范文一:pcr技术发展与展望
PCR技术的发展及展望
摘要:PCR技术是遗传与分子生物学分析的根本性基石,近年来(基于常规PCR技术开发出了许多新的用途。综述了PCR技术的主要扩展。
关键词:PCR技术
1971年Khorana等最早提出PCR理论:“DNA变性解链后与相应引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,重复该过程便可克隆tRNA基因”。因当时基因序列分析方法尚未成熟、热稳定DNA聚合酶还未发现及寡聚核苷酸引物合成仍处于手工和半自动阶段,核酸体外扩增设想似乎不切实际,且Smith等已发现了DNA限制性内切酶,使体外克隆基因成为可能,Khorana等的早期设想被忽视。1985年Mullis等用大肠杆菌DNA聚合酶工Klenow片段体外扩增哺乳动物单拷贝基因成功以及1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶(Taq酶)引入PCR,使扩增反应的特异性和效率大大提高,并简化了操作程序,最终实现了DNA扩增的自动化,迅速推动了PCR的应用和普及。
PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下。以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点。通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。现已被广泛应用于农学、植物病理学等领域的研究。最初的PCR技术相当不成熟,但在随后的几十年里,PCR技术被不断改进。它从一种定性的分析方法发展到定量测定;从原先只能扩增几个kb的基因到目前已能扩增长达几十个kb的DNA片断[1]。到目前为止,PCR技术已有十几种之多。
1 .PCR技术的扩展
1.1 AP-PCR技术
1.1.1 AP-PCR技术的定义、来源及特点
AP-PCR(Arbitrarily primed PCR)技术[2],是指在对所扩增基因顺序一无所知的情况下(主观上随意地设计或选择一个非特异引物进行PCR扩增,反应在不严格条件下扩增l至数轮后,再于严格条件下进行。通过比较扩增产物的指纹图,即可反映出待分析基因组的特征。AP-PCR技术由Williams等[3]于20世纪90年代建立(它可以快速地从两个或更多的个体组织细胞中分离出差异基因或基因差异表达产物,具有简单、灵敏、有效和重复性好等特点。
1.1.2 AP-PCR技术的应用
AP-PCR技术是常规PCR技术在差异基因分离方面的扩展,主要应用在:(1)差异基因的分离,Liang和Pardee[2]应用AP-PCR技术对正常A31和肿瘤起源的BPA31细胞进行了鉴定,并分离得到了仅存在于正常细胞的N1及仅存在于肿瘤细胞的T1片段;(2)菌株鉴定,杨国玲等
[3]采用AP-PCR技术对甲真菌病病原菌进行了快速鉴定;(3)遗传作图,Welsh等成功地应用
1.2 LP-PCR和彩色PCR
1.2.1 LP-PCR和彩色PCR的定义
LP—PCR(Labelled primers PCR)(即标记PCR,它是指利用同位素、荧光素等
对PCR引[2]AP-PCR方法快速鉴定了重组鼠(C56BL/6J×DBA/2J)扩增多态性在染色体图谱中位置。
物5’端进行标记,通过PCR反应扩增,来检测目的基因存在与否。
彩色PCR(Color Complement Assay)是指利用荧光染料标记引物的5’端,不同荧光(荧光染料TAMRA呈红色荧光,JOE和FAM呈绿色荧光,COUM呈蓝色荧光)标记的引物同时参加反应,经PCR反应扩增后,根据不同荧光的色泽来判断目标基因是否存在及扩增基因的类型
[4]。
1.2.2 LP-PCR和彩色PCR的比较
LP-PCR与彩色PCR由荧光PCR那发展而来,彩色PCR是LP-PCR的一种。与常规PCR相比,LP-PCR更为直观,其省去了限制性内切酶酶解及分子杂交等繁琐步骤,并且一次可以同时分析多种基因成分,但是LP-PCR只能对产物进行定性鉴定。与LP-PCR相比,彩色PCR通常需要2种不同颜色的引物:一种作为基因检测引物;另一种作为控制条件的内对照。但是在检测多点突变时,彩色PCR需用更多的色彩[4]。
1.2.3 LP-PCR和彩色PCR的应用
LP-PCR和彩色PCR是常规PCR技术与标记技术相结合的产物,LP-PCR常被用于大量临床标本的基因诊断,同时可用于对PCR产物进行定性鉴定。彩色PCR常被用予检测基因的突变,染色体重排或转位,基因缺失及微生物的型别鉴定等,如被用于检测多突变点的遗传病
[4][5]。
1.3免疫PCR技术
1.3.1免疫PCR技术的定义、来源及特点
免疫PCR(immuno polymerase chain reaction,IM-PCR)是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术,它综合了同相免疫反应和PCR的特点。免疫PCR技术是1992年Sano建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术[6]。与常规PCR及普通ELSA相比,免疫PCR优势明显,具体表现为:灵敏度增加,可以同时进行多种抗原/半抗原检测,有更宽的线性范围[7]。
1.3.2免疫PCR技术的应用
免疫PCR技术是常规PCR技术在医学免疫学领域的主要扩展。它常被用于:(1)激素和细胞因子的检测,Furuya等[8]运用免疫PCR技术对白介素-18进行了检测,灵敏度提高了10000倍;(2)生化酶类的检测,Chang等[10]通过改良的免疫PCR方法对大肠杆菌β-葡萄糖苷酶进行了检测;(3)致病微生物的检测,Monteiro等[10]将磁珠技术和免疫PCR技术相结合,设计了一种能检测粪便中幽门螺杆菌的新方法;(4)寄生虫感染的检测,国内利用免疫PCR技术检测弓形虫C抗原,敏感性较ELISA法提高了200倍[2];(5)其他毒素或蛋白的检测。宋云扬等[11]建立的检测金葡菌肠毒索B的双抗体夹心免疫PCR方法比ELISA灵敏度高1000倍。
1.4原位PCR技术与原位反转录PCR技术
1.4.1原位PCR技术与原位反转录PCR技术的定义
原位PCR(in situ polymerase chain reaction)技术将PCR高效扩增与原位杂交的细胞定位相结合,在组织细胞水平。原位榆测单拷贝的特定DNA或RNA序列[12]。原位反转录PCR技术(in situ reverse transcription PCR,RT in situ PCR or in
situ cDNA PCR),简称原位RT—PCR(它是指先将细胞和组织进行处理(网定、酶消化)(以获得适度的细胞通透性;再通过逆转录使mRNA转录成cDNA;然后把载玻片放人热循环机,对靶DNA等细胞内靶目标在原位进行PCR扩增(扩增反应中含有标记的单核苷酸);最后通过检测标记产物的方法检测扩增产物[13]。
1.4.2原位PCR技术与原位反转录PCR技术的比较
原位PCR技术在进一步提高以单细胞底物进行PGD (preim plantation genetic
diagnosis,PGD)的效率的前提下,由Thornhill提出(它具有细胞定位能力和高
术的一种,它检测的靶序列为度特异敏感。原位反转录PCR技术是原位PCR技
RNA,由Nuovo等[15]1992年发明。具有操作简单、流程短、省时等优点;同时具有特异性差、容易出现非特异性DNA产物、造成假阳性、且扩增效率较低(特别是石蜡切片[16]等缺点。
1.4.3原位PCR技术与原位反转录PCR技术的应用
原位PCR技术是常规PCR在细胞学领域的扩展,它常被用于感染性外源基因的检测、内源基因的检测与导入基因的检测等(如对HIV、结核杆菌等进行的检测[17]。原位反转录PCR技术常被用于扩增和检测标本中罕见的mRNA,如定量细胞表达特殊mRNA的丰度、检测扩增产物的细胞起源及检测细胞群中基因表达的趋势等[18]
1.5定量PCR技术
1.5.1定量PCR技术的定义及特点
定量PCR(polymerase Chain Reaction)技术有广义和狭义两层含义。广义的定量PCR技术是指以外参或内参为标准,通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测,进行PCR起始模板量的定量。狭义的定量PCR技术(又称为实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescent
quantitative PCR,FQ-PCR)(它是严格意义上的定量PCR技术,指用外标法(荧光杂交探针保证特异性)通过监测PCR过程(监测扩增效率)达到精确定量起始模板数的目的(同时以内对照有效排除假阴性结果(扩增效率为零),1996年南美国Applied Biosystems公司推出(与常规PCR技术相比(定量PCR技术不仅实现了对DNA模板的定量(同时具有灵敏度更高、特异性和可靠性更强、能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点
1.5.2定量PCR技术的应用
定量PCR技术实现了PCR技术从定性分析到定量测定的发展,它常被应用于临床微生物、食品微生物、临床肿瘤学的检测、肿瘤耐药基因表达的研究、细胞因子的表达分析等方面。其中,临床微生物和食品微生物是定量PCR应用中最重要的两个方面,彭年才等[19]2010年自主研发了用于食品安全检测的实时定量PCR仪,并已投入产业化应用。
1.6多重PCR技术
1.6.1 多重PCR技术的定义及特点
多重PCR(multiplex PCR)是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,它最明显的优点是省时、省力、能够快速检测和鉴别病原体[20],另外,多重PCR还可以精确地估计一个样品中模板数量。
1.6.2多重PCR技术的应用
多重PCR技术将多个PCR反应放在同一个体系内,进一步提高了 PCR反应的效率,它被广泛地用于病原体鉴别、性别鉴定、连锁分析、法医研究、模板检测和基因的疾病诊断等方面。
1.7反向PCR技术
1.7.1反向PCR技术的定义及特点
反向PCR(reverse PCR),又称为染色体缓移(chrornosme walking)[22][19][14]。 ,它是指利用在已知序列内部没有切点的限制性内切酶对此段DNA进行酶切,在DNA连接酶作用下自连形成环状DNA分子,然后利用方向合适并与已知序列两端互补的引物,以连接成环的DNA为模板,经PCR扩增(得到已知序列的旁侧DNA片段。与常规PCR技术相比(反向PCR优势突出,但
它需要从许多酶中选择限制酶(或者说必须选择一种合适的酶进行酶切(另外,由于大多数有核基因组含有大量中度和高度重复序列,在YAC或Cosmid的未知功能序列中有时也会存在这些序列(从而导致反向PCR得到的探针与多个基因序列杂交,影响扩增效果。
1.7.2反向PCR技术的应用
反向PCR技术在检测病毒、转座子等在基因组中的整合位点,建立基因组步移文库及研究基因的上游调控元件等方面较常规PCR技术优势明显
1.8锚定PCR技术
1.8.1锚定PcR技术的定义及特点
锚定PCR(Anchored PCR)[23],又称同定PCR(它以基因组总DNA为模板,用一条基因特异性引物进行线性PCR扩增,产生单链扩增产物;在末端转移酶的作用下,在单链DNA分子的3’末端加上多聚胞嘧啶;用巢式基因特异性引物与多聚胞嘧啶配对的锚定引物对加尾的产物进行PCR扩增(PCR产物连入载体后进行测序鉴定。与常规PCR技术相比。锚定PCR技术特异性高、有较长的步行距离,一次实验可以获得1(5 kb左右的目的片段,同时它无需对基因组总DNA进行限制性内切酶消化段连接反应,另外(其操作过程较其他方法简单,大约2-3个工作日就能完成。
1.8.2锚定PCR技术的应用
锚定PCR技术解决了常规PCR技术所不能完成的已知片段侧翼序列的克隆问题,是常规PCR技术的又一重大扩展。
1.9兼并引物PCR技术
1.9.1 兼并引物PCR技术的定义
兼并引物PCR(degenerate primer PCR)是指针对由密码子的兼并性引起的。单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列的不精确性,设计成对兼并引物。通过PCR扩增所有编码已知顺序的核酸序列。
1.9.2兼并引物PCR技术的应用
兼并引物PCR技术是常规PCR技术在蛋白领域的应用,具体表现在两个方面:(1)寻找新蛋白已被测定的一段氨基酸序列的相应基因;(2)寻找其有进化上保守结构域的蛋白质家族新成员的基因[25].陶爱林等[26]采用该技术成功进行了蓰草花粉过敏原全长同源基因的克隆。
1.10重组PCR技术及其应用
1.10.1重组PCR技术的定义
重组PCR(recombinant PCR)是通过DNA重叠序列的衔接作用。使多个DNA分子融合在一起的体外扩增技术[27][22],Souer等1995年将反向PCR技术与差别筛选法相结合,从矮牵牛W138中分离得到了高效转座子标签dTphl标记的基因。 。它包括三个阶段:(1)制备用于重组的DNA组件;(2)组件分子作为引物互为模板延伸;(3)克隆和定向筛选重组产物[28]。
1.10.2重组PCR技术的应用
重组PCR技术的出现,使常规PCR技术得到进一步扩展,它是PCR技术在核酸与蛋白两个领域应用的结晶。重组PCR技术的应用主要表现在:(1)精确解析大分子功能和相互作用的结构基础,如标定活性位点的关键残基、确认已知蛋白中未知功能的结构域、揭示配体一受体识别过程中相互临近的区域等。(2)探索顺式作用元件的调控机理,揭示mRNA的非翻译区的功能、确定启动子和增强子成分的功能等。(3)嵌合受体在研究信号途径和胞内定位中具有独特的“钓鱼”优势,用功能已知的分子和待研究对象嵌合来研究结合TGF之后的
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范文二:pcr技术的发展前景及特点——张影影
PCR技术的发展前景及特点
摘要:PCR技术是遗传与分子生物学分析的根本性基石,近年来(基于常规PCR技术开发出了许多新的用途。本文主要阐述PCR技术的发展扩展及特点。
关键词:PCR技术
引言
PCR即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。现已被广泛应用于农学、植物病理学等领域的研究。最初的PCR技术相当不成熟,但在随后的几十年里,PCR技术被不断改进。它从一种定性的分析方法发展到定量测定;从原先只能扩增几个kb的基因到目前已能扩增长达几十个kb的DNA片断到目前为止,PCR技术已有十几种之多。本文对其近年来的主要扩展及应用进行综述。
1 .PCR技术的扩展
1.1 AP-PCR技术
1.1.1 AP-PCR技术的定义、来源及特点
AP-PCR技术,是指在对所扩增基因顺序一无所知的情况下,主观上随意地设计或选择一个非特异引物进行PCR扩增,反应在不严格条件下扩增至数轮后,再于严格条件下进行。通过比较扩增产物的指纹图,即可反映出待分析基因组的特征。AP-PCR技术由Williams等于20世纪90年代建立,它可以快速地从两个或更多的个体组织细胞中分离出差异基因或基因差异表达产物,具有简单、灵敏、有效和重复性好等特点。
1.1.2 AP-PCR技术的应用
AP-PCR技术是常规PCR技术在差异基因分离方面的扩展,主要应用在:(1)差异基因的分离;(2)菌株鉴定;(3)遗传作图。
