范文一：蛋白质谱

一、苏州普泰生物技术有限公司

4. 我需要用什麽样的胶跑电泳?

很多种聚丙烯酰胺凝胶与MS分析兼容，包括传统的Tris-Glycine凝胶，或市面上许多品牌的预制凝胶如 Novax NuPAGE Bis-Tris，Tris-Acetate凝胶。在蛋白质鉴定中，我们还没有观察到不同比例的一个凝胶或梯度凝胶， 或不同厚度的一个凝胶导致的显著影响。尽管如此，根据我们的经验我们还是建议不要使用Tricine凝胶 进行蛋白质鉴定。

5. 我需要用什麽样的染色方法?

凝胶可以用许多不同的染色方法染色，包括考马斯蓝染色，胶体考马斯染色，铜染色，锌染色，荧光染料染色和银染色。 传统的银染不兼容质谱分析，但一些修改的银染色程序，消除了以感光剂为主的glutaldehyde的使用，被认为更兼容 MS分析。有几种商业银染色包声称与MS兼容。但是根据我们的经验，等量的蛋白质，胶回收时使用所谓与 MS兼容的银染染色的胶带中肽的产量还是要比用胶体考马斯染色的胶带的产量低。虽然我们接受银染凝胶样品， 我们还是建议我们的客户尽量使用胶体考马斯染色，铜染色，锌染色方法以纯化足够的蛋白质样品（检测最低限量为 ng），而且使用银染时想要提纯更多的蛋白质太难了。从长远来看，优化纯化过程的收益往往是很大的， 可以大大提高鉴定的成功率，得到一个高可信度的蛋白质鉴定结果，而且这些经验对以后的工作也很重要。

此外，请小心以避免在此步骤中样品被污染。直接用手接触、使用脏的容器或者被污染了的试剂都将可能导致鉴定的失败！

6. 如何切割蛋白质胶带?

从凝胶中切割出蛋白条带时千万要十分小心！第一，采取一切预防措施，以避免用手或任何有可能被污染的表面直接接触到凝胶体， 如灯箱、刀片或使用过的容器。您需要戴上干净的手套，将胶体放置在灯箱下的干净塑料薄膜上（如Sara Wrap ），并使用干净的刀片和凝胶容器。请记住，即使是极小块的人体皮肤也可能含有比凝胶带上蛋白质量高出数百倍的角蛋白。 第二，切出来的凝胶切片的大小应接近该蛋白带的大小。太小的凝胶切片意味着宝贵的样品的损失，而过大的凝胶切片可能会降低 酶切的消化效率和肽的回收率。蛋白带被切下来之后，小心转移到一个干净的500μl离心管中。盖上盖，贴上标签： 用石蜡膜包裹，以防止凝胶片干燥（你也可以添加?10微升1％醋酸/水，以防止其干燥）。如果你需要切割出若干个蛋白带， 一个一个的做，以免这些蛋白带混淆。每个错误将很难再追查。

8. 凝胶带上最低需要多少蛋白质才能检测出来?

由于我们使用了Nano-LC-MS技术用于蛋白质的鉴定，我们将有很大的机率可以鉴定出一个非常微弱的考马斯染色带。我们不能保证100％的成功，因为一个含量微弱的条带有可能实际上只是一个错觉，而不是一个真正的蛋白带。不过，我们可以对所有考马斯染色的样品保证质量（如果鉴定失败将免费），即使这个条带是个错觉。

Nano-LC-MS/MS技术的另一个优势是它能够鉴别一个复杂混合物中的蛋白质。我们鉴定出在一个单一的凝胶带中超过 5种蛋白质或在一个溶液样品中超过30种蛋白质的情况并不罕见。

丁香园

MALDI-TOF/TOF原理：

基质辅助激光解析（MALDI）技术是将样品均匀包埋在基质中，基质吸收激光提供的能量而蒸发，携带部分样品分子进入气相，并将一部分能量传递给样品分子使其离子化。 · 离子通常带1-2个电荷，对分子质量较大的样品而言，不会形成复杂的多电荷图，因此对图谱的解析比较清楚；

