固有免疫模式识别受体与药物研

范文一：固有免疫模式识别受体与药物研究

综述与专论

固有免疫模式识别受体与药物研究

庞红艳,刘耕陶

(中国医学科学院北京协和医学院药物研究所,北京100050)

[摘要] 固有免疫细胞可通过模式识别受体直接识别和结合病原体病原相关分子模式而被激活,启动机体免疫防御反应,在识别和清除病原体的过程中起重要的作用。文中介绍了2种重要的固有免疫识别受体Toll样受体(Tolllikereceptors,TLRs)和核苷酸结合寡聚化结构域(nucleotidebindingoligomerzationdo-main,NODs)受体家族,论述了感染性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤、中枢神经系统疾病等与模式识别受体的关系和相关的药物研究靶点,并介绍了TLRs为靶点的药物和NOD2配体胞壁酰二肽(muramyldipeptide,MDP)衍生物的研究现状和应用前景。

[关键词] 固有免疫;模式识别受体;Toll样受体;核苷酸结合寡聚化结构域受体家族[中图分类号]R966;R967 [文献标识码]A [文章编号]1003-3734(2008)-05-0353-06

Pattern-recognitionreceptorsanddrugresearch

PANGHong-yan,LIUGeng-tao

(InstituteofMateriaMedica,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPeking

UnionMedicalCollege,Beijing100050,China)

[Abstract] Innateimmunecellscanbeactivatedbyrecognizingthepathogen-associatedmolecularpattern(PAMPs)throughpattern-recognitionreceptors(PRRs).ThePRRshaveimportantfunctionsinpathogenrecogn-i

tionandclearance.Inthisreview,theTol-llikereceptors(TLRs)familyandnucleotidebindingoligomerizationdomain(NODs)familywereintroduced,andtheimportantrolesofPRRsininfection,inflammation,allergy,au-toimmunedisease,cancerandneurodegenerativediseasesandthepossibilityoftherapeutictargetingPRRswerediscussed.ThecurrentresearchstatusandpotentialapplicationofdrugstargetingTLRsandNOD2agonistswerea-l

socommented.

[Keywords] innateimmunity;pattern-recognitionreceptors(PRRs);Tol-llikereceptors;nucleotidebind-ingoligomerizationdomainfamily

固有免疫是生物体在长期进化过程中形成的防御机制,主要特点是固有免疫细胞表面或胞内的受体可识别多种/非己0异物共同表达的模式分子,经特殊的信号转导途径表达效应分子以产生免疫效应。这种存在于固有免疫细胞的能识别病原微生物或宿主凋亡细胞的某些共有的特定分子结构的受体称为模式识别受体(patternrecognitionreceptors,PRRs),PRRs识别结合的配体分子,即病原微生物某些共有的高度保守的分子结构或凋亡细胞某些共有的特定分子结构,称为病原相关分子模式(patho-gen-associatedmolecularpatterns,PAMPs)

[1,2]

bindingoligomerzationdomain)是PRRs的两大家族,

表达在不同免疫细胞或非免疫细胞的表面或细胞内,越来越多的证据显示某些TLRs和NODs成员与多种疾病密切相关,如感染性疾病、过敏性疾病、自身免疫性疾病、神经退行性疾病以及肿瘤等,因此TLRs和NODs的结构、配体、信号通路和功能的研究为多种疾病的预防和治疗提供了理论基础和新的药物靶点。

1 PRRs的组成、结构和信号途径1.1 TLRs的组成与结构

目前发现人类TLRs家族成员至少有10个

[3]

。,

TLRs(Tolllikereceptors)和NODs(nucleotide

*基金项目:美国国立卫生院(NIH)资助项目(U01AI-61092-01)

可以分别识别并结合多种PAMPs,TLR1,2,4,5,6

)

存在于细胞膜上,TLR3,7,8,9存在于细胞质中,TLR1与TLR2联合(TLR1/2)识别三酰基脂肽,

TLR2识别脂蛋白和G菌的肽聚糖结构,TLR3识别病毒双链RNA结构,TLR5识别鞭毛蛋白,TLR4识别G菌的脂多糖(LPS),TLR6与TLR2联合(TLR2/6)识别二酰基脂肽,TLR7和TLR8识别单链RNA,TLR9识别非甲基化的CpGDNA,目前还没有确认TLR10的配体。

TLRs是Toll/IL-1受体(Toll/Interleukin-1re-ceptors,TIR)超家族的成员,主要由位于胞膜外区的富含亮氨酸重复序列(leucine-richrepea,tLRR)结构域和胞内的TIR结构域组成,LRR结构的主要功能是与配体识别并结合,而TIR结构域是启动下游信号传导的关键。1.2 TLRs的信号途径

TLRs的LRR结构域与配体结合后,胞内的TIR结构域通过嗜同作用(homophilicinteraction)募集下游含有TIR的接头分子,已发现在TLRs信号通路中有4种重要的接头分子,即髓分化因子88(my-eloiddifferentiationfactor88,MyD88),Mal(Myd88-a-dapterlike),TRIF(TIR-domain-containingadeptormoleculeinducingIFN-B)和TRAM(Tri-frelatedadap-tormolecule),TLR的信号转导途径常分为MyD88依赖途径和MyD88非依赖途径,多数TLRs包括TLR1,2,4,5,6,7和9信号中都有MyD88的参与。1.2.1 MyD88依赖性信号途径 MyD88的N-和C-末端分别有一个死亡受体结构域和TIR结构域,TLRs与相应配体结合引起受体(同源或异源)二聚化,受体胞质区TIR通过嗜同作用募集MyD88接头蛋白,MyD88通过死亡结构域(deathdomain,DD)嗜同作用募集含有死亡结构域的IL-1受体相关激酶(IL-1R-associatedkinases,IRAKs),IRAK通过磷酸化作用被激活,与肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNFR-associatedfactor6,TRAF6)结合,并进一步与TAB-1,TAB-2和TGF-B激活的激酶(TGF-B-ac-tivedkinase,TAK)1形成复合物,TAK-1再激活IKKA/IKKB/IKKC(IJBkinase),IKKB将IJB磷酸化,磷酸化的IJB通过泛素化降解,NF-JB被解离进入核内,启动多种炎性细胞因子、黏附分子基因的转录表达。另外,TLRs还可以活化MAPK(Mitogen-ac-tivatedproteinkinasesignalingcascades)途径,活化多种转录因子如AP-1,Elk-1等。1.2.2 MyD88非依赖性途径研究发现,MyD88缺陷小鼠对TLR2,TLR7和TLR9配基引起的刺激)

)

[4]

不仅失去产生炎症因子的能力,活化NF-JB和JNK的效应也丧失,然而TLR4配基LPS诱导的效应依

[5]

然存在,只是产生的时相比野生型小鼠要晚,这个结果提示当用LPS进行刺激时,还存在一种MyD88非依赖的途径,此外,TLR3的配基dsRNA也能使MyD88缺陷的巨噬细胞NF-JB活化,并且能活化转录因子干扰素调节因子-3(interferon-regulato-ryfactor-3,IRF-3),表达IFN-B,提示TLR3也利用了MyD88非依赖型途径。之后的研究发现,接头分子TRIF和TRAM介导了MyD88非依赖途径,TRIF对TLR3和TLR4的信号转导相当重要,可以活化IRF-3,随后合成IFN-B,然后引起一些IFN诱导基因的表达。TLRs与相应配体结合后引起的信号转导过程见图1

