飞扬跋扈的卤蛋
范文一：【黄芩图片】黄芩种植技术,黄芩种子怎么种,黄芩的养殖方法
黄芩是一种中药植物，为唇形科黄芩属，其主要功效有清热燥湿、消炎抗菌、消肿等。由于黄芩具有很高的经济价值，在国内有很多种植户栽培，主要产地在西北地区，野生黄芩主要分布于内蒙古地区，已成为我国野生药材的主产地。今天我们要讲解的主题是黄芩种植技术，相信也有一些种植户在关注这些技术问题，接下来，在文本紫云会详细给大家讲解黄芩的种植养护问题，如下：
黄芩的生长习性
黄芩野生于山顶、山坡、林缘、路旁等向阳较干燥的地方。喜温暖，耐严寒，成年植株地下部分在-35℃低温下仍能安全越冬，35℃高温不致枯死，但不能经受40℃以上连续高温天气。耐旱怕涝，地内积水或雨水过多，生长不良，重者烂根死亡。排水不良的土地不宜种植。土壤以壤土和沙质壤士，酸碱度以中性和微碱性为好，忌连作。
黄芩的养殖方法
1.直播法：黄芩种子繁殖以直播为主，直播黄芩根系直，根叉少，商品外观品质好，同时省工。直播多于春季进行，一般在地下5厘米地温稳定在12℃-15℃时播种，北方地区多在4月上中旬前后。
2.移栽法：黄芩育苗移栽法可节省种子，延长生长时间，利于确保全苗，但较为费工，同时移栽黄芩主根较短，根叉较多，商品外观品质差，一般在种子昂贵或者旱地缺水直播难以出苗保苗时采用。
黄芩种植技术
1.间苗定苗：采取黄芩种子直播时，当幼苗长到4厘米高时要间去过密和瘦弱的小苗，按株距10厘米定苗。育苗地不必间苗。
2.中耕除草：黄芩幼苗出土后，应及时松土除草，并结合松土向幼苗四周适当培土，保持疏松、无杂草，一年需要除草3-4次。
3.施肥灌溉：当黄芩苗高10-15厘米时，追肥1次，施用量为每亩用人畜粪水1500-2000千克。6月底-7月初，每亩追施过磷酸钙20千克、尿素5千克，行间开沟施下，覆土后浇水。次年收获的待植株枯萎后，于行间开沟每亩追施腐熟厩肥2000千克、过磷酸钙20千克、尿素5千克、草木灰150千克，然后覆土盖平。黄芩耐旱怕涝，雨季需注意排水，田间不可积水，否则易烂根。遇严重干旱时或追肥后，可适当浇水。
4.摘除花蕾：在抽出花序前，将花梗减掉，可减少养分消耗，促使根系生长，提高产量。
5.病虫防治：黄芩病害有叶枯病，可清洁田园，发端正初期喷洒1：1：200波尔多液，或用50%多菌灵1000倍液防治。对于根腐病的控制，要注意排水，实行轮作；及早拨出病株烧毁，病株处土壤用石灰消毒。黄芩虫害有黄芩舞蛾，可用90%敌百虫防治。
范文二：黄芩的种植管理技术
作者：李树军
河南农村报 2001年07期
选地整地
黄芩喜光、怕涝，应选择地势高、排水良好、地下水位低、背风向阳、光照充足、无树木遮光、土层深厚、土质疏松、富含腐殖质的钙土或沙质壤土地块。地块确定后，要施足基肥，一般每亩施优质腐熟的农家肥５０００公斤，加过磷酸钙３０公斤和适量钾肥。深耕土地２５厘米～３０厘米，耙细耙平，然后做成宽１．２米的平畦备播。
种植方法
（１）种子繁殖
①黄芩花期长达２～３个月，种子成熟期很不一致，而且极易脱落，需随熟随收，最后可连果枝剪下，晒干收获种子，去净杂质备用。种子的质量要求是：籽料饱满、大小均匀、色泽鲜明、具原品种优良特征，无病虫害、发芽率高、发芽势强。这样的种子播种后生长整齐，便于管理，并可减少田间杂草和病虫为害。
②种子直播，播种期根据当地条件适当掌握，以能达到苗全苗壮为目的。春播在３月～４月，北方夏播一般在雨季７月～８月，也可以冬播（即１１月），以春播产量最高。无灌溉条件的地方，应在雨季播种。一般采用条播，播后轻轻镇压。每亩播种量０．５～０．７５公斤。因种子细小，为避免播种不匀，播种时可掺５～１０倍细沙混匀后播种。如土壤湿度适中，大约１５天左右即可出苗，干旱地区雨季播种５～７天出苗。黄芩种子很小，播种时覆土又不能太厚，常因土壤干旱或表土不平而出苗不全，造成连片的缺苗断垅。因此，黄芩种植的关键环节是如何保全苗、保壮苗。各地药农总结为：整地要深耕细耙，地平土细；播种时如过于干旱，播后要及时浇水，苗出全前和苗后一段时间内都要经常保持土壤湿润，在没有灌溉条件的地方应选雨季播种。播种时最好进行催芽处理，以缩短出苗时间，但催芽的种子应播在墒情好的土壤。催芽时，一般用４０℃～４５℃的温水将种子浸泡５～６小时捞出放在２０℃～２５℃的条件下保温，每天用清水淋洗２次，待大部分种子胚芽萌动后即可播种。干旱地区，春季播种可用塑料薄膜覆盖留湿保墒。有些特别干旱地山坡地，可采用园地育苗，大田移栽的方法。
③育苗移栽选背风向阳的地块作苗圃，于３月播种，亩用种１．５公斤，注意保温、保湿，出苗后及时间苗，株距保持５厘米左右。加强肥水管理，次年春季土壤解冻后马上移栽大田，行距１８厘米，株距９厘米。育苗面积和大田移栽面积之比一般为１∶５。
（２）扦插繁殖
扦插繁殖成败的关键在于繁殖季节和取条部位。春、夏、秋季都可以进行扦插，以春季五六月份扦插成活率高。黄芩成活后雨季移栽，到冬前形成大苗，便可安全越冬。插条应选茎尖半木质化的幼嫩部位，不用任何处理，扦插成活率可达９０％以上。不能用茎的中、下部。扦插基质可用砂、砂掺蛭石或砂抽壤土均可。扦插时，剪取茎端６～１０厘米长嫩茎作插条，把下面２节的叶去掉，保留３～４片叶片，按行株距１０厘米×５厘米插于准备好的苗床。时间以阴天为好，晴天宜选上午１０点以前或下午４点以后扦插，要随剪随插，保持扦条新鲜，插后浇水，并搭阴棚（阴蔽度５０％～８０％）遮阴。每天早晚浇水，水量不宜过大，否则易引起插条腐烂，影响成活。插后４０～５０天即可移栽大田，株行距以１５厘米×３０厘米为宜。用扦插育苗法栽植的黄芩，不但产量高，品质也好。平均亩产达３８５公斤，最高亩产７００多公斤，有效成分黄芩甙的含量高达１３．４％，超过《中国药典》不低于４％的规定，也高于种子繁殖１２．９％和野生种９．４％，是一项值得推广的繁殖技术。
（３）分株繁殖
可在收获时进行。采收时选取高产优质植株，切取主根留作药用，根头部分供繁殖用。冬季采收的可将根头埋在窖内，第二年春天再分根栽种。若春季采挖，可随挖随栽。为了提高繁殖数量，可根据根头的自然形状，用刀劈成若干个单株，每个单株留３～４个芽眼，然后按株行距２０厘米×３０厘米栽于大田。分根繁殖成活率高，生长快，可缩短生产周期。
田间管理
（１）间苗定苗
出苗后要间去过密的弱苗。当苗高６～７厘米时，按株距１２～１５厘米定苗，并对缺苗的地方进行补苗。补苗时一定要带土移栽，可把过密的苗移来补苗，栽后浇水。补栽时间要避开中午，宜在下午３点后进行。
（２）中耕
春季需中耕２～３次，中耕宜浅，不能损伤药根。
（３）追肥
定苗后，进行第一次追肥，每亩施稀人粪尿５００公斤，６～７月追磷酸二铵３０公斤。第２年和第３年返青后以及６月下旬封垅前各追一次人粪尿５００～１０００公斤。开花期进行叶面喷肥，亩用磷酸二氢钾０．６公斤，分３次于晴天喷雾。
（４）排灌
黄芩一般不需浇水，但如遇持续干旱时要适当浇水。黄芩怕涝，雨季要及时排除田间积水，以免烂根死苗，降低产量和品质。
联系电话：0371-5952932
范文三：黄芩中黄芩苷的提取分离及测定方法的研究
中南大学
硕士学位论文
黄芩中黄芩苷的提取分离及测定方法的研究 姓名:赵爱丽
申请学位级别:硕士
专业:分析化学
指导教师:陈晓青
20070101
硕十研究生毕业论文 摘要 摘要
本文在大量文献调研的基础上,研究了黄芩中黄芩苷的提取、分离纯化及 分析测定方法。具体内容摘要如下:
黄芩苷的提取。系统地研究了煎煮提取、水浴回流提取、超声提取和微波 提取法从黄芩中提取黄芩苷的最佳工艺,通过比较四种提取方法所得黄芩苷的 得率,确定微波提取为最佳方法,正交优化试验得到微波提取工艺的最优提取 条件为:取59黄芩加入100mL体积分数60%的乙醇溶液中浸泡2h,微波提取 80s,黄芩中黄芩苷的得率为5.71%。
黄芩苷的分离纯化。首先选择酸沉法分离得黄芩苷粗品,然后分别用重结 晶和双水相萃取法对黄芩苷进行纯化,得到了最优条件为:聚乙二醇(PEG) 6000质量分数为26%,K2rn'04的质量分数18%,pH值为7,温度为30
黄芩苷的分析测定。采用红外光谱法对黄芩苷样品进行定性分析。采用紫 外分光光度法在最大吸收波长278nm下,对黄芩苷进行定量分析,确定最佳测 定条件。浓度在8.0x10-3mg/mL~6.0x10
通过比较紫外分光光度法和高效液相色谱法测定结果,发现用紫外分光光 度法测定黄芩中所提取黄芩苷的得率,简单方便,准确度和精密度均令人满意。
关键词:黄芩苷,微波提取,双水相萃取,紫外分光光度法,高效液相色谱 法
硕士学位论文 ABSTRACT ABSlRACT
On the basis of the literatures,the extraction,separation,purification and determination methods ofbaicalin from Scutellaria baicalensis were studied.Specific summary as follows:
Extraction of baicalin.11le methods of decoction extraction,reflux extraction, ultrasonic wave extraction and microwave-assisted extraction of baicalin from Scutellaria baicalemis were studied systemicallv.Microwave-assisted extraction Was chosen for its lligh extraction yield of baicalin.And the optimal parameters were taking 59Scutellaria baicalensis to the 100mL solvent(ethanol:water=60:40,v/v) soak for 2hours.nle exWaction time was 80s.Under this condition,the yield of baicalin was 5.71%.
Separation and purification of baicalin.First,crude baicalin WaS obtained by adding hydrochloric acid to exWaction solution.111e
baicalin was purified by crystallization;1he aqueous two-phase extraction Was established to purify.田他 optinlal conditions were following:gather glycol(PEG)6000for
26%(、枞), K2HP04,18%;pH=7,thetemperature,30℃.ThentotalrecoveryWas98.6%.
Determination of baicalilL Method of infrared spectrum WaS established to identify baicalin.
At the absorption wavelength of 278nm,ultraviolet spectra was used for determining baicalin samples.1he determination of baicalin was linear in 8.0x lo.jm咖IlL~6.0x lo.zmg/mL.
