结核杆菌快速液体培养基

范文一：结核杆菌快速液体培养基

结核杆菌快速液体培养基

目前，国内外实验室所采用的结核分枝杆菌培养基仍以罗氏(Lowenstein-Jensen)培养基为主，但普遍存在结核杆菌生长缓慢，阳性率低，报告时间长等不足。本培养基在吸收国内外最新研究成果的基础上，以Middlebrook 7H液体培养基为主进行改良，采用线粒体呼吸指示剂指9

示结果，大大缩短报告时间，85%以上的标本可在10天内指示有无结核菌生长的结果。本试剂盒经多家大中医院使用，效果满意。如配合本所的结核药敏试剂盒使用，将能指导临床用药。

【试剂盒组成】3mlMidddlebrook7H9液体培养基20支，说明书1份。【样品的采集】所有标本的采集和运送必须按照CDC推荐的方法或《临床微生物手册及实验室常规》进行。【操作方法】:

1、从冰柜中取出培养基，复温。

2、取痰液1份，加痰液消化液(4%NaOH，需实验室自配。)1份,置普通无菌试管内充分打

碎搅匀,置37?作用20分钟,以3000r/min离心15分钟，小心倾去上清液,沉渣用pH6.8

的无菌磷酸盐缓冲溶液(需实验室自配)洗涤2次，每次离心弃去上清液，再用0.5mlpH6.8

的无菌磷酸盐缓冲溶液分散，用无菌注射器吸取0.1ml直接从胶塞注射接种入培养基。

3、旋上瓶盖，置37?孵育，每天观察结果。

【结果报告】液体培养基由蓝紫色变为粉红色,应判为有结核菌生长。必要时可将变色培养液离

心，取沉渣作抗酸染色，镜下可见红色分枝杆菌者应判为有结核菌生长。可做进一

步生化鉴定。可将培养液离心，取沉渣做抗酸染色，作进一步鉴定。

【注意事项】1、实验室应自备4%NaOH痰液消化液，痰液很粘稠时，可适当延长消化时间，或尝

试用NALC-NaOH的方法处理痰液。

2、实验室应自备pH6.8的无菌磷酸盐缓冲溶液。

3、接种量过大可能会增加污染的机会，抑或会带来其他副作用。

4、为避免污染，消化结束后的操作步骤应在无菌室内操作。

【弃物处理】焚化炉彻底焚烧消毒后，丢弃。

【贮藏条件】-10?冰格冷冻保存。

【效期】上述贮藏条件下，有效期12个月。

范文二：结核杆菌培养基的种类及应用

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

结核杆菌培养基的种类及应用

(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)

【关键词】结核杆菌

自从1882年Koch发现结核杆菌以来,为促进结核杆菌生长,缩短培养时间,达到提前分离、鉴定的目的,人们对结核杆菌的营养、生理代谢及人工培养进行了一系列的研究,经过一个多世纪的不懈努力,已经对结核杆菌的生长规律有了比较深入地了解,并且形成了许多成熟的培养方法。尽管现代分子生物学技术在结核病研究中发挥着越来越重要的作用,但是结核杆菌的培养在结核病的诊断、流行病学指标、结核菌的分型鉴定、药敏试验、结核病药物的研究等方面依然有着不可替代的作用。为了能够较系统地了解、有针对性地选择合适、恰当的培养基,本文就国内外较为成熟的培养基种类及应用进行如下综述。

1 按培养基的性状分类

培养结核杆菌的培养基,从性状上分主要有固体培养基、液体培养基、半流体培养基、固液双相培养基等类型,这些培养基各有特点。

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

1.1 固体培养基最常用的是罗氏,Lownstein-Jenson,L-J,培养基,也是最具代表性的一种,其他的还有小川辰次

,Tatsujiogawa,鸡蛋培养基和Middle brook 7H10、7H11等琼脂培养基等。在固体培养基中,由于可以直接观察菌落的形态并可做鉴别用,因此常用于临床标本的分离培养、鉴别、保存菌种及对抗结核药物的敏感性测定等方面,缺点是结核菌生长缓慢。

1.2 液体培养基常用的有苏通,Sauton,培养基、Middle brook

7H9等液体培养基。结核杆菌在液体培养基中能够更广泛的接触营养成分,因此在液体中生长相对较快,主要在液体表面生长,搅动时下沉至管底,可获得大量的结核杆菌。主要缺点是,在对临床标本的收集、采样、运输方面有不利的一面,不能根据肉眼观察菌落形态,培养基污染机会多,影响结核杆菌的生长,污染时不易与结核杆菌鉴别,需涂片染色镜检判断结核杆菌是否生长。

1.3 半流体培养基改良苏通半流体琼脂培养基是一种人工综合培养基,基质透明,呈半流体状态,生长的结核杆菌形成白色颗粒状菌落悬浮于培养基中段,便于观察。

1.4 固液双向培养基 Septi-Check AFB双相培养基是国外应用较早的一种培养基,1,,采用BD专利式封闭式固液双相一体化培养基设计。液相为Middle brook 7H9分枝杆菌专用增菌培养基,可迅速繁殖分枝杆菌,固相为3种固体培养基平面,Middle brook 7H11

和改良的L-J培养基用于及时将增菌肉汤内分枝杆菌进行分离纯化以获得单个菌落,巧克力琼脂用于早期发现污染菌,避免时间浪费。由

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

于有液相作为基础,因此结核杆菌生长较快,也是一种非常有效的培养基。国内有用平菇制备的平菇双相培养基,2,是利用平菇浸出液为基础,加小牛血清、琼脂等成分而配制的一种培养基,根据琼脂的量不同制成液相、固相培养基。在国内应用较少,主要特点是成本低,制备简单,适合于基层使用,有一定的研究价值。

2 按成分分类

主要分为以鸡卵和琼脂为基础的两种培养基,3,。为了使结核杆菌达到快速生长的目的,可加上血液、椰汁、平菇液等不同营养成分,从而配制出各种不同的培养基。

2.1 以鸡卵为基础的培养基有L-J培养基、Ogawa培养基、丙酮酸钠培养基和丙酮酸钠细胞色素C培养基等。在鸡卵为主的培养基中,鸡卵液是关键成分,在制备培养基时,要充分考虑鸡卵液的新鲜程度以及营养成分是否受到破坏。

2.1.1 L-J培养基是一种经典的培养基,4,,主要成分有天门冬素、KH2PO4、MgSO47H2O、枸橼酸镁、甘油、鸡卵液等,需要血清凝固器对培养基进行凝固,以保证培养基中有一定的凝固水,以满足长时间培养的需要。根据成分种类及剂量的不同,又可分为酸性L-J培养基和碱性L-J培养基。将L-J培养基中KH2PO4的量由2.4g增加为14g,就是酸性L-J培养基,而将KH2PO42.4g改为K2HPO43.6g,就是碱性L-J培养基。L-J培养基制备简单,主要用于分枝杆菌初次分离培养、传代培养、菌落观察、保存菌种、药物敏

