范文一:还原能力的测定
还原能力测定
抗氧化剂(还原剂)是通过自身的还原作用,给出电子而清除自 由基的,还原能力越强,抗氧化性越强。实验中,样品的抗氧化 剂能使铁氰化钾的三价铁还原成二价铁(亚铁氰化钾) ,二价铁 (亚铁氰化钾) 进一步在和三氯化铁的反应下生成在 700nm 处有 最大吸光度的普鲁士蓝(Fe4[Fe(CN)6]3 ) ,因此测定 700nm 处 的高低可以间接反映抗氧化剂的还原能力大小, 吸光度越大, 还 原能力越强。 配置不同浓度的样品溶液梯度 (如 50、 100、 250、 500、 1000PPm ,过小时吸光度数值小,误差较大) ,依次加入一 定量磷酸缓冲液 (保证溶液反应的 PH 环境, 如 2.5ml pH=6.6) 、 一定量和浓度的铁氰化钾溶液 (与样品中的抗氧化剂反应生成二 价铁,如 2.5ml 1% m/v ) ,混合均匀,将该体系置于一定温度 下(比如:50℃ , 不能过高,不然会使物质失适当加热可以保证 反应程度和时间)恒温水浴放置一定时间(如 30min ,以反应充 分为宜) ,取出加入三氯乙酸溶液(铁氰化钾溶液为黄色,猜测 用三氯乙酸与反应剩余铁氰化钾生成沉淀, 离心除去, 排除对吸 光度数值的影响) ,混匀,置于离心机内 3000转
离心 10min (离心机使用时一定保证对侧样品等重) ,取一定量 上清液于另一试管中, 加入二次水和三氯化铁溶液 (3K4Fe(CN)6 + 4FeCl3 → Fe4[Fe(CN)6]3 + 12KCl ,黄色晶体亚铁氰化钾放 进三氯化铁的溶液中, 产生颜色很鲜艳的蓝色沉淀, 即普鲁士蓝, 测定吸光度时要摇匀,且普鲁士蓝耐热性在 140℃,光照下较稳
定,不用避光) ,混匀后用分光光度计在 700nm 下测定溶液吸光度 .
范文二:分析广金钱草总黄酮含量测定及还原Fe3 + 的能力
分析广金钱草总黄酮含量测定及还原Fe3 + 的能力
黄酮类化合物是自然界中一大类天然产物,广泛存在于植物界,是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值。黄酮类有效成分对治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有显著效果,无副作用,并以此开发出多种药品和保健食品。而黄酮类化合物是自然界中抗氧化作用最强的一类天然化合物,由于它具有很强的抑制活性氧、清除自由基作用,同时毒副作用相对小于化学合成药,因此黄酮类化合物一直是人们致力于寻找新药的重要研究领域。广金钱草Yerba Desmodii Styracilii 为豆科植物广金钱草Desmodium styracifolium ( Osb. ) Merr. 的干燥地上部分。盛产于广西、广东、福建等省,具有清热利湿,通淋排石之功效。性味甘、淡、凉,归肝、肾、膀胱经,用于热淋、砂淋、小便刺痛、黄疸尿赤、尿路结实等。《中华人民共和国共和国药典》和《中药大辞典》中记载,广金钱草含有生物碱、黄酮苷、酚类、鞣质等成分,从广金钱草中分到的黄酮主要为黄酮碳苷化合物夏佛塔苷( Schftoside) 、异牡荆素( Isovitexin) 、异荭草素( Isoorienton) 、6 - C - 木— 26糖- 8 - C - 葡萄糖洋芹素( Vicenin - 1) 、6 - C - 葡萄糖- 8 - C - 木糖泽芹素( Vicenin - 3) 等。目前对广金钱草还原Fe3 + 的能力研究较少,本试验对广金钱草中黄酮类化合物进行了提取,分别通过紫外分光光度法和普鲁士兰法测定了其还原Fe3 + 的能力,为进一步研究广金钱草黄酮类化合物以及其深入开发利用提供理论依据。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器
KQ5200DB 型数控超声波清洗器: 昆山市超声仪器有限公司; 可见分光光度计( 722N) : 上海民桥精密科学仪器有限公司; 电子天平: 上海舜宇恒平科学仪器有限公司; ZKJ - 1002 循环水式真空抽气泵:上海嘉鹏科技有限公司; 旋转蒸发器( RE - 52AA) :上海安亭实验仪器有限公司; HH - SA 数显恒温水浴锅: 上海上登实验设备有限公司等。
1. 2 试剂
无水乙醇AR ; 95% 乙醇AR; 盐酸AR; 磷酸氢二钠AR; 磷酸二氢钠AR; 铁氰化钾AR; 三氯乙酸AR; 三氯化铁AR 等。广金钱草采自广西百色市凌云县。
2 方法与结果
2. 1 总黄酮的提取
称取广金钱草干品约6 g,加80 mL 95% 乙醇,超声波提2. 5 h,抽滤。滤渣以同法提取2. 5 h 抽滤,两次滤液合并,用旋转蒸发仪浓缩至一定体积,将浓缩液转入100 mL 容量瓶中,用60% 乙醇稀释至刻度,得样品液。
2. 2 总黄酮的含量测定
2. 2. 1 波长的确定取0. 5 mL 样品液,在0. 30 mL 5% 亚硝酸钠溶液存在碱性条件下,
加入10%硝酸铝溶液0. 30 mL,以试剂空白作参比液在400 , 700 nm 波长范围确定络合物的吸光度。本实验中络合物于410 nm 波长处有最大吸收,故测定时选用此波长。