1.2 LP-PCR和彩色PCR
1.2.1 LP-PCR和彩色PCR的定义
LP—PCR:即标记PCR,它是指利用同位素、荧光素等对PCR引物5’端进行标记,通过PCR反应扩增,来检测目的基因存在与否。
彩色PCR是指利用荧光染料标记引物的5’端,不同荧光荧光染料TAMRA呈红色荧光,JOE和FAM呈绿色荧光,COUM呈蓝色荧光)标记的引物同时参加反应,经PCR反应扩增后,根据不同荧光的色泽来判断目标基因是否存在及扩增基因的类型。
1.2.2 LP-PCR和彩色PCR的比较
LP-PCR与彩色PCR由荧光PCR那发展而来,彩色PCR是LP-PCR的一种。与常规PCR相比,LP-PCR更为直观,其省去了限制性内切酶酶解及分子杂交等繁琐步骤,并且一次可以同时分析多种基因成分,但是LP-PCR只能对产物进行定性鉴定。与LP-PCR相比,彩色PCR通常需要2种不同颜色的引物:一种作为基因检测引物;另一种作为控制条件的内对照。但是在检测多点突变时,彩色PCR需用更多的色彩。
1.2.3 LP-PCR和彩色PCR的应用
LP-PCR和彩色PCR是常规PCR技术与标记技术相结合的产物,LP-PCR常被用于大量临床标本的基因诊断,同时可用于对PCR产物进行定性鉴定。彩色PCR常被用予检测基因的突变,染色体重排或转位,基因缺失及微生物的型别鉴定等,如被用于检测多突变点的遗传病。 1.3免疫PCR技术
1.3.1免疫PCR技术的定义、来源及特点
免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的高灵敏性而建立的一种微量抗
原检测技术,它综合了同相免疫反应和PCR的特点。免疫PCR技术是1992年Sano建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。与常规PCR及普通ELSA相比,免疫PCR优势明显,具体表现为:灵敏度增加,可以同时进行多种抗原/半抗原检测,有更宽的线性范围。 1.3.2免疫PCR技术的应用
免疫PCR技术是常规PCR技术在医学免疫学领域的主要扩展。它常被用于:(1)激素和细胞因子的检测;(2)生化酶类的检测;(3)致病微生物的检测;(4)寄生虫感染的检测;(5)其他毒素或蛋白的检测。
1.4原位PCR技术与原位反转录PCR技术
1.4.1原位PCR技术与原位反转录PCR技术的定义
原位PCR技术将PCR高效扩增与原位杂交的细胞定位相结合,在组织细胞水平。原位榆测单拷贝的特定DNA或RNA序列。原位反转录PCR技术,简称原位RT—PCR(它是指先将细胞和组织进行处理(网定、酶消化),以获得适度的细胞通透性;再通过逆转录使mRNA转录成cDNA;然后把载玻片放人热循环机,对靶DNA等细胞内靶目标在原位进行PCR扩增(扩增反应中含有标记的单核苷酸);最后通过检测标记产物的方法检测扩增产物。 1.4.2原位PCR技术与原位反转录PCR技术的比较
原位PCR技术在进一步提高以单细胞底物进行PGD的效率的前提下,由Thornhill提出,它具有细胞定位能力和高度特异敏感。原位反转录PCR技术是原位PCR技术的一种,它检测的靶序列为RNA。具有操作简单、流程短、省时等优点;同时具有特异性差、容易出现非特异性DNA产物、造成假阳性、且扩增效率较低(特别是石蜡切片等缺点。 1.4.3原位PCR技术与原位反转录PCR技术的应用
原位PCR技术是常规PCR在细胞学领域的扩展,它常被用于感染性外源基因的检测、内源基因的检测与导入基因的检测等,如对HIV、结核杆菌等进行的检测。原位反转录PCR技术常被用于扩增和检测标本中罕见的mRNA,如定量细胞表达特殊mRNA的丰度、检测扩增产
物的细胞起源及检测细胞群中基因表达的趋势等。
1.5定量PCR技术
1.5.1定量PCR技术的定义及特点
定量技术有广义和狭义两层含义。广义的定量PCR技术是指以外参或内参为标准,通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测,进行PCR起始模板量的定量。狭义的定量PCR技术,又称为实时荧光定量PCR技术,它是严格意义上的定量PCR技术,指用外标法(荧光杂交探针保证特异性)通过监测PCR过程(监测扩增效率)达到精确定量起始模板数的目的,同时以内对照有效排除假阴性结果(扩增效率为零)。与常规PCR技术相比,定量PCR技术不仅实现了对DNA模板的定量,同时具有灵敏度更高、特异性和可靠性更强、能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点。
1.5.2定量PCR技术的应用
定量PCR技术实现了PCR技术从定性分析到定量测定的发展,它常被应用于临床微生物、食品微生物、临床肿瘤学的检测、肿瘤耐药基因表达的研究、细胞因子的表达分析等方面。其中,临床微生物和食品微生物是定量PCR应用中最重要的两个方面。
1.6多重PCR技术
1.6.1 多重PCR技术的定义及特点
多重是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,它最明显的优点是省时、省力、能够快速检测和鉴别病原体,另外,多重PCR还可以精确地估计一个样品中模板数量。
1.6.2多重PCR技术的应用
多重PCR技术将多个PCR反应放在同一个体系内,进一步提高了 PCR反应的效率,它被广泛地用于病原体鉴别、性别鉴定、连锁分析、法医研究、模板检测和基因的疾病诊断等方面。
1.7反向PCR技术
1.7.1反向PCR技术的定义及特点
反向,又称为染色体缓移,它是指利用在已知序列内部没有切点的限制性内切酶对此段DNA进行酶切,在DNA连接酶作用下自连形成环状DNA分子,然后利用方向合适并与已知序列两端互补的引物,以连接成环的DNA为模板,经PCR扩增,得到已知序列的旁侧DNA片段。与常规PCR技术相比,反向PCR优势突出,但它需要从许多酶中选择限制酶,或者说必须选择一种合适的酶进行酶切。另外,由于大多数有核基因组含有大量中度和高度重复序列,在YAC或Cosmid的未知功能序列中有时也会存在这些序列,从而导致反向PCR得到的探针与多个基因序列杂交,影响扩增效果。
1.7.2反向PCR技术的应用
反向PCR技术在检测病毒、转座子等在基因组中的整合位点,建立基因组步移文库及研究基因的上游调控元件等方面较常规PCR技术优势明显。
1.8锚定PCR技术
1.8.1锚定PcR技术的定义及特点
锚定PCR,又称同定PCR(它以基因组总DNA为模板,用一条基因特异性引物进行线性PCR扩增,产生单链扩增产物;在末端转移酶的作用下,在单链DNA分子的3’末端加上多聚胞嘧啶;用巢式基因特异性引物与多聚胞嘧啶配对的锚定引物对加尾的产物进行PCR扩增,PCR产物连入载体后进行测序鉴定。与常规PCR技术相比,锚定PCR技术特异性高、有较长的步行距离,一次实验可以获得1.5 kb左右的目的片段,同时它无需对基因组总DNA进行限制性内切酶消化段连接反应。另外,其操作过程较其他方法简单,大约2-3个工作日就能完成。 1.8.2锚定PCR技术的应用
锚定PCR技术解决了常规PCR技术所不能完成的已知片段侧翼序列的克隆问题,是常规PCR技术的又一重大扩展。
1.9兼并引物PCR技术
1.9.1兼并引物PCR技术的定义
兼并引物PCR是指针对由密码子的兼并性引起的。单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列的不精确性,设计成对兼并引物,通过PCR扩增所有编码已知顺序的核酸序列。 1.9.2兼并引物PCR技术的应用
兼并引物PCR技术是常规PCR技术在蛋白领域的应用,具体表现在两个方面:(1)寻找新蛋白已被测定的一段氨基酸序列的相应基因;(2)寻找其有进化上保守结构域的蛋白质家族新成员的基因。
1.10重组PCR技术及其应用
1.10.1重组PCR技术的定义
重组PCR是通过DNA重叠序列的衔接作用,使多个DNA分子融合在一起的体外扩增技术。它包括三个阶段:(1)制备用于重组的DNA组件;(2)组件分子作为引物互为模板延伸;(3)克隆和定向筛选重组产物。
1.10.2重组PCR技术的应用
重组PCR技术的应用主要表现在:(1)精确解析大分子功能和相互作用的结构基础,如标定活性位点的关键残基、确认已知蛋白中未知功能的结构域、揭示配体一受体识别过程中相互临近的区域等;(2)探索顺式作用元件的调控机理,揭示mRNA的非翻译区的功能、确定启
动子和增强子成分的功能等;(3)嵌合受体在研究信号途径和胞内定位中具有独特的“钓鱼”优势,用功能已知的分子和待研究对象嵌合来研究结合TGF之后的TGFR二聚化形式和内向整流型钾通道的脂筏定位过程;(4)开发新型载体,比如通过DNA重排来增强绿色荧光蛋白(GFP)的荧光稳定性;(5)升级分子标记,通过DNA改组已经获得的重组拟南芥K+转运蛋白可以使植株内的钾离子富集度提高26(1,;(6)重组PCR在蛋白体外定向进化中的应用最引人瞩目;(7)基于重组PCR技术的分子育种在疫苗研发中有着广阔的应用前景。
2.PCR技术的特性
2.1操作简便
应用PCR方法的早期阶段操作繁琐,因为使用的聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶的大片段,即Klenow片段,而不是耐高温的TaqDNA聚合酶,而且操作也未实现自动化。目前使用的是耐高温的TaqDNA聚合酶,其操作也实行了电脑控制的DNA扩增仪的自动化,只要将扩增反应所需要的特定程序输入DNA自动扩增仪,把反应所需要的全部材料混合均匀,置入仪器内,反应就会按照所输入的正确程序进行。如果需要,还可随时予以调整。 2.2灵敏度高
PCR产物的生成是以指数方式增加的,所以欲扩增pg量级的起始物到此水平成放大真核细胞单拷贝基因,通过PCR方法都是不难完成的。PCR方法还可用单一双倍体细胞,一根头发,甚至单一精子进行DNA定型。
2.3特异性强
作为引物的寡聚核苷酸与模板结合的正确性是决定反应产物是否特异的关键。TaqDNA聚合酶耐高温的性质,使得反应中引物与模板退火的步骤可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的目的DNA片段也能保持很高的正确程度。
2.4对原始材料的质量要求低
由于PCR技术有高灵敏度和较强的特异性,故仅含目的基因的DNA,就可以作为反应起始材料来获取目的DNA扩增产物。
3.PCR技术的应用
3.1PCR在食品行业检测
PCR技术在食品科学中主要用于对食品中微生物含量的检测。物种特异性 PCR 技术可以用于清真食品的鉴定,是一种可以信赖和合适的技术。以物种间基因差异为基础的分子学鉴定方法成为研究的热点,而采用PCR方法有特异性强、灵敏度高和可鉴别性的特点,已经成为肉质品种鉴别最常用的方法。
3.2PCR在医学中的应用
在临床医学方面也经常使用PCR技术,如对乙肝病毒、肿瘤、病原体等的检测。如人类许多常见的肿瘤疾病与某些病毒病因及肿瘤相关基因的遗传学改变有着密切的关系。PCR技术在肿瘤病毒病因、肿瘤相关基因、肿瘤相关抑癌基因等研究方面已取得可喜成果。同时也被用于多点突变的遗传病。
PCR在法学中应用于亲子鉴定、血型鉴别以及指纹鉴别等。对某些犯罪现场的生物材料的检定将为法医提供可靠有效的依据及直接、高效率的数据。
3.3PCR在应用水中的检测
运用PCR技术可对水体进行直接检测,缩短检测时间,扩大检测范围,并且具有较高的精确度,同时也可以反映水环境中微生物病原体的种类及多样性。
3.4PCR技术在非生物学中的应用
DNA 的初级结构核苷酸序列具有极丰富的信息含量,利用 PCR 扩增,可以从非常少的DN A原始材料中获取信息,使之在作为商业产品的亚显微标志或标志物方面用途广泛。例
如在对伪造产品的检测,污染源的追踪调查等方面,都可通过PCR来鉴定。 4. PCR技术的发展
PCR作为一项“革命性的技术”,不仅推动了遗传与分子生物学的发展,而且在其它领域科学家的努力与创新下,其不断与该领域的核心技术相结合,极大地推动了此领域的发展。并且PCR技术从问世便成为生物学界的一大热点。
传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来,已被广泛应用到生命科学的各个领域.随着技术方法的不断改进与完善。荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中的应用;PCR技术在食品、医学、以及其他方面的应用都具有重要的作用,在高通量的生物免疫检测方面具有广泛的应用。未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰改进样品前处理技术等方面,其次是整合应用多重PCR与其他技术,必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。
参考文献:
【1】《PCR理论与技术》王延华.2005.21世纪生物技术丛书
【2】《PCR最新技术原理、方法及应用》黄留玉.2011.化工出版社
佛学经典励志语录,
一、人之所以痛苦,在于追求错误的东西。
二、与其说是别人让你痛苦,不如说自己的修养不够。
三、如果你不给自己烦恼,别人也永远不可能给你烦恼。因为你自己的内心,你放不下。
四、好好的管教你自己,不要管别人。
五、不宽恕众生,不原谅众生,是苦了你自己。
六、别说别人可怜,自己更可怜,自己修行又如何?自己又懂得人生多少?
八、福报不够的人,就会常常听到是非;福报够的人,从来就没听到过是非。
九、修行是点滴的工夫。
十、在顺境中修行,永远不能成佛。
十一、你永远要感谢给你逆境的众生。
十五、当你快乐时,你要想,这快乐不是永恒的。当你痛苦时你要想这痛苦也不是永恒的。
十六、认识自己,降伏自己,改变自己,才能改变别人。
十八、你可以拥有爱,但不要执著,因为分离是必然的。
十九、不要浪费你的生命在你一定会后悔的地方上。
二十、你什么时候放下,什么时候就没有烦恼。
二一、内心没有分别心,就是真正的苦行。
二二、永远不去只看众生的过错。你只看众生的过错,你永远污染你自己。
二五、每一种创伤,都是一种成熟。
二六、当你知道迷惑时,并不可怜, 当你不知道迷惑时,才是最可怜的。
二七、狂妄的人有救,自卑的人没有救。
二八、你不要一直不满人家,你应该一直检讨自己才对。不满人家,是苦了你自己。
二九、一切恶法,本是虚妄的,你不要太自卑你自己。一切善法,也是虚妄的,你也不要太狂妄你自己。
三十、当你烦恼的时候,你就要告诉你自己,这一切都是假的,你烦恼什么?
三一、当你未学佛的时候,你看什么都不顺。当你学佛以后,你要看什么都很顺。
三二、你要包容那些意见跟你不同的人,这样子日子比较好过。你要是一直想改变他,那样子你会很痛苦。要学学怎样忍受他才是。你要学学怎样包容他才是。
三四、修行就是修正自己错误的观念。
三五、医生难医命终之人,佛陀难渡无缘的众生。
三六、一个人如果不能从内心去原谅别人,那他就永远不会心安理得。
三七、心中装满着自己的看法与想法的人,永远听不见别人的心声。
三八、毁灭人只要一句话,培植一个人却要千句话,请你多口下留情。
三九、当你劝告别人时,若不顾及别人的自尊心,那么再好的言语都没有用的。
四十、不要在你的智慧中夹杂着傲慢。不要使你的谦虚心缺乏智慧。
四一、根本不必回头去看咒骂你的人是谁?如果有一条疯狗咬你一口,难道你也要趴下去反咬他一口吗?
四二、忌妒别人,不会给自己增加任何的好处。忌妒别人,也不可能减少别人的成就。
四三、永远不要浪费你的一分一秒,去想任何你不喜欢的人。
四四、多少人要离开这个世间时,都会说出同一句话,这世界真是无奈与凄凉啊!
