一概而轮
范文一：菊花组织培养
要点1 植物组织培养的理论基础
当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株（即细胞全能性）。
要点2 植物组织培养的基本过程
（1）基本过程
离体的植物组织、器官或细胞
组织培养
脱分化
愈伤组织
组织培养
再分化
试管苗
人为使用植物激素控制
（2）基本概念
细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。
愈伤组织：离体的植物组织或细胞，培养一段时间后，会通过细胞有丝分裂，形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。
脱分化（去分化）：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。
再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。
（3）植物体细胞发育成完整植株（表现出全能性）的条件。
脱离原来所在植物体（离体）、营养供给、激素控制、无菌条件、适宜的温度、PH和光照等。
要点3 影响植物组织培养的因素
（1）材料因素的影响
不同的植物组织，培养的难易程度差别很大，容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养。同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短也有影响。幼龄、保存时间短的植物材料容易培养成功。菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧芽。
（2）营养因素的影响
需要配置适宜的培养基，常用的一种培养基是 MS培养基，其主要成分包括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S；微量元素，如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；有机物，如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素，以及蔗糖等。
（3）激素的影响
在配置好的MS培养基中，常常需要添加植物激素。植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等，都会影响实验结果。
①按照不同的顺序使用这两类激素，会得到不同的实验结果。
使用顺序
实验结果
先使用生长素，后使用细胞分裂素
有利于细胞分裂，但细胞不分化
先使用细胞分裂素，后使用生长素
细胞既分裂又分化
同时使用
分化率提高
②当同时使用这两类激素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。
生长素用量比细胞分裂素用量
植物细胞的发育方向
比值高时
有利于根的分化、抑制芽的形成
比值低时
有利于芽的分化、抑制根的形成
比值适中时
促进愈伤组织的生长
（4）pH、温度、光照等条件的影响
不同的植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花的组织培养，一般将pH控制在5.8左右，温度控制在18～22℃，并且每日用日光灯照射12h。
要点4 植物组织培养技术的优点
植物组织培养技术可以实现优良品种的快速繁殖，保持遗传性状的一致；可以实现花卉的连续生产，不受开花季节的限制。
要点5 实验操作
（1）制备MS固体培养基
①配置各种母液
将各种成分按比例配制成浓缩液，使用时，根据浓缩液比例计算用量，加水稀释。
②配置培养基
③灭菌
（2）外植体消毒
①过程
流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗20min→无菌吸水纸吸干外植体表面→体积分数为70﹪的酒精中摇动2～3次，持续6～7s→无菌水清洗→无菌吸水纸吸干外植体表面→质量分数为0.1﹪的氯化汞溶液中1～2min→无菌水中至少清洗3次。
②注意事项
对外植体进行表面消毒时，既要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物的耐受能力。
（3）接种
接种前用体积分数为70%的酒精将工作台擦拭一遍。将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成小段（长约0.5～1cm）。左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥于右手手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰；右手用镊子夹取菊花茎段，插入培养基中。插入时应注意方向，不要倒插。接种后，将封口膜重新扎好。
（4）培养
在无菌箱中培养，温度控制在18～22℃，每日用日光灯光照12h。
（5）移栽
先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间培养几日。然后用清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土土壤中。
