范文一：基于能值分析法的生态效率构建

基于能值分析法的生态效率构建

在对系统进行能量分析中，不能直接将不同来源和形式的能量相加减，而能值理论为其提供了全新的思路。作为一种比值，太阳能值转换率常用于能值分析中，即每单位某种物质或能量相当于多少太阳能焦耳的能值转化而来。本文以能值分析方法为基础，以生态效率为主线，通过对包钢的个案分析，构建其生态效率指标体系，以此对其生态效率进行分析。

关键词：能值分析法 生态效率 指标体系

能值分析法

采用能量进行分析时，自然资源和社会经济之间用一般的方式不可直接衡量，这一难题就是所谓的“能量壁垒”。美国著名“系统生态学”之父H.T.Odum 经过长期研究，于20世纪80年代后期创立了能值理论和分析方法以及太阳能值转换率。在对系统进行能量分析中，不能直接将不同来源和形式的能量相加减，而能值理论为其提供了全新的思路。

作为一种比值，太阳能值转换率常用于能值分析中，即每单位某种物质或能量相当于多少太阳能焦耳的能值转化而来。为了将不同类别物质转换为能够统一度量的能值单位，H.T.Odum 给定了各种资源相应的太阳能值转换率。所以，能值分析是通过能值对资源等进行计算，而不是货币。

企业生态效率

生态效率可作为企业以环境为导向的最佳化决策评估模式工具，评估未来发展的可能做法。同时，对企业绿色竞争力也是重要体现。

钢铁企业生态效率是指企业在降低生态影响和资源的消耗强度的同时，提供有竞争优势的、保证人们生活质量和满足人类需求的产品，并且要以前者优先。并反映企业的生态化目标实现程度及可持续发展水平。因此，提高生态效率是钢铁企业生态化的本质。引入“生态效率”，对钢铁企业的状况进行比较，为制定提高环境绩效的措施奠定基础。

包钢的节能减排现状及存在的问题

（一）节能减排的现状

保护环境是关系企业生存和人类社会发展的大事，所以应按照“3R”的原则，大力发展循环经济，不懈打造“绿色包钢”，努力建设资源节约型和环境友好型企业，以实现可持续发展。包钢遵循这一规律，具体表现在以下几方面：

1. 吨钢综合能耗显著降低。包钢努力克服各种不利因素，使吨钢综合能耗近几年每年以100千克标煤的幅度在降低；吨钢耗新水降到6.72立方米，同比降低0.23立方米。2010年公司吨钢耗新水降至5.95立方米，同比降低0.77立方米。高炉余压发电从2001年的0.23亿千瓦时增加到2010年的4亿千瓦时。

2. 吨钢耗新水提前达标。包钢的钢产量由2001年的421万吨增至2010年的1011.53万吨，增长140.27%，但吨钢耗新水却由2001年的20.5吨降至2010年的5.95吨，降低了67%，实现了增产降水，如期实现国家《钢铁产业发展政策》要求的到2010年吨钢耗新水8吨以下的目标。

3. 减排工作效果显著。在废渣治理利用方面，包钢正在形成以冶金渣为主要原料的建筑材料产业链。炼钢工艺生产的钢渣分选出的废钢直接返转炉利用，对分选出的钢渣尾渣主要用于回填、筑路、建厂房地坪、生产建材制品等。目前，基本实现了钢渣的零排放。从2003年以后，污水排放全部成为达标排放，工业

范文二：PEST分析法

PEST 分析法

PEST 分析法是指宏观环境的分析,包括政治 P 、经济 E 、社会 S 及技术 T 四个方面。 1概念 2政治环境 3经济环境 4社会环境 5技术环境 6影响因素 7分析变形

概念

PEST 分析是指宏观环境的分析, P 是政治 (Political System), E 是经济 (Economic), S 是社会 (Social), T 是技术 (Technological)。 在分析一个企业集 团所处的背景的时候, 通常是通过这四个因素来进行分析企业集团所面临的状况。 政治环境

Political Factors

政治环境 主要包括政治制度与体制, 政局, 政府的态度等; 法律环境主要包 括政府制定的法律、法规。

1. 政治环境 是否稳定?

2. 国家政策是否会改变法律从而增强对企业的监管并收取更多的赋 税?

3. 政府所持的市场道德标准是什么?

4. 政府的经济政策是什么?

