件控制：温度，pH （影响铁盐的稳定性），营养成分，光，通气量和搅拌转速、
前体饲喂:前体是指目的代谢物代谢途径上游的物质
诱导子的应用：生物诱导子：来源于生物体的化合物
非生物诱导子：化学伤害胁迫、物理伤害胁迫
培养方法： 两步培养法：第一步使用和是细胞快速生长的培养基即生长培养基，以达到最大生物量
第二步使用合适次生代谢合成的培养基即生产培养基
两相培养法：培养相和吸附相，指在植物细胞培养野种加入对细胞无毒性的吸附剂和萃取剂
毛状根培养技术：毛状根是用土壤病原细菌发根农杆菌转化植物细胞而得到的特化器官，具
有自主合成织物继续的能力
冠瘿培养技术、反义技术：
第六章
原生质体是指用机械法，酶解法等方法除去细胞壁后裸露的有生活力的原生质团。
原生质体的活力测定方法：（一）形态识别法
（二）染色法①荧光素乙二酸酯染色法(FDA):发绿光的为有活性的原生质体 ②伊凡蓝染色法：不着色的为有活力的原生质体；③酚藏花红染色法：不染色的为有活力的原生质体 影响原生质体数量和活力的因素：材料的基因型和外植体；酶的种类、浓度与酶解时间；渗透压稳定剂；
质膜稳定剂；pH ；植物材料的生理状态；不同种类或碱组织
原生质体融合的意义：克服种属以上植物有性杂交不亲和性障碍；为携带外援遗传物质的大分子渗入细胞创造条件
植物体细胞杂交的意义：实现远缘杂交，形成新物种；创造细胞质杂种；培育作物新种质和新品种 原生质体融合方法
化学诱导融合法：
无机盐诱导融合法：以硝酸钠做融合剂加入到培养液中促进原生质体融合的方法
优点：盐类融合剂对原生质体的活力破坏力小；缺点：融合频率低，对液泡化发达的原生质体不易诱发融合
高pH -高Ca 2+诱导融合：将需融合的原生质体至于高pH -高Ca 2+条件下融合
原理：Ca 2+浓度决定着细胞膜的稳定性和可塑性，影响原生质体膜的结合。高PH 改变膜的表面电荷，也能促进原生质体集聚和融合
PEG 诱导融合：在培养物中加入PEG 以促进融合。
高PEG-高pH-高Ca 2+浓度诱导诱导融合：PEG 是相邻原生质体表面积按得分子桥
电诱导融合法：根据原生质膜带有电荷的特性，用改变电场的方法使原生质膜表面极化形成原生质体串珠，再在高压直流脉冲的作用下将其击穿即可与相邻的细胞发生诱导融合。
优点：毒性小，融合频率高，融合速度快，诱导过程可控性强；缺点：不能使大小相差较大的原生质体发生融合
PEG 诱导融合法与电诱导融合法比较的优缺点：
PEG 法融合成本低，无需特别设备，产生杂种的概率大。缺点是PEG 试剂对细胞损伤较大。
体细胞杂种的筛选方法：互补选择法；机械选择法；
再生植株的鉴定方法：形态学鉴定；细胞学鉴定；同工酶鉴定；分子生物学鉴定
*同工酶鉴定：根据亲本和杂种同工酶谱的差异来鉴定杂种植株
植物种质资源：生物多样性的重要组成部分。
种质：亲代通过生殖细胞或体细胞直接传递给子代并决定固有生物性状的遗传物质
种质资源离体保存：对离体培养的小植株、器官、组织、细胞或原生质体等材料，采用限制、延缓或停止
其生长的处理措施是之保存，需要时恢复其生长的方法
细胞工程（动物细胞）
第十二章动物细胞培养技术
LETS ：纤维连接素
CSP ：细胞表面蛋白
PBS ：磷酸盐缓冲液
TK ：胸腺嘧啶核苷激酶
1、体外培养细胞的形态
贴附型细胞：①成纤维细胞型：中胚层间质起源的组织细胞
②上皮细胞型：起源于内、外胚层的细胞
③游走细胞型：常见于羊水细胞培养的早期
④多形细胞型：神经细胞常见
悬浮型细胞：在培养过程中不贴附于支持物上，而呈悬浮状生长，胞体为圆球形。如淋巴细胞、白细胞、某些肿瘤细胞。
2、细胞生长的两个现象
