小贝1992
范文一：茶叶中总黄酮含量测定方法的研究
茶叶中总黄酮含量测定方法的研究
台湾黑龙茶-http://www.cy8.com.cn/pinpai/1818
实验1:茯砖茶中黄酮含量的测定 前言:
茯砖茶是古老茶类，属黑茶中的高档品种。黑茶是我国特有的产后发酵茶，拥有悠久的历史。黑茶中有丰富的茶多酚和黄酮类物质，其中大部分黄酮化合物具有生理活性，是极具开发前景的天然抗氧化剂，研究黑茶尤其是黑茶中的黄酮有着重要的实际意义。目前，已有一些学者对茶叶及其黄酮进行了一些研究，如刘勤晋等人“以食饵性高胆固醇血症家兔进行造模研究，观察康砖茶浸提液对高胆固醇血症的影响，证明黑茶有明显的降血脂作用;翟所强等53以患有高血脂并有不同程度感音神经性聋的男性作为对象观察饮用黑茶前后的血脂和听力变化。结果表明，黑茶可降低血胆固醇、甘油三酷，并能降低过氧化脂质的活性;杨宏等人通过动物学实验研究表明，金花茶叶的水浸出物，主要含黄酮类物质，具有降血糖、降血脂、抑制肿瘤生长、提高机体免疫能力等多种生理功能，是一种十分优良的功能性食品原料。而近年来许多药理研究也表明，黄酮类物质在防止皮肤疾病、增强免疫力和预防心血管疾病以及抗氧化活性等方面具有重要生物活性与功效。而对黑茶中黄酮的提取检测研究，却很少有文献报道。黄酮的检测主要是以其含芦丁为标准来衡量的，本文主要对湖南益阳产茯砖茶中黄酮的提取方法、提取时间和显色条件等进行了探究，以芦丁为对照品，用分光光度法对其含量进行了测定
实验目的 一、
1. 采用提取法从茯砖茶中提取黄酮类化合物。
2. 熟练测定黄酮总含量的方法，并可以进行准确测定。
二、 仪器及试剂
1. 仪器 722型可见光分光光度计，电子天平
2. 试剂芦丁、95%乙醇、5%的亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、氢氧化钠溶液 三、 实验原理
黄酮类化合物多为结晶性固体，难溶或不溶于水，易溶甲醇、乙醇等有机溶剂。所以可以用乙醇来提取黄酮类化合物。先用芦丁标准品配得一定浓度标准溶液，然后选择标准溶液的测定波长(一般为最大吸收波长)，接着根据浓度梯度的不同绘制标准曲线得浓度与吸光度的对应关系，最后根据提取液所测得的吸光度来计算茯砖茶中的黄酮浓度，从而计算出含量。
四、 实验步骤及现象
1.
2. 标准溶液的制备:精密称取0.5442g芦丁于1L容量瓶中，加适量甲醇，水浴上微热使其溶解，加乙醇定容至刻度，溶液为前绿色，得到0.5mg/ml标准溶液。 测定波长的选择及标准曲线的制备:准备6个干净的25ml容量瓶，贴上编号分别为1-6，按下表顺序分别加入下列试剂。先加入一定量标准溶液和1ml亚硝酸钠，溶液颜色由浅绿色转变为亮黄色，放置6min后加入硝酸铝溶液1ml，混匀，溶液由亮黄色变为深红棕色，放置6min，加10ml氢氧化钠溶液并加水稀释至刻度，混匀。
3.
取三号样，在420nm--540nm波长范围内测定吸收曲线，作图如下:结果表明在510nm处有最大吸收，故选择510nm作为总黄酮测定波长。
吸光度
波长
4.
标准曲线的制备:将配好的1—6号样品分别在510nm下测定吸光度，记录数据如下，做得标准曲线:
吸光度
浓度
5.
由上图可得:吸光度y与浓度x的关系为 y = 11.257 x + 0.0311 精密称取5.0012g茯砖茶于250ml圆底烧瓶中，加入95%乙醇100ml，将其置于85?水浴锅中回流60min，抽滤，得滤液100ml。(注:若滤液不足100ml，加入95%乙醇至100ml，方便计算)
五、 数据处理
计算过程如下:
根据标准曲线得:吸光度y与浓度x的关系为 y = 11.257 x + 0.0311 滤液0.5ml、1.0ml对应的吸光度分别为: y1 =0.567，y2 =1.121 代入公式可得:x1= 0.0476 mg/mlx2=0.0968mg/ml 实验称取茯砖茶5.0012g 10.5ml滤液溶于25ml容量瓶中，所得浓度为0.0476mg/ml，所以0.5ml滤液中的黄?
酮含量为25×0.0476，所以总的100ml滤液中的黄酮含量为:25×0.0476×(100/0.5)=238mg
茯砖茶中黄酮含量为:0.238g/5.0012g×100%=4.76%
21.0ml滤液溶于25ml容量瓶中，所得浓度为0.0968mg/ml，所以1.0ml滤液中的黄?
酮含量为25×0.0968，所以总的100ml滤液中的黄酮含量为:25×0.0968×(100/1)=242mg
茯砖茶中黄酮含量为:0.242g/5.0012g×100%=4.84%
综合?1?2得黄酮的平均百分含量为 4.8%，
绝对误差?1?2分别为:4.76%—4.8%=—0.04%;4.84%—4.8%=0.04%， 相对误差分别为:(0.04%/4.8%)×100%=0.83%;(0.04%/4.8%)×100%=0.83%。
六、 误差分析
1. 实验操作不当导致的误差，如称量过程中的误差，
配溶液过程中的误差
2. 茯砖茶被浸取后自身颜色较深，对吸光度的测量有
一定的影响
3. 在实验操作中加入亚硝酸钠及硝酸铝时放置时间不
够使得反应不充分导致的误差等。
七、 反思与总结
通过本次试验，我知道了测定植物中黄酮含量的一般方法，并可以熟练地掌握
其要点。
同组人:寇钰丽 20131001205
黑进城 20131001206
刘航 20131001208
实验时间:2016.10.20
范文二：12.香椿叶总黄酮含量测定方法研究
第１０卷
２０ｌ
第５期
中国食品学报
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｖ０１．１００ｃｔ．２
Ｎｏ．５Ｏ
１０
０年ｌＯ月
香椿叶总黄酮含量测定方法研究
李秀信１
（１西北农林科技大学林学院
张院民２
２理学院陕西杨凌７１２１００）
摘要
为了解决ＮａＮ０２－Ａ１（Ｎ０３）３法测定香椿总黄酮含量时数据偏高的问题，将ＮａＮ０２－Ａ１（Ｎ０３）３法与Ａ１Ｃ１３法
作比较。结果表明：ＮａＮ０２－Ａ１（Ｎ０３）３法比ＡＩＣｌ３法测定的香椿总黄酮含量高５９．９６ｍｇ／ｇ。ＡＩＣｌ３法可消除干扰，提高数据的准确度，其适宜酸度ｐＨｉ＞５．５，干扰试验的平均误差为０．００７ｎｌｇ，测定回收率９８．５４％，样品测定的相对
标准差为０．４６８％。
关键词椿叶；总黄酮；多酚类
文章编号１００９—７８４８（２０１０）０５－０２４３—０６
香椿为楝科高大落叶乔木．因其嫩芽有特殊香气而得名，是我国特有速生用材树种。香椿叶含有黄酮类化合物【１】。黄酮含量的测定方法有多种。如可见区络合法［２４、液相色谱法［４１、荧光法嘲、化学发光法同等。用于测定总黄酮的方法是可见区络合法。液相色谱主要用于单一黄酮化合物的测定。络合法的化学原理是：金属离子与酮羰基、邻位羟基形成配位化合物，使吸收带发生位移。可见区络合法与被测液的成分有很大关系．络合剂及酸度的选择非常重要。由于香椿叶的颜色较重，多酚类物质含量较高，因此．不适宜的测定方法会造成较大的误差。本文对可见区亚硝酸钠一硝酸铝法与可见区三氯化铝法进行比较分析。
１．２黄酮的两种测定方法
１．２．１
ＮａＮ０２－ＡＩ（Ｎ０３）法精密称取１０５ｏＣ烘至恒