5. 政府是否关注文化与宗教?

6. 政府是否与其他组织签订过贸易协定,例如欧盟(EU ), 北美自由 贸易区 (NAFTA ), 东盟 (ASEAN )等?

经济环境

Economic Factors

构成 经济环境 的关键战略要素:GDP 、 利率 水平、 财政 货币政策 、 通货膨胀 、 失业率 水平、 居民可支配收入 水平、 汇率 、能源供给成本、 市场机制 、市场需求 等。

1. 利率 。

2. 通货膨胀率 与人均就业率。

3. 人均 GDP 的长远预期等。

社会环境

Sociocultural Factors

影响最大的是 人口环境 和文化背景。 人口环境 主要包括人口规模、 年龄结构、 人口分布、种族结构以及收入分布等因素。

1. 信奉人数最多的宗教是什么?

2. 这个国家的人对于外国产品和服务的态度如何?

3. 语言障碍是否会影响产品的市场推广?

4. 这个国家的男人和女人的角色分别是什么?

5. 这个国家的人长寿吗?老年阶层富裕吗?

6. 这个国家的人对于环保问题是如何看待的?

技术环境

Technological Factors

技术环境不仅包括发明, 而且还包括与企业市场有关的新技术、 新工艺、 新 材料的出现和发展趋势以及应用背景。

1. 科技是否降低了产品和服务的成本,并提高了质量?

2. 科技是否为消费者和企业提供了更多的创新产品与服务, 例如网上银行、 新一代手机等?

3. 科技是如何改变分销渠道的,例如 网络书店 、机票、拍卖等?

4. 科技是否为企业提供了一种全新的与消费者进行沟通的渠道,例如 Banner 广告条、 CRM 软件等?

影响因素

PEST 分析法是战略 外部环境分析 的基本工具, 它通过政治的 (Politics ) 、 经济的(Economic )、社会的(Society )和技术的(Technology )角度或四个 方面的因素分析从总体上把握宏观环境, 并评价这些因素对 企业战略目标 和战略 制定的影响。

四大方面的影响因素

一、 P 即 Politics , 政治要素, 是指对组织经营活动具有实际与潜在影响的 政治力量和有关的法律、 法规等因素。 当政治制度与体制、 政府对组织所经营业 务的态度发生变化时, 当政府发布了对企业经营具有约束力的法律、 法规时, 企 业的经营战略必须随之做出调整。 法律环境主要包括政府制定的对企业经营具有 约束力的法律、法规,如 反不正当竞争法 、税法、环境保护法以及外贸法规等, 政治、 法律环境实际上是和 经济环境 密不可分的一组因素。 处于竞争中的企业必 须仔细研究一个政府和商业有关的政策和思路, 如研究国家的税法、 反垄断法以 及取消某些管制的趋势, 同时了解与企业相关的一些国际贸易规则、 知识产权法 规、 劳动保护和社会保障等。 这些相关的法律和政策能够影响到各个行业的运作 和利润。

具体的影响因素主要有:

①企业和政府之间的关系。②环境保护法。③外交状况。④产业政策。⑤专 利法。⑥政府财政支出。

⑦政府换届。⑧政府预算。⑨政府其他法规。

对企业战略有重要意义的政治和法律变量有:

①政府管制。②特种关税。③专利数量。④政府采购规模和政策。⑤进出口 限制。⑥税法的修改。

⑦专利法的修改。 ⑧劳动保护法的修改。 ⑨公司法和合同法的修改。 ⑩财政 与货币政策。

二、 E 即 Economic ,经济要素,是指一个国家的经济制度、 经济结构 、 产业 布局 、 资源状况、 经济发展 水平以及未来的经济走势等。 构成 经济环境 的关键要 素包括 GDP 的变化发展趋势、 利率 水平、 通货膨胀 程度及趋势、 失业率 、 居民可 支配收入 水平、汇率水平、能源供给成本、市场机制的完善程度、市场需求状况 等等。 由于企业是处于宏观大环境中的微观个体, 经济环境 决定和影响其自身战 略的制定, 经济全球化还带来了国家之间经济上的的相互依赖性, 企业在各种战 略的决策过程中还需要关注、 搜索、 监测、 预测和评估本国以外其他国家的经济 状况。

企业应重视的经济变量如下:

1、经济形态。 2、可支配收入水平。

3、利率规模经济。 4、消费模式。

5、政府预算赤字。 6、劳动生产率水平。

7、股票市场趋势。 8、地区之间的收入和消费习惯差别。

9、劳动力及资本输出。 10、财政政策。

11、贷款的难易程度。 12、居民的消费倾向。

13、通货膨胀率。 14、货币市场模式。

15、国民生产总值变化趋势。 16、就业状况。

17、汇率。 18、价格变动。

19、税率。 20、货币政策。

3、 S 即 Society ,社会要素。是指组织所在社会中成员的民族特征、文化传 统、 价值观念 、宗教信仰、教育水平以及风俗习惯等因素。构成社会环境的要素 包括人口规模、年龄结构、种族结构、收入分布、 消费结构 和水平、人口流动性 等。 其中人口规模直接影响着一个国家或地区市场的容量, 年龄结构则决定消费 品的种类及推广方式。

每一个社会都有其核心价值观, 它们常常具有高度的持续性, 这些价值观和 文化传统是历史的沉淀, 通过家庭繁衍和社会教育而传播延续的, 因此具有相当 的稳定性。 而一些次价值观是比较容易改变的。 每一种文化都是由许多亚文化组 成的, 它们由共同语言、 共同 价值观念 体系及共同生活经验或生活环境的群体所 构成, 不同的群体有不同的社会态度、 爱好和行为, 从而表现出不同的市场需求 和不同的 消费行为 。

不同的国家之间有人文的差异, 不同的民族之间同样有差异, 我国有众多民 族, 虽同是中华民族但却存在着较大的人文差异, 如藏族的生活方式和藏传佛教 的宗教色彩联系紧密, 牛是藏族的吉祥动物, 在 西藏 地区的越野车辆市场中日本

丰田越野车占据着绝对的市场分额, 原因是其标识形似牛头, 因此广受藏族人民 的欢迎。可见文化对于战略的影响有时是巨大的。

自然环境是指企业业务涉及地区市场的地理、气候、资源、生态等环境。不 同的地区企业由于其所处自然环境的不同,对于企业战略会有一定程度的影响。 我国是一个幅员辽阔的国家, 这种影响尤其明显, 如同一种产品在我国东南部的 广东地区其市场的营销战略和 西藏 等西北高寒地区有较大差距, 但很多时候此点 会被忽略。

值得企业注意的社会文化因素如下:

1、 企业或行业的特殊利益集团。 2、 对政府的信任程度。 3、 对退休的态度。

4、社会责任感。

5、 对经商的态度。 6、 对售后服务的态度。 7、 生活方式。 8、 公众道德观念。 9、对环境污染的态度。

10、收入差距。 11、购买习惯。 12、对休闲的态度。

四、 T 即 Technology , 技术要素。 技术要素不仅仅包括那些引起革命性变化 的发明, 还包括与企业生产有关的新技术、 新工艺、 新材料的出现和发展趋势以 及应用前景。在过去的半个世纪里,最迅速的变化就发生在技术领域,像 微软 、 惠普、 通用电气等高技术公司的崛起改变着世界和人类的生活方式。 同样, 技术 领先的医院、 大学等非盈利性组织, 也比没有采用先进技术的同类组织具有更强 的竞争力。

分析变形

有时, 亦会用到 PEST 分析的扩展变形形式, 如 SLEPT 分析 、 STEEPLE 分析, STEEPLE 是以下因素英文单词的缩写,社会 /人口(Social/demographic)、技 术 (Technological ) 、 经济 (Economic ) 、 环境 /自然 (Environmental/Natural) 、 政治(Political )、法律(Legal )、道德(Ethical )。

此外,地理因素(Geographical Factor)有时也可能会有显著影响。 更多扩展

PESTLE/ PESTEL分析 - Political, Economic, Sociological,

Technological, Legal, Environmental

PESTLIED 分析 - Political, Economic, Social, Technological, Legal, International, Environmental, Demographic