四五、恋爱不是慈善事业,不能随便施舍的。感情是没有公式,没有原则,没有道理可循的。
四六、请你用慈悲心和温和的态度,把你的不满与委屈说出来,别人就容易接受。
四七、创造机会的人是勇者。等待机会的人是愚者。
四八、能说不能行,不是真智慧。
四九、多用心去倾听别人怎么说,不要急着表达你自己的看法。
五十、同样的瓶子,你为什么要装毒药呢?同样的心理,你为什么要充满着烦恼呢?
五一、得不到的东西,我们会一直以为他是美好的,那是因为你对他了解太少,没有时间与他相处在一起。当有一天,你深入了解后,你会发现原不是你想像中的那么美好。
五二、这个世间只有圆滑,没有圆满的。
五三、修行要有耐性,要能甘于淡泊,乐于寂寞。
五四、活着一天,就是有福气,就该珍惜。当我哭泣我没有鞋子穿的时候,我发现有人却没有脚。
五五、多一分心力去注意别人,就少一分心力反省自己,你懂吗?
五六、眼睛不要老是睁得那么大,我且问你,百年以后,那一样是你的。
五七、欲知世上刀兵劫,但听屠门夜半声。不要光埋怨自己多病,灾祸横生,多看看横死在你刀下的众生又有多少?
五八、憎恨别人对自己是一种很大的损失。
五九、每一个人都拥有生命,但并非每个人都懂得生命,乃至于珍惜生命。不了解生命的人,生命对他来说,是一种惩罚。
六十、自以为拥有财富的人,其实是被财富所拥有。
六一、情执是苦恼的原因,放下情执,你才能得到自在。
六四、当你对自己诚实的时候,世界上没有人能够欺骗得了你。
六五、用伤害别人的手段来掩饰自己缺点的人,是可耻的。
六七、在你贫穷的时候,那你就用身体去布施,譬如说扫地、洒水、搬东西等,这也是一种布施。
六八、内心充满忌妒,心中不坦白,言语不正的人,不能算是一位五官端正的人。
六九、默默的关怀与祝福别人,那是一种无形的布施。
七十、多讲点笑话,以幽默的态度处事,这样子日子会好过一点。
七一、与人相处之道,在于无限的容忍。
七二、不要刻意去猜测他人的想法,如果你没有智慧与经验的正确判断,通常都会有错误的。
七三、要了解一个人,只需要看他的出发点与目的地是否相同,就可以知道他是否真心的。
七四、人生的真理,只是藏在平淡之中。
七五、不洗澡的人,硬擦香水是不会香的。名声与尊贵,是来自于真才实学的。有德自然香。
七六、与其你去排斥它已成的事实,你不如去接受它。
七七、佛菩萨只保佑那些肯帮助自己的人。
七八、逆境是成长必经的过程,能勇于接受逆境的人,生命就会日渐的茁壮。
七九、你要感谢告诉你缺点的人。
八十、能为别人设想的人,永远不寂寞。
八一、如果你能像看别人缺点一样,如此准确般的发现自己的缺点,那么你的生命将会不平凡。
八二、原谅别人,就是给自己心中留下空间,以便回旋。
八三、时间总会过去的,让时间流走你的烦恼吧!
八四、你硬要把单纯的事情看得很严重,那样子你会很痛苦。
八五、永远扭曲别人善意的人,无药可救。
八六、人不是坏的,只是习气罢了,每个人都有习气,只是深浅不同罢了。只要他有向道的心,能原谅的就原谅他,不要把他看做是坏人。
八七、说一句谎话,要编造十句谎话来弥补,何苦呢?
八八、其实爱美的人,只是与自己谈恋爱罢了。
八九、世界上没有一个永远不被毁谤的人,也没有一个永远被赞叹的人。当你话多的时候,别人要批评你,当你话少的时候,别人要批评你,当你沈默的时候,别人还是要批评你。在这个世界上,没有一个不被批评的。
九一、你目前所拥有的都将随着你的死亡而成为他人的,那为何不现在就布施给真正需要的人呢?
九二、为了赞美而去修行,有如被践踏的香花美草。
九三、白白的过一天,无所事事,就像犯了窃盗罪一样。
九四、能够把自己压得低低的,那才是真正的尊贵。
九五、广结众缘,就是不要去伤害任何一个人。
九六、沈默是毁谤最好的答覆。
九七、对人恭敬,就是在庄严你自己。
九八、拥有一颗无私的爱心,便拥有了一切。
九九、仇恨永远不能化解仇恨,只有慈悲才能化解仇恨,这是永恒的至理。
一00、你认命比抱怨还要好,对于不可改变的事实,你除了认命以外,没有更好的办法了。
范文三:pcr技术的过程和意义
PCR技术的过程和意义
一、PCR技术的基本原理
类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。
在环境检测中,靶核酸序列往往存在于—个复杂的混合物如细胞提取液中,且含量很低,对于探测这种复杂群体中的特异微生物或某个基因,杂交就显得不敏感。使用PCR技术可将靶序列放大几个数量级,再用探针杂交探测对被扩增序列作定性或定量研究分析微生物群体结构。
二、PCR技术的步骤
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
1、模板DNA的变性
模板DNA经加热至93?左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备; 2、模板DNA与引物的退火(复性)
模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55?左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
3、引物的延伸
DNA模板--引物结合 物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2,4分钟,2,3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。
三、PCR技术的意义
1、特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
?引物与模板DNA特异正确的结合;
?碱基配对原则;
?Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
?靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
2、灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg=-6)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中最小检出率为3个细菌。
3、简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2,4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 4、对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。
四、PCR技术主要应用的领域
1、核酸的基础研究:基因组克隆
2、不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序
3、反向PCR测定未知DNA区域
4、反转录PCR(RT-PCR)用于检测细胞中基因表达水平、RNA病毒量以及直接克
隆特定基因的cDNA
5、荧光定量PCR用于对PCR产物实时监控
6、cDNA末端快速扩增技术
7、检测基因的表达
8、医学应用:检测细菌、病毒类疾病;诊断遗传疾病;诊断肿瘤;应用于法医物证学。
五、关于RT-PCR
4月17日,在北京检验检疫局承担的国家质检总局科技计划项目“禽流感病毒H7N9亚型双重荧光RT-PCR定型技术研究”鉴定会上,专家组一致认为:该项目创新性地实现了对禽流感病毒H7N9亚型的一步快速定型,可在一次检测中确认样品中是否存在H7N9亚型禽流感病毒或其他H7亚型和N9亚型的禽流感病毒;在通用性、特异性、灵敏性上,技术优势突出。专家组同意项目成果通过鉴定,并建议在进一步扩大和完善动物临床验证实验基础上,尽快推广应用。
RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写。逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR,
RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。
利用RT-PCR技术,也许在不久的将来,H7N9的快速诊断将成为一个非常容易的问题。
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出路出路,走出去才有路
“出路出路,走出去才有路。”这是我妈常说的一句话,每当我面临困难及有畏难情绪的时候,我妈就用这句话来鼓励我。
很多人有一样的困惑和吐槽,比如在自己的小家乡多么压抑,感觉自己的一生不甘心这样度过,自己的工作多么不满意,不知道该离开还是拔地而起去反击。你问我,我也不知道你应该怎么选择,人生都是自己的,谁也无法代替你做怎样的选择。
有一个和我熟识的快递员,我之前与他合作了三年。最开始合作的时候,他负责收件和送件,我搬家的时候,他帮我安排过两次公司的面包车,有时候他送件会顺路把我塞在他的三蹦子里当货物送回我家。他时常跟我提起在老家农村种地的生活,以及进城之前父母的担
忧及村里人为他描绘的可怕的城里人的世界。那时候的他,工资不高、工作辛苦、老婆怀孕、孩子马上就要出生了,住在北京很郊区的地方。
一定有很多人想说:“这还在北京混个什么劲儿啊~”但他每天都乐呵呵的,就算把快递送错了也乐呵呵的。某天,他突然递给我一堆其他公司的快递单跟我说:“我开了家快递公司,你看得上我就用我家的吧。”我有点惊愕,有一种“哎呦喂,张老板好,今天还能三蹦子顺我吗”的感慨。之后我却很少见他来,我以为是他孩子出生了休假去了。再然后,我就只能见到单子见不到他了。
某天,我问起他们公司的快递员,小伙子说老板去上海了,在上海开了家新公司。我很杞人忧天地问他:“那上海的市场不激烈吗,新快递怎么驻足啊~”小伙子嘿嘿一笑说:“我们老板肯定有办法呗~他都过去好几个月了,据说干得很不错呢~”“那老婆孩子呢,孩子不是刚生还很小吗,”“过去了,一起去上海了~”
那个瞬间,我回头看了一眼办公室里坐着的各种愁眉苦脸的同事,并且举起手机黑屏幕照了一下我自己的脸,一股“人生已经如此的艰难,有些事情就不要拆穿”的气息冉冉升起。并不是说都跳槽出去开公司才厉害,在公司瞪着眼睛看屏幕就是没发展,我是想说,只有勇气才能让自己作出改变。
我们每个人都觉得自己越活越内向,越来越自闭,越长大越孤单,以至于滋生了“换个新环境,我这种性格估计也不会跟其他人相处融洽,所以还是待着忍忍凑合过算了”的思想感情。与其说自己自闭,其实就是懒,不想突破自己好不容易建立起来的安全区域。于是大家都活在了对别人的羡慕嫉妒恨与吐槽抱怨生活不得志中,搞得刚毕业的学生都活得跟30岁一样。
《拒绝平庸》里有一句话:很多时候我们为什么嫉妒别人的成功,正是因为知道做成一件事不容易又不愿意去做,然后又对自己的懒惰和无能产生愤怒,只能靠嫉妒和诋毁来平衡。
其实走出去不一定非要走到什么地方去,而是更强调改变自己不满意的现状。有人问我那你常说要坚持,天天跑出去怎么坚持,其实要坚持的是一种信仰,而不是一个地方,如果你觉得一个地方让你活得特别难受,工作得特别憋屈,除了吐槽和压抑没别的想法,那就要考虑走出去。就像歌词里说的:“梦想失败了,那就换一个梦想。”不能说外面都是大好前程,但肯定你会认识新的人,有新的机会,甚至改头换面重新做人。
很多人觉得在一个公司做不下去了,需要思考下是不是自己能力有问题。职场上的合适不合适,有很多可能性和干扰因素,不仅仅是能力的事,谁说他在这里干不好,去别的地方也不行呢,想想,真的是这样,职场上总能见到在一个地方呆不下去而在另一个地方就如鱼得水的人。有时候走出去不仅仅是找到新机会,更重要的是找到合适自己的位置,树立起人生新的自信与欢乐。
别在同一个地方折磨自己太久,别跟自己长时间过不去。出路出路,走出去了都是路。
说给昨天的今天的明天的我们自己
如果有来生,要做一棵树,站成永恒,没有悲欢的姿势。一半在尘土里安详,一半的风力飞扬,一半洒落阴凉,一半沐浴阳光。如果有来生,要做一只飞鸟,飞越永恒,没有迷途的苦恼。东方有火红的希望,南方有温暖的巢床,向西逐退残阳,向北唤醒芬芳。
__三毛?《说给自己听》
我们都已走过了昨天。如果,我们都希望有这样一个如果,能够让一切重新来过,回到最初,抛弃悲伤,丢掉包袱,去完成在心中蕴藏已久的梦想,带上年少时不羁的血性,独自一人乘坐火车去遥远陌生的地方遇见另一个自己。如果还有如果,一切是否还会走到现在的地步,37度的体温,身上的每一个的疤痕都是昨天的一个的一个故事。看着电影、电视或小说里某些情节和片段,我也幻想着抛弃现在的工作,义无返顾的背起行囊去远方。昨天,我真的这样想过,直到现在,这样的幻想不止一次的出现在脑海里,可是最终还是只在心中去了远方。
谁年轻的时候没有迷茫过,最终我们也没有缺胳膊少腿,就算带来了满身的伤痕,那又能怎样,就算是无理取闹,也要跟自己说句你是对的。这就是我们大致相似却又不相同的昨天。昨天,那场没有看完的电影,没有听完的歌曲,没有写完的日志,没有来一场说走就走的旅行…这些,都已风尘仆仆的定格在了我们的昨天。今天,还在依旧鲜活的闪亮登场。人生没有如果,也无法重来,人生就是每天都在上映着没有彩排的现场直播。努力投入到今天的角色中,全情搏一个无悔的我们的明天。哪怕明天,我知道会有悲伤,我也要积极面对。有时候坚强,是我们根本别无选择的选择。
明天,明天近在咫尺,也远在天涯。因为人生充满了变数,所以,于世人而言,明天永远是谜,是未知。时光从来都不会为任何人停留,不管今天你是春风得意,还是怀才不遇;不管今天你是一帆风顺,还是举步维艰;不管今天你是逍遥自在,还是身受束缚;不关今天你是富甲一方,还是一无所有,明天,已在路上,正向我们走来。
颓废者,会让幸福悄然远走;堕落者,会让美好戛然止步。成败不过一步之遥,同样的际遇,不一样的面对和处置,最后会有不一样的明天和结局。千里之行始于足下,明天是平淡还是出彩,是成功还是失败,都取决于你今天的选择和行动。你若盛开,清风自来。你若付出,必有收获。生活茶,品过才知甘苦;人生路,走过才知深浅,明天的一切都有待于我们的铺陈。毋庸置疑,唯有今天的耕耘才能换来明天的馈赠。
亲爱的朋友们,今天幸福不代表明天美好,今天失意不代表明天失败,人一定要经得起生活的考验,努力做事,从容做人,宠辱不惊。“海纳百川,有容乃大,壁立千仞,无欲则刚”。面对生活,不言弃,走过今天的崎岖,也许就能迎来明天的顺利;走过今天的风雨,也许就能迎来明天的晴朗;走过今天的挫败,也许就能迎来明天的辉煌。
人生里喜忧参半,生命中得失并存。纵然风沙肆虐,白杨依然选择挺立;纵然瞬间一现,昙花依然选择绽放。“虚心竹有低头叶,傲骨梅无仰面花”,为了明天,别在享福中丢了追求,别在落难时丢了自尊,别在迷茫中丢了自信。