重的芦丁０．１０００ｇ，用７０％乙醇溶解，摇匀，定容至１００ｍＬ。取１０ｍＬ此标准液于１００ｍＬ容量瓶中．稀释、定容为Ｏ．１ｍｇ／ｍＬ芦丁标准品溶液，备用。分别吸取芦丁标准液０．００、０．２５、０．５、１．０、２．０、
３．０、４．０、５．０ｍＬ于１０
ｍＬ比色管中，用７０％乙醇稀
ｍＬ，摇匀，静置６
释至５．０ｍＬ，先加入５％ＮａＮ０２０．３ｍＬ，摇匀，静置
６
ｍｉｎ，再加入５％Ａ１（Ｎ０３）３
４
０．３
ｍｉｎ．最后加入４％ＮａＯＨｍＬ。并用７０％乙醇水
溶液定容至刻度，摇匀，静置１２ｒａｉｎ，于波长５０４ｌｌｍ处测定吸光度。以吸光度值（ｙ）为纵坐标。显色液中芦丁质量浓度Ｘ（ｍ∥ｍＬ）为横坐标。用最小二乘法进行回归，线性方程Ｙ＝Ｉ．１２９９ｘ一０．００１７．相关系数ＲＥ＝０．９９９２。
１．２．２三氯化铝法分别吸取芦丁标准液０、２．０、
３．０、４．Ｏ、５．Ｏ、６．０、７．０ｍＬ于２５
１材料与方法
１．１试剂与仪器
芦丁，北京化学试剂公司。
傅立叶变换红外光谱仪（Ｍ一２１７３０型）、紫外一可见分光光度计（入一２１７型），美国Ｐ—Ｅ公司；精密ｐＨ计（ＰＨＳ一３Ｃ—１１Ａ型），中国上海雷磁新泾仪器公司。
ｍＬ比色管中．加入
１．５％Ａ１Ｃ１３８ｍＬ和醋酸一醋酸钠缓冲液（ｐＨ５．５）
４
ｍＬ，用７０％乙醇溶液定容至刻度，摇匀，静置０．５
ｈ。于４１５ｎｍ处测定吸光度。以吸光度值ｙ为纵坐
标。显色液中芦丁质量浓度Ｘ（ｍｇ／ｍＬ）为横坐标，用最ｄｘ－－乘法进行回归。线性方程为Ｙ＝Ｉ．０３９５＋
０．００５５Ｘ，Ｒ２＝Ｏ．９９９１。
１．３香椿叶样品处理
收稿日期：２００９—１２—３０
香椿叶：不同生长期（５月３０日、６月２０日、７月１日、８月２０日、９月１０日及９月３０日）的香椿叶于２００８年采自西北农林科技大学南校区
作者简介：李秀信，女，１９６４年出生，硕士，副教授
中国食品学报
２０１０年第５期
家属院内，阴干，粉碎。确称取１０．００ｇ香椿叶于锥形瓶中，按１：２０的固液比加入７０％乙醇溶液．６０℃水浴提取５ｈ。抽滤，滤液转移到１００ｍＬ容量瓶中，７０％ｇ。醇溶液定容。
称取香椿叶５０．００ｇ，加入２５０ｍＬ石油醚浸泡３０ｍｉｎ，抽滤，弃醚液，加入５００ｍＬ７０％乙醇溶液，６０℃回流提取５ｈ。抽滤，减压浓缩至一定体积．滤液转移至分液漏斗中。用等体积乙酸乙酯萃取３次，减压浓缩除乙酸乙酯，烘干，得黄褐色晶体。采用ＫＢｒ压片法绘制红外光谱图（见图１）。
２结果与分析
２．１
红外光谱法鉴定香椿叶的提取物
９０８０７０６０５０
魁４０
誊３０
２０
ｌＯ
Ｏ－１０—２０
２５００
２０００
波数，ｃｍ一１
（ａ）
９０８０
７０
６０５０４０瑙３０
簧
督２０
ｌＯＯ－１０—２０一３０
４０００
３５００３０００２５００２０００１５００
１０００
５０（
波数／ｃｍ－Ｉ
（ｂ）
图１
Ｆｉｇ．１
Ｉｎｆｒａｒｅｄ
香椿叶黄酮提取物（ａ）和芦丁（ｂ）的红外光谱图
ｌｅａｖｅｓ
ｏｆＴｏｏｎａ
ｓｐｅｃｔｒａｏｆｅｘ廿ａｅｍｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｉｎｓｉｎｅｎｓ蠡（ａ）ａｎｄｒｕｉｆｉｎ（ｂ）
第１０卷第５期香椿叶总黄酮含量测定方法研究
２４５
图５ａ中．在波数３
４０３
ｌ４（图５ｂ在３
４２４
动。图５ａ中，羟基波数较低，峰型较宽，说明香椿叶的黄酮类物质羟基缔合程度强于芦丁。结合图５ａ中１
７０５
ｃｍ一）处为羟基的伸缩振动吸收峰，ｌ
１６５４
７０５ｔｉｌｌ４和
ｃｍ一１（图５ｂ中在１
６５４
６５５
ｃｍ－１）处为羰基伸缩振
４４６
ｃｍ４处存在羰基吸收峰，说明香椿叶
动吸收峰。从１ｃｍ－１到ｌｃｌｎ４（图５ｂ中在ｃｍ一的多个吸
提取物中含有酚酸类物质。综上所述，香椿叶的提取物为黄酮类化合物。
２．２两种黄酮测定方法的比较
ＮａＮ０２－Ａｌ（Ｎ０３），法与Ａ１Ｃ１３法测定结果见表１。
１６５５、１６０２、ｌ５０４ｌ一－处的吸收峰为苯环骨架的ｃｍｏ到１
１００
呼吸振动）．从１
３５９
收峰为酚的碳氧伸缩振动和羟基的弯曲振动。
８００
ｅｌｌｌ—１附近的吸收峰为苯环上碳氢键的弯曲振
表１
Ｔａｂｌｅ
１
ＮａＮＯｒＡＩ（Ｎ０３）３法与ＡＩＣｌ３法测定结果比较
ｏｎ
Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒｕｓｕｈ
ＮａＮ０２－ＡＩ（Ｎ０３）３ａｎｄＡＩＣｌ３ｍｅｔｈｏｄ
由表１可知，ＮａＮＯ：一Ａ１（Ｎ０３）３法的测定结果偏高，约５９．９６ｍｇ／ｇ，而用Ａ１Ｃ１３法得出的结果则相对偏低。２．３干扰试验
香椿叶中含有大量的酚类物质，为明确Ａ１Ｃ１，法是否受酚类物质影响，做如下试验。以芦丁为被测试样，鞣酸为干扰剂（鞣酸是酚类物质的代表，含有邻位多羟基酚），按标准曲线的测定方法测
定。准确移取０．１ｍｇ／ｍＬ芦丁３．０ｍＬ，７份，分别加入０．１ｍｇ／ｍＬ鞣酸溶液Ｏ．５、１．０、１．５、２．Ｏ、２．５、３．０、
３．５
ｍＬ。再依次加入８ｍＬ０．１ｍｏｌ／ＬＡ１Ｃ１３和４ｍＬ
醋酸一醋酸钠缓冲液（ｐＨ５．５），用７０％乙醇溶液定容，试验结果见表２。结果芦丁测定值与实际值略有差异，平均误差０．００７Ｉ职。随着鞣酸量的增加，芦丁测定值无上升趋势．因此用Ａ１Ｃ１，方法测定香椿叶中的黄酮含量。不受酚和酸类物质的影响。
表２鞣酸对试验结果的影响
Ｔａｂｌｅ２
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｔａｎｎｉｎ
ａｃｉｄ
ｏｎ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔ
２．４酸度的影响
分别配制ｐＨ３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５和６．０醋酸一醋酸钠缓冲溶液。吸取２丁标准溶液和１．５％Ａ１Ｃ１，８
ｍＬ
ｍＬ０．１
吸收峰位置逐渐红移，当ｐＨ值大于５时，最大吸收峰位置稳定．位于波长４１５ｎｍ处，即最大吸光度值且稳定。用酸度计对缓冲溶液和显色后的测试液进行测试，结果发现ｐＨ值大于５．５时，测试液与缓冲溶液的差值最小。选定ｐＨ５．５作为测定用缓冲溶液酸度。
ｎａｇ／ｍＬ芦
５份。分别加入不
同ｐＨ值的醋酸一醋酸钠缓冲溶液，７０％乙醇溶液定溶。试验结果表明，随着溶液酸度的降低，最大
中国食品学报
２０１０年第５期
２．５回收率试验
取９月３０日香椿叶为试样，平行量取５份，每份５ｍＬ，分别加入１．０、２．０、３．０、４．０、５．０
ｍＬ０．１
ｍｇ／ｍＬ芦丁标准物质，ＡＩＣｌ３比色法测定，测定结果列于表３。平均回收率９８．５４％。
表３ＡＩＣｌ３比色法测定黄酮的回收率试验结果
ｔｅｓｔｉｎｇｒｅｓｕｌｔｏｆｆｌａｖｏｎｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｂｙ
ＡＩＣｌ３ｍｅｔｈｏｄ
１铀ｌｅ
３
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ
２．６精密度试验
取９月３０日香椿叶为试样，平行量取５份，每份５ｍＬ，Ａ１Ｃ１，比色法测定，结果如表４所示。
可以看出，用ＡＩＣｌ３比色法测定香椿中的总黄酮，标准差０．１１１０ｍｇ／ｇ。说明该方法重现性好。
表４
Ｔａｂｌｅ４
ＡＩＣｌ３比色法测定黄酮的精密度试验结果