STEEPLE 分析 - Social/Demographic, Technological, Economic,

Environmental, Political, Legal, Ethical

SLEPT 分析 - Social, Legal, Economic, Political, Technological

范文三：SWOT分析法

SWOT分析法是用来确定企业自身的竞争优势、竞争劣势、机会和威胁，从而将公司的战略与公司内部资源、外部环境有机地结合起来的一种科学的分析方法。

基本信息

中文名称

战略分析

外文名称

SWOT

应用领域

企业管理

内容

优势、劣势、机会、威胁

目录

1基本简介

2分析模型

3实际应用

4基本规则

折叠编辑本段基本简介

SWOT分析方法

SWOT分析方法

所谓SWOT分析，即基于内外部竞争环境和竞争条件下的态势分析，就是将与研究对象密切相关的各种主要内部优势、劣势和外部的机会和威胁等，通过调查列举出来，并依照矩阵形式排列，然后用系统分析的思想，把各种因素相互匹配起来加以分析，从中得出一系列相应的结论，而结论通常带有一定的决策性。[1]

运用这种方法，可以对研究对象所处的情景进行全面、系统、准确的研究，从而根据研究结果制定相应的发展战略、计划以及对策等。

S (strengths)、W (weaknesses)是内部因素，O (opportunities)、T (threats) 是外部因素。按照企业竞争战略的完整概念，战略应是一个企业“能够做的”（即组织的强项和弱项）和“可能做的”（即环境的机会和威胁）之间的有机组合。

SWOT分析方法从某种意义上来说隶属于企业内部分析方法，即根据企业自身的既定内在条件进行分析。SWOT分析有其形成的基础。著名的竞争战略专家迈克尔.波特提出的竞争理论从产业结构入手对一个企业“可能做的”方面进行了透彻的分析和说明，而能力学派管理学家则运用价值链解构企业的价值创造过程，注重对公司的资源和能力的分析。SWOT分析，就是在综合了前面两者的基础上，以资源学派学者为代表，将公司的内部分析（即20世纪80年代中期管理学界权威们所关注的研究取向，以能力学派为代表）与产业竞争环境的外部分析（即更早期战略研究所关注的中心主题，以安德鲁斯与迈克尔.波特为代表）结合起来，形成了自己结构化的平衡系统分析体系。

SWOT分析方法

SWOT分析方法

与其他的分析方法相比较，SWOT分析从一开始就具有显著的结构化和系统性的特征。就结构化而言，首先在形式上，SWOT分析法表现为构造SWOT结构矩阵，并对矩阵的不同区域赋予了不同分析意义；其次内容上，SWOT分析法的主要理论基础也强调从结构分析入手对企业的外部环境和内部资源进行分析。另外，早在SWOT诞生之前的20世纪60年代，就已经有人提出过SWOT分析中涉及到的内部优势、弱点，外部机会、威胁这些变化因素，但只是孤立地对它们加以分析。SWOT方法的重要贡献就在于用系统的思想将这些似乎独立的因素相互匹配起来进行综合分析，使得企业战略计划的制定更加科学全面。

SWOT方法自形成以来，广泛应用于战略研究与竞争分析，成为战略管理和竞争情报的重要分析工具。分析直观、使用简单是它的重要优点。即使没有精确的数据支持和更专业化的分析工具，也可以得出有说服力的结论。但是，正是这种直观和简单，使得SWOT不可避免地带有精度不够的缺陷。例如SWOT分析采用定性方法，通过罗列S、W、O、T的各种表现，形成一种模糊的企业竞争地位描述。以此为依据作出的判断，不免带有一定程度的主观臆断。所以，在使用SWOT方法时要注意方法的局限性，在罗列作为判断依据的事实时，要尽量真实、客观、精确，并提供一定的定量数据弥补SWOT定性分析的不足，构造高层定性分析的基础。[2]

折叠编辑本段分析模型

SWOT分析模型

SWOT分析模型

优势与劣势分析（SW）

由于企业是一个整体，并且由于竞争优势来源的广泛性，所以，在做优劣势分析时必须从整个价值链的每个环节上，将企业与竞争对手做详细的对比。如产品是否新颖，制造工艺是否复杂，销售渠道是否畅通，以及价格是否具有竞争性等。如果一个企业在某一方面或几个方面的优势正是该行业企业应具备的关键成功要素，那么，该企业的综合竞争优势也许就强一些。需要指出的是，衡量一个企业及其产品是否具有竞争优势，只能站在现有潜在用户角度上，而不是站在企业的角度上。