2. 2. 2 标准曲线的绘制分别精确量取芦丁对照液( 0. 10mg /mL) 依次为0. 00,0. 50,1. 00,2. 00,3. 00,4. 00,5. 00 mL 于10mL 容量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液0. 30 mL,摇匀,静置6 min; 再加10% 硝酸铝溶液0. 30 mL,摇匀,静置6 min; 再加4% 氢氧化钠溶液4. 00 mL,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置12 min,以试剂空白作参比液,于410 nm 波长处测其吸光度,以对照液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标做标准曲线,建立回归方程。
2. 2. 3 提取物含量的测定精密吸取样品液0. 50 ml,置10 mL 容量瓶,按标准曲线的制备方法测定吸光度A 为1. 716 根据回归方程A = 11. 6x - 0. 002,计算样品中总黄酮的含量C = 0. 148 mg /mL。
2. 3 总黄酮提取液
还原Fe3 + 能力( 普鲁士兰法)采用普鲁士兰法测定样品还原Fe3 + 能力。分别取5 支10mL 具塞比色管,依次加入不同浓度的样品溶液2. 5 mL,磷酸盐缓冲液( 0. 2 mol /L pH
值6. 6) 2. 5 mL 和1% 铁氰化钾2. 5 mL,混匀后置于50?水浴中反应20min,然后加入10%三氯乙酸2. 5mL,混匀,如溶液浑浊离心( 3 000 r /min) 10 min,取上清液2. 5 mL,
700 nm加入2. 5mL 蒸馏水和0. 1%三氯化铁溶液0. 5 mL,混匀,以试剂空白作参比,在处测定吸光度值,吸光度值增加表明还原能力增强。随着广金钱草总黄酮提取液浓度增大,其吸光度值不断增加,对Fe3 + 还原能力增强。
3 结论与展望
本实验结果表明,本实验方法简单,采用超声波提取法对广金钱草总黄酮进行提取,用60% 乙醇配置成样品溶液,以芦丁为标准品测定其总黄酮的含量( C = 0. 148mg /mL) 。且对Fe3 + 还原能力较强。
黄酮类化合物是一大类天然产物,广泛存在植物界,是许多中草药的有效成分。天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,能通过血脑屏障,能进入脂肪组织,进而体现如下功能: 消除疲劳、__保护血管、防动脉硬化、扩展毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。具有抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。广金钱草黄酮对Fe3 +还原能力较强,对天然抗氧剂药物的开发有潜在的利用价值。本文的研究结果为进一步研究广金钱草黄酮类化合物及其深入开发利用提供理论依据。
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范文三:广金钱草总黄酮含量测定及还原Fe_3_的能力
中 国 野 生 植 物 资 源 33 5 第 卷第 期 ol〃 33 No〃 5 V2014 10 Oct年 月 〃 2014 Chinese Wild Plant esources ,
doi: 10〃 3969 / j〃 issn〃 1006 , 9690〃 2014〃 05〃 007
3 + Fe广金钱草总黄酮含量测定及还原 的能力
1 1 2* 2,,,余丽丽 汪娇梅黄锁义谭 冰
( 1〃 ,533000; 2〃 ,533000)色 右江民族医学院 临床学院广西 百右江民族医学院 药学院广西 百色
3 + : Fe,。摘 要 目的提取广金钱中总黄酮并探究总黄酮还原 的能力为充分利用广金钱草资源提供理论依据方 : 95% ,; 、法以 乙醇为提取溶剂超声辅助法提取广金钱草中的总黄酮分别采用紫外分光光度法利用普鲁士兰法测 3 + 3 + Fe。: C = 0〃 148 mg / mL。: Fe定其黄酮还原 的能力结果广金钱草总黄酮的含量 结论广金钱草对 具有较强的还
。原能力 3 + ; ; Fe关键词 广金钱草总黄酮还原 的能力
: ,284〃 2 : A : 1006 , 9690( 2014) 05 , 0026 , 03中图分类号文献标识码文章编号
Determination of Total Flavone and the Ability of ,estoring
3 + Fefrom Desmodium styracifolium
1 1 2* 2Yu Lili,Wang Jiaomei,Huang Suoyi,Tan Bing
( 1〃 Clinical College,Youjiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,China; 2〃 College of Pharmacy,Youjiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,China)
Abstract Objective: Extracting the total flavonoid from Desmodium styracifolium and determining the a- 3 + bility of flavonoids to restore Fe,in order to provide the theory basis for making full use of Desmodium styracifolium resources〃 Methods: With 95% ethanol as the extraction agent and using ultrasonic wave
