孤寂de心
范文一：茶多酚DPPH自由基清除能力
附录：
表一 茶多酚含量的测定
1
没食子酸标准溶液
（mL）0.0没食子酸标准溶液浓
度（μg/mL）0.00样品（mL）-蒸馏水（mL）
2.0福林分溶液（mL）0.5Na2CO3溶液（mL）3.0
定容（ml)10.0A（λ=517nm）0.000
20.18.86
-1.90.53.010.00.065
30.2
40.4
50.6
60.8
71.0
8-9--1.01.00.53.010.00.550
17.7235.4453.1670.8888.60------1.01.81.61.41.21.01.00.50.50.50.50.50.53.03.03.03.03.03.010.010.010.010.010.010.00.1810.3030.4400.5210.6510.555
范文二：雅安藏茶对氧自由基清除能力评价
V01(27 No(2 第27卷第2期四川农业大学学报of Sichuan 2009年6月 Journal Jun(2009 Agricultural University
雅安藏茶对氧自由基清除能力评价
郭金龙1，王春梅，杜 晓h2
625014)(1(四川农业大学园艺学院; 2(四川省茶业科学与工程重点实验室，四川雅安
摘要:对雅安藏茶的水浸出物清除超氧阴离子自由基(Oz7)和羟自由基(?OH)的能力进行评价。结果表明，当反
mg,L和40(5 mg,L时，对超氧阴离子自由基(o:7)和羟自由基(? 应体系中雅安藏茶水浸出物浓度分别为4(8
0H)的清除率达最大值，分别为(90(07士0(01),和(88(70-4-0(02),。以半抑制浓度(IC。。)作评价指标，试样清除超氧阴离子自由基的能力大小顺序为:藏茶>藏茶原料>绿茶;试样清除羟自由基能力大小顺序为:绿茶>藏茶> 藏茶原科;并且都高于Vc、VE、BHA、BHT等常用的抗氧化剂对这两种氧自由基的清除能力。雅安藏茶清除上述 两种氧自由基效果十分显著。呈现了明显的量效关系，说明雅安藏茶也具有相当的抗氧化功能。 关键词:水浸出物; 超氧阴离子自由基;羟自由基;雅安藏茶文献标识码:A 中图分类号:s571(1 文章编号:1000一2650(2009)02—0189--04 Free RadicalEffects of Yaan Tibet Tea's on Scavening Appraisal Oxygen
Guo Xia01’2Jin—lon91，WANG Chun—rnei，DU
and Horticulture。Sichuan of University; (1(College Forestry Agricultural
Province of Tea Science and 2(Sichuan 625014，Sichuan，China))Key Laboratory Engineering，Yaan effects article of extraction the the ultra Abstract:This studied Yaan Tibet tea's on scavening oxy-
anion free the free the chlorination radical(Oz 7)、and radical(?0H)(By nitryl hydroxy two and the (NBT)light gen reducing process neighbour nitrogen Philippines—Fe2+oxo-process(it tested the rate of the to the two kinds of free radical(The results reagent oxygen scavening
showed that when the Yaan Tibet tea’S extraction was 4(8 and 40(5 mg,L mg,L respec— density rate to in the 7)and the free radical(?OH) tively reacting system，the scavening the(02 hydroxy reached the as the e— maximum，(90(07-4-0(01),and(88(70?0(02),respectively，with IQo
indicator。the order of the to scaven the ultra anion free radical valuating regent’S ability oxygen was as follows:the Tibet tea>Tibet tea raw material>the tea;the order of the green regent'sabi free radical to scaven tea raw hydroxy was:Green tea>Tibet material(A1l tea>Tibet lity
Tibet these abilities than these of had remarkable are tea a- Vc，VE，BHA，BHT(Yaan xtronger to scaven the two kinds of free radicals，and it had an obvious relation be— oxygen presented bility
tween and effect(So it indicated that Yaan Tibet tea also had certain oxidation resistance quantity