细胞贴附现象：在液体环境中生长的细胞基本为圆形，当附于支持物表面后开始为圆形，很快发生形态上的改变转变为延展的圆饼型细胞。其形成的过程非常复杂，且影响因素很多。
接触抑制：正常的细胞相互接触之后会抑制细胞的运动。恶性细胞无接触抑制。（增殖分裂仍可继续） 密度抑制：细胞密度增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多，细胞发生密度抑制，导致分裂停止。
3、培养细胞生命期（指细胞在体外培养的条件下持续增殖和生长的时间）
①原代培养期：也称初代培养，即从动物细胞内取出组织接种培养到第一次传代阶段。此时期的细胞移动活跃，可见细胞分裂，但不旺盛。细胞群是异质的。
②传代期：出现细胞系。传代期在全生命期中持续时间最长，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型。一
般传代10~50次。
③衰退期：细胞存活但增值已经缓慢并逐渐停止，细胞逐渐衰退死亡。 HGPRT ：次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 DMSO ：二甲基亚砜 MTT ：四唑盐
细胞株：细胞系经过克隆或用其他方法而得到的由单一类型的细胞群体建立的亚系称为细胞株。
4、无限细胞系也称连续细胞系：传代细胞受到某种因素的影响发生自发转化，使得细胞获得永生性和恶性性的细胞系。
5、“一代”：从细胞接种到分离再培养时的一段时间。一代可倍增3~6次。（不同于细胞世代和细胞倍增）
每一代经过的生长阶段：①潜伏期②对数生长期 ③稳定(停滞) 期④衰亡期
6、细胞培养的一般过程
（一）取材：从不同的生物体不同的组织或器官中取材的方式都不相同。例如引颈法
（二）培养：
原代培养：第一次培养，将培养物放臵在体外生长环境中持续培养中途不分割培养物的培养过程。细胞离体时间较短，其原有的生物学特征仍然保持。
方法：1、组织块培养法（薄层培养法；翻转干涸法）；
2、分散细胞培养法：机械分散法；消化分散法（常用）：消化试剂-胰蛋白酶、胶原酶
传代培养：当细胞持续增殖一段时间达到一定的细胞密度后，就应当将细胞分离到新的培养皿并补充新的培养液进行培养，即细胞的传代培养。
*贴壁细胞的消化法传代步骤：
①吸掉旧培养液
②用PBS 液洗涤细胞1、2次
③根据细胞铁壁的牢固程度选取适宜浓度的胰蛋白酶-EDTA 溶液，细胞呈圆粒状时，终止消化
④吸掉胰蛋白酶-EDTA 溶液，加入适量含血清的新鲜培养液终止消化，离心后吸掉上清液
⑤轻拍培养瓶使细胞脱落，加入适量新鲜培养液混合均匀按合适比例稀释转移培养。
悬浮细胞的传代：①出培养液离心，1000r/min，5min 。
②吸掉上清液加入适量新鲜培养液，混匀转移培养。
（三）纯化：自然纯化：利用某一细胞增值优势排挤其他细胞增殖，最后留下生长优势细胞，除去其他细胞达到细胞纯化的目的。
人工纯化：人为手段对某一细胞创造有利环境，抑制其他细胞生长。
人工纯化方法：①酶消化法：成纤维性细胞对胰蛋白酶耐受性不如上皮细胞，因此先脱壁。
具体操作：a ：先用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA（1:1）混合液漂洗，等半数细胞脱
落后停止消化。
b ：离心去掉上清，转移至另一瓶中，加入新鲜培养液，反复处理几次
②机械刮除法；③反复贴壁法；④克隆法；⑤流式细胞仪技术；⑥其他纯化方法（培养基限定法）
（四）细胞的冷冻复苏及运输：慢冻快融
慢冻的原因：快冻会产生冰晶，造成细胞膜损伤
1、细胞冷冻保存：需要冷冻保护剂：
①渗透性保护剂：甘油、二甲基亚砜（DMSO ）、葡萄糖、乙二醇、丙二醇等。