机会与威胁分析（OT）

比如当前社会上流行的盗版威胁：盗版替代品限定了公司产品的最高价，替代品对公司不仅有威胁，可能也带来机会。企业必须分析，替代品给公司的产品或服务带来的是 “灭顶之灾”呢，还是提供了更高的利润或价值；购买者转而购买替代品的转移成本；公司可以采取什么措施来降低成本或增加附加值来降低消费者购买盗版替代品的风险。

SWOT分析方法

SWOT分析方法

整体分析

从整体上看，SWOT可以分为两部分：第一部分为SW，主要用来分析内部条件；第二部分为OT，主要用来分析外部条件。利用这种方法可以从中找出对自己有利的、值得发扬的因

素，以及对自己不利的、要避开的东西，发现存在的问题，找出解决办法，并明确以后的发展方向。根据这个分析，可以将问题按轻重缓急分类，明确哪些是急需解决的问题，哪些是可以稍微拖后一点儿的事情，哪些属于战略目标上的障碍，哪些属于战术上的问题，并将这些研究对象列举出来，依照矩阵形式排列，然后用系统分析的所想，把各种因素相互匹配起来加以分析，从中得出一系列相应的结论而结论通常带有一定的决策性，有利于领导者和管理者做出较正确的决策和规划。

折叠编辑本段实际应用

SWOT分析方法

SWOT分析方法

SWOT分析法常常被用于制定集团发展战略和分析竞争对手情况，在战略分析中，它是最常用的方法之一。进行SWOT分析时，主要有以下几个方面的内容：

分析环境因素

运用各种调查研究方法，分析出公司所处的各种环境因素，即外部环境因素和内部能力因素。外部环境因素包括机会因素和威胁因素，它们是外部环境对公司的发展直接有影响的有利和不利因素，属于客观因素，内部环境因素包括优势因素和弱点因素，它们是公司在其发展中自身存在的积极和消极因素，属主动因素，在调查分析这些因素时，不仅要考虑到历史与现状，而且更要考虑未来发展问题。

优势，是组织机构的内部因素，具体包括：有利的竞争态势；充足的财政来源；良好的企业形象；技术力量；规模经济；产品质量；市场份额；成本优势；广告攻势等。

劣势，也是组织机构的内部因素，具体包括：设备老化；管理混乱；缺少关键技术；研究开发落后；资金短缺；经营不善；产品积压；竞争力差等。

机会，是组织机构的外部因素，具体包括：新产品；新市场；新需求；外国市场壁垒解除；竞争对手失误等。

威胁，也是组织机构的外部因素，具体包括：新的竞争对手；替代产品增多；市场紧缩；行业政策变化；经济衰退；客户偏好改变；突发事件等。

SWOT方法的优点在于考虑问题全面，是一种系统思维，而且可以把对问题的“诊断”和“开处方”紧密结合在一起，条理清楚，便于检验。

构造SWOT矩阵

将调查得出的各种因素根据轻重缓急或影响程度等排序方式，构造SWOT矩阵。在此过程中，将那些对公司发展有直接的、重要的、大量的、迫切的、久远的影响因素优先排列出来，而将那些间接的、次要的、少许的、不急的、短暂的影响因素排列在后面。

制定行动计划

在完成环境因素分析和SWOT矩阵的构造后，便可以制定出相应的行动计划。制定计划的基本思路是：发挥优势因素，克服弱点因素，利用机会因素，化解威胁因素；考虑过去，立足当前，着眼未来。运用系统分析的综合分析方法，将排列与考虑的各种环境因素相互匹配起来加以组合，得出一系列公司未来发展的可选择对策。

折叠编辑本段基本规则

SWOT分析方法

SWOT分析方法

成功应用SWOT分析法的简单规则：

进行SWOT分析的时候必须对公司的优势与劣势有客观的认识。

进行SWOT分析的时候必须区分公司的现状与前景。

进行SWOT分析的时候必须考虑全面。.

进行SWOT分析的时候必须与竞争对手进行比较，比如优于或是劣于你的竞争对手。

保持SWOT分析法的简洁化，避免复杂化与过度分析。

SWOT分析法因人而异。[3]

范文四：PEST分析法

何为 PEST 分析法

启动营销程序之前必须考虑公司的 市场 环境, 这一点很重要。 事实上, 市场环境分析应该是一项 长期的工程,并对营销计划产生全方位的影响。公司的 市场 营销 环境包含以下几个方面:

1.