明天是一片待垦的荒原,努力者会让它生机勃勃、美丽如画。明天,是没有尽头的时间隧道,若要明天会更好,今天的我们就必须全力以赴。哪怕自己只是尘埃里的一朵小花,也请选择做最美的绽放。不管身在何处,我们,都要把最美的诗篇写在今天留在明天,把潇洒的身影印在世界拉长在地平线。
这就是我想说给昨天的、今天的和明天的我自己的话,而且我也希望我的朋友们可以和我一起分享。然后我们一起卯足了劲儿,珍藏昨天、珍惜今天、珍重明天~我们风雨兼程、我们寒暑无休,我们且行且坚定且努力且珍惜~
冰心在她的散文中说过“今生如果美好,我又何求来世,今生若不美好,我又何求来生。”
童年的我老是被重男轻女的爸爸严厉的指责和打骂,连住在我家的邻居看到我被打骂都看不下去,还有,就是我爸爸宠着我的弟弟,很冷淡的对待我。
到了成年了,父母下岗了,父亲没有工作,母亲偷渡到法国,给在法国的中国家庭当保姆,本来是条件好了点,不幸又降临到我身上。我因为恋爱原因,我竟然疯了。送到了精神病医院住了1个半月的院。 面对人生我绝望了,不知道未来的路如何行走,看着路人的嫌弃眼光,和无意中说的“神经病”三个字,我死的心都有了。天天在家吃了睡,睡了吃。有天我一个亲戚叫我去外地打工,我父亲叫我去了,结果,我又出了问题了。我神经病发作,从摩托车上摔下来,又送到医院去,住了半个月的院,又从外地拖回了家中。第二次病发了,我又在神经病院住了1个半月的医院。 出院后,我就在想自己人生的路应该怎么走了,
我依然参加了成人高考,考取了英文系,读了2年的英文,过了四,六级。母亲给的钱,自己读的书。那年我毕业才24岁,有了大专文凭了,自己找了份工作。有工作了谈恋爱应该可以吧。于是,我每谈恋爱都告诉他我有病的事,不是吓的手机关机,就是吓的人失踪,没人踪影。偶尔,有个对你的好的吧,自己又看不上。
一下都30了,工作换了N个,男朋友也谈了N个,有次在保险公司上班,碰到个单身的客户,和他在一起后,怀孕结婚了,本以为挺幸福的。谁知,天有不测风云,我结婚当天发疯了,在婚宴上,他脸面丢尽了,把小孩打掉了,和我离婚。于是,我又送进了神经病医院。
出院后,我任然是积极向上的,找了份工作,准备读法律课程。谁知,书读多了我又送到神经病医院去了,总共在医院住了4次院。
我任然没有向老天低头,在我一个亲戚的公司当文案。我原本没机会的,听说是她们可怜我,照顾我,我才进来的。没想到是叫我写写微信,写写公司的会议稿件。这么一写,他们都说我很有才情,就这样留在了公司。
是呀,每个人的人生都是一个故事,每一个人的故事都是独一无二的,我老是记得一句话,上帝给自己关了扇门,总会留扇开着的窗户。每当自己痛苦的时候就告诉自己,忍受住苍天的考验,发疯的时候告诉自己,我是在充电休息,工作压力逼的自己要辞职的时候,告诉自己下份工作会做的更好。每当自己被人家谩骂的时候,笑着告诉自己,有什么关系,有病我一样坚强。
能支撑我走到现在,没有走上绝路的,出了自己的自强自立。还有就是社会上的关爱。
在医院的时候,医生和护士的细心照顾,让我的病情好转的很快,她们说我病是病了,但是,人还是很清醒的,可以和他们正常沟通。在工作的时候,老板和同事都对我很关照,前辈的教导和老板的叮咛,每天都不绝于耳。在感情上,有很多男士主动追求,目前,就有一位对我很好。
我还年轻,没什么人生感悟,只是写出自己的经历,勉励自己,以后再有困难,再发病送医院,我也不害怕。未来的路还长着呢,我将继续坚强,用毅力战胜病魔,用笑容面对人生的不如意,用乐观的态度接受命运的挑战,用真心真意来对待爱自己的人。
范文四:RT-pcr和race技术
RT-PCR 技术
RT-PCR 是将 RNA 的反转录(RT )和 cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR )相结合 的技术。 首先经反转录酶的作用从 RNA 合成 cDNA, 再以 cDNA 为模板, 扩增合成 目的片段。 RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平, 细胞中 RNA 病毒的含量和直接克隆 特定基因的 cDNA 序列。 作为模板的 RNA 可以 是总 RNA 、 mRNA 或体外转录的 RNA 产物。无论使用何种 RNA ,关键是确保 RNA 中 无 RNA 酶和基因组 DNA的污染。使用天为时代公司的总 RNA 提取系统(如目录 号 DP405和 DP406) , 所获得的 RNA 的纯度高, 基因组 DNA 污染少, 用于 RT-PCR 系统可得到满意结果。
用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、 Oligo dT 及基因特 异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞 mRNA ,三种都可。 RT-PCR 引物的选择
随机引物:适用于长的或具有发卡结构的 RNA 。 适用于 rRNA 、 mRNA 、 tRNA 等 所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。
Oligo dT :适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA 。(原核生物的 RNA 、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具有 PolyA 尾巴。)由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾 巴上, 所以对 RNA 样品的质量要求较高, 即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成 量大大减少。
基因特异性引物:与模板序列互补的引物,适用于目的序列已知的情况。 天为时 性引物 代公司的 SuperScript One-Step System 特别适合于与基因特异 性 引物连用。
RT-PCR 影响因素
RT-PCR 反应受多个因素影响,如硫酸镁的浓度 , 引物退火的温度,扩增的 循环数等。
◇建议选择 0.5-3.0 mM (相差 0.5 mM)的硫酸镁作初步实验。
◇对于具有较高 Tm 的引物,增加退火和延伸时的温度对反应有利。较高的 温度有利于减少非特异的引物结合,因而提高特异产物的得率。
◇大多数目标 RNA 经 40轮 PCR 反应就能观察到。但如果目标 RNA 太稀少, 或者只有很少的起始材料,有必要增加扩增的次数到 45-50次。
RACE
RACE(rapid-amplification ofcDNA ends) 是通过 PCR 进行 cDNA 末端快速克 隆的技术。
cDNA 完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。 完整的 cDNA 序列可以通过文库的筛选和末端克隆技术获得。
近年来随着生物技术的不断发展, 出现了许多新基因的方法和手段, 如图谱技术、 转座子标签技术、 mRNA 差异显示技术二减法技术以及 cDNA 文库筛选技术等。 但上
述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。 cDNA 末端快速扩增 技术 (rapid amplification of cDNA ends, RACE) 是一种基于 PCR 从低丰度的转录 本中快速扩增 cDNA 的 5' 和 3’ 末端的有效方法,以其简单、快速、廉价等优势而受到 越来越多的重视。
经典的 RACE 技术是由 Frohman 等 (1988)发明的一项技术,主要通过 RT-PCR 技术由已知部分 cDNA 序列来得到完整的 cDNA5’ 和 3’ 端,包括单边 PCR 和锚定 PC R 。该技术提出以来经过不断发展和完善,克服了早期技术步骤多、时间长、特异性 差的缺点 (Frohman等 ,1995:Schaefer,l995: Chen,1998: Bespalova 等 ,1998: Matz 等 11999) 。 对传统 RACE 技术的改进主要是引物设计及 RT-PCR 技术的改进 :改进之 一是利用锁定引物 ((lock docking primer) 合成第一链 cDNA, 即在 oligo(dT)引物的 3' 端引入两个简并的核苷酸【 5'-Oligo(dT)16_30MN-3', M=A/G/C;N=A/G/C/T】 ,使引 物定位在 poly(A)尾的起始点,从而消除了在合成第一条 cDNA 链时 oligo(dT)与 poly (A)尾的任何部位的结合所带来的影响 ; 改进之二是在 5‘ 端加尾时, 采用 poly(C), 而不 是 poly(A);改进之三是采用 RNase H 一莫洛尼氏鼠白血 . 病毒 (MMLV)反转录酶或选 择嗜热 DNA 聚合酶可能在高温 h (60 度 -70度 ) 有效地逆转录 mRNA , 从而消除了 5‘ 端由于高 CC 含量导致的 mRNA 二级结构对逆转录的影响 ; 改进之四是采用热启动 PCR (hot start PCR) 技术和降落 PCR(touch down PCR) 提高 PCR 反应的特异性。
随着 RACE 技术日益完善,目前己有商业化 RACE 技术产品推出,如 CLONTE CH 的 MarathoTM 技术和 SMART TM RACE 技术术。 邢桂春等 (2001)先后使用上述 两种盒进行 RACE 反应,结果发现使用 Marathon TM 所得到的片断总是比采用 SM ARTsup]TMRACE盒到所得到的片断短。其原因在于 Marathon TM 技术反转录反应 往往不能真正达到 mRNA 的 5’ 末端。所以认为,进行 RACE 反应应当优选 SMARTT M RACE 盒。以下就国内目前应用最广的 SMART TM RACE 盒为例,简要概述 RA CE 技术的原理和操作过程。 SMARTTM 3‘ -RACE 的原理是 :利用 mRNA 的 3‘ 末端 的 poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有 SMART 寡核营酸序列通用接头引物 的 Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链 cDNA 。 然后用一个基因特异 引物 GSP1(gene specific primer,GSP) 作为上游引物,用一个含有部分接头序列的 通用引物 UPM(universal primer,UPM) 作为下游引物,以 cDNA 第一链为模板,进行 PCR 循环,把目的基因 3‘ 末端的 DNA 片段扩增出来。
RACE 的优点
与筛库法相比较,有许多方面的优点
1)此方法是通过 PCR 技术实现的,无须建立 cDNA 文库,可以在很短的时间内 获得有利用价值的信息。
2)节约了实验所花费的经费和时间。
3)只要引物设计正确,在初级产物的基础上可以获得大量的感兴趣基因的全长。 实验室现有的 RACE 试剂盒的简介
RACE 是一种从一个相同的 cDNA 模板进行 5‘ 和 3‘ 末端快速克隆的方法。此方 法会产生较少的错误条带。此过程中使用的酶混合物非常适合长链 PCR 。
使用此方法的要求是必须知道至少 23-28个核苷酸序列信息,以此来设计 5’ 末端和 3‘ 末端 RACE 反应的基因特异性引物(GSPs ) 。
RACE 引物的设计:
基因特异性引物(GSPs )应该是:
23-28nt
50-70%GC
Tm 值 ≥65度, Tm 值 ≥70度可以获得好的结果
需要实验者根据已有的基因序列设计 5‘ 和 3‘RACE 反应的基因特异性引物(GS P1和 GSP2). 由于两个引物的存在, PCR 的产物是特异性的。
反应中涉及到的一些事项
cDNA 的合成起始于 polyA+RNA。如果使用其它的基因组 DNA 或总 RNA ,背 景会很高。
RACE PCR 的效率还取决于总的 mRNA 中目的 mRNA 的量和不同的引物有不 同的退火和延伸温度。
在进行 5‘ 和 3’RACE PCR 的时候应该使用热启动。
表 4中给出了所有引物的相互关系。重叠引物的设计会对全长的产生有帮助。 另外,重叠的引物可以为 PCR 反应提供一个对照。并不是绝对的要利用设计的引物 产生重叠片段。
引物 GSP 中的 GC 含量要在 50-70%之间。这样可以使用降落 PCR 。避免使 用自身互补性的引物序列,否则会产生回折和形成分子内氢键。另外,避免使用与 A P1互补的引物,尤其是在 3‘ 末端。
如果要用重叠片段来检测设计的引物, GSp1和 GSp2之间至少是 100-200碱 基。只有这样才可以用扩增的产物来鉴定设计的引物是否正确。
降落 PCR 可以明显的增加 RACE PCR 产物的特异性。 在最开始的循环中, 退 火温度高于 AP1引物的 Tm 值,可以增加对特异性条带的扩增。随后的退火和延伸 的温度降回到 AP1的温度,可以进行随后的 PCR 循环。
验证基因特异性引物的对照:
单个引物的阴性对照:只用一个引物 GSP 来进行阴性对照。这样不应该产生 任何的条带。 如果可以看到明显的产物, 应该改变循环的参数, 或重新设计原始引物。
利用两个 GSPS 进行阳性对照:(只有两个 GSP 可以产生重叠的时候才可以采 用此步。 )为了确定 RNA 样品中目的基因确实表达,利用两个 GSP 和接头连接的 c DNA 来产生阳性对照。可以产生两个引物之间的重叠大小的片段。如果没有这个片 段,应该重复 cDNA 的合成,或者从一个不同的组织或细胞来源进行 cDNA 的合成。
制备和抽提 polyA+RNA
不要使用 DEPC 处理过的水。
纯化完 mRNA 之后,利用琼脂糖凝胶电泳检测 mRNA 的质量。哺乳动物的 mR NA 样品是 0.5-12kb 的拖带,在其中有 4.5和 1.9kb 的 rRNA 的条带。非哺乳动物 的 mRNA 应略小
具体的实验步骤
cDNA 第一条链的合成:
我们建议进行 cDNA 合成的对照反应,这样可以对样品的 cDNA 的合成进行鉴 定。加入各种试剂之后,在气浴中 42度保温一个小时。
注意:在水浴或酒精浴中保温回减少反应体积,从而降低第一链的合成效率。 将管放于冰上,以终止第一链的合成反应。
直接进行第二链的合成。
cDNA 第二链的合成:
第二链合成的酶混合物中,含有聚合酶、 RNaseH 和连接酶。 T4 DNA 聚合酶的 功能是补平 dscDNA 的末端。我们建议做阳性对照,试剂盒中提供人类骨骼肌的 mR NA 。
建议进行阳性对照 ,cDNA 的质量取决于制备的 polyA+RNA的质量。非哺乳动 物样品的 mRNA 大约在 0.5-3kb 之间。