。

图1 TLRs的信号途径

1.3 TLRs的内源性配体

[5]

某些内源性分子可以通过TLRs信号途径激活单核-巨噬细胞系统,并促使树突细胞成熟,为了区分微生物来源的病原体相关分子模式,将这些分子称为TLRs的内源性配体。热休克蛋白(heatshockprotein,HSPs)如Hsp60,Hsp70,Hsp90以及位于内

[6,7]

质网的gp96,可以激活单核细胞、巨噬细胞,诱导树突细胞分泌细胞因子肿瘤坏死因子-A(TNF-A),白介素-1(IL-1),IL-6和IL-12,并释放NO和C-C趋化因子,上调MHC?类和MHCò类分子和辅刺激分子CD80,CD86的表达,促使树突细胞成熟,另外,纤维蛋白原、硫酸肝素、mRNA等也具有相同的诱导效应。随后发现Hsp60,Hsp70和gp96是TLR2和TLR4共有的配体,纤维蛋白原、表面活性物质蛋白-A、透明质酸以及硫酸肝素也是TLR4的内源性配体。此外,细胞坏死或凋亡后释放出来的

[8]

mRNA或其他RNA在形成双链结构时,就会成为TLR3的内源性配体。内源性分子的释放意味着机体存在组织损伤或者感染,为某些非感染性炎症、自身免疫性疾病的病因解释提供了理论依据。也有些研究对TLRs内源性配体的作用提出了

[9]

质疑,因为除了mRNA,以上内源性分子的受体主要是TLR2和TLR4,虽然某些TLRs能够识别几种结构不同的配体,但是TLR2和TLR4却能够区分识别结构类似的LPS和细菌脂蛋白,而所报道的内源性配体结构差异非常大,但是TLR2和TLR4却没有能力区分,因此认为在研究的过程中可能存在LPS或脂蛋白的污染,对于内源性配体的存在问题尚需进一步研究探讨。1.4 NODs

NODs是最近几年发现的位于胞浆内的一组PRRs,目前发现有20多个成员,包括NOD1,NOD2,cryopyrin和Apa-f1等。大多数NODs家族成员含有3个不同的功能结构域:N末端效应结构域(effector-bindingdomain,EBD),中央的核苷酸结合位点(nu-cleotide-bindingsite,NBS)和富含亮氨酸重复序列(leucine-richrepea,tLRR)的C末端配体识别区域(ligand-recognitiondomain,LRD)。NBS对于NOD的寡聚化和活化非常重要,EBD结构域介导嗜同种蛋白-蛋白相互作用,该区域是可变的,可以是caspase募集区域(caspase-recruitmentdomain,CARD),也可以是pyrin区域(pyrindomain,PYD)

[10,11]

制剂IJB被催化磷酸化后被蛋白酶降解,NF-JB被释放,进入细胞核,与相应的靶基因结合,诱导促炎

细胞因子pro-IL-1B的合成和IL-1B的产生。此外,NOD蛋白还可能通过CARD-CARD同嗜性作用,增加Caspase-1或其他Caspase的活性,可能参与IL-1或IL-18的加工以及诱导细胞凋亡,这可能是一种通过细胞死亡的方式清除病原微生物的机制。2 PRRs与疾病的关系和药物研究

PRRs是机体免疫防御反应启动的关键环节,被相应的PAMP识别后不但能启动固有免疫防御反应,通过吞噬作用、氧依赖和氧非依赖杀菌系统直接杀伤、清除内外源性病原体,还可以通过抗原提呈作用启动特异性免疫应答和通过分泌多种细胞因子参与和促进炎症反应。随着PRRs及其配体结构、信号转导过程以及功能的阐明,某些疾病发病机制也逐渐明确,根据疾病发展的免疫学机制,设计以PRRs信号系统为靶点的药物来调节机体免疫功能,预防或治疗相关疾病是近年来研究的热点,在感染性疾病、过敏性疾病、炎症相关疾病、肿瘤的治疗以及疫苗设计等方面具有广阔的发展空间。2.1 感染性疾病

炎症是机体清除病原体时发生的应答反应,然而,过度的炎症反应对机体可能是致命的,如脓毒血症中,细菌及其代谢产物过度活化了宿主的免疫反应网络,产生大量炎症因子,导致多器官衰竭、心血管系统的崩溃以及休克、死亡。TLRs效应与脓毒血症的发病机制密切相关,因此,控制TLRs有利于脓

[5]

毒血症休克的治疗,主要有3种策略:1用可溶性TLRs结合并中和微生物配基,阻止其与免疫细胞上的受体结合。o用抗体或小分子受体阻滞剂阻断配体或蛋白-配体复合物与受体的结合。?用特异的小分子物质阻断由配体-TLRs相互作用引发的信号通路的传导。

?型IFNs可以活化抗病毒机制,TLR3,TLR7,TLR8和TLR9可以识别核酸配基,诱导树突细胞和巨噬细胞产生IFN-A和IFN-B,TLR4也能诱导IFN-B,因此,TLRs的激动剂可以用于抗病毒的辅助治疗,咪唑喹啉(Imidazoquinoline)化合物咪喹莫特(imiquimod,R837)和resiquimod(R848)是人工合成的低相对分子质量的免疫调节剂,其受体是TLR7和TLR8,可以在多种细胞中诱导?型IFNs和其他

[12]

细胞因子的合成,能有效抑制多种病毒感染。目前,咪喹莫特已经成功地用于临床局部治疗人乳头瘤病毒引起的生殖器疣

[13]

,均属死

亡结构域超家族。NOD1和NOD2是目前研究比较清楚的具有代表性的成员,可以识别肽聚糖(pept-idoglycan,PGN)相关的结构,其中NOD1特异性识别PGN的一种产物内消旋二氨基庚二酸(meso-dia--minopimelicacid,meso-DAP),主要存在于G菌,NOD2主要结合胞壁酰二肽(muramyldipeptide,MDP),存在于G菌和G菌中,所以推测NOD2可能是细菌肽聚糖降解产物的普遍受体。

NODs识别后的信号通路:以NOD1,NOD2的信号转导为例,细菌被吞噬后,胞壁的PGN降解产生meso-DAP或MDP,被转移到胞浆,分别激活NOD1或NOD2,在非活化状态,NOD的LRR和NBS结合,保持分子处于折叠状态,当NOD1和NOD2通过LRR和配体结合后可以打开,通过NBS发生自身寡聚化,募集下游效应器分子RICK,RICK含丝氨酸-苏氨酸激酶,活化的RICK和IKK复合物(IKKC/IKKA/IKKB,即IJB激酶)与调节亚基IKKC结合,并活化催化亚基IKKA和IKKB,与NF-JB结合的抑

。

)