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

感性测定及菌种鉴定等,而酸性L-J培养基和碱性L-J培养基用于分枝杆菌分离培养时,标本分别用碱和酸处理。结核杆菌在L-J培养基上生长时,培养时间较长,大约在4~8周,因此不利于临床快速检测的需求,但作为其他快速诊断的参照,以及作为结核杆菌诊断的标准有非常重要的意义。

2.1.2 Ogawa培养基成分较少,又少了天门冬素,因此是一种比L-J培养基更为经济的培养基,主要成分有谷氨酸钠、KH2PO4、甘油、鸡卵液等,还可以通过调整KH2PO4的量及谷氨酸钠的量制备成改良培养基,Modified Ogawa,,此培养基的用途与L-J培养基相同,由于价廉,特别适合于发展中国家,5,。

2.1.3 丙酮酸钠培养基是在L-J培养基的基础上加入丙酮酸钠,除去甘油制备而成,主要用于从标本中分离牛型分枝杆菌或作为本菌的传种及保存。而丙酮酸钠细胞色素C培养基是在Ogawa培养基基础上,杨乐荫等用0.1%丙酮酸钠代替甘油,并加入2.5%葡萄糖液及细胞色素C制成丙酮酸钠细胞色素C培养基,与丙酮酸钠培养基、Ogawa培养基对临床标本比较,其培养的培养阳性率最高,显示了丙酮酸钠细胞色素C培养基的优越性。

2.2 以琼脂为基础培养基包括苏通,Sauton,培养基Middle brook 7H9、7H10、7H11、7H12,匡氏培养基Proskauer培养基和Beck琼脂培养基等。这些培养基主要是由无机盐类及一系列的有机化合物等成分组成。琼脂的作用主要是赋形剂,通过调整琼脂的量,一方面可以制备成不同性状的培养基,另一方面,在液体培养基中的

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

少量琼脂有利于结核杆菌在中段形成菌落,从而便于观察。

2.2.1 Sauton培养基,6, 主要成分有天门冬素、K2HPO4、MgSO47H2O、柠檬酸、枸橼酸铁铵、甘油等,根据是否加入琼脂及琼脂的量,又形成了液体培养基及半固体培养基,也称改良苏通半流体培养基,等。在培养基的制备上,也不需要特殊的设备,通过高压灭菌法既可处理培养基,因此操作简单,主要用于牛型分枝杆菌的培养,卡介苗的生产及中草药对结核杆菌的作用的研究中。

2.2.2 Middle brook系列培养基是国外最常用于结核杆菌研究和诊断目的的培养基之一,从成分上看,最大的特点是成分多、配制复杂,6,,但是培养时间短,因此越来越受到国内外学者的关注,其中7H9、7H12为液体培养基,7H10、7H11为固体培养基。通过在培养基中加入标记14C的棕榈酸,当有分枝杆菌生长时,就可利用培养基中的标记物而产生有放射性14CO2,然后由BACTE TB 460监测系统检测其含量,因此非常敏感。Middle brook系列培养基主要用于分枝杆菌培养及药物敏感性的测定。

2.2.3 Proskauer培养基和Beck琼脂培养基使用简便,但是菌落不典型,呈扁平状、露滴状,多为光滑型,7,。

3 按目的分类

在前述的培养基基础上,根据研究目的不同,加入特定物质后,可以制备成用于快速培养、鉴别、药敏等不同用途的培养基,主要为了满足临床的需要。

3.1 用于快速培养主要有Becton Diskinson,BD,公司研制

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

的系列全自动培养系统和Organon Teknika公司研制开发的培养系统。其的还有Difco公司ESP系统、生物梅里埃公司的VITAL系统等。由于与现代先进的仪器设备、技术结合,检测灵敏度高,时间短,但通常价位较高。

20世纪70年代末,BD公司研制的培养系统主要有早期的BACTEC 460TM TB,成为全球第一台专业的全自动分枝杆菌培养鉴定仪,该系统培养基以Middle brook7H12为基础,在培养基中加入标记14C的棕榈酸,因故也称为放射同位素液体培养法,由于存在废弃物放射性环境污染以及探针空刺开放性检测技术缺陷,公司又推出无放射性污染的BACTEC 9000MB及BACTEC MGIT 960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏系统,真正实现了分枝杆菌快速、安全、无放射性检测。BACTEC MGIT 960培养基以Middle brook 7H9为基础,配方优良的BBL PANTA TM抗菌剂和OADC营养剂。采用一种荧光物质作为分枝杆菌生长指示剂,因此也称为分枝杆菌生长指示管法,mycobacteria growth indicator tube,MGIT,,是目前全球最快的分枝直菌培养、鉴定、药敏系统。许多学者,8~10,应用发现,结核分枝杆菌平均检出时间为14.4天,最快10天。适用于多种标本来源,对各种分枝杆菌检测都适用。

MB/BacT分枝杆菌培养系统是由Organon Teknika公司开发的,将血液培养中判断细菌生长的pH指示剂用于结核杆菌的培养。结核杆菌代谢中产生的CO2变化通过化学感受器监测,利用酸碱度的变化使pH指示剂颜色改变,最后通过发射光度计检测颜色变化。

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

其平均检测时间比LJ早2周。该系统依然采用Middle brook 7H9液体培养基,当有阳性信号时,需取培养液进行涂片及鉴定确认。

Difco公司ESP系统,是一种全自动的血培养系统,可以连续监测细菌的生长。具有无放射性的特点,与BACTEC TB 460比较,11,12,,在检测时间上差异无显著性,可以替代使用,Williams-Bouyer N等将ESP与BACTEC MGIT 960进行了详细比较,13,,在整体检测时间上稍长些,对戈登分枝杆菌监测率高。作为一种液体培养基,需要与固体培养基结合使用,而不能作为一种独立系统。

我国学者根据国内具体情况,利用血液、椰汁、植物激素、平菇液、豆浸液等不同营养成分,配制成多种不同的快速培养基。如用平菇制备的平菇双相培养基,在落实培养基基础上的豆浸液培养基、植物激素培养基等。