function(
anion free free tibet teawords:extraction;ultra radical;Yaan Key radical;hydroxy oxygen 近年来，研究已证实氧自由基和人类常见的多 自由基的能力是筛选和评价抗氧化剂常用的方法。 种疾
病都有关系叫。超氧阴离子自由基(0。7)和羟 自由基已有研究表明，天然抗氧化剂具有预防自由基所诱 (?0H)是两种典型的氧自由基，测定清除氧 导的各类疾病与保护机体的作用嘲，从而引起了人 收稿日期:2009—03—09
基金项目:l匹I Jll农业大学青年创新基金项目(00330300);雅安藏茶研究中心、专家大院项目。
责任作者:杜晓(E-mail:duxiao@vip(163(tom)
万方数据
四川I农业大学学报 第27卷 们对抗氧化剂清除自由基研究的关注。目前，对天 中核黄素浓度为0(003 mmol,L，甲硫氨酸浓度为
0(01 rnmol,L，NBT浓度为0(1 mmol,L，PH一7(6 然食品、饮料抗氧化活性及能力评价成为研究的热 点，一方面研究筛选天然抗氧化剂;另一方面，在于 的PBS溶液(磷酸盐缓冲溶液)0(05 mmol,L。将 揭示天然产品的保健价值。茶叶是一种保健饮料， 试样置于光照培养箱中，在25?条件下，9000 Ix光
照40 rain，以不光照的为对照，在560 nm处比色测 因其含有大量的多酚类物质，尤其是含有对氧自由
定其吸光值A，并按下式计算其清除率: 基清除能力极强的茶多酚类，茶叶的清除自由基、抗
氧化等保健功能备受关注。目前对绿茶、红茶主要 成分清除自由清除率(,)一垒塑#兰竖×100 ，1对照 但对其他茶类，尤其是作基的研究已经十分广泛而深入口“]，1(2(3 清除羟自由基(?OH)的测定 为黑茶的代表茶类，雅安藏茶清除自由基依据Fenton反应原理H]，采用邻二氮菲一 抗氧化的研究资料很少，认识也不够 Fe2+氧化法检测[7]。反应总体积为8 mL，其中邻二氮菲 深入。雅安藏茶是藏胞的日常生活必需品，饮茶历 浓度为0(75 mmol,L，FeSo。的浓度为0(75 mmol, 史上千年，传统看法和饮茶体验认为，它具有减肥、 7(4的PBS溶液(磷酸盐缓冲溶L，pH 降脂效果，但研究工作仅处于起步阶段。本文将从
液)150mmol,L，H。02的浓度为0(2,。不加H。()。和清除氧自由基角度探讨其功能价值。
供试液的为空白，不加H。0:的为对照。将试样置本文分别用光照核黄素体系产生0z 7，用Fen- rain，于536 nm处37?恒温水浴振荡，反应60 于 ton反应体系产生?OH，用比色法测定了雅安藏茶、 测定其吸光值A，并按下式计算其清除率:藏茶原料茶及天然抗氧化剂Vc、V。和人工合成抗 比色
氧化剂BHA、BHT对氧自由基的清除作用，评价雅 清除率(,):垡生塑二垒塑立二塑堕塑二型×100,4。-鼍术碾。-- 。A-芏_顼-安藏茶的抗氧化能力，研究雅安藏茶的抗氧化作用， 注:A宁未损为不加H202，而且不加试样;A药未 损 为探索雅安藏茶的保健功能提供实验依据。为不加H。0。，但是加入试样;A空损为加H:0:，但是 l材料与方法 不加试样;A药损为加H。0。，而且加试样。
1(2(4 JC。。值的定义1(1材 料Jc50值(50,Inhibiting concentration)为清除1(1(1 材料 率等于50,时，反应体系中所加入的试剂浓度。称 雅安藏茶成品茶及原料茶由雅安市友谊茶业有为半抑制浓度。一般IC;。的数值越小，说明该试样 限公司提供，原料于2008年秋采收于雅安茶区，一的抑制能力越强。 芽四、五叶原料;对照茶样绿茶由四川省高县林湖茶
厂提供，生产原料采收于宜宾高县，春茶一芽二、三 2结果与分析
叶原料。 2(1 雅安藏茶清除超氧阴离子自由基(O:7)的效1(1(2主要试剂 果氯化硝基四氮唑蓝(NBT)，邻二氮菲，2，6一二 超氧阴离子自由基(O。7)与多种疾病有密切联 叔丁基对甲酚(BHT)，叔丁基羟基茴香醚(BHA)， 系，它还是第一氧自由基，0。7可以通过一系列反应 抗坏血酸等均为国产分析纯。 生成其他氧自由基【8]。在反应体系中，加入不同浓 1(1(3主要仪器设备
度的雅安藏茶水浸出物溶液均能够清除该体系产生 光照培养箱，富华SHA—B恒温水浴振荡器， 的超氧阴离子(Oz 7)，清除率随试样浓度增加而V一1100型可见分光光度计。 提
高，呈明显的剂量依赖效应，由图1所示，当反应1(2方法
体
系中所加入的雅安藏茶水的浸出物浓度为4(8 mg, 1(2(1 茶样的制备方法
L时，雅安藏茶水浸出物对()z 7自由基清除率最大 准确称取磨碎茶样1(00 g，加100 mL沸蒸馏 达到(90(07?0(01),，而此时对照试样，如藏茶原 水，在100?恒温水浴锅内浸提45 rain，冷却，过
料、绿茶、Vc、BHT、BHA的清除率分别为:(77(87滤，静置30 rain，配成梯度供试溶液备用。 4-0(02),、(77(18?0(06),、(20(49 4-0(06),、1(2(2 清除超氧阴离子自由基(O:7)的测定 (12(23?0(02),、(11(66?0(02),，VE清除作用 万方数据采用光照核黄素产生0。7，NBT(氯化硝基四
没有被检出。以JC。。评价试样对清除超氧阴离子 氮唑蓝)光还原法检测嘲。反应总体积为5 mL，其
第2期 郭金龙(等):雅安藏茶对氧自由基清除能力评 价 水的浸出物浓度为40(5 mg,L时，雅安藏茶水浸出 自由基的能力，其清除能力大小顺序为:藏茶>藏茶