最近的研究显示,PRRs在肠道固有免疫中起着关键性的作用,TLRs与NOD2参与肠道免疫防御和组织修复,维持肠黏膜与肠道共生菌群的动态平衡,TLRs信号保护肠上皮细胞屏障,维持肠道的免疫耐受,抑制过敏反应,避免过强的炎症效应,而NOD2信号发挥抗微生物活性,阻止病原体的侵袭,这2种受体分子表现出截然相反的特征,确保肠黏膜与共生菌之间的平衡,当两者之间的平衡遭到破坏,就会导致组织损伤和肠黏膜的炎症反应。因此PRRs激动剂或抑制剂都有可能作为治疗药物。2.2 过敏性疾病

TLRs是过敏性疾病如哮喘的治疗靶点。对哮喘患者的血液、支气管灌洗液和支气管黏膜活组织检查的结果显示,Th2型细胞明显被激活,产生IL-4,IL-13和IL-5,调节IgE的产生,而IgE是过敏性疾病的关键因子,某些TLR的配基如CpGDNA(TLR9的配基)是Th1型细胞的诱导剂,可将Th2驱动的炎性反应为主的效应逆转为具有保护性的Th1型免疫反应,阻止炎症反应的发展。但是,哮喘症状一旦稳定下来并发展到慢性阶段,如果遭遇细菌或病毒感染,症状经常会恶化,表现为间歇性气短、咳嗽、哮喘或者与呼吸道狭窄有关的胸闷,其机制可能是TLRs引发炎症提高了气管的敏感性,在慢性阶段,应用TLRs阻滞剂可能对防止哮喘恶化有益。因此,根据哮喘的不同发展阶段有选择性、适当地应用TLRs激动剂或阻滞剂进行治疗才是可取的治疗手段。2.3 自身免疫性疾病

环境因素是自身免疫性疾病发病的一个重要原因,研究发现,微生物感染在多种自身免疫性疾病发病中起着关键的作用,如:1型糖尿病、系统性红斑狼疮、心肌炎、类风湿关节炎以及多发性硬化症等

[16]

[5,15]

[14]

结构激活TLR9是避免发生自身免疫性疾病的策略。研究发现目前临床用于治疗自身免疫性疾病的

一些药物可以干扰TLR信号,例如CpG-DNA与TLR9的相互作用需要在酸性条件下进行,氯喹是一种强碱性药物,可以抑制细胞浆的酸化,抑制CpG-DNA诱导的免疫反应。2.4 肿瘤

Seya等

[17]

和Okamoto等

[18]

研究认为,某些微

生物组分能通过激活TLRs的信号通路活化机体免疫系统,具有抗肿瘤的效果。弗氏佐剂的活性成分卡介苗细胞骨架(BacillusCalmette-Guerincellwallskeleton,BCG-CWS),其受体是TLR2和TLR4,能够增强细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)和巨噬细胞的功能,具有明显的抗肿瘤活性。OK-432是酿脓链球菌经青霉素杀灭并冻干的制备物,表现出了抗多种恶性肿瘤的活性,后来证明从OK-432中分离出来的一种脂磷壁酸相关的分子OK-PSA是抗肿瘤的活性成分,其活性是通过TLR4介导的。细菌的DNA含有特有的非甲基化的CpG二核苷酸结构,能够通过TLR9增强对肿瘤的细胞和体液免疫反应,核酸的结构类似物imidazoquino-lines,oxoribine和broprimine是TLR7的配体,具有免疫调节和抗肿瘤效应,imidazoquinolines对慢性淋巴细胞白血病的治疗作用尤其突出,能增加肿瘤细胞对细胞毒性T细胞、免疫毒素和一些化疗药物的敏感性,推测其将来可能会与放疗、化疗、单克隆抗体以及肿瘤疫苗合用,目前?期临床试验正在进行[19]

中。但是也有某些研究显示TLRs信号转导通路可能能够加快肿瘤的发展

[20]

,其可能带来相反的效

果,因此,TLRs系统是一把双刃剑,在应用时需要非常小心。

2.5 中枢神经系统疾病

研究发现许多神经退行性疾病,如老年痴呆、多发性硬化症、帕金森病等的病理过程与炎症相[21,22]关。中枢神经系统具有自身的免疫系统,小胶质细胞是常驻中枢神经系统的类似巨噬细胞的一个细胞群体,是目前公认的对脑损伤和疾病发生反应的中枢免疫细胞,被活化后具有抗原提呈和释放炎症因子的功能,在神经系统的免疫调节、组织修复以及细胞损伤方面有重要作用。正常情况下,小胶质细胞处于静息状态,细胞损伤和感染可以将其激活,启动脑内的固有免疫反应,是中枢神经系统抵御病原体入侵的第一道防线,但是其释放的免疫介质如:毒性游离基、细胞因子、谷氨酸盐等可以造成神经元

,其发病机制与DCs的功能以及TLRs信号密

切相关。DCs在抗微生物感染和控制免疫耐受方面

具有关键性的作用,不成熟的DCs不仅提呈微生物抗原,同时还有自身抗原,在缺乏刺激信号时,DCs保持不成熟状态,为T细胞提供耐受信号,一旦出现刺激信号,会促使DCs成熟,启动特异性免疫反应。TLRs是DCs刺激信号的受体,TLRs信号的激活可以打破免疫耐受,诱发自身免疫性疾病。TLR9识别自身DNA中的CpG结构可能是系统性红斑狼疮的发病原因之一,来自狼疮患者的免疫复合物可以结合TLR9激活树突细胞产生细胞因子、趋化因子和IFN-A,因此阻止自身DNA的CpG)

)

损伤,引起神经细胞的缺氧、缺血、退化、变性等。Bsibsi等的研究发现人的小胶质细胞表达多种TLRs,星形胶质细胞和少突胶质细胞主要表达TLR2和TLR3,免疫组化的方法检测正常和多发性硬化患者脑和脊髓样品,发现在有炎症的中枢神经组织中,TLR3和TLR4的表达量明显增加。小鼠小胶质细胞TLR1-9都有表达,经各种配体刺激或用各种脑脊髓炎病毒感染小鼠小胶质细胞,会引起多种炎症因子和趋化因子的表达,MHCò类分子和辅

[22]

刺激分子的表达也增高。因此,TLRs的抑制剂对慢性炎症相关的神经退行性病变可能具有治疗作用。2.6 以TLRs为靶点的药物研发

目前很多生物技术公司和医药公司正致力于以TLRs为靶点的药物开发研究

[23]

[21]

移,延长患者生存时间,是具有应用前景的肿瘤免疫治疗剂

[26]

。Murabutide与抗逆转录病毒治疗

(HAART)联合用于HIV的治疗,可以使长期

HAART不成功的HIV患者的CD4细胞的数量增加,血小板计数增加,并使患者病毒载量降低,转阴率增加

[27]