HPLC(High Pcrformanc.e Liquid Chromatography)Was used to determine baicalin.111e analysis eonditiom were following:column,VP-ODS Cts (150minx4.6mm);mobile phase,methanol-water-phosphoric acid=47:53:0.2(v/v/v); Detection wavelength,278nm;Flow rate,1.5mL/min;Column temperature,25
Conclusion Was drawn after comparing the two determining methods:n硷 precision and accuracy ofUV Was satisfactied.
KEY WORDS:baicalin,microwave-assisted extraction,aqueous two-pha.∞ extraction,ultraviolet spectrophotomegy,HPLC
Ⅱ
原创性声明
本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。
作者签名:
关于学位论文使用授权说明
本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校 有权保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位 论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论 文;学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。
作者签名:导师签名:——日期:——年一月一日
硕士学位论文 第一章绪论 1.1概述
第一章绪论
天然药物来自植物、动物和矿物,以天然植物为主,其中《本草纲目》就记载了1800多种,《本草纲目拾遗》又补充了1000多种【I】。
黄芩又名空心草、黄金茶,多年生草本植物,主根长大.略呈圆锥状,外皮褐色.在各 种黄芩成份的研究中,经过众多科学工作者十几年的辛苦努力,已分离得到多种黄酮类,甾 醇类,糖类化合物和氨基酸等成分,其中黄酮类化合物被确认为是主要的药用有效成分。 黄芩为唇形科黄芩属植物Scutellm'ia baicalensis Georgi的干燥根,是我国常用的大宗药 材之一(见图1.1,图I-2)。始载于《神农本草经》,列为中品,其性寒味苦,具有清热燥湿, 泻火解毒,止血安胎等作用,为清凉解热药。
图1-1黄芩植物 图1.2黄芩的根(药用黄芩)
我国黄芩(Scutellaria Baicalensis Geogri)属植物大约有100余种,多为野生,南北均产, 根为黄色可入药的大约有10种左右。药典收载的黄芩为黄芩的根,如图1.1所示。另外粘毛 黄芩(SHscidulaBge),丽江黄芩(S.LikiangensisDiels),滇黄芩(S.AmoenacHWright),甘肃 黄芩(S.RehderianaDiels),川黄芩(S.Hytx,ricifolialevl)等品种的根均入药,且疗效不凡。
黄芩广布于我国东北、华北北部和内蒙高原草原东部,具体分类、分布如表1.1【3l。
硕士学位论文 第一章绪论
黄芩&baicalensis
滇黄芩S.amoena 粘毛黄芩S.viscidula
甘肃黄芩S.rehdericma
丽江黄芩S.1ikiangen,凼
川黄芩最hypericifolia 木根黄芩洳ew 韧黄芩S.tenax 薄叶黄芩S.ikormikovii 萦背黄芩S.discolor 阿尔卑斯黄芩S撕 半枝莲S.riwla帕 韩信草￥.indica
空心草、黄金茶、香水水草 西南黄芩 黄花黄芩、下巴子、腺毛黄芩 小黄芩 连翘叶黄芩 北京,甘肃,陕吨,内蒙 ,云南,四川 内蒙,山西,河北,山东 甘肃 云南 四川
辽宁
云南,四川
宁夏、内蒙古东部
尼泊尔中部
意大利
台湾
台湾 1.2.黄芩的生物学性状
1.2.1土壤适应性
黄芩植物喜温暖,耐高温,耐寒,成株地下根部能耐.30℃低温,植株能耐3512左右的 高温【4】。在高燥、向阳、雨量中等、排水良好,中性和微碱性的壤土或砂质壤土地块内生长 良好。黄芩性耐旱,怕水涝。在低洼积水或雨水过多的地方,生长不良,易造成烂根死亡。 适宜种植在中性或偏碱J眭、土层较厚、土质肥沃疏松、Et照充足的沙质土壤中。人工栽培黄 芩时,单一施用和复合施用氮、磷、钾化肥对提高其根部黄芩苷的含量有显著影响。 1.2.2生殖特性
黄芩传统的繁殖方式是用种子繁殖,因种子细小,覆土浅,极易因失水导致出苗率不高, 特别是在干早地区或干旱季节播种,常因土壤干旱,出苗困难,而使产量和质量均有所下降。
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硕士学位论文 第一章绪论
除了深翻细整和适时播种外,还采取了坐水播种、浸种催芽、覆盖保嫡、育苗移栽等措施, 取得了较好的效果。
1-3黄芩中的化学成分
1.3.1黄酮和黄酮醇类
黄酮类化合物是指两个芳环通过三碳链相互联结而成的一系列化合物。黄芩中的化学成 分主要为黄酮类成分,从黄芩中获得黄酮和黄酮醇类化合物四十多种,黄酮类成分是其发挥 药理活性的基础,其中黄芩:ff(Baicalin),黄芩素(Baicakin),汉黄芩苷(Wogonins汝)和汉黄 芩素(wo窖0n-m)是最主要的活性成分伊H。黄芩苷作为黄芩药材的主要有效成分,在黄芩植株 根、花、叶、茎等器官中均有分布,但在各器官中的含量之间具有显著性差异阍,以根中的 含量最高,其次是花、叶、茎。对于—年生植株来讲,根部含量是花的27.23倍,是叶的47.52倍,是茎的127.54倍。因此,黄芩苷主要分布在根中,本试验所用原料为黄芩的根部。
0H
OH O
图1-3黄芩昔的化学结构
1.3.2二氢黄酮和二氢黄酮醇类
黄芩中二氢黄酮和二氢黄酮醇也占有相当一部分,已经发现的有17种,其中主要有二氢 黄芩苷(Dihydrolyaicalin)刚01,7,2’,6’.三羟基.5.甲氧二氢黄耐¨】
(7'2’’6’-T
硕士学位论文 第一章绪论 1.3.3黄烷酮类成分
4’,5,7.三羟基岳甲氧基黄烷酮(4’,5,7-Trihydroxy-6-methoxytlavanone)113.141,7;2’,6’_三羟 基.5.甲氧基黄烷酮(7’2’,6’.Trihydroxy-5-methoxyflavanone)【3.团,2’,6’…357一五羟基黄烷酮 (2’,6’’3,5,7-Pentahydroxydroxyflavanone)【旧,2’,6’,5,7.四羟基黄烷酮
(2’,6’,5,7-Tetrahydroxyflavaaonell61)。
1.3.4查尔酮成分
2,62’,4’.四羟基-6’一甲氧基查尔酮(2触’,4’-tetrahy-droxy-6'-melhoxychalcone)(I)和滇黄芩 苷甲(AmoeninAXIll
1.3.5苯乙醇苷
最早从黄芩根中分离得到苯乙醇苷为2彤.羟基4甲氧基苯基)-基.1.Om.L一鼠李糖
1.3.6挥发油类
杨得坡【1目等利用气相一质谱联用方法对中药黄芩根的挥发性成分进行了分析研究,鉴定 了19+挥发性成分,17种为首次发现,其中烯类成分有旷藿香烯(pp疵的tll∞e)、o.-愈创木 烯(a---guaiene)等,酮类成分有薄荷酮(menthone)、番薄荷酮((+)-pulegone)等,酯类成分有癸 基.己基.邻苯_-rg酸--酯(phthalicacid,decylIl‘狮deg时)、邻苯二甲酸二异己酯(phthalicacid, ditsohexylester)等。张箭【19】等对黄芩c02超临界萃取物的化学成分进行研究,经气质联用仪分 析共测出黄芩挥发油的23个峰,鉴定了其中的18种化学成分,主要为阻芳樟醇(1inalooi)-等醇 类成分和酸类成分如正十7蝴(cctanoicacid),硬脂酸(stearic acid)等。
1.4黄芩苷的理化性质
黄芩苷刚为淡黄色针晶,熔点223
4
硕士学位论文 第一章绪论 1.5黄芩苷的药理作用
1.5.1抗菌作用
黄芩苷的抗菌范围广,抗菌作用强。程国强【211等采用连续倍比稀释法观察黄芩苷对金黄 色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、流感杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌、甲型链球菌、乙 型链球菌、肺炎球菌等常见病原菌的抗菌作用,显示黄芩苷对所有受试菌均有不同程度的抑 菌和杀菌作用。白念球菌是人体的正常菌群,是常见的深部感染的条件致病性真菌,也是阴 道炎、口腔粘膜病等免疫功能低下病人的主要感染性微生物。熊英僻1采用微量稀释法测定黄 芩苷对白念球菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果表明黄芩苷在体外有较好的抗白念球 菌作用。
1.5.2抗炎作用
黄芩苷具有抗炎作用。黄芩的甲醇提取物、黄芩素、黄芩苷和汉黄芩素等均能抑制由醋 酸诱导的大鼠急性足跎肿胀;黄芩苷对--EF苯致水肿模型有抑制作用网。抗炎作用机理与其 抗组胺释放及抗花生四烯酸代谢有关刚,黄芩苷可显著抑制白细胞内白三烯B4(LTB4)和白三 烯C4(LTC4)的生物合成瞄】,其ICS0值分别为0.48tunol/L和3.15Ⅲnol/L。sb∞通过试验证实, 黄芩苷清除活性氧中间体、黄芩素损抗配体诱导的Ca2+内流,两者共同抑带lJMac21依赖的白 细胞粘附作用,从而达到抗炎活性。花生四烯酸的代谢产物在免疫细胞是以前列腺素Ez(PGE z)和血栓素B(TXB)为主。张修罗等闯报道了黄芩苷对刺激钙离子载体A23187诱导大鼠腹腔巨 噬细胞PGEz的合成有抑制作用。这可能提示黄芩苷抗炎作用的部分机理。杜肇宗田垮研究 发现黄芩苷可选择地抑制脂加氧酶而达到抗炎作用。
1.5.3清除氧自由基及抗氧化作用
目前研究表明,黄酮类的自由基清除活性与其所含有的酚羟基数量和结构密切相关,黄 芩苷的酚羟基数量较黄芩中其它的有效成分为多,且A环中含有邻二酚结构,因而具有较强 的自由基清除活性网。用荧光法检测黄芩苷对Fenton反应生成的?OH的清除作用的体外研究 结果证实,黄芩苷对?OH的清除作用强于?OH特异性清除剂甘露醇,两者的半数有效浓度 EC[29]。黄芩苷可明显降低由二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型中肝脏线粒体脂质过氧化 产物丙二醛(MDA)含量的作用表明,黄芩苷的抗氧化活性与氧自由基的清除能力密切相关 [301。因此黄芩昔可作为有效的自由基清除剂,用于治疗与自由基相关的疾病。蔡中丽Ⅲl通 过研究N20饱和黄芩苷水溶液的辐射机理,发现黄芩苷和羟自由基反应生成了四种产物,说 明黄芩中的黄酮类活性成分具有很强的化学反应性,特别是高效俘获自由基的能力。黄芩苷 的抗氧化活性与氧自由基的清除能力密切相关网,无论在体内或体外,黄芩苷都表现出较好