通过电泳检测 cDNA 的产量,与对照进行对比,这样可以有利于在以后的步骤 中对 cDNA 进行稀释。
接头的连接及连接产物的稀释
按照程序进行连接反应。
如果没有对比样品和对照的产量,利用 Tricine -EDTA buffer 制备接头连接的 dscDNA 的 1/50和 1/250的稀释物, 用两种稀释物进行以下的 RACE PCR 反应, 直 到鉴定出哪一种稀释可以得到好的效果。
RACE RACE --PCRPCR 扩增扩增
? 进行 5’ 和 3’ 的 RACE -PCR 扩增。
? 利用以下的程序进行降落 PCR 反应:
94度 30秒
5个循环:94度 5秒
72度 4分
5个循环:94度 5秒
70度 4分钟
20-25个循环:94度 5秒
68度 4分钟
注意:
我们建议使用降落 PCR 反应,这就要求 GSP 的 Tm 值 ≥70度。
当循环结束时, 利用 1.2%琼脂糖凝胶电泳分析每一个管中的产物 5μl, 使用适当 的分子量 marker 。
? 可以根据你的基因的特异性来设计最理想的循环参数。如果看不到带或者只有 微弱的带,在 68度多加 5个循环。最佳的延伸时间取决于扩增条带的长度。如果片 断的长度在 2-5kb 的时候,经常使用 4min , 0.2-2kb 的时候将延伸时间减到 2-3m in ,对于 5-10kb 的条带,延伸时间增加到 10min 。
RACE 产物的验证:
应该对 RACE 的片段进行验证 , 以此来确定是否已经扩增了理想的产物。 如果得 到的是多条带或者研究的是多基因家族的成员,验证是非常有用的。
有 3种验证 RACE 产物的方法:
(1)比较由 GSP 和 NGSP 获得 RACE 产物。
(2) Southern blot
(3)克隆并测序
我们建议最好测得 RACE 产物的部分序列。有的时候需要嵌套引物的存在。 比较由 GSP 和 NGSP 获得 RACE 产物。
对于 5‘ 末端的 RACE 产物,比较由 AP1和 GSP1扩增出来的产物和由 AP1和 NGSP1扩增出来的产物。
对于 3‘ 末端的 RACE 产物,比较由 AP1和 GSP2扩增出来的产物和由 AP1和 NGSP2扩增出来的产物。 这对于鉴定多条带是否是上一个 PCR 的特异性产物是非常 有用的。
如果条带是正确的,在嵌套 PCR 反应中的条带应该是略微小一些。基本 PCR 和嵌套 PCR 产物的迁移率的不同取决于cDNA结构中 GSP1和嵌套引物的位置。 RACE 产物的克隆和测序:
可以利用胶回收试剂盒来回收 RACE 产物,此试剂盒适合回收 2.5kb 以下的 R ACE 产物;对于长的片段,可以通过电洗脱获得好的结果。如果你选择使用其他的 纯化方法,最后用 Tricine -EDTA buffer 30μl重新悬浮 DNA 样品。
电泳 5μl回收的样品来鉴定回收的质量。
将回收的 PCR 产物直接克隆到 /A型的 PCR 克隆载体中。 另外还可以利用接头 和 /或 cDNA 合成引物中的 Not1、 Srf1、 Xma1、 ECOR1等酶切位点,将产物克隆到 常规载体中
对于 5‘ 端的 RACE 产物,我们建议挑取至少 8-10个不同的克隆以获得 5‘ 端的 最大可能性的序列。 (反转录并不总是进行到 mRNA 模板的 5’ 末端,尤其是长模板。 另外, T4 DNA 聚合酶会移走 5‘ 末端的 0-20个碱基。 )
一旦鉴定了含有插入片断的克隆,应该获得多的序列信息。理想的是,可以对 整个开放读码框进行测序。包括 5‘ 和 3‘ 的非翻译区。
全长 cDNA 的获得
通过部分或全部测序鉴定了 RACE 产物后,可以通过两种选择获得全长的 cD NA 。
通过 PCR 的方法。
通过克隆的方法。
通过 PCR 的方法获得全长 cDNA :
扩增长的 cDNA 需要较长的延伸时间,但是如果延伸的时间过长,可以产生拖 带,所以要慎重的设计引物。
根据从 5‘ 和 3‘RACE 产物获得序列信息设计 5’ 和 3‘GSP 引物。 这些引物应该来 自 cDNA 的 3’ 或者 5‘ 的末端,应该是 23-28nt 长。不应该在引物的末端加上限制性 位点,这样会导致高背景。在某些时候可以设计 3’ 和 5‘ 的嵌套引物。但是还是应该先 利用一对引物进行 PCR 反应。
通过 PCR 的方法获得全长 cDNA :
进行如下的热循环:
94度 30秒
25个循环 94度 5秒
72度 2-15分钟
延伸的时间应该等于预期的 cDNA 长度加上 2分钟。例如:预期得到 6kb 的条 带,用 6+2=8分钟的延伸时间。
注意:如果没有条带或者条带弱,增加 5个循环;或者优化 PCR 的条件。 通过 PCR 的方法获得全长 cDNA :
在 1.2%的琼脂糖凝胶上分析 5μl的样品。通常情况下,可以见到一条单一带, 如果这样,利用胶来纯化全长的 cDNA 。
制备 1.2%的 TAE buffer 制备琼脂糖凝胶。 不使用 TBE buffer , TBE 的胶很难 制备全长的 cDNA 。
将剩下的 45μl反应物点样,选用适当的 marker 。
利用长波紫外观察 cDNA (≧ 300nm )切下全长的 cDNA 。注意:应该尽量减 少紫外对 cDNA 的照射。
通过 PCR 的方法获得全长 cDNA :
利用胶回收试剂盒回收 cDNA 。此试剂盒适合回收 2.5kb 以下的 RACE 产物; 对于长的片段,可以通过电洗脱获得好的结果。如果你选择使用其他的纯化方法,最 后用 Tricine -EDTA buffer 30μl重新悬浮 DNA 样品。
将全长的 cDNA 克隆到 T/A型的 PCR 克隆载体中。
通过克隆产生全长的 cDNA :
如果你已经获得了含有重叠部分的 5‘ 和 3’RACE 产物,同时在 cDNA 的重叠部 分含有一个酶切位点的话,通过克隆技术可以获得全长的 cDNA 。
利用酶切获得的 3‘ 和 5’ 扩增产物,并且利用 T4 DNA 连接酶将它们连接起来。 利用接头和 cDNA 合成引物中的内切酶将最终的全长 cDNA 克隆到载体中。
在哺乳动物基因组中, NOT1和 Srf1酶切非常稀少,大约 106bp 才出现一次, 因此在绝大多数的 cDNA 中是不出现的。
Appendix :cDNA 接头和引物 接头在设计的时候可以使 cDNA 的扩增成功进行:接头的 5‘ 端在第一个循环中没有 AP1引物的结合位点。 AP1的结合位点只有通过 G SP 的扩增之后才能够产生。 这些特点中的每一个都可帮助减少 cDNA 片段扩增过
程中出现的非特异性扩增。另外,它们允许从一个复杂的 DNA 片段的混合物中扩增 出靶样品 ―― 所有的产物都有相同的末端结构,因为使用了单一的一套 GSPs 。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下:
1. 制备 1%琼脂糖凝胶 (大胶用 70ml, 小胶用 50ml):称取 0.7 g(0.5 g) 琼脂糖置于锥形瓶中 , 加 入 70 ml(50ml)1×TAE, 瓶口倒扣小烧杯 . 微波炉加热煮沸 3次至琼脂糖全部融化 , 摇匀 , 即成
1.0%琼脂糖凝胶液 .
2. 胶板制备 :取电泳槽内的有机玻璃内槽 (制胶槽 ) 洗干净 , 晾干 , 放入制胶玻璃板 . 取透明胶带 将玻璃板与内槽两端边缘封好 , 形成模子 . 将内槽置于水平位置 , 并在固定位置放好梳子 . 将冷 却到 65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上 , 使胶液缓慢展开 , 直到整个玻 璃板表面形成均匀胶层 . 室温下静置直至凝胶完全凝固 , 垂直轻拔梳子 , 取下胶带 , 将凝胶及内 槽放入电泳槽中 . 添加
1×TAE 电泳缓冲液至没过胶板为止 .
3. 加样 :在点样板或 parafilm 上混合 DNA 样品和上样缓冲液 , 上样缓冲液的最 终稀释倍数应不小于 1X. 用 10 ul 微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内 , 每加完一个样品 , 应更换一个加样头 , 以防污染 , 加样时勿碰坏样品孔周围的凝 胶面 .(注意 :加样前要先记下加样的顺序 ).
4. 电泳 :加样后的凝胶板立即通电进行电泳 , 电压 60-100V, 样品由负极 (黑色 ) 向正极 (红色 ) 方向移动 . 电压升高 , 琼脂糖凝胶的有效分离范围降低 . 当溴酚蓝 移动到距离胶板下沿约 1cm 处时 , 停止电泳 .
(5)电泳完毕后 , 取出凝胶 , 用含有 0.5 ug/ml的溴化乙锭 1×TAE溶液染色约 20 min, 再用清水漂洗 10 min.
(6)观察照相 :在紫外灯下观察 ,DNA 存在则显示出红色荧光条带 , 采用凝胶成像 系统拍照保存
实验原理
闭合环状质粒、 线性质粒和开环质粒 DNA 由于构形不同, 在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电 泳上呈现不同的迁移率,因而在紫外灯下观察,能区别闭合环状质粒 DNA (cccDNA ) 、线 性质粒 DNA (L-DNA )和开环质粒 DNA (ocDNA ) 。
实验材料和 试剂
(一)实验样品
质粒 pUC118
(二)
1. l DNA/HindIII分子量标准
2.溴酚蓝指示剂点样缓冲液
0.2% 溴酚蓝
50% 蔗糖
3. 1mg/ml溴化乙锭溶液
4.电泳缓冲液(TAE )
40 mmol/L Tris-乙酸
1 mol/L EDTA
(配制方法:24.2克 Tris 碱, 5.71ml 冰乙酸, 10ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0),定容至 5000 ml )
5. 0.7% 琼脂糖凝胶
(配制方法:称取琼脂糖 0.35克,加入 50ml TAE 电泳缓冲液)
(三)仪器
微量移液器 电泳仪
水平电泳槽 透射紫外观察仪
实验步骤
1.选择合适的水平式电泳槽,调节电泳槽平面至水平。检查稳压电源与正负极的线路。
2.选择孔径大小合适的点样梳子,垂直架在电泳胶模的一端,使点样梳子底部离电泳胶 模底部的距离为 1.0mm 。
3.制备 0.7%琼脂糖凝胶, 100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀。
4.用吸管取少量琼脂糖凝胶溶液将电泳胶模四周密封好,防止浇灌琼脂糖凝胶板时发生 渗透。待琼脂糖凝胶冷却至 60℃左右时,加入一滴溴化乙锭,摇匀,轻轻倒入电泳胶模中, 琼脂糖凝胶的厚度在 3~5mm 。倒胶时要避免产生气泡,若有气泡可用吸管小心吸去。 5.琼脂糖凝胶凝固后,在室温放置 20分钟,小心拔掉点样梳子和电泳胶模两端的挡板, 保持点样孔的完好。
6. 将电泳胶模放入电泳槽中, 加入电泳缓冲液, 使电泳缓冲液面高出琼脂糖凝胶表面 1~ 2mm 。如点样孔内有气泡,用吸管小心吸出,以免影响加样。
7.将 15ml DNA 样品与 1/5体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液混合。上样缓冲液不仅可以 提高样品的密度,使样品均匀沉到样品孔内,还可以使样品带颜色,便于上样和估计电泳 时间和判断电泳的位置。
8.用微量移液器将样品小心加入加样孔内,记录样品点样秩序。
9.盖上电泳槽,开启电源开关,最高电压不超过 5V/cm(100~150V 恒压电泳) ,使 DN A 从负极向正极移动。
10.电泳时间随实验的具体要求而异。电泳一般需 1~3小时。电泳完毕后关闭电源,戴 一次性塑料手套取出凝胶,尽可能将所有的电泳缓冲液淋干,在 254nm 波长的透射紫外灯 下观察。
【提示】
(一)琼脂糖凝胶电泳
1.琼脂糖凝胶的性质
琼脂糖是从海藻中提取的一种直链多糖,它由 D-半乳糖和 3,6-脱水 -L-半乳糖的残基交替
排列组成的线型多聚糖。 当琼脂糖加热至 90~100℃左右,即可形成清亮透明的液体。浇在 模板上冷却至 40~45℃时,凝固形成凝胶。琼脂糖带有亲水性,不含有带电荷的基团,不 引起 DNA 变性,又不吸附被分离的物质,因此它是一种很好的凝胶剂。琼脂糖凝胶可区分 相差 100bp 的 DNA 片段。
2. DNA 分子的迁移率
DNA 分子在电泳中的迁移率的因素是多方面的,除了决定于 DNA 分子大小与构型外, 还有琼脂糖凝胶的浓度、电压大小、缓冲液 pH 值和电泳时的温度等。
(二)实验操作中注意的问题
1.加热溶解琼脂糖时应不断地摇动容器,使附于壁上的颗粒也完全溶解。
2.溴化乙锭是一种强致癌剂,并有中度毒性,因此必须十分谨慎小心。操作时一定要戴 手套,用过的手套要及时将手套顺手翻过来,让污染有溴化乙锭的面朝里。
3.用 254nm 波长的紫外光进行观察的效果比 366nm 清晰,但产生的切口 DNA 量也较 高。紫外光对眼睛有害,观察时应戴上眼镜或防护面罩。
范文五:实验二基因的pcr扩增技术【优质】
实验二基因的PCR扩增技术
一、实验目的
1、学习PCR反应的基本原理与实验技术
2、从BCG基因组DNA中PCR扩增Rv1791(PE19)基因 二、基本原理
1、PCR类似于DNA的天然复制过程。
2、将待扩增的DNA片段与其两侧互补的两段寡核苷酸引物,经变性、
n退火和延伸若干个循环后,DNA扩增倍数可达2倍。 3、DNA的变性和复性
1)加热或强酸、碱性作用可以使 DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离,形成单链DNA,这称为 DNA的变性。
2)解除变性的条件后, 变性的单链可以重新结合起来,形成双链,其原有的特性和活性可以恢复,这称DNA复性, 也叫退火。 三、实验材料
, BCG基因组DNA
, 10?PCR反应缓冲液、4?dNTPs、Taq DNA聚合酶、模板DNA、引
物 (P1、P2)、超纯水SW
, PCR反应管、移液器、 PCR仪、离心机
四、实验步骤
, 引物设计
, 准备PCR反应溶液
, PCR扩增反应
, 结果检测
, Rv1791-F: ATGAATTCAGGAAGACAGCATGTCGTTC(EcoR I)
, Rv1791-R:
, ATCTCGAGTGTTCCCCCTCTCCTTCAG
, (XhoI)
(二)准备PCR反应溶液
10×PCR反应缓冲液 2.5μl
4×dNTPs 2.0μl
引物P1 1μl(10nM)
引物P2 1μl
模板DNA 2μl
Taq DNA聚合酶 0.2μl
用无菌去离子水至 25μl
?
用手指轻弹PCR反应管管底部,使溶液混匀
?