· 对杂质的忍耐性较好；

LC-ESI-MSMS原理：

电喷雾（ESI）技术是将待测分子溶解在溶剂中，以液相方式通过毛细管达到喷雾口，在喷雾口高压电场作用下形成带电荷的微滴，随着微滴中的挥发性溶剂蒸发，微滴表面的电荷体密度随半径减少而增加，达到某一临界点时，样品以离子化的方式从液滴表面蒸发，进入质量分析器。

· 电喷雾离子化方式容易形成多电荷离子，因此在较小的M/Z范围内可检测到大分子质量的分子；

· 采用液相方式进样，一般与液相色谱（LC）连用，根据样品在色谱中不同的保留时间对其先进行分离后鉴定，大大提高了分析的效率和精确度。

样品要求：

1. 防止角蛋白污染

2. 样品状态：液体、固体或胶内蛋白质（接受考马斯亮兰染色和银染样品鉴定）

3、含盐量： 挥发性无机盐< 20="" mm;=""><>

4、不少于200 ug /一块胶（银染）；

5、胶内蛋白质鉴定，蛋白质样品量不少于1mg/一块胶（考马斯亮兰染色）

蛋白质鉴定结果常见问题：

1、由于角蛋白等蛋白质的污染，造成鉴定为污染蛋白。

2、由于蛋白量过少引起鉴定结果的评分低，可信度不高。

3、由于蛋白质纯度不足，造成鉴定结果为混合蛋白质。

4、由于蛋白质为未知蛋白，造成鉴定无结果。

注意事项：

1、推荐采用考马斯亮兰染色。因为该方法的成功率较高，而银染的成功率则会低很多。

2、银染的方法为快速银染法。常规银染法不适用质谱鉴定。

3、考马斯亮蓝染色样品的上样量>1mg

4、银染法得上样量>0.6mg

博奥生物

蛋白质及多肽质谱鉴定

博奥生物有限公司蛋白质实验室于2006年开始对外提供多肽和蛋白质测试服务，包括多肽和蛋白质的分子量和序列测定，蛋白种类鉴定。博奥采用串联质谱法（Tandem Mass Spectrometry, MS/MS）鉴定蛋白，可靠性高。蛋白经胰酶消化形成的肽段进入质谱，一级质谱检测多肽分子的大小，然后再将肽段打碎，形成一系列离子即N端离子系列（B系列）和C端碎片离子系列（Y系列）。质谱再检测碎片离子的大小，即二级质谱。将质谱数据与蛋白数据库进行比对，获得肽段的序列，特定的多肽序列对应着特定的蛋白，从而鉴定出待检测蛋白。除了鉴定单个蛋白，我们的液相色谱和质谱联用平台（Liquid Chromatography- Tandem Mass Spectrometry, LC-MS/MS）还具有分析混合蛋白的能力。MALDI-TOF MS（Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry）是另一种常用的质谱平台，通过肽指纹图谱（Peptide Mass Fingerprinting, PMF）来鉴定蛋白质。MALDI-TOF MS的鉴定结果没有没有氨基酸序列信息，最终得到的是蛋白数据库多个质量相同或相似的候选蛋白列表，相对而言可靠性较低，并且MALDI-TOF MS无法鉴定混合蛋白。

1. 单个蛋白鉴定用于鉴定纯化的单个蛋白的溶液或粉末，或经过SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）的单个条带或二维电泳的单个点。