。因此,MDP的衍生物具有开发和临床

应用前景。3 展望

自从哺乳动物的PRRs被发现后,固有免疫系统的分子机制很快得到了阐明,研究发现多种疾病包括感染性疾病、炎性相关疾病、自身免疫性疾病等与PRRs有关,基于PRRs为靶点的药物研究是目前的热门领域,有些传统的药物作用机制得以阐明,如卡介苗等,目前也有一些具有前景的药物正在开发中。研究证明根据疾病的发病机制和发展阶段选择合适的PRRs的激动剂或阻滞剂进行治疗是有效的,但是仍有很多问题需要解决,如:由于机体免疫网络的复杂性和PRRs影响的广泛性,基于PRRs的药物有可能带来严重的不良反应,如何控制药物的治疗作用和不良反应之间的平衡是此类药物面临的关键问题。从药理学的观点来看,本领域的研究仍然处于起步阶段。在药物研究方面,许多中草药活性成分具有抗炎免疫调节作用,这类活性成分对固有免疫模式识别受体的影响如何?目前,这方面的研究甚少,应是一个值得深入探讨的方向。以TLRs为靶点研制新的药物需要对其在各种疾病发病机制中的作用及信号通路进行更加深入的研究。

[作者简介] 庞红艳(1975-),女,博士研究生,主要从事免疫药理学方面的研究。联系电话:(010)63165203,E-mai:lhongyp@imm.ac.cn。

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proteinsasactivatorsoftheinnateimmunesystem[J].Trends

,大多处于临床前

研究阶段,咪喹莫特是惟一被批准的TLR7的激动

剂,用于外用治疗乳头瘤病毒引起的疣和光化性角化病,其他有一些TLRs3,4,7,8,9的激动剂目前正在临床试验阶段,大部分是针对免疫性治疗肿瘤和病毒性疾病,如Dynavax公司的TLR9激动剂用于治疗结肠直肠癌、何杰金淋巴瘤,Ideraps公司的IMO-2055治疗肾细胞癌,TLR7激动剂ANA975用于丙型肝炎病毒的治疗,TLR9的激动剂作为乙肝病毒疫苗的佐剂都处于临床试验阶段,此外TLR4的阻滞剂Eritoran(E5564)用于治疗脓毒症的研究也已进入ó期临床阶段。以TLRs为靶点的药物开发具有光明的前景。2.7 胞壁酰二肽(MDP)衍生物与药物研究

NOD2的配体MDP是分枝杆菌细胞壁中具有免疫佐剂活性的最小的结构单位,最初的研究认为MDP可以替代福氏完全佐剂中的整个灭活分枝杆菌,促进机体对外源抗原的特异性免疫反应,还可以作为免疫调节剂在一定程度上增强机体对感染和肿瘤的非特异抵抗力,但是由于MDP的亲水性较强,难以穿透细胞膜,在体内迅速消除,以及体内实验MDP可以引起发热、嗜睡、厌食和新陈代谢亢进等不良反应影响了其应用,因此,对MDP进行结构改造,合成活性好的结构类似物作为疫苗的佐剂或免疫调节剂用于感染和肿瘤的治疗成为药物研究领域内的一项重要课题。MDP的衍生物如MDP-Lys可以增加重组乙肝病毒表面抗原、灭活汉塔病毒等多种病毒疫苗的免疫原性,可以发展作为疫苗的佐剂用于抗病毒和抗肿瘤治疗

[25]

[24]

。L-MTP-PE的临

床试验结果显示能有效抑制骨肉瘤术后复发和转

)

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编辑:杨青/接受日期:2007-11-20

n关于举办第九届全国青年药学工作者最新科研成果交流会的通知(第一轮) 中国药学会主办的第九届全国青年药学工作者最新科研成果交流会将于2008年5月底在北京市召开。现将会议有关事宜通知如下。

1.征文范围:我国药学学科各分支专业(中药与天然药物、药理、药剂、抗生素、药物分析、药物化学、生化与生物技术药物、制药工程、医院药学、老年药学、海洋药物、药事管理、军事药学、药物流行病、药物经济学、药学史等)的研究论文及近二年内最新科研成果论文,均在应征范围。论文要求立题明确,条理清晰,实验方法科学,具有创新性和前瞻性,并应为没有公开发表。

2.征文对象:面向全国高等医药院校、科研院所、医疗机构、医药企业等机构青年科技工作者。论文第一作者必须是年龄在40岁以下(1968年1月1日以后出生)的青年科技工作者。欢迎港澳台和海外归国的青年科技人员参会;欢迎有关单位领导和专家积极推荐和支持本单位的优秀青年科技工作者参会。

3.征文要求:论文格式及要求,请务必参照5中国药学杂志6。应征论文字数限4000字以内(包括参考文献),为便于论文评审,请务必用A4纸打印论文一份,同报名回执表一并寄至中国药学会学术部孙文虹收,地址:北京市朝阳区建外大街四号建外SOHO九号楼18层1802室,邮政编码:100022;同时必须将论文以word格式E-mail至sunwenhong2002@163.com或yxhwag@sina.com。寄送论文时,请附单位介绍信和本人身份证复印件。征文截止时间为2008年4月20日。

4.联系人和联系方式:中国药学会学术部:孙文虹、鲁毅、王爱国,地址:北京市朝阳区建外大街4号建外SOHO九号楼18层1802。邮编:100022,电话:(010)58699275-819/820,传真:(010)58699125,E-mai:lsunwenhong2002@163.com或yxhwag@sohu.com。

会议具体时间和地点,请及时参见2008年4月下旬发出的第二轮通知。可从中国药学会网站(www.cpa.org.cn)查询。

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范文二：toll样受体作为模式识别受体在先天免疫中的作用

模式识别受体在先天免疫中的作用：Toll样受体最新研究进

展

Toll样受体作为识别病原保守结构的成分，其发现大大促进了我们对机体是如何感知病原入侵、引起先天免疫反应并启始针对特定病原的适应性免疫反应的认识。尽管TLRs对宿主防御是很关键的，但已经越来越明确，TLR信号传递负性调节的缺失，以及TLRs对宿主自身分子的识别，都与炎症反应和自身免疫疾病的发病机理有密切的关系。而且，现在已经清楚的知道，TLRs和最近证实的胞浆先天免疫感受器的相互作用，对发动有效的免疫反应是至关重要的。本文将阐述TLR在宿主防御和疾病中的生物学作用的最新研究进展。在过去的十年中，人们对先天性免疫识别细菌成分以及它在宿主抵抗感染中的关键作用的认识，已经取得了极大的进步。早期的观点认为先天性免疫反应非特异性识别细菌;然而，在19世纪90年代中期，TLRs的发现表明：先天性免疫对病原的识别实际上是特异的，它依赖由生殖细胞编码的PRRs，PRRs已经进化为识别涉及病原相关分子模式（PRRs）的外源病原成分。TLRs是I型跨膜蛋白，包括富含亮氨酸重复区的胞外区、跨膜区和胞内区。胞外区介导PAMPs的识别；胞内区的TIR结构域是信号向下游转导所必需的。截至目前，已经分别在人和小鼠身上发现了10种和12种可以发挥功能的TLRs，其中的TLR1-TLR9是二者共有的。由于一种逆转录病毒的插入，小鼠的TLR10并不发挥作用，而TLR11、TLR12和TLR13已经在人的基因组中丢失。对每一种TLR缺陷型小鼠的研究表明，它们各自在PAMPs识别和免疫反应中发挥不同的作用。几种TLR胞外区晶体结构的说明为证实一些PAMPs可以充当TLRs的配体提供了结构上的认识。TLRs可以识别来自于细菌、病毒、真菌和寄生虫等微生物的包括脂质、脂蛋白、蛋白和核酸等成分。PAMPs可在细胞的不同部位被TLRs识别，这些部位包括胞浆膜、内噬体、溶酶体和内噬溶酶体。TLRs在细胞上的合适定位，对于配体结合的难易、对诸如核酸之类的自身分子耐受的维持以及下游信号转导都是至关重要的。