物对?OH清除率最大可达到(88(7士0(02),，而 原料>绿茶，并远高于Vc、BHT、BHA。试验的结
明显此时对照试样，如藏茶原料、绿茶、V。、BHT、BHA 果表明，雅安藏茶水浸出物对超氧阴离子自由基有 4-4-0(03),、(82(49 的清除作用。 的清除率分别为:(79(0
0(02),、(13(09?0(02),、(16(76-4-0(02),、
+GiPP(n lea (12(224-0(02),，V。(清除作用没有被检出。以-o-Yaan Tibel tea +Tibet tea raw material JC。。评价试样对清除超氧阴离子自由基的能力，其100 清除能力大小顺序为:绿茶>藏茶>藏茶原料，远高，、80 零 于V。、BHT、BHA。试验的结果表明，雅安藏茶对 60 静警 羟自由基(?OH)有明显的清除作用。 篮‘多 40 孵? 2(3雅安藏茶对氧自由基清除能力评价o 20为了进一步证实实验效果，将雅安藏茶与藏茶 O 原料、vc、V。、BHA、BHT氧自由基的能力进行比O 2 4 6 8 10 12 较;同时，以普通绿茶作为对照试样，比较其与绿茶 浓度清除自由基能力差异。为了更好地评价雅安藏茶水 Concentration(rag‘L。 1)浸出物清除氧自由基能力的大小，对各试样清除两 图l清除超氧自由基效果 l free 种氧自由基的JC。。值进行了计算，结果如表1所示。 The ultra eliminating oxygen Figure radical effect of test the specimen由表l可知，雅安藏茶的IC。。值明显低于绝大多数
对照试样，依据JC。。值越小，清除自由基能力越强，2(2雅安藏茶清除羟自由基(?OH)的效果 雅安藏茶对于O:7和?0H这两种氧自由基的清
除羟自由基(?OH)是目前已知的最强的氧化剂， 能力明显强于绝大多数对照样。 它反应能力强，几乎可以和所有细胞成分发生反应，表1各试样清除氧自由基效果的比对机体的危害极大[8]。由Fenton反应产生羟自由
较 Table 1 Eliminate free radical effectoxygen 基(?OH)，羟自由基(?OH)使邻二氮菲-Fe2+氧化 of various test comparison specimens 为邻二氮菲一Fe3+，其反应结果用比色法检测。在反mg?L1 应体系中加入不同浓度的雅安藏茶水浸出物溶液能 含氧自由基，(?j。够清除该体系产生的羟自由基(?OH)，其清除率随 试样 竺兰!墅!竺!型型竖! Samples超氧阴离子自由基(Q:)羟自由基(?OH) 试样浓度增加而提高，呈明显地剂量依赖效radicalradical Free Hydroxyl 应。由图2所示，当反应体系中所加入的雅安藏 茶 +CiPPrl tea -(?1-Yaan Tikt tea+Tibet tea raw material loo 一80零 60舱竽 篮‘多 40 磐? 该试验结果表明，雅安藏茶水浸出物对超氧阴 ? 一、 离子自由基清除能力大小顺序为:雅安藏茶>藏茶 0原料>绿茶>BHT>Vc>BHA，雅安藏茶的清除40 60 80 100 120 140 160 180 O 20
超氧阴离子效果是藏茶原料的1-4倍、绿茶的2 倍、浓度 BHT的5(6倍、Vc的6(7倍、BHA的23(2倍。而 Concentration(mg?L。 )
对于清除羟自由基，藏茶和绿茶清除效果相当接近 图2清除羟自由基效果
2 The effect of the test Figure specimen (F=0(88 雅安藏茶>藏茶原料>VE>BHA>BHT，雅安藏 万方数据 192四JIl农业大学学报 第27卷 茶的清除羟自由基效果是藏茶原料的1(4倍、绿茶 BHT进行对比实验，结果表明，雅安藏茶对氧自由 的0(74倍、VE的2(8倍、BHA的4(09倍、BHT的 基的清除作用显著强于Vc、VE、BHA和 BHT。根 4(76倍。 据JC。。评价它们的清除自由基能力强弱，其中对超 氧阴离子自由基的清除能力大小顺序为:雅安藏茶 论3讨>BHT>V。>BHA;对羟自由基的清除能力大小 3(1雅安藏茶与绿茶清除氧自由基效果比较 顺序为:雅安藏茶>VE>BHA>BHT;雅安藏茶的 目前，普遍认为绿茶清除自由基、抗氧化能力较 抗氧化能力明显强于常用的天然人工合成抗氧化 其他 剂。本论文的研究结果证实雅安藏茶具有一定的抗 茶类更强，原因是绿茶中还原态的多酚类成分 氧化作用，这可能是其重要的保健价值和功能之一。保留更高凹]。本实验研究表明，雅安藏茶清除O:7 的能力显著强于绿茶，在4(8 mg,L时，两者的最大参考文献:清除率分别为(90(07?0(01),和(77(87士 [1]赵保路(氧自由基和天然抗氧化剂[M](北京;科学技术出 0(02),;雅安藏茶清除?OH的能力与绿茶相当接 版社，1996( 近，在相同的40(5 mg,L浓度条件下，其最大清除 x Z B，et a1(The effects of meso-2，3一 [2]Zhang J(Wang F，Lu acid and on acutedimercaptosuccinic oligomeric procyanidins 率分别为(88(70?0(02),和(82(49?0(02),。这 lead in rat Radic Biol neurotoxicity hippocampus[J](Free 表明，在雅安藏茶加工过程中，渥堆会使多酚类物质 Med(2004，37(7):1037—1050(S S of irradiation on[3]Lee c，Jeong M。