内部环境,例如公司员工(或者内部顾客)、办公科技、工资、财务等。

2. 微观环境,例如外部顾客、代理商与分销商、供货商、竞争对手等。

3. 宏观环境:例如国家政策(或者法律),经济力量、社会与文化力量、科技力量。这些就是 所谓的 PEST 要素。

政治要素(Political Factors):

政治会对企业监管、 消费能力以及其他与企业有关的活动产生十分重大的影响力。 你必须牢记以 下几点:

1. 政治环境是否稳定?

2. 国家政策是否会改变法律从而增强对企业的监管并收取更多的赋税?

3. 政府所持的 市场 道德标准是什么?

4. 政府的经济政策是什么?

5. 政府是否关注文化与宗教?

6. 政府是否与其他组织签订过贸易协定,例如欧盟(EU ),北美自由贸易区(NAFTA ),东盟 (ASEAN )等?

经济要素(Economic Factors):

市场 营销 人员需要从短期与长期两个方面来看待一个国家的经济与贸易, 特别是在进行国际营销 的时候。你可以参考以下几点:

1. 利率。

2. 通货膨胀率与人均就业率。

3. 人均 GDP 的长远预期等。

社会与文化要素(Sociocultural Fators):

各国的社会与文化对于企业的影响不尽相同。社会与文化要素十分重要,包括以下几点:

1. 信奉人数最多的宗教是什么?

2. 这个国家的人对于外国产品和服务的态度如何?

3. 语言障碍是否会影响产品的 市场 推广?

4. 消费者有多少空闲时间?

5. 这个国家的男人和女人的角色分别是什么?

6. 这个国家的人长寿吗?老年阶层富裕吗?

7. 这个国人的人对于环保问题是如何看待的?

科技要素(Technological Factors):

科技不仅是全球化的驱动力,也是企业的竞争优势所在。下面几点解释了何为科技要素:

1. 科技是否降低了产品和服务的成本,并提高了质量?

2. 科技是否为消费者和企业提供了更多的创新产品与服务,例如网上银行、新一代手机等?

3. 科技是如何改变分销渠道的,例如网络书店、机票、拍卖等?

4. 科技是否为企业提供了一种全新的与消费者进行沟通的渠道,例如 Banner 广告条、 CRM 软 件等?

范文五：MTT分析法

悬浮细胞:

MTT 分析法是以活细胞代谢物还原剂 3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT 噻唑蓝为基础。 MTT 为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱 氢酶和细胞色素 C 的作用下 tetrazolium 环开裂,生成蓝色的 for mazan 结晶, formazan 结晶的生成量仅与活细 胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将 MTT 还原)。还原生成的 for mazan 结晶可在含 50%的 N, N-二甲基甲酰胺和 20%的十二甲基磺酸钠(pH 4.7)的 MTT 溶解液中溶解,利用酶标仪测定 490 nm 处的光密 度 OD 值,以反映出活细胞数目。也可以用 DMSO 来溶解。 MTT 粉末和溶液保存时都需要避光,用铝箔纸包好 就可以。实验的时候建议关闭超净台上的日光灯来避光。

步骤如下:

1:接种细胞:用含 10%胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液,以每孔 1000-10000个细胞接种到 96孔板, 每孔体积 200ul 。

2:培养细胞:同一般培养条件,培养 3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。

3: 呈色:培养 3-5天后,每孔加 MTT 溶液(5mg/ml用 PBS 配) 20ul. 继续孵育 4小时,终止培养, 小心吸弃孔内培养上清液, 对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。 每孔加 150ul DMSO , 振荡 10 分 钟,使结晶物充分融解。

4:比色:选择 490nm 波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵 坐标绘制细胞生长曲线。

注意事项:

1、选择适当得细胞接种浓度。

2、避免血清干扰:一般选小于 10%的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。

3、设空白对照:与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致,最后比色以空白调零。 MTT 实验吸光度最后要在 0-0.7之间,超出这个范围就不是直线关系。例如:用 96孔板培养 SMMC-7721肝癌 做 MTT 测细胞活力 , 应该加 200ul 1640, 20ulMTT , 150ul DMSO 。加 DMSO 之前要尽量去掉培养液,便于 D MSO 溶解甲臜颗粒进行比色测定。一般每孔 4000个细胞为宜,既细胞浓度在 20000个 /ml, MTT 加 20ul ,作 用四小时后洗掉上清液,注意不要将甲瓉洗掉,然后每孔加 150ul DMSO ,在脱色摇床上振荡 10分钟,然后测 吸光值。