自从包含TIR结构域的接头分子My88被发现后，TIR信号转导通路得到了大量的研究。随后其它包含TIR结构域的接头分子的发现表明，不同的TLRs选择性的招募不同的接头分子，针对感染的细菌做出特异性免疫反应。研究表明，特定类型细胞的信号通路决定他们的免疫性能。例如，浆细胞样DC和炎性单核细胞有特定的信号通路控制抗病毒反应，可能其它的细胞就没有。最近，TLR信号传导领域的科学家投入了大量的注意力在转录后修饰、信号分子空间结构调整以及TLR靶基因的特性描述的研究。

TLRs发现后，包括RLRs和NLRs在内的几类细胞浆模式识别受体也先后被发现。RLR家族主要包括3个成员，RIG-1、Mda5和LGP2，它们主要识别RNA病毒。NLR家族包括超过20个成员，其中的一些可对多种PAMPs、非PAMP粒子和细胞应激做出反应，并引发包括分泌IL-1β的炎性反应。另外，还有一些细胞表达自今未能鉴定的PRRs，它们识别双链DNA，并诱导产生Ⅰ型干扰素。这些PRRs可由包括非免疫细胞在内的许多种细胞表达，并且，有时识别与TLRs相同的PAMPs。这些PRRs和TLRs一起在先天和获得性免疫反应中发挥重要作用。

图Ⅰ：PAMP被细胞表面的TLRs识别，TLR4和MD2一起与LPS结合形成复合物。LPS六条链中的5条与MD2结合，剩下的一条与TLR4结合。受体多聚体的结构是由两个拷贝的TLR4-MD2-LPS复合物组成，通过招募包含TIR结构域的接头分子TIRAP（mal）和MyD88（MyD88依赖通路）来启动NF-κB早期活化的信号传递。继而，TLR4-MD2-LPS复合体被内在化并保留在内噬体中，在内噬体中它通过招募TRAM和TRIF来引发导致IFR3和晚期NF-κB活化的信号转导，进而诱导Ⅰ型干扰素的生成（TRIF依赖通路）。早期和晚期NF-κB的活化对于炎性细胞因子的诱发都是必要的。TLR2-TLR1和TLR2-TLR6异二聚体分别识别三酰脂肽和二酰脂肽。三酰脂肽的三条链中的两条与TLR2结合，另一条与TLR-1（没有TLR-6）的疏水通道结合。TLR2-TLR1和TLR2-TLR6通过招募TIRAP和MyD88来诱导NF-κB的活化。TLR5识别鞭毛蛋白，并通过MyD88活化NF-κB。

尽管TLRs是抗感染的必不可少的保护性免疫，但不合适的TLR反应会导致严重的慢性炎症反应和全身性自身免疫疾病。确实，TLR介导的反应的负反馈调节缺失的小鼠会患这些疾病。更重要的是，越来越多的证据表明，死亡细胞产生的内源分子或是某些病理状态会刺激TLRs，并导致炎性反应和自身免疫疾病的发展或加速。

在这篇文章中，我们研究了结构生物学、细胞生物学以及TLRs信号转导的现有认识，然后，我们会描述TLRs和胞浆PRRs在适应性免疫反应中的作用，最后，探讨TLR介导的内源分子的识别，以及它们在免疫系统中的作用的最新研究进展。

细胞表面TLRs的结构和配体

根据TLRs在细胞的结合位置和各自的PAMP配体，主要将其分成两个亚家族。一个由TLR21、TLR2、TLR24、TLR5、TLR6和TLR11组成，它们在细胞表面表达，并识别细菌表面的成分，如脂、脂蛋白和蛋白；另一家族有TLR3、TLR7、TLR8和TLR9构成，它们仅在胞内小泡中表达，如内质网、内噬体、溶酶体和内噬溶酶体，它们识别微生物核酸。 TLR4，作为TLR家族最早发现的成员之一，被确认正是长期探求的对LPS做出反应的受体，LPS是革兰氏阴性菌外膜的成分，可以引起脓毒性休克。TLR4与MD2在细胞表面形成复合物，它们共同充当LPS的主要结合构件。对TLR4-MD2和LPS

形成的复合物的

结构的研究表明：LPS六条脂肪酸链中的五条结合在MD2的疏水袋上，而剩下的一条链被暴露在MD2的表面与TLR4结合。磷酸基团也与带正电的TLR4残基相互作用。受体多聚体的最终构造是由两个TLR4-MD2-LPS复合物组成的，它通过招募胞内接头分子来启动信号转导。其它的一些蛋白，如LBP和CD14等，也参与了LPS的结合。LBP是可结合LPS的胞浆可溶蛋白，CD14是一个由糖基磷脂酰肌醇连接的，包含富含亮氨酸重复的蛋白，该蛋白可结合LBP，并传递LPS-LBP给TLR4-MD2复合物。除了结合LPS，TLR4还参与呼吸道合胞病毒融合蛋白、小鼠乳房肿瘤病毒封装蛋白、肺炎链球菌溶血素和植物源的抑制细胞生长的药物紫杉醇的识别，尽管TLR4和这些配体相互作用的在结构上的认识还没有得到证明。

TLR2广泛参与来自细菌、真菌、寄生虫和病毒的PAMPs的识别，包括细菌表面的脂肽、革兰氏阳性菌的肽聚糖和磷壁酸、分支杆菌的阿拉伯木聚糖脂、真菌的酵母聚糖、克氏锥虫的tGP2粘蛋白以及来自麻疹病毒的红血球凝集素蛋白。TLR2通常与TLR1或TLR6形成异二聚体。TLR2-TLR1异二聚体特异识别革兰氏阴性菌的三酰脂肽和支原体，而TLR2-TLR6异二聚体识别革兰氏阳性菌的二酰脂肽和支原体。有研究从结构认识上证实了这些异二聚体区分脂肽结构的机制。TLR2-TLR1和TLR2-TLR6共享一个m样结构（图1）异二聚体在TLR2-TLR1-配体复合物上，pam3CSK4的三条链中的两条与TLR2结合，而第三条链与TLR1的疏水通道结合。这样三酰脂肽的识别就实现了。然而，因为TLR6没有疏水通道，所以TLR2-TLR6异二聚体就不能够识别三酰脂肽。同时，TLR1和TLR6不同的脂质结合袋都负责脂蛋白的区分。而且，TLR2能够与细胞表面协助PAMP识别的共受体一同起作用。这些共受体包括CD 36和dectin-1，CD36可与TLR2-TLR6异二聚体共同介导部分TLR2激动剂的感知，而dectin-1是一种C型凝集素，可以结合真菌β葡聚糖，并诱导其内在化。尽管确信，TLR2激动剂主要诱导产生炎性细胞因子、巨噬细胞的非Ⅰ型干扰素及DCs，它还可以响应牛痘病毒感染并诱使炎性单核细胞产生Ⅰ型干扰素，这表明，TLR2在抗病毒反应中具有针对特定类型细胞的作用。看起来，通常是诱使Ⅰ型干扰素产生因素的核酸，并不参与TLR2的活化。

