范文一:DMEM高糖配方培养基
DMEM 高糖配方 /F12培养基说明书
产品代号:MD207-050
一.【组成成分】
成分 mg/L 成分 mg/L 成分 mg/L
无水氯化钙 116.6 L-亮氨酸 59.05 亚油酸 0.042
五水硫酸铜 0.0013 L-赖氨酸盐酸盐 91.25 硫辛酸 0.105
九水硝酸铁 0.05 L-蛋氨酸 17.24 酚红 8.1
七水硫酸亚铁 0.417 L-苯丙氨酸 35.48 1,4-丁二胺二盐酸盐 0.081
氯化钾 311.8 L-丝氨酸 26.25 丙酮酸钠 55
氯化镁 28.64 L-苏氨酸 53.45 维生素 H 0.0035
无水硫酸镁 48.84 L-丙氨酸 4.45 D-泛酸钙 2.24
氯化钠 6999.5 L-天门冬酰胺 7.5 氯化胆碱 8.98
无水磷酸二氢钠 54.35 L-天门冬氨酸 6.65 叶酸 2.65
磷酸氢二钠 71.02 L-半胱氨酸盐酸盐 17.56 i-肌醇 12.6
七水硫酸锌 0.432 L-谷氨酸 7.35 烟酰胺 2.02
L-精氨酸盐酸盐 147.5 L-脯氨酸 17.25 盐酸吡哆醛 2
L-胱氨酸盐酸盐 31.29 L-色氨酸 9.02 盐酸吡哆醇 0.031
L-谷氨酰胺 365 L-酪氨酸 38.4 核黄素 0.219
甘氨酸 18.75 L-缬氨酸 52.85 盐酸硫胺 2.17
L-组氨酸盐酸盐 31.48 D-葡萄糖 3151 胸苷 0.365
L-异亮氨酸 54.47 次黄嘌呤 2 维生素 B12 0.68
二.【产品指标】
外观 粉红色固体粉末
溶解性 完全溶解,溶液澄明。
pH 值
①加 NaHCO3 6.60~7.20
②不加 NaHCO3 5.50~6.10
水分(%) ≤5.0
渗透压(mOsm/kgH2O)
①加 NaHCO3 274~302
②不加 NaHCO3 238~263
细菌内毒素(EU/ml) ≤10
微生物检查(CFU/g) ≤1000
细胞生长试验 细胞形态 与标准细胞形态相似
细胞数量 加 10%小牛血清培养 4天, 细胞密度从 104细胞 /ml增加到 105细胞 /ml。
三 . 【配制方法】
⑴ 将一袋培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水将袋内残留培养基洗下, 并入容器。加注射用水(水温 20℃~30℃)到 950毫升,轻微搅拌溶解。
⑵ 加入 2.438克碳酸氢钠。
⑶ 轻微搅拌溶解,加注射用水至 1升。
⑷ 用 1mol / L 氢氧化钠溶液或 1mol / L盐酸溶液调 pH 至所需值。 ⑸ 用 0.2μm滤膜正压过滤除菌。
⑹ 溶液应在 2℃-8℃下避光保存。
四.【贮藏】 2℃-8℃冷藏,干燥、密封、避光贮藏。
范文二:1 DMEM高糖基本培养基
BioWiseTech Co., LTD.
www.biotowntek.com 1 AdvCell ? DMEM 高糖基本培养基
AdvCell?
DMEM 高糖基本培养基是在 MEM 培养基的基础上研制的。与 MEM 比较增加了各种成分用量, 培养基高糖特性。有利于细胞停泊于一个位置生长,适于生长较快、附着较困难的细胞等。产品严格无 菌,无病毒和支原体,性能稳定,使用该培养基能使干细胞在理想营养平衡状态下进行多代扩增而不发 生分化(至少在 10代以内)。
★ 产品号
Cat No : BDMEM0001
★ 产品组成
★ 产品特点
1. 氨基酸含量为依格尔培养基的 2倍,且含有非必需氨基酸,如甘氨酸等;
2. 维生素含量为依格尔培养基的 4倍;
3. 含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸;
4. 含有微量的铁离子。
★ 产品适用范围
DMEM培养基广泛应用于各种原代哺乳细胞及细胞系的培养;如原代成纤维细胞、原代血管内皮细胞 的培养。
范文三:各培养基成分
1.营养肉汤
成分:蛋白胨 10g,牛肉膏 3g,氯化钠 5g,蒸馏水 1000mL,pH7.4。 制法:按上述成分混合,溶解后校正 pH,121℃高压灭菌 15min。
2.营养琼脂培养基
成分:蛋白胨 10g, 牛肉膏 3g, 氯化钠 5g, 琼脂 17g, 蒸馏水 1000mL, pH7.2。
制法:将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中,校正 pH,加入琼脂,分装于烧瓶 内,121℃,15min 高压灭菌备用。
3.MRS 培养基
成分:蛋白胨 10g,牛肉膏 10g,酵母粉 5g,K2HPO42g,柠檬酸二铵 2g, 乙酸钠 5g, 葡萄糖 20g, 吐温 80 1mL, MgSO4 .7H2O 0.58g, MnSO4 4H2O 0.25g, (琼脂 15~20g) ,蒸馏水 1000mL。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调 pH 至 6.2~6.4,分装 于三角瓶中,121℃,灭菌 15min。
4.脱脂乳培养基
成分:牛奶,蒸馏水。
制法:将适量的牛奶加热煮沸 20~30min,过夜冷却,脂肪即可上浮。除去上 层乳脂即得脱脂乳。 将脱脂乳盛在试管及三角瓶中, 封口后置于灭菌锅中在 108℃条件下蒸汽灭菌 10~15min,即得脱脂乳培养基。
5.培养基 A
成分:蛋白胨 10.0g, 酵母提取物 1.0g, 葡萄糖 10.0g, NaCL5.0g, 琼脂 15.0g, 水 1000mL。制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调 pH 至 7.0~7.2,分装于三角瓶中,121℃,灭菌 15min。
6.PTYG 培养基
成分:胰胨 Tryptone(Oxoid)5g,大豆蛋白胨 5g,酵母粉(Oxoid)10g, 葡萄糖 10g,吐温 80 0 1mL,琼脂 15~20g,L-半胱氨酸盐酸盐 0.05g,盐溶 液 4mL。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调 pH 至 6.8~7.0,分装 于三角瓶中,115℃灭菌 30min。
盐溶液制备:无水氯化钙 0.2g,K2HPO41.0g,KH2PO41.0g,MgSO4。
7H2O 0.48g,NaCO3 10g,NaCL 2g,蒸馏水 1000mL,溶解后备用。 7.豆芽汁液体培养基
成分:豆芽汁 10mL,磷酸氢二铵 1g,KCL 0.2g,MgSO4.7H2O 0.2g,琼脂 20g。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调 pH 至 6.2~6.4,分装 于三角瓶中,0.04%的溴甲酚紫酒精溶液(黄色 5.2~6.8紫色)作为指示剂, 115℃灭菌 20min。
豆芽汁制备:将黄豆芽或绿豆芽 200g 洗净,在 1000mL 中煮沸 30 min,纱布 过滤得豆芽汁、补足水分至 1000mL。
8.麦芽汁琼脂培养基
成分:优质大麦或小麦,蒸馏水,碘液。
制法:取优质大麦或小麦若干,浸泡 6~12h,置于深约 2cm 的木盘上摊平, 上 盖纱布,每日早、中、晚各淋水一次,麦根伸长至麦粒两倍时,停止发芽晾干 或烘干。
称取 300g 麦芽磨碎,加 1000mL 水,38℃保温 2h,再升温至 45℃,30min,
再提高到 50℃,30min,再升至 60℃,糖化 1~1.5h。
取糖化液少许,加碘液 1~2滴,如不为蓝色,说明糖化完毕, 用文火煮半小时, 四层纱布过滤。如滤液不清,可用一个鸡蛋清加水约 20mL 调匀,打至起沫, 倒入糖化液中搅拌煮沸再过滤,即可得澄清麦芽汁。用波美计检测糖化液浓度, 加水稀释至 10倍,调 pH5~6,用于酵母菌培养;稀释至 5~6倍,调 pH7.2, 可用于培养细菌,121℃灭菌 20min。
9.查(察)氏培养基
成分:NaNO3 2g, K2HPO4 1g, MgSO4. 7H2O 0.5g, KCL 0.5g, FeSO4.7H2O 0.01g,蔗糖 30g,琼脂 15~20g,蒸馏水 1000mL,pH 值自然。
制法:加热溶解,分装后 121℃灭菌 20min。
10.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)
成分:马铃薯(去皮)200g,葡萄糖(或蔗糖)20g,琼脂 20g,水 1000mL。
制法:pH值自然。将马铃薯去皮、洗净、切成小块,称取 200g 加入 1000mL 蒸馏水,煮沸 20min,用纱布过滤,滤液补足水至 1000mL,再加入糖和琼脂, 溶化后分装,121℃灭菌 20min。另外,用少量乙醇溶解 0.1g 氯霉素,加入 1000mL 培养基中,分装灭菌后可用于食品中霉菌和酵母菌计数、分离。
11.PY 基础培养基
成分:蛋白胨 0.5g,酵母提取物 1.0g,胰酶解酪胨 (Trypticase) 0.5g,盐溶液 Ⅱ 4.0mL,蒸馏水 1000mL。
盐溶液Ⅱ成分:CaCL2 0.2g, MgSO4.7H2O 0.48g, K2HPO4 1.0g, KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCL 2.0g,蒸馏水 1000mL。
制法:加热溶解,分装后 121℃灭菌 20min。
12.甘露醇琼脂培养基(MSA)
成分:牛肉浸膏 1g,月示胨 NO.3(Difco)10g,D-甘露醇 10g,NaCL 75g, 琼脂约 13g,酚红 0.025g,水 1000mL,pH7.2~7.6
制法:按量将各成分(酚红除外)混合,加热使完全溶解,调 pH 至 7.4±0.2。 加 1%的酚红溶液 2.5mL,混匀。121℃高压灭菌 15min
13.高氏一号(淀粉琼脂)培养基(主用于放线菌、霉菌培养)
可溶性淀粉 20g, KNO3 1g, NaCL 0.5g, K2HPO40.5g, MgSO4.7H2O 0.5g, FeSO4.7H2O 0.01g,琼脂 20g,蒸馏水 1000mL,pH7.2~7.4,121℃灭菌
20min。
14.淀粉铵盐培养基 (主要用于霉菌、放线菌培养)
可溶性淀粉 10g, (NH4) 2SO4 2g, K2HPO4 lg, MgSO4.H2O lg, NaCL 1g, CaCO3 3g, 蒸馏水 1000mL, pH7.2~7.4, 121℃灭菌 20min。 若加入 15~20g琼脂即成固体培养基。
15.麦氏培养基(醋酸钠琼脂培养基)
葡萄糖 1.0g, KCL 1.8g, 酵母汁 2.5g, 醋酸钠 8.2g, 琼脂 15g, 蒸馏水 1000mL, pH 自然,0.7kg/cm2灭菌 30min。
16.高盐察氏培养基(用于霉菌和酵母菌计数、分离用)
硝酸钠 2g,磷酸二氢钾 1g,硫酸镁(MgSO4 7H2O)0.5g,氯化钾 0.5g, 硫酸亚铁 0.01g,氯化钠 60g,蔗糖 30g,琼脂 20g,蒸馏水 1000mL,115℃灭菌 30min。
注:①分离食品和饮料中的霉菌和酵母可选用马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基和/或 孟加拉红培养基。②分离粮食中的霉菌可用高盐察氏培养基。
17.糖、醇类发酵基础培养基
(1)一般细菌常以休和利夫森二氏培养基
蛋白胨 5g,NaCL 5g,K2HPO4 0.2g,糖醇(葡萄糖或其它糖、醇)10g,琼脂 5~6g,1%溴甲酚紫(溴百里香草酚蓝)3mL,蒸馏水 1000mL,pH7.0~7.2, 分装试管,培养基高度约 4.5cm,115℃灭菌 20min。
(2)芽孢菌培养基
(NH4)2HPO4 1.0g, KCL 0.2g, MgSO4.7H2O 0.2g, 酵母膏 0.2g, 琼脂 5~6g, 糖或醇类 10.0g,蒸馏水 1000mL,溴甲酚紫(0.04%)15mL,pH7.0~7.2, 分装试管,培养基高度约 4~5cm,112℃灭菌 30min。
(3)乳酸菌培养基
蛋白胨 5g, 牛肉膏 5g, 酵母膏 5g, 吐温 80(Tween 80) 0.5mL, 糖或醇 10g, 琼脂 5~6 g,蒸馏水(自来水)1000mL,加入 1.6%溴甲酚紫溶液约 1.4mL。 以上调 pH6.8~7.0,分装试管,112℃灭菌 30min。
18.硝酸盐培养基(硝酸盐还原试验用)
蛋白胨 5.0g, KNO30.2g, 蒸馏水 1000 mL, pH7.4, 每管分装 4~5mL, 121℃灭菌 15~20min。
吲哚实验培养基:1%胰蛋白胨,调 pH7.2~7.6,分装 1/3~1/4试管,115℃ 灭菌 30min。
19.硫化氢试验(纸条法)培养基
蛋白胨 10g, NaCL 5g, 牛肉膏 10g, 半胱氨酸 0.5g, 蒸馏水 1000mL, pH7.0~ 7.4,分装试管,每管液层高度 4~5cm,112℃灭菌 20~30min。另外将普通 滤纸剪成 0.5~1cm宽的纸条,长度根据试管与培养基高度而定。用 5%~10%的醋酸铅将纸条浸透,然后用烘箱烘干,放于培养皿中灭菌备用。
20.尿素培养基(尿酶试验)
成分:蛋白胨 1.0g, 葡萄糖 1.0g, NaCL 5.0g, KH2PO4 2.0 g, 0.4%酚红 3.0mL, 琼脂 20.0g,20%尿素 100.0mL,pH7.1~7.4。
制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正 pH 值, 加入琼脂, 加热熔化并 分装于三角瓶,121℃灭菌 15min,冷却至 50~55℃,加入过滤除菌的尿素溶 液,分装于灭菌试管内,摆成琼脂斜面备用。