ＡＩＣＩｓＭｅｔｈｏｄ
Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｔｅｓｔｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｏｆｆｌａｖｏｎｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｂｙ
３讨论
硝酸铝比色法测定黄酮的主要依据是铝离子（Ａ１３＋）与黄酮母核中的３位（或５位）上的羟基和４位羰基配合形成稳定结构【刀（图１），从而可用比
色法测定黄酮含量。香椿中的黄酮类化合物目前发现几种嘲，如图２所示。香椿中的黄酮类化合物均在３位（或５位）上含有羟基，因此可用硝酸铝比色法测定香椿中的总黄酮。
０Ｏ
０—’’Ａｌ“
（ａ）
Ａｌ／
（ｂ）
图２
Ｆｉｇ．２
Ｓｔａｂｌｅ
ＡＩ舢与黄酮母核中３位（或５位）羟基和４位羰基形成的稳定结构
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｆｏｒｍｅｄｂｅｔｗｅｅｎ
ｉｎ
ｍｏｔｈｅｒ
ＡＩ＊ａｎｄ３（ｏｒ５）ｈｙｄｒｏｘｙｌａｎｄ４－－ｃａｒｂｏｎｙｌｇｒｏｕｐｓ
ｎｕｃｌｅｕｓ
ｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
第１０卷第５期
香椿叶总黄酮含量测定方法研究
２４７
ＯＣＨ，
ＯＣＨ３
Ｃ飓Ｏ
ＨＯ
ＣＨ３０
（ｂ）
ＨＯ
ＯＨＯ
（ｄ）（ｅ）
（ｆ）
（ｇ）
（ｈ）
注：（ａ）６，７，８，２７一四甲氧基一５，６’一二羟基黄酮；（ｂ）５。７－二羟基一８一甲氧基黄酮；（ｃ）山奈酚；（ｄ）槲皮素；
（ｅ）槲皮索…３
Ｏ鼠李糖苷；（ｆ）槲皮素一３一Ｏ一葡萄糖甙；（ｇ）花青素；（ｈ）芦丁。
图３香椿中的黄酮类化合物
Ｆｉｇ．３
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｃｏｎｔａｉｎｅｄｉｎ
Ｔｏｏｎａｓｉｎｅｎｓｉｓ
此外。邻二酚类化合物也可与Ａ１３＋形成稳定结构（图３），从而干扰测定。香椿中的邻二酚类化合物主要为羟基苯甲酸类（原儿茶醛、原儿茶酸）、花青素类等。这些化合物具有邻二酚类结构，显色反应后在波长５０４ｎｍ处有强吸收。因此。直接用硝酸铝比色法测定香椿中的黄酮含量时。邻二酚类化合物会对测定结果产生正性干扰，导致测定结果偏高。
Ａ１Ｃ１，法反应原理：黄酮分子母核上有３－ＯＨ或５－ＯＨ．当Ｂ环上有邻位二羟基（这是黄酮类化
Ｈ
图４邻二酚类化合物与Ａ１３＋形成的稳定结构
Ｆｉｇ．４
Ｓｔａｂｌｅ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｆｏｒｍｅｄｂｅｔｗｅｅｎＡ１＊ａｎｄ
ｏｒｔｈｏ—ｄｉｐｈｅｎｏｌｉｃｐｏｕｎｄｓ
合物的典型结构）时，Ａ１Ｃ１。与之生成黄色的黄酮铝配合物［９１，从而定量显色；而在酸性环境下，只与酮羰基和其邻位羟基发生络合。反应如下：ｑ
＾ｒ｛ｏ
０Ｈ
Ｈ
坚曼塑塑．
０Ｈ
ＯＨ
Ｏ
Ａ１ＣＩ，法测定时，芦丁等黄酮类物质反应强烈，对黄酮类化合物的专属性较强，因此，选用Ａ１．
Ｃｌ，法定量测定香椿叶中的黄酮。
中国食品学报
２０１０年第５期
参考文献
【ｌ】陈铁山，罗忠萍，崔宏安，等．香椿化学成分初步研究叨．陕西林业科技，２００１，（２）：１－３．【２】姚新生主编．天然药物化学『Ｍ】．２版．北京：人民卫生出版社，１９９６：１９４．
［３】付桂明，万茵，周建斌．杜仲叶醇提液中黄酮测定方法的比较研究叨．中国食品学报，２００６，６（１）：２２４—２２９．【４】郭春燕，李振良，张力．分光光度法测定桃红四物汤中总黄酮含量忉．中草药，２００２，３３（４）：３２０－３２１．【５】吴晓明，殷斌志．银杏叶黄酮类化合物的测定方法【刀．药物分析杂志，２００１，２１（２）：１３５－１４１．【６】杨丹，苍晶，郝再彬．流动注射化学发光法测定大豆异黄酮叨．分析化学，２００６，３４（８）：ｌｌｌ３—１１１５．
［７】徐礼荣，刘爱茹．黄酮类化合物测定方法啪．中草药通讯，１９７９，７：３９卅．
［８１罗小东，吴少华，马云保．椿叶的化学成分研究叨．中草药，２００ｌ，３３（５）：３９０—３９１．【９】
中国科学院上海药物研究所植物化学研究室．黄酮体化合物鉴定手册【Ｍ】．北京：科学出版社，１９８１：１８３．
Ｓｔｕｄｉｅｓ
ｏｎ
ｔｈｅ
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｏｆＴｏｔａｌＦｌａｖｏｎｅＣｏｎｔｅｎｔｉｎＴｏｏｎａＳｉｎｅｎｓｉｓ
ＩＡＸｉｕｘｉｎｌ
ＺｈａｎｇＹｕａｎｍｉｎ２
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
（。Ｃｏ／／ｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｙ
２Ｃｏｌｌｅｇｅ
ｏｆｓｃｉｅｒ配ｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＳｃｉ－ＴｅｃｈｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙ，
ｙ册∥讥ｇ７１２１００，Ｓｈａａｎｘｉ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ
ｗａｓ
Ｉｎ
ｏｒｄｅｒ
ｔｏｓｏｌｖｅｏｆ
ａ
ｐｒｏｂｌｅｍｏｆｒｅｓｕｌｔｄｅｖｉａｔｉｏｎ
ｉｎ
Ｔｏｏｎａｓｉｎｅｎｓｉｓ
ｌｅａｆ
ｏｆｆｌａｖｏｎｅ
ｂｙ
ｂｏｔｈ
ｃｏｎｔｅｎｔｉｎＴｏｏｎａｓｉｎｅｎｓｉｓ
ｌｅａｆ．Ａｐａｒｉｓｏｎ
ｍａｄｅ
ｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｈａｔ
ｔｈｅｒｅｓｕｌｔ
ｆｌａｖｏｎｅｓ
ＮＡＮ０２－Ａｌ（Ｎ０３）３ｍｅｔｈｏｄａｎｄＡ１Ｃ１３ｍｅｔｈｏｄ．Ｉｔ
ｔｈａｔ
ｏｆ
Ａ１Ｃ１３ｍｅｔｈｏｄ．Ａ１Ｃ１３
ｏｎ
ｃｏｎｃｌｕｄｅｄｍｅｔｈｏｄ
ｏｆＮＡＮ０２－ＡＩ（Ｎ０３）３ｍｅｔｈｏｄＷａｓｈｉｇｈｅｒａｂｏｕｔ５９．９６ｍＳ／Ｓｔｈａｎ
ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｅｅａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙ．ＴｈｅｆｉｔｔｅｓｔｐＨ
ｅｒｒｏｒｓ
Ｃａｌｌ
ｅｌｉｍｉｎａｔｅｔｈｅｉＳ
５．５．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈ
ｓｔａｎｄａｒｄ
ｄｅｖｉａｔｉｏｎ
ｉｎｔｅｒ－
ｆｅｒｅｎｃｅｉｎｄｉｃａｔｏｓｔｈａｔａｖｅｒａｇｅｔｅｅｔｉｏｎｉ８０．４６８％．
ｉｓ
０．００７ｍｇａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｉｓ９８．５４％．Ｒｅｌａｔｉｖｅ
ｏｆｓａｍｐｌｅｄｅ—
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ
Ｔｏｏｒｍｓｉｎｅｎｓ／ｓｌｅａｆ；ｆｌａｖｏｎｅ；ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ
ｉ弱国国ｉ
美国批准肉毒杆菌素治偏头痛
据新加坡《联合早报》报道，美国食品和药物管理局已批准艾尔建（Ａｌｌｅｒｇａｎ）公司的抗皱纹注射剂肉毒杆菌素（Ｂｏｔｏｘ）用来治疗慢性偏头痛。
药管局当地时间１５日发表的声明说，为了缓解头痛，患有慢性偏头痛的成年人可以每３个月接受一次肉毒杆菌素的注射。
药管局还说，对那些每个月头痛次数只有１４天或少于１４天的人，注射肉毒杆菌素没有疗效。
英国在今年７月成为全球第一个允许把肉毒杆菌素用来治疗偏头痛的国家。
（消息来源：新浪网）
范文三：苦瓜总黄酮含量测定方法研究
苦瓜总黄酮含量测定方法研究 江苏农业科学2009年第3期一317一
苦瓜总黄酮含量测定方法研究
郭育东,单斌,梁瑞仪
(韶关学院英东生物工程学院,广东韶关512005)
摘要:利用聚酰胺吸附除去苦瓜总黄酮中的色素杂质的干扰,以芦丁为参照品,硝酸铝作显色剂,采用分光光度计
在510nlll波长处测定苦瓜总黄酮含量.结果表明:该测定方法基本上消除了杂质的干扰,其回归方程为Y=7.41C一
0.00366,相关系数为0.9992;精密度高,重现性与稳定性较好,平均加样回收率为100.11%,RSD=0.34%.按此方法测
得苦瓜样品中总黄酮平均含量为2.11%.此法操作简便,快速,准确,可作为检测苦瓜中总黄酮含量的一种有效方法.
关键词:苦瓜;总黄酮;含量;测定
中图分类号:R284.1文献标志码:A文章编号:1002—1302(2009)03—0317—03 苦瓜(MomordicaCharantiaL.)又名凉瓜,癫瓜,癫葡萄,锦
荔枝等,是葫芦科苦瓜属植物,在我国各地均有种植….它具
有良好的食用价值和明显的药用功能,素有药用蔬菜之称.近
年来的临床和实验研究表明,苦瓜有消暑解热,明目解毒,滋养
强壮,降压,降血脂,舒张血管,抗心率失常,抗癌等作用..
植物天然产物中多糖和黄酮由于其各种显着生物活性已
成为目前研究的热点J.近年来黄酮类化合物因其独特的
功效,常作为降血糖,降血脂,抗心律失常,抗氧化,增强机体
免疫力的药物予以应用.苦瓜黄酮是苦瓜中有效成分之
一
,具有明显的抗氧化及降血脂功能,因此具有较高的药用和
保健价值.
苦瓜总黄酮的测定对其提取工艺优化,原料选择及质量 控制都具有重要意义.目前,有关植物中总黄酮含量的测定 主要有紫外区直接测定法,分光光度法,荧光法,化学发光法 收稿日期:2008—12—11
作者简介:郭育东(197l一),男,广东韶关人,硕士,实验师,主要从事 农副产品深加工方向的研究.E—mail:gydsgu@163.corn.
通讯作者:单斌.Tel:(0751)8121437;E—mail:shanlibbrr@hot
mail.corno
和高效液相色谱(HPLC)法等.据文献报道,色素对分 光光度法的测定结果影响较大,致使结果偏高.从苦瓜中提 取的苦瓜总黄酮含有大量色素,用聚酰胺吸附和NaNO:一Al (NO)络合法相结合的方法能较好去除色素的干扰. NaNO,一A1(NO)络合法为分光光度法测定黄酮的一种,其 原理是黄酮类化合物中的3一羟基,4一羟基,5一羟基,4一羰 基或邻二位酚羟基与Al?进行络合反应,在碱性条件下生成 红色络合物,可通过分光光度法进行定量测定.本研究采 用聚酰胺吸附法和NaNO一A1(NO,)络合法相结合测定苦 瓜总黄酮含量,测定方法快速,准确,重视性与稳定性好,为合 理开发利用苦瓜资源提供可靠的检测手段.
1材料与方法
1.1仪器
UV一4802双光束紫外可见分光光度计(尤尼柯上海仪 器有限公司);AR21104电子天平(奥克斯国际贸易上海有限 公司);DKB2501A型超级恒温槽(上海精宏实验设备有限公 司);SHB2II循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公 司);FW100型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公 (上接第316页)
(B)>提取时间(D).盐酸一 度(C)>提取温度(A)>料液比
香草醛法最佳的提取条件为ABC3D3,即:用70%乙醇,在温
度6o?,料液比1:6的条件下提取8Omin.此条件下,盐酸 一
香草醛法提取黑莓籽中原花青素的得率达4.81%. 3结论
盐酸一香草醛法对原花青素的反应具有特异性,方法简 便易行.采用低浓度盐酸一香草醛法,通过单因素和正交试 验对影响黑莓籽原花青素提取工艺的关键因子及其相互作用 进行分析,优化出了最佳的工艺参数:乙醇浓度70%,提取温
?,料液比1:6,提取时间80min,pH值为4.5.在这 度60
种条件下,黑莓籽中原花青素得率为4.81%. 参考文献:
[1]朱凤妹,杜彬,李军,等.大孔吸附树脂分离葡萄酒下脚料中 原花青素的研究[J].食品工业,2008(1):6—9.
[2]陈磊,王军.山葡萄籽中原花青素的提取[J].中国野生植 物资源,2008,27(1):58—60.
[3]BumsRE.Memodsoftanninanalysisforforagecropevaluation[J].
Phytoehemistry,1963,2(4):355—360.
[4]Bate—SmithEC.SystematicaspectsoftheastringenttanninsofAcer
species[J].Phytochemistry,1978,17(11):1945—1948. [5]姚开,何强.葡萄籽提取中原花青素含量不同测定方法比较 [J].化学研究与应用,2002,14(2):230—232.
[6]李春阳,许时婴,王璋.低浓度盐酸一香草醛法测定葡萄籽中 原花青索含量的研究[J].食品工业科技,2004(6):128—130. [々]魏福祥,韩菊,张兰,等.葡萄籽中提取低聚原花色素的技术 研究[J].现代化工,2001,21(4):27—29.
[8]魏福祥,韩菊,王改珍,等.低聚原花青素提取技术研究[J]. 食品工业科技,2003(9):54—55.
一
318一江苏农业科学2009年第3期
司);真空干燥箱ZK一82A(南京艾赛特科技发展有限公司). 1.2试剂与样品
芦丁标准品购自中国药品生物制品检定所;聚酰胺(80, 100目),乙醇,亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠均为分析纯;苦瓜 样品购于韶关农贸市场,洗净后切片,烘干,粉碎至4o目备用. 1.3试验方法
1.3.1标准品溶液的制备精密称取干燥至恒重芦丁标准 品10mg,加适量无水乙醇,置水浴中微热溶解,冷却后用无 水乙醇定容至100ml,配成0.1mg/ml的芦丁标准品溶液,摇 匀,备用.
1.3.2苦瓜总黄酮的提取准确称取苦瓜粉末适量,加入无 水乙醇lOllll,于70?加热回流提取2h,重复1次,合并提取 液,加无水乙醇定容至200ml,摇匀,备用.
1.3.3苦瓜总黄酮的纯化准确吸取提取液1ml,加入装有 1g聚酰胺粉的小层析柱中,吸附5min,先用40ml水把色素 等杂质洗去,再用30rnl无水乙醇洗脱,收集洗脱液,无水乙 醇定容,摇匀,得样品溶液.