Lee J M(et a1(Effect 会发生部分氧化、聚合。尽管还原态的多酚类含量 total and catechins contents radical ac— and scavenging phenol 有所下降，但雅安藏茶的水浸出物仍然表现出较强of tea leaf Bio—and stem Food tivity extract[J](J green chem，2008，32(6):782—794( 的清除氧自由基作用，其原因有待继续研究。 13(The radi— [4]Muzolf M，Gliszczynska—Swigo A，Tyrakowska 3(2 雅安藏茶与藏茶原料清除氧自由基效果比较cal of Journal scavenging capacity green tea[J](Polish of Natural Sciences Supplement，2007，16(4):63—69( 雅安藏茶成品茶清除氧自由基的能力明显高于 [5]贾之慎，唐盂成。朱祥瑞(桑树黄酮类化合物清除超氧离子 藏茶原料。其中，成品藏茶和原料对超氧阴离子自02 i自由基的研究[J](浙江农业大学学报，1996，22(5): 519-523( 由基的最大清除率分别为(90(07?0(01),和 1-63徐向荣，王文华。李华斌(比色法测定Fenton反应产生的羟(77(87士0(02),;对羟自由基的最大清除率分别为 自由基及其应用口](生物化学与生物物理进展，1996，26(1):67-69( (88(70?0(02),和(82(49?0(02),。这表明，在 [7]金鸣，蔡亚欣，李金荣，等(邻二氮菲一Fe2+氧化法检测加工过程中某些内含成分发生的变化，可能会提高 H z02,Fe产生的羟自由基[J3(生物物理与生物化学研究进展，1996，23(6):553—555( 成品藏茶的抗氧化能力。在雅安藏茶加工过程中， R [8]Herningway W，Karchesy and signi—canceJ(Chemistry 一方面多酚类物质将发生氧化缩合反应，同时，另一condensed tannins rM](New York:Plenum Press，1989( 0f [93杜晓，王孝仕，何春雷(茶蒸青叶中儿茶素的制备及其对 方面也伴随着复杂的水解反应[1 ，可能某些成分的 氧自由基的清除作用[J](西南农业学报，2005，18(4):444— 水解产物具有较强的清除氧自由基的能力，有文献447( [10]赵玉芬，杨贤强(茶多酚保护生物大分子的自由基机理l-报道，雅安藏茶成品茶中没食子酸含量会增加，是否 J']( 浙江农业大学学报，1995，21(4):361—365( 与其有关有待于进一步研究。 3(3 雅安藏茶与常用抗氧化剂V。、V。、BHA 和 BHT清除氧自由基效果比较将雅安藏茶与常用抗氧化剂Vc、V。、BHA和 (本文审稿:何春雷;责任编辑:巩艳红;英文编辑:李 清源) 万方数据 第四届全国大学生创新年会 ,,】】年,,月 ,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,‘,,,,,,,,,, ,,,,, ,;,(,,, , ,,,的羟自由基清除能力及其作用机制研究 贾向姣雷永兴陈坤 (郑州大学，生物工程学院，河南省郑州市)摘要:,,,是一种新发现的大肠杆菌分泌的五肽(,,,,,—,,,—,,,,,,,,,,,一,,)。它作为一个群体感应信号分子参与,,,,,(毒素一抗毒素系统)介导的,,,途径，而,,,,,这一系统能够被多种外界压力条件胁迫激活。我们通过对,,,,、,,、,,’的研究首次发现,,,的自由基(尤其是羟自由基)清除能力。同时结合,,,类似物的研究以及体内;,,实验进一步提示,,,的生理意义:,,,既参与,,,,,介导的大部分细菌的程序性死亡过程又通过清除自由基途径保护小部分细菌的存活，而,,,的这种功能在很大程度上依赖于其色氨酸残基。,,,这种性质的发现对于理解压力胁迫下的群体感应过程提供了新的思路。关键词:信号分子;自由基;抗氧化;程序性死亡;群体感应 ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,;,,,,;,,,,,,,, ,;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,;,,,,,,, ,,,,, ,,;,,, ,, ,,;,,,,,,,, ;,, , ,,, ,，,,, ,，,, ,,, ,,,, ,刚, ,,,, ,,, ,;,,,, ,,，,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,，,,,,, ,,,,,,;,),,,,,,;, ,,, ,,,,,;,,,,,,, ,,,,, ,,;,,,(,,,),, , ,,,,, ,,,;,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,？,,,;, ,, ,,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,—,,(,,,,,)(，, ;,,,, ,;, ,, ,？,,,,,,,,,,,,, ,,,,;,,, ,,, ,, ,,,;,,,,, ,, ,,, ,,,,,—,,,,,,,, ;,,, ,,,,, ,, ,,;,,,,;,,,;,,,(，, ,,, ,,,,,, ,,,,,。