蛋白酶解成多肽。

液相分离多肽，离子化的多肽进入质谱，母离子检测，母离子裂解成一系列子离子，子离子检测。

数据库检索。

人工验证，输出报告。

2. 蛋白混合物的鉴定用于鉴定含多种蛋白的混合物，根据样品的复杂程度采取不同的策略分离后再进行质谱鉴定。

3. 差异蛋白分析相对定量：比较两组细胞/体液中的蛋白，找出差异蛋白。

广州辉骏生物技术有限公司

由于是要鉴定混合蛋白，所以做LC-MS-MS 比较适合

可以用Tricine胶

可以不跑胶，直接把蛋白提取出来，然后酶切做质谱

这个都没有关系，质谱检测的是肽段的分子量，比这个还要小的。跑了胶切条带还是要再酶切的

范文二：影响蛋白质检测结果的分析

影响蛋白质检测结果的分析 352

【经验交流】

[文章编号]1004--8685(2002)03—0352—Ol

主垦里生熊堕塞查堡旦卷第3

期}lireJwmBlofHealthLaboratoryTeehnolo~X)02.June.12.No.3

影响蛋白质检测结果的分析

(中图分类号]R155.57[文献标识码]B

马玉华,陈冬梅

(伊犁州质量与计量检测所,新疆835O0o) 蛋白质是生命的物质基础,同时也是衡量产品营养成分

乳制品,豆制品,调味品以及饲料中都 高低的一项重要指标.

有蛋白质这一检测项目,检测结果的准确与否,与消费者和企 业利益都密切相关.目前,许多检测机构,仍然采用GB5009.5 规定的方法,检测产品中蛋白质的百分含量.本人根据长期 检验所积累的经验,略述在整个检测过程中的反应方程和相 应的注意事项.

1试验原理

蛋白质是含氮的有机化合物.食品与硫酸和催化剂一同 加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵.

用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准 然后碱化蒸馏使氨游离,

溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量. 2样品称量

2.1所称取的样品,一定要均匀才具有代表性,有些颗粒样品 如饲料,常有许多大小不等的小石子,如果所称样品未经均 质,不但影响检测结果的准确性,连平行试验也难保在允许误 差范围之内.

2.2消化所用凯氏定氮烧瓶一定要沽净干燥,样品一定要加 至烧瓶底部,如果烧瓶内壁未干,所加试样很容易残留于烧瓶 颈部.这时要用少量蒸馏水冲洗入内,否则会造成试样损耗 而导致结果偏低.

3样品消化

3.1消化过程的反应式如下:

so4so,十十O2十+0

c+O2cO2十

NH2一R—COOH+H2so4一NH2一R—OH+CO2十+sch+H20

NIt2一R—COOH+H2SO4一NH3十+co2+so2十+H20 NH3+H2SO4一(NH4)2SO4

3.2根据上述方程式可知,硫酸在催化剂作用下,既可以炭化 分解样品又与试样中的蛋白质发生反应,生成最终产物 (NH4)2SO4,在整个消化过程中,硫酸的使用量对消化反应影响 很大,硫酸不足,会造成样品炭化不完全,消化不彻底,从而导 致检测结果与真实值之间出现偏差.

3.3硫酸为强酸溶液,在催化剂作用下,沸点会急剧上升,因 此消化初始需用小火加热,以防瓶内产生瀑沸现象.消化结 束,消煮液必须放凉后才可加入蒸馏水,也是这个道理.其 次,消化时间是否充足,对消化是否彻底,结果是否准确,也至 关重要.一般情况下,待消煮液变为透明青绿色后,再大火消 4蒸馏过程

4.1蒸馏过程中的反应方程式如下

(NH4)2SO4+NaOH—NH}十+Na2SOa+H2O NH3+H3]303一(NH4)2B407+H2O 4.2蒸馏装置蒸馏过程实质上是氨的回收过程,在此环节 中防止氨的损失最为关键,因此,蒸馏装置必须吻合紧密,防 止漏气.首先,冷凝管与烧瓶连接处,橡胶塞与瓶口一定要旋 紧密封,其次冷凝管下端应插入盛有硼酸和指示剂的回收瓶

液面内部,接近底部,即保证氨气畅通排出,又保证生成的氨 气能完全被吸收.另外,为避免氢氧化钠从凯氏烧瓶口加入 时有氨的损失,可增加如下图所示的一个简易漏斗装置.氢 氧化钠由漏斗口松动夹子后迅速加入,然后夹紧胶管.图示 1.定氮球

2.氧氧化钠溶液漏斗

3.弹簧夹

4.橡皮塞

4.3蒸馏蒸馏一开始,首先要在加入足量的氢氧化钠后轻 轻摇匀,然后开始加热,不能先开启电炉再加氢氧化钠,以防 瓶内温度急剧上升.其次,预示蒸馏完毕,烧瓶内出现瀑沸现 象时,应先将冷凝管下端移离回收瓶液面,续蒸2min后再停止 加热,切忌先关电炉,再移取回收瓶,否则会引起倒吸现象,致 使整个试验失败.