②非渗透性保护剂：乳糖、蔗糖、麦芽糖、木糖、聚乙二醇、白蛋白、甘露醇、山梨醇等。
2、冻存细胞的复苏：轻柔操作，融化快速。方法：①离心法；②直接铺板法。
3、细胞运输：冷冻储存运输、充液法。
*7、动物细胞培养的基本方法
①悬滴培养法：经典方法
②培养瓶培养法:培养组织块或细胞悬液的仪器称为卡氏瓶。用于封闭式培养、开放式培养和半开放式培养 ③培养板培养法
④旋转管培养法
⑤灌注小室培养法
⑥克隆培养法：又称单细胞分离培养，分为3种：多孔塑料板克隆细胞法、琼脂培养、饲养层克隆法。
8、动物细胞大规模培养方法
动物细胞与微生物细胞的区别：
①动物细胞个体大，无细胞壁，机械强度低，适应环境能力差；
②生长缓慢，倍增时间长，易感染，需要抗生素
③培养过程需氧量少
④培养过程中互相粘连，以集群形式存在
⑤原代一般培养50代即退化死亡
⑥代谢产物具有生物活性，生产成本高，但附加值也高。
动物细胞培养的方法：转瓶培养、反应器贴壁培养、悬浮培养、固定化培养（体表面积大）
9、动物细胞工程表达产品应用：疫苗、单克隆抗体、基因重组产品。
10. 四唑盐（MTT ）比色试验原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT 还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。用酶联免疫检测仪在490nm 波长处测定其光吸收值可间接反映活细胞数量。
特点：灵敏度高，重复性好，操作简便，无放射性污染
11、细胞活力的检测：
①台盼蓝排斥实验：死细胞变淡蓝色，活细胞不染色。
②伊红Y 排斥实验：与台盼蓝类似，但对比度不如台盼蓝。
③苯胺黑排斥实验：死细胞变黑色，活细胞步染色。
11、污染的途径：空气、器材、操作、血清（支原体污染）、组织样本
污染的排除：抗生素排除法、加温除菌、动物体内接种、与巨噬细胞共培养。
细胞同步化的方法：选择同步化法、诱导同步化法（DNA 合成阻断法，中期阻断法）、两者结合法
第十三章动物细胞融合
英文：PEG ：聚乙二醇McAb ：单克隆抗体
1、细胞融合：指两个或两个以上来源相同或不同的细胞合并成一个细胞的过程。可分为自发细胞融合和人工诱导融合。类型有同核体和异核体。
人工诱导融合时，亲本若为体细胞且融合后的细胞可以增值传代，则称为体细胞杂交。
2、人工诱导细胞融合方法：病毒诱导融合、化学诱导融合、电融合。后两个使用最多。
①病毒诱导融合：常见的诱导病毒有疱疹病毒、牛痘病毒、副黏液病毒，副黏液病毒科的仙台病毒应用最 为广泛。
过程：通过病毒的特异结构使细胞相互凝集，再通过膜上蛋白质分子的重新分布，使膜中脂类分子重排， 打开质膜，导致细胞融合。
利弊：比较早的方法，操作繁琐、融合效率和重复性不够高。
②化学方法诱导融合：常用诱导剂有PEG 、Ca2+、溶血卵磷脂等。PEG 最常用，其可以使细胞表面黏稠，在黏合部位产生穿孔，最后发生融合。
利弊：简便、融合效率高。
③电融合：将亲本细胞臵于交变电场中，使它们彼此靠近相互接触，排成串珠状，然后在高强度、短时程 的直流电脉冲作用下，相连的细胞质膜击穿导致融合。
利弊：融合效率高，对细胞毒性小，参数较容易控制。但需要预实验确定细胞融合的最佳参数。
3、选择性筛选
（一）利用基因缺陷互补的筛选
原理：利用次黄嘌呤、胸苷、氨基蝶呤、氨甲喋呤阻断嘌呤和嘧啶从头合成核苷酸的途径，致使缺 乏补救途径的细胞死亡，达到筛选目的。
（二）利用抗性标记筛选
原理：将对抗生素的抗性基因导入细胞并稳定表达，然后将细胞融合，并加入两种抗生素进行培养， 未融合的细胞由于缺少抗性基因因而不能存活。