硕士学位论文 第一章绪论 的抗氧化作用。
1.5.4降压、利尿作用
黄芩酊剂、浸剂、煎剂、醇或水提取物、黄芩苷等物质对麻醉犬、猫、兔的静脉、肌肉 注射或灌肠,均可起降压作用[3435】。浸剂口服能降低正常及慢性肾性高血压犬的血压,酊剂 可使神经性高血压犬血压回至正常,浸剂口服的降压作用,以云南产者为佳,河北次之,西 北的较差。黄芩的降压原理,一直认为系直接扩张血管,也可能作用于血管感受器,反射地 引起降压。黄芩同属植物Scutellariagalericulata则无降压作用。
1.5.5利胆、解痉作用
黄芩煎剂和乙醇提取液可增加犬、兔胆汁排泄量[36,371,黄芩苷元较黄芩作用明显,汉黄 芩素无影响,黄芩苷使结扎总输胆管的家兔在l~6ll内胆红素(较对照组)增高,但24-48h 后则使之降低。黄芩酊剂、煎剂对在位肠管有明显的抑制作用,酊剂可拮抗毛果芸香碱引起 的肠管运动增强现象,切断迷走神经后并不影响其作用,用小白鼠小肠段进行解痉的效价测 定,汉黄芩素只有弱的解痉作用,黄芩苷元则无解痉效力。
1.5.6镇静作用
黄芩苷能抑制小白鼠的自发活动13羽,作用强度与剂量有关,黄芩煎剂可抑制小鼠阳性条 件反射,此作用可能是由于它加强了皮层抑过程所致,可用于神经兴奋增高及失眠的高血压 患者。
1.5.7抗肿瘤作用
黄芩苷对人体肝癌细胞和乳腺癌细胞株的生长均有一定的抑制作用,而细胞毒性很小 139-40l。袁榴娣等【4IJ观察黄芩苷对艾氏腹水瘤细胞影响,采用EACdx鼠腹腔给药,用无色孔雀 绿方法测定腹水中的脂加氧酶活性,同时,采用测定血清溶菌酶及T淋巴细胞非特异性酯酶 染色法。结果显示,给药组小鼠的溶菌酶活性及淋巴细胞酸性非特异性酯酶阳性率增加,体 内、外艾氏腹水瘤细胞生长受抑制。证实黄芩苷增强了小鼠的体液和细胞免疫功能,能抑制 荷瘤小鼠腹水脂加氧酶活性,抑制艾氏腹水瘤细胞的生长。
1.5.8抗HIV-I活性
黄芩苷对多种病毒有抑制作用[42-43],其中近年来研究最热门的是黄芩苷的抗人类免疫缺 陷病毒HIV的作用。黄芩苷是一种有效的预防和治疗HIV.1感染的药物,在体外实验中发现
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硕十学位论文 第一章绪论
其有抗mv.1活性,且未发现细胞毒性和抑制细胞生长现象。Li BQ等附J研究证明黄芩苷能显 著抑制植物血凝索0'HA)日I起的外周血单核细胞_,(PBMC)OOHIV-I的复制,其抑制作用具浓度 依赖性。如果预先使用黄芩苷更有效。黄芩苷对无症状的HIV.1携带者PHA引起的PBMC中 HIV.1的复制也有抑制作用。体外培养发现,黄芩苷能抑制由包壳蛋I刍(envelopeprotein)介导 的热带T细胞(tropicT cell)/昧X4与感染mv一1病毒的热带单核细r咆擞tropic monocyte)R5的细 胞融合,并能在ⅢV-l病毒感染的早期阶段阻止DNA的复制。
1.6黄芩苷的提取方法
1.6.I碱性水或碱性稀醇提取
由于黄酮类化合物大多具有酚羟基,因此可用碱性水(如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙 的水溶液)或碱性稀醇(如50%的乙醇或甲醇)浸出,浸出液经酸化后可析出黄酮类化合物。 稀氢氧化钠水溶液浸出能力较大,但浸出杂质较多,如将其浸出液酸化,迅速滤去(如在半 小时内滤去)先析出的沉淀物(多半是杂质),滤液中再析出的沉淀物可能是较纯的黄酮类化 合物。例如从菊花中提取黄酮类化合物时,用氢氧化钠水溶液浸出效果最好。而从槐米中提 取黄酮类化合物时,则用碱性较强的饱和石灰水作溶剂,这样有利于芦丁成盐溶解。
1.6.2水煎煮提取法
煎煮法是将原料加水煎煮取汁的方法。水是一种强的极性溶剂,植物中的亲水成分,如 无机盐、糖类、分子不太大的多糖类、鞣质、氨基酸、蛋白质、有机酸盐、生物碱盐及萤类 等都能被水溶出。此法简单易行,能煎煮出大部分有效成分,但煎出液中杂质含量较多,且 容易发生霉变,一些不耐热挥发性成分易损失。热水仅限于提取黄酮苷类物质,例如自槐花 米中提取芦丁.由于热水浸提时易溶于水的杂质(如蛋白质淀粉多糖类化合物等)较多,后 处理较复杂。提取效率也不高,故不常使用。潘国强等H5】专门研究黄芩水煎煮工艺,得到很 好的提取效果。胡应全等阳对黄芩苷的水煎煮工艺和加减水煎煮法提取黄芩甙工艺进行了比 较研究,并对提取黄苓苷工艺中滤过工艺和pH值进行了考察,认为水煎煮提取效果更好。
1.6.3水浴回流提取法
应用有机溶剂加热提取,需采用回流加热装置,以免溶剂挥发损失。小量操作时,可在 圆底烧瓶上连接回流冷凝器。溶剂浸过药材表面约l~2cm。在水浴中加热回流,一般保持沸 腾约l小时小放冷过滤,再在药渣中加溶剂,第二、三次加热回流分别约半小时,或至基本提 尽有效成分为止。该法的优点是以较少的溶剂一次加入便可将有效成分提取完全,效率提高。 但该提取器容量较小,大批量生产中多采用连续提取法。例如周德庆等M以黄芩苷和总黄酮
硕士学位论文 第一章绪论
为指标,筛选水煎煮并用DloI吸附树脂纯化与乙醇回流提取工艺比较。张玉飞等M考察了水 煎煮法、乙醇回流法、乙醇室温浸提法对黄芩总黄酮得率和纯度的影响。
1.6A超声提取法
用超声波法提取黄酮类物质,是目前比较新的方法。它的原理是超声的空化作用对细胞 膜的破坏有助于黄酮类化合物的释放与溶出,超声波使提取液不断震荡,有助于溶质扩散, 同时超声波的热效应使水温较高,对原料有水溶作用。因此,超声波法大大缩短了提耿时间, 提高了有效成分的提取率,原料的利用率。可见,超声波法具有较高的提取率。早在1994年郭孝武l嘴用超声波法从黄芩根中提取黄芩甙的方法,与常规煎煮法相比,无需加热,
缩短了提取时间,提高了提出率,同时也研究了超声波频率对黄芩苷成分的影响。王佩琪150l 等利用超声技术提取黄芩中黄芩苷的最佳条件,并对超声提取法与传统的水提酸沉法和醇提 酸沉法进行比较,得出超声提取法是一种提取效率高、操作简便、省时的提取中草药有效成 分的新方法。
1.6.5微波提取法
微波技术在人们的生产生活中应用越来越广泛,此法在黄酮类化合物的提取上也取得了 良好效果【51.53】。它在提取过程中具有反应高效性和强选择性等特点,而且操作简单,副产物 少,提取率高及产物易提纯等优点。浸出过程中药材细粉不凝聚不糊化,克服了热水法易凝 聚易糊化的不足。例如,不少人研究了微波技术对黄芩中黄芩苷浸出量的影响,并与传统提 取方法作了比较,结果表明微波辅助提取黄芩中的黄芩苷,具有质量稳定、速度快、萃耿效 率高等特点[54-571。
1.6.6酶解法
酶是具有特殊催化活性的蛋白质。对于一些被细胞壁包围不易提取的黄酮类物质可以采 用酶法提取嗍。例如山楂中,由于黄酮类物质被以纤维素为主的细胞壁所包围,并且这些细 胞壁间尚有果胶粘结,因此采用酶法要比一般方法(酶提取)的提取率要高。王晓等网用果 胶酶和纤维素酶对山楂叶进行酶解,然后用水提,大大提高了总黄酮得率,提取率比乙醇提 取法提高了16.9%。张福维等I哪研究了纤维素酶在黄芩甙提取工艺上的应用,实验结果表明:加酶提取黄芩苷比不加酶提取的产率提高16.3%,产物中黄芩甙的纯度有明显的提高。 黄芩苷提取的方法很多,每种方法都有它各自的优缺点,要根据提取物的性质,提取成 本工艺设备等条件来选择最合适的提取工艺,提高其提取率,增大原料的利用率。
8
硕士学位论文 第一章绪论 1.7黄芩苷分离纯化方法
上述提取法得到的中草药提取物仍然是混合物,需进一步除去杂质,进行分离、纯化、 精制,可根据活性成分的性质来选择合适的分离纯化方法。
1.7.1酸碱分离法
利用提取液中某些成分能在或碱中溶解,当加碱或酸调整溶液的pH值后,所需成分又 变回不溶物而析出,最后可以离心或利用与水不相混溶的有机溶剂把这些化合物萃取分离出, 以达至4分离的目的.黄酮类化合物虽然因为交叉共轭系统和苷上糖链的存在有一定的极性, 但在水中较难溶解,因此可以用碱性水或碱性稀醇浸出,经酸化后得出黄酮类物质。在用酸 碱进行提取纯化黄酮类化合物时,应当注意温度和碱度都不宜过高,以免破坏黄酮类化合物 的母核。酸化时,酸度也不宜过高,否则酸会与黄酮类化合物生成盐而溶解。
1.7.2双水相萃取法
采用传统的溶剂提取工艺分离中草药的有效成分存在着收率低、工艺复杂、成本高且通 常会残留一些有机溶剂等问题。近年来,双水相萃取(ArP)分离技术已引起了人们极大的 重视【6l-o],被广泛用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取。近年也 有应用于中草药提取的报道,如ModiUn等利用双水相技术从菠菜中成功的分离了蜕皮激素 (∞dysIeIoid),提取率达91.2%,己商业化。Mishima等报道了用PEG6(K肌K2HP04-H20的双 水相体系对黄芩营和黄芩素进行萃取实验,由于黄芩苷和黄芩素都有一定的憎水性,被主要 分配在富含PEG的上相。李伟等I删考察了黄芩苷在伴有温度诱导效应的E()p0/18m双水相系 统中的分配行为,并实验分析了添加盐对黄芩苷分配状态的影响,认为与Mishima的实验相 比较,选择EoPo/K}Ⅱ,双水相系统更具优越性。
1.7.3柱色谱法
吸附柱色谱的原理是利用混合物中不同组分对固体吸附剂的吸附能力不同而到达分离的 层析方法。液.固吸附色谱是运用较多的一种方法嘲。特别适用于很多中等分子量的样品(相 对分子小于1000的低挥发性样品)的分离,尤其是脂溶性成分,一般不适用与高分子量样品 如蛋白质、多糖或离子型亲水化合物等的分离。吸附层析的分离效果与吸附剂、溶剂和被分 离化合物的性质这三个因素有关。
1.7.4结晶法
中草药化学成分在常温下多半是固体的物质,都具有结晶的通性,中草药化学成分在常 9
硕士学位论文 第一章绪论
温下多半是固体的物质,都具有结晶他的通性,可以根据溶解度的不同用结晶法来达到分离 精制的目的。研究中草药化学成分时,一旦获得结晶,就能有效地进一步精制成为单体纯品。
1.8黄芩苷含量的测定方法
1.8.1紫外分光光度法
利用一定频率的紫外-可见光照射被分析的有机物质,引起分子中价电子的跃迁,它将有 选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱,反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内, 在紫外可见光的范围内,对于—个特定的波长,吸收的程度正比于试样中该成分的浓度,因 此测量光谱可以进行定性分析,而且根据吸收与已知浓度的标样的比较,还能进行定量分析。 蔡越秀[66.671等采用该法测定黄芩苷,结果表明该方法快捷简便,可供黄芩苷质量控制用。
1.8.2簿层色谱扫描法
薄层色谱扫描法(ⅡCS)由于在测定时,斑点不经洗脱,在薄层板E经扫描可直接得到 一种或几种成分的含量,因而具有快速、简单等优点,目前已广泛地用于中草药及中成药的 分析。戈早川嘲等研究了胶束薄层色谱扫描法测定银黄片与银黄注射液中的黄芩苷与绿原 酸,分离效果和选择性较好。