5滴定过程

5.1滴定过程反应式如下:

(NH4)213407+HC1+H2O——NH4Cl+H3B0 5.2滴定根据用已知浓度的强酸标准溶液滴定所消耗的毫 升数,可以计算出样品中蛋白质的百分含量,因此,滴定的关 键在于滴定终点的把握切忌滴定过量.当然空白试验也是必 不可缺的.

6讨论

总之,取样,消化,蒸馏中的每个环节,都与测定结果密切 相关,因此,检验人员不但要严格按标准操作,还要不断总结 经验,改进操作方法,以保证检验结果的准确,可靠. 参考文献

[1]食品卫生检验方法理化部分[M].中国标准出版社,1997:3. [2]食品物理与化学分析方法[M].轻工业出版社,1987:6. (收稿日期:20O2—02—05)

范文三：影响蛋白质检测结果的分析

352

【经验交流】

〔文章编号〕1004—8685(2002) 03—0352—01

影响蛋白质检测结果的分析

马玉华, 陈冬梅

(伊犁州质量与计量检测所, 新疆835000)

〔中图分类号〕　R155. 5+7　　〔文献标识码〕　B 　

　　蛋白质是生命的物质基础, 同时也是衡量产品营养成分

高低的一项重要指标。乳制品、豆制品、调味品以及饲料中都有蛋白质这一检测项目, 检测结果的准确与否, 与消费者和企业利益都密切相关。目前, 许多检测机构, 仍然采用G B5009. 5规定的方法, 检测产品中蛋白质的百分含量。本人根据长期检验所积累的经验, 略述在整个检测过程中的反应方程和相应的注意事项。1　试验原理

蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化, 使蛋白质分解, 然后碱化蒸馏使氨游离, 溶液滴定, , 。2　样品称量211　所称取的样品, , 有些颗粒样品如饲料, 常有许多大小不等的小石子, 如果所称样品未经均质, 不但影响检测结果的准确性, 连平行试验也难保在允许误差范围之内。212　消化所用凯氏定氮烧瓶一定要洁净干燥, 样品一定要加至烧瓶底部, 如果烧瓶内壁未干, 所加试样很容易残留于烧瓶颈部。这时要用少量蒸馏水冲洗入内, 否则会造成试样损耗而导致结果偏低。3　样品消化311　消化过程的反应式如下:

H 2S O4C +O 2

催化剂△

(NH 4) 2S O 4+NaOH NH 3+H 3BO 3

NH 3↑+Na 2S O 4+H 2O

(NH 4) 2B 4O 7+H 2O

412　蒸馏装置　蒸馏过程实质上是氨的回收过程, 在此环节

中防止氨的损失最为关键, 因此, 蒸馏装置必须吻合紧密, 防

止漏气。首先, 冷凝管与烧瓶连接处, 橡胶塞与瓶口一定要旋紧密封, 液面内部, , , 又保证生成的氨。氢, 然后夹紧胶管。图示

413　蒸馏　蒸馏一开始, 首先要在加入足量的氢氧化钠后轻

S O 2↑+O 2↑+H 2O

NH 2-R -OH +CO 2↑+S O 2+H 2O NH 3↑+CO 2+S O 2↑+H 2O

CO 2↑

NH 2-R -COOH +H 2S O 4NH 2-R -COOH +H 2S O 4NH 3+H 2S O 4

(NH 4) 2S O 4

312　根据上述方程式可知, 硫酸在催化剂作用下, 既可以炭化

分解样品又与试样中的蛋白质发生反应, 生成最终产物

(NH 4) 2S O 4, 在整个消化过程中, 硫酸的使用量对消化反应影响很大, 硫酸不足, 会造成样品炭化不完全, 消化不彻底, 从而导致检测结果与真实值之间出现偏差。313　硫酸为强酸溶液, 在催化剂作用下, 沸点会急剧上升, 因此消化初始需用小火加热, 以防瓶内产生瀑沸现象。消化结束, 消煮液必须放凉后才可加入蒸馏水, 也是这个道理。其次, 消化时间是否充足, 对消化是否彻底, 结果是否准确, 也至关重要。一般情况下, 待消煮液变为透明青绿色后,