,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,;,,—,;,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,, ,,,(,,, ;,,,, ,;,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,;,,, ,, ,,,,, ,,, ,,,,,;, ,,,,,,,，,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,;,,,(,,, ,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,, ,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,, ,,;,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,;,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ;,,, ,,,,, ,,,;,,,,, ,,;,,,,;,,, ;,,,(,,, ,,,,,:,,,,,;,,,,,,, ,,,,, ,,;,,,;,,,, ,,,,;,, ,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,, ;,,, ,,,,,;,,,,,,,,,,,,,, 程序性死亡(,,,)系统不仅存在于真核多细胞生物体内，在细菌体内也同时存在。在大肠杆菌体内，研究最深入的一个毒素一抗毒素系统一,,,,,系统能够介导这一过程(它由稳定的毒素,,,,和能中和其毒性的不稳定的抗毒素,,,,组成。,,,,介导的,;,过程能够被多种压力所激活，包括抗生素、氨基酸饥饿等,(在这个过程中，,,,,能诱导,,,,特异性剪切 从而致使大部分细菌死亡:,( ,,, 第四届全国大学生创新年会 ,,,,年,,月 ,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,’,,,,,,,时,,,,, ,;,(,,, , ,,,,年，,,,,,,,,(,,,等人研究发现,,,参与了,,,,,介导的,,，)过程并被命名为胞外致死因子,。它是首次被报道的参与大肠杆菌群体感应的多肽类信号分子,(随后，研究发现抑制转录或者翻译的抗生素能通过,,,依赖陛途径来完成,,,,介导的,,,过程，并且,,,可能参与该过程,(,,,,年，,,,,,,,,及其同事提出了杀菌型抗生素的共同作用机制并指出了,,,，尤其是羟基自由基，引起的生物大分子损伤能进一步导致细菌死亡,(因此，,,,是参与大肠杆菌,,,过程的一个非常重要的群体感应信号分子，而且,,,在这一过程中起着非常重要的作用。但是，到目前为止，关于,,,与,,,(尤其是,)之间的关系还不清楚。本研究首次研究了,,,的自由基清除能力(,,,,，,,，,,)、,,,在体内生理作用以及,,,的作用机制。,材料与方法,(,试剂 谷胱甘肽(,,,)，,,,,购自,,,,,,,,,,，其余为分析纯试剂。,(, ,,,,清除实验 ,(,,,,, ,,,,溶于甲醇，其他药物溶于,,,(,,,,，,,,(,)，接着将,,,,甲醇溶液和药物溶液等体积快速混匀，避光孵育,,分钟后，在,,,,,测吸光度并计算清除率〔,,。,,,作为阳性对照。,(,超氧自由基清除实验, 该实验方法参照文献〔,〕，该体系包括:,,,(吩嗪二甲酯硫酸盐，,,, ,)、,,,,(,,, ,)、,,,(氮蓝四唑，,,, ,)和其他各种浓度的药物(溶于,,,)，室温孵育,分钟，在,,,,,测吸光度并计算清除率。维生素,作为阳性对照。,(,羟自由基清除实验 该实验测定,一,一脱氧核糖的降解〔,〕。反应体系包括:脱氧核糖(,(,喇)、,,,,,(,,,,,)、,，,,,,,,一,,,缓冲液(,,州，,,,(,)、,,,,(,,,, ,)、,,,,(,,,,)、维生素,(,,,, ,)和各种浓度的药物，定容,,,。在加入反应体系之前，将,,,,,和,,,,混合均匀，接着将混合溶液在,,,,条件下孵育,,，接着将,,，,, ,(,,,,,(三氯乙酸)和,,, ,(,,,,,加入,(,,,反应混合溶液，混合后在,,,,孵育,,分钟，最后在,,,,,用分光光度计测定,,,,,并计算清除率。,,,作为阳性对照。,(, ,,,对杀菌型抗生素作用的研究 培养大肠杆菌,,,,,，稀释至,, ,,,,,,，同时加入不同的药物和抗生素，并在,,,,培养,小时，离心并用,,,洗涤后加入到培养皿中。,,,,孵育过夜，计算,,,,,,〔,〕。,实验结果,(, ,,,对自由基的清除活性研究 我们研究了,,,对,,,,、超氧自由基和羟自由基的清除能力。图,左图显示，阳性对照,,,在,(,,,,,至,(,,,范围内显示出较强的,,,,自由基清除能力，但是,,,在,(,,,,, 第四届全国大学生创新年会 ,,,,年,,月 ,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,。,,,,,,,毋,,,,, ,;,(,,,, ,(,,,浓度范围内没有作用。图,右图显示，,,,在较低浓度时具有微弱的促氧化能力，浓度增加后，又显示较弱的抗氧化性。并且,,,的清除超氧自由基的能力比阳性对照维生素,要弱(,,,(,,)。图,左图显示，,,,比,,,有更强的羟自由基清除能力(,,,(,,)。在,(,,,,至,(,,,范围内，,,,显示出 剂量依赖效应。因此，我们认为,,,能有特异性地清除羟基自由基。