贴壁细胞:

MTT

黄色的噻唑兰,简称 MTT ,可透过细胞膜进入细胞内,活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性 MTT 还原为难 溶于水的蓝紫色的针状 For mazan 结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜(DMSO )溶解,用酶联免疫检 测仪在 490nm 波长处测定其光吸收值,可间接反映细胞数量。

二、实验步骤(实用于贴壁细胞)

1)收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,分于 96孔板,每孔 180μl, 3000-10000个 /孔。

2)置 37℃、 5%CO2温箱培养使细胞贴壁,培养 6-24小时。

3)加入待筛样品 20μl,继续培养 44小时。

4)小心吸去上清,加入 80μl新鲜 RPMI 1640培养液,再加入 20 ul MTT 溶液(5 mg/ml,即 0.5%MTT), 继续培养 4 h 。

6)然后吸掉上清,每孔加入 150 ul 二甲基亚砜,置摇床上低速振荡 10 min ,使结晶物充分溶解。在酶联免疫 检测仪 490 nm 处测量各孔的吸光值。

7) 同时设置调零孔(培养基、 MTT 、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、 MT T 、二甲基亚砜),每组设定 3复孔。

8) 计算抑制率=[(对照 -空白 )-(给药 -空白 )]/(对照 -空白 )X100%.

但凡做过细胞培养的人,没有不知道 MTT 法的。这篇文章仅为入门者扫盲之用,高手请绕道:)

MTT 原理

MTT 全称为 3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide ,是一种黄颜色的染料。活细胞 线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原 MTT ,同时在细胞色素 C 的作用下,生成蓝色(或蓝紫色)不溶于水的甲 臜(For mazan ),甲臜的多少可以用酶标仪在 570nm 处进行测定。在通常情况下,甲臜生成量与活细胞数成正 比,因此可根据光密度 OD 值推测出活细胞的数目。由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶,因此加入 MTT 不会有反 应。 MTT 溶液的配制方法通常,此法中的 MTT 浓度为 5mg/ml。因此,可以称取 MTT 0.5克,溶于 100 ml 的 磷酸缓冲液(PBS )或无酚红的培养基中,用 0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放 4℃ 避光保存即可。在 配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。需要注意的是, MTT 法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但 不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性, MTT 吸光度最好在 0-0.7 范围 内。

MTT 原理

MTT 全称为 3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide , 汉语化学名为 3-(4, 5-二甲基噻唑 -2)-2, 5-二苯基 四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。

MTT 比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒 体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒 (Formazan )并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO )能溶解 细胞中的甲瓒, 用酶联免疫检测仪在 490nm 波长处测定其光吸收值, 可间接反映 活细胞数量。在一定细胞数范围内, MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。该方法 已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、 大规模的抗肿瘤药物筛选、 细胞毒性 试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

缺点:由于 MTT 经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。 这不仅使工作量增加, 也会对实验结果的准确性产生影响, 而且溶解甲的有机溶 剂对实验者也有损害。

MTT 溶液的配制方法

通常, 此法中的 MTT 浓度为 5mg/ml。 因此, 可以称取 MTT 0.5克, 溶于 100 ml 的磷酸缓冲液(PBS )或无酚红的培养基中,用 0.22μm 滤膜过滤以除去溶液 里的细菌,放 4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸 包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好。 需要注意的是, MTT 法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细 胞绝对数。 在用酶标仪检测结果的时候, 为了保证实验结果的线性, MTT 吸光度 最好在 0-0.7 范围内。

MTT 一般最好现用现配,过滤后 4ºC避光保存两周内有效,或配制成 5mg/ml保存在 -20度长期保存, 避免反复冻融, 最好小剂量分装, 用避光袋或是 黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把 MTT 粉分装在 EP 管里,用的时候 现配,直接往培养板中加,没必要一下子配那么多 , 尤其当 MTT 变为灰绿色时就 绝对不能再用了。

MTT 有致癌性,用的时候小心 , 有条件最好带那种透明的簿膜手套 . 配成的 MTT 需要无菌, MTT 对菌很敏感; 往 96孔板加时不避光也没有关系, 毕竟时间较 短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉 .

配制 MTT 时用 PBS (ph=7.4) 溶解。 PBS 配方:Nacl 8g + Kcl 0.2g + Na2HPO 4 1.44g + KH2PO 4 0.24g调 pH 7.4,定容 1L 。

普通 MTT 法实验步骤:

1:接种细胞:用含 10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔

1000-10000个细

胞接种到 96孔板,每孔体积 200ul.

2: 培养细胞:同一般培养条件,培养 3-5天(可根据试验目的和要求决定培养 时间)。

3:呈色:培养 3-5天后,每孔加 MTT 溶液(5mg/ml用 PBS 配制, pH=7.4)20ul.继续孵育 4 h,

终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内 培养上清液。

每孔加 150ul DMSO,振荡 10min ,使结晶物充分融解。

4:比色:选择 490nm 波长, 在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值, 记录结果, 以时间为

横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

药物 MTT 法实验步骤

贴壁细胞:

1: 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入 100ul, 铺板使待测细胞调密 度 1000-

10000 孔,(边缘孔用无菌 PBS 填充)。

2: 5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板) , 加入浓度梯度的药 物 , 原则上,

细胞贴壁后即可加药, 或两小时, 或半天时间, 但我们常在前一天下午铺板, 次日上午

加药 . 一般 5-7个梯度 , 每孔 100ul, 设 3-5个复孔 . 建议设 5个,否则难以反 应真实情况

3: 5%CO2,37℃孵育 16-48小时,倒置显微镜下观察。

4: 每孔加入 20ulMTT 溶液 (5mg/ml, 即 0.5%MTT) , 继续培养 4h 。 若药物与 MTT 能够反应,

可先离心后弃去培养液,小心用 PBS 冲 2-3遍后,再加入含 MTT 的培养液。 5: 终止培养,小心吸去孔内培养液。

6: 每孔加入 150ul 二甲基亚砜,置摇床上低速振荡 10min ,使结晶物充分溶解。 在酶联免

疫检测仪 OD490nm 处测量各孔的吸光值。

7: 同时设置调零孔(培养基、 MTT 、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的 药物溶解介质、培养液、 MTT 、二甲基亚砜)。

悬浮细胞:

1: 收集对数期细胞, 调节细胞悬液浓度 1×106/ml, 按次序将①补足的 1640(无 血清)培

养基 40ul ;②加 Actinomycin D(有毒性) 10ul 用培养液稀释 (储存液 100μg/ml,需预试寻找最佳稀释度, 1:10-1:20);③需检测物 10ul ;④细胞 悬液 50ul (即 5×104cell/孔),共 100ul 加入到 96孔板(边缘孔用无菌水 填充)。每板设对照(加 100μl 1640)

2: 置 37℃, 5%CO2孵育 16-48小时,倒置显微镜下观察。

3: 每孔加入 10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即 0.5%MTT),继续培养 4 h。(悬浮 细胞推荐使用

WST-1,培养 4 h后可跳过步骤 4),直接酶联免疫检测仪 OD570nm (630nm 校准)测量各孔的吸光值)

4、离心(1000转 x10min ),小心吸掉上清,每孔加入 100 ul二甲基亚砜,置 摇床上低速振荡 10 min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪 OD570nm (630nm 校准)测量各孔的吸光值。

5、同时设置调零孔(培养基、 MTT 、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的 药物溶解介质、培养液、 MTT 、二甲基亚砜),每组设定 3复孔。

注意事项:

(1) 选择适当得细胞接种浓度。

(2) 避免血清干扰:一般选小于 10%的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后 尽量吸尽孔

内残余培养液。

(3) 设空白对照:与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。 其他试验步骤保 持一致,

最后比色以空白调零。

(4) MTT实验吸光度最后要在 0-0.7之间,超出这个范围就不是直线关系。

(5) 用 96孔板培养细胞做 MTT 测细胞活力 , 应该加多少 1640培养基 , 多少 MTT 和 DMSO 合适

根据书上说的加 200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO 加 DMSO 之前要尽量去掉培 养液,便于

DMSO 溶解甲臜颗粒进行比色测定

(6) 一般每孔 4000个细胞为宜, 既细胞浓度在 20000个 /ml, MTT 加 20ul , 作用四小时后洗 掉上清液,注意不要将甲瓉洗掉,然后每孔加 150ul DMSO,在脱色摇床上振荡 10分钟, 然后测吸光值。

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