在台式离心机中离心2秒以集中溶液于管底
(三)PCR扩增反应
在PCR仪中设计如下反应程序:94?C、5min;94?C、30sec,61?C、40sec,72?C、30sec,30个循环;72?C、5min 将已混匀的PCR反应管置于PCR仪的反应孔中,盖好盖子 进行反应。反应完毕,将样品取出置于冰浴中待用
(四)结果检测
, 本PCR扩增的产物DNA片段长度为300bp,适合于在1.5%琼脂
糖凝胶中进行电泳检测。从每个反应管中取5ul PCR产物进行
电泳检测。
五、实验结果与分析
本组实验序号为41号。
Rv1791(PE19)基因的分子量在250bp-500bp之间,符合已知数据DNA分子量是300bp,PCR扩增成功。本组实验PCR扩增的DNA量较少,可能原因有实验一时提取的DNA含量较少,DNA未与PCR反应溶液混合均匀。
六、思考题
, 影响PCR结果的因素。
解: 1.外部因素对实验结果的影响:
不同PCR仪品牌与型号在温度控制性能上的不同直接影响了三种温度平台的温度的准确性和不均一性,因而影响了整个PCR反应的实验结果。另外,升温速度的不同,温度下降梯度的不均一性,温度过低,温度过冲,也是重要的因素。最差的情况,一个本该阳性的结果却可能得出阴性的结果。对于实时PCR,荧光信号输出和产量/溶解曲线,直接与温度控制有关系,而这些结果很可能是戏剧性的。
2.PCR仪器之间的差别对实验结果的影响:
没有任何两台PCR仪器的温度控制是一模一样的。相对于预设的温度模块温度总是偏高或偏低,就是同一模块不同的孔之间,温度有时也会不一样,相差可能达几摄氏度之多。一些PCR仪温度控制性能的不足造成的后果是:当PCR仪的模块温度在升温时,温度过冲或不足,不能准确的达到预设的平台温度。
3.温度控制技术的差别对实验结果的影响:
使PCR仪模块的温度达到并保持在某一温度有很多方式。每一种方式都有优点和缺点。另外,这些技术被运用控制的水平对于温度控制的水准是很重要的,且有很大不同。大多数PCR仪器的温度控制性能是很差的。在单一或多传感器控制机制上的不同显而易见的引起了温度的不均一性。
4.仪器老化对实验结果的影响:
虽然PCR仪没有任何的机械或可移动部件,但是那并不意味着它不会磨损。电子器件的性能会随着时间的延长而老化,并由于过度的使用而加速老化。Peltier器件的失效或磨损会引起模块的热斑或冷
斑,通常PCR仪器不能识别这种由于机械磨损,模块延展和收缩效应引起的温控性能的不同。因此,为掌握这些情况,实时监测PCR仪的温度控制性能是重要的。出于同样的原因,PCR仪温控性能的失常通常是实验失败或毁坏循环反应的重要原因。
5.实验室认证:
根据以上的论点,很多实验室已经不得不适应一些认证。和ISO、GMP、GLP标准一样,必须证明所有的实验室程序是按照标准程序所操作的。一些实验室只有当他们采用已经被他们的合作组织或专业委员会测试的或认可的程序时才可以称他们自己是合格的。
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班主任工作总结专题8篇
第一篇:班主任工作总结
小学班主任特别是一年级的班主任,是一个复合性角色。当孩子们需要关心爱护时,班主任应该是一位慈母,给予他们细心的体贴和温暖;当孩子们有了缺点,班主任又该是一位严师,严肃地指出他的不足,并帮助他改正。于是,我认为班主任工作是一项既艰巨而又辛苦的工作。说其艰巨,是指学生的成长,发展以至能否成为合格人才,班主任起着关键性的作用,说其辛苦,是指每天除了对学生的学习负责以外,还要关心他们的身体、纪律、卫生、安全以及心理健康等情况。尽管这样,下面我就谈几点做法和体会。
一、常规习惯,常抓不懈
学生良好的行为习惯的养成不是一节课、一两天说说就行的,它必须贯穿在整个管理过程中。于是我制定出详细的班规,要求学生对照执行,使学生做到有规可循,有章可依。由于低年级学生自觉性和自控力都比较差,避免不了会出现这样或那样的错误,因此这就需要班主任做耐心细致的思想工作、不能操之过急。于是,我经常利用班
会对学生中出现的问题进行晓之以理、动之以情、导之以行的及时教育,给他们讲明道理及危害性,从而使学生做到自觉遵守纪律。
二、细处关爱,亲近学生
爱,是教师职业道德的核心,一个班主任要做好本职工作,首先要做到爱学生。“感人心者,莫先乎情。”工作中,我努力做到于细微处见真情,真诚的关心孩子,热心的帮助孩子。我深信,爱是一种传递,当教师真诚的付出爱时,收获的必定是孩子更多的爱~感受孩子们的心灵之语,便是我最快乐的一件事~”
三、具体要求,指导到位
心理学研究表明,儿童对事物的认知是整体性的,能熟知轮廓,但不注重细节。
我认为,首先要蹲下来,以孩子的视角观察事物,用孩子能听懂的话和他们交流。其次,要注重细节教育,把该做的事指导到位,因为他们很想按照老师的要求去做,很想把事情做好。
四、示范带头,直观引导
大教育家乌申斯基曾有过这样一段话:“教师个人的范例,对于学生的心灵是任何东西都不能代替的最有用的阳光。”低年级的学生对自己的班主任是一个怎样的老师,他们会留心观察班主任的每一个动作、每一个眼神、每一种表情,会细心倾听班主任的每一句话,他们对班主任有着一种特殊的信任和依赖情感。班主任的自身素质,道
德修养,班主任的一言一行,一举一动,无形之中会成为全班几十个孩子的榜样。因此,在班级工作中我时刻注意自身形象,事事从我做起,以良好的形象率先垂范,潜移默化的影响着我的学生。凡要求学生做到的,教师首先自己做到,而且做得更好。要求学生讲卫生,不随便乱扔垃圾,自己就做到随手捡拾垃圾。要求学生不迟到,在我的带动下,我们班的大多数学生都能做到讲卫生不迟到,个个讲文明守纪律。
五、及时表扬,延迟批评
德国美学家黑格尔说:“不应该使孩子们的注意力长久地集中在一些过失上,对此,尽可能委婉地提醒一下就够了。最重要的是要在学生身上激发出对自身力量和自身荣誉的信念。”教过低年级的老师都知道:孩子小,事儿多,一上课就“告状”。当老师的又不能不公平处理,这样耽误的时间太多,而且学生因为受了批评,注意力长时间集中在自己的过失上,情绪受影响,低落的情绪体验使智力活动水平明显下降,课堂吸收效率变低。针对这一情况,我采取延迟批评,这样既培养学生愉快的情绪体验,又给予其改正和返回的机会,之后老师只要加以指导,就能很好的解决问题......
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第二篇:四年级班主任工作总结
学生是涌动着无限活力的生命体,是教育的起点和归宿。面对学生,祖国的未来,我们要做一个真正有意义的班主任,素质教育要求我们要面向全体学生,为学生服好务,使学生的思想道德、文化科学、劳动技能、身体心理素质得到全面和谐地发展,我们的班级管理究竟该如何阅读学生个体,提升学生学习生活及生命的质量呢?在过去的一学期里,我们班在学校的统一组织、领导和同学们的共同努力下及任课老师的大力支持和配合下,各项工作顺利开展,安全、学习、工作等方面都取得较突出的成绩,现将我所做的一些工作总结如下:
一、做好学生的思想工作,培养学生良好的道德品质,净化学生的心灵,努力培养德智体全面发展的人才
做好学生的思想工作从两方面入手,一是重视每周的班会课,开好班会课;二是重视与学生的思想交流,多与学生谈心。重视班会,开好班会,为的是在班中形成正确的舆论导向,形成良好的班风、学风,为学生提供一个好的大环境,重视的是学生的共性。为配合学校各项工作的落实,我们班积极开展了许多有益于学生身心健康发展的活动,让学生在活动中明事理、长见识。学生自尊心也很强,直接的批评换回来的可能是思想的叛逆,利用班会课对学生进行思想教育的好处,就是避免单调重复的批评说教而引起学生的反感,容易为学生接受,能切实帮助学生澄清思想上的模糊认识,提高学生的思想境界。但开班会课不一定都要等到每周二下午第四节,可利用一些零碎的又不影响学科学习的时间开短小精悍的班会也能取得良好的效果。不必长篇大论,班主任把及时发现的不良思想的苗头一针见血地指出来,
对事不对人,进行警示性的引导教育,往往能把一些影响班风、学风的不良思想消灭在萌芽阶段。而重视与学生的思想交流,多与学生谈心,注重的是学生的个性和因材施教。我常利用课余时间和学生促膝谈心,及时对学生进行针对性的教育。用个人的魅力征服学生,用自己的热情和朝气感染学生。体现在学习、生活的方方面面。做任何事情,一定要从学生的角度去考虑,为学生利益着想,学生才易于接受。在这个时候,我就是他们的好朋友,尽量为他们排忧解难,也正因如此,我得到了班上大多数学生的喜爱和信任。
二、加强班级管理,培养优秀的学风、班风,深入全面地了解学生,努力培养"团结、严格、活泼、奋进"的班集体
四年级的学生思想、心理发展、变化很快。因此,对学生的思想工作显得尤其复杂和重要。在这个学期里,我的班级管理工作主要从三方面实施:一方面,我主要加大了对学生自治自理能力培养的力度,通过各种方式,既注意指导学生进行自我教育,让学生在自我意识的基础上产生进取心,逐渐形成良好的思想行为品质;又注意指导学生如何进行自我管理,培养他们多方面的能力,放手让学生自我设计、自我组织各种教育活动,在活动中把教育和娱乐融入一体;还注意培养学生的自我服务的能力,让学生学会规划、料理、调控自己,使自己在集体中成为班集体的建设者,而不是"包袱"。在这点上,特别值得一提的是班干部的选用,这是让学生自治的重要途径。班主任的管理代表的是学校的管理,不论班主任如何和颜悦色都带有不容质疑的权威性,也难免有不被理解和接受的时候,通过班干部的协调,往往
能够取得意想不到的效果。班干部起的是协助班主任管理班级的作用,他们接受班主任的指导,又及时向班主任反馈班级情况和同学们的思想动态;他们分工管理班级的各项事务,同时又是一个团结合作的整体。选好班干部,不但有利于班级管理,而且有利于全体学生共同发展。培养学生担任班干部,是培养学生能力、提高学生素质的一种很有效的方法,如培养其组织能力、管理能力、社交能力、语言表达能力等,还可以培养其关心集体、关心他人、乐于奉献、积极进取等优良的思想品质。多培养班干部有利于多数学生全面发展......
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第三篇:特教班主任工作总结
本学期在校领导的信任和支持下,我继续担任高考班班主任的工作,为了在今后的工作能够取长补短,特总结如下:
(一)抓常规管理规范学生的行为习惯
早到校、两操、打扫除、校各项活动的参加都认真组织,严格要求,决不马虎,让学生感到做人就要这样严谨、认真、一丝不苟。至今学生以习惯成自然。例如间操时间一到不用老师强调,都主动自觉去做,赢得任课老师的好评。
(二)实行班级管理
我们班级发展的目标都是由师生共同商讨确立的,并且分工负责。这样,使管理者和被管理者做到和谐统一。师生能以诚相待,共同决策,使学生感觉到班级的事也有他们的一部分。通过分级管理,班干部承担了一些日常事务的管理工作,并有权独立处理相关事务。班主任则激励和指导学生自主性的发挥,化解工作中的矛盾。通过自我管理,既加强了班干部队伍的建设,培养了学生组织管理能力,又提高了全体学生的自觉性,自制力。
(三)营造良好的学习环境
现在初中学生的学习、生活有绝大部分时间是在学校里度过的。班级即是学生的一个大家庭。营造良好的学习环境,对提高学生的德育素质,起了相当大的作用。首先对学生进行理想教育,学习目的教育,习惯的养成教育,培养其自信心及责任意识,其次,建立一些监督机制,奖惩制度,定期检查,定期反馈,赏罚分明,现在班级风气正,学风浓,凝聚力强。班级真正成为一个和谐向上的集体。
(四)个别教育与表扬相结合
班级中思想基础和学习都比较差的学生。通常表现为精力旺盛而又学不进去,思想活跃而又任性好动,对班集体正常的学习生活秩序有一定影响。在教育转化这部分学生时,我从建立和培养感情入手,亲近他、关心他、了解他,努力发现他身上的闪光点,如在班级活动中,象打扫卫生、主动抬水,拾到东西主动上缴,积极参加校运会入场式等等,都及时表扬,使这些不管在家里,还是在学校,极少获得
表扬,久而久之,已经失去了上进心和自我认同感,缺乏自信心的同学,从拾自信,使他们在班主任充分理解和信任的基础上,使性格和人格回到了正确的轨道上来......
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第四篇:优秀班主任工作总结
素质教育要求我们要面向全体学生,使学生的思想道德、文化科学、劳动技能、身体心理素质得到全面和谐地发展,个性特长得到充分的培育。这是一项长期的、具有划时代意义的改革。学校教育是我国主要的教学形式,班级授课制是学校教育的基本形式。因此,作为"班集体灵魂"的班主任应该充分认识到自己所承担的历史重任。
小学班主任面对6、7岁--11、12岁的儿童,工作更加繁重。我相信,任何一位班主任都希望胜任这项工作并把自己从繁重中尽量解脱出来,那么,如何开展小学班主任工作就至关重要。下面我谈谈自己的体会。
一、亲近学生,研究学生;展现自我,树立威望。
"谁爱孩子,孩子就会爱他,只有用爱才能教育孩子。"班主任要善于接近孩子,体贴和关心学生,和他们进行亲密的思想交流,让他们真正感受到老师对他的亲近和"爱"。这是班主任顺利开展一切工作的基础。研究学生是教育取得成功的必要条件,最好的途径是通过活动观察。
了解班风、学风,了解全班主要的优缺点并分析其原因所在,了解家长普遍的文化层次,找到亟待纠正的弱点;二要研究学生的个性特征(包括能力、气质、性格、爱好等),了解个人的生活环境,掌握哪些是积极分子,哪些是特别需要注意的学生等等。
在亲近与研究学生的过程中,班主任要努力展现自身广博的文化与高尚的道德情操,使学生对你"既亲近又崇拜",既认定你是值得信赖的老师,又把你当作好朋友,树立起班主任崇高的威望。那么,你的教育可能取得事半功倍的效果。
二、班干部队伍的组建和培养。
一个班的集体面貌如何,很大程度上是由小班干部决定的。小班干部对班集体有着"以点带面"和"以面带面"的作用,我称他们是"班主任的左右手。"所以唯有慎重地选拔和培养班干部队伍,班主任工作才能逐渐从繁重走向简单与轻松。
当选的班干部应具有较强的号召力和自我管理能力。班干部队伍的组建不能仅仅作为一种形式存在,班主任必须精心培养:其一,要大力表扬班干部优点,宣传他们的先进事迹,帮助小班干部树立威信;其二,在鼓励班干部大胆工作,指点他们工作方法的同时,要更严格要求班干部个人在知识、能力上取得更大进步,在纪律上以身作则,力求从各方面给全班起到模范带头作用,亦即"以点带面";其三,培养*部团结协作的精神,要能够通过*部这个小集体建立正确、健全的
舆论,带动整个班集体开展批评与自我批评,形成集体的组织性、纪律性和进取心,亦即"以面带面"。
三、以强化常规训练带动教育教学工作。
良好的常规是进行正常的学习和生活的保障,一个学生调皮捣蛋、不合常规的举动往往会使一堂好课留下遗憾,使整个集体活动宣告失败,甚至使全班努力争取的荣誉付诸东流,直接影响到班集体的利益。因此,要扎实有效地加强一个学生的常规训练。训练的内容包括《小学生守则》和《小学生日常行为规范》要求的常规、课堂常规、集会和出操常规、卫生常规、劳动常规、参观常规以及路队常规等等诸多方面。训练可以通过集体或个人、单项强化或全面优化相结合的方式进行(根据具体情况选择),务必使每个学生具有"服从集体,服从命令"的思想......
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第五篇:大学班主任工作总结
见习期刚满的我,回顾这一年的工作,除了代理团委书记一职外,另外很重要的一部分工作就是担任班主任。我当任的是2000级英教及2001级0103、0104班的班主任。以下我分别将两个专业的班级工作进行总结。
2000级英教专业两个班情况比较好。他们已经基本适应大学生活,两个班班委工作认真负责,能起到核心带头作用,与我也保持着密切
联系,作好了桥梁工作。因此,两个班取得了不少成绩:2001班在今年被评为优秀班集体。班上有2/3的同学参加了党校学习,并都以优异的成绩结业。其中有一名同学被发展为预备党员。该班学风浓厚,平时坚持早读,在期末考试中无一人重修。在英语剧比赛中,该班也获得了二等奖的好成绩。
2002班在去年也被评为了红旗团支部。该班也是积极要求进步。全班33人,有22人向党组织递交了入党申请书,形成一股“一颗红星向着党”的良好精神面貌。团支部认真负责,组织开展了以“揭批”为中心的团支部会议,使同学们对**有了清醒地认识。李国宏同学虽然曾经犯过错误,但在班上同学的帮助下,勇于改正,并且一次意外中舍己救人,为外语学院争了光。该班另一特色就是活跃,能全面发展。在冬季长跑中,报名踊跃,最后有7人参加。在“十大歌星”比赛中,有两人获奖。“十大笑星”中,该班节目代表外语学院参赛,获得第一名的好成绩。
作为班主任能看到这样的班级成绩感到非常欣慰与骄傲。下学期他们将进入大三,班委要改选,我希望能有跟多的同学得到锻炼。我带的另外两个班与他们形成对比,大一的0103、0104总的情况另我担忧。先谈谈不足吧,总的有以下几点......