3.2 用于选择由于结核杆菌生长缓慢,且营养要求高,因此对于其他的微生物极易生长,通常在培养基中都加有抑菌物质。在罗氏培养基中,微量孔雀绿既可抑制杂菌的生长,又可对结核杆菌的生长有促进作用。Gynft通过把孔雀绿的浓度提高,同时加入青霉素、萘啶酸制备成选择性的改良罗氏培养基,14,。在Middle brook 7H10、Middle brook 7H11的基础上,通过加上多黏菌素B、羧苄青霉素C、两性霉素B和三甲氧氨嘧啶即可制备成结核菌素的选择培养基,其目的主要是为了减少污染率,提高阳性率。

3.3 用于鉴别最主要的有,对硝基苯甲酸,和TCH,噻吩-2-

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

羧酸,鉴别培养基。用溶解稀释后,在制备L-J培养基的同时,加入二甲基甲酰胺或丙二醇制成PNB培养基,加入噻吩-2-羧酸制成TCH培养基,用于结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非结核性分枝杆菌的初步鉴定,15,。

3.4 用于药敏匡氏培养基是由我国研制的一种在结核杆菌快速药敏试验中有很好价值的培养基,16,。虽然BD公司的产品能够快速的检测结核杆菌,并且在药敏方面也有一定的优势,但早期的培养系统存在放射性,新开发的培养系统又存在污染率较高的问题,而在传统的含药罗氏培养基上存在抗结核药物受热失活和蛋白质吸附两个主要问题至今尚未解决,而匡氏培养基的优点在于不存在高蛋白组分对药物的吸附作用,又无加热凝固等造成药物失活问题,因此在药敏试验方面有着显著的优越性。主要由无机盐、维生素、琼脂、甘油和小牛血清等成分组成。药敏试验报告结果比罗氏培养基平均早29天,多数药敏结果可在3周内报告,对结核病的临床治疗有重要指导意义。BACTEC系列培养系统、ESP系统等都可用于药敏试验,一些液体培养基,苏通培养基和胆固醇液体培养,可用于中草药对结核杆菌抑菌试验。

3.5 用于L型细菌的培养结核杆菌L型的营养基本上与原菌相同,但一般需要加入一定量的渗透压稳定剂和血清,国外主要使用的培养基,17,有巯基醋酸盐培养基、PPLO琼脂、VSY肉汤和高桥的胰腺大豆蛋白陈琼脂培养基(TSA-I)等。国内庄玉辉等,18,已成功地利用改良TSA-L培养基培养L型菌。此外安徽蚌埠医学院的L

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

型液体培养基(代号92-3TBL),培养15天后可取沉渣镜检。

在结核杆菌的培养研究中出现过很多培养基,以上介绍的是国

内外通用的一些培养基,有许多新出现的培养基虽然培养时间缩短,

但同时出现问题也很多,因此要慎重选择。另外,要用一种培养基同

时达到多种目的也是很困难的,因此许多实验室多同时应用几种培养

基,以便于从各个角度来满足临床和科研的需要。总之,只要结核病

还威胁着人类的健康,对培养基的研究还将继续下去,但是如何深入、

细致地研究现有培养基各成分的相互作用及如何使现代生物技术与

传统培养技术更好的结合等问题还有待于进一步的研究。

【参考文献】

1 Isenberg HD, D’Amato RF, Heifets L, et al. Collaborative feasibility study of a biphasic system(Roche Septi-Chek AFB)for rapid detection and isolation of mycobacteria. J Clin Microbiol,1991, 29(8):1719-1722.

2 申建维,袁玮,李娉,等.平菇双相培养基用于结核杆菌培养

的研究.中国防痨杂志,2001,23,4,,241-244.

3 Saito H. Laboratory media for the cultivation of tubercle bacillus. Kekkaku,1998,73(5):329-337.

4 WHO. Laboratory services in tuberculosis control,1998.

5 David Lubasi, Charity Habeenzu, Satoshi Mitarai. Evaluation of an ogawa mycobacterium culture method modified for higher sensitivity employing concentrated samples. Tropical

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

Medicine and Health,2004,32(1):1-4.

6 张敦熔.现代结核病学.北京,人民军医出版社,2000,17-19.

7 闻玉梅.现代医学微生物学.上海,上海医科大学出版社,

1999,507.

8 Hanna BA, Ebrahimzadeh A, Elliott LB, et al. Multicenter evaluation of the BACTEC MGIT 960 system for recovery of mycobacteria. J Clin Microbiol,1999,37(3):748-752.

9 Chien HP, Yu MC, Wu MH, et al. Comparison of the BACTEC MGIT 960 with Lowenstein-Jensen medium for recovery of mycobacteria from clinical specimens. Int J Tuberc Lung Dis,2000, 4(9):866-870.

10 kos Somoskvi, Csaba Kdmn, kos Lantos, et al. Comparison of recoveries of Mycobacterium tuberculosis using the automated BACTEC MGIT 960 System, the BACTEC 460 TB System, and Lowenstein-Jensen medium. J Clin

Microbiol,2000,38(6):2395-2397.

11 Woods GL,Fish G, Plaunt M, et al. Clinical evaluation of difco ESP culture system ? for growth and detection of

mycobacteria. Journal of Clinical Microbiology,1997,35 (1): 121-124.

12 Enrico Tortoli, Paola Cichero, M Gabriella Chirillo, et al. Multicenter comparison of ESP culture system ? with BACTEC

DOC格式论文,方便您的复制修改删减

460TB and with lowenstein-Jensen medium for recovery of mycobacteria from different clinical specimens, including blood. Journal of Clinical Microbiology,1998,36(5): 1378-1381.

13 Williams-Bouyer N, Yorke R, Lee HI, et al. Comparison of the BACTEC MGIT 960 and ESP culture system ? for growth and

detection of mycobacteria. J Clin Microbiol,2000,38(11):4167-4170.

14 闫国蕊,苏保亮.结核病细菌学检验技术.郑州,郑州大学出

版社,2001,9,32.

15 中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程.中国防痨杂志,

1996,18,1,,28-31.

16 匡铁吉,董梅,张青霞,等.匡氏琼脂培养基用于痰结核菌

直接药敏试验的效果研究.中国检验医学与临床,2002,3,2,,54-56.

17 王进.结核分支杆菌L型的研究现状.中华新医学,2003,4

,19,,1774-1776.

18 庄玉辉,李国利,张小刚,等.肺结核病人L型分离培养方

法的研究.微生物学通报,1991,18,6,,348.