od for extraction flavonoids substances from Desmodium styracifolium; respectively using the UV meth
spectrophotometry and the Prussian method for the determination of its flavonoids’restoring the ability of 3 + Fe〃 ,esults: Content of total flavonoids Desmodium styracifolium C = 0〃 148 mg / mL〃 Conclusion: 3 + Desmodium styracifolium flavonoids has a strong reduction ability for Fe〃
3 +Key words Desmodium styracifolium; flavonoids; the ability to restore Fe
Yerba Desmodii Styracilii ,黄酮类化合物是自然界中一大类天然产物广 广金钱草 为豆科植物
Desmodium styracifolium ( Osb〃 ) Merr〃 的 干广金钱草,,泛存在于植物界是许多中草药的有效成分具有很 ,2,。、、, 盛产于广西广东福建等省具燥地上部分。、高的药用价值黄酮类有效成分对治疗冠心病老
,。、、,、有清热利湿通淋排石之功效性 味甘淡凉归 肝、、、年性痴呆脑血栓神经系统疾病和消除自由基抑
、,、、、、肾膀胱经用于热淋砂淋小便刺痛黄疸尿 赤尿、,,菌抗癌等方面有显著效果无副作用并以此开发 ,3,,1,。《》 《路结实等中华人民共和国共和国药典和中。出多种药品和保健食品而黄酮类化合物是自 》,、、药大辞典中记载广金钱草含有生物碱黄 酮苷酚,然界中抗氧化作用最强的一类天然化合物由于它
、,类鞣质等成分从广金钱草中分到的黄酮 主要为黄、,具有很强的抑制活性氧清除自由基作用同时毒副
( Schftoside) 、酮碳苷化合物夏佛塔苷异牡 荆素,作用相对小于化学合成药因此黄酮类化合物一直
( Isovitexin) 、( Isoorienton) 、6 , C , 异荭草素木 。是人们致力于寻找新药的重要研究领域
: 2014 ,04 ,12 收稿日期
: “”( ,2012,32 ) ; ( 基金项目国家中医药管理局十二五中医药重点学科建设项目国中医药人教发号广西重点学科建设项目桂
,2013,16 ) ; 2013 ( ,2013,14 ) 。教科研号年度广西自治区级大学生创新训练计划立项资助项目桂教高教号 : ( 1991 , ) ,,,: 、。作者简介余丽丽女在读本科生研究方向天然产物化学食品卫生 * : ( 1964 , ) ,,、,。: 、通讯作者黄锁义男副主任教授硕士研究生导师研究方向天然产物有效成分提取及活性研究天然产物化
、、。E-mail: huangsuoyi@ 163〃 com学药物化学食品卫生
3 + 5 ,: Fe第 期 余丽丽等广金钱草总黄酮含量测定及还原 的能力
,410 nm ,, 8 , C , ( Vicenin , 1 ) 、6 , C , 糖 葡萄糖洋芹素葡 空白作参比液于 波长处测其吸光度以对
,4 ,5 ,,,。照液浓度为横坐标吸光度为纵坐标做标准曲线建 , 8 , C , ( Vicenin , 3) 萄糖 木糖泽芹素等目
3 + ,1。立回归方程结果见图 Fe,前对广金钱草还原 的能力研究较少本试验对 ,广金钱草中黄酮类化合物进行了提取分别通过紫
3 + Fe外分光光度法和普鲁士兰法测定了其还原 的
,能力为进一步研究广金钱草黄酮类化合物以及其
。深入开发利用提供理论依据
1 仪器与试剂
1〃 1 仪器 KQ5200DB : 型数控超声波清洗器昆山市超声 1 图 芦丁对照液的标准曲线 ; ( 722N) : 仪器有限公司可见分光光度计上海民桥 2〃 2〃 3 提取物含量的测定 ; : 精密科学仪器有限公司电子天平上海舜宇恒平科 ,0〃 50 ml,10 mL 精密吸取样品液 容量瓶按 置; ZKJ , 1002 : 学仪器有限公司循环水式真空抽气泵A 1〃 716 为 根据 标准曲线的制备方法测定吸光度; ( ,E , 52AA) : 上海嘉鹏科技有限公司旋转蒸发器A = 11〃 6x , 0〃 002, 计算样品中总黄酮的 回归方程; HH , SA 上海安亭实验仪器有限公司数显恒温水 C = 0〃 148 mg / mL。 含量: 。浴锅上海上登实验设备有限公司等 3 +( )2〃 3 Fe总黄酮提取液还原 能力普鲁士兰法 1〃 2 试剂 3 + Fe。采用普鲁士兰法测定样品还原 能力分 A, ; 95% A,; A,; 无水乙醇 乙醇 盐酸 磷酸氢
5 10mL , 别取 支 具塞比色管依次加入不同浓度的; A,; A,; A,三氯乙酸二钠 磷酸二氢钠 铁氰化钾 2〃 5 mL,( 0〃 2 mol / L pH 样品溶液值磷酸盐缓冲液A,; A, 。三氯化铁 等广金钱草采自广西百色市凌 6〃 6) 2〃 5 mL 1% 2〃 5 mL,和 铁氰化钾 混匀后置于。云县 50? 20min,10% 2〃 5 水浴中反应 三氯乙酸 然后加入