图,右图显示，改变,,,(,,,,,)两侧的氨基酸残基时，对羟基自由基的清除效率基本没有什么变化，但是将中间的色氨酸替换为丙氨酸后，其清除效果明显降低。因此，可以推断色氨酸残基对,,,的羟自由基清除能力至关重要。 ? ;一( ? 。:,;,,, ， ? 如 一乒一 蚕一 ,己 篇《,,,,,,,,(,，蜃 (,弘,,,,,,,, 。 ，,,,,，?暑呈,，,,,,譬蜃 ,(, ,(, ????,寻伯,?,暑 图,(,,,清除,,,,(左图)和超氧(右图)自由基的活性实验结果 ? 柏 ? 一舞一 ? 竹 ，,,,,,,蚤,,，;芎,一,,宝,。, 。 一,。,,已否量,，;,，,罟,,萋,嚣 ?”? 柏?柏仲。 ,(,, ,(,, ,(, ,(, ,,,;,,,,,,,,,(,粕’) 图,(,,,清除羟自由基的活性以及起作用的关键残基的实验结果,(, ,,,的体内活性研究 在图,中，,,,在生理浓度,(,,，,,,,,时，表现出很明显的保护效果(,,,(,,)，从而验证了假设:在抗生素诱导产生羟基自由基的情况下，,,,能保护部分细菌的存活。 蚕, 卷, 芋。 , , ,,,，‘:,,圳,，,, ,,,，,, ，,, ,,, 图,(,,,对氨苄青霉素(,,,)杀菌活性的抑制作用(,,:二联吡啶;,,:硫脲),结论 在大肠杆菌体内，,,,,经过,,,途径的电子传递链被氧化并导致超氧自由基的产生。产生的超氧自由基能与,,—,簇作用通过,,,,,,反应产生羟自由基。羟自由基能损伤脂质、蛋白质、,,,，从而导致细菌死亡。因此，研究,,,与内源自由基(羟自由基、超氧自由基)就 ,,, 帑叩月仝国，学’,创新年台 ,,, ,,,,,,,,,…?, ,,,,,,,’,,;,,,,,,, ,,,,, ,;, ,,, 显得非常有必要。实验结果显示,,,能剂晕依赖性地精除内源自由基，特别是羟自由基并且 能保护重要大分子免受羟自由基的损伤(部分数据未显示)。 ,,,,,系统馓活后，,,,,能诱导,,,,,特异性剪切从而致使大部分细菌死亡。同时仍有小 部分细菌存活,当环境压力缓解时(将增殖为新的群体。实验结果显示,,,在群体感应过程 中有双重功能:起始阶段，,,,作为死亡信号分予柬调节丸部分细菌的死亡;在随后的一个阶 段一只有很少数量的细菌仍生存并此时,,,的晕达到很高，然后其就清除羟自由基保护这一 小部分细菌的继续存活。结合对，’:,,机理的研宄，发现,，),对羟自由基的特异性清除与色氨 酸残萆的存在有根大关系。 总的来说，我们首次研究了印,的自由基清除能力及其生理作用。实验的发现为我们理 解压力胁迫时的群体感应过程提供了新的思路。,展望 我们最近的研咒结果发现了,,,在胞内町能的作用靶点，并且对其作用机制进行了初步探讨(图,)，相差的结果完善之后会在近期得以发表。 凰,(,,,可能的胞内作用靶点与结合口袋的分子对接参考文献, ,,,,,,,,,,, ,,,,，孤,，,,,山,,，,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,, ,？,,,,(,,,,,,,,,;,,,,,？,,’,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,,, ,,,, ,;,,,;, ,,,,:,,,:,,,(,‘,,,,,,,，,,,,,,，,,,,,,;,,,，,,,,,,,, ;，;,,,, ;,?,,,,,,,,, ,,,;,,,;,,,, ,,,,,,,,,,;, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,, ;,,,(,,,,,,,,,,,;, ,:,,,,,,’,,,,,,,，,,,,,,;, ,,,？,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ;,,, ,,,,, ,,，,,,,,,,,;,,:,,,?,。,,,,,,,,,,,,,,,, ,,如，，,,,,,,,,,,,,， ,;,,,,,,, ,,,,,,,,(,,,,;,,,,,, ,,,,,,,,,, ;,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,;;,,,,,,,,,;,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,;, ,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,;,:,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,, ,,,, ,;,,,,,,,,,;,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,，,,,粕,如,,,,;, ,,,, ,,,,;,,,:,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,只,,,,,,，,,,,,,,, ,’,,,,(,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,(,;,,,,,,,, ,;,,,,;,,,;,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ;,,,,,，,,,,,,(,,,,,,,,,,,,, ,,,,;,,:,,,,, 1、 羟自由基清除能力测定法 试剂：1.865 mmol/L邻二氮菲、无水乙醇溶液、0.2 M的pH 7.4磷酸盐缓冲液、1.865 mmol/L的FeSO4·7H2O溶液、0.03% (v/v) 的H2O2、抗坏血酸 取1.0 mL浓度为1.865 mmol/L邻二氮菲的无水乙醇溶液于带塞试管中，分别加入浓度为0.2 M的pH 7.4磷酸盐缓冲液2 mL和1 mL不同浓度的样品，充分混匀后加入1.0 mL浓度为1.865 mmol/L的FeSO4·7H2O溶液，再次混匀后加入1.0 mL 0.03% (v/v) 的H2O2，于37℃恒温水浴，60 min后，在536 nm下分别测量各组混合溶液的吸光度值得AS ，以蒸馏水代替样品作为空白组测吸光度值得Ab，以蒸馏水替代H2O2作为损伤组，测其吸光度值An，以抗坏血酸代替样品作为阳性对照，抗氧化剂的羟自由基清除率按以下公式计算： 羟自由基清除率(%)=[(As-An)/(Ab-An)] × 100。 