percoll分离液原理_范文大全网

范文一：percoll分离液原理

）原理

Percoll 是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低（<20mosm／kg h="" ２o="" ）,="" 粘度也很小，可形成高达1.3g="" ／ml="" 密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力（200～1000g="" ）于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于percoll="" 扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，percoll="">

二）操作方法及注意事项

1. 不同浓度（密度）Percoll 溶液的制备: 先用9份Percoll 与1份8.5％ NaCl 或

1.5MPBS 混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液（0.85％ NaCl 或0.15M PBS）稀释到所需浓度。

Percoll 浓度（％） 70 60 50 40 30 20 比重g ／ml 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031

2. 不连续密度梯度Percoll 层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll 液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll 比重相差不大时，可将Percoll 液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

3. 装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4. 离心：一般采用离心力为400g ，时间20～25min 。由于多层Percoll 之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

5. 取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll 液后收集界面部位的细胞; 有时大部分细胞位于Percoll 层中, 则需要逐层收集。收获含有Percoll 液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

（三）分离纯化细胞举例

1. 富含NK 活性大颗粒淋巴细胞（LGL ）的纯化:按顺序由下向上逐层加50％、47.5％、45％、42.5％和40％五种不同密度的Percoll, 如用10ml 试管（或塑料管）分离, 每层Percoll 约1.2～1.5ml ，初步从外周血中分离的PBMC 细胞1×10８悬于１ml 培基中，按要求装样、离心和取样。一般富含NK 杀伤活性的LGL 细胞位于42.5％与45％Percoll 界面以及上下二层的Percoll 液中。

2. 纯化淋巴母细胞和除去死细胞：分别叠加50％和30％Percoll 液。收取经PHA （或其它抗原、有丝分裂原）刺激PBMC, 或含有较高比例异型的PBMC （如肾综合征出血热患者），按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞；两层Percoll 之间为淋巴母细胞，纯度和回收率在80％以上，位于30％Percoll 表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。

（四）人不同血细胞的漂浮密度

表人不同血细胞的漂浮密度

──────────────┬────────────────── 细胞漂浮密度 │ 细胞漂浮密度

──────────────┼────────────────── 红细胞 1.09-1.11 │淋巴细胞 1.052-1.077 粒细胞 │ B淋巴细胞 1.062-1.075

嗜酸性 1.09-1.095 │ T淋巴细胞 1.065-1.077

嗜中性 1.080-1.085 │ 淋巴母细胞 1.065-1.077

单核细胞 1.050-1.066 │自然杀伤细胞 1.050-1.070 血小板 1.030-1.060 │

──────────────┴──────────────────

（五）问与答

问：请问percoll 连续梯度怎么配制？比如15%---75%的percoll 连续梯度?

答：根据你需要的具体密度梯度决定的，根据要分离的不同细胞种类，数量等等，也有用原液配的。也有用80％配的，不一定的。另外，percoll 本身是低渗透压的，要用高渗透压溶

液配成生理等渗透压溶液，然后使用，不然，细胞容易破裂。一般是先用9份Percoll 与1份8.5％ NaCl 或1.5MPBS 混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液（0.85％ NaCl 或0.15M PBS）稀释到所需浓度。即取Percoll 原液与10倍浓缩的PBS 以9：1的比例混合，此时溶液为100％ Percoll ，比重是1.127，毫克分子渗透压浓度为290mOsmol/kg Percoll 浓度（％） 70 60 50 40 30 20

比重g ／ml 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031

范文二：percoll 细胞分离液

北京华越洋生物提供

www.huayueyang.com Percoll 细胞分离液 Gt0253-100ml

Percoll 不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞

Percoll 细胞分离液

(一 ) 原理

Percoll 是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低 (<20mosm g="" h2o),="" 粘度也="" 很小,可形成高达="" 1.3g="" l="" 密度,采用预先形成的密度梯度时可在低离心力="" (200~1000g)="" 于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于="" percoll="" 扩散常数低,所形成的梯度十="" 分稳定。="" 此外,="" percoll="" 不穿透生物膜,="" 对细胞无毒害,="" 因此广泛用于分离细胞、="" 亚细胞成分、="">

Percoll 细胞分离液

(二 ) 操作方法及注意事项

1. 不同浓度 (密度 )Percoll 溶液的制备 : 先用 9份 Percoll 与 1份 8.5% NaCl 或 1.5MPBS 混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液 (0.85% NaCl 或 0.15M PBS)稀释到所需浓度。

2. 不连续密度梯度 Percoll 层的制备 : 先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的 Percoll 液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层 Percoll 比重相差不大时,可将 Percoll 液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。

3. 装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异,一般加样体积不宜过大,细胞浓度也不可过高,否则会影响细胞的分离和回收。

4. 离心:一般采用离心力为 400g ,时间 20~25min 。由于多层 Percoll 之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。

5. 取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时, 可逐层去除 Percoll 液后收集界面部位的细胞 ; 有时大部分细胞位于 Percoll 层中 , 则需要逐层收集。收获含有 Percoll 液的细胞经 2次洗涤后可供培养或检测用。