21.氮源利用基础培养基
KH2PO4 1.36g, NaH2PO4 2.13g, MgSO47H2O 0.2g, FeSO4.7H2O 0.2g,
CaCL2 0.5g,葡萄糖 10.0g,蒸馏水 1000mL。
将需要测定的氨基酸、氨态氮(如磷酸氢二氨) 、硝态氮(如硝酸钾)加入到上 述基础培养基中, 使其终浓度为 0.05~0.1%, 如测定菌不能利用葡萄糖为碳源, 可用其它碳源代替(终浓度为 0.2~0.5%) ,另做一份不加氮源的空白对照,调 pH7.0~7.2,分装于试管,每管 4~5mL,112℃灭菌 20~30min,制备出的培 养基要求无沉淀。
22.甲基红培养基(M.R及 V-P 试验用)
蛋白胨 7.0g, 葡萄糖 5.0g, K2HPO4(或 NaCL) 5g, 水 1000mL, pH7.0~7.2, 每管分装 4~5mL,115℃灭菌 30min。
23.动力、靛基质、尿素(MIU)综合培养基 (用于检验细菌运动性、吲哚、 尿素酶用)
蛋白胨(含色氨酸)30 g,KH2PO4 2g、NaCL 5g、琼脂 3 g、0.2%酚红酒精 溶液 2mL、尿素 20g、蒸馏水 1000mL。分装于小试管,112℃灭菌 15min, 灭菌后液体应呈淡黄色。
24.半固体培养基(用于细菌的动力试验)
牛肉膏 5.0g,蛋白胨 10.0g,琼脂 3~5g,蒸馏水 1000mL,pH7.2~7.4,熔
化后分装试管(8mL)121℃灭菌 15min,取出直立试管待凝固。
25.M17琼脂培养基(分离、培养乳球菌等的选择培养基)
植物蛋白胨 5g,酵母粉 5g,聚蛋白胨 5g,抗坏血酸 0.5g,牛肉膏 2.5g, MgSO47H2O 0.01g,ß-甘油磷酸二钠 19g,蒸馏水 1000mL,121℃ 灭菌 15min。
26.蛋白胨水溶液(靛基质试验用)
蛋白胨 20.0g,NaCL 5.0g,蒸馏水 1000mL,pH7.4,121℃灭菌 15min。 27.精氨酸双水解酶实验培养基
成分:蛋白胨 1g,氯化钠 5g,K2HPO40.3g,L-精氨酸 10g,琼脂 10g,酚 红 0.01g,蒸馏水 1000mL。
制法:除酚红外,将以上各成分溶解,调节 pH7.0~7.2,加入指示剂,分装试 管,培养基高约 4~5cm,121℃灭菌 20min 备用。
28.葡萄糖氧化发酵培养基
成分:蛋白胨 2g,氯化钠 5g,1%溴百里酚蓝水溶液 3mL,琼脂 5~6g,
K2HPO40.2g,葡萄糖 1%,蒸馏水 1000mL。
制法:除溴百里酚蓝外,溶解以上各成分,调节 pH 值为 6.8~7.0,分装试管, 用 115℃灭菌 20min 备用。
29.假单胞菌选择培养基(PSA)
基础成分:多价胨 16g, 水解酪蛋白 10g, 硫酸钾 10g, 氯化镁 1.4g, 琼脂 11g, 甘油 10mL,蒸馏水 1000mL,pH7.1±0.2。
CFC 选择添加物:溴化十六烷基三甲胺 10mg/L,梭链孢酸钠 10mg/L,头孢 菌素 50mg/L。
制法:先将基础成分加热煮沸使之完全溶解,121℃,15min 条件下灭菌。冷 却到 50℃备用。当基础培养基冷却到 50℃后加入溶解后过滤除菌的 CFC 补充 物,完全混合后倒平板备用。
30.乳糖胆盐发酵培养基
成分:蛋白胨 20g,猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g,乳糖 10g,0.04%溴甲酚紫 水溶液 25mL,蒸馏水 1000mL,pH7.4。
制法:将蛋白胨、 胆盐及乳糖溶于水中, 校正 pH, 加入指示剂, 分装每管 10mL,
并放入一个小倒管,115℃,15min 高压灭菌.
注:双料乳糖胆盐培养基除蒸馏水外,其他成分加倍。
31.伊红美兰琼脂培养基
成分:蛋白胨 20g, 乳糖 10g, 磷酸氢二钾 2g, 琼脂 17g, 2%伊红 Y 溶液 20mL, 0.65%美兰溶液 10mL,蒸馏水 1000mL,pH7.1。
制法:将蛋白胨、 磷酸氢二钾和琼脂溶解于蒸馏水中, 校正 pH, 分装于烧瓶内, 高压灭菌 121℃,15min 备用。
临用时,加入乳糖,并加热溶化琼脂,冷至 50~55℃,加入伊红和美兰溶液, 摇匀,倾注平板。
32.乳糖发酵培养基
成分:蛋白胨 20g, 乳糖 10g, 0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL, 蒸馏水 1000mL, pH7.4。
制法:将蛋白胨、 乳糖溶于水中, 校正 pH, 加入指示剂, 按检验要求分装 30mL、 10mL 或 3mL,并放入一个小倒管,115℃,15min 高压灭菌。
33.胰酪胨大豆肉汤
成分:胰酪胨(或胰蛋白胨)17g,植物蛋白胨(或大豆蛋白胨)3g,氯化钠 100g,磷酸氢二钾 2.5g,葡萄糖 2.5g,蒸馏水 1000mL。
制法:将上述成分混合,加热并轻轻搅拌溶液,分装后 121℃15min 高压灭菌。 最终 pH7.3±0.2。
34.7.5%氯化钠肉汤
成分:蛋白胨 10g,牛肉膏 3g,氯化钠 75g,蒸馏水 1000mL,pH7.4。 制法:将上述成分加热溶解,校正 pH,分装试管,121℃15min 高压灭菌。 35.豆粉琼脂
成分:牛心消化汤 1000mL,琼脂 20g,黄豆粉浸液 50mL,pH 7.4~7.6。
制法:将琼脂加在牛心消化汤中,加热溶解,过滤。加入黄豆粉浸液,分装每 瓶 100mL,121℃15min 高压灭菌。
36.血琼脂平板
成分:豆粉琼脂 100mL,脱纤维羊血(或兔血)5~10mL。
制法:加热融化琼脂,冷至 50℃,以无菌操作加入脱纤维羊血或兔血,摇匀, 倾注平板。或分装灭菌试管,摆成斜面。
37.aird-Parker 氏琼脂平板
成分:胰蛋白胨 10g,牛肉膏 5g,酵母膏 1g,丙酮酸钠 10g,甘氨酸 12g, 氯化锂(LiCL·6H2O)5g,琼脂 20g,蒸馏水 950mL,pH7.5。
增菌剂的配法:30~50%卵黄盐水 50mL 与除菌过滤的 1%亚碲酸钾溶液 10mL 混合,保存在冰箱内。
制法:将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解。冷至 25℃,矫正 pH。 分装每瓶 95mL,121℃高压灭菌 15min。临用时,加热融化琼脂,冷至 50℃, 每 95mL 加入预热至 50℃的卵黄-亚碲酸钾增菌剂 5mL,摇匀后倾注平板。培 养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过 48h。
38.肉浸液
成分:绞碎牛肉 500g, 氯化钠 5g, 蛋白胨 10g, 磷酸氢二钾 2g, 蒸馏水 1000mL, pH 7.4~7.6。
制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉 500g, 混合后放冰箱 24h, 除去液面之浮油, 隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液, 加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后矫正 pH7.4~7.6煮沸并 过滤,分装烧瓶,121℃,30min 高压灭菌。
39.兔血浆
成分:柠檬酸钠 0.106 mol/L(31.3g Na3C6H5O7·2H2O溶于 1L 蒸馏水中) 制法:一份加兔血 9份混合后离心 2000rpm,10min 吸取上清液即为兔血浆。 40.肠毒素产毒培养基
成分:蛋白胨 20g,胰消化酪蛋白 200mg,氯化钠 5g,磷酸二氢钾 1g,氯化 钙 0.1g,硫酸镁 0.2g,菸酸 0.01g,蒸馏水 1000mL,琼脂 10~12g(固体透 析培养用) ,pH7.2~7.4。
41.葡萄糖肉浸液肉汤
成分:绞碎牛肉 500g, 氯化钠 5g, 蛋白胨 10g, 磷酸氢二钾 2g, 葡萄糖 10g, 蒸馏水 1000mL,pH7.4~7.6。
制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉 500g, 混合后放冰箱 24h, 除去液面之浮油,
隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液, 加水补足原量。加入蛋白胨、葡萄,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正 pH,煮沸并 过滤、分装,121℃30min 高压灭菌。
42.牛心浸液
成分:绞碎牛心 500g, 氯化钠 5g, 蛋白胨 10g, 磷酸氢二钾 2g, 蒸馏水 1000mL, pH7.4~7.6。
制法:将绞碎牛心 500g,混合后放冰箱 24h,除去液面之浮油,隔水煮沸半小 时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。 加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后校正 pH,煮沸并过滤、分装,121℃, 30min 高压灭菌。
43.匹克氏肉汤
成分:含 1%胰蛋白胨的牛心浸液 200mL,1:25000结晶紫盐水溶液 10mL, 1:800三氮化钠溶液 10mL,脱纤维兔血(羊血)10mL。
制法:将上述已灭菌的各种成分, 无菌依次混合, 分装于无菌试管内, 每管 2mL, 保存冰箱内备用。
44.胰蛋白胨大豆胨琼脂(TSA)
成分:胰蛋白胨 15g,大豆胨 5g,氯化钠 5g,琼脂约 13g,蒸馏水 1000mL, pH7.1~7.5。
制法:按量将各成分溶解,加热使完全溶解,调 pH 值,121℃,15min 灭菌。 45.缓冲蛋白胨水(BP)培养基
成分:蛋白胨 l0g,NaCL5g,Na2HPO4.12H20 9g,H2PO4 1.5g,蒸馏水 1000mL,pH7.2。
制法:121℃灭菌 15min,沙门氏菌前增菌使用。
46.氯化镁孔雀绿(MM)增菌液
成分:
甲液:胰蛋白胨 5g,NaCL 8g,KH2P04 1.6g,蒸馏水 1000m1
乙液:MgCL2 40g,蒸馏水 100mL
丙液:0.4%孔雀绿水溶液
制法:分别按上述成分配好后,121℃灭菌 15min 备用。临用时取甲液 90mL、 乙液 9mL、丙液 0.9mL 以无菌操作混合即成。
47.四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液
成分:多胨或胨 1g,CaCO3 10g,Na2S203 30g,蒸馏水 1000m1。
制法:将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶 100m1。分装时应随时振 荡, 使其中的 CaCO3混匀。 121℃灭菌 15min 备用。 临用时每 100m1培养基 中加入碘溶液 2m1、0.1%煌绿 1m1。
48.亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液
成分:蛋白胨 5g, 乳糖 4g, 亚硒酸氢钠 4g, Na2HPO4 5.5g, KH2PO4 4.5g, L—胱氨酸 0.01g,蒸馏水 1000m1,pH7.0。
制法:将除亚硒酸氢钠和胱氨酸以外的各种成分溶解于 900mL 蒸馏水中, 加热 煮沸,冷却备用。另将亚硒酸氢钠溶解于 100mL 蒸馏水中,加热煮沸,冷却, 以无菌操作与上液混合。再加入 1%L-胱氨酸—氢氧化钠溶液 1m1。分装于灭 菌瓶中,每瓶 l00mL。
49.亚硫酸铋琼脂(BS)培养基
成分:蛋白胨 10g,牛肉膏 5g,葡萄糖 5g,FeSO40.3g,Na2HPO4 4g, 煌绿 0.025g,柠檬酸铋铵 2g,Na2SO46g,琼脂 20g, 蒸馏水 1000mL, pH7.5。
制法:将前 5种成分溶解于 300mL 蒸馏水中, 再将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用 50m1蒸馏水溶解。将琼脂于 600mL 蒸馏水中煮沸溶解,冷至 80℃左右。将 以上三液合并,补充蒸馏水至 1000m1,校正 pH,加 0.5%煌绿水溶液 5mL ; 摇匀。冷却至 50~55℃,倾注平板。
注:此培养基不需高压灭菌。制备过程中不宜过分加热,以免降低其选择性。 应在临用前一天制备,贮存于室温暗处。超过 48h 不宜使用。
50.DHL 琼脂培养基
成份:蛋白胨 20g,牛肉膏 3g,乳糖 10g,蔗糖 10g,去氧胆酸钠 1g, Na2S2032.3g,柠檬酸钠 1g,柠檬酸铁铵 1g,中性红 0.03g,琼脂 20g,蒸 馏水 1000mL,pH7.3。
制法:除中性红和琼脂外,将其他成分溶解于 400m1蒸馏水中,校正 pH 值。 再将琼脂溶于 600mL 蒸馏水中,两液合并,加 0.5%中性红水溶液 6mL,待冷 至 50~55℃,倾注平板。
51.HE 琼脂培养基
成份:月示 胨 12g,牛肉膏 3g,乳糖 12g,蔗糖2g,水杨素 2g,胆盐 20g, NaCL 5g, 琼脂 20g, 蒸馏水 1000m1, 0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL, Andrade 指示剂 20mL,甲液 20mL,乙液 20m1。
制法:将前七种成分溶解于 400mL 蒸馏水中。作为基础液,加入甲液和乙液, 校正 pH 值为 7.5,再加入指示剂;将琼脂溶于 600m1蒸馏水中。二者合并, 待冷至 50~55℃,倾注平板。