（6）栽培
要点6 疑难解答
（1）你能说出MS培养基中各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？
微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
（2）你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？
可以安排学生分组，做不同的材料或配方，最后分别汇报成果。但每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
范文二：菊花组织培养
菊花的组织培养
一、植物组织培养的基本过程:
1.植物组织培养的优点 (31页)
植物组织培养的起点 终点 (31页) 植物组织培养的概念 (32页课题背景)。 植物组织培养原理 细胞全能性 (记书上) 细胞全能性概念:细胞的全能性是指已分化的细胞仍具有发育成完整个体的潜能。(记书上) 细胞全能性原因:是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质,都有发育成为完整个体所必需的全部基因 (记书上)
2.相关概念:
?细胞分化:
细胞分化实质(记书上):基因的选择性表达 ?脱分化:
?再分化:(4)愈伤组织特点
3.画出植物组织培养的流程图:
离体器官、 脱分化 再分化
愈伤组织 根、芽 植物体
组织或细胞
二 影响植物组织培养的因素:(33页看书背)
1材料的种类、年龄及保存时间长短等
2培养基
3植物激素
4 PH、温度、光照等条件
三、实验操作
(一)制备MS固体培养基
(二)外植体消毒:
1.外植体的概念:
2.注意:对外植体进行表面消毒时，既要 考虑 的消毒效果，又要考虑 。 3.选取菊花茎段时，要取 。菊花茎段用
流水冲洗后可加 ，用软刷轻轻刷洗。再用 吸干外植体表面的水分， 放入 中摇动2-3次，取出外植体，吸干，再用 消毒，在 至少清洗 次，漂净 。
(三)接种
接种前，用 将工作台擦拭一遍，再点燃酒精灯，此后，所有的接种操作都必须在 旁进行，并且每次使用器械后，都需要用 灭菌。 左手 右手 ，并将封口膜 ，以避免 。左
，使瓶口 ，右手 ，插入时，应注意 。手
不要 。每瓶接种 块外植体。 (四)培养
接种后的锥形瓶最好放在 中培养，培养期间应 。培养温度控制在 ，并且 。 (五)移栽
，然后用 清洗根部的在移栽试管苗之前应
培养基，将幼苗移植到 等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。
(六)栽培
将幼苗移栽后，每天 ，适时浇水，施肥，直至 。 (一)旁栏思考题
1.你能说出各种营养物质的作用吗,同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同,
答:微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐;蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压;甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培
养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
2.你打算做几组重复,你打算设置对照实验吗, 答:教师可以安排学生分组，做不同的材料或配方，最后分别汇报成果。但每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。 (二)练习
1.答:植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。 2.答:外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。
范文三：菊花的组织培养
课题1 菊花的组织培养
一．基础知识
1、具有某种生物全套 的任何一个活细胞，都具有发育成 的能力，即每个生物细胞都具有 。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在 条件下，通过基因的 ，构成不同组织和器官。
2、植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的 ；培育 作物；制作 种子；培育作物 以及细胞产物的 等。
3、细胞分化：个体发育中细胞在 上出现稳定性差异的过程。
〖思考1〗细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？
使多细胞生物体中细胞 趋向 化，有利于 各种生理功能的效率。
4、愈伤组织是通过 形成的，其细胞排列 ，高度 呈 态的 细胞。
〖思考2〗填表比较根尖分生组织和愈伤组织的异同：
6、材料：植物的种类、材料的 和 等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择 作材料。
〖思考3〗一般来说，容易进行 繁殖的植物容易进行组织培养。
〖思考4〗选取生长旺盛嫩枝进行组培的原因是