2 方法与结果L,,( 3 000 r / min) 10 min,混匀如溶液浑浊离心取 上m
2〃 5 mL,2〃 5mL 0〃 1% 蒸馏水和 三氯化 铁溶加入清液2〃 1 总黄酮的提取 0〃 5 mL,,,700 nm 混匀以试剂空白作参比在处测定液, 6 g,80 mL 95% 称取广金钱草干品约 乙醇加
,。 吸光度值吸光度值增加表明还原能力增强结果如2〃 5 h,。2〃 5 h 抽 抽滤滤渣以同法提取超声波提。1 所示 表 ,,,滤两次滤液合并用旋转蒸发仪浓缩至一定体积3 + 1 Fe 表 广金钱草总黄酮提取液还原 能力吸光度值 100 mL ,60% 将浓缩液转入 容量瓶中用 乙醇稀释 ( mg / mL) 0 〃 018 0 〃 027 0 〃 036 0 〃 045 0 〃 054 C浓度 ,。至刻度得样品液A 0〃 578 0〃 894 1〃 078 1〃 468 1〃 670吸光度 ,6, 2〃 2 总黄酮的含量测定 1 ,由表 可以看出随着广金钱草总黄酮提取液 2〃 2〃 1 波长的确定 3 + ,0〃 5 mL 0〃 30 mL 5% 还原能力 取 样品液在 亚硝酸钠溶 ,,Fe浓度增大其吸光度值不断增加对
10% 0〃 30 mL, 硝酸铝溶液 。增强,液存在碱性条件下加入
400 , 700 nm 波长范围确定 以试剂空白作参比液在3 结论与展望410 nm 波长 。络合物的吸光度本实验中络合物于
,,本实验结果表明本实验方法简单采用超声波 ,。处有最大吸收故测定时选用此波长
60% 乙醇配 2〃 2〃 2 标准曲线的绘制 ,提取法对广金钱草总黄酮进行提取用
( 0〃 10mg / mL) 分别精确量取芦丁对照液依次 ,置成样品溶液以芦丁为标准品测定其总黄酮的含 3 + 0〃 00,0〃 50,1〃 00,2〃 00,3〃 00,4〃 00,5〃 00 mL 10 。 于 ( C = 0〃 148mg / mL) 。Fe 还原能力较强 且对为量,L 5% 0〃 30 mL, 容量瓶中分别加入 亚硝酸钠溶液 ,黄酮类化合物是一大类天然产物广泛存在植 m
,6 min; 10% 0〃 30 mL, 再加 硝酸铝溶液 静置摇匀,。物界是许多中草药的有效成分天然来源的生物
6 min; 4% 4〃 00 mL, 再加 氢氧化钠溶液 ,摇匀静置,,黄酮分子量小能被人体迅速吸收能通过血脑屏 ,,60% 12 min, 乙醇稀释至刻度摇匀静置 ,,: 、以试剂障能进入脂肪组织进而体现如下功能消除疲劳 用
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33 中 国 野 生 植 物 资 源 第 卷
〃 ,5, ,,广金钱草黄酮类化学成分的研究 苏亚伦王 玉兰杨 俊山、、、、 保护血管防动脉硬化扩展毛细血管疏通微循环
,J,〃 ,1993,24( 7) : 343〃中草药 、、。抗脂肪氧化抗衰老活化大脑及其他脏器细胞的功 能,6, ,,,〃 谭 冰严焕宁廖慧娴等广西茉莉花叶总黄酮的提取及对羟 自、、、、具有抗肿瘤抗心脑血管疾病抗炎镇痛免疫 调节,J,〃 ,2012,87 ( 6 ) : 244由基的 清 除 作 用 研 究食 品 科 技 、、、、 、降血糖治疗骨质疏松抑菌抗病毒抗氧化抗衰老, 246〃 ,7 ,13 ,3 + 。Fe抗辐射等作用广金钱草黄酮对 还原能力,7, ,〃 ,J,〃 ,华 辉郭 勇黄酮类化合物药 理 研 究 进 展广 东 药 学 ,。1999,9( 4) : 9 , 12〃 较强对天然抗氧剂药物的开发有潜在的 利用价值
〃 ,8,,,黄黄酮类化合物药理作用研究进展河胜马 传庚陈 志武 本文的研究结果为进一步研究广金钱草 黄酮类化合,J,〃 ,2000,25( 10) : 499 , 562〃中国中药杂志 。 :物及其深入开发利用提供理论依据参考文献 ,9, ,〃 ,J,〃 ,王 玮王 琳黄酮类化合物的研究进展沈阳医学院学报 ,1, ,,〃 夏杏洲张辉魏传晚榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研 2002,4( 2) : 115 , 119〃 ,J,〃 ,2002,23( 5) : 35〃究食品研究与开发 ,10, ,,,〃 曹纬国刘志勤邵云等黄酮类化合物药理作用研究进展 ,2, 〃 ,J,〃 ,1991, 孙世远金钱草及其混淆品的鉴别吉林中医药,J,〃 ,2003,23( 12) : 2241 , 2247〃西北植物学报 ( 4) : 37〃 ,11, ,,〃 姜国芳谢 宗波乐 长高银杏叶黄酮类化合物的研究进展 ,3, Yasukawa K〃 Studies on the constituents in the water extracts of ,J,〃 ,2004,15( 5) : 306 , 308〃时珍国医国药 Crudedrugs styracifolium Merr〃 ( I) ,M,〃 ( ) ,1986, 药学杂志日,12, ,,,〃 ,J,〃 余美料陈镇黎海泥等莲藕总黄酮的提取及鉴别右 江106( 6) : 517 , 519〃 ,2005,27( 1) : 96 , 97〃民族医学院学报 ,4, 〃 ,J,〃 ,2001,高瑞英广金钱草化学成分的分离与鉴定中药材 ,13, ,,,〃 黄锁义黎海泥余美料等益母草总黄酮的提取方法及鉴 别24( 10) : 724〃 ,J,〃 ,2005,16( 5) : 398 , 399〃时珍国医国药
檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳
2015 《》 年植物遗传资源学报征订启事
《》,植物遗传资源学报是中国农业科学院作物科学研究所和中国农学会主办的学术期刊为中国科技论 文
、( ) 、( ) 、统计源期刊中国科学引文数据库来源期刊核心期刊中国核心期刊遴选数据库收录期刊中国学术 期刊
,《》、。综合评价数据库统计源期刊又被中国生物学文摘和中国生物学文献数据库中文科技期刊数据库 收录
、,、,、报道内容为大田园艺作物观赏药用植物林用植物草类植物及其一切经济植物的有关植物遗传资 源基
、、、。,、 础理论研究应用研究方面的研究成果创新性学术论文和高水平综述或评论诸如种质资源的考察收集保、、、,、; 、、; 、、、、存评价利用创新信息学管理学等起源演化分类等系统学基因发掘鉴定克隆基因文库 建立遗
。传多样性研究
,16 ,196 。20 ,120 。。 双月刊大 开本页定价 元全年 元各地邮局发行邮发代
: 82 , 643。CN11 , 4996 / S,ISSN1672 , 1810。 号国内刊号 国际统一刊号 本刊编
,3 。辑部常年办理订阅手续如需邮挂每期另加 元
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范文四:广金钱草总黄酮含量测定及还原Fe_3_的能力
3 + Fe广金钱草总黄酮含量测定及还原 的能力 1 1 2* ,,,余丽丽汪娇梅黄锁义谭 冰 2
( 1, ,533000; 2, ,右江民族医学院 临床学院广西 百色 右江民族医学院 药学院广西 百色
533000)
3 + ,: Fe。摘 要 目的提取广金钱中总黄酮并探究总黄酮还原 的能力为充分利用广金钱草资源提供理论依据方
,: 95% ; 、法以 乙醇为提取溶剂超声辅助法提取广金钱草中的总黄酮分别采用紫外分光光度法利用普鲁士兰法测
3 + 3 + Fe= 0, 148 mg / mL。: Fe。: C 定其黄酮还原 的能力结果广金钱草总黄酮的含量 结论广金钱草对 具有较强的还
。原能力 3 + 关键词 广金钱草; 总黄酮; 还原 Fe的能力
: ,284, 2: A: 1006) 9690( 2014) 05 ) 0026) 03中图分类号 文献标识码 文章编号
Determination of Total Flavone and the Ability of ,estoring
3 + Fefrom Desmodium styracifolium
1 1 2* 2Yu Lili,Wang Jiaomei,Huang Suoyi,Tan Bing
( 1, Clinical College,Youjiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,China; 2, College of Pharmacy,Youjiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,China)
Abstract Objective: Extracting the total flavonoid from Desmodium styracifolium and dteermining the a- 3 + bility of lfavonoids to restore Fe,in order to rpovide the theory basis for making full use of Desmodium styracifolium resources, Methods: With 95% ethanol as the xetraction agent andu sing ultrasonic wave
method for extacton favonods substances from e smDodum styracfoum; espectvey usng the UriliiiliriliV spectrophotometry and Ptrheuss ian method for the tedremination of its flavonoidsrestoring the ability of ’
3 + Fe,, esults: Content ofto tal flavonoids Desmodium styracifolium C = 0, 148 mg / mL, Conclusion:
3 + Desmodium styracifolium flavonoids has a strongre duction ability for Fe,
3 + the ability to restore FeKey words Desmodium styracifolium; flavonoids;
,Yerba Desmodii Styracilii 黄酮类化合物是自然界中一大类天然产物广 广金钱草 为豆科植物
,,Desmodium styracifolium ( Osb, ) Merr, 泛存在于植物界是许多中草药的有效成分具有很 广金 钱 草 的
,2,。、。、、,高的药用价值黄酮类有效成分对治疗冠心病老 干燥地上部分盛产于广西广东福建等省具