1.3.4最大吸收波长的确定吸取一定量的标准溶液和样 品溶液,分别置于lOmI具塞试管中,加无水乙醇至5ml,按 1.3.5方法显色,以等量的无水乙醇作空白,显色后,标准溶 液和苦瓜样品溶液分别于400—600nm扫描,确定其最大吸 收波长.
1.3.5标准曲线的制备准确吸取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0
ml芦丁标准品溶液,分别置于10ml具塞试管中,加入无水乙 醇补足5.0ml,各加人0.1ml5%NaNO:溶液,摇匀后放置6 min,再加入0.1ml10%的Al(NO,)溶液,摇匀后放置6 min,继续加入1mol/LNaOH溶液3ml,摇匀放置10min,以 无水乙醇为空白参照,在510nm波长处测定吸光度.以吸光 度为纵坐标,芦丁标准品的质量(mg)为横坐标,作回归曲线,
得回归方程.
1.3.6苦瓜中总黄酮测定精确称取适量苦瓜粉末3份,按 1.3.2的方法提取苦瓜总黄酮,按1.3.3的方法纯化,准确吸 取纯化样液1ml,加入无水乙醇补足5.0ml,按1.3.5的方法 测定吸光度,并代入回归方程计算苦瓜样品中总黄酮含量. 2结果与分析
2.1苦瓜总黄酮纯化条件的选择
乙醇一水为溶剂提取苦瓜总黄酮,把果胶,甾体,低聚糖, 蹂质,色素及其他多酚类物质一起提取出来,这些杂质尤其是 色素严重干扰测定,测定前需去除.本试验采用聚酰胺吸附 后,用水去除色素等杂质,再用洗脱剂将黄酮类物质洗脱下 来,以达到纯化的目的.通过对洗脱剂和洗脱剂用量的选择, 确定苦瓜总黄酮的最佳纯化条件.考虑到甲醇具有毒性及易 挥发性,所以本研究选择乙醇水溶液作为溶剂进行试验.分 别用30rnl的60%,70%,80%乙醇和无水乙醇洗脱,结果发 现以无水乙醇洗脱与60%,70%,80%乙醇洗脱能力相差不 大,无水乙醇洗脱液色泽均一,此外考虑到测定方便,最终确 定用无水乙醇洗脱,用量为30ml.
2.2苦瓜总黄酮最大吸收波长确定
芦丁标准溶液和苦瓜黄酮样品溶液显色后在400—600 nm扫描测定.结果表明:芦丁标准溶液和样品溶液均在510 nm处有最大吸收峰,因此本试验选择510nm为苦瓜总黄酮 测定吸收波长.光谱扫描结果见图1.
波长(nm)
图1芦丁标准溶液和苦瓜总黄酮样品溶液的光谱扫描结果 2.3芦丁标准溶液标准曲线的制备
A1(NO,)一NaNO络合法为分光光度法测定黄酮的一 种,在碱性条件下生成红色络合物,可通过分光光度法进行定 量测定,具有使用方便,反应时间短,染色稳定,抗干扰性强等
特点,因此可用于苦瓜总黄酮含量的测定.以芦丁为标准品, 做标准曲线,求得回归方程.标准曲线见图1.标准曲线的 回归方程为:Y=7.41C一0.00366.其中Y为吸光度,C为芦 丁质量,R=0.9992.
由图2可见,标准品在0—100txg范围内呈良好的线性 关系.此法试剂配制简单,操作简便快捷,反应灵敏,适合于 苦瓜总黄酮含量的定量分析.
芦丁质量(mg)
图2芦丁标准溶液标准曲线
2.4精密度试验
精确吸取5份同一供试样品各1.0ml,分别放入l0ml 具塞试管中,按照1.3.5的方法测定吸光度,计算相对标准偏 差RSD值,试验数据列于表1.结果表明,相对标准偏差RSD 仅为1.26%,表明此方法精密度良好.
表1精密度试验结果
样品12345均值(R
%
SD
)
吸光度(A)0.3890.3940.3910.3940.4020.3941.26
2.5稳定性试验
精确吸取1O份待测溶液各1.0ml,分别放入10Inl具塞 试管中,按照1.3.5的方法测定吸光度(A),当显色体系反应 完全后,每隔5min记录一次吸光度值,连续45min考察其稳 定性,结果见表2.结果表明,利用此法测定苦瓜黄酮含量稳 定性很好,在45min时显色较稳定.
2.6重现性考察
,分别置于回流烧 精确称取经粉碎的苦瓜粉末样品5份
瓶中.按照1.3.2的方法提取苦瓜总黄酮,按1.3.3的方法
纯化,准确移取样品溶液1.0ml,置于10fnl具塞试管中,按 1.3.5的方法分别测定各自吸光度(A),每份平行测定3次,取 郭育东等:苦瓜总黄酮含量测定方法研究一319一 平均值,计算5份测定结果的相对标准偏差RSD值,考察其重定方法测定总黄酮重
复性良好,具有较高的可靠性.
现性,结果(表3)表明相对标准偏差RSD仅为1.05%,所用测 表2稳定性试验结果
表3重现性试验结果(n=3)
2.7加样回收率试验
分3组,每组做3份平行样,均取1ml样品溶液于具塞 试管中,再分别加入一定量芦丁标准溶液,按1.3.5方法测定 吸光度,计算其加样回收率.结果(表4)表明采用分光光度法 测定苦瓜中的总黄酮含量的加样回收率较高为100.11%,相对 标准偏差较小为0.34%,因此该方法准确度较高. 2.8苦瓜总黄酮含量的测定结果
准确称取同一供试样品苦瓜粉末3份各1g,按照1.3.2 表4苦瓜总黄酮含量测定加样回收率试验结果(n=3) 的方法提取苦瓜总黄酮,按1.3.3的方法纯化,准确移取样品 溶液1.0ml,分别置于具塞试管中,按照1.3.5的方法测定吸 光度(A),代入回归方程,计算出苦瓜中总黄酮含量.苦瓜样 品总黄酮含量实际测定结果见表5.测定结果表明,黄酮类 物质是苦瓜中含量较高的一种生物活性成分,相同苦瓜品种 中黄酮类物质含量较稳定,实际测得的供试样品苦瓜总黄酮 平均含量为2.11%,相对标准偏差RSD为1.98%. 表5苦瓜中总黄酮含量测定结果{n=3J
3讨论
Al(NO,)一NaNO络合法的基本原理是:先用NaNO: 还原黄酮,黄酮类化合物中的3一羟基,4一羟基,5一羟基,4 一
羰基或邻二位酚羟基,与A1"进行络合反应,最后加NaOH
溶液(在碱性条件下)使黄酮类化合物开环,生成2'一羟基查
耳酮红色络合物而显色,在一定浓度范围内,其浓度与吸光度
符合比尔定律,可进行定量分析.申湘忠等"在505nm下
测得苦瓜50%乙醇水溶液提取液的黄酮类化合物质量分数
为1.535%,本试验测得结果为2.11%,与其有一定差异,可
能由于供试苦瓜品种,产地,采摘季节,采摘时成熟度,贮藏条
件,测定方法等方面存在差异.
本试验采用聚酰胺纯化总黄酮.聚酰胺是较为理想的吸
附剂,是通过分子中的酰胺羰基与黄酮类化合物分子上的酚
羟基形成氢键缔合而产生吸附作用,黄酮提取液中的杂质通
过水洗去除后,再用洗脱剂把黄酮类物质洗脱下来;达到纯化
的目的.通过选择的最佳纯化条件,能较好的去除杂质的干
扰,并且把黄酮洗脱完全,从而避免了总黄酮中色素等其他杂
质干扰而引起的系统误差.通过进行精密度,稳定性,重现性
和加样回收率试验,说明该方法不仅简便可行,而且准确率和
精确度都比较高,适于苦瓜总黄酮含量的测定.我国苦瓜资
源丰富,苦瓜中总黄酮含量测定方法的建立,对苦瓜资源综合
利用的保健产品开发具有一定的技术指导意义.
参考文献:
[1]WangLZ,WangM,LiQH,eta1.Partialpropertiesofanaspartie proteaseinbittergourd(MomordieaeharantiaL.)fruitanditsacti- vationbyheating[J].FoodChemistry,2008,108(2):496-502. [2]何新益,刘仲华.苦瓜多糖降血糖活性的高通量筛选研究[J].