7、营养：常用的培养基是 培养基，其中含有的大量元素是 ，
微量元素是 ，有机物有
等。
8、激素：在培养基中需要添加 和 等植物激素，其 、 、 等都影响结果。 〖思考5〗填表：激素使用的先后顺序及其用量比例对细胞分裂和分化的影响。
9、环境条件： 、 、 等环境条件。菊花组培所需PH为 ，温度为 ℃，光照条件为 。
范文四：菊花组织培养论文
菊花组织培养论文
单位：迁安市马兰庄镇初级中学
姓名：胡瀚文
摘 要 :通过组培试验，初步得出了菊花组培育苗时最佳的诱导培养墓配方:用花瓣做外植体，在诱导培养基上接种诱导成愈伤组织，然后再在分化培养基上快速分化，之后在生根培养基上生根壮苗，再出瓶培养成生产用苗。
关 键 词 :菊花; 愈伤组织; 培养基；激素
. 菊花
菊科多年生宿根花卉，别名黄花、节华、秋菊、金蕊等。菊花原产中国，栽培历史悠久，品种丰富，花型花色千变万化，观赏价值极高。它是中国十大传统名花之～，也是世界上深受广大民众喜欢的园艺植物之一，与香石竹、月季、唐菖蒲一起被称为四大切花，畅销国际市场。
组织培养发展简史
1838-1839年，德国科学家Schleide 和Schwann发表了细胞学说，奠定了组织培养的理论基础。 1902年，德国植物学家Haberlandt 根据细胞学说，提出单个细胞的植物细胞全能性（totipotency）理论。
1904年，Hanning 最先成功地培养了萝卜和辣根菜的胚。 1922年，Knudson 采用胚培养法获得大量兰花幼苗。
1934年，White 用番茄根尖建立起第一个活跃生长的无性繁殖系，从而使
非胚器官的培养首先获得成功。 1958年，英国科学家Steward 等用胡萝卜根的愈伤组织细胞进行悬浮培养，成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株，不但使细胞全能性理论得到证实，而且为组织培养的技术程序奠定了基础。
1962年，Murashinge 和Skoog 在烟草培养中筛选出至今仍被广泛使用的MS培养基。
1964-1966年，印度科学家Guha 和Maheswari 在曼陀罗花药培养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。
1972年，Carlson 通过两个种的烟草原生质体融合培养，获得了第一个体细胞杂交的杂种植株。……
、
材料与方法
1．实验材料
（1） 实验植株
菊花
（2） 实验器材
高压灭菌锅、超净工作台、培养箱、冰箱、天平、平底试管、剪刀、镊子、平皿、酒精灯、滤纸、烧杯、玻璃棒、橡胶塞、ph试纸。 (3) 实验试剂
贮备液Ⅰ（20×） V=500ml (按顺序逐一溶解) NH4NO3 33g KNO3 38g
CaCl2.2H2O 8.8g（含结晶水换算） MgSO4.7H2O 7.4g（含结晶水换算） KH2PO4 3.4g
贮备液 Ⅱ（200×） V=1000ml (按顺序逐一溶解) KI 0.166g H3BO3 1.24g MnSO4.4H2O 4.460g ZnSO4.7H2O 1.720g Na2MoO4.2H2O 0.050g CuSO4.5H2O 0.005g CoCl2.6H2O 0.005g
贮备液Ⅲ（200×） V=200ml (按顺序逐一溶解,调PH到5.5) Na2.EDTA.2H2O 1.492g FeSO4.7H2O 1..112g
(分开配再混在一起，FeSO4.7H2O不能加热要自然溶解，否则Fe2+会被氧化成Fe3+)
贮备液Ⅳ（200×） V=1000ml (按顺序逐一溶解) 肌醇 20g 烟酸 0..1g 盐酸吡哆醇 0.1g 盐酸硫胺素 0.02g 甘氨酸 0.4g
激素：生长素—α-萘乙酸（NAA） 细胞分裂素—6-苄基腺嘌呤（6-BA） 其他: 蔗糖、琼脂粉、
2. 实验方法
(1) 配置四种储备液，见实验试剂 （2）配置激素
1mg/ml 6-BA：称取50mg的6-BA于烧杯中，加适量的氢氧化钠使其混匀，
再定容到50ml，倒入试剂瓶中。
1mg/ml NAA：称取50mg的NAA于烧杯中，加适量的无水乙醇使其混匀，
再定容到50ml，倒入试剂瓶中。 （3）MS培养基的配置
称取3g蔗糖于250ml的烧杯中，向其中加入适量的水溶解，再向其中加入贮
备液Ⅰ5 ml，Ⅱ0.5 ml，Ⅲ 0.5 ml，Ⅳ 0.5 ml,加水混匀定容到100ml。分装平底试管，每管20ml,，再往每管中加入0.14g的琼脂粉，最后往每管中加入不同浓度的生长素和细胞分裂素，见下表：
（5）菊花花瓣的预处理
取菊花花瓣，用自来水洗3~5次，置于小烧杯中浸泡半小时，用70%乙醇浸泡15 s，无菌水清洗3次后，用2%次氯酸钠（吐温80 2滴）浸泡10 min，再用无菌水洗3~4次。于灭过菌的培养皿上，切割成0.5 cm×0.5 cm大小。
（6）诱导培养:将处理好的菊花花瓣接入到诱导培养基中，每管做好记号，放入
25℃温箱光照培养。
（7）分化培养：四个星期后，菊花花瓣变绿，将没污染且长势良好的菊花花瓣
组织切成小块无菌操作转入诱导培养基中。分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L
（8）生根培养：一个星期后，可看见叶子长出，将没污染且长势良好的菊花转
入生根培养基中培养。生根培养基MS+NAA 0.3 mg/L