（三）利用营养缺陷的筛选
原理：设计一种选择性培养基，使具有基因互补的融合细胞可在其中存活。
（四）利用温度敏感突变特性的筛选
原理：细胞一般只能在32~39℃内生存，如果引入合适的突变环境，成功融合的细胞可在非允许温 度下存活，未为融合的亲本细胞则会死亡。
4、淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体
（一）B 淋巴细胞杂交瘤
原理：将骨髓瘤细胞与淋巴细胞进行融合。杂交瘤细胞既具有B 淋巴细胞分泌特异性抗体的功能，又具有骨髓瘤细胞能够在体外长期快速生长的特性，使杂交瘤细胞可以持续分泌抗体。
（二）杂交细胞的选择
①融合细胞的抗体筛选：在细胞融合之后，利用放射免疫测定的方法进行鉴定。
②在测定的基础上进行筛选（6个方面）：抗体的特异性和交叉情况、抗体的类型和亚类、抗体的中和活性、抗体的亲和力、抗体对应抗原的相对分子质量、抗体识别的抗原表位。
5、单克隆抗体技术
McAb 的特性：①高度特异性②高度稳定性③高抗体活性④不可知性
6、人源杂交瘤McAb
存在问题：①致敏问题②杂交瘤细胞不稳定③转化细胞不稳定④抗体生产问题
第十四章 胚胎工程
胚胎工程：以动物胚胎为研究对象而产生的一系列技术操作如胚胎移植，胚胎冷冻保存，胚胎分割等。 胚胎移植：对优秀雌性动物进行超数排卵处理，在其发情配种后一定时间内从其生殖道取出早期胚胎，一直到同期发情的普通雌性动物生殖道的相应部位，让其生产后代的技术。
胚胎移植的基本程序：
供体和受体的选择：
1、供体：具有遗传学价值、最好有一胎以上的正常繁殖史、健康状况良好。
2、受体：健康状况良好、无生殖器官疾病、发情周期正常的适繁母畜、体型不宜过小。
注意事项：避免供（受）体长途运输、饲料管理突然改变、防疫注射、驱虫、剪毛等应激因素。
供体的超数排卵：在动物发情周期的适当时期，用促性腺激素进行处理，诱发其卵巢上大量卵泡同时发育并排卵的技术。
供体超数排卵常用的生殖激素：
1、①促卵泡素（FSH ）②促黄体素（LH ）③孕马血清促性腺激素（PMSG ）④人绒毛膜促性腺激素（hGG ）⑤促排卵3号（LRH-A3）
2、孕激素 孕酮
3、前列腺素（PG ）
受体的同期发情处理：要求供体与受体在发情时间上要相同或相近，前后不宜超过1天。一般要进行同期发情处理。
胚胎检查及质量鉴定：
1、形态学鉴定：①卵子是否受精②透明带的规则性③胚胎的色调和透明度④卵裂球的致密程度⑤卵周隙是否有游离细胞或细胞碎片⑥胚胎本身的发育阶段是否与胚胎日龄一致。
2、染色检查*：①二乙酸荧光素（FDA ），细胞活力越强淡绿色的荧光越强。死亡的或者活力降低的细胞不发荧光或仅有微弱荧光。
②台盼蓝染色检查：有活力的细胞不着色，死亡的细胞充满着台盼蓝着色颗粒。
3、体外培养法：放在外界查看是是否进一步发育，由于外界因素影响较大，应比较困难。
胚胎冷冻保存技术
胚胎保存技术：将胚胎在正常温度下暂时储存于体内或体外而不使其失去活力；或将其保存于低温或超低温情况下，使细胞处于新陈代谢和分裂速度减慢或停止的状态，一旦恢复正常发育温度时，又能继续发育。
原理：通过合适速度降温，利用脱水来维持细胞内外环境渗透压平衡。通常需要添加低温保护剂：①低相对分子质量可渗透性保护剂：如甘油、乙二醇、二甲基亚砜等。②小分子不可渗物质：如海藻糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖等。③大分子保护剂：如聚乙烯吡咯烷酮（PVP ）、聚乙烯醇（PVA ）等。 最通用的办法是玻璃化冷冻法。