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第六篇:差班班主任工作总结
担任八所中学初一年级(6)班的班主任一年了,在与孩子们接触打交道的这一年中,有苦有泪,有欢笑也有悲痛,更有些许成功也有些许遗憾~
现我对这一年的班主任工作作出如下总结:
一(班风管理
俗话说:一个班的班风犹如这个班的班主任的性格特点。我是一个比较“苛刻”的人,对人对事都极度的讲究“完美”。在管理班级的时候,我是以“军队化”的标准来进行的。一个学生,如果能够约束自己,并能够服从管理、听从指挥,我想,这个学生就达到了自我的升华。
1.学生的品德
一个班级的优秀与否,表现在每位学生品德的优劣上面。我们班一共有87个人,男生59个,女生28个,其中少数民族生共有6人,从下面乡镇上来的学生占了本班人数的78,。无论是从下面乡镇上来的学生还是在市内的学生,几乎每个学生的品德思想多多少少都存在着个体的差异性。
概括来讲,从下面乡镇上来的学生普遍会在心理及思想上认为自己是从农村来的,无论是学习还是见识方面都不如城市的孩子,难免会产生自卑的心理;城市的孩子则会认为自己比从农村上来的孩子优秀很多,甚至有瞧不起人的这种不良心态;还有这两类孩子之间会进
行物质上的攀比。这些品德思想上的认识多多少少都影响了一个班级的凝聚力,也影响了个人的品德素养~
面对这些问题,我主要采用“鼓励,限制”的方法。鼓励具有自卑心理的学生向精神方面看齐;鼓励具有攀比之心的学生也向精神方面看齐~同时限制家庭条件好的同学要特别注意学校的规章制度,不能带手机、带MP3和MP4进入教室的,坚决不能让他们带入~
当然,在学生们交往接触的过程中,难免也会发生矛盾,主要体现在吵架和打架这两大方面上。对于如何避免这些冲突,我坚持的原则是——宽以待人。如果学生之间发生冲突了,我会找他们了解情况,无论是谁对是谁错,都要让他们站在对方的角度去进行思考:换成是我,我能不能这样做,让他们学会宽以待人,避免下次再发生矛盾冲突。
2.学生的考勤
著名教师魏书生说过一句话:学生能做的事学生自己做~学生的考勤情况,我是这么进行管理的:各个组长负责各组成员的迟到、旷课以及课堂纪律的考勤;纪律委员负责对每个组长的纪律考勤;副班长监督纪律委员的纪律考勤;正班长对副班长的纪律进行考勤。不管是身为普通身份的学生,还是身处“要职”的班干部,如果出现乱子,我都会找该负责人进行对话,及时地进行处理。且在合适的时间,比如说每周周一的班会课上进行点名批评,当然对于做得比较好的学生,也会进行点名表扬......
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第七篇:幼儿园班主任工作总结
本学期我班根据《纲要》精神,以幼儿园工作计划为指导,紧紧围绕学期计划,在班上老师的紧密配合下,有的放矢,循序渐进的开展班级各项工作。现将本学期主要工作总结如下:
一、教育工作
1、“多元化幼儿艺术教育融化”的尝试
根据幼儿园及班工作计划,我班进行了“多元化幼儿艺术教育融化”的尝试,并制订了《春雨的色彩》、《夏天》的主题网络。在《春雨的色彩》的主题网络中,以文学作品为切入点,以“春”为核心,涉及科学、社会、语言、艺术、健康等领域的各项活动。《春雨的色彩》中还生成了小主题《雨》,并根据“雨”进行了“雨的形成”、“小雨滴旅行记”、“小雨点”?等等的活动。在进行这些活动时,我们注重利用各种资源,合理整合。通过实验、图片、电教设施来启发幼儿了解有关雨的知识;或许是因为幼儿年龄知识水平的因素,或许所选知识涉及过深,在活动进行中,发现效果不理想,没有达到预定目标。因此,在进行第二主题网络《夏天》时,我们总结经验,反思不足,及时进行调整。从幼儿生活中选材,以南京教材中《找凉快》为蓝本进行课程整合,而收到了较好的成效。在夏天的主题网络中,
从小朋友找凉快?动物找凉快?到昆虫的夏眠?多种多样的乘凉工具?我发明的乘凉工具;幼儿参与程度的热情较上一主题高涨。
2、环境创设
我班幼儿三十九人,性格活泼开朗,但个性鲜明突出。因此,我班在进行环境创设中能依据《纲要》中的精神,结合本班幼儿实际情况,有针对性的创设各区域:
〈1〉、对个性霸道、任性的幼儿创设了“谦让是美德”角色扮演区。
〈2〉、对爱表现、外露的幼儿设置了小舞台。
〈3〉、壁画的设计及进度紧扣教育主题,充分利用家长资源和幼儿作品......
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第八篇:初中班主任工作总结
一个学期很快结束了,在领导和各位老师的关心和帮助下,顺利走过了一学期。现在就把一学期的工作情况总结一下。
一、我所做的主要工作
初三是整个初中重要的时期,我深知自己肩负的责任重大,不敢有丝毫的怠慢。学生在心理和生理上都发生了很大的变化,对于这一变化,学生的精神上有更多的压力,而大多数的学生在这个转折时期
显得无所适从。怎样让学生尽快适应这一变化,顺利度过转折时期,这是摆在我眼前的首要任务。
我当班主任力争做到两点:一是尊重每一个学生,满足学生尊重的需要,承认的需要,情感的需要,努力克服固执己见,偏激的思维方式,尊重学生个性发展,为孩子的成长创造一个愉快的心理运动空间;二是善待每一个学生,用真诚的爱心对待每一个孩子。对于优等生,不掩饰他们的缺点,积极引导他们扬长改过,努力使其达到卓越。
对于后进生,不歧视他们,善于发现他们身上的闪光点,激励他们一步一步自我完善。我班的王帅同学学习很差,上课不注意听讲,作业经常不交,课上、课下纪律不能保证,是典型的后进生。对于这样的孩子如果只是批评、指责,他的自信心肯定会越来越少,甚至还会自暴自弃。我发现他的足球踢得不错,于是就鼓励他,如果你在学习上能象踢球那么专注,你的学习成绩一定会取得大进步。对于他身上的每一点进步,我都及时发现,并且及时予以鼓励,培养他的自信心。对于后进生,我动员学习好的同学帮助他们,带动他们把学习成绩提高上去,组成一帮一学习互助学习小组。
这个班的学生整体给人的感觉就是思维活跃,反应敏捷,但就是组织纪律性差,纪律松散,缺乏自我约束能力。如今的孩子已经今非昔比,他们接触面广,思维活跃,自尊心强,但又有着现代青少年极大的弱点即缺乏勤奋刻苦拼搏的精神,这些都表现在一言一行中。在队列队行训练中表现尤其明显。他们自由散漫,在队列里有说话的、
打闹的,无精打采,步伐随便。我向孩子提出要求,从起步到走步,从转体到每一个动作,都给他们提出规范化的要求,亲身示范,身体力行。通过这些训练,使孩子们体会到严格有序管理带来的效果。
现在的孩子普遍自私,在小事上斤斤计较,不能宽厚待人。这表现在处理同学关系上,同学之间有了矛盾,出言不逊,动辄大打出手,拳脚相加。针对这一现象,我教育学生怎样正确处理同学关系,并以此开展主题班会,对学生进行教育。在处理闹矛盾的学生时,我让学生多做自我批评,在自己身上找不足,以比来培养学生宽厚待人的精神,学会以宽容和大度之心对待周围的人。
劳动更培育学生德育思想品质的机会。现在的孩子一提起劳动就有厌烦心理,这些独生子女平时干活的机会很少,养成了懒惰的习惯。首先必须得教会学生怎样干活,从扫地到拖地,从擦玻璃到擦墙围子,我都示范指导并严格检查,及时表扬做得好的同学,批评做的不认真和逃跑的同学,让孩子们知道老师不仅在意他们的学习更注重他们的人品......
大学生实习总结专题8篇
第一篇:大学生实习总结
一、社会实践目的:认识当代社会对大学生的要求、及从中找出自己的不足之处、在四年中在这方面加强学习。了解一些社会的其他
人如何在努力生活,对自己以后毕业找工作有一定的帮助,了解一些就业岗位需要怎么样的技能,怎样的工作、以及我们应该如何去做。最主要的就是锻炼自己,使自己不会再像以前那么那样懒惰,让自己变得坚强不再懦弱、学会忍受忍受一些不公、学会忍受孤独~
二、实践内容:在寒假开始时我一回到家就开始给家里帮忙,家里在市场批发蔬菜每天早上6点就要在零下20度的环境下将自己从别的地方运来的蔬菜进行批发、今年已经近20岁了、对家里的帮助也是很少很少,感觉惭愧,只是每天早早的去帮忙送菜,这个实践对自己的专业知识倒是没有什么运用的地方,也许是现在用不上,我是很希望将自己所学的运用到工作使自己所学的不至于一无用处!但现在这种机会是少之又少。以前只要是星期天、假期都会给家里帮忙这只是对自己的小锻炼、在大学校园中也许是舒服贯了变得无所事事、现在早上早起感觉这么的困难这在以前是怎么也不会出现的事情,这个假期这个毛病也有了少许的改变、呵~这就是所谓的成绩、我从小就希望自己长大能去做自己喜欢的生意、通过给家里好几年的批发零售我看到也许做生意会很枯燥、乏味、但是能忍受这种孤独、乏味并在其中创造出成绩的我认为这就是成功的,这便是生活的意义所在。
三、实践结果:回嘉峪关在家中的这几日虽不比在学校的安逸但是也让自己成长了少许、通过寒假的帮忙的帮忙发现自己的人际交往能力还是很弱,这是以后必须解决的问题、使自己变得无所畏惧。在这几日中我也思考过一个问题:现在社会看重的是经验还是所谓的文凭、我个人觉得经验、经历也是较重要。所以在大二我要去找工作锻
炼自己,也许每个人的想法都不一样,有人在大学只是努力学习但我明白自己、我绝不是那个能认真潜心学习的家伙,也许自己需要的是社会的磨练......
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第二篇:统计学专业大学生实习总结
本人系福州大学统计学专业的一名学生,于年月27日——月8日到省统计局科研所实习,在两周的时间里,我所做的每一项工作都是以前从来没有做过的,在领导和同事的耐心帮助下,我学习到了很多实用的、有价值的东西,在积累了一些实际工作经验的同时也更深刻的理解到了统计理论知识体系,为今后的学习奠定了坚实基础。
在实习期里,我所做的工作内容比较具体、感受和体会也比较多。下面,我仅把实习期里的主要情况做一下汇报。如有不妥之处,欢迎给予批评和指正。
一、省统计局科研所
科研所是统计局内部的一个重要职能,而统计科研涉及的领域也十分广阔,包括统计基础理论研究、统计应用研究和统计信息技术研究。同时在统计工作中,对和社会关心的有关经济、社会、科技、资源与环境等重大,都需要从统计的角度进行分析研究,得出结论,提出建议。“十五”期间,国家统计科技研究的重点是统计观念的创新、统计方法的创新、统计手段的创新以及统计体制的创新。要积极组织、
指导重大课题研究,统计科研所每年要完成一项以上具有重要影响的课题。统计杂志是展示优秀科技成果的重要窗口,是科技成果转化为生产力的重要媒介。要加强对统计杂志的领导和支持,不断杂志的质量,增加发行量,扩大影响力,努力创办一流杂志。
科研所的主要职能有五点,具体包括:1.拟订全省统计科研计划和科研制度,并组织实施;2.组织协调本局及全省各地区、各的统计科研工作;3.承担统计科研课题,负责向国家统计局和省直有关进行统计科研课题的申报立项及管理工作;4.承担全省统计科研成果的评审、选优、奖励工作,并推荐优秀成果参加国家和省级评奖;5.拟订省统计学会章程,负责省统计学会日常工作,履行省统计学会秘书处的职责。
根据国务院有关文件精神,国家和各地统计科研所作为非营利性社会公益类科研机构,只能加强,不能削弱。统计科研所担负着从事统计科学研究、进行科研管理(组织统计科技交流、发布课题指南、课题立项、成果评奖等)、编辑出版统计杂志等重要职能。统计局要为科研配备先进的计算机设备、统计分析软件、通讯工具以及其他办公设备;要建设内容丰富的统计科研网站等。
二、科研所实习的具体内容
第一天到科研所报到时,一进门,就看到书柜上排列着诸多奖章,象年度科研先进单位、统计学会先进单位等等,都是国家统计局给予
省统计局科研所的表彰,也是对他们工作的肯定,我为自己能有幸到这里实习而感到骄傲。
俞明所长和所内同事对我们的到来也表示了欢迎。俞所长对我们今后几天实习的具体工作做了安排,具体包括《福建统计》杂志的出版,统计科研网站的建设,如《国际经济信息摘编》,统计论文出版的校对及统计学会的一些工作。在次,我也就这几个工作做汇报。
首先,是关于论文集的校对工作,也是此次实习中的重点工作,由于这本论文集的重要性,更要求我们校对工作的严格,在次之前,科研所的同事已经对该论文集校对过三遍,但为了确保论文集的正确无误,我们又进行了第四次校对工作。我也不得不为科研所里同事们认真负责......
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第三篇:信合大学生实习工作总结
2014年,在联社信贷科与信用社领导的关心及全体同志的帮助下,我认真学习业务知识和业务技能,积极主动的履行工作职责,较好的完成了本年度的工作任务,在思想觉悟、业务素质、操作技能、优质服务等方面都有了一定的提高。现讲本年度的工作总结如下:
1、加强学习,努力提高政治与业务素质。一年来,我能够认真学习**建设具有中国特色社会主义的理论,自觉贯彻执行党和国家制定的路线、方针、政策,具有全心全意为人民服务的意识。能遵纪
守法,敢于同违法乱纪行为作斗争,忠于职守、实事求是、廉洁奉公、遵守职业道德和社会公德。认真学习了**的“三个代表”精神,能较好的理解了“三个代表”精神的内涵,在“三个代表”学习过程中,能及时的发现存在的问题及对“三个代表”精神领悟不透的地方并及时加强学习,予以改正,使我在思想觉悟方面有了一定的进步。同时,利用工余时间认真学习金融业务知识,不断充实自己的工作经验,对于联社下发的各种学习资料能够融会贯通,学以致用,业务工作能力、综合分析能力、协调办事能力、文字语言表达能力等方面,都有了很大的提高。
2、履行职责,踏踏实实的做好本职工作。我热爱自己的本职工作,能够正确认真的去对待每一项工作任务,把党和国家的金融政策及精神灵活的体现在工作中,在工作中能够采取积极主动,认真遵守规章制度,能够及时完成领导交给各项的工作任务。一是严格规章制度,把好信贷资产质量的第一道关口。作为一名信贷内勤,我深感自己肩上的担子的分量,稍有疏忽就有可能出现信贷风险。因此,我不断的提醒自己,不断的增强责任心。针对城区居民集中,贷款户身份证容易使用混乱的状况,我建议领导将贷户的证件按申请先后顺序登记名字、号码后,在城区信用社全部核查,确定无贷款后再办理手续。一年来无论是炎热的夏季,还是寒冷的冬天,我坚持到其他信用社核查,对于多户贷款者、垒大户者坚决不予办理。同时,为了更好的把关守口,我还通过关系,向有关单位的同志,学会了真假身份证的辨别能力,只要是假的证件,我一眼就能辨别出来,从而把好了信贷资产质
量的第一道关口。二是坚持信贷原则,做好贷款的审查。我深知:信贷资产的质量事关信用社经营发展大计,责任重于泰山,丝毫马虎不得。一年来,我坚持贷款的“三查”制度和联社制定的信贷管理制度,对每一笔贷款都一丝不苟地认真审查,从借款人的主体资格、信用情况、生产经营项目的现状与前景、还款能力,到保证人的资格、保证能力,抵、质押物的合法有效性;从库存的检查、往来账目的核对到房屋和设备的实地考察;从资产负债情况的计算、产销量和利润的分析到经营项目现金净流量的研究、贷款风险度的测定,直至提出贷与不贷的理由,每一个环节我都是仔细审查,没有一丝一毫的懈怠......