、、、,。、、,年性痴呆脑血栓神经系统疾病和消除自由基抑 有清热利 湿通淋排石之功效性 味 甘淡凉归 、,,菌抗癌等方面有显著效果无副作用并以此开发 肝、肾、膀 胱 经,用 于 热 淋、砂 淋、小 便 刺 痛、黄 疸 尿 ,3,,1,、。《》 赤尿路结实等中华人民共和国共和国药典出多种药 品 和 保 健 食 品。而黄酮类化合物是自 《》,、和中药大辞 典中 记 载广 金钱草含有生物碱黄 ,然界中抗氧化作用最强的一类天然化合物由于它 、、,酮苷酚类鞣质等成分从广金钱草中分到的黄酮 、,具有很强的抑制活性氧清除自由基作用同时毒副 ( Schftoside) 、主要为黄酮碳苷化合物夏佛塔苷异牡 ,作用相对小于化学合成药因此黄酮类化合物一直 ( Isovitexin) 、( Isoorienton) 、6 )C ) 荆素异荭草素木 是人们致力于寻找新药的重要研究领域。
2014) 04 ) 12: 收稿日期
基金项目: 国家中医药管理局“十二五”中医药重点学科建设项目( 国中医药人教发,2012,32 号) ; 广西重点学科建设项目( 桂
教科研,2013,16 号) ; 2013年度广西自治区级大学生创新训练计划立项资助项 目( 桂教高教,2013,14 号) 。
作者简介: 余丽丽( 1991) ) ,女,在读本科生,研究方向: 天然产物化学、食品卫生。 * ,1964) ) ,,、。: 、: ( 通讯作者黄锁义教授硕士研究生导师研究方向天然产物有效成分提取及活性研究天然产物化 男副主任、、。E-mail: huangsuoyi@ 163, com学药物化学食品卫生
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3 + Fe5 ,: 第 期 余丽丽等广金钱草总黄酮含量测定及还原 的能力
) 8 )C ) Vicenin )1 ) 、6 )C ) ( ,410 nm ,糖 葡萄糖洋芹素葡 空白作参比液于 波长处测其吸光度以对
,4 ) 5,) 8 )C ) Vicenin ) 3) 。( ,,萄糖 木糖泽芹素等目 照液浓度为横坐标吸光度为纵坐标做标准曲线建 3 + Fe,前对广金钱草还原 的能力研究较少本试验对 ,1。立回归方程结果见图
,广金钱草中黄酮类化合物进行了提取分别通过紫 3 + Fe外分光光度法 和 普 鲁 士兰法测定了其还原 的
,能力为进一步研究广金钱草黄酮类化合物以及其
。深入开发利用提供理论依据
1 仪器与试剂
1, 1 仪器
KQ5200DB 型数控 超 声 波 清 洗 器: 昆 山 市 超 声 1 图 芦丁对照液的标准曲线 ) : ; ( 722N上 海 民 桥 仪器有限公司可见分光光度计 2, 2, 3 提取物含量的测定 ; : 精密科学仪器有限公司电子天平上海舜宇恒平科 0, 50 ml,10 mL ,精密吸取样品液 置 容量瓶按 ; ZKJ ) 1002 : 学仪器有限公司循环水式真空抽气泵A 1, 716 标准曲线的制备方法测定吸光度 为 根 据 ; ( ,E ) 52AA) : 上海嘉鹏科技有限公司旋转蒸发器A = 11, 6x )0 , 002,回归方程 计算样品中总黄酮的 ; HH )SA 上海安亭实验仪器有限公司数 显 恒 温 水 C = 0, 148 mg / mL。含量 : 。浴锅上海上登实验设备有限公司等 3 + 2, 3 Fe ( )总黄酮提取液还原 能力普鲁士兰法 1, 2 试剂 3 + 。Fe 采用普鲁士兰法测定样 品 还 原 能 力分 无水乙醇 A, ; 95% 乙醇 A,; 盐酸 A,; 磷酸氢
5 10mL ,别取 支 具 塞 比 色 管依次加入不同浓度的 ,; ,; ,; AAA磷酸二氢钠 铁氰化 钾 三 氯 乙 酸 二钠 2, 5 m,( 0, 2 mo / L pH Ll样品溶液 磷酸盐缓冲液 值 A,; A, 。三氯化铁 等广金钱草采自广西百色市凌 6, 6) 2, 5 mL 和 1% 铁 氰 化 钾 2, 5 mL,混 匀 后 置 于 。云县 50? 20min,10% 2, 5 水浴中反应 然后加入 三氯乙酸 2 方法与结果 mL,,( 3 000 r / min) 10 min,混匀如溶液浑浊离心 取 上清液 2, 5 mL,加入 2, 5mL 蒸馏水和 0, 1% 三氯化 总黄酮的提取 2, 1
铁溶液 0, 5 mL,混匀,以试剂空白作参比,在 700 nm 称取广金钱草干品约 6 g,加 80 mL 95% 乙醇,
处测定吸光度值,吸光度值增加表明还原能力增强。 2, 5 h,。2, 5 h 超声波提 抽 滤滤渣以同法提取 抽 结果如表 1 所示。 ,,, 滤两次滤液合并用旋转蒸发仪浓缩至一定体积3 + Fe 1 表 广金钱草总黄酮提取液还原 能力吸光度值 100 mL ,60% 将浓缩液转入 容量瓶 中用 乙 醇 稀 释 0, 018 0, 027 0, 036 0, 045 0, 054 mg / mL)C( 浓度 ,。至刻度得样品液 0, 578 0, 894 1, 078 1, 468 1, 670 A 吸光度 ,6,2, 2 总黄酮的含量测定
1 ,由表 可以看出随着广金钱草总黄酮提取液 波长的确定 , 2, 1 23 + ,,Fe浓度增大其吸光度值不断增加对 还 原 能 力 0, 5 mL ,0, 30 mL 5% 取 样品液在 亚硝酸钠溶
。,10% 0增强, 30 mL, 液存在碱性条件下加入 硝酸铝溶液