*降温过慢：高渗，细胞休克。降温过快：内部形成冰晶，破坏细胞膜和细胞器，导致死亡。 *冷冻时缓慢降温脱水，解冻时快速复温。
胚胎冷冻方法：
1、常规冷冻法：广泛采用且最为成功
2、一步冷冻法：胚胎在室温脱水后不需要特殊的降温程序，冷冻过程所需时间短。
3、玻璃化法：①溶液组成：25%甘油、25%1,2-丙二醇或25%乙二醇。②由于存在毒性，几方面在研究解决：通过两步平衡胚胎、缩短平衡时间、降低平衡稳定、使用蔗糖或海藻糖等抗毒性物质。 体外受精技术
体外受精（IVF-ET ）：指把成熟卵母细胞或把未成熟卵母细胞经体外成熟培养后，与体内或体外获能的精子在体外条件下完成受精的过程。
试管动物：体外受精胚胎移植到母体后获得的动物。
体外精子获能技术：哺乳动物的精子必须在子宫或输卵管内存留一段时间，并经发生一定的生理变化，才能获得受精能力。（什么叫精子获能？）
精子获能的方法：血清白蛋白法；高渗盐法；卵泡液孵化法；Ca 2+载体法；肝素法
什么叫单精族？
动物克隆技术
胚胎分割：采用显微操作将哺乳动物附植前的胚胎分成若干个具有继续发育潜力部分的生物技术。 *运用胚胎分割可以获得同卵双生后代。
胚胎融合：指通过显微操作使2枚或2枚以上的受精卵或胚胎发育成1枚胚胎的技术。由此发育而成的个体成为嵌合体。
方法：①早期胚胎聚合法②分裂球聚合法③囊胚注入法
体细胞克隆技术路线：
*克隆技术尚需进一步解决的问题：
1、提高成功率：现为1~3%，出生率不到10%
2、解决部分个体生理或免疫缺陷问题
3、解决受体细胞质与供体细胞核周期相容性的问题
4、通过核移植产生的重构胚胎能否完成整个发育过程的问题
5、减少或避免供体线粒体的带入
第十五章动物干细胞技术
*原来的干细胞从体细胞团获得，现在的干细胞也可通过诱导获得。
干细胞：指具有无限或较长期的自我更新能力，并能产生至少一种高度分化子代细胞的细胞。 胚胎性干细胞：指源于囊胚内细胞团（ICM ）的胚胎干细胞（ES ）。
成体干细胞：指那些具有组织特异性的细胞，主要用于维持细胞功能的稳定，具有修复和再生能力。 根据细胞分化的潜力大小可以分类：①全能干细胞②多能干细胞（单胚层或三胚层等）③单能干细胞 根据来源不同可分为胚胎性干细胞和成体干细胞两类。胚胎性干细胞是指源于囊胚内细胞团的胚胎干细胞。成体干细胞是指那些具有组织特异性的细胞，他们主要维持细胞功能的稳定，具有修复和再生能力。
成体干细胞四个种类：
① 造血干细胞（HSC ）：主要存在于骨髓、外周血和脐带血中。
② 神经干细胞（NSC ）
③ 间充质干细胞（MSC ）：可分化为骨骼肌管、平滑肌、骨、软骨和脂肪
④ 表皮干细胞：表皮干细胞维持了终生的自我更新能力
*饲养层细胞培养法：
（一）种类：
①小鼠胚胎成纤维细胞（MEF ）：最常用，但不能在体外长期传代，限制适用范围。
②STO 细胞：主要分泌干细胞生长因子和白血病抑制因子（LIF ）。
ES/EG细胞的鉴定方法
① 形态学特征：细胞较小，核质比高，细胞核显著，有一个或多个核仁，染色体正常，具有稳定的二倍
体核型，染色质较分散，细胞呈多层集落状生长，无明显细胞界限，形似鸟巢，边缘整齐，折光性强。 ② 特异性标志分子的表达：
1、Oct-4 胚胎内唯一能检测到的Oct-4表达的是原始生殖细胞。
2、碱性磷酸酶（AKP ） 未分化的ES 呈阳性，一旦分化呈阴性。
3、阶段特异性胚胎细胞表面抗原（SSEA ） SSEA是一种糖蛋白，在未分化多能干细胞中呈阳性，另外它的表达具有种属特异性。
4、其他表面标志分子：如TRA-1-60、TRA-1-81、GCTM-a 、干细胞因子和生殖细胞核因子等。 ③ 分化潜能的检测：