注:①此培养基不可高压灭菌; ②Andrade 指示剂:酸性复红 0.5g, 1M NaOH溶液 16m1,蒸馏水 100mL。制法为:将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠 溶液。数小时后如果复红退色不全,再加氢氧化钠溶液 1~2mL。③甲液: Na2S203 34g,柠檬酸铁铵 4g,蒸馏水 100m1。④乙液:去氧胆酸钠 10g, 蒸馏水 100mL。
52.S.S.琼脂
(1)基础培养基
成分:牛肉膏 5g,月示 胨 5g,三号胆盐 3.5g,琼脂 17g,蒸馏水 1000mL。
制法:将牛肉膏、月示 胨和胆盐溶解于 400mL 蒸馏水中,将琼脂溶于 500m1蒸馏水中,二液混合,121℃灭菌 15min 备用。
(2)完全培养
成分:基础培养基 1000mL,乳糖 10g,柠檬酸钠 8.5g,Na2S2038.5g,10 %柠檬酸铁溶液 10m1,1%中性红溶液 2.5m1,0.1%煌绿溶液 0.33m1。
制法:加热熔化基础培养基,按比例加入上述染料以外的各成分,充分混合均 匀,校正 pH 值为 7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。
注:制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于 48h 内使用;煌绿溶液配好 后应在 10d 以内使用。
53.靛基质试验培养基
成分:蛋白胨 10g,氯化钠 5g,水 1000mL,pH7.3~7.5。
制法:称取各成分,加入水中加热溶化。用 1mol/L NaOH调至 pH 7.4~7.5。 分装小试管,每管约 3mL,116℃,15min 高压灭菌后 4~10℃保存备用。
54.三糖铁琼脂(TSI)
成分:蛋白胨 20g,硫代硫酸钠 0.2g,乳糖 10g,蒸馏水 1000mL,硫酸亚铁 铵 0.2g,蔗糖 10g,酚红 0.025g,氯化钠 5g,牛肉膏 5g,琼脂 12g,葡萄糖
1g,pH7.4。
制法:将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中,校正 pH。加入琼脂, 加热煮沸以溶化琼脂。加入 0.2%酚红水溶液 12.5mL,摇匀。分装试管,装量 宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌 15min 后放置高层斜面备用。
55.尿素琼脂
成分:蛋白胨 1g,葡萄糖 1g,0.4%酚红溶液 3mL,蒸馏水 1000mL,氯化钠 5g,磷酸氢二钾 2g,琼脂 20g,20%尿素溶液 100mL,pH7.2±0.1
制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正 pH,加入琼脂,加热溶化并分 装烧瓶。 121℃高压灭菌 15min, 冷至 50~55℃, 加入经除菌过滤的尿素溶液。 尿素的最终浓度为 2%。最终 pH 为 7.2±0.1。分装于灭菌试管内,放成斜面备 用。
56.ONPG 培养基
成 分 :邻 硝 基 酚 β-D-半 乳 糖 昔 (O-NitropHenyl -β-D -galactopyranoside) (ONPG) 60mg, 0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL, 1%蛋白胨水(pH7.5) 30mL
制法:将 ONPG 溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于
10mm×75mm试管,每管 0.5mL,用橡皮塞塞紧。
57.氨基酸脱羧酶试验培养基(赖氨酸培养基)
成分:蛋白胨 5g,酵母浸膏 3g,葡萄糖 1g,蒸馏水 1000mL,1.6%滇甲酚紫 -乙醇溶液 1mL,L-氨基酸或 DL-氨基酸 0.5或 1g/100mL,pH6.8。
制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶 100mL,分别加入赖氨酸、 精氨酸和鸟氨酸等各种氨基酸。L-氨基酸按 0.5%加入,DL-氨基酸按 1%加 入。再行校正 pH 至 6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内,每 管 0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌 10min。
58.氰化钾(KCN)培养基
成分:蛋白胨 10g,氯化钠 5g,磷酸二氢钾 0.225g,磷酸氢二钠 5.64g,蒸馏 水 1000mL,0.5%氰化钾溶液 20mL,pH7.6。
制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌 15min。放在 冰箱内使其充分冷却。 每 100mL 培养基加入 0.5%氰化钾溶液 2.0mL(最后浓度 为 1∶10000),分装于 12mm×100mm灭菌试管,每管约 4mL,立刻用灭菌 橡皮塞塞紧,放在 4℃冰箱内,至少可保存两个月。同时,将不加氰化钾的培养 基作为对照培养基,分装试管备用。
59.丙二酸钠培养基
成分:酵母浸膏 1g,硫酸铵 2g,磷酸氢二钾 0.6g,磷酸二氢钾 0.4g,氯化钠 2g,丙二酸钠 3g,0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL,蒸馏水 1000mL,pH6.8。
制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正 pH 后再加入指示剂,分装试管, 121℃高压灭菌 15min。
60.氧化酶试验试剂
(1)1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存。
(2)1%四甲基对苯二胺溶液:将四甲基对苯二胺 1.0g 溶于 100.0mL 蒸馏水 即可。通常使用新鲜配制的试剂,如放置于冷藏库,可在配制后 7天内使用。
(3)1% α-萘酚-乙醇溶液。
61.亚硒酸盐煌绿增菌液
成分:蛋白胨 5g,酵母膏 5g,甘露醇 5g,牛磺胆酸钠 1g,20%亚硒酸氢钠 溶液 20m1, 0.25mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 100mL, 2%煌绿水溶液 0.25mL, 蒸馏水 900m1。
制法:将前三种成分溶于水中,调节 pH 值为 7.0,加入牛磺胆酸钠,加热溶解 调 pH 值 (其中干鸡蛋白样品 pH8.2土 0.1; 其它干蛋品 pH7.2土 0.1, 冰蛋品 pH7.0土 0.1) (具体数值如下)121℃灭菌 15min,放冷备用,此为甲液;称 取 4g 亚硒酸氢钠,溶于 19mL 蒸馏水中,即为 20%亚硒酸氢钠溶液 20mL, 12l℃灭菌 15min,放冷备用,此为乙液;精确称取 K2HPO4(无水)2.18g, KH2PO4(无水)1.71g,溶解于蒸馏水中,定容至 100mL。12l℃灭菌 15min, 放冷备用,此为丙液;称取煌绿(灿烂绿)0.2g 溶于 10mL 蒸馏水中,即为 2%煌绿水溶液,此为丁液。用前将乙液和丙液依次加入甲液中,复查混合液的 pH 值,加入煌绿溶液。无菌操作分装于无菌烧瓶或试管内,每瓶 150m1。培养基 应在 1~5d内使用。
62.GN 增菌液
成分:胰蛋白胨 20g, 葡萄糖 1g, 甘露醇 2g, 柠檬酸钠 5g, 去氧胆酸钠 0.5g, 磷酸氢二钾 4g,磷酸二氢钾 1.5g,氯化钠 5g,蒸馏水 1000mL,pH7.0。
制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正 pH。分装每瓶 225mL,115℃高压 灭菌 15min。
63.苯丙氨酸培养基
成分:酵母浸膏 3g,DI-苯丙氨酸(或 L-苯丙氨酸 1g ) 2g,磷酸氢二钠 1g, 氯化钠 5g,琼脂 12g,蒸馏水 1000mL,
制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌 15min,使成斜面。
64.西蒙氏柠檬酸盐培养基
成分:氯化钠 5g,硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g,磷酸二氢铵 1g,磷酸氢二钾 1g, 柠檬酸钠 5g, 琼脂 20g, 蒸馏水 1000mL, 0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL, pH6.8。
制法:先将盐类溶解于水内,校正 pH,再加琼脂加热溶化。然后加入指示剂, 混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌 15min 后放成斜面。
65.葡萄糖铵培养基
成分:氯化钠 5g,硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g,磷酸二氢铵 1g,磷酸氢二钾 1g,葡萄糖 2g,琼脂 20g,蒸馏水 1000mL,0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL, pH6.8。
制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正 pH,再加琼脂加热溶化,然后加入指示 剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌 15min 后放成斜面。
66.麦康凯琼脂
成份:蛋白胨 17g,月示 胨 3g,猪(牛、羊)胆盐 5g,NaCL 5g,,琼脂 17g, 蒸馏水 1000m1,乳糖 10g,0.01%结晶紫水溶液 10m1,0.5%中性红水溶液 5m1。
制法:将蛋白胨、月示 胨、胆盐和氯化钠溶于 400mL 蒸馏水内,校正 pH 值 至 7.2。将琼脂于 600mL 蒸馏水中煮沸溶解。合并两液,分装于烧瓶内,121℃灭菌 15min 备用。临用时加热溶化上述琼脂,趁热加入乳糖。冷至 50~55℃时加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。
注:结晶紫和中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
67.肠道菌增菌肉汤(EE肉汤)
成分:蛋白胨 10g, 葡萄糖 5g, 牛胆盐 20g, 磷酸氢二钠 8g, 磷酸二氢钾 2g, 煌绿 0.015g,蒸馏水 1000mL,pH7.2。
制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正 pH。分装每瓶 30mL,115℃高压 灭菌 15min。注意必须使用纯净的牛胆盐和煌绿,减少对受损且数量极少的肠 杆菌的生长抑制。
68.克氏双糖铁琼脂(KI)
上层培养基成分:血消化汤(pH7.6) 500mL,琼脂 6.5g,硫代硫酸钠 0.1g,硫
酸亚铁铵 0.1g,乳糖 5g,0.2%酚红溶液 5mL。
下层培养基成分:血消化汤(pH7.6) 500mL,琼脂 2g,葡萄糖 1g,0.2%酚红 溶液 5mL。
制法:取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解。分别 加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌的 12mm×100mm试管内,每管约 2mL。115℃高压灭菌 10min。将上层培养 基放在 56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固。等下层 培养基凝固后,以无菌操作将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约 1.5mL 并放成斜面。
69.Elek 氏培养基(毒素测定用)
成分:胨 20g,麦芽糖 3g,乳糖 0.7g,氯化钠 5g,琼脂 15g,40%氢氧化钠 溶液 1.5mL,蒸馏水 1000mL,pH7.8。
制法:用 500mL 蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸并用滤纸过滤。用 1mo1/L氢氧化钠校正 pH。用另外 500mL 蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合,分装试 管 10mL 或 20mL。121℃高压灭菌 15min。临用时加热溶化琼脂倾注平板。
70.EC 增菌液(36)
成分:胰蛋白胨 20g,胆盐 1.5g,乳糖 5g,NaCL5g,无水 KH2PO4 1.5g, 无水 K2HPO4 4g,蒸馏水 1000mL,pH7.0。
制法:将各成分溶于水中,调 pH 值,依据实验需求分装三角瓶或试管。121℃ 灭菌 15min 备用。 之后, 如果通过灭菌细菌滤器添加 1‰的 20mg/L新生霉素, 即为改良 EC 增菌液。
71.改良山梨醇麦康凯琼脂(TC-SMAC)
成分:蛋白胨 7g,眎胨 3g,猪胆盐 5g,山梨醇 10g,NaCL 5g,琼脂 18g, 0.5%中性红水溶液 5mL,0.01%结晶紫水溶液 10mL,亚碲酸钾 2.5mg,头孢 肟 0.05g,蒸馏水 1000mL,pH7.2。