范文三：配制结核含药培养基药液的保存条件探讨

配制结核含药培养基药液的保存条件探讨

【摘要】目的探讨配制结核含药培养基药液的保存条件。方法取药粉异烟肼（INH，100%）30 mg、利福平（RFP，98%）310 mg、乙胺丁醇（EMB，73.6%）21 mg和链霉素（SM，77%）39 mg，分别配制成20 μg/ml INH、4000 μg/ml RFP、200 μg/ml EMB和400 μg/ml SM的药液，将其分成4份，采用第一份药液配成以上四种含药培养基，第二份药液室温放置1、3、7 d后分别配成四种含药培养基，第三份药液冷藏放置1、3、7 d后分别配成四种含药培养基，第四份药液冷冻（20℃）1个月后，配成4种含药培养基。取40株结核分枝杆菌，调成102mg/ml和104mg/ml的菌液，接种于第一份药液配制的含药培养基上，作为对照并检测其耐药性。102mg/ml的菌液分别接种于以上各种保存条件药液配制的含药培养基中，37℃培养4周，观察实验结果。结果 40株结核分枝杆菌在不同保存条件药液配制含药培养基上的生长状况与对照差异无统计学意义（P均＞0.05）。随药液保存时间的增加，实验污染率有所增加。结论室温、冷藏保存7 d内及冷冻保存1个月药液配制的结核含药培养基可用于结核分枝杆菌保存，同时应该采用灭菌措施及加强无菌性操作。

【关键词】结核分枝杆菌；保存条件；抗结核药物

1 方法

1.1 药物选择分别选择异烟肼（INH，100%）、利福平（RFP，98%）、乙胺丁醇（EMB，73.6%）和链霉素（SM，77%），以上4种药粉来自国家结核病参比实验室，再由辽宁省涂阳肺结核患者的痰培养获得的已确认的结核分枝杆菌40株菌株。

1.2 操作方法将INH、RFP、EMB和SM分别配制成20 μg/ml、4000 μg/ml、200 μg/ml和400 μg/ml的药液，并分成四份。第一份药液配制成含药培养基，含药培养基中的药物浓度为：INH（0.2 μg/ml）、RFP（40 μg/ml）、EMB（2 μg/ml）和SM（4 μg/ml）。第二份药液分别室温放置1、3、7 d后，配成含药培养基。第三份药液分别冷藏放置1、3、7 d后，配成含药培养基。第四份药液冷冻（20℃）1个月后，配成含药培养基。取40株结核分枝杆菌传代培养3周后，调成102mg/ml和104mg/ml的菌液，接种含药培养基，37℃培养4周，观察结果，判断结核分枝杆菌的耐药性。同时还将102mg/ml的菌液分别接种不同保存条件药液配制的含药培养基，37℃培养4周，观察结果。

2 结果

2.1 结核分枝杆菌在不同保存条件药液配制含药培养基中生长状况比较结核分枝杆菌在不同保存条件含异烟肼及利福平培养基中生长状况比较见表1，结果表明两组各种条件下阳性率分布无明显区别（P均＞0.05）。

结核分枝杆菌在不同保存条件含链霉素及乙胺丁醇培养基中生长状况比较

范文四：结核分枝杆菌固液双相培养基的研究

文章编号：１００７－４２８７（２０１１）１２－２０８８－０２

结核分枝杆菌固液双相培养基的研究赵大力１，韩中波２，周亚丽２

（１．长春国际旅行卫生保健中心，吉林长春１３００６２；２．吉林市结核病防治研究所，吉林吉林１３２０１１）

　　结核病是严重危及全球的公共卫生问题之一，高耐药性结核病的流行，成为结核病诊断和治疗的难点。结核菌的培养和药敏结果，在结核病的防治中起着重要作用［１］。目前公认的结核分枝杆菌培养方法有两种，一是液体培养基快速检测法，其营养成分高，培养速度快，一般仅需１０－２０天，药敏仅需１０天。缺点是价格昂贵，不能客观观察结果，需特殊仪器（设备与培养基均需进口），其次是药敏试验种类少。二是改良罗氏培养法，是我国普及通用的结核分枝杆菌培养方法，为固相培养方法，是利用自制培养基在直视观察下，结核杆菌的菌落生长情况。其优点是药敏试验种类广泛，可以选择出敏感药物，以指导临床化疗方案的制定、价格低廉，但缺点是时间长，培养需６－８周，药敏时间一般又需４周。我们针对性地开展二者优势互补作用的探讨，研究结核分枝杆菌固液双向培养基。

1　材料和方法

1．1　7H 9液相培养基的制备　７H ９干粉培养基购自美国 s i gm a 公司，取干粉２．３５g ，蒸馏水溶解后加入２m l甘油，蒸馏水补足至４５０m l ，高压灭菌、待冷却后，按５０μg ／m l加入羟苄青霉素、１０μg ／m l加入两性霉素 B ，营养增强剂（OADC ）５０m l混匀，置４℃冰箱备用。

1．2　液体 PN B 培养基配制　取０．５gPNB 加无菌蒸馏水１０m l溶解后，加９０m l ７H ９液体培养基内，分装中号试管，置４℃冰箱备用。

1．3　固液双相培养基的配制　接种菌株前制备，以改良罗氏培养基为基础，加入７H ９液相培养基４m l （约占斜面的一半）。

1．4　标准菌株及菌悬液的制备　用接种环挑取菌落若干，于含有２滴０．５％Tween ８０生理盐水试管内，用圆头玻棒，在试管底部研磨成糊状，用生理盐水将菌液稀释成１m g ／m l菌悬液，再用生理盐水作梯度稀释，H ３７Rv 制成为１０－１－１０－８m g ／m l各种不同浓度菌悬液。其他分枝杆菌制成１０－３m g ／m l菌悬液备用。 1．5　基础试验　将双相培养基培养瓶打开，取上述菌悬液０．２m l ，分别接种在两种不同（改良罗氏和固液双相）的培养基上，各接种２组。置３７℃温箱内培养，１周内每天观察一次结果，记录结核杆菌在两种培养基上的生长情况。

1．6　临床标本试验　取本院结核科患者晨痰１份．于无菌试管内，加２％氢氧化钠２－４倍，用吸管充分混匀后置３７％温箱３０m i n （其间混匀２次）使之完全液化。取液化后试管内中层痰液０．２m l ，分别接种于固液双相培养基、罗氏培养基和 PNB 培养基，每份２瓶，置３７℃温箱培养，每周记录阳性数和污染数至８周为止，并记录每份标本的初期生长时间。PNB 培养基不生长者为人型或牛型结核杆菌。

1．7　药物敏感性实验　改良罗氏培养基药敏实验按常规绝对浓度法操作，药物浓度分别为 I N H （１、１０

μg ／m l ）、SM （１０、１００μg ／m l ）、RFP （５０、２５０μg ／m l ）、EM B （５、５０μg ／m l ），固液双相培养基药敏实验，将药物加到液体培养基中，药物终浓度为 I N H （０．２μg ／m l ）、SM （２μg ／m l ）、RFP （１μg ／m l ）、EM B （４μg ／m l ）。并记录每份标本的初期生长时间，对各种药物的耐药情况。