400 : 700 nm 以试剂空白作参比液在 波长范围确定 3 结论与展望 。410 nm 络合物的吸光度本实验中络合物于 波长 ,,本实验结果表明本实验方法简单采用超声波 ,。处有最大吸收故测定时选用此波长 ,60% 提取法对广金钱草总黄酮进行提取用 乙醇配 2, 2, 2 标准曲线的绘制 ,置成样品溶液以芦丁为标准品测定其总黄酮的含 3 + ( C = 0, 148mg / mL) 。Fe。( 0, 10mg / mL) 量且对 还原能力较强 分别精确量取芦丁对照液 依 次
,黄酮类化合物是一大类天然产物广泛存在植 0, 00,0, 50,1, 00,2, 00,3, 00,4, 00,5, 00 mL 10 为 于 ,。物界是许多中草药的有效成分天然来源的生物 mL ,5% 0, 30 mL, 容量瓶中分别加入 亚硝酸钠溶液 ,,黄酮分子量 小能被人体迅速吸收能 通 过 血 脑 屏 ,6 min; 10% 0, 30 mL, 摇匀 静置 再加 硝酸铝溶液 ,,: 、障能进入脂肪组织进而体现如下功能消除疲劳 ,6 min; 4% 4, 00 mL, 摇匀静置 再加 氢氧化钠溶液 — 27 — 60% ,,12 min,用 乙醇稀释至刻度摇匀静置 以试剂
33 中 国 野 生 植 物 资 源 第 卷
,5, ,,, 苏亚 伦王 玉 兰杨 俊 山广金钱草黄酮类化学成分的研究 、、、、保护血管防动脉硬化扩展毛细血管疏通微循环
,J,, 中草药,1993,(2 74) : 343, 、、抗脂肪氧化抗衰老活化大脑及其他脏器细胞的功 ,6, ,,,, 谭 冰严焕宁廖慧娴等广西茉莉花叶总黄酮的提取及对羟 。、、、能具有抗肿瘤抗心脑血管疾病抗炎镇痛免疫 自由基的 清 除 作 用 研 究,J,, 食 品 科 技,2012,87( 6 ) : 244 、、、、、 调节降血糖治疗骨质疏松抑菌抗病毒抗氧化) 246, ,7 ) 13,3 + ,, ,J,, ,华 辉郭 勇黄酮类化合物 药 理 研 究 进 展广 东 药 学 。Fe、抗衰老抗辐射等作用广金钱草黄酮对 7, ,1999,9( 4) : 9 ) 12, ,还原能力较强对天然抗氧剂药物的开发有潜在的 ,,, 黄河 胜马 传 庚陈 志 武黄酮类化合物药理作用研究进展 ,8, 。利用价值本文的研究结果为进一步研究广金钱草 ,J,, 中国中药杂志,2000( 1,205) : 499 ) 562,
王 玮,王 琳, 黄酮类化合物的研究进展,J,, 沈阳医学院学报, 。 黄酮类化合物及其深入开发利用提供理论依据参,9, 2002,4( 2) : 115 ) 119, :考文献
, ,,,1, 夏杏洲张辉魏 传 晚榕 树 叶 中 黄酮类化合物的提取条件研 10, ,,,, ,曹纬国刘志勤邵 云等黄酮类化 合物药理作用研究进展 究,J,, 食品研究与开发,2002,23( 5) : 35, ,J,, 西北植物学报,2003( ,1223) : 2241) 2247, , ,J,, ,1991, ,2, 孙 世 远金 钱 草 及 其 混 淆 品 的 鉴 别吉 林 中 医 药,,, ,11, 姜国芳谢 宗 波乐 长 高银杏叶黄酮类化合物的 研 究 进 展 ( 4) : 37, ,J,, 时珍国医国药,2004( ,51) 5: 306 ) 308, YasukawaK , Studies on the ocnstituenst in the water extracofts ,3, ,12, ,,,, ,J,, 余美料陈镇黎 海 泥等莲藕总黄酮的提取及 鉴 别右 Crudedrugssty racifolium Merr, ( I) ,M,, ( ) ,1986,药 学 杂 志 日 ,2005,27( 1) : 96 ) 97,江民族医学院学报 106( 6) : 517 ) 519, ,13, ,,,, , ,J,, ,2001,黄锁义黎海泥余 美 料等益母草 总黄酮的提取方法及鉴 高瑞英广金钱草化学成分的分离与 鉴 定中 药 材 ,4, ,J,, ( 5) : 398 ) 399,,2005,1624( 10) : 724, 别时珍国医国药 檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳
《》2015 年植物遗传资源学报征订启事
《》,植物遗传资源学报是中国农业科学院作物科学研究所和中国农学会主办的学术期刊为中国科技论
、( ) 、( ) 、文统计源期刊中国科学引文数据库来源期刊核心期刊中国核心期刊遴选数据库收录期刊中国学术
,《》、期刊综合评价数据库统计源期刊又被中国生物学文摘和中国生物学文献数据库中文科技期刊数据库 。收录
、,、,、报道内容为大田园艺作物观赏药用植物林用植物草类植物及其一切经济植物的有关植物遗传资 源
、、。,、 基础理论研究应用研究方面的研究成果创新性学术论文和高水平综述或评论诸如种质资源的考察收、、、、、、、、,; 、、; 集保存评价利用创新信息学管理学等起源演化分类等系统学基因发掘鉴定克隆基因文库 建、。立遗传多样性研究
,16 ,196 。20 ,120 。。 双月刊大 开本页定价 元全年 元各地邮局发行邮发代
: 82 ) 643。CN11 ) 4996 / S,ISSN1672 ) 1810。 号国内刊号 国际统一刊号 本刊
,3 。编辑部常年办理订阅手续如需邮挂每期另加 元
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范文五:总糖盒还原总糖含量的测定