用清除 DPPH 自由基法评价啤酒抗氧化能力 赵二劳, 范建凤, 张海容 ,山西忻州师范学院化学系, 山西 忻州 034000, 摘 , , , 要:啤酒含有大量的抗氧化物质不仅能防止啤酒老化变质改善啤酒风味稳定性而且对 人体有抗氧化和抗衰老功能, 有益于人体健康。采用清除 DPPH 自由基法评价啤酒外源性抗氧化 能力, 啤酒对 DPPH 自由基的清除率和啤酒与 Vc 对 DPPH 自由基清除能力的比较结果表明, 啤 酒对 DPPH 自由基具有较强的清除能力。( 孙 悟) 关键词: 啤酒; 抗氧化DPPH 自由基; 文献标识码: B 中图分类号: TS262.5; TS261.4 文章编号:1001- 9286(2006)11- 0030- 01 Evaluation of Beer Antioxidative Capacity by DPPH Fr ee Radical Elimination Method ZHAO Er-lao, FAN Jian-feng and ZHANG Hai-rong (Department of Chemistry, Xinzhou Normal College, Xinzhou, Shanxi 034000, China) Abstr act: Beer contains large amount of antioxidative substances, which could not only prevent beer deterioration and im- prove beer flavor stability but also have healthcare functions. Beer antioxidative capacity was evaluated by DPPH free radi- cal elimination method. Compared with beer and Vc, beer had stronger DPPH free radical elimination capacity. Key wor ds: beer; DPPH free radical; antioxidative capacity 啤酒含有大量的抗氧化物质, 不仅能防止啤酒老化 1 材料与方法 变质, 改善啤酒风味稳定性, 而且对人体有抗氧化和抗 1.1 材料与仪器 [1]衰老功能, 有益于人体健康。由于啤酒中抗氧化物质较 啤酒, 市售保质期内的某品牌产品; 二苯代苦味酰 多, 单个抗氧化剂无法代表啤酒的总抗氧化能力, 各种 肼自由基(DPPH?), 日本东京化成工业株式会社; 乙醇, 抗氧化剂对抗氧化作用的总和也不能代表它们在啤酒 分析纯; 实验用水为二次蒸馏水。722 型光栅可见分光 , 所以现在普遍采用对自由基的 体系内的相互协同作用光度计, 上海分析仪器总厂; AB204- N 电子分析天平; [2]。 清除率来表示其总的抗氧化能力梅特勒- 托利多上海有限公司。 二苯代苦味酰肼自由基(DPPH?)是一种稳定的有机 [2]1.2 实验与分析方法 自由基, 在可见光区最大吸收峰为 517 nm, 其乙醇溶液 分别准确量取 0 mL, 0.5 mL, 0.8 mL, 1.2 mL 和 2.5 呈深紫色, 当有自由基清除剂存在时, 由于与其单电子 mL 啤酒加入 5 支 10 mL 比色管中, 各加入浓度为 0.8 , 其褪色程度与其接受的电子数 配对使其吸收逐渐消失mg/mL DPPH 溶液 2.5 mL, 用蒸馏水定容至 5 mL, 室温 , 来检 成定量关系。因而可用分光光度法进行定量分析下静置反应 20 min 后, 在 517 nm 处测定吸光度, 因体 , 从而评价样品的抗氧化能力。其能 测自由基清除情况系内 DPPH 自由基的浓度与其吸光度成正比, 所以可以 [3], 清除率越大, 其抗氧化能力越强。 力用清除率来表示直接以下式计算啤酒对 DPPH 自由基的清除率。 [2] 对于啤酒内源性抗氧化能力的研究已有文献报道, 本 清除率(%)=( A - A) /A ×100 % 0 0 文采用清除 DPPH 自由基法评价啤酒外源性抗氧化能 式中: A 为未加啤酒时测定的 DPPH?的吸光度; 0 力, 并与常用抗氧化剂 Vc 的抗氧化能力进行比较, 为人 A 为加入啤酒后测定的 DPPH?的吸光度。 们认识啤酒, 合理饮用啤酒, 提供一定的科学依据。 ( 下转第 34 页) 基金项目: 山西省自然科学基金项目( 20051028) 。 收稿日期: 2006- 07- 17 作者简介:赵二劳(1952- )，男，山西省原平市人，副教授，主要从事分析化学教学研究。 酿酒科技 2006 年第 11 期( 总第 149 期)?LIQUOR- MAKING SCIENCE & TECHNOLOGY 2006 No.11(Tol.149) 34 将酵母菌转接 3 代后发酵,高级醇产量见表 3。