TLR5识别细菌鞭毛的鞭毛蛋白成分（图1）。小肠的CD11c+CD11b+固有层DCs对TLR5有高表达量。固有层DCs在促进产生IL-17的TH17细胞和TH1细胞的分化有非常特殊的作用，同时，对初始B细胞分化成产生IgA的浆细胞以应对鞭毛蛋白也有促进作用。而且，固有层DCs可以产生视黄酸，这使得体液免疫和细胞免疫都能够实现。小鼠的肾脏和膀胱相对于TLR5而言对TLR11有高表达量。TLR11被认为是用来识别导致肾盂肾炎细菌的成分的，因为TLR11缺失的小鼠容易感染这种细菌。TLR11还可以识别来自兔弓形虫的肌动蛋白样分子。

核酸感应TLRs的结构和配体

TLR3最初被认为是用来识别模拟合成的双链RNA（dsRNA）、聚肌胞苷酸（poly（I:C））的，它模拟病毒感染，并通过促进Ⅰ型干扰素和炎性细胞因子的产生来引发抗病毒免疫反应。识别的机制是通过对人的TLR3胞外区结合dsRNA的结构分析来阐明的（图2）。TLR3胞外区有一个大的马蹄样结构，它可能是为了增加表面积并帮助识别dsRNA.在TLR3胞外区凸出表面的侧面，dsRNA结合在N端和C端两个不同的位置，这为TLR3通过C端区域形成同二聚体提供了足够的稳定性。除了识别poly（I:C），TLR3还识别呼吸道肠道病毒的基因组RNA、单链RNA复制过程中产生的双链RNA、病毒（包括呼吸道合胞病毒、脑心肌炎病毒和西尼罗河病毒）以及某些小分子干扰RNA。TLR3通过产生Ⅰ型干扰素和炎性细胞因子来触发抗病毒免疫反应，这表明在抗病毒感染中发挥关键作用。TLR3缺陷的小鼠易于遭受小鼠巨细胞病毒的致命感染，而TLR3缺陷的人更易感染HSV-1。

TLR7最初被确认识别咪唑喹啉衍生物，如咪喹莫特和瑞喹莫德（R-848）和鸟嘌呤类似物，如罗唑利宾（有抗病毒和抗肿瘤的特点），识别来自RNA病毒的单链RNA，如水泡性口膜炎病毒、A型流感病毒和人免疫缺陷综合症病毒（图2）。TLR7还识别合成的多聚尿嘧啶RNA和某些小分子干扰RNA。TLR7在pDCs有高表达量，pDCS在感染病毒后可以产生大量的Ⅰ型干扰素，而pDCs应答RNA病毒诱导产生的细胞因子完全依赖TLR7，这表明TLR7充当单链RNA病毒的感受器。而且，cDCs上表达的TLR7感应细菌RNA类型包括B型链球菌并诱导产生Ⅰ型干扰素。pDCs的TLR7介导的RNA病毒的识别以复制独立的方式发生。病毒被内在化并被招募到内噬溶酶体上，继而触发TLR7介导的对ssRNA的识别并起始抗病毒反应。而且，TLR7还可以识别复制的水疱性口炎病毒，它通过自噬的方式进入胞浆，自噬是溶酶体降解胞内蛋白的过程，这涉及到称为自噬体的具有双层膜的小泡的形成（图2）。在感染水泡性口膜炎病毒后，缺失可诱导自噬体形成的自噬相关蛋白Atg5的pDCs表现出产生α型干扰素缺陷。pDCs表现出基本的自噬体形成。这些发现表明，pDC对于递呈胞质病毒复制中间体给溶酶体是至关重要的，在溶酶体中，TLR7参与它们的识别和随后的抗病毒反应的起始。

TLR8与TLR7是在进化上最相似的。TLR8介导R-848和病毒ssRNA的识别。相对于TLR7缺陷的小鼠，TLR8缺陷的小鼠对这些激动剂反应正常。TLR8在许多组织中都有表达，而在单核细胞中表达量最高，细菌感染后还会上调表达量。

TLR9识别未甲基化的2′-脱氧（CpG）DNA基元，这一结构多见于细菌和病毒，而极少在哺乳动物细胞中出现（图2）。合成的CpG寡聚核苷酸充当TLR9的配体并直接活化DCs、巨噬细胞和B细胞，还促使强烈的TH1反应。DNA寡核苷酸有磷酸骨架时，DNA糖骨架的2′脱氧核糖对于TLR9的识别是非常重要的。相反，在非天然的硫代磷酸骨架存在时，CpG基元是必不可少。TLR9在pDCs中有高表达量，而且它充当DNA病毒感染（如，小鼠巨细胞病毒、HSV-1和HSV-2）的感受器。除了识别DNA，TLR9还直接识别不溶性的结晶疟原虫色素，结晶疟原虫色素是作为恶性疟原虫消化宿主血红蛋白后排毒过程的副产品而产生的。

核酸感应TLRs的细胞定位

如前所述，核酸感应TLRs固定在细胞内的许多个不同的部位。内噬溶酶体酸化过程的阻断能够抑制TLR7和TLR9诱导的反应，这一发现表明，内在化的核酸分子被递呈给内噬溶酶体对于这些TLRs的相互作用是至关重要的。在未受刺激的细胞中，TLR9和TLR7被专门的隔离在内质网中，当接受配体刺激后，迅速的传递给内噬溶酶体（图2）。这种转运是由定植在内质网上的蛋白UNC93B1来调节的，UNC93B1是一个跨12层膜的蛋白。带有一个编码UNC93B1基因错义突变的小鼠，在应答TLR7和TLR9配体以及TLR3配体时，有产生细胞因子和上调共刺激分子的缺陷，这种小鼠对细菌和病毒高度易感。据报道，UNC93B1缺陷与人类患者的HSV-1脑炎有关。来自这些患者的细胞对TLR3、TLR7和TLR9激动剂有低反应性，但是对细胞外的TLRs有完整的反应。UNC93B1特异结合内质网中TLR3、TLR7和TLR9的跨膜区，而且TLR7和TLR9在带有3d变异的DCs中不离开内质网。这些结果共同表明，UNC93B1协助TLR7和TLR9从内质网到内噬溶酶体的传递，这对于这些TLRs诱发免疫反应是必要的。TLRs的运输还受到另两个保留在内质网中的蛋白PRAT4A 和 gp96的调控。PRAT4A分别连接TLR4和TLR9，对于TLR4和TLR9分别被转运到胞浆膜和内噬溶酶体都是必要的。PRAT4A缺陷的细胞没有对TLR2、TLR4和TLR9激动剂的反应，而TLR3介导的反应在这些细胞中是完整的，这表明TLR3和TLR9转运的调控是不同的。