实验结果
1、 诱导培养
第一周，菊花花瓣由外向内逐渐变绿。
第二周，绿色变深，部分地方厚度增加
第三周，周围卷起，厚度增加。
第四周，可以观察到小叶子长出
2、分化培养结果
可明显观察到叶子和根系
3、生根培养。（略）
三：结果分析
从试验结果可得出利用菊花组培繁殖程序:花瓣外植体——> MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.5 mg/L诱导培养——>MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L分化培养 ——>MS+NAA 0.3 mg/L生根培养,然后再
栽培到合适的基质中培养成生产用苗。
范文五：菊花花瓣组织培养
论文题目: 菊花花瓣组织培养
系 别:
班 级: 生物技术及应用
学 号:
姓 名:
指导老师:
时 间: 2011.10 — 2011.12
目 录
中文摘要………………………………………………………………………………3
中文关键词………………………………………………………………………..3
英文摘要………………………………………………………………………………3
英文关键词………………………………………………………………………..3
引 言 ........................................................................................................................ 3
1.1 组织培养 ................................................... 3
1.2 菊花组培概述 .......................................................................................... 3 2 实验材料与方法 ................................................................................................... 4
2.1 实验材料 .................................................................................................... 4
2.2 试验方法 .................................................................................................... 4
2.2.1培养基制备 ............................................................................................. 4
,.,.,材料处理 ............................................................................................ 4
,.,.3 培养及观察 ........................................................................................ 5 , 实验结果与分析 ................................................................................................. 5
,.1 NAA对愈伤组织影响 .............................................................................. 5
,., NAA、6-BA不同浓度组合对分化培养的影响 ................................... 6
4 讨论与建议 .................................................................................................. 6
4(, 结果讨论 ........................................................................................................... 6
4. 2 褐化及其相关建议 ............................................................................ 7
参考文献: ........................................................................................................ 7
1、陈世昌 植物组织培养[M] 高等教育出版社 .......................................... 7
