范文一：COD测定注意事项
重铬酸钾标准法测量 COD 注意事项
1、 使用 0.4g 硫酸汞络合氯离子的最高量可达 40mg , 如取用 20.00mL 水样,即最高可络合 2000mg/L氯离子浓度的水样。若氯离子的浓度 较低,也可少加硫酸汞,使保持硫酸汞 :氯离子 =10:1(W/W)。若出现 少量氯化汞沉淀,并不影响测定。
2、本方法测定 COD 的范围为 50— 500mg/L。对于化学需氧量小于 50mg/L的水样,应改用 0.0250mol/L重铬酸钾标准溶液。回滴时用 0.01mol/L硫酸亚铁铵标准溶液。对于 COD 大于 500mg/L的水样应稀 释后再来测定。
3、水样加热回流后,溶液中重铬酸钾剩余量应为加入量的 1/5— 4/5为宜。
4、用邻苯二甲酸氢钾标准溶液检查试剂的质量和操作技术时,由于 每克邻苯二甲酸氢钾的理论 CODCr 为 1.176g, 所以溶解 0.4251g 邻苯 二甲酸氢钾 (HOOCC6H4COOK)于重蒸馏水中,转入 1000mL 容量瓶,用 重蒸馏水稀释至标线, 使之成为 500mg/L的 CODcr 标准溶液。 用时新 配。
5、 CODCr 的测定结果应保留四位有效数字。
6、每次实验时,应对硫酸亚铁铵标准滴定溶液进行标定,室温较高 时尤其注意其浓度的变化。 (也可在滴定后的空白中再加入 10.0ml 重 铬酸钾标准溶液 , 用硫酸亚铁铵滴定至终点 .)
7、水样应保证新鲜,尽快测定。
范文二：ELISA测定注意事项
【摘要】 分析基层中心血站实验室手工操作ELISA 时，影响检测结果的相关因素。分别对用于临床ELISA 测定标本收集、试剂准备，加样、温育时间与温度控制，洗板，以OPD 和TMB 为底物的显色，比色测定及报告结果和准确解释行问题进行探讨。对受血者和献血者采用ELISA 定性和定量测定操作简便可行。
【关键词】 酶联免疫吸附试验 献血 质量控制
在血站质量管理工作中， 检测试剂质量优劣直接影响到临床用血安全和血液检测的准确率。基层中心血站实验室ELISA 测定现通常采用手工操作, 以微孔板条为固相的测定模式。任何一个步骤处理不当都会影响测定结果，因此最大限度地保证检测结果的可靠及输血的安全就显得十分重要。
1 临床标本的收集和保存
用于ELISA 测定的临床标本最为常用的是血清（浆）其次为唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。血清标本测定的标志物为传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、特种蛋白时，在处理和保存方面要考虑以下几个方面：1）要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，故在以HRP 为标记酶的ELISA 测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP 底物反应显色［1］。2）样本的采集及血清分离中要注意避免细菌污染。细菌生长分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；此外一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。3）血清标本如是以无菌操作分离，则可在2～8℃下保存1周。如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存应在- 70℃以下。4）冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。5）标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注意收集时间对测定结果产生影响。如可的松在早晨4～6点之间，会有一峰值出现：生长激素、促黄体激素（LH ）和促卵泡激素（FSH ）均以阵发性方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。此外体位对测定结果亦有影响，当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显增高。治疗药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。 2 ELISA 测定中试剂准备