从表 选方法得到 7 株高级醇产量较低的菌株, 做遗传稳定性 测试, 除一株传代 3 代以后高级醇产量增加 24.19 %外, 3 可知, 只有 TQ208 菌的高级醇产量增幅超过 20 %, 说 其余 6 株高级醇产量增幅均未超过 20 %。 明经过紫外诱变巩固后所得到的菌株遗传性状稳定。 : 参考文献 " $%&+*! (),-./’ #$#$!"!" [1] 方维明, 等.低含量高级醇啤酒酵母菌种的选育[J].南京农业 !"!" #$#$!" "!" "大学学报, 2005, 28( 1) : 61- 65. "#$"#$ %&’()* %& ’()*汪志军, 等.紫外诱变筛选低高级醇和双乙酰含量的啤酒酵 [2] # #$% #$ # #$% # !"!"!"!!"!"!"!""""母[J].中国酿造, 2005, ( 1) : 13- 17. #$%# #$ # #$%& # !"!"! !"!""!"!"!"!"!刘勇军, 等.离子注入诱变筛选高产 L- 乳酸菌及其发酵条件 [3] # # #$% #$ !"!"!!!"!"!""!!"的初步研究[J].中国乳品工业, 2003, 31( 1) : 9- 13. !"!"# !""#$$ !"# !"!"# !"!#$% !"#$% 宋安东, 等.离子注入对苹果酒酵母菌的诱变研究[J].郑州大 学学报, 2003, 35(3): 48- 51. [4] 甄会英, 等.气相色谱法测定葡萄酒中高级醇[J].食品科技, 3 结论 2005, ( 4) : 74- 76. [5] 本文采用离子注入诱变方法对一株分离自黎族酒孙俊红, 何碧英.白酒中甲醇、高级醇类的毛细管气相色谱测 曲的酵母进行诱变处理, 经过乳酸培养基、产酸培养基、 定法[J].职业与健康, 2005, 21( 5) : 696- 698. [6] TTC , 初步得到 18 显色等一系列过程的初筛株菌株。进 冯志华, .孙启玲低能离子注入微生物育种及其机制研究进 , 除一株发酵失败外另外 15 一步进行果汁发酵复筛后展[J].四川食品与发酵, 2002, 2: 6- 8. [7] 株菌的高级醇产量均低于原菌株的高级醇产量。最好的 虞龙, 张宇.离子注入微生物育种的研究与应用进展[J].微生 物学杂志, 2005, 25( 2) : 80- 83. 一株菌高级醇产量降低达 34.5 %。离子注入诱变方法虽 黄文彩, 等.离子注入微生物的诱变效应研究[J].安徽农业大 , 但是在人们的实践过程中发 [8] 然是一种高效的诱变方法学学报, 1994, 21( 3) : 282- 285. , 因此本试验后期采用紫外诱 现该方法的回复突变率高 , 以保证菌种遗传性状稳定。因 变加以巩固此诱变效果[9] 此, 选用 TQ111 菌对其进行紫外诱变处理, 按照上述筛 [10] 张明, 等.低能氮离子注入大肠杆菌诱发的生物学效应研究 [J].生物学杂志, 2004, 21( 3) : 23- 26. !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!( 上接第 30 页) Vc 对 DPPH 自由基清除率的测定方法同上。 % ##$ % "$&’! "&+! ! ()*,-’ % #$&()*+(.*!"",-’ 2 结果与分析 /0 123 45 62768 932:3 2.1 啤酒对 DPPH 自由基的清除率( 见表 1) "#""$ %& "#() *"#$) ;’! % "$&’(()+0! *,-./DPPH 自由基具有较强的清除能力。 !"#$%!"#$ &’(!)$ *+,!-$ 01 ./../..3 讨论 2 344 1562 ././/通过实验表明, 啤酒对 DPPH 自由基具有较强的清 5 636 7803 ././/除能力, 对人体具有保健功能, 适量饮用啤酒可以延缓 17 65 4727 /././人体衰老, 有益于人体健康。但啤酒作为一个复杂的物 72 420 616 /././质体系, 某些物质之间的相互作用在改变着啤酒的风味 和抗氧化性, 随着啤酒存放时间的延长, 其风味会逐渐 由表 1 可知, 随着啤酒加入量的增加, 对 DPPH 自 [2]老化, 甚至变质。因此应尽可能饮用新鲜的啤酒。 由基清除能力逐步增加。当加入啤酒 2.5 mL 时, 在实验 参考文献: 条件下, 对 DPPH 自由基的清除率可达 60.16 %。因此, 啤酒作为一种自由基清除剂, 具有较强的抗氧化能力, 可 , 提示适量饮用啤酒, 对人 体清除自由基对人体的危害 [1] 季晓东, 楚晓珉, 武千钧. 啤酒的抗氧化功能与保健[J]. 酿酒 有一定的保健功能。科技, 2001,( 6) : 66- 67. 2.2 啤酒与 Vc 对 DPPH 自由基清除能力的比较( 见表 严敏, 李崎, 顾国贤. 利用 DPPH 自由基清除率评价啤酒内源 [2] 2) 性抗氧化能力[J]. 食品工业科技, 2005, 26( 8) : 82- 84. 由表 2 可知, 1.2 mL 啤酒对 DPPH 自由基的清除率 彭长连, 陈少薇, 林植芳, 等. 用清除有机自由基 DPPH 法评 [3] 略低于 0.002 mg Vc 对自由基的清除率, 说明啤酒对 价植物抗氧化能力[J]. 生物化学与生物物理, 2006, 27( 6) : 658- 600. 转载请注明出处范文大全网 » 茶多酚DPPH自由基清除能力范文三：EDF的羟自由基清除能力及其作用机制研究
范文四：羟自由基清除能力测定法
范文五：用清除DPPH自由基法评价啤酒抗氧化能力