制法:除山梨醇、指示剂和抑菌剂外,其余成分溶于水中,溶解后调 pH 值。 115℃灭菌 20min。临用时溶化培养基,冷至 50℃,加入山梨醇、灭菌的结晶 紫和中性红; 加入过滤除菌的 1%亚碲酸钾 250μL和 50g/L头孢肟 1mL, 混匀, 倾注倒平板。
72.LST 肉汤
成 分 :胰 蛋 白 胨 或 胰 酪 胨 (Tryticase ) 20g , NaCL 5.0g , 乳 糖 5.0g , K2HPO42.75g,KH2PO4 2.75g,月桂基硫酸钠 0.1g,蒸馏水 1000mL。
制法:将各成分溶解于蒸馏水中。分装到有倒立发酵管的 20mm×150mm试 管中,每管 10mL。121℃高压灭菌 15min。最终 pH6.8±0.2。
73.MUG-LST
LST 肉汤中添加 4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷 (MUG) , 使终浓度为 0.1g/L。 74.甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
成分:蛋白胨 10g,牛肉膏 1g,甘露醇 10g,氯化钠 10g,琼脂 15g,蒸馏水 1000mL,0.2%酚红溶液 13mL,50%卵黄液 50mL,多粘菌素 B 100国际单 位/mL,pH7.4。
制法:将前面五种成分加入于蒸馏水中,加热溶解,校正 pH,加入酚红溶液。 分装烧瓶,每瓶 100mL,121℃高压灭菌 15min。临用时加热溶化琼脂,冷至 50℃,每瓶加入 50%卵黄液 5mL 及多粘菌素 B 10000国际单位,混匀后倾注 平板。
75.酪蛋白琼脂
成分:酪蛋白 10g,牛肉膏 3g,磷酸氢二钠 2g,氯化钠 5g,琼脂 15g,蒸馏 水 1000mL,0.4%溴麝香草酚蓝溶液 12.5mL,pH7.4。
制法:将除指示剂外的各成分混合,加热溶解(但酪蛋白不溶解),校正 pH。加 入指示剂,分装烧瓶,121℃高压灭菌 15min。临用时加热溶化琼脂,冷至 50℃,倾注平板。
注:将菌株划线接种于平板上,如沿菌落周围有透明圈形成,即为能水解酪蛋 白。
76.木糖-明胶培养基
成分:胰胨 10g,酵母膏 10g,木糖 10g,磷酸氢二钠 5g,明胶 120g,蒸馏 水 1000mL,0.2%酚红溶液 25mL,pH7.6。
制法:将除酚红以外的各成分混合,加热溶解,校正 pH。加入酚红溶液,分装 试管,121℃高压灭菌 15min,迅速冷却。
77.动力-硝酸盐培养基(A法)
成分:蛋白胨 5g, 牛肉膏 3g, 硝酸钾 1g, 琼脂 3g, 蒸馏水 1000mL, pH7.0。 制法:加热溶解,校正 pH。分装试管,每管 10mL,121℃高压灭菌 15min。 78.甲萘胺-醋酸溶液、对氨基苯磺-醋酸溶液(硝酸盐培养基)
成分:硝酸盐 0.2g,蛋白胨 5g,蒸馏水 1000mL,pH7.4。
制法:溶解,校正 pH,分装试管,每管约 5mL,121℃高压灭菌 15min。 硝酸盐还原试剂:
(1)甲萘胺-醋酸溶液:将甲萘胺 0.5g 溶解于 5mol/L乙酸溶液 100mL 中。
(2)对氨基苯磺-醋酸溶液:将对氨基苯磺酸 0.8g 溶解于 5mol/L乙酸溶液 100mL 中。
79.氯化钠结晶紫增菌液
成分:蛋白胨 20g,氯化钠 40g,0.0l%结晶紫溶液 5mL,蒸馏水 1000mL, pH9.0。
制法:除结晶紫外其他按上述成分配好,加热溶解,约加 3%氢氧化钾溶液 4.5mL,校正 pH,加热煮沸,过滤,再加入结晶紫溶液,混合分装试管,121℃高压灭菌 15min 备用。
80.3.5%氯化钠三糖铁琼脂
成分:蛋白胨 20g, 牛肉膏 5g, 乳糖 10g, 蔗糖 10g, 葡萄糖 1g, 氯化钠 35g,
硫酸亚铁铵 0.2g, 硫代硫酸钠 0.2g, 琼脂 12g, 酚红 0.025g, 蒸馏水 1000mL, pH7.4。
制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正 pH,加入琼脂,加 热煮沸使琼脂溶化,加入 0.2%酚红溶液 12.5mL,摇匀,分装试管,121℃高 压灭菌 15min,放置高层斜面备用。
81.TCBS 琼脂(配方 1)
成分:酵母膏 5g,蛋白胨 10g,蔗糖 20g,硫代硫酸钠 10g,柠檬酸钠 10g, 牛胆酸钠 3g,牛胆汁粉 5g,氯化钠 10g,柠檬酸铁 1g,溴麝香草酚蓝(2%溶液)20mL,草酚蓝(1%溶液)4mL,琼脂 15g,pH8.6。
制法:将上述成分加蒸馏水至 1000mL,混合,使全部溶解,校正 pH 为 8.6, 加热煮沸,不需高压灭菌,倾注平皿 15~20mL。
注:不分解蔗糖的副溶血性弧菌,在此培养基上生长呈绿色菌落,分解蔗糖的 细菌呈黄色菌落。
82.TCBS 琼脂(配方 2)
成分:酵母浸膏 5g,蛋白胨 10g,硫代硫酸钠 10g,枸橼酸钠 10g,牛胆粉 8g,蔗糖 20g,氯化钠 10g,柠檬酸铁 1g,溴麝香草酚兰 0.04g,麝香草酚蓝
0.04,琼脂约 13g,水 1000mL,pH8.5~8.7。
制法:除指示剂外,将剩余成分混合于 1000mL 水中,煮沸溶解。调至 pH8.5~8.7,加入指示剂,混匀。再次煮沸 1~2min。无需高压灭菌。
83.改良 Camp—BAP 培养基
成分:胰蛋白胨 10g,蛋白胨 10g,葡萄糖 1g,酵母浸膏 2g,氯化钠 5g,焦 亚硫酸钠 0.1g, 琼脂 15g, 蒸馏水 1000mL, 硫乙醇酸钠 1.5g, 万古霉素 10mg, 多粘菌素 B 2500国际单位,两性霉素 B(AmpHotericin B) 2mg,头孢霉素 (CepHalosporin)15mg,亦可用 Ceporan)
脱纤维羊血 50mL,pH7.0土 0.2。
制法:除抗生素和羊血外, 将其他成分混合, 加热溶解, 校正 pH 到 7.0土 0.2。 装瓶,每瓶 100mL。121℃高压灭菌 15min 备用。此为布氏琼脂基础培养基; 临用前,加热溶解基础琼脂,冷至 60℃。每 100mL 基础琼脂中,加入脱纤维 羊血 5mL、 抗生素混合液 0.5mL 及两性霉素 B, 头孢霉素混合液 0.5mL, 摇匀, 倾注平板。
注:两性霉素 B, 头孢霉素混合液配法:称两性霉素 B 2mg和头孢霉素 15mg, 加 5mL 蒸馏水混合即成。
84.甘氨酸培养基
成分:布氏肉汤 1000mL,琼脂粉 1.6g,甘氨酸(glycine)10g。
制法:将以上成分混合,加热溶解,校正 pH7.0,分装试管,每管 4mL,121℃高压灭菌 15min,备用。
85.Skirrow 氏培养基
成分:蛋白胨 15g,胰蛋白胨(typtone) 2.5g,酵母浸膏 5g,氯化钠 5g,琼脂 15g,蒸馏水 l000mL,甲氧苄氨嘧啶(trimethoprin,TMP) 5mg,万古霉素 (vancomycin) 10mg,多粘菌素 B(po1ymyxin) 2500国际单位,冻溶马血 70.0mL,pH7.4。
制法:除甲氧苄氨嘧啶、 抗生素和冻溶马血外, 其他成分混合溶解。 校正 pH7. 4, 装瓶 100mL。 121℃高压灭菌 15min, 备用。 此即血琼脂基础培养基。 临用前, 加热溶解基础培养基,冷至 60℃。每 100mL 基础培养基中,加入冻溶二次的 马血及 TMP、抗生素混合液 0.5mL,摇匀,倾注平板。
86.庖肉培养基
成分:牛肉浸液 1000mL,蛋白胨 30g,酵母浸膏 5g,磷酸二氢钠 5g,葡萄 糖 3g,可溶性淀粉 2g,碎肉渣适量,pH7.8。
制法:称取新鲜除脂肪和筋膜的牛肉 500g,加蒸馏水 1000mL 和 1mol/L氢 氧化钠溶液 25mL,搅拌煮沸 15min,充分冷却,除去表层脂肪,澄清,过滤, 加水补足至 1000mL。加入除碎肉渣外的各种成分,校正 pH。
87.卵黄琼脂培养基
成分:基础培养基为肉浸液 1000mL, 蛋白胨 15g, 氯化钠 5g, 琼脂 25~30g, pH7.5。
50%葡萄糖水溶液。
50%卵黄盐水溶液。
制法:基础培养基分装每瓶 100mL。 121℃高压灭菌 15min。 临用时加热溶化, 冷至 50℃, 每瓶内加 50%葡萄糖水溶液 2mL 和 50%卵黄盐水悬液 10~15mL, 摇匀,倾注平板。
88.EB 增菌液.
成分:胰胨 17g,多价胨 3g,酵母膏 6g,氯化钠 5g,磷酸二氢钾 2.5g,葡萄 糖 2.5g,蒸馏水 1000mL,pH7.2~7.4。
制法:121℃高压灭菌 15min,使用前加吖啶黄溶液 15mg/L、萘啶酮酸溶液 40mg/L和放线菌酮 50mg/L,此三种成分要过滤除菌或无菌配制。
89.胰酪胨大豆琼脂(TSAYE)
成分:胰胨 17g,多价胨 3g,酵母膏 6g,氯化钠 5g,磷酸氢二钾 2.5g,葡萄 糖 2.5g,琼脂 15g,蒸馏水 l000mL,pH7.2~7.4。
制法:加热溶解,调 pH 值,分装,121℃高压灭菌 15min 备用。
90.硫酸铁铵半固体(SIM)
成分:胰胨 20g,多价胨 6g,硫酸铁铵 0.2g,硫代硫酸钠 0.2g,琼脂 3.5g, 蒸馏水 1000mL,pH7.2。
制法:加热溶解,调 pH 值,分装,121℃高压灭菌 15min 备用。
91.改良的 McBride 琼脂(MMA)
成分:胰胨 5g,多价胨 5g,牛肉膏 3g,葡萄糖 1g,氯化钠 5g,磷酸氢二钠 lg, 苯乙醇 2.5 mL, 无水甘氨酸 10g, 氯化锂 0.5g, 琼脂 15g, 蒸馏水 1000mL, pH7.2~7.4。
制法:加热溶解,调 pH 值,分装,121℃高压灭菌 15min 备用。
92.STAA 培养基
成分:蛋白胨 20.0g,酵母提出物 2.0g,磷酸氢二钾 1.0g,硫酸镁 1.0g,甘油 15mL, 琼脂 13.0g, 乙酸铊 50mg, 链霉素-硫酸盐 500mg, 环己酰亚胺 50mg, 蒸馏水 1000mL,pH7.0±0.2。
制法:除乙酸铊, 链霉素-硫酸盐, 环己酰亚胺外, 其余缓慢加热使其完全溶解; 121° C下灭菌 15min。冷却到 50°C后,在无菌条件下加入上述三种物质的过 滤除菌水溶液。
93.马丁(Martin)孟加拉红-链霉素琼脂培养基
成分:葡萄糖 10.0g,蛋白胨 5.0g,磷酸二氢钾 1.0g,硫酸镁 0.5g,孟加拉红 33.4g,琼脂 20g,蒸馏水 1000mL,pH5.5~5.7。
制法:以上各成分溶解、调 pH、分装,于 121℃,20min 高压灭菌。倒平板前 按每 10mL 培养基加 1mL0.03%链霉素溶液(含链霉素 30mg/mL) 。
94.Ames 检测营养肉汤液体培养基
成分:牛肉膏 0.5g,蛋白胨 1.0g,氯化钠 0.5g,蒸馏水 100mL,pH7.2~7.5。
制法:加热溶解,调 pH 值,分装于三角瓶中 121℃,20min 高压灭菌。 95.Ames 检测底层培养基
成分:葡萄糖 20g,柠檬酸(C6H8O7·H2O) 2g,磷酸氢二钾(K2HPO4) 3.5g, 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g,琼脂粉 12g,蒸馏水 1000mL,pH7.0。
制法:加热溶解,调 pH 值,分装于三角瓶中 115℃,20min 高压灭菌。 96.Ames 检测顶层培养基的制备
成分:脂粉 0.6g,氯化钠 0.5g,加蒸馏水 90mL。
制法:以上溶液加 10mL0.5mol/L组氨酸-生物素溶液,分装灭菌。
97.氨苄青霉素培养基和氨苄青霉素-四环素培养基(1000mL)
成分:底层培养基 910mL,磷酸盐贮备液 20mL,40%葡萄糖溶液 50mL,组 氨酸水溶液(0.4043g/100mL) 10mL,0.5mol/L生物素 6mL,0.8%氨苄青霉 素溶液 3.15mL,0.8%四环素溶液 0.25mL。
制法:以上成分除抗生素外,均分别单独灭菌,使用时无菌操作混合;使用灭
菌细菌滤器加入氨苄青霉素溶液,即为氨苄青霉素培养基,摇匀,铺平板;无 菌同时加入氨苄青霉素和四环素就是氨苄青霉素-四环素培养基
98.组氨酸-生物素培养基(1000mL)
成分:底层培养基 914mL,磷酸盐贮备液 20mL,40%葡萄糖溶液 50mL,组 氨酸水溶液(0.4043g/100mL) 10mL,0.5mol/L生物素 6mL。
制法:以上成分均已分别灭菌,用时无菌操作混匀。
99.CM 液体培养基
KNO3 3g,KH2PO4 1g,MgSO4.7H2O 0.5g,蛋白胨 10g,酵母粉 5g,葡 萄糖 20g,蒸馏水 1000mL,pH6.5~6.8,15磅灭菌 20min。
100.HMM(高渗 MM)培养基
KNO3 3g, KH2PO4 1g, MgSO4.7H2O 0.5g, 微量元素液 2mL, 葡萄糖 20g, 蔗糖 0.6M,1.6%~1.8%琼脂粉,蒸馏水 1000mL,pH6.5~6.8,121℃灭菌 20min。
101.结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA)
成分:酵母提取物 3.0g, 蛋白胨 7.0g, 氯化钠 5.0g, 3号胆盐 1.5g, 乳糖 10.0g, 中性红 0.03g,结晶紫 0.002g,蒸馏水 1000mL。
制法:将各成分加入蒸馏水中(染料配成 1%的水溶液过滤后加入) ,加热煮沸, 使各成分完全溶解,调节 pH 至 7.4±0.1。冷却至 45℃倒入灭菌平皿,置 2~-8℃保藏,4周内使用。
102.显色培养基琼脂(X a-GLcA)
成分:蛋白胨 20.0g,牛肉膏 5.0g,氯化钠 5.0g,琼脂 20.0g,5-溴 4-氯 3吲 哚 a-D 葡萄糖苷 0.08g,蒸馏水 1000mL。