在临床实验室作实验时通常将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA 测定中试剂准备最关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定。以使试剂盒在使用前与室温平衡。其目的是在后面的温育反应步骤中，使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，目前的商品ELISA 试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制，因
此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。此外，当试剂盒以OPD 为底物时，则底物溶液应在反应显色前临时配制。
3 加血清样本及反应试剂
在现在的ELISA 商品试剂盒中，血清样本的加入几乎是唯一的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意避免以下几点：加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要。滴加太快易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。故有时一份标本用相同的试剂盒两次测定结果不同，往往是上述加样及试剂的错误所致［2］。
4 温育的时间与温度
温育是ELISA 测定中最容易出现问题的步骤。ELISA 作为一种固相免疫测定，必须在一定的温度条件下反应一定的时间，且温育所需时间与温度成负相关性。最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。 目前ELISA 商品试剂盒，国产反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时，进口试剂盒为37℃ 1～2小时才能较完全的结合。温育实际测定操作中要注意以下几点：1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。在临床实验室中，通有将微孔板一放入温箱即开始计时，造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来 。南方冬季室内温度较低应特别注意，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性［3］。为保证37℃下足够的温育时间，可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱所需时间孔内温度才能达到37℃，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。2）温育温度的选择。在有的ELISA 试剂盒的说明书中，指出温育温度可有两种。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时间最为完全。建议在临床ELISA 测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。3）“边缘效应”的排除。“边缘效应”指外周孔显色较中心孔深，原因为96孔板周孔与中心孔表面热力学梯度不同。使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可排除“边缘效应”，且可提高测定重复性。
总而言之，尽量采用水浴，温育中让微孔板浮于水面上，或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒，放于温箱中。这样因板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触，水浴箱或湿盒内的高温度使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
5 ELISA 测定的洗板
洗板对于ELISA 测定是极其关键的一步。以HRP 作为标记酶的ELISA 试剂盒中使用的洗板液一般为含0.05%Tween20的中性PBS 。Tween20为一种非离子去垢剂，既含亲水基团，也含疏水基团。由于抗体或抗原的包被通常也是通过在碱性条件下与固相的疏水性相互作用而被动吸附于固相，因此要注意非离子去垢剂的使用浓度，洗板液中Tween20浓度高于0.2%，可使包被于固相上的抗原或抗体解吸附而影响试验的测定下限。