食品科学,2007,28(2):313—316.
[3]YuanXQ,GuXH,TangJ,eta1.Hypoglycemiceffectofsemipurified peptidesfromMomordicaeharantiaL.vat.abbreviataSer.inalloxan —
induceddiabeticmice[J].JournalofFoodBiochemistry,2008,32
(1):107—121.
[4]许应龙,蓝静,丁世先.蔬菜苦瓜在临床医药上的应用[J].中 国医学杂志,2004,2(12):702—703.
[5]谢建华,谢明勇,聂少平,等.青钱柳多糖提取工艺研究[J].食 品科学,2007,28(10):188—191.
[6]ManachC,DonovanJL_Pharmaeokineticsandmetabdismofdietary
flavonoidsinhumans[J].FreeRadiealResearch,2004,38(8):771
—
785.
[7]何书美,刘敬兰.茶叶中总黄酮含量测定方法的研究[J].分析 化学,2007,35(9):1365—1368.
[8]郁建生,李英伦.草珊瑚总黄酮提取工艺比较研究[J].江苏农 业科学,20o6(5):136—138.
[9]文廷刚,杜小凤,郭宇,等.女贞子总黄酮的测定及其提取工艺 [J].江苏农业科学,2008(2):187—188.
[1O]周建华,刘松艳,巩发永.两种分光光度法测定苦荞中黄酮含量 的比较[J].江苏农业科学,2008(5):247—251.
[11]徐宝才,丁霄霖.苦养黄酮的测定方法[J].无锡轻工大学学 报,2003,22(2):98—101.
[12]于村,俞莎,沈向红.保健食品中总黄酮的测定方法研究 [J].中国卫生检验杂志,2002,12(5):401—402.
[13]申湘忠,杨民生,刘志成.苦瓜植株各部分黄酮的提取与粗黄酮 含量的测定[J].食品与生物技术,2007,26(1):60—64.
范文四：黄芪中总黄酮的含量测定方法
黄芩中总黄酮的含量测定
To determine the content of total flavonoids in
Radix Scutellariae
班级 08级2班
专业 药学
姓名 崔立靖
同组人 陆晓娅 关雪 李娟 张栋材
摘要 目的：黄芩中总黄酮含量的测定。方法：采用紫外分光光度法测定黄芩中总黄酮的含量。结果：黄芩中总黄酮含量是0.034mg/ml。
Abstract Objective : To determine the content of total flavonoids in Radix Scutellariae.
Methods : Ultraviolet spectrophotometry was used to To determine the
content of total flavonoids content.
Results : Total flavonoids content of Radix Scutellariae reached
0.034mg/ml。
关键词 黄芩；总黄酮；紫外分光光度法
Key World Radix Scutellariae ；Total flavonoids ; uv-spectrophotometry
目录
摘要................................................................................................................................................... 1
Abstract ............................................................................................................................................. 1
关键词............................................................................................................................................... 1
Key World ......................................................................................................................................... 1
目录................................................................................................................................................... 2
1 绪论 . ............................................................................................................................................ 3
2 黄芩中总黄酮含量测 . ................................................................................................................ 6
2.1仪器与试剂 . ........................................................................................................................ 6
2.1.1实验仪器 . ................................................................................................................. 6
2.1.2实验药品 . ................................................................................................................. 6
2.2试验方法 . ............................................................................................................................ 6
2.2.1总黄酮成分提取 . ..................................................................................................... 6
2.2.2定量实验总黄酮的含量测定 . ................................................................................. 6
2.2.2.1线性关系考察 . .............................................................................................. 6
2.2.2.2提取物含量的测定 . ...................................................................................... 7
2.3方法学检验 . ........................................................................................................................ 7
2.3.1精密度实验 . ............................................................................................................. 7
2.3.2稳定性考察 . ............................................................................................................. 7
2.4黄芩根及粉末的显微图像 . ................................................................................................ 7
2.4.1黄芩根的显微图像 . ................................................................................................. 7
2.4.2黄芩粉末的纤维图像 . ............................................................................................. 7
3 参考文献 . .................................................................................................................................... 8
1 绪论
【英文名】 Radix Scutellariae
【别名】山茶根、黄芩茶、土金茶根
【来源】本品为唇形科植物黄芩 Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥根。春、秋二季采挖，除去须根及泥沙，晒后撞去粗皮，晒干。产于河北、辽宁、陕西、山东、内蒙古、黑龙江等地。
【植物特征】多年生草本，高30～70厘米。主根粗壮，略呈圆锥形，棕褐色。茎四棱形，基部多分枝。单叶对生；具短柄；叶片披针形，全线。总状花序项生，花偏生于花序一边；花唇形，蓝紫色。小坚果近球形，黑褐色，包围于宿萼中。花期7～10月，果期8～10月。
【制法】