再大火消煮2h -3h 。4　蒸馏过程411　蒸馏过程中的反应方程式如下:

轻摇匀, 然后开始加热, 不能先开启电炉再加氢氧化钠, 以防

瓶内温度急剧上升。其次, 预示蒸馏完毕, 烧瓶内出现瀑沸现象时, 应先将冷凝管下端移离回收瓶液面, 续蒸2min 后再停止加热, 切忌先关电炉, 再移取回收瓶, 否则会引起倒吸现象, 致使整个试验失败。5　滴定过程511　滴定过程反应式如下:

(NH 4) 2B 4O 7+HCl +H 2O NH 4Cl +H 3BO 4

512　滴定　根据用已知浓度的强酸标准溶液滴定所消耗的毫升数, 可以计算出样品中蛋白质的百分含量, 因此, 滴定的关键在于滴定终点的把握切忌滴定过量。当然空白试验也是必不可缺的。6　讨论

总之, 取样、消化、蒸馏中的每个环节, 都与测定结果密切相关, 因此, 检验人员不但要严格按标准操作, 还要不断总结经验, 改进操作方法, 以保证检验结果的准确、可靠。

参考文献

[1]　食品卫生检验方法　理化部分[M].中国标准出版社,1997:3.[2]　食品物理与化学分析方法[M].轻工业出版社,1987:6.

(收稿日期:2002-02-05)

范文四：影响蛋白质检测结果的分析

352 经验交流

文章编号 1004 8685(2002)03 0352 01

中国卫生检验杂志2002年6月第12卷第3期 Chi nese Journal of Heal th Laborat ory Technol ogy 2002 June 12 No 3

影响蛋白质检测结果的分析

马玉华, 陈冬梅

(伊犁州质量与计量检测所, 新疆835000)

中图分类号 R155. 5+7 文献标识码 B

蛋白质是生命的物质基础, 同时也是衡量产品营养成分

高低的一项重要指标。乳制品、豆制品、调味品以及饲料中都有蛋白质这一检测项目, 检测结果的准确与否, 与消费者和企业利益都密切相关。目前, 许多检测机构, 仍然采用GB5009. 5规定的方法, 检测产品中蛋白质的百分含量。本人根据长期检验所积累的经验, 略述在整个检测过程中的反应方程和相应的注意事项。

1 试验原理

蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化, 使蛋白质分解, 分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离, 用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定, 根据酸的消耗量乘以换算系数, 即为蛋白质含量。2 样品称量

2 1 所称取的样品, 一定要均匀才具有代表性, 有些颗粒样品如饲料, 常有许多大小不等的小石子, 如果所称样品未经均质, 不但影响检测结果的准确性, 连平行试验也难保在允许误差范围之内。

2 2 消化所用凯氏定氮烧瓶一定要洁净干燥, 样品一定要加至烧瓶底部, 如果烧瓶内壁未干, 所加试样很容易残留于烧瓶颈部。这时要用少量蒸馏水冲洗入内, 否则会造成试样损耗而导致结果偏低。3 样品消化

3 1 消化过程的反应式如下:

H 2SO4C+O 2

催化剂(NH 4) 2SO 4+NaOH 3 +Na 2SO 4+H 2O NH 3+H 3BO 3NH 4) 2B 4O 7+H 2O

4 2 蒸馏装置 蒸馏过程实质上是氨的回收过程, 在此环节中防止氨的损失最为关键, 因此, 蒸馏装置必须吻合紧密, 防止漏气。首先, 冷凝管与烧瓶连接处, 橡胶塞与瓶口一定要旋紧密封, 其次冷凝管下端应插入盛有硼酸和指示剂的回收瓶液面内部, 接近底部, 即保证氨气畅通排出, 又保证生成的氨气能完全被吸收。另外, 为避免氢氧化钠从凯氏烧瓶口加入时有氨的损失, 可增加如下图所示的一个简易漏斗装置。氢氧化钠由漏斗口松动夹子后迅速加入, 然后夹紧胶管。图示