ELISA 测定的洗板有两种方式：1）手工洗板是在每次反应温育后，将反应液吸出或甩干，然后在板孔中加满洗液，放置2～3分钟后，将洗液吸出或甩干，再在吸水纸上拍干。重复上述洗涤步骤3～4次，最后在吸水纸上拍干，即可进行下一步测定操作。2）洗板机洗板则是将上述手工操作改由洗板机进行，但每次洗板后不能拍干，故有较多的液体残留。使用洗板机到底洗多少次能达到要求，可进行下面这个简单的实验：选择4×8 HBsAgELISA包被板条，每2×8孔分别加入相同一份弱阳性和一份阴性样本，按试剂盒说明加入酶结合物并完成温育。洗板均为4孔时，按第1排洗1次、第2排洗2次、第3排洗3次-直至第8排洗8次。加底物显色测定，如洗3次后，显色不再改变，即洗3次的板孔比色测定与4次、5次洗板的板孔的吸光度相同，阳性/阴性值保持最大不变，则可认定所用洗板机 3次洗板即可达到要求［4］。
6 以OPD 和TMB 为底物的显色
在目前的以HRP 作为标记酶的商品ELISA 试剂盒中，如以TMB 为底物，则提供的底物为A 和B 两瓶应用液；如以OPD 为底物，则试剂盒提供OPD 片剂或粉剂，临用前配制。37℃ 30分钟可使HRP 的底物催化反应完全，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37℃下反应25～30分钟后，终止反应比色测定。
此外，在加入底物开始显色反应前，最好是先检查一下底物溶液的有效性，即可将A 和B 两种液各加一滴于清洁的空板孔或eppe ndorf管中，观察是否有显色出现，以OPD 为底物，配好后应为无色，则需避光进行，否则就不能使用。以TMB 为底物，整个显色反应无需避光，显色反应完成后，加入酸终止反应，振荡混匀后即可进行下面的比色测定或肉眼判断结果。
7 ELISA 的比色测定
ELISA 的比色测定由酶标仪进行测定后，有许多阴性测定孔的吸光度值为负数或测定假阳性率大大增加等。这主要是未能正确理解和使用酶标仪所致。故需强调下面两点：1）比色测定时，一定要注意酶标仪的波长是否已调至合适或所用滤光片是否正确。在行ELISA 测定时 ，以TMB （比色波长450nm ）为底物和以OPD （比色波长492nm ）为底物的试剂盒均有使用，滤光片需根据要求随时更换。故易出现滤光片错用的问题。2）单波长或双波长比色选择的问题。单波长比色以对显色具有最大吸收的波长如450nm 或492nm 进行比色测定；而双波长比色则在敏感波长450nm 和非敏感波长630nm 各测定1次。敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和。非敏感波长下测定即改变波长至一定值，使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零，此时测得的为脏物的吸光度值。最后酶标仪给出的数值为敏感波长与非敏感波长下的吸光度值的差。如在使用双波长比色时，仍设空白孔，就可能会造成前面提到的测定孔吸光度为负数的现象。由于ELISA 测定中单个空白孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性，故而在ELISA 测定比色时最好使用双波长比色。
8 ELISA 测定结果判定
临床ELISA 测定结果分为定量和定性两大类。1）定量测定则是对标本中待测抗原的多少进行量值测定，以具体数值表示。它是用于非病原体抗原物质的测定，如激素、细胞因子、肿瘤标志物、小分子药物等。定量测定的“量值”依据是试剂盒中所带标准品同时测定得出的剂量反应曲线（又称标准曲线）。2）定性测定只是对标本中是否含有待测抗原或抗体作出“有”或“无”的结论，分别用“阳性”和“阴性”来表示。通常是用于传染性病原体的抗原或抗体的测定，以判断特定病原体 感染的存在与否。定性测定的“阳性”和“阳性”的判定依据必须是试剂盒所确定的阳性判定值（Cut-off ）。以前很多基层实验室均使用卫生部临床检验中心供应的弱阳性定值质控血清（以前也称“临界值”血清）的测定吸光度来判定结果，高于其判为阳性，反之为阴性，而不管试剂盒Cut-off 值如何。至今仍有一些实验室在坚持这种错误的做法应予纠正。
9 ELISA 结果报告及解释