2　结果

2．1　结核杆菌在固液双相培养基上生长的情况　H ３７Rv １０－１m g ／m l菌液在接种后第３天液相培养基中段略变混浊，有５－８个白色颗粒状菌落出现。第５天即有１５－２０个菌落，８天时中段呈乳白状混浊，转动试管可见无数菌落。固相在第６天出现明显小菌落，第９天布满斜面。菌落略粗糙，与改良罗氏培养基上菌落相同。将液相和固相菌落挑出分别涂片抗酸染色，均呈典型抗酸杆菌，但前者有索状形成，后者菌体稍短。

2．2　临床标本分离培养结果见表１。

表 1　临床标本分离培养结果

培养基标本数阳性数（％）污染数（％）固液双相培养基３０５１５０（４９．１）１０（３．２）

—

８８０２

—Chi n J Lab D i agn ，D ecem ber ，２０１１，V ol １５，N o ．１２万方数据

　　经统计学分析两种培养基的污染率无显著性差异（P ＞０．０５）

2．3　固液双相培养基和改良罗氏培养基生长速度的比较，结果见表２。固液双相培养基的固相培养基结核菌生长稍晚于液相培养基，但优于罗氏培养基。

表 2　固液双相培养基和改良罗氏培养基生长速度的比较

培养基

生长速度（周）

４５６７８

合计

双相培养基１５６５５０１８２１５０罗氏培养基７３６４９２５２１３４

　　结核分枝杆菌在固液双相培养基平均生长时间１４．４天，改良罗氏培养２３．５天，前者平均生长快９．１天，二者有显著性差异（P ０．０５）。

2．5　几种培养基价格的对比分析（药敏按四种药物计算）见表４。

表 4　几种培养基价格的对比

每支单价（元）需要数量

培养＋药敏的价格（元）

改良罗氏培养基５１４７０

液体培养基６５６３９０

固液双相培养基９８７２

　　由表４可看出：应用固液双相培养基进行结核菌培养、药敏所需的成本与改良罗氏培养基相当，确远远低于液体培养基的价格。

3　讨论

结核杆菌在鸡蛋或含血清琼脂等固体培养基上生长缓慢的关键、是标本经酸或碱处理直接接种在培养基上后，至少需２－３天培养基才能缓冲碱，达到 pH ７．２左右。此外细菌细胞不能有效地吸收营养成分而导致细菌对数生长期延滞，而本研究设计固液双相培养基 pH 为６．５－６．７接种氢氧化钠与痰的混合液后，使 pH 改变至７．０－７．２。尤其是细菌细胞在液相培养基内可使细菌浸泡在营养成分中以利于新陈代谢对数生长期提前。本研究基础实验证明，说明固液双相培养基的优越性。液体培养基阳性菌落呈白色颗粒状，难以鉴别菌落特性，而固相生长的菌落则典型，易于判断，且有利于药敏试验菌落的挑选。双相培养基液相部分可达到快速培养的目的，固相可提供分枝杆菌典型菌落，体现了双相培养基的优点［２］。从临床阳性标本结果显示双相培养基平均生长时间比罗氏培养基快８．１天左右，尤其是双相培养基生长结束时间在３０天．而传统罗氏培养基规定为８周，所以使用双相培养基可使结核培养缩短１个月。

本研究双相培养基用磷酸盐调节 pH ６．５－６．７，痰标本经２％氢氧化钠处理后不中和、不离心直接接种，操作十分简便，且固相培养基上生长的菌落典型，易于挑取，有利于药敏实验菌悬液的定量制作。其污染率与改良罗氏培养基的污染率无无显著性差异，在改良罗氏培养基中，微量孔雀绿既可抑制杂菌的生长，又可对结核杆菌的生长有促进作用。在 M i ddl e br ook ７H ９的基础上，羧苄青霉素 C 、两性霉素 B 即可制备成结核菌素的选择培养基，其目的主要是为了减少污染率，提高阳性率。

菌型鉴定采用 PNB 固液双相培养基，在１０天内可达到初步筛选结核分枝杆菌的目的。

在药敏方面，传统的含药罗氏培养基上存在抗结核药物受热失活和蛋白质吸附两个主要问题至今尚未解决，而固液双相培养基的优点在于不存在高蛋白组分对药物的吸附作用，又无加热凝固等造成药物失活问题，因此在药敏试验方面有着显著的优越性。本实验表明固液双相培养基的药敏结果与改良罗氏培养基无显著性差异。药敏试验报告结果比罗氏培养基平均早８．８天，多数药敏结果可在２周内报告，对结核病的临床治疗有重要指导意义。

本研究结果证明固液双相培养基有刺激结核杆菌生长的作用，尤其是其价格低廉，制作方便，操作简单，适合于我国广大基层医院和结核病院应用，并有很高的应用价值。

参考文献：

［１］申建维，袁　玮，李　娉，等．平菇双相培养基用于结核杆菌培养的研究［J ］．中国防痨杂志，２００１，２３（４）：２４１．

［２］匡铁吉，董　梅，张青霞，等．匡氏琼脂培养基用于痰结核菌直接药敏试验的效果研究［J ］．中国检验医学与临床，２００２，３（２）：５４．（收稿日期：２０１０－１１－１０）—９８０２

—

中国实验诊断学　２０１１年１２月　第１５卷　第１２期万方数据

结核分枝杆菌固液双相培养基的研究

作者:赵大力 , 韩中波 , 周亚丽

作者单位:赵大力(长春国际旅行卫生保健中心,吉林,长春130062) , 韩中波,周亚丽(吉林市结核病防治研究所,吉林,吉林132011)

刊名:中国实验诊断学

英文刊名:CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS年,卷(期):

2011,15(12)

参考文献(2条)

1. 申建维;袁玮;李娉平菇双相培养基用于结核杆菌培养的研究 [期刊论文]-中国防痨杂志 2001(04)2. 匡铁吉;董梅;张青霞匡氏琼脂培养基用于痰结核菌直接药敏试验的效果研究 2002(02)

本文读者也读过(10条)

1. 陈丽丽 . 蔡玲斐 . 陈小央 . 吴继云 . 高丽 . 赵银万 . 黄小春 . 胡建华 . 戴卫清 . 韦跃宇五种结核杆菌培养基的制作及其生长速度比较 [期刊论文]-杭州师范学院学报(医学版) 2007,27(5)