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第四篇:新闻专业大学生实习个人总结
两个月弹指一挥间就毫无声息的流逝,就在此时需要回头总结之际才猛然间意识到日子的匆匆。原先颇感忸怩的离开大学的围城生活,现在已经渐渐变得顺其自然了,这或许应该是一种庆幸,或许更应该是一种叹息,谁能说得清呢,
两个月的磨刀练阵,按理说,自己到底是宝刀还是锈铁应该可以从这些日子的点滴表现中露出应有的光泽了,然而直至目前,我却对自己这些许的光泽没有信心——虽然我坚信自己不是锈铁~
两个月来,我分别在两个不同的岗位上练兵,前个月在电编部学习新闻采编,后一个月是在办公室做临时的文秘工作。
首先说说在电编部的工作心得。在电编部一个月的工作生活,我感触最深的就是,这里是我的第二个家,新闻工作可以在快乐中完成。从初中到高中再到大学,这期间我一直都是在远离父母亲人的视线之外享受着逍遥自主的生活。虽然在学校里也有师长的关爱与教诲,但总有一种仰承的距离感,缺少家庭特有的温馨。本以为毕业参加工作后,这种人际关系的距离感、层次感只可能加强,但在电编部工作让我惊喜地发现自己原先的判断错了。电编部容主任、韦副主任、廖副主任三位领导都对我们这些新人亲切有加,特别是容主任,在工作之余,以朋友的姿态经常和我们一起打球,坦怀聊天,非但不摆领导的架子,而且还以慈父的关爱之心在引导我们做好新闻工作,让我真切感受到了久违的父爱温情。而其他大部分的老同事,也对我们这些新人投以真挚友情的目光,在工作中,只要你需要,他们随时给予热情地指导;工作之余,大家开怀谈笑,不分彼此。记得刚到一周的时间,电编部新老同事以及三位领导就已经打成一片,给我的感觉是上下同心。正因为如此,在电编部工作,让我体会了在愉快中完成工作的欢欣。
我在工作上的收获主要有:,、基本学会使用和维护摄影机;,、基本掌握会议新闻与社会新闻的拍摄和采写的区别;,、基本了解并初步学会编辑新闻摄像带;,、基本学会电视新闻稿的一些写作方法和技巧等。在这期间我不仅可以较好地配合各位师兄一同出去采访拍
摄工作,还可以自己独立外出采写完成具体的新闻作品。一个月的时间,我配合各位师兄一起完成新闻采写近篇,自己独立完成的采写作品,篇。主任每次安排的采访任务都基本可以顺利完成。
在这期间,工作上最大的不足主要有:?新闻拍摄技术相对落后,画面的稳定性不够;?新闻的采写比较古板,缺乏新意;?新闻的敏感性相对较差,特别是对与会议新闻相关联的社会性新闻把握不足等。
月初我开始被调到办公室工作,主要负责协助钟主任开展日常办公接待和文秘拟写等。
显然,办公室的工作环境与电编部迥然相异。虽然钟主任与电编部的容主任一样,对我关爱有加,体贴不减,同样让我深深感受到一种父爱的慈祥与特有的威严,另外还有同事彭秋霞姐和周光明兄的友情关心与帮助,但却逃脱不掉办公室特有的按部就班的沉静环境。这多少让我喜欢热闹的性格有些不很适应。幸好有钟主任以及其他几位同事的友情关心帮助下,我较早地克服了波动的心思,全身心投入到办公室的日常工作环境中。
经过一个月的工作学习,我做出了一定的成绩:?独立完成并印发了两期《简报》;?配合办公室其他同事开展日常接待、后勤服务和卫生清理工作,并具体负责杨副局长办公室的卫生打理;?负责部分公文打字和复印登记工作;?在钟主任的具体指导下,负责拟写相关公文,如较好的完成了自查自纠工作总结;干部职工培训工作总结;
拟写完成《文字、图片、音像规范化管理》规定,并顺利通过领导审核等;?协助钟主任组织召开“行风评议自查自纠座谈会”,并根据要求,完成“行风评议调查”统计和上送工作;?与同事梁伟耀共同策划完成两个版面的“四五”普法教育宣传板报。
在办公室工作不足主要有:?缺乏基本的办公室工作知识,在开展具体......
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第五篇:公共文秘大学生实习总结
为使公关实习得到良好的效果,我们本着现实性、生活性、真实性、的原则,进行了模拟公关策划模拟和问卷调查的活动。经过一周的实习使我们了解了当代大学生的公关意识成为影响大学生成材和发展以及整个社会发展和进步的重要因素。
在实习的一周里,我们公共文秘专业的两个班共同做了关于包含八个主题的媒体访谈、新闻事件、危机处理、公关策划的公关模拟活动,紧接有进行了关于大学生八个方面的问卷调查,并将有关课题一一分组做了实践活动。在公关策划中,我们几组运用了情景体验,现场模拟的方式,对公关“是什么,怎么做,做的怎样”有了详细了解,有利于提高我们的学习积极性与掌握程度。策划中每组成员都能够按照规定的策划程序:
1、确定公关目标2、设计主题3、界定公众4、选择媒体5、公关预算6、审定方案7、计划书,将方案确定下来;在模拟方案时,我们师生共同讨论,争辩、评判,在点评时间里,每组成员都能够认真听取其不足及优点,并及时对自己组的方案做及时的补充与修改,以求更精。
中我组活动所做的课题为危机事件,主题为肯德基苏丹红事件。事件的中心内容:围绕着肯德基——中国地区销售处,在其食品中发现含有危害人体健康的苏丹红,对此,肯德基中国代理商进行了事件调查,并对此事件进行了一系列相关处理,最终圆满化解危机。
事件安排:组员将事件发展设置为三个场景;
场景一:医生为病人看病,并诊断为食物中毒疑似是吃肯德基引起的(根据今日消费者来院的病例所得)这位病人为此投诉到肯德基。
场景二:肯德基负责人接到投诉,立刻汇报上级并立即组建公关调查小组,调查此事件。已顾客为首要对他们进行了慰问。
场景三:关于此事件的发生,中国销售处召开记者招待会,借用媒体向消费者道歉。
事件结尾事件完善处理,危机成功度过,销售业绩逐渐上升。
此活动策划的开展,使我们的开括了思路,锻炼了分析问题和解决问题的能力,有新意,可行性高。
接下来的几天,我们各个组将所抽到的调查问题,经过小组讨论专题调查......
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第六篇:计算机公司大学生实习总结
在大学里,我一直在不断的努力,我相信我可以做的更好的,可是一直以来我没有很大的进步,我好像进入了瓶颈期。我学习的是计算机技术专业,现实的情况是,只有计算机技术十分好,在社会上才可以做的更好,我需要更多的经历和实践来参加我的专业,那样我才可以做的更好~
我开始到青岛海信计算机有限公司郑州办事处技术服务部实习。在部门领导和同事的指导帮助下,我慢慢了解了公司的组织机构、经营状况及管理体制,以及技术服务部的基本业务,并学到了许多计算机维护知识。
海信集团是以海信集团公司为投资母体组建的国内大型专业电子信息产业集团。创业三十多年,从最初的青岛无线电二厂,到青岛电视机厂、海信电器公司,发展成为国内著名的大型高新技术企业集团。
海信公司的服务承诺是:
全国联保,计算机出现故障时,用户可凭《品质保证书》在最近的海信公司最近的各级海信维修部以及各个授权维修中心获得维护服务。
在设有海信计算机维修服务站的地区实行三日内修复的服务。
免费维修,在计算机不见保修期内且在正常使用下的故障,免收部件的成本费用和维修费用,超过保修期,免收服务费,只收成本费。
保修期的第一年内,正常使用过程中的计算机出现故障时,只需播打海信计算机公司设在该区的服务热线,即可预约时间,并且在预约时间享受免费上门服务。
终身维护,为彻底解决顾客的后顾之忧,对于超过保修期的海信计算机......
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第七篇:机电专业大学生实习总结
读了三年的大学,然而大多数人对本专业的认识还是不够,在大二期末学院曾为我们组织了两个星期的见习,但由于当时所学知识涉及本专业知识不多,所看到的东西与本专业很难联系起来,所以对本专业掌握并不是很理想.
今年暑假,学院为了使我们更多了解机电产品、设备,提高对机电工程制造技术的认识,加深机电在工业各领域应用的感性认识,开阔
视野,了解相关设备及技术资料,熟悉典型零件的加工工艺,特意安排了我们到几个拥有较多类型的机电一体化设备,生产技术较先进的工厂进行生产操作实习.
为期23天的生产实习,我们先后去过了杭州通用机床厂,杭州机密机床加工工厂,上海阀门加工工厂,上海大众汽车厂以及杭州发动机厂等大型工厂,了解这些工厂的生产情况,与本专业有关的各种知识,各厂工人的工作情况等等。第一次亲身感受了所学知识与实际的应用,传感器在空调设备的应用了,电子技术在机械制造工业的应用了,精密机械制造在机器制造的应用了,等等理论与实际的相结合,让我们大开眼界,也是对以前所学知识的一个初审.通过这次生产实习,进一步巩固和深化所学的理论知识,弥补以前单一理论教学的不足,为后续专业课学习和毕业设计打好基础.
杭州通用机床厂
7月3日,我们来到实习的第一站,隶属杭州机床集团的杭州通用机床厂.该厂主要以生产m-级磨床7130h,7132h,是目前国内比较大型的机床制造厂之一.在实习中我们首先听取了一系列关于实习过程中的安全事项和需注意的项目,在机械工程类实习中,安全问题始终是摆在第一位的.然后通过该厂总设计师的总体介绍.粗略了解了该厂的产品类型和工厂概况.也使我们明白了在该厂的实习目的和实习重点.
在接下来的一端时间,我们分三组陆续在通机车间,专机车间和加工车间进行生产实习.在通机车间,该车间负责人带我们参观了他们的生产装配流水线,并为我们详细讲解了平面磨床个主要零部件的加工装配工艺和整机的动力驱动问题以及内部液压系统的一系列构造.我最感兴趣的应该是该平面磨床的液压系统,共分为供油机构,执行机构,辅助机构和控制机构.从不同的角度出发,可以把液压系统分成不同的形式.按油液的循环方式,液压系统可分为开式系统和闭式系统。开式系统是指液压泵从油箱吸油,油经各种控制阀后,驱动液压执行元件,回油再经过换向阀回油箱。这种系统结构较为简单,可以发挥油箱的散热、沉淀杂质作用,但因油液常与空气接触,使空气易于渗入系统,导致机构运动不平稳等后果。开式系统油箱大,油泵自吸性能好。闭式系统中,液压泵的进油管直接与执行元件的回油管相连,工作液体在系统的管路中进行封闭循环。其结构紧凑,与空气接触机会少,空气不易渗入系统,故传动较平稳,但闭式系统较开式系统复杂,因无油箱,油液的散热和过滤条件较差。为补偿系统中的泄漏,通常需要一个小流量的补油泵和油箱.由于闭式系统在技术要求和成本上比较高,考虑到经济性的问题,所以该平面磨床采取开始系统,外加一个吸震器来平衡系统.现代工程机械几乎都采用了液压系统,并且与电子系统、计算机控制技术结合,成为现代工程机械的重要组成部分,怎样设计好液压系统,是提高我国机械制造业水平的一项关键技术.在专机车间,对专用磨床的三组导轨,两个拖板等特殊结
构和送料机构及其加工范围有了进一步的加深学习,比向老师傅讨教了动力驱动......
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第八篇:中药学专业大学生实习总结
转眼间大学四年就快要结束就还剩下一年了,即将踏上社会的我而很懵懂,不知道社会的酸甜苦辣,之前一直是学生,也没有到社会上去实践工作过,这很是不好。终于在即将踏入社会之前有了一次社会实习的机会,我当然不能放过,兴高采烈的去参加实践去了。希望在毕业之前能够了解工作生活的艰辛,在毕业以后踏上社会也不至于无所依赖。
在实践结束以后我感觉这个暑假过得异常的丰富,其中最大的收获就是第一次真正的接触了与中药学专业有关的社会部门,进行了短期的社会实践活动。这次活动让我亲身经历了本专业的工作流程,仿佛是一次模拟的职场人生,受益匪浅。
我们来到了位于区附近的大药房店。作为连锁药店中的一家,该点坐落在居民聚居区域,并南临鞋城等商业街区,北临省医院,东面与颐玛特超市相对。沈河区作为市中心,人口相对集中,交通便利,居民生活水平相对水平相对较高,因此店在选址上具备了充足的客源,一定的顾客够买力,便利的交通以方便顾客的前来购买和配送中心送货运输。店的入口设计为封闭型入口,面向大街一面。进入店内,
左面为非处方药专柜,右面为处方药专柜。紧贴店内侧的是中药饮片专柜,旁边还设立了一个医疗器械专柜,作为经营的副业以增加销售量。为了充分利用营业面积,在店中央设立了药岛,将柜台销售与货架销售有机结合。药岛和周围的柜台在整个店内形成口字型通道方便顾客从身边两册同时浏览选购药品,缩短了行程。在店中环顾浏览时感觉到店虽然营业面积不大,但经营药品的品种很齐全。每个柜台都分为几层摆满了各种不同的药品,让顾客有更大的选择空间再与营业员的交流中,营业员具备了基本的医务能力和营业素质。对常见病、所售药品的药理常识掌握很牢固,能依据顾客的口述迅速判断疾病,帮助顾客选准药品。对治疗同种疾病的不同药品之间的差别、副作用等都能详细具体的解释。处方药的销售须严格持医师处方销售。
大药房店之行,让我有如下三个方面的收获:
1、就是销售人员自身。销售人员要有一定的医务能力、识别顾客的能力、销售技巧和良好的心理素质,给顾客带去高质量的药学服务,以体现药店的核心功能。这也正是目前我们在校大学生在即将踏入社会成为一名医药销售者所应具备的最基本的能力和素质。
2、从经营者的角度考虑,药品销售是以盈利为核心。最初的药店选址应综合考虑客流量、购买力、交通、现有市场和潜在市场等多方面因素,已保障药品有畅通的销售渠道。其次是店面营业场所的设计,一个好的营业场所能够促进药品销售、培养顾客忠诚度并提高工作效率。在设计过程中,应根据行业特点和顾客需求及周边环境等因素,
结合各种布局、橱窗、货架的优缺点综合设计,扬长避短,以做到有利于顾客、服务于大众、突出特色、善于经营、提高效率、增长效益。在大药房店的药品陈设中,让我不足之处在于药品的摆设有些混乱。儿童药品与成人、中老年人药品交错摆设,不便顾客寻找。同时,柜台分层摆设尽管充分利用了柜台空间,但却没有充分考虑群体特点。儿童药品摆在上层,而成人、中老年人相当一部分药品却摆......
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