临床ELISA 测定结果的报告较为简单。定性测定报阴性或阳性即可；定量测定则报出具体的数值，结果解释比较起来要复杂得多。例如，对操作“两对半”结果的解释，不但要求检验者要知道不同的结果模式的临床意义，而且必须对乙肝病毒的分子生物学、分子的变异及其对表型的影响有更深层次的了解［5］。现在，检验不再是单纯的实验室测定，而已成为一门临床医学学科-检验医学，要求检验医师对所做的测定项目十分熟悉。
为帮助大家分析查找临床ELISA 测定中出现问题的可能原因（非试剂盒本身的原因），特对常见问题及原因归纳总结如下：
1) 弱阳性质控样本检测不出温育的时间或温度不够；显色反应时间太短；所用配制缓冲液的蒸馏水有问题。2）测定的重复性差 （相同样本两次测定结果不一致） 这是典型的由测定操作引起的问题，包括①加样本及试剂量不准；孔间不一致；②加样过快，孔间发生污染；③加错样本；④加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区；⑤不同批号试剂盒中组分混用；⑥温育时间、洗板、显色时间不一致；⑦孔内污染杂物；⑧酶标仪滤光片不正确；⑨血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性等。3）白板（阳性对照不显色） ①漏加酶结合物；②洗板液配制中出现问题，如量筒不干净，含酶抑制物（如叠氮钠）等。③漏加显色剂A 或B ；④终止剂当显色剂使用。4）全部板孔均有显色 ①洗板不干净；②显色液变质；③加底物的吸光受酶污染；④洗板液受酶等污染。
【参考文献】
［1］张艳, 王晓红, 孙柳燕.ELISA 法实验操作技术的探讨［J ］. 长春中医学院学报,1997,13(1):36
［2］李洪波, 刘美红.ELISA 检测血液各项指标的影响因素分析［J ］. 职业与健康,2004,20(12):66
［3］陈平, 何秉洪, 邹昌新, 等. 回顾分析手工操作ELISA 实践存在的问题及其对策［J ］. 中国输血杂志,2001,14(增刊)139
［4］何平.ELISA 操作中应引起重视的两个问题［J ］. 现代检验医学杂志,2004,3:16
［5］陈景芬. 乙肝五项(ELISA法) 手工操作不当结果分析［J ］. 中国保健(医学研究版),2007,15(17):131
范文三：总糖测定注意事项
总糖测定注意事项
1.本法所用的氧化剂碱性酒石酸铜的氧化能力较强，醛糖和酮糖都可被氧化，所以测得的是总还原糖量。
2.本法是根据一定量的碱性酒石酸铜溶液（Cu2+量一定）消耗的样液量来计算样液中还原糖含量，反应体系中Cu2+的含量是定量的基础，所以样品处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免样液中引入Cu2+，得到错误的结果。
3.次甲基蓝也是一种氧化剂，但在测定条件下氧化能力比Cu2+弱，故还原糖先与Cu2+反应，Cu2+反应完全后，稍过量的还原糖才与次甲基蓝指示剂反应，使之由蓝色变为无色，指示到达终点。
4.为消除氧化亚铜对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2+o生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀。
5.碱性酒石酸铜甲液和乙液分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
6.滴定必须在沸腾条件下进行，其原因一是可以加快还原糖与Cu2+的反应速度，二是次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化成氧化型。此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗氧量。
7.滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。
8.样品溶液预测的目的：一是本法对样品中还原糖浓度有一定要求（0.1%左右），测定时样品溶液的消耗体积与标定葡萄糖溶液时消耗体积相近。通过预测可了解样品溶液浓度是否合适，浓度过大或过小应加以调整，使预测使消耗样液量在10ml左右，二是通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正式测定时，预先加入比实际用量少1ml左右的样液，只留下1ml左右样液在续滴定时加入，以保证在1分钟之内完成续滴定工作，提高测定的准确度。