1、体外分化潜能检测：自发分化或者诱导分化，常见的分化诱导剂有视黄酸（RA ）、DMSO 、3-甲氧苯丙胺和神经生长因子等。
2、体内分化潜能检测。
④ 嵌合体的形成：桑葚胚聚合法和囊胚注射法。
十七章动物染色体工程
染色体加倍技术：
1、化学诱导法 1）秋水仙素：破坏纺锤丝的形成使得染色体加倍；
2）细胞松弛素B ：通过抑制动物肌动蛋白聚合成微丝，组织细胞质的分裂。
3）PEG ：诱导两个精子先融合再与卵子融合（双精受精）
2、物理学方法温度休克法、水静压法；高盐高碱法；
3、生物学方法：通过杂交技术获得异源多倍体，也称染色体组的合并。
基因敲除和基因打靶技术
基因打靶：是指通过DNA 定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能。基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段，它的产生和发展建立在胚胎干(ES)细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，并促进了相关技术的进一步发展。
基因敲除（knockout ）是指一种遗传工程技术，针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏障，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。
范文五：植物细胞工程
课时课题： 专题二 植物细胞工程 1课时
本节内容主要讲述植物的组织培养和植物体细胞杂交，这是重点内容，学习时，应注意和必修教材中的知识多加联系，进行知识的迁移。对于一些新的专业术语要在教学中讲透讲活，并要注意做到理论联系实际。要充分调动学生学习的积极性和主动性，课堂要及时反馈以便及时巩固。 【课外阅读】 植物培养的类型
①植株培养。指以具备完整植株形态的材料（如幼苗和较大的植株）为外植体的无菌培养。 ②胚胎培养。指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。 ③器官培养。指以植物的根，茎，叶，花，果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖，茎节和切段，叶的叶原基，叶片，叶柄，叶鞘和子叶，花器的花瓣，雄蕊（花药，花丝），胚珠，子房，果实等的离体无菌培养。
④组织培养。指以分离出植物各部位的组织（如分生组织，形成层，木质部，韧皮部，表皮，皮层，胚乳组织，薄壁组织，髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。这是狭义的组织培养。
⑤细胞培养。指以单个的游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。
⑥原生质体培养。指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。 附：【达标检测】
一、 选择题
1．在生物体的所有细胞中，全能性最高的是（ ） A．卵细胞
B．植物花粉
C．体细胞
D．受精卵
3．植物体细胞杂交尚未解决的问题有（ ）
A． 去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体
B． 让杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良性状 C．将杂种细胞培育成植物 D．尚未培育出属间杂种植物
4．与传统的有性杂交法相比，植物体细胞杂交的最大优点是（ ）