Percoll 细胞分离液

(三 ) 分离纯化细胞举例

1. 富含 NK 活性大颗粒淋巴细胞 (LGL)的纯化 :按顺序由下向上逐层加 50%、 47.5%、 45%、 42.5%和 40%五种不同密度的 Percoll, 如用 10ml 试管 (或塑料管 ) 分离 , 每层 Percoll 约 1.2~

1.5ml ,初步从外周血中分离的 PBMC 细胞 1×108悬于1ml 培基中,按要求装样、离心和取样。一般富含 NK 杀伤活性的 LGL 细胞位于 42.5%与 45%Percoll 界面以及上下二层的 Percoll 液中。

2. 纯化淋巴母细胞和除去死细胞:分别叠加 50%和 30%Percoll 液。收取经 PHA(或其它抗原、有丝分裂原 ) 刺激 PBMC, 或含有较高比例异型的 PBMC(如肾综合征出血热患者 ) ,按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞; 两层 Percoll 之间为淋巴母细胞, 纯度和回收率在 80%以上,位于 30%Percoll 表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。

Percoll 细胞分离液

牛血清白蛋白 [组份五 ] Albumin from bovine serum[BSA] Roche[分 ] 5g

牛血清白蛋白 [组份五 ] Albumin from bovine serum[BSA] Roche[分 ] 5g*10

**** 胆固醇 Cholesterol 国产 100g

北京华越洋生物提供

www.huayueyang.com **** 胆固醇 Cholesterol 国产 100g*10 **** 琼脂糖 Agarose 西班牙 100g **** 琼脂糖 Agarose 西班牙 100g*10 **** 琼脂糖 Agarose 西班牙 100g **** 琼脂糖 Agarose 西班牙 100g*10 Percoll 细胞分离液

范文三：percoll细胞分离液

北京华越洋生物提供 www.huayueyang.com

Percoll 细胞分离液 Gt0253-100ml

Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞

Percoll 细胞分离液

(一) 原理

Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(<20mosm,kg h,o),="" 粘度也很小，可形成高达1.3g,ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200,1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。="">

Percoll 细胞分离液

(二)操作方法及注意事项

1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5, NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85, NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。

2.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

3.装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4.离心:一般采用离心力为400g，时间20,25min。由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

5.取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

Percoll 细胞分离液

(三)分离纯化细胞举例

1.富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50,、47.5,、45,、42.5,和40,五种不同密度的Percoll,如用10ml试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2,1.5ml，初步从外周血中分离的PBMC细胞1×10,悬于,ml培基中，按要求装样、离心和取样。一般富含NK杀伤活性的LGL细胞位于42.5,与45,Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。

2.纯化淋巴母细胞和除去死细胞:分别叠加50,和30,Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾综合征出血热患者)，按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞;两层Percoll之间为淋巴母细胞，纯度和回收率在80,以上，位于30,Percoll表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。

Percoll 细胞分离液

牛血清白蛋白[组份五] Albumin from bovine serum[BSA] Roche[分] 5g 牛血清白蛋白[组份五] Albumin from bovine serum[BSA] Roche[分] 5g*10 **** 胆固醇 Cholesterol 国产 100g

北京华越洋生物提供 www.huayueyang.com

**** 胆固醇 Cholesterol 国产 100g*10

**** 琼脂糖 Agarose 西班牙 100g

**** 琼脂糖 Agarose 西班牙 100g*10

**** 琼脂糖 Agarose 西班牙 100g

**** 琼脂糖 Agarose 西班牙 100g*10

Percoll 细胞分离液

范文四：percoll分离液道理[精华]

) 原理

二)操作方法及注意事项

1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5, NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85, NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。

Percoll浓度(,) 70 60 50 40 30 20

比重g,ml 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031

2.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

3.装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4.离心:一般采用离心力为400g，时间20,25min。由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

(三)分离纯化细胞举例

(四) 人不同血细胞的漂浮密度

表人不同血细胞的漂浮密度

?????????????????????????????????

细胞漂浮密度 ? 细胞漂浮密度

?????????????????????????????????

红细胞 1.09-1.11 ?淋巴细胞 1.052-1.077

粒细胞 ? B淋巴细胞 1.062-1.075

嗜酸性 1.09-1.095 ? T淋巴细胞 1.065-1.077

嗜中性 1.080-1.085 ? 淋巴母细胞 1.065-1.077

单核细胞 1.050-1.066 ?自然杀伤细胞 1.050-1.070

血小板 1.030-1.060 ?

?????????????????????????????????