1.8.3高效液相色谱法
高效液相色谱法(HPLC)能准确测定复杂组分中黄芩苷的含量。宋卫平㈣等采用高效 液相色谱法成功测定出双黄连含片中黄芩苷和汉黄芩素的含量;周静安‘7哪用高效液相色谱法 测定黄芩中药牙膏中的黄芩苷与丹皮酚的含量;谢友良(711等采用HPLC测定黄芩正气胶囊中 橙皮苷、黄芩苷、和厚朴酚、厚朴酚的含量,均得到满意效果。
1.9本论文的主要内容研究意义
本次论文的工作主要为:寻找黄芩中黄芩苷的最优提取和纯化方法,研究了黄芩苷的分 光光度分析方法的各项条件,建立黄芩苷的分光光度分析方法并用于黄芩中黄芩苷的测定。 研究高效液相色谱法测定黄芩中黄芩苷,优化色谱分析条件。
中药现代化是我国传统中药发展的必然趋势。作为中药现代化的基础性研究,中药有效 成分的提取、分离纯化是中药现代化的主要组成部分。黄芩是我国传统常用中药材,需进一 步加强对其药材资源的开发和利用。黄芩苷是黄芩的主要成分,具有抗炎、抗氧化,抗肿瘤 抗HIV-1病毒等多种作用,因此对黄芩苷的提取分离纯化工艺加以优化,以提高黄芩苷的产 率意义重大。
IO
硕士学位论文 第一章绪论
本文工作的特色及创新之处在于用双水相萃取法分离黄芩苷,具有分相快'使用温度低 易于操作等特点,且所使用的PEG及盐类对人体及环境无毒害,萃取率高,天然产物有效成 分富集分离的一种有效方法。由于目前对该法的研究较少,尤其是对中草药提取研究的应用处 于起步阶段,这一技术的应用有待于进一步研究。有望进行规模化生产。
硕+学位论文 第二章黄苓苷的提取1:艺研究 第二章黄芩苷的提取工艺研究
中药材的提取过程是固—掖扩散过程,该过程分为:浸润、溶解、扩散和置换四个阶 段。固液扩散公式如下:
W:K.!sg二竺z,
一P
(2.1) 4
式中。
W二—提取率(%)
T_一绝对温度
S一原料表面积
卜一原料粒径
Kc——常数
n_—诸剂粘度
CI卜一原料内溶质浓度
c、v一原料外溶质浓度
1.-一提取时间
从公式(2.1)可以看出,提取率的高低与温度、原料表面积、原料内外浓度差成正比, 与溶剂粘度、原料粒径成反比。溶剂的极性、粘度等物性影响到植物组织中不同物质的提取 速度和溶出度。温度升高,扩散速度加快,浸提速度也加快,温度适当升高,可使原料中的 蛋白质凝固、酶破坏而增加浸提液的稳定性,但温度过高可能破坏热敏性成分,并且导致浸 提液的品质变劣。植物原料力度越小,比表面积越大,浸提速度越快,但粒度过小,吸附作 用增强,反而影响扩散速度,许多不溶性高分子物质微粒进入浸出液中,会使杂质浸出量增 加,后续分离提纯困难;此外固液相对运动速率越高,溶液的湍动越强,会导致边界层变薄, 提高浸出速率。原料的有效成分随提取时间延长,提取的得率提高,但时间过长,杂质成分 溶解液随之增加。所以合适的提取温度、样品粉碎力度、提取溶剂组成、提取剂用量、提取 次数、提取时间等因素对产品的提取率十分重要。
本章系统研究了常规煎煮提取法、回流提取法、超声波提取法及微波提取法从黄芩中提 取黄芩苷的工艺,并对这四种方法的提取效果进行了比较,以黄芩苷的得率为指标,确定了 最佳提取方法及最佳提取工艺。
硕士学位论文 第二章黄芩营的提取工艺研究
其中得率的计算公式见公式(2-2):
黄芩苷的得率=茎雩訾募翥嚣舅掣×t。。% 2.1煎煮法提取黄芩中的黄芩苷
2.1.1提取原理
(2—2)
煎煮提取法是根据中草药中各种成分在水中的溶解性质,将有效成分从药材组织内溶解 出来的方法。提取过程是典型的液一固传质过程,将水加到中草药原料(需适当粉碎)加热 煮沸一段时间,溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁渗透到细胞内,溶解可溶性物质, 而造成细胞内外的浓度差,于是细胞内的浓溶液不断向外扩散,水又不断进入药材组织细胞 中,如此多次往返,直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时,将此饱和溶液滤出,继续加入 水煎煮,就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部分溶出。影响中草药有效成分提取效率 的因素基本上都与此传质过程有关。一般情况下,升高温度,可增大扩散系数;加大提取溶 剂倍数,使两相的浓度差增大,可增大扩散动力;减小药材颗粒粒度,可使扩散路径缩短。 所以,升高温度、增大溶剂倍数与减小药材颗粒都能加快提取过程。
2.12实验部分
2.12.1仪器与试剂
S硼卜_ⅡI循环水式多用真空泵,郑州长城仪器厂;
PHS-3C精密pH计,上海精密仪器有限公司;
AYl20电子天平,日本岛津有限公司;
FWl00高速万能粉碎机,天津泰斯特仪器有限公司;
DZF-6050型真空干燥箱;
可调节电炉,湖南林松电子;
TGL-16GA离心机,湖南星科科学仪器有限公司。
黄芩药样(用烘箱60烘干、粉碎、筛得100目黄芩粉末,保存备用),产地湖南,购于 长沙金沙大药房;
无水乙醇,95%乙醇分析纯,天津市大茂化学试剂厂;
盐酸分析纯,株洲开发区石英化玻有限责任公司;
NaOH分析纯,焦作鑫安科技股份有限公司试剂厂。
硕+学位论文 第二章黄苓苷的提取工艺研究 2.1.2.2实验方法
称取适量黄芩药样,浸泡分两次加入一定体积的水加热至微沸,保持微沸lh后抽滤,将 滤液合并,经离心分离和萃取纯化(见3.1和32节),然后用紫外分光法测定黄芩苷(见4.2节)。改变提取条件:浸泡时间,料液比。以黄芩苷的得率(其计算见公式2-2)为指标,来 确定最佳提取条件。
2.1.3结果与讨论
2.1.3.1浸泡时间的选择
准确称取黄芩粗粉样59,料液比为1:20,煎煮提取2次,每次lh,合并提取液后的操 作同2.1.2.2,为考察浸泡时问对提取效果的影响,选择不同浸泡时间进行实验,实验结果如 图2-l所示。
窭
替
眨
雹
{扭 }夺 般
1.6
O 246810
浸泡时间,h
图2-I浸泡时间对黄芩苷得率的影响
由图2-1可见,在前2ll内,得率随着浸泡时间的增加显著增加,此后得率缓慢下降。因 此本试验最佳浸泡时间为2ll。
2.1.3.2料液bE的选择
准确称取黄芩粗粉样59,浸泡2ll,煎煮提取2次,每次lh,合并提取液后的操作同2.1.2.2节,为考察料液比对提取效果的影响,选择不同的料液比进行实验,实验结果如图2-2所示。
14
4
2
O
8
1110
硕士学位论文 第二章黄芩苷的提取工艺研究
孚 、
哥 雅 g 逝 衿 掘 1,7
1.6
1.1
1.0
1:141:161:181:201:221:24料液比
图2-2料液比对黄芩苷得率的影响
由图2-2可知,随着溶剂量的增加,黄芩苷的得率增加,当增加至1:20之后,得率变化 不大,从提取效果、减少溶剂用量和降低浓缩负荷三方面综合考虑,故应选择料液比为1:20。
2.1.3.3实验结果
准确称取黄芩粗粉样59,料液比为1:20浸泡2ll,煎煮提取2次,每次lh,合并提取液 后的操作同2.1.2.2。在此条件下做3份平行样,数据见表2.1所示。
表2-l煎煮提取最优口阱下平行实验
2.2水浴回流提取黄芩苷
2.2.1提取原理
水浴回流提取法同煎煮法原理一样也是根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质,选 用对活性成分溶解度大,对不需要溶出成分溶解度小的溶剂,将有效成分从药材组织内溶解 出来的方法。提取过程是典型的液一固传质过程,当溶剂加到中草药原料(需适当粉碎)中
硕士学位论文 第二章黄芩苷的提取工艺研究
时,溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁渗透到细胞内,溶解可溶性物质,而造成细胞 内外的浓度差,于是细胞内的浓溶液不断向外扩散,溶剂又不断进入药材组织细胞中,如此 多次往返,直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时,将此饱和溶液滤出,继续多次加入新溶 剂,就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部分溶出。影响中草药有效成分提取效率的因 素基本上都与此传质过程有关。一般情况下,升高温度,可增大扩散系数;加大提取溶剂倍 数,使两相的浓度差增大,可增大扩散动力;减小药材颗粒粒度,可使扩散路径缩短。所以, 升高温度、增大溶剂倍数与减小药材颗粒都能加快提取过程。
2.2.2实验部分
2.2.2.1仪器和试剂
旋转蒸发器SENCO R系列,上海申生仪器厂;
W201B恒温水浴锅,上海申生科技有限公司;
其它仪器及试剂见2.1.2.1。
2.2-2.2实验方法
称取适量黄芩粉碎样,加入一定量的提取溶剂,置于温控水浴锅中改变浸泡时间、提取 时间、料液比和不同浓度的提取溶剂等提取条件进行回流提取。经离心分离和萃取纯化(见 3.1和3.2节),然后用紫外分光光度法测定(见4.2节),以黄芩苷的得率(其计算见公式2-2) 为指标,来确定最佳提取条件。
2.2.3结果与讨论
中草药成分在溶剂中的溶解度直接与溶剂性质有关。中草药成分中草药成分在溶剂中的 溶解度直接与溶剂性质有关嘲。中草药成分及各类溶剂的性质,与其分子结构有关。我们可 以通过对待提取成分的结构分析,按照“相似相溶’’的规律来选择合适的溶剂。选择溶剂要注 意以下三点:1.溶剂对有效成分溶解度大,对杂质溶解度小;2.溶剂不能与中药的成分起化学 变化;3.溶剂要经济、易得、使用安全。用于有机物提取的溶剂很多,溶剂的选择是否恰当 是回流提取中最关键的一步。根据‘湘似相溶’’的提取原理,本实验选用乙醇水溶液作为提取 溶剂。
2.2.3.1乙醇浓度的选择
选取不同浓度的乙醇水溶液为提取溶剂,浸泡2h后于80℃条件下回流提取。结果如图 2-4所示。
由图2.4可见,黄芩苷得率随着乙醇浓度的增加缓慢增加,乙醇浓度为60%时达到最大 值,而后又迅速下降,因此本试验最佳提取液浓度为60%K,醇水溶液。
16
硕士学位论文 第二章黄芩苗的提取工艺研究
术25
并
靶2.0
g
枇1.5
将
饭1?0
05
0.0
0204060∞ 1∞
乙醇浓度惕
图2.4乙醇浓度时黄芩苷得率的影响
2.2.3.2浸泡时间的选择
用6懈乙醇溶液浸泡不同时间后,于80℃下回流提取,结果如图2-5所示。
3.00
芝2.75
龉
眨
g
枷2.50
枪
枢
2.25
2,00
O 246810
浸泡时间,h
图2-5浸泡时间对黄芩苷得率的影响
由图2-5可见,黄芩苷得率随着浸泡时问的增加显著增大,2h时达到最大值,因此本试 验选择最佳浸泡时间为2h。
17
硕士学位论文 第二章黄芩苷的提取工艺研究
2.2.3.3提取时间的选择
用60%乙醇溶液浸泡2ll后,于80
3.0
2.9
芝2.8
将
靶
g 2.7
{扭
好
辍2.6
2.5
O.51.O 1.52.O 2.530
提取时间/h
图2-6提取时间对黄芩苷得率的影响
2.2.3.4料液比的选择
用不同料液比的60%乙醇溶液浸泡2ll后,于80℃下回流提取2h,结果如图2-7所示。 由图2.7可知料液比1:20时黄芩苷的得率最大。