制法:将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,调节 pH7.3±0.1,分装适当容器, 121℃高压灭菌 3min。
范文四:各种培养基成分
1.营养肉汤
成分:蛋白胨10g ,牛肉膏3g ,氯化钠5g ,蒸馏水1000mL ,pH7.4。
制法:按上述成分混合,溶解后校正pH ,121℃高压灭菌15min 。
2.营养琼脂培养基
成分:蛋白胨10g ,牛肉膏3g ,氯化钠5g ,琼脂17g ,蒸馏水1000mL ,pH7.2。
制法:将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH ,加入琼脂,分装于烧瓶内,121℃,15min 高压灭菌备用。
3.MRS 培养基
成分:蛋白胨10g ,牛肉膏10g ,酵母粉5g ,K2HPO4 2g,柠檬酸二铵2g ,乙酸钠5g ,葡萄糖20g ,吐温80 1mL,MgSO4 .7H2O 0.58g,MnSO4 4H2O 0.25g,(琼脂15~20g),蒸馏水1000mL 。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调pH 至6.2~6.4,分装于三角瓶中,121℃, 灭菌15min 。
4.脱脂乳培养基
成分:牛奶,蒸馏水。
制法:将适量的牛奶加热煮沸20~30min,过夜冷却,脂肪即可上浮。除去上层乳脂即得脱脂乳。将脱脂乳盛在试管及三角瓶中,封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min,即得脱脂乳培养基。
5.培养基A
成分:蛋白胨10.0g ,酵母提取物1.0g ,葡萄糖10.0g ,NaCL5.0g ,琼脂15.0g ,水1000mL 。制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调pH 至7.0~7.2,分装于三角瓶中,121℃,灭菌15min 。
6.PTYG 培养基
成分:胰胨Tryptone (Oxoid )5g ,大豆蛋白胨5g ,酵母粉(Oxoid )10g ,葡萄糖10g ,吐温80 0 1mL,琼脂15~20g,L-半胱氨酸盐酸盐0.05g ,盐溶液4mL 。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调pH 至6.8~7.0,分装于三角瓶中,115℃灭菌30min 。
盐溶液制备:无水氯化钙0.2g ,K2HPO4 1.0g,KH2PO4 1.0g,MgSO4 。7H2O 0.48g,NaCO3
10g ,NaCL 2g,蒸馏水1000mL ,溶解后备用。
7.豆芽汁液体培养基
成分:豆芽汁10mL ,磷酸氢二铵1g ,KCL 0.2g,MgSO4.7H2O 0.2g,琼脂20g 。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调pH 至6.2~6.4,分装于三角瓶中,0.04%的溴甲酚紫酒精溶液(黄色5.2~6.8紫色)作为指示剂,115℃灭菌20min 。
豆芽汁制备:将黄豆芽或绿豆芽200g 洗净,在1000mL 中煮沸30 min,纱布过滤得豆芽汁、补足水分至1000mL 。
8.麦芽汁琼脂培养基
成分:优质大麦或小麦,蒸馏水,碘液。
制法:取优质大麦或小麦若干,浸泡6~12h,置于深约2cm 的木盘上摊平,上盖纱布,每日早、中、晚各淋水一次,麦根伸长至麦粒两倍时,停止发芽晾干或烘干。
称取300g 麦芽磨碎,加1000mL 水,38℃保温2h ,再升温至45℃,30min ,再提高到50℃,30min ,再升至60℃,糖化1~1.5h。
取糖化液少许,加碘液1~2滴,如不为蓝色,说明糖化完毕,用文火煮半小时,四层纱布过滤。如滤液不清,可用一个鸡蛋清加水约20mL 调匀,打至起沫,倒入糖化液中搅拌煮沸再过滤,即可得澄清麦芽汁。用波美计检测糖化液浓度,加水稀释至10倍,调pH5~6,用于酵母菌培养;稀释至5~6倍,调pH7.2,可用于培养细菌,121℃灭菌20min 。
9.查(察)氏培养基
成分:NaNO3 2g,K2HPO4 1g,MgSO4. 7H2O 0.5g,KCL 0.5g,FeSO4.7H2O 0.01g,蔗糖30g ,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL ,pH 值自然。
制法:加热溶解,分装后121℃灭菌20min 。
10.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA )
成分:马铃薯(去皮)200g ,葡萄糖(或蔗糖)20g ,琼脂20g ,水1000mL 。
制法:pH 值自然。将马铃薯去皮、洗净、切成小块,称取200g 加入1000mL 蒸馏水,煮沸20min ,用纱布过滤,滤液补足水至1000mL ,再加入糖和琼脂,溶化后分装,121℃灭菌20min 。另外,用少量乙醇溶解0.1g 氯霉素,加入1000mL 培养基中,分装灭菌后可用于食品中霉菌和酵母菌计数、分离。
11.PY 基础培养基
成分:蛋白胨0.5g ,酵母提取物1.0g ,胰酶解酪胨 (Trypticase) 0.5g ,盐溶液Ⅱ 4.0mL ,蒸馏水1000mL 。
盐溶液Ⅱ成分:CaCL2 0.2g,MgSO4.7H2O 0.48g,K2HPO4 1.0g,KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCL 2.0g,蒸馏水1000mL 。
制法:加热溶解,分装后121℃灭菌20min 。
12.甘露醇琼脂培养基(MSA )
成分:牛肉浸膏1g ,月示胨NO.3(Difco )10g ,D-甘露醇10g ,NaCL 75g ,琼脂约13g ,酚红0.025g ,水1000mL ,pH7.2~7.6
制法:按量将各成分(酚红除外)混合,加热使完全溶解,调pH 至7.4±0.2。加1%的酚红溶液2.5mL ,混匀。121℃高压灭菌15min
13.高氏一号(淀粉琼脂)培养基(主用于放线菌、霉菌培养)
可溶性淀粉20g ,KNO3 1g,NaCL 0.5g,K2HPO4 0.5g,MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4.7H2O 0.01g,琼脂20g ,蒸馏水1000mL ,pH7.2~7.4,121℃灭菌20min 。
14.淀粉铵盐培养基 (主要用于霉菌、放线菌培养)
可溶性淀粉10g ,(NH4)2SO4 2g,K2HPO4 lg,MgSO4.H2O lg,NaCL 1g,CaCO3 3g,蒸馏水1000mL ,pH7.2~7.4,121℃灭菌20min 。若加入15~20g琼脂即成固体培养基。
15.麦氏培养基(醋酸钠琼脂培养基)
葡萄糖1.0g ,KCL 1.8g,酵母汁2.5g ,醋酸钠8.2g ,琼脂15g ,蒸馏水1000mL ,pH 自然,0.7kg/cm2灭菌30min 。
16.高盐察氏培养基(用于霉菌和酵母菌计数、分离用)
硝酸钠2g ,磷酸二氢钾1g ,硫酸镁(MgSO4 7H2O )0.5g ,氯化钾 0.5g ,硫酸亚铁0.01g ,氯化钠60g ,蔗糖30g ,琼脂20g ,蒸馏水1000mL ,115℃灭菌30min 。
注:①分离食品和饮料中的霉菌和酵母可选用马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基和/或孟加拉红培养基。②分离粮食中的霉菌可用高盐察氏培养基。
17.糖、醇类发酵基础培养基
(1)一般细菌常以休和利夫森二氏培养基
蛋白胨5g ,NaCL 5g,K2HPO4 0.2g,糖醇(葡萄糖或其它糖、醇)10g ,琼脂5~6g,1%溴甲酚紫(溴百里香草酚蓝)3mL ,蒸馏水1000mL ,pH7.0~7.2,分装试管,培养基高度约4.5cm ,115℃灭菌20min 。
(2)芽孢菌培养基
(NH4)2HPO4 1.0g,KCL 0.2g,MgSO4.7H2O 0.2g,酵母膏0.2g ,琼脂5~6g,糖或醇类10.0g ,蒸馏水1000mL ,溴甲酚紫(0.04%)15mL ,pH7.0~7.2,分装试管,培养基高度约4~5cm,112℃灭菌30min 。
(3)乳酸菌培养基
蛋白胨5g ,牛肉膏5g ,酵母膏5g ,吐温80(Tween 80)0.5mL ,糖或醇10g ,琼脂5~6 g,蒸馏水(自来水)1000mL ,加入1.6%溴甲酚紫溶液约1.4mL 。以上调pH6.8~7.0,分装试管,112℃灭菌30min 。
18.硝酸盐培养基(硝酸盐还原试验用)
蛋白胨5.0g ,KNO3 0.2g, 蒸馏水1000 mL,pH7.4,每管分装4~5mL,121℃灭菌15~20min。
吲哚实验培养基:1%胰蛋白胨,调pH7.2~7.6,分装1/3~1/4试管,115℃灭菌30min 。
19.硫化氢试验(纸条法)培养基
蛋白胨10g ,NaCL 5g,牛肉膏10g ,半胱氨酸0.5g ,蒸馏水1000mL ,pH7.0~7.4,分装试管,每管液层高度4~5cm,112℃灭菌20~30min。另外将普通滤纸剪成0.5~1cm宽的纸条,长度根据试管与培养基高度而定。用5%~10%的醋酸铅将纸条浸透,然后用烘箱烘干,放于培养皿中灭菌备用。
20.尿素培养基(尿酶试验)
成分:蛋白胨1.0g ,葡萄糖1.0g ,NaCL 5.0g,KH2PO4 2.0 g,0.4%酚红3.0mL ,琼脂20.0g ,20%尿素100.0mL ,pH7.1~7.4。
制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH 值,加入琼脂,加热熔化并分装于三角瓶,121℃灭菌15min ,冷却至50~55℃,加入过滤除菌的尿素溶液,分装于灭菌试管内,摆成琼脂斜面备用。
21.氮源利用基础培养基
KH2PO4 1.36g,NaH2PO4 2.13g,MgSO4 7H2O 0.2g,FeSO4.7H2O 0.2g,CaCL2 0.5g,葡萄糖10.0g ,蒸馏水1000mL 。
将需要测定的氨基酸、氨态氮(如磷酸氢二氨)、硝态氮(如硝酸钾)加入到上述基础培养
基中,使其终浓度为0.05~0.1%,如测定菌不能利用葡萄糖为碳源,可用其它碳源代替(终浓度为0.2~0.5%),另做一份不加氮源的空白对照,调pH7.0~7.2,分装于试管,每管4~5mL,112℃灭菌20~30min,制备出的培养基要求无沉淀。
22.甲基红培养基(M.R 及V-P 试验用)
蛋白胨7.0g ,葡萄糖5.0g ,K2HPO4(或NaCL )5g ,水1000mL ,pH7.0~7.2,每管分装4~5mL,115℃灭菌30min 。
23.动力、靛基质、尿素(MIU )综合培养基 (用于检验细菌运动性、吲哚、尿素酶用)
蛋白胨(含色氨酸)30 g ,KH2PO4 2g 、NaCL 5g 、琼脂3 g 、0.2%酚红酒精溶液2mL 、尿素20g 、蒸馏水1000mL 。分装于小试管,112℃灭菌15min ,灭菌后液体应呈淡黄色。
24.半固体培养基(用于细菌的动力试验)
牛肉膏5.0g ,蛋白胨10.0g ,琼脂3~5g,蒸馏水1000mL ,pH7.2~7.4,熔化后分装试管(8mL )121℃灭菌15min ,取出直立试管待凝固。
25.M17琼脂培养基(分离、培养乳球菌等的选择培养基)
植物蛋白胨5g ,酵母粉5g ,聚蛋白胨5g ,抗坏血酸0.5g ,牛肉膏2.5g ,MgSO4 7H2O 0.01g,ß-甘油磷酸二钠19g ,蒸馏水1000mL ,121℃灭菌15min 。
26.蛋白胨水溶液(靛基质试验用)
蛋白胨20.0g ,NaCL 5.0g,蒸馏水1000mL ,pH7.4,121℃灭菌15min 。
27.精氨酸双水解酶实验培养基
成分:蛋白胨1g ,氯化钠5g ,K2HPO4 0.3g,L-精氨酸10g ,琼脂10g ,酚红0.01g ,蒸馏水1000mL 。
制法:除酚红外,将以上各成分溶解,调节pH7.0~7.2,加入指示剂,分装试管,培养基高约4~5cm,121℃灭菌20min 备用。
28.葡萄糖氧化发酵培养基
成分:蛋白胨2g ,氯化钠5g ,1%溴百里酚蓝水溶液3mL ,琼脂5~6g,K2HPO4 0.2g,葡萄糖1%,蒸馏水1000mL 。
制法:除溴百里酚蓝外,溶解以上各成分,调节pH 值为6.8~7.0,分装试管,用115℃灭菌20min 备用。
29.假单胞菌选择培养基(PSA )
基础成分:多价胨16g ,水解酪蛋白10g ,硫酸钾10g ,氯化镁1.4g ,琼脂11g ,甘油10mL ,蒸馏水1000mL ,pH7.1±0.2。
CFC 选择添加物:溴化十六烷基三甲胺10mg/L,梭链孢酸钠10mg/L,头孢菌素50mg/L。
制法:先将基础成分加热煮沸使之完全溶解,121℃,15min 条件下灭菌。冷却到50℃备用。当基础培养基冷却到50℃后加入溶解后过滤除菌的CFC 补充物,完全混合后倒平板备用。
30.乳糖胆盐发酵培养基
成分:蛋白胨20g ,猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g ,乳糖10g ,0.04%溴甲酚紫水溶液25mL ,蒸馏水1000mL ,pH7.4。
制法:将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正pH ,加入指示剂,分装每管10mL ,并放入一个小倒管,115℃,15min 高压灭菌.