2
菊花花瓣组织培养
摘 要
以菊花花瓣为外植体，在离体条件下可通过诱导形成愈伤组织，再由愈伤组织诱导分化不定芽发生。在试验中探讨了激素NAA、6-BA对诱导愈伤组织和不定芽的影响，并在该试验中筛选出诱导愈伤组织的最佳脱分化培养基为MS+6-BA 1.0 mg,L+NAA0.5mg,L;诱导不定芽的最佳分化培养基为MS+6-BA 4.0mg,L+NAA0.5mg,L。
【关键词】:菊花;花瓣;愈伤组织;组织培养
引 言
1.1 组织培养
自哈布兰特(G.Haberlandt)提出细胞全能性理论在无数科学家的努力下以及进行离体培养以来，经过80多年的历程，才使这项技术趋于完善，趋于成熟。近40年来，植物组织培养技术得到了迅速发展，已渗透到植物生理学、病理学、药学、遗传学、育种以及生物化学等各个研究领域，成为生物学科中的重要研究技术和手段之一。已成为当代生物科学中最有生命力的一门学科。
植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官(如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等)、组织(如形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞(如体细胞、生殖细胞等)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、原生质体(如脱壁后仍具有生活力的原生质体)，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，
[2]诱发产生愈伤组织，或潜伏芽等，或长成完整的植株，统称为植物组织培养。
目前，国内外把植物组织培养已普遍应用于植物育种、植物脱毒和快速繁殖、植物有用产物、植物种质资源保存和交换、遗传、生理、生化和病理研究等
[1]方面有广泛应用。
1.2 菊花组培概述
菊花，菊科菊属，又称白帝、帝女花等，多年生宿根草本植物，原产我国，现世界各地均有栽培，品种多，花期各异，有春菊、夏菊、秋菊、寒菊等，花型多样，色彩繁多，分布广泛，在园林上应用广泛且深受人们喜爱。现在生产上多用扦插和嫁接繁殖，但该方法大面积绿化使用时成苗慢，尤其在北方地区冬季严寒，夏秋季为主要绿化季节.冬春季节为育苗季节，相对来说任务重，成本高。随着组培技术的发展，其快速、高效、保优等都将改变这种不足，因此推动菊花
3
[3]走向组培育苗的道路在北方地区有着广阔的前景。
2 实验材料与方法
2.1 实验材料
外植体来自开封菊花展中的各种名贵菊花花瓣，选取直径约2 cm且生长良好苞片未开裂的花蕾作为表面消毒材料，以花瓣作为外植体进行接种，长度2,3 cm，呈黄色或紫色。
2.2 试验方法
2.2.1培养基制备
以MS为基本培养基,6-BA、,,,两种激素搭配。琼脂为7g /L,蔗糖30g/L, pH 5.8-6.0，接种诱导培养基为,个配比(见表,)，分化培养基为,个配比(见表,)。
表1 不同NAA质量浓度的诱导培养基配方
培养基编号 6-BA(mg,L) NAA(mg,L)
1 1 0.1
2 1 0.3
3 1 0.5
表3-2 不同激素条件对愈伤组织分化的影响
培养基编号 6-BA(mg,L) NAA(mg/L) 6-BA/ NAA(比值)
4 0.5 0.5 1:1
5 2.0 0.5 4:1
6 4.0 0.5 8:1
,.,.,材料处理
取菊花花瓣用自来水洗洗净表面的污渍，然后流水冲洗30min;置于小烧杯中，用70%乙醇浸泡30s，无菌水清洗2-3次后，用0.1%升汞(吐温1-2滴每升
[1]升汞溶液)浸泡3-15min，再用无菌水洗3-4次。
于灭过菌的培养皿上，每个花瓣切割成2-3段，接种到诱导培养基，待获得愈伤组织后。将愈伤组织转移到分化培养基，进行芽的分化诱导。完成分化诱导后再转入生根培养基中，进行根的诱导，进而形成完整植株。等苗木长出粗茎段
4
时再进行出瓶培养，在无土无菌基质中培养成生产用苗。
,.,.3 培养及观察
将培养室温度控制在24-25?，湿度在75%-85%之间，光照度1500-2000 Lx,每天照光16h。从接种后第3天开始观察培养物生长情况，统计外植体形成愈伤组织时期、生长速度、幼叶出现时期及生长方式。根据生长状况，接种4-6周待获得愈伤组织后，将愈伤组织转移到进行分化培养，观察增殖状况及天数。生根阶段观察生根部位、生根时间以及出瓶培养成活情况。
, 实验结果与分析
,.1 NAA对愈伤组织影响
接种14天后，花瓣边缘稍向上翻卷。20天后，部分外植体伤口处开始形成黄绿色的愈伤组织。第21天及第28天统计愈伤组织诱导情况(表3、4)。从表3可以看出，不同NAA浓度对愈伤诱导率、质地及生长情况变表现出的差异不明显。在三种培养基上，都表现出形成时间长，生长缓慢的情况，且愈伤诱导率相同。但在3号培养基上，切口周围出现膨大的淡绿色愈伤组织，其结构疏松，质量最。因此，3号培养基是诱导菊花花瓣形成愈伤组织的适宜培养基。
表3 NAA浓度对菊花花瓣愈伤组织诱导的影响
NAA 培养基 6—BA 外植体块愈伤组织 愈伤组织 愈伤组织
(mg,
编号 (mg,L) 数(块) (块) 颜色和质地 生长情况 L)
黄色、边缘呈淡绿形成时间长，生长缓1 1 0.1 9 9 色 慢