3.0
2.9
《2.8
糌
难
g 2.7
轴
轮
般2.6
2.5
1:141:161:181:201:221:24
料液比/g/=L
图2-7科液比对黄芩苷得率的影响
18
硕十学位论文 第二章黄芩苷的提取工艺研究
2.2.3.5实验结果
由以上实验确定回流提取的最佳条件是以600/,7,醇作为提取液,1:20的料液比,浸泡时 间2ll,回流提取2ll。在此条件下做3份平行样,结果如表2-2所示。
表2-2回流提取平行实验结果
由实验结果可知,回流提取效果优于煎煮提取。
2.3超声提取
2.3.1提取原理
超声波是一种弹性机械波,是听阙以外的和声振动。超声波振动能产生并传递强大的 能量,给予媒质质点以大的速度和加速度。在某些物质里超声波可以比一些电磁波穿透得 更深,停留时间也较长,所以产生强烈的空化作用,并伴有机械振动、乳化、扩散、击碎 等次级效应。超声波提取法的理论依据是:利用起具有的强烈振动、空化效应和搅拌等特 殊作用,破坏植物药材的细胞,是提取溶剂渗透到植物细胞中,从而加速成分的溶出,因 此可用于植物活性成分的提取,可以明显缩短提取时间,还能避免高温高压对活性成分的 破坏。超声波提取效果不仅取决于超声波强度、频率,而且与提取剂性质有关,现已有适 合小规模提取的超声波发生装置。
2.3.2实验部分
2.3.2.1仪器和试剂
超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;其他仪器与试剂见2.12l。
2.3.2.2实验方法
称取适量黄芩粉碎样加入一定量的提取溶剂,室温下置超声波清洗器中超声提取,滤液, 经离心分离和萃取纯化(见3.1和3.2节),然后用紫外分光法测定黄芩苷(见4.2节)。改变 提取条件:浸泡时间、超声时间、料液比和提取溶剂的浓度等,以黄芩苷的得率(其计算见 公式2-2)为指标来确定最佳提取条件。
19
硕十学位论文 第二章黄芩苷的提取工艺研究 2.2.3结果与讨论
2.2.3.1超声时间的选择
以水为提取液,1:20的料液比(g:mL),无浸泡的条件下,选择不同的超声时间,进行 实验,结果如图2-8所示。
5.0
4.5
芝
静
难4.0
g
j缸
挣3.5
枢
3.O
2.5
1020304050∞
超声时间,h
图2-8超声时间对黄芩苷得率的影响
由图2-8可知,随着超声时问的增加,黄芩苷得率先增大后减小。究其原因可能是超声 波虽然有利于黄芩苷的溶出,但时间太长会对某些有效成分造成破坏。因此本试验选择最佳 超声时问为30min。
2.2.3.2浸泡时间的选择
以水为提取液,1:20的料液比(g:mL),超声30min的条件下,选择不同浸泡时间进行 实验,结果如图2-9所示。
由图2-9可知,随着浸泡时间的的增加,黄芩苷的得率显著增加,2h后得率变化不大, 因此本试验选择最佳浸泡时间为2ll。
硕十学位论文 第二章黄芩苷的提取工艺研究
5.∞
术
孓
替4.95
露
g
栖4.90
枪
粒
4.85
4.80
0246810
浸泡时间,h
图2-9浸泡时间对黄芩苷得率的影响
2.2.3.3料液比的选择
以水为提取液浸泡2h,选择不同料液比,超声30min提取,结果如图2-10所示。
5.1
5.O
零
;4?9
靶4.8
g
枷4.7
持
辍4.6
4.5
4.4
1:141:161:181:201:221:24
料液比/(g:mL)
图2-10料液比对黄芩苷得率的影响
由图2.10可见,得率随着料液比的减小而增大,当料液比小于1:20之后,得率基本稳 定不变。可能是因为当溶剂量太小时黄芩苷不能完全溶出,溶剂量太大杂质析出量增大。因
21
硕十学位论文 第二章黄芩营的提取工艺研究 此,为了节省溶剂本试验选择最佳料液比为1:20。
2.2.3.4乙醇浓度的选择 。
以1:20的料液比(g:IIll,,选择不同浓度的乙醇为溶剂浸泡2h,超声30min提取,结果 如图2.11所示。
5.5
5.0
墨
槲4.5
靶
g 4.0
垃
衿3.5
辍3.0
2.5
2.0
02040∞ 80100
乙醇浓度,%
图2-11乙醇浓度对黄芩苷得率的影响
由图2-11知,随着乙醇浓度的升高,黄芩苷的得率显著增加,浓度为600,6时提取效果最 好。而后得率逐渐下降。因此本试验选择最佳提取溶剂为60%乙醇。
2.2.3.5实验结果
由以上实验确定超声提取的最佳条件为:以1:20的料液比(g:IIll)用60%Z,醇溶液浸泡 2ll后超声30min提取。在此条件下做3份平行样,结果见表2-3。
表2-3超声提取平行实验结果
由此可见,与常规溶剂提取相比,超声波提取黄芩中的黄芩苷,操作简单快速,无须加 热,提取率高,速度快,效果好,且结构未被破坏,具有明显优势。
硕十学位论文 第二章黄芩苷的提取工艺研究 2.4微波提取黄芩苷
2.4.1提取原理
微波是频率大约在300蚴ooG}Iz,即波长在100cm-lmm范围内的电磁波。与传统 加热方式相比,微波不需要热传导过程,物质内外同时升温,即热速度快而均匀,仅需加 热方法的百分之一到几千分之一的时间便可完成整个加热过程。在单位时间内单位体积的 电介质中所产生的热量(P)与电场(E)、频率(f)、物质介电常数(舀)以及电介质的介 电损耗(西)之间有下列关系:
P--rE。.tg 6(2-2)
所以物质在为波场中产生的热量主要与微波的性质(f、E)、物质的种类及介电特性(e,; t96)等有关。在进行微波提取时,应选择好提取剂、提取时间、提取剂用量,以达到良好 的效果。
微波提取技术(MicrowaveAssistedExtraction,MAE)是20世纪80年代才开始的新方 法。其原理是在微波场中,利用不同结构的物质微波能力的差异,使得基体物质的某些区域 或提取体系中的某些组分被选择性加热,从而使被提取物质从集体或体系中分离,进入介电 常数小、微波能力相对差的提取剂中。所以MAE技术具有选择性高、快速高效、溶剂消耗 少、活性成分得率高、不产生噪音、适合于热不稳定物质等特点。在我国,微波萃取已列入 2l世纪中药现代化推广技术之一。
微波辅助提取是新发展起来的利用微波辐射来提高提取效率的新技术。被提取中药有效 成分在微波电磁场中快速旋转向及定向排列,从而产生撕裂和互相摩擦引起发热,可以保证 能量的快速传递和充分利用,易于溶出和释放。在提取过程中,药材不凝聚、不糊化、具有 选择性能高、操作时问短、溶剂耗量少、有效成分收率高的特点。
2.42实验方法
称取适量黄芩粉碎样加入一定量的提取溶剂,室温下置微波炉中微波提取,改变提取条 件:浸泡时问、微波时间、料液比和提取溶剂的浓度等,经离心分离和萃取纯化(见3.1和 3.2节),然后用紫外分光光度法测定(见4.2节),以黄芩苷的得率(其计算见公式2-2)为 指标,来确定最佳提取条件。
2.4.3结果与讨论
2.4.3.1微波时间的选择
硕士学位论文 第二章黄芩苷的提取工艺研究
以水为提取液,1:20的料液比(g:n正),在功率为650W的微波炉上选择不同的微波时 间进行提取,结果如图2-12所示。
蓬
静
靶 g 枷
杼 枢
406080100120140
微波时间,s
图2-12微波时间对黄芩苷得率的影响
由图2-12可知,在80s之前,黄芩苷得率随着时间的增加而增大,此后缓慢下降。究其 原因可能是微波有利于黄芩苷的溶出,但微波时间过长会破坏其中的某些有效成分而导致得 率略有下降。因此本实验选择最佳微波时间为80s。
2.4.3.2浸泡时间的选择
以水为提取液,1:20的料液比(g:IIlL),选择不同的浸泡时间,在功率为650W时,微 波提取80s,结果如图2-13所示。
56
芝5.4
毒}
驼
宅5.2
垃
轮
权50
4.8
o 246810
浸泡时阃m
图2-13浸泡时间对黄芩苷得率的影响
5
5
5
554433
硕士学位论文 第二章黄芩苷的提取工艺研究
由图2-13知,黄芩苷得率随浸泡时间的增加先增大后减小,2ll时得率达到最大。因此 本实验选择最佳浸泡时间2h。
2.4.3.3料液比的选择
以水为提取液,选择不同料液比,浸泡2h,在功率为650W下,微波提取80s,结果如 图2-14所示。
述5-4
丹5.2
啦
g
5.0
枷
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牲
4?6
4.4
1:141:161:181:201:221:24
料液比/(g:mLl
图2-14料液比对黄.树得率的影响
由图2-14知,随着溶剂量的增加,黄芩苷的得率明显上升,料液比达到1:20时得率最 大,溶剂量继续增大而得率基本不变。为了节省溶剂确定本试验选择最佳料液比为1:20。
2.4.3.4乙醇浓度的选择
选择不同浓度的乙醇以1:20的料液比(g:mL)浸泡2ll,在功率为650W时微波80s,结 果如图2-13所示。
由图2一13可知,随着乙醇浓度的升高,黄芩苷的得率增加,在浓度达到60%时,提取效 果最好。浓度大于60%以后得率明显下降。因此本实验的最佳溶剂为60%乙醇水溶液。
硕士学位论文 第二章黄苓苷的提取:T=艺研究
6.0
5.5
芝50
瓣45
鐾4.o
枷3.5
篓s.o
25
Z0
1.5
O 20406080100
乙醇浓度,%
图2-15乙醇浓度对黄芩苷得率的影响
2.4.3.5实验结果
由以上实验确定微波提取的最佳条件是以1:20的料液比(g:mL)用600,47.醇溶液浸泡 2lI后微波80s提取。在此条件下做3份平行样,结果如表24所示。
表2-4微波提取最优条件下平行实验
不同提取方法黄芩苷的得率比较,结果如表2-5所示。由表2-5可知,微波提取为最佳 提取方法。
表2-5不同提取方法得率的比较
2.5微波的正交实验
为了进—步得到微波提取黄芩中黄芩苷的最优化工艺,本文根据单因素实验设计正交实 验,选取浸泡时间、微波时间、提取液和料液比4个因素,每个因素3个水平的L9(34)正 交设计方案,进行正交实验,结果如表2--6~表2-8所示。
硕士学位论文 第二章黄芩苷的提取工艺研究
表2-6正交实验因数水平表
表2-7正交实验以及结果
5.1134.9804.5930.520
5.015.294.48
4确
531
5m
4.584.635J02
l 233l 22
3l 。 2323。
3。 2
螂 螂 啪 嬲
4
44O 。23。 23, 23
弼 胛 肼 肼
4
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。
。222333叼 m 粥 矾
454O ,23456789k
b b
R
硕士学位论文 第二章黄芩苷的提取_T艺研究
由表2-7可知,采用微波提取,最佳条件为A282C2D2,即取黄芩药样59,按1:20的料 液比(g:mL)用60%乙醇溶液浸泡2h后,微波80s提取。
表2-8可知,以黄芩苷粗品的得率为考察指标,各因素对黄芩中黄芩苷提取量的影响程 度依次为溶剂浓度>i曼泡时间>微波时间>料液比,其中提取溶剂浓度对黄芩苷提取量的影响 最大,具有显著性的差异。
2.6小结
由此可见,微波提取有以下优点:投资少,设备简单、重现性好、操作时问短、热效率 高、不产生噪音、不产生污染和易于自动化。尤其是与传统煎煮法相比,克服了药材细粉易 凝聚、易焦化的弊端,有望进行规模化生产。