TLR9是已知的有内噬溶酶体中的胞内蛋白酶降解的，它产生一个介导配体识别并起始

信号转导的功能受体（图2）。可能介导TLR9降解的蛋白酶包括组织蛋白酶，如组织蛋白酶B，组织蛋白酶S，组织蛋白酶L，组织蛋白酶H和组织蛋白酶K，以及天冬氨酸肽链内切酶。然而，关于TLR9功能的降解依然存在争议。N末端区域的特殊富含亮氨酸重复的降解使得TLR9不能对配体反应，并且TLR9带正电的N末端区域可能介导与CpG DNA的结合，这表示完整结构在TLR9活化中的重要作用。

图2：胞内TLRs识别PAMP。TLR3识别来自病毒或被病毒感染的细胞的dsRNA。dsRNA结合在TLR3胞外区凸出表面的侧面的N端和C端两个位置，这使得TLR3通过C端区域形成同二聚体。TLR3活化TRIF依赖通路，诱导产生Ⅰ型干扰素和炎性细胞因子。在pDCs，TLR7识别来自内噬溶酶体的ssRNA病毒的ssRNA，并通过MyD88分别活化NF-κB和IRF7，并诱导产生炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素。另外，自噬体也参与了递呈ssRNA到表达TLR7的小泡的过程。TLR9识别来自细菌和病毒的RNA。TLR9通过胞内蛋白酶溶蛋白性降解对向下游的信号传导是必要的。在pDCs中TLR9通过招募MyD88来活化NF-κB和IRF7。TLR3, TLR7 和 TLR9主要以稳定结合的形式定植在内质网上，并转移到内噬溶酶体，然后结合他们的配体。在内质网中，UNC93B1与这些TLRs相互作用，并且对这种转移是必不可少的。gp96缺陷的巨噬细胞在应对TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR7和TLR9受体激动剂时，缺乏细胞因子诱导反应，gp96是内质网热休克蛋白90家族的成员。而且已证实gp96结合TLR9.这些发现表明，不像只调控某些特定TLRs转移的PRAT4，gp96担当TLRs的通用伴侣蛋白。

TLR信号传导中包含TIR结构域的接头分子

每个TLR都引发特定的生物学反应。如，TLR3和TLR4都产生Ⅰ型干扰素和炎性细胞因子反应，而细胞表面TLR1-TLR2,TLR2-TLR6和 TLR5主要诱导炎性细胞因子（图1和2）。这些不同由于包含TIR结构域的接头分子的发现而得到解释，这些接头分子包括MyD88, TIRAP(Mal),TRIF和TRAM,它们被各自的TLR招募，并活化各自的信号通路（图1和2）。MyD88是第一个被发现的TIR家族成员，被除了TLR3外的所有TLRs使用，并活化转录因子NF-κB和有丝分裂原蛋白激酶MAPKs，进而诱导炎性细胞因子。相反，TRIF被TLR3和TLR4使用，并诱导其它的通路，进而活化转录因子IRF3和 NF-κB，随后诱导Ⅰ型干扰素和炎性细胞因子。TRAM 和TIRAP充当类型接头分子，它分别为TLR4招募TRIF，为TLR2和TLR4招募MyD88。因此，TLR信号通路可以大致的分为MyD88依赖型通路和TRIF依赖型通路，MyD88依赖型通路驱动诱导炎性细胞因子，而TRIF依赖型通路同时负责Ⅰ型干扰素和炎性细胞因子的诱导。

TLR4是唯一的同时利用四个接头分子并活化两个通路的TLR（图1）。TLR4最初招募胞浆膜的TIRAP，随后帮助招募MyD88来触发NF-κB和MAPKs的初始活化。TLR4随后经历动力依赖的内吞作用，并被转移给内噬体，然后形成一个有TRAM和TRIF而不是TIRAP和MyD88的信号复合体，进而引发TRIF依赖通路的活化，导致IRF3的活化以及晚期NF-κB和MAPK的活化。因此，TLR4活化MyD88依赖型通路早于TRIF依赖型通路。特别地，两个通路的活化对通过TLR4信号传导的炎性细胞因子的诱导都是必要的，与此相反，对于其它的TLRs，任何一个信号通路的活化都足以诱导产生炎性细胞因子。为什么单一信号通路的活化不能满足通过TLR4信号通路诱导产生的炎性细胞因子需要，仍然是个谜。 MyD88依赖通路

TLRs被它们同源的PAMPs结合后，MyD88招募IL-1相关受体激酶IRAK4, IRAK1, IRAK2 和 IRAK-3（图3）。IRAK4最先被活化，并对NF-κB和MAPK下游的MyD88的活化发挥关键作用。IRAK的活化导致与TRAF6的相互作用，一个E3连接酶催化连接到靶蛋白上Lys63（K63）的多聚泛蛋白的合成，包括TRAF6自身和IRAK1协同二聚E2泛素结合酶UBC13和Uev1A。连接有K63的多聚泛蛋白链结合到TAB2和TAB3的新型锌指型泛蛋白结合域来活化TAK1，TAB2和TAB3是激酶TAK1复合体的调节成分。连接有K63的多聚泛蛋白链还结合到NEMO的泛蛋白结合结构域，NEMO是IKK复合体的必要调节成分，NF-κB的活化需要它。因此，K63多聚泛蛋白链可能负责招募TAK1来形成IKK复合体，然后允许TAK1通过它临近IKK复合体的部分使IKKβ，通过磷酸化和随后的ⅠκB蛋白的降解使NF-κB活化。然而，Ubc13缺陷的细胞对TLR激动剂表现出正常的NF-κB活化，不管NEMO的连接有K63的多聚泛蛋白是否缺陷，这表明在NEMO介导的NF-κB活化中存在不依赖连接K63的泛蛋白的机制。由线状泛素链组装复合的NEMO的头尾相连的线性多聚泛素化已被证明在IKK活化过程中是非常重要的。

TAK1通过诱导MAPK激酶的磷酸化（而不是泛素化）同时活化MAPKs Erk1, Erk2, p38和Jnk，然后活化多种转录因子，诱导AP-1，同时影响翻译。不管有没有正常的NF-κB活化，Ubc3缺陷型细胞表现出削弱的MAPK的活化。但是，负责MAPK活化的Ubc3的直接靶标仍是未知。

MyD88通路的活化导致许多基因的启动，而且其中的一些对依赖NF-κB的转录有关键作用（图3）。这些基因包括I κ B蛋白I κ B δ，它充当NF-κB p50亚基的共诱导活化者，帮助IL-6和IL-12p40的诱导产生；C/EBP δ，它和NF-κB一同最大化IL-6的产生；I κ B-NS，它通过调节NF-κ B p65亚基的DNA结合活性抑制IL-6和TNF；以及ATF3，它通过招募组

蛋白脱乙酰基酶来限制NF-κB活化。

TRIF依赖的通路

TRIF依赖的通路在IRF3和NF-κB都活化后达到高峰（图3）。TRIF招募TRAF6并活化TAK1用于NF-κB的活化，这一过程有可能是通过依赖泛化素的机制，这一机制与依赖MyD88的途径相似。TRIF也可以通过同型RIP相互作用来获得RIP1. TLR3会活化激活与K63有关连的泛素，RIP1会经过这一泛素的处理，并且这一处理过程需要