黄芩片 除去杂质，置沸水中煮10分钟，取出，闷透，切薄片，干燥；或蒸半小时，取出，切薄片，干燥（注意避免曝晒）。本品为类圆形或不规则形薄片，外表皮黄棕色至棕褐色，切面黄棕色或黄绿色，具放射状纹理。
酒黄芩 取黄芩片，照酒炙法炒干。本品为类圆形或不规则形薄片，外表皮棕褐色，切面黄棕色，呈放射状纹理，略带焦斑，中心部分有的呈棕色。
【性状】本品呈圆锥形，扭曲，长8～25cm ，直径1～3cm 。表面棕黄色或深黄色，有稀疏的疣状细根痕，上部较粗糙，有扭曲的纵皱或不规则的网纹，下部有顺纹和细皱。质硬而脆，易折断，断面黄色，中间红棕色；老根中心枯朽状或中空，呈暗棕色或棕黑色。气微，味苦。
【显微特征】 横切面 木栓层为数层至20余层扁平细胞组成，其中散在嗜细胞。木栓组织外缘多破裂。皮层狭窄，散在纤维及石细胞。韧皮部较宽广，有多数纤维与石细胞，石细胞多分布于外侧，纤维单个散在或数个成群，多分布于内侧；形成层环状明显；木质部导管单个散在或数个成群，周围有木纤维束；木射线较宽。老根中央有一至多个同心状的木栓组织环。薄壁细胞中还淀粉粒。
【粉末特征】粉末深黄色。①韧皮纤维微黄色，梭形，两端尖或斜尖，长51~200（~271）um, 直径9~33um，壁木化，孔沟明显。②石细胞淡黄色，类方形、类圆形、椭圆形或纺锤形，直径24~48um，长约85（~160）um ，壁厚至24um 。③网纹及具缘纹孔导管多见。④木纤维细长，壁稍厚，具斜纹孔或具缘纹孔。另可见淀粉粒、木栓细胞。
【黄芩根横切】
【化学成分】 含多种黄酮类化合物, 主要为黄芩甙（baicalin ）, 黄芩素（baicalein ）, 汉黄芩甙（wogonoside ）, 汉黄芩素（wogonin ）, 7-甲氧基黄芩素, 7-甲氧基去甲基汉黄芩素, 黄芩黄酮Ⅰ, 黄芩黄酮Ⅱ。
【鉴别】 取粉末1g ，加甲醇20ml ，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1g ，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml 含1mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5μl ，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1）为展开剂，预平衡30分钟，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显一相同的暗绿色斑点。
【含量测定】
照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水－磷酸（47:53:0。2） 为流动相；检测波长为280nm 。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备 精密称取在60℃减压干燥4 小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml 含60μg 的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品中粉约0。3g[同时另取本品粉末测定水分（附录Ⅸ H第一法）]，精密称定，加70%乙醇40ml ，加热回流3 小时，放冷，滤过，滤液置100ml 量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，
洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml ，置10ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl ，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含黄芩苷（C21H18O11） 不得少于9。0% 。
【理化鉴别】
1. 取粉末1 g, 加乙醇10 ml, 温浸15分钟, 滤过, 取滤液1 ml, 加醋酸铅试液2～3滴, 生成桔黄色沉淀；另取滤液1 ml, 加镁粉少量与盐酸3～4滴, 显红色．
2. 薄层层析
样 品 液:取粉末1 g, 加乙醚40 ml 于索氏提取器中回流至无色, 浓缩至2～5 ml, 供试．对照品液:取黄芩素和汉黄芩素配成溶液作为对照溶液．
展 开:0.5 N 草酸硅胶G 板（硅胶G+0.5 N 草酸溶液铺板）, 以氯仿-甲醇（10∶1）展开17 cm．
显 色:于365 nm 紫外灯下观察, 供试品在与标准品的相同位置有相同的暗灰棕色荧光斑点．成分分析研究进展:略
【药理作用】
1. 抗菌、抗病毒、抗真菌:煎剂对多种球菌、杆菌、耐药的金黄色葡萄球菌、流感病毒、皮肤真菌有抑制作用．
2. 解热:煎剂及黄芩甙对实验性发热的家兔有解热作用．
3. 降压、利尿作用:黄芩甙给麻醉狗注射, 有明显的降压和利尿作用．
4. 抗炎、抗过敏:黄芩甙与黄芩素动物试验能抑制过敏性炎症渗出, 降低毛细血管通透性, 有抗组织胺与抗乙酰胆碱作用。
【类药比较】
1） 枯芩∶子芩
黄芩分枯芩与子芩。
枯芩为生长年久的宿根，中空而枯，体轻主浮，善清上焦肺火，主治肺热咳嗽痰黄。
子芩为生长年少的子根，体实而坚，质重主降，善泻大肠湿热，主治湿热泻痢腹痛。
2） 黄芩∶续断
黄芩与续断均有安胎之功，用治胎动不安。
黄芩药性寒凉，清热泻火，安胎，用治胎热所致的胎动不安。 续断药性微温，补肝肾，安胎，用治肝肾不足所致的胎动不安。
2 黄芩中总黄酮含量测
2.1仪器与试剂
2.1.1实验仪器
超声波清洗器、紫外可见分光光度计、分析天平、100ml 容量瓶、25ml 容量瓶、5ml 移液管、1ml 移液管、6支试管、1个试管架、洗耳球
2.1.2实验药品
70%乙醇、5%亚硝酸钠、10%硝酸铝、4%氢氧化钠、芦丁标准品、黄芩
2.2试验方法
2.2.1总黄酮成分提取
取黄芩，粉碎。精密称取黄芩粉末约1 g，放置100 ml容量瓶中，加90ml 70%乙醇，超声波提取约50min ，用70%乙醇稀释至刻度，得样品液。
2.2.2定量实验总黄酮的含量测定
2.2.2.1线性关系考察
分别精密吸取芦丁对照液（0.1 mg/ml）0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 ml 于试管中，用70%乙醇稀释至5ml ，再分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3 ml ，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.3 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml ，最后加70%乙醇0.4ml ，摇匀，静置12 min ，以试剂作空白，于510 nm处测吸光度。以吸光度值A 为纵坐标，芦丁浓度C （mg/ml）为横坐标，进行线性回归，得回归方程
A=0.0832C+0.0004,r=0.9999。标准曲线见下图
2.2.2.2提取物含量的测定
精密吸取样品液2.00 ml于试管中，按标准曲线的制备操作测定吸光度，根据回归方程计算样品中总黄酮的含量。
2.3方法学检验
2.3.1精密度实验
取黄芩样品液，重复测定吸光度6次，计算其相对标准偏差，结果RSD 为0.19%，本实验精密度良好。
2.3.2稳定性考察
精密吸取黄芩对照品溶液，与0，10，20，30，40，50，60min 测定吸光度值，RSD 为0.92%（n=6），表明对照品溶液在60min 内基本稳定。【2】
2.4黄芩根及粉末的显微图像
2.4.1黄芩根的显微图像
2.4.2黄芩粉末的纤维图像
韧皮纤维 石细胞 导管
木栓细胞 淀粉粒 木纤维
3 参考文献
【1】 国家药典委员会，中华人民共和国药典2010版（第一部）[S].北京：
化学工业出版社，2005：211-212.
【2】 李云鹏，黄云，魏春娥. 紫外分光光度法测定黄芩中总黄酮含量[J].
河北中医药学报，2007，22（l ）：36-37
收稿日期：2011-6-16
范文五：甘草总黄酮含量测定方法研究
甘草总黄酮含量测定方法研究 [字体:大 中 小]
【摘要】 目的选择适宜的对照品，建立能够准确测定甘草中总黄酮含量的 方
法 。方法针对甘草苷、柚皮苷、芦丁3种对照品分别使用紫外分光光度法，通
过全波长扫描，比较不同对照品和样品与显色前后的最大吸收波长，从而确定
适合的对照品。结果甘草苷对照品和样品液经过碱处理后最大吸收波长分别为
334，334.5 nm且全波长扫描后得到峰形基本一致，而柚皮苷对照品经过相同
处理后最大吸收波长在419.5 nm，芦丁对照品和样品分别经过Al2(NO3)3-
NaOH-NaNO2显色后最大吸收波长在510 nm和363 nm。通过对3种方法的测定
结果进行统计学 分析 ，以甘草苷为对照品的测定结果分别与另外两种方法差
异显著。结论选用甘草苷为对照品 应用 于紫外分光光度法测定甘草总黄酮成
分准确度较高，是切实可行的含量测定方法。
【关键词】 甘草 黄酮 紫外分光光度法
Abstract:ObjectiveTo select the appropriate standard for determination of flavonoids in Glycyrrhiza.MethodsTo compare the largest absorption wavelength by wavelength scanning of ultraviolet spectrophotometry. ResultsStandard Liquiritin and samples processed by alkali had the largest absorption at the 334nm and 334.5nm wavelength, and standard Naringin at the 419.5 nm wavelength.ConclusionTo determine content of flavonoids in glycyrrhiza with ultraviolet spectrophotometry by standard Liquiritin is a practical method with higher accuracy .
Key words:Glycyrrhiza; Flavonoids; Ultraviolet spectrophotometry 甘草中的黄酮类成分包括黄酮类、二氢黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类、查尔酮
类和双黄酮类,1,化合物，其中以二氢黄酮类和查尔酮类含量较高,2,。二