淡黄色、形态不规形成时间长，生长缓2 1 0.3 9 9
则 慢后期膨大
黄绿色、边缘 形成时间长，愈伤组3 1 0.5 9 9
膨大松散 织较大，后期变松散 注:诱导培养28d
表4 NAA浓度对菊花花瓣愈伤组织诱导率
MS/mg?L-1 21天后 28天后
培养基 外植体
6-BA (mg,愈伤组愈伤组织 愈伤组 愈伤组织 编号 块数(块) NAA (mg,L)
L) 织(块) 诱导率(%) 织(块) 诱导率(%)
1 1 0.1 9 6 66.7% 9 100%
2 1 0.3 9 9 100% 9 100%
5
3 1 0.5 9 9 100% 9 100%
在统计NAA浓度对菊花花瓣愈伤组织诱导率(表4)中,可以看出NAA不同浓度对菊花花瓣愈伤组织的诱导率差异不明显(P>0.05)。
,., NAA、6-BA不同浓度组合对分化培养的影响
将接于MS+6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L 、MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.3
mg/L、MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.5 mg/L培养基形成的愈伤组织，分别转入
-BA 0.5 mg/L + NAA 0.5 mg/L、MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.5 mg/L、MS + 6
MS + 6-BA 4.0 mg/L + NAA 0.5mg/L,进行分化培养(见表5)，结果显示:
表5 不同激素对愈伤组织分化生长及分化情况
-1不同编号培养基上愈伤组织生长及分化情况MS/mg?L 愈伤组织形成来源
培养基编号 , , ,
愈伤组织分化较快，体积膨愈伤组织分化很慢 愈伤组织较致密，体积膨大
, 大
中部褐化 中部褐化 中部褐化
愈伤组织分化较慢 愈伤组织体积膨大较，致密 愈伤组织呈翠绿色，体积膨,
中部褐化 中部褐化 大，中部褐化
愈伤组织分化较慢， 愈伤组织较致密，较致密 愈伤组织呈翠绿色，体积膨
,
边缘褐化 褐化严重 大，晶状化，中部褐化 注:分化培养14d
由表5可得出以下结果:
(1)表5中，在经同一诱导培养基所得的愈伤组织在三种分化培养基中:MS + 6-BA 4.0 mg/L + NAA 0.5mg/L培养基是分化培养的适宜培养基。(横向比较)
(2)在分化培养基相同时比较诱导愈伤组织形成培养基中:MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.5mg/L培养基是诱导、分化培养的适宜培养基。(纵向比较)
(3)综上分析:在试验中对菊花花瓣的诱导、分化最好的组合:MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.5 mg/L和MS + 6-BA 4.0 mg/L + NAA 0.5mg/L。(综合分析)
(4)在分化培养后期，培养基中的组织出现褐化，并且部分培养瓶中褐化现象较为严重。
4 讨论与建议
4(, 结果讨论
1、在试验中探讨了激素NAA、6-BA对诱导愈伤组织和不定芽的影响，通
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过本次试验可知，诱导菊花最佳脱分化形成愈伤组织的培养基为MS+6-BA 1.0 mg,L+NAA0.5mg,L，在试验的三种培养基上，菊花愈伤组织都表现出形成时间长，生长缓慢的情况，这可能与前期对花瓣的消毒处理、刀切等方面有影响，三组愈伤诱导率的相同可能与试验中所设置的浓度梯度有关。
2、在探讨6-BA、NAA不同浓度组合对分化培养的影响，可以得出最佳分化培养基为MS+6-BA 4.0mg,L+NAA0.5mg,L。几组试验都没有分化出幼苗来，而缺在试验后期组织大部分出现褐化情况，这些可能与基因型和材料的选取本身，激素的浓度梯度设置有关。有待作进一步探索。
4. 2 褐化及其相关建议
在分化培养后期，培养基中的组织出现褐化，并且部分培养瓶中褐化现象较为严重。褐变是指外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激后活，使细胞内的酚类物质氧化成棕褐色醌类物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散致使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其它酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分
[2]化，最后变褐而死亡的现象。
对预防褐变的几点建议:
(1)选择适宜的外植体及最佳培养基:适当降低培养基无机盐浓度，降低细胞分裂素水平等，可显著减轻培养物褐变;(2)连续转移;(3)加抗氧化剂:如硫代硫酸钠、抗坏血酸(4)加活性碳;(5)加多胺类物质:如精胺、亚精胺[3]。
参考文献:
1、陈世昌 植物组织培养[M] 高等教育出版社
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