A．可使两个亲本的优良性状组合在一起 B．可以克服远缘杂交不亲和的障碍 C．可以降低生产成本提高经济效益 D．可以培育出高产性状优良的新品种 8．植物细胞表现出全能性的必要条件是（ ） A．给予适宜的营养和外界条件 B．导入其它植物细胞的基因
C．将成熟植物的细胞核移植到去核的卵细胞中 D．脱离母体后，给予适宜的营养和外界条件
9．植物细胞壁的形成与高尔基体有关，由此说明了高尔基体是（ ） A．具有合成多糖的能力 C．具有合成磷脂的能力
B．具有合成蛋白质的能力 D．具有合成细胞膜的能力
10. 甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的（ ）
A. 有丝分裂 B. 分化 C. 减数分裂 D. 全能性 11. 植物组织培养依据的原理，培养过程的顺序及诱导的植物激素分别是（ ）
① 体细胞全能性 ② 离体植物器官，组织或细胞 ③ 根，芽 ④ 生长素和
细胞分裂素 ⑤ 生长素和乙烯 ⑥ 愈伤组织 ⑦ 再分化 ⑧ 脱分化 ⑨ 植物体
A. ①、②⑧⑥⑦③⑨、④ B. ①、②⑦⑥⑧③⑨、⑤ C. ①、⑥②⑨⑧③⑦、⑤ D. ①、②⑨⑧⑥⑦③、④ 12.（多选题）要将胡萝卜韧皮部细胞培养成完整植株，需要（ ）
A. 具有完整细胞核的细胞 B. 离体状态 C. 导入外源基因
D. 一定的营养物质和激素
13.（03江苏）用高度分化的植物细胞、组织和器官进行组织培养可以形成愈伤组织，下列叙述错误的是（ ）
A. 该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的 B. 该愈伤组织的细胞没有全能性
C. 该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成 D. 该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状结构 14. 有关细胞全能性的叙述中，不正确的是（ ）
A. 受精卵在自然条件下能够使后代细胞形成完整的个体，全能性最高 B. 卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性很高 C. 生物体内细胞由于分化，全能性不能表达 D. 植物细胞离体培养在一定条件下能表现出全能性 二. 非选择题：
15. 现有甲、乙两个烟草品种（2n＝48），其基因型分别为aaBB和AAbb，这两对基因位于非同源染色体上，且在光照强度大于800勒克司时，都不能生长，这是由于它们中的一对隐性纯合基因（aa或bb）作用的结果。
取甲乙两品种的花粉分别培养成植株，将它们的叶肉细胞制成原生质体，并将两者相混，使之融合，诱导产生细胞团。然后，放到大于800勒克司光照下培养，结果有的细胞团不能分化，有的能分化发育成植株。请回答下列问题：
（1）甲烟草品种花粉的基因型为
（2）将叶肉细胞制成原生质体时，使用 破除细胞壁。 （3）在细胞融合技术中，常用的促融剂是 。 （4）细胞融合后诱导产生的细胞团叫 。
（5）在大于800勒克司光照下培养，有 种细胞团不能分化，能分化的细胞团是
由 的原生质体融合来的（这里只考虑2个原生质体的相互融合）。由该细胞团分化发育成的植株，其染色体数是 ，基因型是 。该植株自交后代中，在大于800勒克司光照下，出现不能生长的植株的概率是 。 15． （1）aB （2）纤维素酶和果胶酶 （3）聚乙二醇 （4）愈伤组织 （5）2 甲、乙 48 AaBb 7/16
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