硕士学位论文 第三章黄芩苷的分离及纯化工艺研究 第三章黄芩苷的分离及纯化工艺研究
由于提取过程中的多种作用,黄芩提取液形成了一个既含有许多极细微粒和大分子物质, 如粘液质、蛋白质、鞣质、树胶等,又混有药样微粒、粗纤维等固体杂质的混悬体系,具有 热力学不稳定性和动力学不稳定性,严重影响后续处理,必须经过分离纯化以提高活性成分 的含量。目前,中药活性成分纯化处理技术很多。本试验采用酸沉重结晶法、双水相萃取的 纯化工艺,并对相关工艺参数进行了优化,取得了满意的效果。
黄芩苷的纯度的计算
黄芩苷的纯度=瓦襄譬鬻藉譬霉誓雾誓‰×too%。d,
3.1沉淀分离法
3.1.1仪器与试剂
W201B恒温水浴锅,上海申生科技有限公司;s}m—IⅡ循环水式多用真空泵,郑州长城 仪器厂;pHS-3C精密pH剂,上海精密仪器有限公司;AYl20电子天平,日本岛津有限公司; DZF 6050型真空干燥箱,上海—恒科技有限公司;可调节电炉,湖南林松电子。
黄芩药样(产地湖南),购于长沙金沙大药房;无水乙醇,95%乙醇分析纯,天津市大茂 化学试剂厂;盐酸分析纯,抹洲开发区石英化玻有限责任公司;NaOH分析纯,焦作鑫安科 技股份有限公司试剂厂。
3.1.2实验原理
沉淀分离法是在样品溶液中加入某些溶剂,通过化学反应或者改变溶液的pH值、温度 等,使分离物质以固相物质形式沉淀析出的一种方法。本试验利用黄芩苷在中性溶液中溶解, 在酸性溶液中沉淀析出,从而与其它杂质分离。
3.1.3实验部分
称量59黄芩样品微波提取,抽滤后提取液加HCI溶液调至pH--2,80
硕士学位论文 第三章黄苓苷的分离及纯化1:艺研究
后加等量95%乙醇充分搅拌后抽滤,滤液加HCl溶液调pH=1.5,水浴50。C保温0.5h,冷却 后抽滤得沉淀在80℃下干燥6h后得到黄芩苷粗品。其具体流程如图3-1所示:
沉
加适量的水搅匀,加40%NaOH 调至pH7,再加适量乙醇,过滤
滤渣滤液
l銎嚣慧:警㈣
厂———]
黄芩苷粗品
滤液
图卜1黄芩提取液中分离黄芩苷的工艺流程
滤
过 叹 提 粉J
筝
黄
硕士学位论文 第三章黄芩苷的分离及纯化工艺研究
用100倍量的95%乙醇回流30min,趁热过滤得到的醇液回收乙醇到原体积的l/5后放 置结晶,母液再次浓缩放置结晶,重复3次后,所得晶体即为纯化后的黄芩苷。然后配成一 定浓度的溶液,用紫外分光光度法测定黄芩苷的质量(见4.2节),计算黄芩苷样品的纯度(其 计算见公式3.1)。
3.1.4结果与讨论
采用酸沉重结晶法做3个平行样,结果如表3.1。
表3-1酸沉结晶分离纯化的平行实验数据
3.2双水相萃取法
3.2.1仪器与试剂
磷酸氢二钾分析纯,焦作鑫安科技股份有限公司试剂厂;聚乙二醇(PEG)1500,PEG 2000,P王好3000,PEG6000焦作鑫安科技股份有限公司试剂厂;其它仪器同3.1.1。
3.2.2实验原理
当两种聚合物或一种聚合物与—种盐溶于同一溶剂时,由于聚合物之间或聚合物与盐之 间的分子空间阻碍作用,无法相互渗透,当聚合物或无机盐浓度达到一定值时,就会分成不 互溶的两相,因为使用的溶剂是水,所以称为双水相。当物质进入双水相体系后,由于表面 性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等)的作用和溶液环境的影响,使其在上、 下相中的浓度不同,即各成分在两相问的选择性分配,从而达到萃取的目的。当被分离的物 质与双水相体系充分混合后,经静置分层,被分离的成分就富集在双水相体系中的上相或下 相,将此富集了被分离成分的相分离出来,再经过处理后就可得到被分离成分。当相系统固 定时,分配系数K为常数,与被分离物质的浓度无关。不同的物质在特定的体系中有不同的 分配系数。
有关计算公式有:
RFⅥ/Ⅵ K5C。/cd
3l (3.2) (3-3)
硕士学位论文 第二章黄芩营的分离及纯化_T艺研究 Y=1/(1+l/(R×K)) (3-4)
公式中:
R-双水相体系上下相的体积比
K-黄芩苷双水相体系的分配系数
Y二黄芩苷在上相中的收率
V.广上水相体系上相的体积(IIlL)
Vd-下水相体系下相的体积(fIlL)
CI广上水相体系上相中黄芩苷的质量浓度(mg/mL)
Ca-下水相体系下相中黄芩苷的质量浓度(1nI咖:lL)
3.2.3影响因素
影响被分离物质在双水相体系中分配的因素有很多,主要有以下几个方面。
①双水相体系的组成成分(即聚合物的种类)。同一种物质在不同的双水相体系中的分 配比相差很大。
②聚合物的相对分子量大小。同一聚合物的疏水性随相对分子量的加大而增加,分配系 数也随之发生变化。
③系线的长度。系线长度趋于零时,上相和下相组成相同,分配系数为1.0。系线长度 增加,上相和下相相对组成差别增大,被分离物质在两相中的表面张力差也增大,从而影响 分配系数。
④pH值的影响。pH值的变化会导致组成体系的物质电性发生变化,也会使被分离物质 的电荷发生改变,从而影响分配的进行。
⑤温度也将影响被分离物质在双水相体系中的量。
3.2A实验部分
双水相体系按质量配制,各组分用质量分数表示,系统总量为lOg,混合均匀后,在离 心机中以2000r/min离心5min,读取上下相体积vu和vd,由公式(3-2)计算得双水相系统 的相比R.分别取样分析上下相中黄芩苷的浓度。由公式(3.3)计算的双水相系统的分配系 数K;然后再利用公式(3-4)的黄芩苷的收率Y。
分别改变聚乙二醇(PEG)6000,K棚'04质量分数,体系pH值及体系温度确定最优分 离条件。
在最佳条件下,取富含黄芩苷一相,回收纯化得黄芩苷。
硕士学位论文 第三章黄芩茴的分离及纯化工艺研究 3.2.5结果与讨论
3.2.5.1PEG平均分子量对双水相体系分配平衡的影晌
对黄芩苷在PEG/K2I-IPO蹦体系中的分配情况进行研究,实验在PEG的质量分数均
为16%,K2HP04质量分数为180,6,p冲-7条件下,考察PEG的分子量变化对黄芩苷在双水相 中分配平衡的影响。结果如图3-2,图3-3,图3-4所示。
n7
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莲
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O.3
24
23
Y 饕22鼬 求
21 20 100020∞ 3000400050006000 PEG的分子量
1驾3-2PEG的分子量对相比R的影响
100020∞30∞400050∞60∞ PEG的分子量
图3-3PEG的分子量对分配系数K的影响
硕士学位论文 第三章黄芩苷的分离及纯化工艺研究
94
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菩
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抽
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髓
10002000300040005000∞00
PEG的分子量
图3-4PEG的分子量对黄芩苷收率Y的影响
由图3-2,图3.3,图3_4可见,PEG的平均分子量愈大,黄芩营愈趋向于上相分配。可 能是因为随着PEG平均分子量的增加,聚合物分子中亲水基的数目减少,疏水基的数目增大。 两相中亲水性差距增大,黄芩苷在上相中的分配率增大。因此确定PEC'6000为研究对象。
3.2.5.2PEG6000与K2HP04质量分数对双水相体系分配平衡的影响
选取PEG6000的质量分数为16%,pH--7.0条件下,考察K士IP04质量分数的变化对黄 芩苷在双水相中分配系数的影响。结果如图3-5,图3-6,图3-7所示:
n∞
O.75
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图3-5K2HP04的百分含量时相比的影响
硕士学位论文 第三章黄芩苷的分离及纯化T艺研究
26242220
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图3-6
K2HP04的百分含量对分配系数K的影响
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24∞俎30
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图3-7
K2HI'04的百分含量对黄苓苷收率Y的影响
由图3.5,图3-6,图3-7可以看出,K2HP04的浓度低时,收率Y比较高是由于相比R 较大,K2HP04的浓度高时,分配系数K减小。因此,在K2HP04的质量分数为18%时,K 值最大,萃取率最高。确立K2HP04的质量分数为18%为最优条件,在pH=7.0的条件下考 察PEG6000质量分数的变化对黄芩苷在双水相中分配平衡的影响,结果如图3—8,图3-9,
图3.10所示:
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硕士学位论文 第三章黄苓苷的分离及纯化工艺研究
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10121416182022“∞283032 PEC.-6000/%
图3-8PEG6000的百分含量对相比R的影响 1012141618202224拍28∞32
图3-9PEG6000的百分含量对分配系数K的影响
硕士学位论文 第三章黄苓苷的分离及纯化。【.艺研究 1∞
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PEG6000/%
图3-10PEG6000的百分含量时黄芩苷收率Y的影响
由图3.8,图3-9,图3.10可以看出随着PEG6000质量分数的增大,K在PEG6000的 质量分数26%时有最大值,黄芩营的萃取率也最高。从分配理论上解释,随着PEG质量分 数的增大,黏度增大,阻止相分子转移的能力增大,使得黄芩苷大部分分布在PEG相。
3.2.5.3pt-I值对双水相体系分配平衡的影响
在PEG6000质量分数为26%,K2HP04的质量分数18%时,调不同pH值,考察体系分 配平衡的变化,结果如图3.1l,图3.12,图3.13所示:
图3-11pH对相比R的影响
硕+学位论文 第三章黄芩苷的分离及纯化工艺研究
35
30
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图3-12pH对分配系数K的影响
8图3-13pH对黄芩苷得率Y的影响
由图3-ll,图3-12,图3-13可知prI值过高对黄芩苷在双水相中分配不利。pH.-7或偏 酸性有利于黄芩营在双水相中的分配,黄芩苷在碱性环境下容易变质。
3.2.5.4温度对双水相体系分配平衡的影响
在PEG6000质量分数为26%,K2HP04的质量分数18%,pH=7时,考察温度对双水相 体系分配平衡的影响,结果如图3.14,图3.15,图3.16所示:
38
硕士学位论文 第三章黄苓苷的分离及纯化T艺研究 2.4
23
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∞ 354045∞ 弱 60温度T,℃
图3-14温度T对相比R的影响
30354045505560温度T,C
图3.15温度T对分配系数K的影响
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硕士学位论文 第三章黄芩苷的分离及纯化工艺研究
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温度T,℃
图3—16温度T对黄芩苷收率Y的影响
由图3.14,图3.15,图3.16可知温度对R和Y影响不很大,但对分配系数K影响较大, 在30
以上实验表明利用PEC.v60(X)/K吐qP04双水相体系萃取黄芩苷时,PEG6000浓度、K2HP04浓度、DH值及温度等因素都对双水相体系的相比、分配系数及黄芩苷的收率有一定影响,试 验得出最佳的分离条件为PEG6000质量分数为26%,K2HP04的质量分数18%, pH值为7.0, 温度为300C。最大的分配系数可达29.8,最大收率98.6%。黄芩苷大部分被分配在PEG相(上 相冲。
在此条件下做三份平行样,步骤同3.1.4,结果见表3-6。
表3-6双柑嘿优务件下的平行实验
33小结
本试验采用沉淀法分离黄芩苷,然后用结晶法和双水相萃取法分离纯化黄芩苷样品。通 过选择不同的工艺参数和分离纯化条件,最终得到纯度较高的黄芩苷产品。比较两种纯化方 法快捷、简单、便宜,且效率较高,是一种较好的分离提纯方法。我们要深入研究使其在其 它天然产物有效成分分离中得到广泛应用。
40
硕十学位论文 第四章黄芩苷的分析测定研究 第四章黄芩苷的分析测定研究
4.1黄芩苷的定性分析
4.1;1仪器与试剂
黄芩苷标准品,云南玉溪万方天然药物有限公司;黄芩苷样品,实验所得;
Nicolet NEXUS670红外光谱仪
4.1.2实验部分
分别测黄芩苷标准品与样品的红外光谱图,如图4.1与图4.2所示。
图4-1黄芩苷标准品的缸外谱图
4l
硕士学位论文 第四章黄芩茁的分析测定研究
图4-2黄芩苷样品的红外港图
分析图4.1和图牝所示谱图:1495.71和1472.微数位置的吸收,900--650波数位置的 精细结构可以判断化合物有苯环;2858.57波数处吸收应该是c—H键的伸缩振动造成的;
3388.88的宽峰应该是OH伸缩振动引起的;1611.03和1572.48波数附近的强吸收;1300一 1420
对比图4.1和图4-2,黄芩苷的所含基团的吸收峰都有且峰形基本相同。另外4.2.3.1所 测黄芩苷样品与标准品的紫外吸收扫描波形相同,最大吸收峰波长一致,可以推定样品主 要成分为黄芩苷。
4.2紫外分光光度法测定黄芩苷的含量
4.2.1仪器与试剂
756MC紫外可见分光光度计,上海精密科学仪器有限公司;
黄芩苷标准品,云南玉溪万方天然药物有限公司;无水乙醇,分析纯;95%Y--,醇分析纯, 天津市大茂化学试剂厂;甲醇分析纯,天津市大茂化学试剂厂;。
4.2.2实验部分
4.2.2.1黄芩苷标准溶液的制备
硕十学位论文 第四章黄芩苷的分析测定研究
准确称取O.05009黄芩苷标准品,用75%乙醇定容于250mL容量瓶中,制成o.2m鲈IlL 的黄芩苷标准储备液,待用。
4.2.2.2黄芩苷样品溶液的制备
准确称取O.05009黄芩苷待测品,方法同4.22.1。
423结果与讨论
4.2.3.1最大吸收波长的确定
取黄芩苷标准储备液用75%乙醇稀释lO倍后在756MC紫外可见分光光度计上进行扫描 得图4-3。
认 . \、 ’‘。、
图4-3黄芩苷标准品扫描图
由图4-3可知最大吸收波长为278nm。
将分离纯化后的黄芩苷待测样品溶液用75%乙醇稀释lO倍后用紫外分光光度法进行扫 描得图“。
叭 ? \
图4.4黄芩苷待测样品扫描图
硕士学位论文 第四章黄苓营的分析测定研究
对比图4-3和图4-4可知本实验分离纯化后所得的黄芩苷样品和黄芩苷标准品在紫外分 光光度上扫描所得图谱基本一致,最大吸收峰位置相同,在278mn处有一个强吸收,可用紫 外分光光度法在278nm处测定黄芩苷的浓度。
4.2.3.2标准曲线
分别移取1.0,1.5,2.0,2.5,3.0ml黄芩苷标准储备液,用75%乙醇稀释25倍后于278nm 测定吸光度,以黄芩苷浓度作为横坐标,其对应的吸光度A作为纵坐标,建立标准曲线如图 钙所示。
1.4
1.2
1,O
《
釉
0.6
o.4
681012141618202224拍
C/mg.mrlxl04
图4巧紫外分光光度标准曲线图
用最小二乘法进行回归,得吸光度A与黄芩苷标准溶液浓度C qtlg/mL)的线性回归方 程A=0.0106+0.05645C,r--0.9998,黄芩苷在浓度8.0x103mg.mL
4.2.3.3精密度实验
准确量取同一样品溶液5份,g-f91.OOmL,在278nm下测定,相对标准偏差(RsD) 为0.87%。
4.2.3A样品测定及其加标回收率实验
量取1.OmL已经测定含量的样品溶液3份,加入一定量的对照品溶液,在278nm下测 定吸光度,平行测定三次,计算加标回收率,结果见表4-2,回收率在98.3%~101.8%之间, 由此可知,此方法的回收率能满足分析的要求。
硕士学位论文 第四章黄苓苜的分析测定研究 表4.2加标回收率实验
4.3高效液相色谱法测定黄芩苷的含量
43.1测定原理
当混合物中各组分在经过—个有固定祥和流动相组成的体系时,由于各组分在化学性质 上的差异,在两相中具有不同的分配系数,两相作相对运动时,被分析的混合组分随流动相 一起运动,并在两相中进行多次吸附和分配,使得那些分配系数只有很小差别的组分,在移 动速度上产生很大差别,从而使各组分得到分离。通过检测器扫描色谱峰,由于色谱峰面积 与进样量成正比,故可做定量分析。
4.3.2仪器与试剂
高效液相色谱仪(S}ⅡMADZ,2010A),检测器(SPmMloAVP),色谱柱(Ⅵ比IDS Clg 150mmx4.6mm,预柱10mm×4.6mm),日本岛津公司。
黄芩菅标准品(co>_97.21%), 云南玉溪万方天然药物有限公司;无水乙醇,95%乙醇分 析纯,天津市大茂化学试剂厂;黄芩苷标准溶液,自己配制;样品溶液,自己配制;甲醇色 谱纯,天津市大茂化学试剂厂;磷酸分析纯;高效液相色谱所用水为二次蒸馏水。
4.33实验部分
黄芩苷标准品和样品溶液的制备同4.2.2节。
43-4结果与讨论
4.3.4.1检测波长及流动相的确定
黄芩苷标准品溶液,用石英比色皿进行紫外扫描,扫描波长从190-40(On。发现在275nm 处有最大吸收,因此确定278nm为测定波长。见4.2…31
流动相是高效液相色谱分析中最重要的测定条件,它的组成对分离测定效果的影响很大。 本实验用甲醇.水.磷酸作流动相,改变各组分体积比进行对比试验,发现甲醇冰一磷酸体积比
硕士学位论文 第四章黄苓苷的分析测定研究
为47:53:0.2时,样品各组分的分离效果较好,且峰形完好,分离度满足色谱要求,故选择甲 醇冰.磷酸(47:53:0.2)为流动相。
4.3.4.2色谱条件
色谱柱(Ⅵ’.oDSCl8150minx4.6mm,预柱10nunx4.6ram):柱温25℃;流动相为甲醇:水:磷酸(47:53:0.2):检测波长278nm;.流速1.5mL/min。
4.3.43标准曲线
精确称取黄芩苷标准品20mg,置100mL容量瓶中,用70%甲醇溶解并稀释至刻度,摇 匀,做为黄芩苷标准品的储备液。精密吸取黄芩苷储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0m1分 别置于50mL容量瓶中,用70%甲醇稀释至刻度。按4.3.4.2节中色谱条件分别进样lO肛L, 以标准溶液浓度为横坐标,色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线,如图4-8所示。
4000∞
350000
300000
嚣250000
旧200000
誊
150000
100000
50000
01020304050
C(u g/mL)
图4-6HPLC标准曲线图
用最小二乘法进行回归,得峰面积Y与黄芩苷标准溶液浓度C(pg/mL)的线性回归方 程Y-q.24×103+8.31x103C,r--O.9998。结果表明,黄芩苷的进样浓度在8.Ollg,mI,~52嵋/mL 之间与峰面积Y之间呈良好的线性关系。
4.3A.4精密度实验
按4.3A.2节的色谱条件,对同一份样品供试溶液平行测定5次,各峰(包括溶剂峰)的 绝对保留时间基本一致,样品保留时间的相对标准偏差(RSD)为0.23%;峰面积的RSD为 0.56%。
范文四：[黄芩种植技术]黄芩种植
[黄芩种植技术]黄芩种植
篇一 : 黄芩种植
致富品种之——家种黄芩市场好
安国市中药师:赵喜进，13102968876，赵帅13032051180。
黄芩为唇形科多年生草本植物，药用根茎，有清热燥湿安胎凉血的作用，别名黄金茶，用来泡茶喝，有清凉败火、消炎去暑的功能。黄芩在我国各地都有分布。
安国市中药材研究协会，赵喜进， 6，赵帅13032051180。
多年来这个品种一直货源不足，特别是野生药材更是缺货，价格一涨再涨，所以应该长期不懈地发展下去，进行人工种植多年生长。黄芩适应性很强，不怕严寒和干旱，荒山荒坡、树林、野地都能生长。有的地方将种子撒播于沙滩上，也有的地方撒播于山坡上都得到了成功，见到了效益，我们不防向人家学习一下。2009年H1N1流感病毒蔓延世界各国，中医药抗治作用好，有关各类方剂及制品，如:银花清感方等，都要用到大宗原料——黄芩。家种黄芩大受市场欢迎，价格也稳中上涨，另外近几年黄芩种植力度减弱，市场库存薄弱，支撑价格上涨。目前价格从2011年初的17-21元/公斤涨到2011年9月的20-25元，其价格后市依然看好。家种多年生黄芩数量少，价格30元/公斤以上连年上涨。家种黄芩种植值得发展。
在平原地区选地以沙质或半沙质土壤为好，要有相应的水利条件，施足底肥，深耕后做畦，不论冬播、春播，还是夏播，亩用种都是2公斤左右。采取平畦宽幅条播种植，像种白菜一样，不过比种白菜要简单的多，播后浇水，遇阴雨天可推迟浇水，小苗只要出了就不会再旱死，耐力很强。
安国市中药材研究协会赵喜进， 赵帅13032051180。
干旱地区要在雨季种植，成功率很高，尽量多使一些种子。黄芩种植管理简单，采收容易，可用拖拉机作业，提高采收效率。黄芩亩产200-350公斤，亩效益高。市场大量收购，数量不限。有关增产增收技术请来我单位咨询。
篇二 : 黄芩种植技术视频
黄芩别名山茶根、土金茶根等，是唇形科黄芩属多年生草本植物，根入药，味苦、性寒，有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效，为常见大宗中药材，具有很高的种植前景，下面我们就一起来看一看黄芩的种植技术视频吧～