9.影响测定结果的主要操作因素是反应碱度、热源强度、煮沸时间和滴定速度。反应液的碱度直接影响二价铜与还原糖反应的速度，反应进行的程度及测定结果。在一定范围内，溶液碱度越高，二价铜的还原越快。因此，必须严格控制反应液的体积，标定和测定时消耗的体积应接近，使反应体系碱度一致。热源一般采用800w电炉，电炉温度恒定后才能加热，热源强度应控制在使反应液在两分钟内沸腾，且应保持一致。否则加热至沸腾所需时间就会不同，引起蒸发量不同，使反应液碱度发生变化，从而引入误差。沸腾时间和滴定速度对结果影响比较大，一般沸腾时间短，消耗糖液多，反之，消耗糖液少，滴定速度过快，消耗糖量多，反之，消耗糖量少。因此，测定时应严格控制上述实验条件，应力求一致。平行试验样液消耗量相差不应超过0.1ml。 10测定时先将反应所需样液的绝大部分加入到碱性酒石酸铜溶液中，与其共沸，仅留1ml左右由滴定方式加入，而不是全部由滴定方式加入，其目的是使绝大多数样液与碱性酒石酸铜在完全相同条件下反应，减少因滴定操作带来的误差，提高测定精度。
1、采用索氏提取法测定食品中的脂肪，因含有少量脂溶性成分，如脂肪酸、高级醇、固醇、蜡质、色素等与脂肪混在一起，故称为粗脂肪。
2、用于食品中脂肪测定的有机溶剂通常是无水乙醚或石油醚。乙醚的沸点低，溶解脂肪的能力比石油醚强，但乙醚中含有约2%的水分，会使水溶性的糖类等非脂成分同时被提取，因此应采用无水乙醚作提取剂，待测样品也需预先干燥。石油醚与乙醚相比，具有较高的沸点，吸收水分少，使用时允许样品含有微量水分，这两种溶剂可以直接用作脂肪提取剂，也可以混合使用。
3、所用的无水乙醚不应含有过氧化物，过氧化物会导致脂肪氧化，在烧烤时可能有爆炸的危险。乙醚中过氧化物主要是在贮存过程中缓慢氧化形成的。在使用前，可按下列方法检查是否有过氧化物存在：取一定量乙醚，加碘化钾溶液，用力摇，放置1min，若出现黄色，则表明有过氧化物存在，需经处理后才能使用。处理方法为：在乙醚中加入亚硫酸钠，用盐酸酸化，振摇，静置分层后，弃去水层，再用水洗至中性，经无水硫酸钠脱水后，进行蒸馏。蒸馏时可放入少量无锈铁丝或铝片，蒸馏后，再用无水硫酸钠脱水，取上层清液使用。
4、检查样品中脂肪是否提取完全的方法：观察提取筒中溶剂的颜色，一般测定脂肪的食品样品会含有少量色素，当提取溶剂无色时可认为脂肪已经提净；也可以用滴管取提取筒内乙醚一滴滴在薄纸片上，对光观察，若无油迹则可认为提取完全；一般样品提取需要6-12h。
抽提法测定粗脂肪含量时的注意事项
抽提法是经典的测定物质中粗脂肪含量的方法，它的精髓就是我们平常所说的重量法。抽提法具体方
法为：用脂肪溶剂将样品溶解，使样品中的脂肪分离，然后用反复抽提的方法将脂肪彻底抽提出来，
再进行重量测定。测出的重量就是脂肪的重量。而根据这一原理，现今已经有很多厂家研发生产了相
关的仪器，如粗脂肪测定仪，它就是利用抽提法的原理，将索氏提取器合成到仪器中，称为专门的脂
肪测定仪。本脂肪测定仪能够对食品、粮食、乳制品等物质中的脂肪含量进行测定，这里测出的脂肪
包括游离脂肪酸、磷脂酯、固醇以及芳香油等物质，因此也就做粗脂肪。
(1)样品应干燥后研细，装样品的滤纸筒一定要紧密，不能往外漏样品，否则重做。
（2）放入滤纸筒的高度不能超过回流弯管，否则*不易穿透样品，脂肪不能全部提出，造成误差。
（3）碰到含多量糖及糊精的样品，要先以冷水处理，等其干燥后联通滤纸一起放入提取器内。
（4）提取时水浴温度不能过高，一般使*刚开始沸腾即可（约45℃左右）。回流速度以每8-12次／
时为宜。
(5)所用乙醚必须是无水乙醚，如含有水分则可能将样品中的糖以及无机物抽出，造成误差。
(6)用于样品测定脂肪，可按下式计算原来样品脂肪的含量．
脂肪（﹪）=( W1-W0)/W*(100-A)
脂肪(％)=物的耐盐性得到不同程度提高。其中Ｚｈａｎｇ和Ｂｌｕｍｗａｌｄ(2001)、Ｚｈａｎｇ
等(2001)报告的转ＡｔＮＨＸ1基因番茄可耐200ｍｍｏｌ/Ｌ的氯化钠,并把吸收的钠盐积累在叶片
中,而果实的品质不受影响。这些研究预示着在提高植物耐盐性方面,离子的选择吸收和跨膜运输的基
因工程是植物耐盐性种质改良的有效途径。
A-100克样品水分的含量(克)．
(7)冷凝管上端最好连接一个氯化钙干燥管，这样不仅可以防止空气中水分进入，而且还可以避免乙
醚挥发在空气中，这样可防止实验室微小环境空气的污染。如无此装置，塞一团干脱脂棉球亦可。
(8)如果没有无水乙醚可以自己制备，制备方法如下：在1000毫升乙醚中，加入无水石膏50克，振