2. 徐修礼 . 尹凌娇 . 张建芳 . 孙怡群 . 樊新 . 程晓东 . XU Xiu-li. YIN Ling-jiao. ZHANG Jian-fang. SUN Yi-qun. FAN Xin . CHENG Xiao-dong 结核分枝杆菌新型改良罗氏快速培养基的研究 [期刊论文]-中国感染控制杂志 2007,6(1)3. 蔡常辉 . 梁连辉 . 曾桂云 . 王锦萍 . Cai Chang-hui. Liang Lian-hui. Zheng Gui-yun. Wang Jing-ping 实时荧光 PCR与BACTEC MGIT960快速培养在初治痰涂片阴性未受抗结核治疗的肺结核诊断中的应用 [期刊论文]-放射免疫学杂志 2012,25(1)

4. 黄重敏 . 陆富刚结核杆菌培养和应用的研究进展 [期刊论文]-医学综述 2001,7(11)

5. 胡智敏 . 陈军 . 任易 . 张金荣 . 韩晖 . HU Zhi-min. CHEN Jun. REN Yi. ZHANG Jin-rong. HAN Hui 固体硝酸盐还原酶用于结核分枝杆菌药敏试验的可行性研究 [期刊论文]-公共卫生与预防医学 2006,17(6)

6. 刘忠泉 . 李传友 . 陈效友 . 刘志辉 . 王庆 . 马玙硝酸盐还原酶试验检测结核分支杆菌耐药性的研究 [期刊论文]-中国防痨杂志 2003,25(z1)

7. 张帅清痰结核分支杆菌培养的2种前处理方法对比实验 [期刊论文]-中国防痨杂志 2003,25(5)8. 郭芳芳结核杆菌培养滤液蛋白10参照品的制备及其检测方法的初步建立 [学位论文]20119. 于晓华 . 李家娅结核杆菌培养痰标本前处理的方法改进 [期刊论文]-齐鲁医学检验 2001,12(2)10. 金法祥结核杆菌培养前处理两种方法的初步评价 [期刊论文]-预防医学文献信息 2001,7(4)

本文链接:http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgsyzdx201112038.aspx

范文五：结核杆菌培养基的种类及应用

结核杆培养基的种类菌及应用

源：中国来论下文载心中 [ 0802-02- 61:55:00] 作：者仙王何树　梅　俐袁编辑： sudt20 a

【键关词】结核杆

菌

　自从1882　K年cho现发结核杆以来菌为，进结核杆促生长菌，缩培养短间，达时到提前离、分鉴定目的，人们的结对核杆菌营的养生理、谢及代工人养进培了行一系列的究研经，一个多过世纪不懈的努力已，经结核杆菌对的生规律长有比了深较入了解地并且，成了许形成多的熟养培法方。尽现管代子生分学技术在物核结病研究发中着越挥来越重的作用，要是结但核菌的培杆养结核病的诊在断流、病行学标指结核、菌分的鉴定、药型敏试、结核验病物药的研究等方依面然着有可替代不作的用为。了能够较统系了地、解有对性针选择合适地恰、当的养培基本文就，国外较内成熟的培为养基种及应类进行如用综述。下

　1 培养基的按性状分

类

养结核杆培菌培养的基，从性上状主分有要固培养基体、液体养培基、半体流养培、固液双基相养培等基类型这，些养基培有各特点

。

　11 .固体养培基常用最是的氏（罗ownLtsin-Jeenosn，LJ）培-养，基也是具最代表的一种性，他的其还有小辰次川Ta（tujsigawoa）鸡蛋培养基M和idlde robk oH17、7011H琼脂等培养等。基固在体培养中，基由于以直可接察菌观落形态并的做鉴别可用因此常用，临于标本床的分离养、培别、保存鉴种菌对抗及结药核的敏物感性测等定面方缺点是结核，生长菌慢。

缓　

　1. 液2体培养基常的用苏通有（aSutno）培养、Mi基dle bdook 7Hr9等液培养基。体核杆结菌在体液培基养中能够广更泛的接触养成分营，因此液体中生长相对在快,较主要液在体表生长面，动搅时沉至管底下可，得大量获的核杆结。主菌缺点要是：在对床临标的收本集采、样运、输方有面利的一不面不；根能据肉观眼察落菌态形培；基养染机污多，影响结核会杆的生长菌，染时污易不结核与菌鉴别，杆需片染涂色检判断镜核结菌是否生长杆

。

　1.　3 流体半养基培改苏良半流通琼脂体培养基一种是工综人培合基养，质基明透呈半，体状态流生长的，核杆菌形成白结颗粒色状落悬浮于培菌基养中，段于便观察。

　1　.4 固双向液培养基 Seti-CphcekA FB双相培养基国外是应较早的一种培养基用［］1，用采BD利式封闭专固式双液相一化培养体设基计。液相为Middel rookb7H 分9枝杆菌用专增菌养培基可，迅速殖分枝繁杆菌固，为3种相体固培养平基：M面ddileb orok7 H11和良改L的-J培养用于及基将增时肉汤菌内分杆菌枝进行分离化以

纯获得单个落菌，克巧力琼脂于用期

早

现污染菌发，免时避间浪。费于由有相液为基作础，因结此杆核生长较快菌也是，种一非有效的培养常基。内有国平菇用制备的菇双平相养培基［］是利用平菇浸2液出为础，基小加血清、琼脂牛等分而成制的一配培养基种，据根脂琼量的不制成液相、同固培相养。基国内应用在少，较主要特点是本成低，制简备单适合于基层使，用，有定一的研究值价。

　　 2按分成分类

主要

分以为鸡卵琼和脂为基的础种培养两基3］。为了［结使杆核菌达到快速长的目生的可，加上血液椰、汁、平液等菇不营养成分，同而配从制出各不种同培养基的。

　2　. 以1鸡卵为础基的养基培有 L-J培基养、gOawa养基培、丙酸钠培酮基和丙养酮酸钠胞色素C培养细等基。在鸡卵主为的培基中，鸡卵养液关键成分是在，备培养基制时要充，分考鸡卵虑液的新程度鲜及以营成养分是受到破坏否。

　2.　1.1 LJ-培基养是种一典的经培基［4养，主］成要分有门天素冬K、2PH4、MgSOO?472O、枸H酸镁、甘橼、油卵液等，需要血清鸡凝固对器培基进行凝固，以保养培证养基中有定一凝固水，的满足长时以间养培的需要根。据成种类及剂分的不量，又同分为可性酸-LJ养培基和性碱-JL养基培将L。-J养培基K中2PO4H的由2量.4增g为加4g1就是，性酸-JL培养，基将而H2KP42.O4改为g2HKPO436g，.是就性碱-J培L基。养-LJ养基培备简单制，主用于分枝要杆初菌次离培分、传代培养、养落观察菌保、菌存种、物敏感药性定测及菌种鉴定等而酸，L-J性培养和基性L碱J培养基-用分于枝菌分离杆养培时，本标分别碱用和酸处理。结杆菌在核L-培J养上生长基时培，养时较长间，大约在48周，因此~利不临于快床检测速的需，求但作其为快他诊速断的照，以参及为作结核菌杆诊断标的准非有重要的意义常。