氢黄酮类包括:甘草苷(liquiritin)、甘草苷元(liquiritigenin)、新甘草苷
(neoliquiritin)、甘草素(liquiritigenin)等，查尔酮类包括:异甘草苷
(isoliquiritin)、异甘草素(isoliquiritigenin)、异甘草苷元
(isoliquiritigenin)、新异甘草苷(neoisoliquiritin) 等,3,7,。而其中
比例较大的成分以甘草苷为主,8,。
甘草总黄酮的测定常用芦丁,9,10,、柚皮苷,11,13,为对照品通过紫外分
光光度法进行测定，而《 中国 药典》中甘草项下没有规范总黄酮成分含量的
测定方法,14,，导致甘草总黄酮成分有多种不同的测定方法。本实验 研究
通过对不同测定方法进行考察，比较不同对照品和样品采用相应方法显色后的
最大吸收波长，对3种对照品相应测定结果分析，确定最适宜甘草总黄酮含量
测定的对照品和测定方法。
1 器材
1.1 仪器HITACHI U-2000 Spectrophotometer。
1.2 样品甘草生药样品由北京中医药大学王文全教授提供和鉴定,全部为甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch(样品按来源依次编号为1.杭锦旗1年生;2.杭锦旗2年生;3.杭锦旗3年生;4.杭锦旗4年生;5.杭锦旗5年生;6.新疆乌苏3年生;7.杭锦旗野生;8.杭锦旗野生横生茎;9.甘肃金塔野生;10.宁夏盐池野生;11.甘肃酒泉野生;除杭锦旗野生横生茎外其余10份样品均为根)。
1.3 试剂供含量测定用甘草苷(编号:111610)、柚皮苷(编号:110722):中国药品生物制品检定所;芦丁对照品由北京中医药大学马长华教授制备;氢氧化钾(,,)、甲醇(,,)、硝酸铝(AR)、亚硝酸钠(AR)、氢氧化钠(AR)。
2 方法
2.1 对照品溶液的制备精密称定甘草苷、柚皮苷、芦丁标准品适量,用甲醇溶解,分别定容于25，10，10 ml容量瓶中,制得浓度为0.075 04 ,?,-1的甘草苷对照品溶液、0.968 ,?,-1的柚皮苷对照品溶液和1.003 ,?,-1的芦丁对照品溶液。
2.2 样品的提取取甘草粉末适量,精密称定,加甲醇50 ml,称重, (250 W,20 kHz)超声提取80 min,称重,补足损失重量,过滤,收集续滤液,即得。
2.3 测定方法
2.3.1 甘草苷为对照品的测定方法精确吸取提取液0.5 ml,加入1 ml甲醇,其中一份加入10%,,,溶液0.5 ml显色,室温放置5 min,用甲醇稀释至10 ml，以相应溶剂为空白，在λ334 nm处测定吸收度。
2.3.2 柚皮苷为对照品的测定方法供试液制备同“2.3.1”项，在波长419nm处测定吸收度。
2.3.3 芦丁为对照品的测定方法精确吸取提取液0.5 ml，加3 ml蒸馏水，5%亚硝酸钠溶液0.5 ml放置6 min，加10%硝酸铝溶液0.5 ml，混匀后放置6 min，加5%氢氧化钠2.5 ml混匀，放置15 min后蒸馏水定容至10 ml。以相应溶剂为空白，在波长510 nm处测定吸收度。
2.4 方法学考察
2.4.1 以甘草苷为对照品方法学考察甘草苷方法标准曲线的测定:精确吸取甘草苷对照品溶液0.25,0.5,0.75,1,1.25,1.5 ml置6个10 ml容量瓶中,按“2.3.1”项下操作。以吸收度A为纵坐标,对照品的浓度C(mg/ml)为横坐标,得线性回归方程: y = 66.753x - 0.017 8,,=0.999 9,线性范围为18.76,112.56 μ,。显色30 min内稳定。
甘草苷方法重复性实验:取6份新疆乌苏3年生人工栽培甘草粉末按“2.2”项下制备，按“2.3.1”项下方法测定。黄酮平均含量为3.33%，RSD=3.23%,(n=5)。
甘草苷方法加样回收率实验:取5份新疆乌苏3年生人工栽培甘草粉末按“2.2”项下制备后分别精密量取已知总黄酮含量的提取液0.5 ml，加入一定量甘草苷对照品溶液，λ334 nm处测定吸收度。 计算 回收率,结果平均为98.7%,RSD=2.0%,(n=5)。
2.4.2 另外两种测定方法的方法
学考察柚皮苷标准曲线以吸收度A为纵坐标,对照品的质量m(mg)为横坐标,得线性回归方程y=0.004 8x - 0.015 7，r= 0.999 3，线性范围48.4,290.4 mg，重现性 RSD=1.38%(n=5)，加样回收率98.73% RSD=1.35%(n=5);显色30 min内稳定。芦丁标准曲线:以吸收度A为纵坐标,对照品的质量m(mg)为横坐标,得线性回归方程y = 1.316 3x- 0.006 3,r = 0.998 7，线性范围0.100 3,0.601 8 mg，重现性RSD=0.97%(n=5)，加样回收率101.35% RSD=3.57%(n=5)。显色30 min内稳定。
3 结果和讨论
3.1 不同对照品吸收峰比较分析通过实验测得甘草提取液样品经KOH显色后的最大吸收波长在334.4nm(图1)，甘草苷对照品KOH显色后于200,500nm波长处扫描,最大吸收波长在334nm左右(图2)，二者相符。 柚皮苷经过KOH显色后于200,500 nm波长处扫描，最大吸收283.5 nm红移到419.5 nm(见图3)，与样品显色后最大吸收波长不一致。
, 1
, 2
, 下一页
2,
欢迎浏览更多首页 ? 医学论文 ? 药学论文文章 [字体:大 中 小] 样品通过Al2(NO3)3-NaOH-NaNO2 方法 显色后最大吸收波长在363 nm处(见图4)，芦丁对照品通过Al2(NO3)3-NaOH-NaNO2 方法显色后最大吸收波长在510 nm左右，两者相距甚远。
3.2 不同对照品方法实测结果比较 分析 对11份样品依“2.2”项下制备，分别依据甘草苷、柚皮苷和芦丁的显色方法在不同波长处进行测定，结果见表1。表1 3种方法总黄酮含量测定结果(略)
通过使用SPSS10.0对表3中数据进行多因素方差分析，3种方法测定结果方差分析F值17.845，P?0.000说明3种方法测定结果有差异，两两比较结果见表2。表2 不同方法测定结果间黄酮含量均数的两两比较(略) 按α=0.05水准，柚皮苷方法和芦丁方法测定的黄酮含量均数比较无统计学差异，而甘草苷方法分别与其他两种方法测定结果差异显著。柚皮苷和芦丁方法测定结果分别较甘草苷方法测定结果低29.6%和28.1%。
3.3 超声提取时间考察在确定对照品等方法的基础上我们对样品提取时间进行了考察，分别对超声50，60，70，80，90，100 min的样品进行测定，发现黄酮百分含量与时间关系如图6，随着时间的增加，黄酮百分含量有所提高，但达到80 min后，升高趋势明显变缓，考虑到实验效率和成本，我们采用80 min作为提取时间。
4 讨论
在对照品的选择上,由于芦丁属于黄酮类化合物(结构为5、7、3'、4' -四羟基黄酮-3-芸香糖苷),甘草中黄酮成分主要为二氢黄酮,其次为查尔酮,芦丁在结构上差异较大,因此不适合用于甘草总黄酮成分测定。柚皮苷(结构为5、7、4' -三羟基二氢黄酮)虽然是二氢黄酮类化合物，但同甘草苷(结构为7-羟基
4'-葡萄糖苷)相比，除都具有7位羟基外，还有5位的游离羟基，且二氢黄酮-
4' 位的羟基是游离的，未结合成苷，结构上的差异，导致与碱反应后最大吸收波长红移不一致，我们采用黄酮中含量最多的甘草苷为对照品，利用二氢黄酮与碱反应后生成查尔酮，由于带I吸收较弱，不灵敏，因此用带II最大吸收红移到330 nm左右进行黄酮成分的含量测定。
在选定以甘草苷为对照品的基础上，我们进一步进行了显色方法的考察，尝试盐酸镁粉法进行测定，考察了镁粉用量、加热时间和温度对显色的 影响 ，发现同样条件显色后甘草苷标准品和样品均在560 nm左右有一吸收峰，然而样品在467 nm处一吸收峰对其造成干扰(见图5)。
黄酮作为重要的药效组分在甘草中有着丰富的种类和较高的含量，如果不采用适宜的测定方法会使结果偏离真实值，从而影响我们对甘草质量客观真实的评价。
【 参考 文献 】
,1,Hong BAI,WEi LI,b Kazuo KOIKE,et al. A Novel Biflavonoid
from Roots of Glycyrrhiza uralensis Cultivated in China,J,.Chemical and Pharmaceutical Bulletin,2003，51(9):1095.
,2,张雪辉.甘草中总黄酮的含量测定,J,. 中国 中药杂志,2001,26(11):746.
,3,朱绪民,邸迎彤,彭树林,等.乌拉尔甘草中的化学成分,J,.中草药，2003,34(3):199.
,4,沈凤嘉,胡金峰,虞亚川,等.乌拉尔甘草化学成分的 研究 ,J,.高等学校化学学报，1995,16(4): 572.
,5,高鸿霞,邵世和,王国庆.中药甘草研究进展,J,.井冈山医专学报，2004,11(5):8.
,6,Taro Nomura, Toshio Fukai, Toshiyuki Akiyama.Chemistry of
phenolic compounds of licorice (Glycyrrhiza species) and thEIr
estrogenic and cytotoxic activities,J,.Pure and Applied Chemistry,
2002,74(7):1199.
,7,Isao Kitagawa. Licorice root. A natural sweetener and an
important ingredient in Chinese medicine,J,.Pure and Applied Chemistry, 2002,74(7):1189.
,8,何三民,石森林.HPLC 法测定甘草中甘草素、异甘草素、甘草苷的含量,J,.中草药，2003,34(7):618.
,9,孙 萍.甘草总黄酮的微波提取及含量测定,J,.时珍国医国药,2003,14(5):266.
,10,吕 欣.紫外分光光度法测定甘草黄酮含量,J,.植物研究，2003,23(2):192.
,11,汪河滨.甘草中黄酮的超声提取及含量测定,J,.时珍国医国药,2004,15(12):815.
,12,封士兰.甘草黄酮的提取分离和含量测定,J,.兰州医学院学报，1998，24(4):20.
,13,李炳奇，汪河滨，李学禹，等.超声联合法提取甘草黄酮和甘草酸的研究,J,.山东中医杂志，2005,24(1):38.
,14,国家药典委员会.中国药典，?部,S,.北京: 化学 工业 出版社, 2005:59.
, 上一页
, 1
, 2
1,
欢迎浏览更多首页 ? 医学论文 ? 药学论文文章
转载请注明出处范文大全网 » 茶叶中总黄酮含量测定方法的研