摇数次，静置10小时以上蒸馏，收集35℃以下的馏液，即可应用。
(9)将提取瓶放在烘箱内干燥时，瓶口向一侧倾斜45℃放置使挥发物*易与空气形成对流，这样干燥
迅速。
(10)样品及醚提出物在烘箱内烘干时间不要过长，因为一些很不饱和的脂肪酸，容易在加热过程中被
氧化成不溶于*的物质；中等不饱和脂肪酸，受热容易被氧化而增加重量．在没有真空干燥箱的条件
下，可以在100-105℃干燥1.5-3小时。
(11)如果没有乙醚或无水乙醚时，可以用石油醚提取，石油醚沸点30-60℃为好。
(12)使用挥发乙醚或石油醚时，切忌用直接火加热。应用电热套电水浴，电灯泡等．
一、抽提试剂的选择
无水乙醚：将乙醚放入分液漏斗，先以1/5乙醚量的KOH溶液洗涤2-3次，以除去乙醇，然后用盐酸酸化，，加入1/5乙醚量的FESO4或NA2SO3溶液，振摇、静置，分层后弃去水溶液，以除去过氧化物，最后用水洗至中性，用无水CACL2或无水NA2SO4脱水，并进行重蒸馏。 二样品粉碎度
样品粗细度要适宜，试样粉末过粗，脂肪不易抽提干净；试样粉末过细，则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失，影响测定结果。
三试样
①样品的滤纸筒一定要严密，不能往外漏样品，但也不要包得太紧影响溶剂渗透。放人滤纸筒时高度不要超过回流弯管，否则超过弯管的样品中的脂肪不能提尽，造成误差。 ②对含多量糖及糊精的样品，要先以冷水使糖及糊精溶解，经过滤除去，将残渣连同滤纸一起烘干，再一起放入抽提管中。
③乙醚若放置时间过长，会产生无过氧化物，过氧化物会导致脂肪氧化，在烘干时也有引起爆炸的危险。故使用前应严格检查，并除去过氧化物。
检查方法：取6 mL乙醚，加2 mL 10％碘化钾溶液，用力振摇l min后，静置分层。若水层出现黄色，则证明有过氧化物存在。应处理后再用。
去除过氧化物的方法：将乙醚倒人蒸馏瓶中，加一段无锈铁丝，收集重蒸馏乙醚。
④提取时水浴温度不可过高，以每分钟从冷凝管滴下80滴左右，每小时回流6～12次为宜，提取过程应注意防火。
⑤抽提是否完全，可凭经验，也可用滤纸或毛玻璃检查，由抽提管下口滴下的乙醚滴在滤纸或毛玻璃上，挥发后不留下油迹表明已抽提完全，若留下油迹说明已抽提不完全。
⑥反复加热可能会因脂类氧化而增重，质量增加时，以增重前的质量作为恒重。
⑦食品中的游离脂肪一般都能直接被乙醚、石油醚等有机溶剂抽提而结合态脂肪不能直接被乙醚、石油醚提取，需在一定条件下进行水解等处理，使之转变为游离脂肪后方能被提取，故索氏提取法测得的只是游离态脂肪，而结合态脂肪测不出来。
范文四：熔点测定注意事项
1.熔点管必须洁净。(熔点管不洁净，等于样品中有杂质，致使测得熔点偏低，熔程加大。如含有灰尘等，能产生4—10OC的误差。)
2.熔点管底未封好会产生漏管(熔点管底部未完全封闭有一针孔，空气会进人，加热时，可看到有气泡从溶液中跑出接着溶液进人，结晶很快熔化，也测不准，偏低。) 3.样品粉碎要细，填装要实，否则产生空隙，不易传热，造成熔程变大。(样品研得不细和装得不紧密，里面含有空隙，充满空气，而空气导热系数小传热慢，会使所测熔点数据偏高熔程大。)
4.样品不干燥或含有杂质，会使熔点偏低，熔程变大。(样品未完全干燥，内有水分和其它溶剂，加热，溶剂气化，使样品松动熔化，也使所测熔点数据偏低，熔程加大(样品含有杂质的话情况同上。)
5.样品量太少不便观察，而且熔点偏低;太多会造成熔程变大，熔点偏高。 6.升温速度应慢，让热传导有充分的时间。(升温速度过快，熔点偏高。加热太快，升温大快，会使所测熔点数据偏高，熔程大，所以加热不能太快。这一方面是为了保证有充分的时间让热量由管外传至管内，以使固体熔化。另一方面因观察者不能同时观察温度计所示度数和样品的变化情况，只有缓慢加热才能使此项误差变小。)
7.熔点管壁太厚，热传导时间长，会产生熔点偏高。 (1)测定熔点时，应注意毛细管的规格大小。由于毛细管内装入供试品的量对熔点测定结果有影响，若内径过大，全熔温度会偏高，故毛细管的内径必须符合药典规定。 (2)温度计必须经过校正，最好绘制校正曲线，否则会影响测定结果的准确性。 (3)应用不同传温液测定药物熔点时，对某些供试品所得的结果可能不一致。因此必须按药典规定选择传温液。(4)熔点读数时，应注意正确判断“初熔”、“全熔”及熔融同时分解时的温度。
范文五：总氮测定注意事项
测定总氮时应注意的几个问题 ?