实验二 总糖和还原糖的测定(二)
── 3,5-二硝基水杨酸法
目的要求:
掌握还原糖和总糖的测定原理,学习用比色法测定还原糖的方法。
实验原理 :
在 NaOH 和丙三醇存在下, 3,5-二硝基水杨酸(DNS )与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的 NaOH 碱 性溶液中此化合物呈桔红色,在 540nm 波长处有最大吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系, 利用比色法可测定样品中的含糖量。
试剂和器材
一、试剂
3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂:称取 6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中,溶解后移入 1000ml 容量瓶中,加入 2mol/L氢氧 化钠溶液 325ml ,再加入 45g 丙三醇,摇匀,冷却后定容至 1000ml 。
葡萄糖标准溶液:准确称取干燥恒重的葡萄糖 200mg ,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至 100ml ,即含葡萄糖 为 2.0mg/ml。
6mol/L HCl:取 250ml 浓 HCl (35%~38%)用蒸馏水稀释到 500ml 。 碘-碘化钾溶液:称取 5g 碘, 10g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水中。 6N NaOH:称取 120g NaOH溶于 500ml 蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
二、材料
藕粉,玉米淀粉。
三、器材
WFJ UV-2000型分光光度计,水浴锅,电炉, 15mm×180mm试管。
操作方法
一、 葡萄糖标准曲线制作
取 5支 15mm×180mm试管,按下表加入 2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号 葡萄糖标准液 蒸馏水
葡萄糖含量 OD 540 /ml
/ml/mg 0 1
00.210.800.4
2 0.40.60.8
3 0.6
0.4
1.2 4
0.8
0.21.6
5
10
2
在上述试管中分别加入 DNS 试剂 2.0ml ,于沸水浴中加热 2min 进行显色,取出后用流动水迅速冷却,各加入蒸馏水 9.0ml ,摇匀,在 540nm 波长处测定光吸收值。以 1.0ml 蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。以葡萄 糖含量(mg )为横坐标,光吸收值为纵坐标,绘制标准曲线。
二、样品中还原糖的提取
准确称取 0.5g藕粉,放在 100ml 烧杯中,先以少量蒸馏水 (约 2 ml)调成糊状,然后加入 40ml 蒸馏水,混匀,于 50℃
黄色
桔红色 生 物 秀
恒温水浴中保温 20min ,不时搅拌,使还原糖浸出混。过滤,将滤液全部收集在 50ml 的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻 度,即为还原糖提取液。
三、样品总糖的水解及提取
准确称取 0.5g 玉米淀粉,放在锥形瓶中,加入 6mol/L HCl 10ml,蒸馏水 15ml ,在沸水浴中加热 0.5h ,取出 1~2滴置 于白瓷板上,加 1滴 I-KI 溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不呈现蓝色。水解毕,冷却至室温后加入 1滴酚酞指 示剂,以 6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色,并定容到 100ml ,过滤取滤液 10ml 于 100ml 容量瓶中,定容至刻度,混 匀,即为稀释 1000倍的总糖水解液,用于总糖测定。
四、样品中含糖量的测定
取 7支 15mm×180mm试管,分别按下表加入试剂:
项目 空白 还原糖 总糖 0123456
样品溶液 /ml0111111 3,5-二硝基水杨酸试剂 /ml2222222
加完试剂后,于沸水浴中加热 2min 进行显色,取出后用流动水迅速冷却,各加入蒸馏水 9.0ml ,摇匀,在 540nm 波长 处测定光吸收值。测定后,取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖量。
五、结果处理
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量:
式中:C ── 还原糖或总糖提取液的浓度, mg/ml;
V ── 还原糖或总糖提取液的总体积, ml ;
m── 样品重量, g ;
1000── mg 换算成 g 的系数。
注意事项
标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行,一起显色和比色
思考题
1. 比色时为什么要设计空白管?
2. 比较费林试剂比色法与 3,5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的结果,这两种方法各有何优 点?