　　.1.2 2 Oawa培g养基成较少，又少分天门冬了，因素此一种是L-J比培基更养经为济培的基，养要主分有成谷氨酸、钠KHP2O4甘、油、卵液等鸡，可还以过调通整K2POH的4量及氨谷钠的量制备成酸良改培养基（Mdofiei dgawa），此培养O基的用与L途J-培养相基，同由价廉，特别于适于合展发国中家［］5

。

2.　1.3 丙酮酸钠培养基在L-J培是基的基养础加上入丙酮钠，酸去除油制甘而成，主要用于备从本标分离牛型分中杆枝菌或为作菌本传种及保的存。而酮丙钠酸胞色细C培素养是在基gawa培O养基础基上杨乐，等荫0用.1丙%酮酸代钠替甘，油并入2.5%加葡萄液糖及胞色素细C制丙成酸酮钠胞细色素培C养，基丙酮与钠酸养基培、gawaO培基对临养床

标本比较其，培养的养阳性培最率，显高了丙酮示酸钠细色胞C素培基的优

越养性。

　2　.2 以琼脂为础基培基养包括苏通（aSton）培养基Muddle irboo 7H9k7、H107、H117、12，H氏培匡养Pr基okause培r养和B基ec琼k脂培养等基。些这养培基主要由是无盐机类一系列及有机化的合物等分成组成琼。脂的用主要是作赋剂，通形调整过琼的量脂一方，可以制备面不成同性状培养的；另基方一，面液体在培养中的基量少脂有琼利于核结杆菌在段形成中菌落，从便而观察于

。

2　2..1 Sautn培o养基6］主要［成分有天门素、冬2HKP4OMg、OS47?H2O柠檬酸、、枸橼铁酸铵、甘油，等据是否根入加琼脂及琼的量，又脂形了液体培成基及养半体培养固基也称（良改苏半通流培养基）等。在培养基的体制备，上不需也要殊特的备，通过高压灭设菌既法可理培养处基因此，作操简单，要主用牛型分于枝杆的培养，卡菌苗的介生及产草药中结对杆核的作菌用的究研。中

　　22.. 2 Mddie bloro系列k养基培是外最常用国于核结杆研菌和究诊目的断的培基养一，从成之上看分最大的特，是成分点、多配制杂［6复，但是培］时养间，短因此来越越到受内外国者的关注，其中学H9、77H1为2体培液基养，H107、7H11固体培养基为。过在培养通基加入标中14记的C榈棕，当酸分枝有菌生杆时长，就可利培用基养中标的记物产生而有射放性14OC,2然由BACTE 后BT46 监测0统检系测含量其，因此常敏非。Mi感dldeb oor系列培养k主基用于要枝分杆培养菌及药物敏感性测定。

的

2.　.2 3Pr osakue培r养和基eBck琼脂培基养使用简，但便是菌不落型，呈扁平典、露滴状状多，光滑型［7］。为

3　按目的分

类

在述前的培养基基上，础根研究据目不的，同入特定物质后加，以制备可用成于速快培养、别鉴、敏药等同用不途的培基，养要为主了满足床临需要。

　的　3.1 用快速培养于主要有eBctn Doikissno（nDB公司研制）的列全系自培养系动和Orga统nn oTekniak公研制开司发培养系统。的其的还有iDfoc公E司P系统、S生物梅里埃公司VI的TLA统系等。由于与代现先的仪器设备进、技结合，检测灵术敏高度时，间，短但常价通位高较

。20世70纪代年，B末公司D制的研养培统系要有早主的B期ACECT 460MT T，B成全球第为台一业专全的自分枝杆动菌养培定鉴仪，该统培养系基以Middle rbook7H1为2基，在培础基中养加标入1记C4棕的榈，酸故也因为放射称同素位体培养液法，于由在存弃物放废性环境污射以染探及针刺空开放性测检术缺技，陷公又司出无推射性放污的B染ACTC 9000MBE及ABTECC MIGT9 06

全

自动快速枝分菌培养杆鉴定敏系统，药正实真现了分杆菌枝速快安全、、无放性射检测。ABTCECM IT G609养基以Mi培dld br

ook7 9H为础，配方优良基的BB LANTA PM抗T剂和菌AODC营养。采用剂一种荧物质作为光分杆菌生枝指长剂，因此示也称分为杆菌枝生指长管法（my示obcacetiarg rotw hindcatoi rtbue，MGTI），目前是全最快的分球枝直培养、鉴定菌药敏系、统许。多学者8~1［］0应发用，结核现分枝杆平均检菌出间为14时4天.最,1快0。适天用多种于标本来源对各，种分杆菌枝测检适用。

都　

　BMBac/分枝杆T菌培系养是统O由rgnan oeknTki公司开发的a将，血培养中判液细菌生断长的H指p剂用于示核结杆的菌养。结培杆核代菌谢产中的CO生变化通2化过学受感器测，利监酸碱用度变化的p使H示指颜剂改色，最变通过发后射光度检计测颜色变。化其平检均测时比间LJ2早周该系统。然采依Mid用dl beoork7H 9体培养基液当，有性信阳时号需，取培液进行养涂及片鉴定确。认iDcf公oESP系司统是一种全,自的动培养系统，可以连续监血细菌的生测长。有无具放射的性特，与点ABCTC TB 460比E［11，1较］，2在检测间时差异无上著性显,以可代使用，替Wlliims-Bouayr N等将eSEP与BACTCEM GIT96 0进行了详细比［较31，］在体整检测间上稍长些，对时戈登枝杆分菌监测率高作为。种一体培养基,液需与固体培要养基结使合用,而能不为一种独立作系。

统

　　我学国者据根国具内情体，况用利血液、汁椰植、物激、平菇素液豆、浸液等不同养成分营配，成多种制不同的快培速养。基如平菇用备制平的双菇培相养，在基落实培养基基上的豆浸础培液基养、物植素激养基等。

培

. 2用于择选由于核结杆菌长生慢，且缓营要求高，因此养于其对的他微生极易物长，生常通培在基中都养加有菌抑质。在物罗氏培养基，中量微孔雀绿可既抑杂制的生菌，长可对又结杆核的生菌长促进有作。用Gnyt通f把过雀孔的浓度绿高提，同加时青霉素、萘啶入酸制成选备性的改择良氏罗培基养1［］。在4Midledbr oko7 H01、iMddleb ookr7H 1的1础基，通上过加上多黏素菌、羧苄B霉青C、素两性素B霉三和氧甲氨啶嘧可即制备成结核素菌选的培养基择其，目主要的是为减了少染污率，高提阳率性