? 简介：水中总氮项目的测定常采用碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法。采用这种方法的优点是步骤相对简单，所需试剂较少，要求使用的仪器设备一般实验室都能具备。但是该方法对空白值的要求非常严格，其所需试剂中的过硫酸钾、氢氧化钠本身都含有一定量的氮，因此空白实验不易做好。要做好总氮的空白实验，不仅与试剂有关，而且还与实验用水、器皿、家用压力锅或医用手提蒸气灭菌器的压力、实验室环境及方法步骤的掌握等因素关系密切。 1、试剂的配制、存放 碱性过硫酸钾的配制过程十分重要，掌握不好，会影响消解效果，对测定结果产生一定的影响。GB11894—89中关于碱性过硫酸钾的配制，只是简单的说将过硫酸钾和氢氧化钠溶于水中，并未作其它要求。实际上，过硫酸钾的溶解速度非常慢，若要加快溶解，绝对不能盲目加热，即使加热，也最好采用水浴加热法，且水浴温度一定要低于60℃，否则过硫酸钾会分解失效。配制该溶液时，可分别称取过硫酸钾和氢氧化钠，两者分开配制，再混合定容，或者先配制氢氧化钠溶液，待其温度降到室温后再加入过硫酸钾溶解。若二者在一只烧杯中溶于水，应缓慢加水，同时搅拌，防止氢氧化钠放热使溶液温度过高引起局部过硫酸钾失效。
过硫酸钾的存放也要注意，应避免与还原性物质、硫、磷等混合存放，另外，过硫酸钾易吸潮，放出氧气，因此，为防止失效，要将其放在干燥的试剂橱中。
2、无氨水的制备
实验过程对水的要求非常严格，普通的蒸馏水往往还达不到实验要求。这时需再做二次加工以得到无氨水。在用蒸馏法制备无氨水时，GB11894—89中指出：“弃去前50ml馏出液，然后将馏出液收集在带有玻璃塞的玻璃瓶中”。根据笔者的工作经验，仅仅弃去前50ml馏出液是不够的。举个例子说，如果蒸出1000ml的无氨水，先前蒸出的200ml馏出液都要弃去，最后蒸出的200ml馏出液也要弃去，只保留中间蒸出的无氨水待用，否则，重蒸无氨水的空白值往往还不如制备之前的普通蒸馏水空白值好。
3、实验室环境
总氮的分析应在无氨的实验室环境中进行，室内不应含有扬尘、石油类及其它的氮化合物，绝对不能在分析氨氮等氮类项目的实验室中做总氮项目的分析，所使用的试剂、玻璃器皿等也要单独存放，避免交*污染，影响空白值。
4、玻璃器皿的洗涤
所使用的玻璃器皿应先用（1+9）盐酸浸泡后，再用无氨水冲洗数次才能使用，否则，也会造成空白值偏高或平行性较差的情况。
5、消解温度、压力的控制
对于使用医用手提蒸气灭菌器的实验室，因测定压力为1.1~1.4kg/cm2，温度为120℃~124℃，此时可以安装一个稳压器，将压力控制在该范围，这样就省去了通过人为切断电源控制的麻烦，稳定且省力。消解时，GB11894—89中要求达到规定温度压力后即开始计时，而笔者的经验是，达到规定温度压力后应当先放气使压力表指针回零，再次达到规定温度压力后再计时。或者直接打开放气阀加热一段时间，待蒸气灭菌器内的冷空气被彻底赶尽、放出热蒸气后再关闭放气阀消解，并且将消解温度控制在123℃，这样测定结果最为理想。
6、比色时的注意事项
该项目的测定涉及两个波长（220nm和275nm），有条件的实验室可采用双光路紫外分光光度计，其优点是方便快速、可以避免反复调整波长产生测量误差，皿间误差也能自动修正。如果没有双光路的光度计，建议在测定完一组样品的同一波长后，再调整到另一波长，统一测定，不要测完一个样品的两个吸光度后再换另一个样品，这样反复调整波长会引起一定的测量误差。
7、试剂的选择
碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法测定总氮的过程中，过硫酸钾是至关重要的试剂。首先，试剂的纯度关系到空白值的高低、测定结果的准确度。一般普通分析纯过硫酸钾的总氮含量最高不超过0.005%，但由于试剂质量存在差异，有些厂家、批次的试剂含氮量常常达不到这个要求，致使空白值偏高。另外，分析纯氢氧化钠的氮化合物含量虽然大大低于过硫酸钾的含氮量，但也要仔细选择。笔者在工作中就曾遇到过将过硫酸钾溶液与氢氧化钠溶液混合成碱性过硫酸钾溶液时，竟散发出氨水气味的现象，这说明试剂的纯度不够。因此，有条件的话建议使用优级纯或基准试剂，尽量降低试剂中的含氮量，从而降低实验空白值。 若实验的空白值不够理想，则需要对实验用水及试剂进行检验，以选择出含氮量最低的水和试剂，获得理想的空白值。笔者的经验是，若每换一种水、每换一个厂家、一个批次的过硫酸钾、氢氧化钠试剂就全过程做一遍总氮，将是相当麻烦的，而且最终还往往难以得出结论。