注:双料乳糖胆盐培养基除蒸馏水外,其他成分加倍。
31.伊红美兰琼脂培养基
成分:蛋白胨20g ,乳糖10g ,磷酸氢二钾2g ,琼脂17g ,2%伊红Y 溶液20mL ,0.65%美兰溶液10mL ,蒸馏水1000mL ,pH7.1。
制法:将蛋白胨、磷酸氢二钾和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH ,分装于烧瓶内,高压灭菌121℃,15min 备用。
临用时,加入乳糖,并加热溶化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美兰溶液,摇匀,倾注平板。
32.乳糖发酵培养基
成分:蛋白胨20g ,乳糖10g ,0.04%溴甲酚紫水溶液25mL ,蒸馏水1000mL ,pH7.4。
制法:将蛋白胨、乳糖溶于水中,校正pH ,加入指示剂,按检验要求分装30mL 、10mL 或3mL ,并放入一个小倒管,115℃,15min 高压灭菌。
33.胰酪胨大豆肉汤
成分:胰酪胨(或胰蛋白胨)17g ,植物蛋白胨(或大豆蛋白胨)3g ,氯化钠100g ,磷酸氢二钾2.5g ,葡萄糖2.5g ,蒸馏水1000mL 。
制法:将上述成分混合,加热并轻轻搅拌溶液,分装后121℃15min 高压灭菌。最终pH7.3±0.2。
34.7.5%氯化钠肉汤
成分:蛋白胨10g ,牛肉膏3g ,氯化钠75g ,蒸馏水1000mL ,pH7.4。
制法:将上述成分加热溶解,校正pH ,分装试管,121℃15min 高压灭菌。
35.豆粉琼脂
成分:牛心消化汤1000mL ,琼脂20g ,黄豆粉浸液50mL ,pH 7.4~7.6。
制法:将琼脂加在牛心消化汤中,加热溶解,过滤。加入黄豆粉浸液,分装每瓶100mL ,121℃15min 高压灭菌。
36.血琼脂平板
成分:豆粉琼脂100mL ,脱纤维羊血(或兔血)5~10mL。
制法:加热融化琼脂,冷至50℃,以无菌操作加入脱纤维羊血或兔血,摇匀,倾注平板。或分装灭菌试管,摆成斜面。
37.aird-Parker 氏琼脂平板
成分:胰蛋白胨10g ,牛肉膏5g ,酵母膏1g ,丙酮酸钠10g ,甘氨酸12g ,氯化锂(LiCL·6H2O )5g ,琼脂20g ,蒸馏水950mL ,pH7.5。
增菌剂的配法:30~50%卵黄盐水50mL 与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合,保存在冰箱内。
制法:将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解。冷至25℃,矫正pH 。分装每瓶95mL ,121℃高压灭菌15min 。临用时,加热融化琼脂,冷至50℃,每95mL 加入预热至50℃的卵黄-亚碲酸钾增菌剂5mL ,摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h 。
38.肉浸液
成分:绞碎牛肉500g ,氯化钠5g ,蛋白胨10g ,磷酸氢二钾2g ,蒸馏水1000mL ,pH 7.4~
7.6。
制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g ,混合后放冰箱24h ,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后矫正pH7.4~7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121℃,30min 高压灭菌。
39.兔血浆
成分:柠檬酸钠0.106 mol/L(31.3g Na3C6H5O7·2H2O 溶于1L 蒸馏水中)
制法:一份加兔血9份混合后离心2000rpm ,10min 吸取上清液即为兔血浆。
40.肠毒素产毒培养基
成分:蛋白胨20g ,胰消化酪蛋白200mg ,氯化钠5g ,磷酸二氢钾1g ,氯化钙0.1g ,硫酸镁0.2g ,菸酸0.01g ,蒸馏水1000mL ,琼脂10~12g(固体透析培养用),pH7.2~7.4。
41.葡萄糖肉浸液肉汤
成分:绞碎牛肉500g ,氯化钠5g ,蛋白胨10g ,磷酸氢二钾2g ,葡萄糖10g ,蒸馏水1000mL ,pH7.4~7.6。
制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g ,混合后放冰箱24h ,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。加入蛋白胨、葡萄,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH ,煮沸并过滤、分装,121℃30min 高压灭菌。
42.牛心浸液
成分:绞碎牛心500g ,氯化钠5g ,蛋白胨10g ,磷酸氢二钾2g ,蒸馏水1000mL ,pH7.4~
7.6。
制法:将绞碎牛心500g ,混合后放冰箱24h ,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH ,煮沸并过滤、分装,121℃,30min 高压灭菌。
43.匹克氏肉汤
成分:含1%胰蛋白胨的牛心浸液200mL ,1:25000结晶紫盐水溶液10mL ,1:800三氮化钠溶液10mL ,脱纤维兔血(羊血)10mL 。
制法:将上述已灭菌的各种成分,无菌依次混合,分装于无菌试管内,每管2mL ,保存冰箱内备用。
44.胰蛋白胨大豆胨琼脂(TSA )
成分:胰蛋白胨15g ,大豆胨5g ,氯化钠5g ,琼脂约13g ,蒸馏水1000mL ,pH7.1~7.5。
制法:按量将各成分溶解,加热使完全溶解,调pH 值,121℃,15min 灭菌。
45.缓冲蛋白胨水(BP)培养基
成分:蛋白胨l0g ,NaCL5g ,Na2HPO4.12H20 9g,H2PO4 1.5g,蒸馏水1000mL ,pH7.2。
制法:121℃灭菌15min ,沙门氏菌前增菌使用。
46.氯化镁孔雀绿(MM)增菌液
成分:
甲液:胰蛋白胨5g ,NaCL 8g,KH2P04 1.6g,蒸馏水1000m1
乙液:MgCL2 40g,蒸馏水100mL
丙液:0.4%孔雀绿水溶液
制法:分别按上述成分配好后,121℃灭菌15min 备用。临用时取甲液90mL 、乙液9mL 、丙液0.9mL 以无菌操作混合即成。
47.四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液
成分:多胨或胨1g ,CaCO3 10g,Na2S203 30g,蒸馏水1000m1。
制法:将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100m1。分装时应随时振荡,使其中的CaCO3混匀。121℃灭菌15min 备用。临用时每100m1培养基中加入碘溶液2m1、0.1%煌绿1m1。
48.亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液
成分:蛋白胨5g ,乳糖4g ,亚硒酸氢钠4g ,Na2HPO4 5.5g,KH2PO4 4.5g,L —胱氨酸0.01g ,蒸馏水1000m1,pH7.0。
制法:将除亚硒酸氢钠和胱氨酸以外的各种成分溶解于900mL 蒸馏水中,加热煮沸,冷却备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL 蒸馏水中,加热煮沸,冷却,以无菌操作与上液混合。再加入1%L-胱氨酸—氢氧化钠溶液1m1。分装于灭菌瓶中,每瓶l00mL 。
49.亚硫酸铋琼脂(BS)培养基
成分:蛋白胨10g ,牛肉膏5g ,葡萄糖5g ,FeSO4 0.3g,Na2HPO4 4g ,煌绿0.025g ,柠檬酸铋铵2g ,Na2SO4 6g,琼脂20g , 蒸馏水1000mL ,pH7.5。
制法:将前5种成分溶解于300mL 蒸馏水中,再将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50m1蒸馏水溶解。将琼脂于600mL 蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃左右。将以上三液合并,补充蒸馏水至1000m1,校正pH ,加0.5%煌绿水溶液5mL ;摇匀。冷却至50~55℃,倾注平板。
注:此培养基不需高压灭菌。制备过程中不宜过分加热,以免降低其选择性。应在临用前一天制备,贮存于室温暗处。超过48h 不宜使用。
50.DHL 琼脂培养基
成份:蛋白胨20g ,牛肉膏3g ,乳糖10g ,蔗糖10g ,去氧胆酸钠1g ,Na2S203 2.3g,柠檬酸钠1g ,柠檬酸铁铵1g ,中性红0.03g ,琼脂20g ,蒸馏水1000mL ,pH7.3。
制法:除中性红和琼脂外,将其他成分溶解于400m1蒸馏水中,校正pH 值。再将琼脂溶于600mL 蒸馏水中,两液合并,加0.5%中性红水溶液6mL ,待冷至50~55℃,倾注平板。
51.HE 琼脂培养基
成份:月示 胨12g ,牛肉膏3g ,乳糖12g ,蔗糖2g ,水杨素2g ,胆盐20g ,NaCL 5g,琼脂20g ,蒸馏水1000m1,0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mL ,Andrade 指示剂20mL ,甲液20mL ,乙液20m1。
制法:将前七种成分溶解于400mL 蒸馏水中。作为基础液,加入甲液和乙液,校正pH 值为
7.5,再加入指示剂;将琼脂溶于600m1蒸馏水中。二者合并,待冷至50~55℃,倾注平板。
注:①此培养基不可高压灭菌;②Andrade 指示剂:酸性复红0.5g ,1M NaOH溶液16m1,蒸馏水100mL 。制法为:将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如果复红退色不全,再加氢氧化钠溶液1~2mL。③甲液:Na2S203 34g,柠檬酸铁铵4g ,蒸馏水100m1。④乙液:去氧胆酸钠10g ,蒸馏水100mL 。
52.S.S. 琼脂
(1)基础培养基
成分:牛肉膏5g ,月示 胨5g ,三号胆盐3.5g ,琼脂17g ,蒸馏水1000mL 。
制法:将牛肉膏、月示 胨和胆盐溶解于400mL 蒸馏水中,将琼脂溶于500m1蒸馏水中,二液混合,121℃灭菌15min 备用。
(2)完全培养
成分:基础培养基1000mL ,乳糖10g ,柠檬酸钠8.5g ,Na2S203 8.5g,10%柠檬酸铁溶液10m1,1%中性红溶液2.5m1,0.1%煌绿溶液0.33m1。
制法:加热熔化基础培养基,按比例加入上述染料以外的各成分,充分混合均匀,校正pH 值为7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。
注:制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48h 内使用;煌绿溶液配好后应在10d 以内使用。
53.靛基质试验培养基
成分:蛋白胨10g ,氯化钠5g ,水1000mL ,pH7.3~7.5。
制法:称取各成分,加入水中加热溶化。用1mol/L NaOH调至pH 7.4~7.5。分装小试管,每管约3mL ,116℃,15min 高压灭菌后4~10℃保存备用。
54.三糖铁琼脂(TSI )
成分:蛋白胨20g ,硫代硫酸钠0.2g ,乳糖10g ,蒸馏水1000mL ,硫酸亚铁铵0.2g ,蔗糖10g ,酚红0.025g ,氯化钠5g ,牛肉膏5g ,琼脂12g ,葡萄糖1g ,pH7.4。
制法:将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中,校正pH 。加入琼脂,加热煮沸以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL ,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min 后放置高层斜面备用。
55.尿素琼脂
成分:蛋白胨1g ,葡萄糖1g ,0.4%酚红溶液3mL ,蒸馏水1000mL ,氯化钠5g ,磷酸氢二钾2g ,琼脂20g ,20%尿素溶液100mL ,pH7.2±0.1
制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH ,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min ,冷至50~55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%。最终pH 为7.2±0.1。分装于灭菌试管内,放成斜面备用。
56.ONPG 培养基
成分:邻硝基酚β-D-半乳糖昔(O-NitropHenyl -β-D -galactopyranoside) (ONPG) 60mg ,0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL,1%蛋白胨水(pH7.5) 30mL
制法:将ONPG 溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管,每管0.5mL ,用橡皮塞塞紧。
57.氨基酸脱羧酶试验培养基(赖氨酸培养基)
成分:蛋白胨5g ,酵母浸膏3g ,葡萄糖1g ,蒸馏水1000mL ,1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液1mL ,L -氨基酸或DL -氨基酸0.5或1g/100mL,pH6.8。
制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL ,分别加入赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸等各种氨基酸。L -氨基酸按0.5%加入,DL -氨基酸按1%加入。再行校正pH 至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL ,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min 。
58.氰化钾(KCN)培养基
成分:蛋白胨10g ,氯化钠5g ,磷酸二氢钾0.225g ,磷酸氢二钠5.64g ,蒸馏水1000mL ,0.5%氰化钾溶液20mL ,pH7.6。
制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min 。放在冰箱内使其充分冷却。每100mL 培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1∶10000) ,分装于12mm×100mm灭菌试管,每管约4mL ,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月。同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。
59.丙二酸钠培养基
成分:酵母浸膏1g ,硫酸铵2g ,磷酸氢二钾0.6g ,磷酸二氢钾0.4g ,氯化钠2g ,丙二酸钠3g ,0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL ,蒸馏水1000mL ,pH6.8。