4 3 蒸馏 蒸馏一开始, 首先要在加入足量的氢氧化钠后轻轻摇匀, 然后开始加热, 不能先开启电炉再加氢氧化钠, 以防瓶内温度急剧上升。其次, 预示蒸馏完毕, 烧瓶内出现瀑沸现象时, 应先将冷凝管下端移离回收瓶液面, 续蒸2min 后再停止加热, 切忌先关电炉, 再移取回收瓶, 否则会引起倒吸现象, 致使整个试验失败。5 滴定过程

5 1 滴定过程反应式如下:

(NH 4) 2B 4O 7+HCl+H 2O 4Cl+H 3B O 4

5 2 滴定 根据用已知浓度的强酸标准溶液滴定所消耗的毫升数, 可以计算出样品中蛋白质的百分含量, 因此, 滴定的关键在于滴定终点的把握切忌滴定过量。当然空白试验也是必不可缺的。

6 讨论

总之, 取样、消化、蒸馏中的每个环节, 都与测定结果密切相关, 因此, 检验人员不但要严格按标准操作, 还要不断总结经验, 改进操作方法, 以保证检验结果的准确、可靠。

参

考

文

献

[1] 食品卫生检验方法 理化部分[M]. 中国标准出版社, 1997:3. [2] 食品物理与化学分析方法[M]. 轻工业出版社, 1987:6.

(收稿日期:2002-02-05)

2 +O 2 +H 2O

2-R-O H+CO 2 +SO 2+H 2O 3 +CO 2+SO 2 +H 2O

2

NH 2-R-COOH+H 2SO 4NH 2-R-COOH+H 2SO 4NH 3+H 2SO 4

4) 2SO 4

3 2 根据上述方程式可知, 硫酸在催化剂作用下, 既可以炭化

分解样品又与试样中的蛋白质发生反应, 生成最终产物(NH 4) 2SO 4, 在整个消化过程中, 硫酸的使用量对消化反应影响很大, 硫酸不足, 会造成样品炭化不完全, 消化不彻底, 从而导致检测结果与真实值之间出现偏差。

3 3 硫酸为强酸溶液, 在催化剂作用下, 沸点会急剧上升, 因此消化初始需用小火加热, 以防瓶内产生瀑沸现象。消化结束, 消煮液必须放凉后才可加入蒸馏水, 也是这个道理。其次, 消化时间是否充足, 对消化是否彻底, 结果是否准确, 也至关重要。一般情况下, 待消煮液变为透明青绿色后, 再大火消煮2h-3h 。

4 蒸馏过程

4

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范文五：蛋白质电泳暨分析结果通知单

*請於收到此單三日內，PI確認簽名後，寄回本實驗室。

*本實驗結果僅供研究參考，恕不負任何法律責任。

通知日期： 年 月 日

申請部門 主 持 人 申 請 人 收件編號 收件日期 送件總數

名稱 電泳大小 染色方式 備 註 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

可能影響結果的原因 PI意見 , 樣品製備不佳 , 結果與預期相符

, 其他： , 1 Dimension

, 2 Dimension

, 其他：

費用(NT:元) PI確認

*請於收到此單三日內，PI確認簽名後，寄回本實驗室。

*本實驗結果僅供研究參考，恕不負任何法律責任。

通知日期： 年 月 日

申請部門 主 持 人 申 請 人 收件編號 收件日期 送件總數

名稱 件數 單價 小計 1. MALDI-TOF 2. MALDI-TOT/TOF 3. 數據分析 4. 5.

可能影響結果的原因 PI意見 , 1. 樣品含量偏低 , 結果與預期相符

, 其他： , 2. 生物性物質污染量偏高

, 3. 非生物性物質污染量偏高

建議事項:

合計費用(NT:元) PI確認

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