范文一:电镜处理
按以下步骤制备扫描电镜样品 :
→ 将菌液以 3000r/min转速离心 10min 后, 弃上清液加 2.5%戊二醛固 定 4h
→ 磷酸缓冲液洗涤 3次
→ 乙醇梯度脱水(分别为 30%、 50%、 70%、 90%乙醇各 1 次, 100%乙醇 2次, 15min/次)
→
置换乙醇 2次(20min/次) ,每一步完成后经 8000r/min 离心 5min 。 → 将样品分别在 20℃和 80℃冷冻 12h , 于冷冻干燥仪中干燥 12h , 备 用。
磷酸缓冲液 PBS (1/15 mol/L, pH=7.2; )
配方:Na 2HPO 4*12H2O 取 23.876g+KH2PO 4取 9.078g ,分别溶于 1L 水 中,然后将二者按照 7:3的体积比混合(V:V) ,
注意以下问题:① 戊二醛固定时间; ② 洗涤液不能用水,必须用磷 酸缓冲液 PBS ;
③ 戊二醛应该用以上的 PBS 来配置;
④ 酒精梯度脱水,顾名思义就是要把水自由水除去,但是如果不按 梯度,突然用 100%来脱水是不行的,因为浓度太高,细胞形态就严 重变形;
⑤ 在冷冻干燥前,必须把脱去自由水的样品按照从 -20→ -80的梯度 冷冻,目的把结合水固定住,梯度原理与 ④ 相同;
范文二:如何看电镜照片
小知识
如何看电镜照片及其它
电镜照片具有直观、通俗的特点,一般大家都能看明白。但从电镜专业的角度来说,多了解一些电镜成像的基础知识,对于更好地从电镜照片中得到更多的信息是非常有好处的。图1是一张电镜照片,在图中标出了亮、暗、黑不同的部位,并对形成亮、暗、黑的原因进行了解释。
上面电镜照片是由亮(白) 、暗(灰) 、黑几种不同色素集合而成,对于正常的二次电子图象来说:
(1)亮是代表样品高凸部位、面向检侧器的部位、具有高原子序数元素的部位,导电性能好的部位。
(2)暗则反之。
(3)不同程度的亮暗,即为不同的差异,那些孔洞、缝隙、底下部位呈现黑色。
由于样品的电磁性能、荧光性能,边缘和尖端效应造成的亮度差异,了解、综合这些样品信息,然后才能获得有关该样品形貌的正确断论,从中得到更多的信息。
在区分图象上,还应该注意,对于样品有透明膜的表面或透光外壳等情况,在光学显微镜下可以无妨碍地看清下面或内部的细节形态,虽然有时常常难以分清该细节是在外表还是在内部。但在扫描电镜中情况就不一样,由于电子显微镜只能“看到”5-10nm 厚的深度,所以它只反映外表的形态,外表既使覆有很薄的透光层,电镜也是看不到下面细节的。
附:扫描电镜的优点及与光学和透射电镜的比较
扫描电镜的优点很多,其中最重要的一点是景深特别大。同样的放大倍数,扫描电镜的景深一般是光学显微镜的100倍,是透射电镜的1000倍左右。景深大,拍摄出来的照片立体感强,具有更多细节。表1列出了扫描电镜、光学显微镜和透射电镜的主要不同点。
表1 扫描电子显微镜与光学和透射电镜比较表
项目
光学显微镜(OM)
扫描电镜(SEM)
0.5nm 10nm 100nm 10~150 000倍 长:
10mm (约10倍时) 1mm (约100倍时) 10um (约1000倍时) 1um (约10000倍时) 10mm (10倍时) 1mm (100倍时) 0.1mm (1 000倍时) 10um (1 0 000倍时) 1um (1 000 000倍时)
透射电镜(TEM)
0.1~0.2nm 0.5~0.7nm 5~7nm 100~800 000倍 短:
接近扫描电镜,但实际上为样品厚度所限制,一般小于100nm
2mm (100倍时) 其它同扫描电镜
1、分辨本领: 最高 0.1um (紫外光显微镜)
0.2 um 熟练操作
5 um 容易达到 2、放大倍数
1~2 000倍
短:
0.1mm (约10倍时) 1um (约100倍时)
3、景深
4、视场
100mm (1倍时) 10mm (10倍时) 1mm (100倍时) 0.1mm (1000倍时)
说明:现在某些光学显微镜,经过光学系统特别是数字化处理后,据报到,其景深可以到达SEM 的效果,但实际是否完全一样,尚待验证。
范文三:电镜前处理方法
在这里小小总结了一下扫面电镜的前处理质量的普通方法,供大家参考。
一般从样品的外观上我们可以分为固体样品和粉末样品两种。
① 固体样品的固定
固定用的导电介质分大概按分:
高倍观察(>5万倍) 低倍观察(<>
液体导电胶 导电胶带
固定方法如图所示
②粉末样品的固定
可以直接固定在导电胶带或者液体导电胶上,见图
注意点:如果是导电胶带, 揭下来的剥离纸一定要倒着放, 撒完样品后在用剥离纸干净的面压一下, 固 定的才回牢
如果是液体导电胶, 最好是用水溶性的, 不容易和样品发生反应, 撒样品的时间点控制在导电胶快 干的时候撒,才能使样品达到半浸没状态。时候撒,才能使样品达到半浸没状态。
也可以用分散法,见图
③ 截面样品制作
如果是硅片或者是玻璃,需要用到玻璃刀,见图
注意点:用玻璃刀划的时候要让开观察的面,也就是说可以上面和下面各划一下,然后再掰就可以了 根据不同样品材质,有的时候是正面掰好,有的时候是从背面掰好。
对于薄膜类的样品,可以用液氮粹断,如下图
范文四:电镜样品处理
样品处理 步骤:样品包埋
1、 将组织切成
的小快儿,立即投入 3%的戊二醛固定液
中,抽气直到组织块完全进入固定液, 4摄氏度固定过夜。 2、 经 PBS 充分洗涤(离心管中洗 10次,每次 15分钟) ,用 0.1%的锇酸后固定, 25摄氏度, 2小时
3、 换离心管用 0.1M PBS充分洗涤 (洗 10次, 每次 15min ) , 乙醇 系列脱水,每次 10min ;纯丙酮过度, 3次,每次 10min 。
4、 浸透, 0、 5ml Spurr树脂 +5滴丙酮
5、 包埋:70摄氏度聚合
6、 制超薄切片
7、 切片捞在 100目 0.3%Formvar膜覆盖的镍网上。
染色
用 2%的醋酸铀 25摄氏度染色 10min ,用重蒸水洗 3次,每次 20min 再用柠檬酸铅 25摄氏度染色 5min ,用重蒸水洗三次,每次 20min 。 电镜观察
范文五:SEM电镜预处理
采用荷兰 FEI 公司的扫描电镜(型号 FEI Quanta 200,带有 Oxford Inca 300 EDS 系统)观察纳米材料与活性污泥之间的相互作用,具体实验步骤如下:
(1)取 50 mL活性污泥混合液, 4000 rpm离心 5 min。
(2)用 0.1 M PBS缓冲液(pH 7.4)漂洗 3次,
(3)加入含 2.5%戊二醛的 0.1 M PBS缓冲液(pH 7.4), 4 o C 固定 4 h。
(4)用 0.1 M PBS 缓冲液(pH 7.4)漂洗 2次后,用 50%、 70%、 80%、 90%和 100%的酒精对样品进行梯度脱水,每个梯度 15 min。
(5)自然干燥后,在 20 kV下通过 FEI Quanta 200观察样品。