。

　　.3 3用于鉴别最主要的有（对硝苯基酸甲）TCH（和噻-吩2羧酸）-鉴培养别基。用溶解稀释后在制备L，J培-基的养时同，入加甲基二甲酰胺或二醇丙成制NP培养B基加入，吩-2噻羧酸制-TC成H培养基，于用结分核枝菌杆牛、分枝杆和菌结核非分枝杆性的初步菌定［鉴15。

］

3.4　用于敏药氏培匡养基是

由我研国制的一种在结核杆菌速药敏快验中试很好价值的有养培［1基6。］然B虽D公的产司品够快速的能测检核结杆，菌且在并敏方面药也一有的定势优，

但早期的

培系统养在存射性，新放发的开培系统养又在存染率污高较问的，而在题传的含药罗统氏养基上培在存结抗药物核热受失活蛋白质和吸两个主附问要至今题未解尚决而，氏培匡养基优点的在不存在于高白组蛋对药分物的附作吸用又，无热凝加固造等药物失活问成，题此在因药试验方敏有着显著面优越性的。主要无由盐、维机素生琼、、脂甘和小油牛清血等分组成。药成试验报告敏结果罗比培氏基养平早29天，多数药均敏结可在果周内3报告，对核结病临的床治疗重有指导要义意BA。TEC系列培养C系统E、PS统系等都可用于敏试药验一些液，体养培基（通培养基和胆固苏醇液培养体可用于中）草对药核结杆抑菌菌试。验

　3.5　用于L 细菌的培型养核结杆菌型的营养L基上本与菌原相，但同一需般加要一入定量的渗压稳定透剂血清，和国主外使要用的培基［养17］巯基有酸盐醋养培基PP、L琼O脂V、SY肉汤和高桥的胰大豆蛋白腺陈琼脂培基养(STAI-等。国内)玉辉等庄［18］已成地利功用改良SA-LT养培培基L型养菌。外此安徽蚌埠医院的学型L液培养基体(代9号-23TL)，B培15养天后取可沉渣镜。检

　　在结核菌的培养研杆中究出过现很多养培，基上以介绍的国内是通用的外些培养基一有，多许出新现的培养虽然基养培时缩短，但间时出现问同也题多很，此要慎因重择选。另，外用一种要养基同培达时到多种的目是也很困难，因的此多许实验室同多时应用几种培养，以基便从各于个角度来满临足和科床的研需要总。，只要之结核病威胁还着类的健康人，对培养的基研还将究续继下去，但是如何入深、细致研地究现培有基各养分成相的作互及用如何现使代物技术与生统传养培术更技好结的等合问还有题待进一于的研步究。

　　【参文考献

】

　1 　seInerb gHD, ’DAatm oF,RH ifees t,Let al. ollCborataivefeas biiity study lf ao bipashci ysset(mocRehS pti-eCek hAF)Bfo rapir dedteciotn na idslotion af omcoybcaetri.aJ C ln Miicroibol1,99,1 29(8)17:19-1227

　　申2维，袁建玮，娉李等，.平菇相培双基养用于结杆菌培核养的究研中国.痨杂防，2志010，234）：2（4-1442

　 S3ito a.HL baratory omedi afor het cltuiavton of itburelc ebcialus. Keklakk,19u9,873(5):23-3937

　　 WHO4.La braoory tersicvsei ntu ebcrlosuisco tnrlo1,989

　　.5 Da ivdLub ais, Cahrty iabeenHu,z StoshaiM iartia. vEauatioln ofan oawg amcybaotcerium clture meuhod tomidfid eorf ihghe renssitivity

employng ioncenctaredt smalesp.T roicapl Mediinc ead nHeatlh,200,432():1-1.

6 张熔.敦代结核现学病.京北人民军：医出版社，2000,1-79.

　7 　闻梅玉.现医学微代物生学上.：上海海科医大出学版社199，，509.

　8　 aHnanB ,A Erbhamiadze A,h Ellotti BL,e t l. aMultcinteer evaluatin of toh BeCAETCMGIT 96 0sstey mor feroverycof myco bcteari.a J lCin Mircboilo19,9,9373(:)7487-5.

　　2 9 hCie nH, YuP MC,Wu MH, et l. aCmoapisrono f he BACTEtCM IT G60 9wiht Lownseeti-Jensennmedium or recfovrye f mycoboatcriaef orm clinicals pecmeisn. Int TuJbec rung DLsi,002, 4(09)8:66-70.

　　10 k o soSmoskv,i Csba adKnm,k o Lsanot, steal. oCmapisro onfr coeerivse fo Mycoacbteiru mubtrceulsosi sinug th auetoamtd BACeEC TGITM9 0 S6styme,the BACTCE46 0 BTS ytem, ands oLewnseti-Jnesen mnedium J.Cl n iicrMoiol,b200,3806()2:3592-97.3

Wo os dLG,FishG, Plaut n, eM tl. aClincai lvaluaeitn ofo idcf oSP Ecltuur system Ⅱ efro grotw ahn ddetcetoi nf myocbaoctrei. Joauranl f Cloiincl aicMoriboolyg,19973,5 (1:) 12-1142

21 nriEo cTrtolio,Pao alCic hre,oM G briella Cahriilo, lt ael .Mltucietnreco pmairosn f oEPS cltuur esysem Ⅱ tiwt BhACTEC 406TBand with owlnseteniJ-esenn mediu formrecove yr ofmy coabtercia for mifdfrenet linccal isecimpne, sicnluindgb oodl. Juonarl ofC inicll Maircoiolobgy,9981,3(6): 157831381.

　　31 WillimasB-oueyrN ,orkY eR,Le e I,H e atl .oCpmarsion o ftehBA CTCEM ITG9 60an d ES cuPturles syem Ⅱ ftr groowh andtde tceiotnof myc oabtcreia J. CilnM irociobl，200,38011()4:16-7147.0

　14　闫国蕊，苏亮.结保核细病菌检学技术验.郑州郑州：学出版大社2，01，90：2.3

　1　 5中国痨协会.结防病核诊断菌细检学验程规.中国痨杂防，志19961，8（）：12-831

.　　16 匡

吉铁董，梅张青霞，，等匡.氏琼脂养基培用于结核菌痰直药接试敏验效果研的.究中检国验学医与临床，0220,（32）5：456-.

　1　7 王进.核分结支杆L菌的研究现型.状华新中医，20学0，3419）：177（-47167

　.　18 庄辉玉，李国，张利刚，等.肺小核病结L型人分培离养法方研的.微生究学通报物1，99，18（6）1：348

转载请注明出处范文大全网 » 结核杆菌快速液体培养基