(五)问与答

问:请问percoll连续梯度怎么配制,比如15%---75%的percoll连续梯度? 答:根据你需要的具体密度梯度决定的，根据要分离的不同细胞种类，数量等等，也有用原液配的。也有用80,配的，不一定的。另外，percoll本身是低渗透压的，要用高渗透压溶

液配成生理等渗透压溶液，然后使用，不然，细胞容易破裂。一般是先用9份Percoll与1份8.5, NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85, NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。即取Percoll原液与10倍浓缩的PBS以9:1的比例混合，此时溶液为100, Percoll，比重是1.127，毫克分子渗透压浓度为290mOsmol/kg Percoll浓度(,) 70 60 50 40 30 20

比重g,ml 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031

范文五：percoll 分离液的配制转

percoll 分离液的配制转

percoll分离液的配制(转)2010年12月07日星期二22:17Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞

(一)原理

Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(20mosm/kgH2O),粘度

也很小，可形成高达1.3g/ml密度，采用预先形成的密度梯度时可

在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常

数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细

胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与

完好的活细胞分离。

(二)操作方法及注意事项

1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备:先用9份Percoll与1份8.5%NaCl或1.5MPBS

混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85%NaCl或0.15MPBS)稀

释到所需浓度。

Percoll浓度(%)706050403020

比重g/ml1.0901.0771.0671.0561.0431.0312.不连续密度梯度Percoll层的制备:先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处

理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在

制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相

差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其

自然慢慢流下。

3.装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度

也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4.离心:一般采用离心力为400g，时间20~25min。由于多层Percoll之间密度差别

不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

5.取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集

界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收

获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

(三)分离纯化细胞举例

1.富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50%、47.5%、

45%、42.5%和40%五种不同密度的Percoll,如用10ml试管(或塑料管)

分离,每层Percoll约1.2~1.5ml，初步从外周血中分离的PBMC细胞1×108悬于1ml培基

中，按要求装样、离心和取样。一般富含NK杀伤活性的LGL细胞位于

42.5%与45%Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。

2.纯化淋巴母细胞和除去死细胞:分别叠加50%和30%Percoll液。收取经PHA(或其

它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾

综合征出血热患者)，按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞;两层

Percoll之间为淋巴母细胞，纯度和回收率在80%以上，位于30%

Percoll表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。

(四)人不同血细胞的漂浮密度

表人不同血细胞的漂浮密度

?????????????????????????????????

细胞漂浮密度?细胞漂浮密度

?????????????????????????????????

红细胞1.09-1.11?淋巴细胞1.052-1.077

粒细胞?B淋巴细胞1.062-1.075

嗜酸性1.09-1.095?T淋巴细胞1.065-1.077

嗜中性1.080-1.085?淋巴母细胞1.065-1.077

单核细胞1.050-1.066?自然杀伤细胞1.050-1.070

血小板1.030-1.060?

请问大家percoll细胞分离液怎么配置成密度为1.1101.1701.035的梯度离心液

我以前配置的用10倍的PBS1:9percoll稀释后再用1倍的PBS配置成90%70%50%的分

离液但是在分离胎肝干细胞的时候取中间层，但是没有细胞在中间，都在上层，不知道是

怎么回事!以前用过percoll分离液的好心人给介绍点经验

密度不对呗。一般是用1.5M的NaCl与percoll原液一1:9配成母液后，再用0.15M的NaCl

稀释成一定浓度的工作液，各个密度所对应的浓度在网上能查到。

另外，用什么来悬浮细胞和细胞的密度很重要，会影响分离效果，建议不要用含血清的培养

液重悬细胞，细胞密度在2*10的7次方/毫升为好，这样比较容易看到密度液层中的细胞带。

还有就是是不是你消化提取的目标细胞数量少而混了很多的结缔组织?如果密度没错但多

数浮在轻密度一层，那很有可能不是目标细胞

进口的Pharmacia的好些，如果梯度浓度约接近，percoll层越不容易区别，我的由于是做60

%和30%的简化梯度分离，所以还算能看得清两层的界线，但一旦细胞悬液细胞密度低的

话就看不见明显的细胞带，所以尽量取材时获得细胞数量大些，就能看见有云雾状的东西，

并且轻轻摇动离心管后云雾晃动后再次稳定，这就是细胞带

加液时要让percoll液和细胞悬液都沿着管壁慢慢下流

问:请问percoll连续梯度怎么配制?比如15%---75%的percoll连续梯度?

:根据你需要的具体密度梯度决定的，根据要分离的不同细胞种类，数量答

等等，也有用原

液配的。也有用80%配的，不一定的。另外，percoll本身是低渗透压的，要用高渗透压溶

液配成生理等渗透压溶液，然后使用，不然，细胞容易破裂。一般是先用9份Percoll与1

份8.5%NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85%NaCl或0.15MPBS)稀释到所需浓度。即取Percoll原液与10倍浓缩的PBS以9:1的比例混合，此时溶液

为100%Percoll，比重是1.127，毫克分子渗透压浓度为

290mOsmol/kgPercoll浓度(%)706050403020

比重g/ml1.0901.0771.0671.0561.0431.031

转载请注明出处范文大全网 » percoll分离液原理

范文一：percoll分离液原理

范文二：percoll 细胞分离液

范文三：percoll细胞分离液

范文四：percoll分离液道理[精华]

范文五：percoll 分离液 的配制 转

范文五：percoll 分离液的配制转