1、黄芩株高30-60厘米，根茎肥厚，粗达2厘米，断面黄色。茎基部伏地，稍木质。叶交互对生，近无柄，叶披针形至条状披针形。总状花序在基顶聚成圆锥状，花柱基生，花期为6-9月，果期为8-10月。
2、黄芩多野生于山坡、地堰、林缘及路旁等向阳较干燥的地
方。它有喜阳，喜温和耐严寒，耐旱怕涝的习性。苗期喜肥水，早春怕干旱、怕地内积水或雨水过多，轻者影响根系生长，重者导致烂根死亡。对土壤要求不甚严格，但过黏、过沙的土壤，生长不良，难以实现全苗和高产优质。
3、黄芩种子寿命2年左右，混等种子发芽率70%左右。种子发芽温度范围较宽，15?-30?均能正常发芽，最适温度为20?左右，发芽出苗快，发芽率高。
1、播种时间:对播种季节要求不严，春、夏、秋均可，各地可视具体情况灵活掌握，但在干旱地区，择适宜时期播种，仍是确保黄芩全苗和夺取高产的重要技术环节。
2、方式选择:在北方有灌溉条件的地块，以地下5厘米地温稳定到15?以上时为宜，在5月中、下旬为最适。春季土壤水分不足，又无灌溉条件的地块，应趁墒播种，北方直播以早春和晚秋为好，或者在雨季及初秋套播。套种先用大锄将前作物行间土壤锄松，随后将种子均匀撒松土上，播幅要宽，播后再用大锄回推压实土壤即可。若用喷壶再喷一遍水，效果更好。套种时播种量应适当增加至每亩1公斤左右。
3、播种方法:播前用25毫克每升的赤霉素溶液或冷水浸泡种子12小时，捞出后置于20?-25?的条件下保温、保湿、催芽，待部分种子裂口时再进行播种。但催芽后的种子必须播在水分充足的土壤上，否则会导致种子回芽，影响正常出苗。直播黄芩多采用开沟条播。
播种时，于做好的床内，按行距20厘米，开深3-5厘米的浅沟，覆土1-1.5厘米，稍加镇压。每亩播种量1.0-1.5公斤。
1、苗床选择:山坡旱地直播难以保苗的，可采用育苗移栽方法，育苗应选择温暖、阳光充足的地方做苗床，阳畦或温床均可，宽130-135厘米，长视需要而定。
2、播种方法:床址选好后，亩施腐熟的厩肥或堆肥5000公斤，深刨细搂，捡净根茬、石块等杂物，整平畦面，浇足底水，于4月上中旬，将已催芽的种子拌湿沙均匀撒畦面，上、盘棵期、块根膨大期、成熟收获期。当年越冬的地黄，翌年4月现蕾开花，6月果实成熟。
栽培技术
一、选地整地。宜选开阔、向阳、地下水位低的地块，以疏松肥沃、排水良好的沙质壤土为好。前茬以小麦、玉米等禾本科作物为宜。秋季前作收获后，深耕30厘米左右。翌年春季每亩施厩肥4000,5000公斤、过磷酸钙50公斤、饼肥50,100公斤，均匀撒施于地面，再浅耕一次，耙细整平，做宽1.2米的平畦或高畦，也可以起60厘米的高垄。
二、繁殖方法。因地黄的块根上芽眼多，容易生根、发芽，所以多用块根繁殖，亦可以用种子繁殖。
块根繁殖。秋季春地黄收获后，选无病虫害、形体好、粗1,2厘米的块根，在地窖里沙藏留种。也可选生长好的留一部分当年不挖，留在地里露地越冬，翌年春季刨起作种。因各地的气候条件及品种的
不同，栽种时间也不同，但一般可分为早地黄和晚地黄，早地黄于4月上中旬栽种，晚地黄于5月下旬至6月上旬栽种。栽种时，在整好的畦面上，按行距30厘米开沟，按株距15,20厘米放根茎，覆土厚3,4厘米。每亩需栽种块根40公斤左右。
种子繁殖。多采用育苗移栽法，于3月下旬播种育苗。按行距10,15厘米开浅沟条播，覆土厚0.3,0.5厘米。要经常喷水保湿。播后15天即可出苗。当幼苗长出6,8片叶时，即可移栽到大田。按行距20厘米、株距15厘米移栽，秋季采挖，大的可以入药，小的选健壮、充实的作种。地黄块根经连续选择繁殖后，产量和质量要好于多年无性繁殖的，为防止退化应交替使用这两种繁殖方法。
田间管理
地黄根浅，要浅锄，以免伤根。一般封行前浅锄3次，最后一次稍深些。结合中耕，第一次每亩追施人粪尿2000公斤、饼肥50公斤，第二次每亩追施人粪尿2500公斤、饼肥50公斤、过磷酸钙50公斤。封行前，还可以按第二次的追肥量稍增加些磷肥进行第三次追肥。少浇水、勤浇水，不可大水漫灌。雨季要及时排除田间积水，防止烂根。除留种的植株外，要及时摘除花薹。地黄能在块根处沿地表长出细长的根，称串皮根，应全部除掉。篇四 : 地黄种植技术讲座
范文五：中药黄芩的作用与功效及食用方法
中药黄芩的作用与功效及食用方法
核心提示:中药黄芩的作用与功效及食用方法 【中药黄芪的作用与功效】: 清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎。用于湿温、暑温胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。主……
【中药黄芪的作用与功效】:
清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎。用于湿温、暑温胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。黄芩的临床应用抗菌比黄连还好，而且不产生抗药性。我们借助广谱抗菌作用强的特点，用在真菌培养杂菌感染特厉害，用黄芩提取液效果很好，它是农业病害防治最理想的一味药。
【中药黄芪的药理作用】:
1.与功效主治相关的药理作用
(1)抗菌、抗病毒
?黄芩素、汉黄芩苷元。
?体外:对多种革兰阳性菌、革兰阴性菌、致病性皮肤真菌有抑制作用。
?抗病毒:抑制流感病毒、乙型肝炎病毒。
(2)抗炎:黄芩素、黄芩苷?抑制急性炎症反应。抑制炎症模型渗出肿胀、毛细血管通透性增加;抑制大鼠佐剂性关节炎。
1)机制:抑制炎性介质产生、释放。
2)抑制组胺释放
3)抗花生四烯酸代谢，抑制前列腺素E(PGE)、白细胞三烯(LT)的生成，减轻炎性介质扩张血管、增加血管壁通透性、白细胞的趋化作用。
(3)对免疫功能的影响:抑制免疫反应:尤其对I型变态反应(过敏反应)作用显著。
作用环节:
?稳定肥大细胞膜，减少炎性介质释放。
?影响花生四烯酸代谢，抑制炎性介质的生成。提高机体免疫功能:黄芩苷，提高巨噬细胞、NK细胞功能。
(4)解热。
(5)保肝、利胆(清肝胆):保肝:与抗氧自由基损伤有关。
(6)镇静:中枢抑制。
(7)对血液系统影响:
作用复杂:黄芩素等?抑制血小板聚集;黄芩素等?抗凝血:抑制凝血酶诱导的纤维蛋白产生。
小结:抗病原体、抗炎、调节免疫功能、解热、镇静、保肝、利胆等。无抗肿瘤作用。
2.其他药理作用ask.zghzyw.com
(1)降血脂、抗动脉粥样硬化:黄酮类成分。降低血清总胆固醇(TC)，降低血清甘油三酯(TG)含量，升高血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);抗动脉粥样硬化。
(2)抗氧自由基损伤:抑制过氧化脂质(LPO)的生成，清除自由基。
(3)降压:直接扩张外周血管;抑制血管运动中枢。
【黄芩的中药药方】:
1、治小儿心热惊啼:黄芩(去黑心)、人参各一分。捣罗为散。每服一字匕，竹叶汤调下，不拘时候服(《圣济总录》黄芩散)
2、泻肺火，降隔上热痰:片子黄芩，炒，为末，糊丸，或蒸饼丸梧子大。服五十丸。(《丹溪心法》清金丸)
3、治慢性气管炎:黄芩、亭苈子各等分，共为细末，糖衣为片，每片含生药0.8克，每日三次，每次片。(内蒙古《中草药新医疗法资料选编》)
4、治上呼吸道感染，肠炎:黄芩切碎，加四倍量水浸泡四小时，过胳残渣，再加二倍水浸泡两次，合并滤液，用20%明矾液倒入浸液中，调节pH为3.5(每100公斤黄芩，需明矾6,8公斤)，产生黄色沉淀，静置四小时，弃去上层清液，将沉淀物装人布袋中加水过滤，烘干，粉碎，造粒打片。侮次服二至三片。(辽宁《中草药新医疗法资料选编》)
5、治少阳头痛及太阳头痛，不拘偏正:片黄莽，酒浸透。晒千为未。每服5克，茶、酒任下。(《兰室秘藏》小清空膏)
6、治太阳与少阳合病，自下利者:黄芥150克，芍药100克，甘草100克(炙)，大枣十二枚(擘)，上四味，以水一斗、煮取三升)去滓。温服一升，日再夜一服。(《伤寒论》黄芩
汤)
7、治淋，亦主下血:黄芩200克，细切，以水五升，煮取二升，分服。(《千金翼方》)
8、治吐血衄血，或发或止，皆心脏积热所致:黄芩50克(去心中黑腐)，捣细罗为散。每服15克，以水一中盏，煎至六分。不计时候，和滓温服。(《圣惠方》黄芩散调)
9、治崩中下血:黄芥，为细未。每服5克、烧秤锤淬酒调下。(《本事方》)
10、治妇人四十九岁已后，天癸却行或过多不止:黄芩心枝条者二两(重用米醋，浸七日，炙干，又浸又炙。如此七次)。为细未，醋糊为丸，如梧桐子大。每服七十丸，空心温酒送下，日进二服。(《瑞竹堂经验方》芩心丸)
11、安胎:白术、黄芩、炒曲。上为未，粥丸，服。(《丹溪心治》)
12、治肝热生翳，不拘大人小儿:黄芩50克。淡豉150克，为未。每服15克，以熟猪肝裹吃，温汤送下，日二服。忌酒、面。(《卫生家宝方》)
13、治眉眶痛，属凤热与痰:黄芩(酒浸，炒)、白芷。上为未，茶清调10克。(《丹溪心法》)
14、治灸疮血出:酒炒黄芩10克。为未，酒服。(《怪证奇方》)
15、治火丹:杵黄芩末，水调敷之。(《梅师集验方》)
16、治产后血渴，饮水不止:黄芩(新瓦上焙干)、麦门冬(去心))各25克。上件，细切。每服15克，水一盏半，煎至八分，去滓温服，不拘时候。(《杨氏家藏方》)
17、治汗后余毒颊肿痛:黄芩、瓜蒌、甘草上口父咀.每服25克白水煎服.(《普济方》)
18、治白癜风:用黄芩末茄蒂蘸搽好.(《仁术便览》)
【黄芩的中医附方】:
1、黄芩膏
《永乐大典》卷一?三三引《王氏手集》:黄芩膏
处方1:黄芩。
制法:上为末，炼蜜为丸，如鸡头大。
功效与作用:小儿衄血、吐血、下血。
用法用量:3岁服1丸，以浓盐汤送下。
摘录:《永乐大典》卷一?三三引《王氏手集》《圣惠》卷九十:黄芩膏
处方2:黄芩75克、黄柏1.5克、栀子仁1.5克、黄连1.5克(去须)、竹叶100克、生地黄75克、胡粉1.5克、川大黄50克、水银50克(入少水，与胡粉同研令星尽)。
制法:除水银、胡粉外，上锉，如豆大，以新绵裹，用猪脂1斤半入铛内，于慢火上煎10余沸，候药色紫，去绵，以布绞去汁，候凝，下水银、胡粉，以柳木篦搅令匀，膏成，以瓷盒盛。
功效与作用:小儿热疮黄脓出。
用法用量:每日夜涂3-4次。
摘录:《圣惠》卷九十
《鬼遗》卷五:黄芩膏
处方3:黄芩50克、黄耆50克、芎?50克、白蔹50克、防风50克、芒草50克、白芷50克、芍药50克、大黄50克、细辛50克、当归50克。
制法:上(口父)咀，以猪脂1升，微火上煎一沸一下，白芷黄即成膏。
功效与作用:痈疽坚强不消。
用法用量:敷之。坚硬者，日可10易。
摘录:《鬼遗》卷五。
2、阿胶黄芩汤
来源:《重订通俗伤寒论》。
组成:青子芩15克、甜杏仁10克、陈阿胶15克、生桑皮10克、生白芍5克、甘蔗梢25克、生甘草4克、鲜车前草25克。
用法:先用生糯米30克，开水泡取汁出，代水煎药。
主治:秋燥。肺燥肠热，上则喉痒干咳，咳甚则痰粘带血，血色鲜红，胸胁串痰;下则腹热如焚，大便水泄如注，肛门热痛，甚或腹痛泄泻，泻必艰涩难行，似痢非痢，肠中切痛，有似鞭梗，按之痛甚，舌苔干燥起刺，兼有裂纹。
将"中药黄芩的作用与功效及食用方法"
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