制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH 后再加入指示剂,分装试管,121℃高压灭菌15min 。
60.氧化酶试验试剂
(1)1% 盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存。
(2)1% 四甲基对苯二胺溶液:将四甲基对苯二胺1.0g 溶于100.0mL 蒸馏水即可。通常使用新鲜配制的试剂,如放置于冷藏库,可在配制后7天内使用。
(3)1% α-萘酚-乙醇溶液。
61.亚硒酸盐煌绿增菌液
成分:蛋白胨5g ,酵母膏5g ,甘露醇5g ,牛磺胆酸钠1g ,20%亚硒酸氢钠溶液20m1,0.25mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 100mL,2%煌绿水溶液0.25mL ,蒸馏水900m1。
制法:将前三种成分溶于水中,调节pH 值为7.0,加入牛磺胆酸钠,加热溶解调pH 值(其中干鸡蛋白样品pH8.2土0.1;其它干蛋品pH7.2土0.1,冰蛋品pH7.0土0.1)(具体数值如下)121℃灭菌15min ,放冷备用,此为甲液;称取4g 亚硒酸氢钠,溶于19mL 蒸馏水中,即为20%亚硒酸氢钠溶液20mL ,12l ℃灭菌15min ,放冷备用,此为乙液;精确称取K2HPO4(无水)2.18g ,KH2PO4(无水)1.71g ,溶解于蒸馏水中,定容至100mL 。12l ℃灭菌15min ,放冷备用,此为丙液;称取煌绿(灿烂绿)0.2g 溶于10mL 蒸馏水中,即为2%煌绿水溶液,此为丁液。用前将乙液和丙液依次加入甲液中,复查混合液的pH 值,加入煌绿溶液。无菌操作分装于无菌烧瓶或试管内,每瓶150m1。培养基应在1~5d内使用。
62.GN 增菌液
成分:胰蛋白胨20g ,葡萄糖1g ,甘露醇2g ,柠檬酸钠5g ,去氧胆酸钠0.5g ,磷酸氢二钾
4g ,磷酸二氢钾1.5g ,氯化钠5g ,蒸馏水1000mL ,pH7.0。
制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH 。分装每瓶225mL ,115℃高压灭菌15min 。
63.苯丙氨酸培养基
成分:酵母浸膏3g ,DI -苯丙氨酸(或L -苯丙氨酸1g ) 2g,磷酸氢二钠1g ,氯化钠5g ,琼脂12g ,蒸馏水1000mL ,
制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min ,使成斜面。
64.西蒙氏柠檬酸盐培养基
成分:氯化钠5g ,硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g,磷酸二氢铵1g ,磷酸氢二钾1g ,柠檬酸钠5g ,琼脂20g ,蒸馏水1000mL ,0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL ,pH6.8。
制法:先将盐类溶解于水内,校正pH ,再加琼脂加热溶化。然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min 后放成斜面。
65.葡萄糖铵培养基
成分:氯化钠5g ,硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g,磷酸二氢铵1g ,磷酸氢二钾1g ,葡萄糖2g ,琼脂20g ,蒸馏水1000mL ,0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL ,pH6.8。
制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH ,再加琼脂加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min 后放成斜面。
66.麦康凯琼脂
成份:蛋白胨17g ,月示 胨3g ,猪(牛、羊) 胆盐5g ,NaCL 5g,,琼脂17g ,蒸馏水1000m1,乳糖10g ,0.01%结晶紫水溶液10m1,0.5%中性红水溶液5m1。
制法:将蛋白胨、月示 胨、胆盐和氯化钠溶于400mL 蒸馏水内,校正pH 值至7.2。将琼脂于600mL 蒸馏水中煮沸溶解。合并两液,分装于烧瓶内,121℃灭菌15min 备用。临用时加热溶化上述琼脂,趁热加入乳糖。冷至50~55℃时加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。
注:结晶紫和中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
67.肠道菌增菌肉汤(EE 肉汤)
成分:蛋白胨10g ,葡萄糖5g ,牛胆盐20g ,磷酸氢二钠8g ,磷酸二氢钾2g ,煌绿0.015g ,蒸馏水1000mL ,pH7.2。
制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH 。分装每瓶30mL ,115℃高压灭菌15min 。注意必须使用纯净的牛胆盐和煌绿,减少对受损且数量极少的肠杆菌的生长抑制。
68.克氏双糖铁琼脂(KI)
上层培养基成分:血消化汤(pH7.6) 500mL,琼脂6.5g ,硫代硫酸钠0.1g ,硫酸亚铁铵0.1g ,乳糖5g ,0.2%酚红溶液5mL 。
下层培养基成分:血消化汤(pH7.6) 500mL,琼脂2g ,葡萄糖1g ,0.2%酚红溶液5mL 。
制法:取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解。分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌的12mm×100mm试管内,每管约2mL 。115℃高压灭菌10min 。将上层培养基放在56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固。等下层培养基凝固后,以无菌操作将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5mL 并放成斜面。
69.Elek 氏培养基(毒素测定用)
成分:胨20g ,麦芽糖3g ,乳糖0.7g ,氯化钠5g ,琼脂15g ,40%氢氧化钠溶液1.5mL ,蒸馏水1000mL ,pH7.8。
制法:用500mL 蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸并用滤纸过滤。用1mo1/L氢氧化钠校正pH 。用另外500mL 蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合,分装试管10mL 或20mL 。121℃高压灭菌15min 。临用时加热溶化琼脂倾注平板。
70.EC 增菌液(36)
成分:胰蛋白胨20g ,胆盐1.5g ,乳糖5g ,NaCL5g ,无水KH2PO4 1.5g,无水K2HPO4 4g,蒸馏水1000mL ,pH7.0。
制法:将各成分溶于水中,调pH 值,依据实验需求分装三角瓶或试管。121℃灭菌15min 备用。之后,如果通过灭菌细菌滤器添加1‰的20mg/L新生霉素,即为改良EC 增菌液。
71.改良山梨醇麦康凯琼脂(TC-SMAC )
成分:蛋白胨7g ,眎胨3g ,猪胆盐5g ,山梨醇10g ,NaCL 5g ,琼脂18g ,0.5%中性红水溶液5mL ,0.01%结晶紫水溶液10mL ,亚碲酸钾2.5mg ,头孢肟0.05g ,蒸馏水1000mL ,pH7.2。
制法:除山梨醇、指示剂和抑菌剂外,其余成分溶于水中,溶解后调pH 值。115℃灭菌20min 。临用时溶化培养基,冷至50℃,加入山梨醇、灭菌的结晶紫和中性红;加入过滤除菌的1%亚碲酸钾250μL和50g/L头孢肟1mL ,混匀,倾注倒平板。
72.LST 肉汤
成分:胰蛋白胨或胰酪胨(Tryticase )20g ,NaCL 5.0g,乳糖5.0g ,K2HPO4 2.75g,KH2PO4 2.75g,月桂基硫酸钠0.1g ,蒸馏水1000mL 。
制法:将各成分溶解于蒸馏水中。分装到有倒立发酵管的20mm×150mm试管中,每管10mL 。121℃高压灭菌15min 。最终pH6.8±0.2。
73.MUG-LST
LST 肉汤中添加4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG ),使终浓度为0.1g/L。
74.甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
成分:蛋白胨10g ,牛肉膏1g ,甘露醇10g ,氯化钠10g ,琼脂15g ,蒸馏水1000mL ,0.2%酚红溶液13mL ,50%卵黄液50mL ,多粘菌素B 100国际单位/mL,pH7.4。
制法:将前面五种成分加入于蒸馏水中,加热溶解,校正pH ,加入酚红溶液。分装烧瓶,每瓶100mL ,121℃高压灭菌15min 。临用时加热溶化琼脂,冷至50℃,每瓶加入50%卵黄液5mL 及多粘菌素B 10000国际单位,混匀后倾注平板。
75.酪蛋白琼脂
成分:酪蛋白10g ,牛肉膏3g ,磷酸氢二钠2g ,氯化钠5g ,琼脂15g ,蒸馏水1000mL ,0.4%溴麝香草酚蓝溶液12.5mL ,pH7.4。
制法:将除指示剂外的各成分混合,加热溶解(但酪蛋白不溶解) ,校正pH 。加入指示剂,分装烧瓶,121℃高压灭菌15min 。临用时加热溶化琼脂,冷至50℃,倾注平板。
注:将菌株划线接种于平板上,如沿菌落周围有透明圈形成,即为能水解酪蛋白。
76.木糖-明胶培养基
成分:胰胨10g ,酵母膏10g ,木糖10g ,磷酸氢二钠5g ,明胶120g ,蒸馏水1000mL ,0.2%酚红溶液25mL ,pH7.6。
制法:将除酚红以外的各成分混合,加热溶解,校正pH 。加入酚红溶液,分装试管,121℃高压灭菌15min ,迅速冷却。
77.动力-硝酸盐培养基(A 法)
成分:蛋白胨5g ,牛肉膏3g ,硝酸钾1g ,琼脂3g ,蒸馏水1000mL ,pH7.0。
制法:加热溶解,校正pH 。分装试管,每管10mL ,121℃高压灭菌15min 。
78.甲萘胺-醋酸溶液、对氨基苯磺-醋酸溶液(硝酸盐培养基)
成分:硝酸盐0.2g ,蛋白胨5g ,蒸馏水1000mL ,pH7.4。
制法:溶解,校正pH ,分装试管,每管约5mL ,121℃高压灭菌15min 。
硝酸盐还原试剂:
(1)甲萘胺-醋酸溶液:将甲萘胺0.5g 溶解于5mol/L乙酸溶液100mL 中。
(2)对氨基苯磺-醋酸溶液:将对氨基苯磺酸0.8g 溶解于5mol/L乙酸溶液100mL 中。
79.氯化钠结晶紫增菌液
成分:蛋白胨20g ,氯化钠40g ,0.0l %结晶紫溶液5mL ,蒸馏水1000mL ,pH9.0。
制法:除结晶紫外其他按上述成分配好,加热溶解,约加3%氢氧化钾溶液4.5mL ,校正pH ,加热煮沸,过滤,再加入结晶紫溶液,混合分装试管,121℃高压灭菌15min 备用。
80.3.5%氯化钠三糖铁琼脂
成分:蛋白胨20g ,牛肉膏5g ,乳糖10g ,蔗糖10g ,葡萄糖1g ,氯化钠35g ,硫酸亚铁铵0.2g ,硫代硫酸钠0.2g ,琼脂12g ,酚红0.025g ,蒸馏水1000mL ,pH7.4。
制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH ,加入琼脂,加热煮沸使琼脂溶化,加入0.2%酚红溶液12.5mL ,摇匀,分装试管,121℃高压灭菌15min ,放置高层斜面备用。
81.TCBS 琼脂(配方1)
成分:酵母膏5g ,蛋白胨10g ,蔗糖20g ,硫代硫酸钠10g ,柠檬酸钠10g ,牛胆酸钠3g ,牛胆汁粉5g ,氯化钠10g ,柠檬酸铁1g ,溴麝香草酚蓝(2%溶液)20mL ,草酚蓝(1%溶液)4mL ,琼脂15g ,pH8.6。
制法:将上述成分加蒸馏水至1000mL ,混合,使全部溶解,校正pH 为8.6,加热煮沸,不需高压灭菌,倾注平皿15~20mL。
注:不分解蔗糖的副溶血性弧菌,在此培养基上生长呈绿色菌落,分解蔗糖的细菌呈黄色菌落。
82.TCBS 琼脂(配方2)
成分:酵母浸膏5g ,蛋白胨10g ,硫代硫酸钠10g ,枸橼酸钠10g ,牛胆粉8g ,蔗糖20g ,氯化钠10g ,柠檬酸铁1g ,溴麝香草酚兰0.04g ,麝香草酚蓝0.04,琼脂约13g ,水1000mL ,pH8.5~8.7。
制法:除指示剂外,将剩余成分混合于1000mL 水中,煮沸溶解。调至pH8.5~8.7,加入指示剂,混匀。再次煮沸1~2min。无需高压灭菌。
83.改良Camp —BAP 培养基
成分:胰蛋白胨10g ,蛋白胨10g ,葡萄糖1g ,酵母浸膏2g ,氯化钠5g ,焦亚硫酸钠0.1g ,琼脂15g ,蒸馏水1000mL ,硫乙醇酸钠1.5g ,万古霉素10mg ,多粘菌素B 2500国际单位,两性霉素B(AmpHotericin B) 2mg,头孢霉素(CepHalosporin )15mg ,亦可用Ceporan)
脱纤维羊血50mL ,pH7.0土0.2。
制法:除抗生素和羊血外,将其他成分混合,加热溶解,校正pH 到7.0土0.2。装瓶,每瓶100mL 。121℃高压灭菌15min 备用。此为布氏琼脂基础培养基;临用前,加热溶解基础琼脂,冷至60℃。每100mL 基础琼脂中,加入脱纤维羊血5mL 、抗生素混合液0.5mL 及两性霉素B ,头孢霉素混合液0.5mL ,摇匀,倾注平板。
注:两性霉素B ,头孢霉素混合液配法:称两性霉素B 2mg和头孢霉素15mg ,加5mL 蒸馏水混合即成。
84.甘氨酸培养基
成分:布氏肉汤1000mL ,琼脂粉1.6g ,甘氨酸(glycine)10g。
制法:将以上成分混合,加热溶解,校正pH7.0,分装试管,每管4mL ,121℃高压灭菌15min ,备用。
85.Skirrow 氏培养基
成分:蛋白胨15g ,胰蛋白胨(typtone) 2.5g,酵母浸膏5g ,氯化钠5g ,琼脂15g ,蒸馏水l000mL ,甲氧苄氨嘧啶(trimethoprin,TMP) 5mg,万古霉素(vancomycin) 10mg,多粘菌素B(po1ymyxin) 2500国际单位,冻溶马血70.0mL ,pH7.4。
制法:除甲氧苄氨嘧啶、抗生素和冻溶马血外,其他成分混合溶解。校正pH7.4,装瓶100mL 。121℃高压灭菌15min ,备用。此即血琼脂基础培养基。临用前,加热溶解基础培养基,冷至60℃。每100mL 基础培养基中,加入冻溶二次的马血及TMP 、抗生素混合液0.5mL ,摇匀,倾注平板。
86.庖肉培养基
成分:牛肉浸液1000mL ,蛋白胨30g ,酵母浸膏5g ,磷酸二氢钠5g ,葡萄糖3g ,可溶性淀粉2g ,碎肉渣适量,pH7.8。
制法:称取新鲜除脂肪和筋膜的牛肉500g ,加蒸馏水1000mL 和1mol /L 氢氧化钠溶液25mL ,
搅拌煮沸15min ,充分冷却,除去表层脂肪,澄清,过滤,加水补足至1000mL 。加入除碎肉渣外的各种成分,校正pH 。
87.卵黄琼脂培养基
成分:基础培养基为肉浸液1000mL ,蛋白胨15g ,氯化钠5g ,琼脂25~30g,pH7.5。
50%葡萄糖水溶液。
50%卵黄盐水溶液。
制法:基础培养基分装每瓶100mL 。121℃高压灭菌15min 。临用时加热溶化,冷至50℃,每瓶内加50%葡萄糖水溶液2mL 和50%卵黄盐水悬液10~15mL,摇匀,倾注平板。
88.EB 增菌液.
成分:胰胨17g ,多价胨3g ,酵母膏6g ,氯化钠5g ,磷酸二氢钾2.5g ,葡萄糖2.5g ,蒸馏水1000mL ,pH7.2~7.4。
制法:121℃高压灭菌15min ,使用前加吖啶黄溶液15mg/L、萘啶酮酸溶液40mg /L 和放线菌酮50mg /L ,此三种成分要过滤除菌或无菌配制。
89.胰酪胨大豆琼脂(TSAYE )
成分:胰胨17g ,多价胨3g ,酵母膏6g ,氯化钠5g ,磷酸氢二钾2.5g ,葡萄糖2.5g ,琼脂15g ,蒸馏水l000mL ,pH7.2~7.4。
制法:加热溶解,调pH 值,分装,121℃高压灭菌15min 备用。
90.硫酸铁铵半固体(SIM)
成分:胰胨20g ,多价胨6g ,硫酸铁铵0.2g ,硫代硫酸钠0.2g ,琼脂3.5g ,蒸馏水1000mL ,pH7.2。
制法:加热溶解,调pH 值,分装,121℃高压灭菌15min 备用。
91.改良的McBride 琼脂(MMA)
成分:胰胨5g ,多价胨5g ,牛肉膏3g ,葡萄糖1g ,氯化钠5g ,磷酸氢二钠lg ,苯乙醇2.5 mL ,无水甘氨酸10g ,氯化锂0.5g ,琼脂15g ,蒸馏水1000mL ,pH7.2~7.4。
制法:加热溶解,调pH 值,分装,121℃高压灭菌15min 备用。
92.STAA 培养基
成分:蛋白胨20.0g ,酵母提出物2.0g ,磷酸氢二钾1.0g ,硫酸镁1.0g ,甘油15mL ,琼脂13.0g ,乙酸铊50mg ,链霉素-硫酸盐500mg ,环己酰亚胺50mg ,蒸馏水1000mL ,pH7.0±0.2。
制法:除乙酸铊,链霉素-硫酸盐,环己酰亚胺外,其余缓慢加热使其完全溶解;121° C 下灭菌15min 。冷却到50°C 后,在无菌条件下加入上述三种物质的过滤除菌水溶液。
93.马丁(Martin )孟加拉红-链霉素琼脂培养基
成分:葡萄糖10.0g ,蛋白胨5.0g ,磷酸二氢钾1.0g ,硫酸镁0.5g ,孟加拉红33.4g ,琼脂20g ,蒸馏水1000mL ,pH5.5~5.7。
制法:以上各成分溶解、调pH 、分装,于121℃,20min 高压灭菌。倒平板前按每10mL 培养基加1mL0.03%链霉素溶液(含链霉素30mg/mL)。
94.Ames 检测营养肉汤液体培养基
成分:牛肉膏0.5g ,蛋白胨1.0g ,氯化钠0.5g ,蒸馏水100mL ,pH7.2~7.5。
制法:加热溶解,调pH 值,分装于三角瓶中121℃,20min 高压灭菌。
95.Ames 检测底层培养基
成分:葡萄糖20g ,柠檬酸(C6H8O7·H2O) 2g,磷酸氢二钾(K2HPO4) 3.5g,硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g ,琼脂粉12g ,蒸馏水 1000mL ,pH7.0。
制法:加热溶解,调pH 值,分装于三角瓶中115℃,20min 高压灭菌。
96.Ames 检测顶层培养基的制备
成分:脂粉0.6g ,氯化钠0.5g ,加蒸馏水90mL 。
制法:以上溶液加10mL0.5mol/L组氨酸-生物素溶液,分装灭菌。
97.氨苄青霉素培养基和氨苄青霉素-四环素培养基(1000mL )
成分:底层培养基910mL ,磷酸盐贮备液20mL ,40%葡萄糖溶液50mL ,组氨酸水溶液(0.4043g/100mL) 10mL,0.5mol/L生物素6mL ,0.8%氨苄青霉素溶液3.15mL ,0.8%四环素溶液0.25mL 。
制法:以上成分除抗生素外,均分别单独灭菌,使用时无菌操作混合;使用灭菌细菌滤器加入氨苄青霉素溶液,即为氨苄青霉素培养基,摇匀,铺平板;无菌同时加入氨苄青霉素和四环素就是氨苄青霉素-四环素培养基
98.组氨酸-生物素培养基(1000mL)
成分:底层培养基914mL ,磷酸盐贮备液20mL ,40%葡萄糖溶液50mL ,组氨酸水溶液(0.4043g/100mL) 10mL,0.5mol/L生物素6mL 。
制法:以上成分均已分别灭菌,用时无菌操作混匀。
99.CM 液体培养基
KNO3 3g,KH2PO4 1g,MgSO4.7H2O 0.5g,蛋白胨10g ,酵母粉5g ,葡萄糖20g ,蒸馏水1000mL ,pH6.5~6.8,15磅灭菌20min 。
100.HMM (高渗MM )培养基
KNO3 3g,KH2PO4 1g,MgSO4.7H2O 0.5g,微量元素液2mL ,葡萄糖20g ,蔗糖0.6M ,1.6%~1.8%琼脂粉,蒸馏水1000mL ,pH6.5~6.8,121℃灭菌20min 。
101.结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA )
成分:酵母提取物3.0g ,蛋白胨7.0g ,氯化钠5.0g ,3号胆盐1.5g ,乳糖10.0g ,中性红0.03g ,结晶紫0.002g ,蒸馏水1000mL 。
制法:将各成分加入蒸馏水中(染料配成1%的水溶液过滤后加入),加热煮沸,使各成分完全溶解,调节pH 至7.4±0.1。冷却至45℃倒入灭菌平皿,置2~-8℃保藏,4周内使用。
102.显色培养基琼脂(X a-GLcA)
成分:蛋白胨20.0g ,牛肉膏5.0g ,氯化钠5.0g ,琼脂20.0g ,5-溴4-氯3吲哚a-D 葡萄糖苷0.08g ,蒸馏水1000mL 。
制法:将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,调节pH7.3±0.1,分装适当容器,121℃高压灭菌3min 。
范文五:培养基成分
血平板【组分】
哥伦比亚血琼脂基础(Columbia agar base) 42.5g(购自OXOID 公司) 脱纤维羊血(sheep blood) 60.0ml
蒸馏水(distilled water) 1000ml
哥伦比亚血琼脂基础(Columbia agar base)的组成成分: 每1000毫升 琼脂(agar) 15.0g
蛋白胨(pantone) 10.0g
bitone 10.0g
NaCl (sodium chloride) 5.0g
牛心消化物(tryptic digest of beef heart) 3.0g
玉米淀粉(cornstarch) 1.0g
pH7.3±0.2 at 25℃
巧克力平板【组分】
血琼脂基础粉(Blood agar base) 42.5g 蒸馏水(Distilled water) 1000ml 酵母粉(Yeast extract) 5g 玉米淀粉(Corn starch) 1.0g 脱纤维羊血(Defibrinated sheep blood) 6% 氯化血红素(X因子) (Chlorhaematin ) 17mg NAD(V因子) (Nicotinamide-adenine dinucleotide) 30mg 万古霉素(Vancomycin ) 60mg 杆菌肽(Bacitracin ) 30mg 血琼脂基础粉的组成成分(composition of blood agar base): 每1000毫升 琼脂(agar ) 15.0g
牛肉浸出物(beef extract) 10.0g
NaCl (sodium chloride) 5.0g
蛋白胨(peptone ) 10.0g
pH7.3±0.2 at 25℃
淋球菌平板【组分】
GC 琼脂(GC agar base) 18g(购自OXOID 公司) 血红蛋白粉(Soluble haemoglobin powder) 5g(购自OXOID 公司) VCNT SR091E(VCNT selective supplement) 1瓶(购自OXOID 公司) VITOX SR090A(粉剂)(VITOX enrichment supplement)1瓶(购自OXOID 公司) VITOX SR090B(水剂)(VITOX enrichment supplement)1瓶(购自OXOID 公司) VCNT SR091E的组成成分:
万古霉素(Vancomycin ) 1.5mg 制霉菌素(Nystatin ) 6250units 多粘菌素E 甲烷磺酸盐(colistin methane suphonate) 3.75mg 甲氧苄氨嘧啶(Trimethoprim ) 2.5mg
M-H 平板【组分】
Mueller-Hinton Agar (购自OXOID 公司) 38g 蒸馏水(Distilled water) l000ml Mueller-Hinton Agar的组成成分(每1000毫升) :
牛肉浸出物(Beef infusion) 300.0g 酪蛋白的酸水解物(Acid hydrolysate of casein) 17.5g 琼脂(Agar ) 17.0g 淀粉(Starch ) 1.5g pH7.4±0.2 at 25℃
M-H 血平板【组分】
MH 琼脂基础(购自OXOID 公司) 38g
脱纤维羊血 60ml
蒸馏水 l000ml
Mueller-Hinton Agar的组成成分(每1000毫升) :
牛肉浸出物(Beef infusion) 300.0g 酪蛋白的酸水解物(Acid hydrolysate of casein) 17.5g 琼脂(Agar ) 17.0g 淀粉(Starch ) 1.5g pH7.4±0.2 at 25℃
营养琼脂平皿【组分】
营养琼脂干粉 36g
蒸馏水 1000ml
营养琼脂干粉的组成成分(每1000毫升):
琼脂(agar ) 15.0g
蛋白胨(peptone ) 5.0g
氯化钠(sodium chloride) 5.0g
酵母提取物(yeast extract) 2.0g
牛肉提取物(beef extract) 1.0g
pH7.4±0.2 at 25℃
麦康凯琼脂平板【组分】
麦康凯琼脂粉 50g
蒸馏水 l000ml
麦康凯琼脂粉的组成成分(每1000毫升):
明胶蛋白胨(Pancreatic digest of gelatin) 17.0g 琼脂(Agar) 13.5g 乳糖(Lactose) 10.0g 氯化钠(Sodium Chloride) 5.0g 胆盐(Bile Salts) 1.5g 酪蛋白胨(Pancreatic digest of Casein) 1.5g 动物组织蛋白胨(Peptic digest of Animal Tissue) 1.5g 中性红(Neutral red) 0.03g 结晶紫(Crystal Violet) 1.0mg pH7.1±0.2 at 25℃
SS 琼脂平板【组分】
SS 琼脂粉 60g
蒸馏水 l000ml
SS 琼脂粉的组成成份(每1000ml) :
蛋白胨(Proteose peptone) 5.0g 牛肉膏(Beef extract) 5.0g 乳糖(Lactose) 10.0g 琼脂(Agar) 13.5g 胆盐No.3(Bile salts ) 3.5g 枸橼酸钠.2H 2O(Sodium Citrate .2H2O) 8.5g 硫代硫酸钠.5H 2O (sodium hyposulfit) 8.5g 枸橼酸铁(ferric citrare) 1.0g 1%中性红水溶液(1% Neutral red solution) 2.5ml 0.1%煌绿水溶液 (0.1% brilliant green Solution) 0.33ml pH7.0~7.1
念珠菌显色培养基【组分】
念珠菌显色培养基干粉 47.7g(购自法国科玛嘉公司) 蒸馏水 l000ml
念珠菌显色培养基干粉的主要组成成份:
蛋白胨、色素、氯霉素、琼脂; PH6.3
克氏双糖铁培养基斜面【组分】
克氏双糖铁琼脂粉 53g
蒸馏水 l000ml
克氏双糖铁琼脂粉的组成成份(每1000ml ):
蛋白胨(Peptone ) 20.0g 牛肉膏(Beef extract) 3.0g 酵母粉(Yeast extract) 3.0g 乳糖(Lactose ) 10.0g 葡萄糖(Glucose ) 1.0g 氯化钠(Sodium chloride) 5.0g 枸橼酸铁铵(Ammonium ferric citrate) 0.5g 硫代硫酸钠(Sodium Hyposulfit) 0.5g 0.5%酚红水溶液(0.5% Phenol red water solution) 5ml 琼脂(Agar) 12g pH7.6±0.2 at 25℃
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