NF-κB的激活。TRADD伴随着RIP1，缺少TRADD的细胞RIP1泛化素有缺陷，并且得不到NF-κB的活化，这就意味着TRADD参与的RIP1的激活发生在TLP3的下游。Pellino-1是环状Pellino家族的一份子，其控制包括E3的泛素连接，Pellino-1缺失会导致RIP1泛化素的缺失，并且NF-κB无法激活，以响应TLR3受体激动素的作用，尽管MyD88途径的NF-κB激活仍然正常。综上所述，TRIF与TRAF6, TRADD, Pellino-1 ，RIP1组成高蛋白分子传递复杂的信息以用于TAK1的激活，TAK1的激活又反作用于NF-κB 与MAPK的激活。

除了能引导NF-κB的激活以外，TRIF的依赖途径还能引导IRF3的激活与β干扰素的转录。TRIF招募一个包括IKKs TBK1 和IKKi (IKKε)在内的信息传递复合体，这个复合体可以促进IRF3的磷酸化，并且可以引导其向细胞核方向的转运。TBK1-IKKi被TRIF激活需要TRAF3. TRAF3的缺失会损害TLR3引导β干扰素形成的过程，同时对于TLR7, TLR9 和 RLR的引导过程也有影响，这些都表明TRAF3在不同核酸的PRR的β干扰素引导中起着十分重要的作用。

TLR4的信号传递过程中TRAF3也会合并入MyD88的复合体上。但是，是将TRAF3依附于K48关联的泛素化过程，之后经cIAP1 与 cIAP2降解。cIAP1 与 cIAP2都是MyD88信号转导复合物的一部分，但不属于TRAF3复合物。TRAF3的促使降解膜近端的信号转导复合物的转移至细胞质这一过程又促使了TAK1的激活。这些发现都表明TRAF3能促进IRF3的激活，同时抑制MyD88依赖途径。依赖MyD88与TRAF3的依赖途径的在调控上的不同，是通过单一分子，这已在NRDP1的研究中有报告。NRDP1是一个包含环状E3连接酶，其可与TBK1相互作用并且可以通过K63关联的泛化素加强TBK1的激活过程，对上述过程，需要Ubc13的参与。同时它通过它的相互作用，以及MyD88的降解来抑制依赖MyD88的途径。通过这些分子来平衡应激细胞因子和Ⅰ型干扰素的产生量，可能在控制肿瘤细胞扩散和自身免疫疾病起至关重要的作用。

pDCs中的TLR7和TLR9信号通路

TLR7和TLR9信号通路已经得到了广泛研究，试图解释病毒感染后它们诱导产生Ⅰ型干扰素的可能性。pDCs中TLR7和TLR9的特殊之处在于它们都需要MyD88来诱导Ⅰ型干扰素（图3）。在这种情况下，pDCs稳定表达的IRF7 结合MyD88并与IRAK4, TRAF6, TRAF3, IRAK1 和 IKKα形成复合蛋白信号复合物，IRF7被IRAK1与或或IKK α磷酸化，从复合物上脱离，并转移到核内。除了需要磷酸化，IRF7活化可能还需要TRAF6和Ubc13依赖的泛素化。然而，IRAK1, IKK α 和 TRAF3分别地参与了IRF7, MyD88, IRAK4的活化，而TRAF6对IRF7 和NF- κB的活化是关键的。

控制pDCs产生Ⅰ型干扰素的其它成分也已经被发现（图3）。OPNi是由TLR9诱导的一种骨架蛋白前体，它在胞浆中是沉默的，而在pDCs中是MyD88-IRF7复合体的成分。药物抑制磷酸肌醇3 - OH激酶（PI（3）K）能消除IRF7的核易位。而且，mTOR 和p70S6K都是PI（3）K的下游靶标，mTOR 和p70S6K被抑制会打断TLR9和MyD88的相互作用，进而导致IRF7的核转移和Ⅰ型干扰素的诱导被削弱。这些发现表明，在病毒感染期间，

PI(3)K-mTOR通路加速pDCs产生Ⅰ型干扰素。IRF5被结合到MyD88复合物，并控制IL-6 和 IL-12p40的诱导。MyD88-IRF5通路也被许多其它类型细胞的TLRs利用，如巨噬细胞和cDCs。敲除IRF8的pDCs表现出TLR9介导的Ⅰ型干扰素和炎性细胞因子诱导缺失，只有很少的NF- κB活化，这表明可能IRF8和NF- κB共同诱导细胞因子。

CpG-TLR9信号复合体在内涵体中的保留也是pDCs控制抗病毒先天免疫反应的重要机制。A(D)型CpG寡脱氧核苷酸包含一个单一的CpG基元和一个多聚（G）尾巴在硫代磷酸二脂键骨架上，它可以诱导pDCs分泌Ⅰ型干扰素。它和TLR9, MyD88和 IRF7一同pDCs的早期内涵体中稳定保留。相反，B(k)型CpG寡脱氧核苷酸包含多个CpG基元在磷酸骨架上，它可以诱导cDcs产生IL-12和B细胞的活化，它迅速转移到晚期内涵体和溶酶体，导致很少的IRF7活化。

图3：TLR信号通路的概述。TLR介导的反应主要有MyD88依赖型通路和TRIF依赖型通路控制，MyD88依赖型通路被除了TLR3外的所有TLR使用，而TRIF依赖型通路为TLR3和TLR4使用。TRAM 和TIRAP分别是TLR4和TLR2-TLR4复合体的类型接头分子。在cDCs和巨噬细胞，MyD88招募IRAK4, IRAK1, IRAK2 和 TRAF6，并通过活化NF- κ B, MAPK 和 IRF5来诱导炎性反应。TRAF6与TAB2和TAB3一同活化TAK1，并活化IKK复合体构成NeMO 和IKKαβ，并催化IκB蛋白用于磷酸化。NF-κ B 诱导 C/eBPδ , I κBδ, I κB-NS, Zc3h12a, ATF3 和 tristeraprolin (TTP)，进而影响基因编码IL-6, IL-12p40 或TNF。TRIF 招募 TRAF6, TRADD 和TRAF3。TRADD 和 Pellino-1 and RIP1相互作用。RIP1 和TRAF6 共同活化 TAK1，导致MAPK 和NF- κ B的活化。TRAF3 活化激酶 TBK1 和 IKKi 进而磷酸化并活化IRF3，最后，控制Ⅰ型干扰素的转录。Nrdp1参与 TBK1-IKKi 的活化。TLR4信号传递过程中，TRIF依赖通路导致炎性激活。在 pDCs, TLR7 和TLR9与 IRAK4 和 TRAF6一起招募 MyD88，活化诱导炎性细胞因子的IRF5 和 NF- κ B，还活化诱导Ⅰ型干扰素的IRF7。对于IRF7活化，需要IRAK1- 和 IKK α –依赖的磷酸化，而且TRAF3位于这些激酶的上游。OPNi 参与 IRF7 活化，并且OPNi参与 IRF7 活化， IRF8促进NF- κB激活。PI(3)K-mTOR-p70S6K 轴加强 TLR7 和 TLR9信号通路。IRF1在 cDCs 而不是

pDCs中通过TLR7 and TLR9参与 I 型干扰素的诱导。在已发现的TLRs负调节因子中，TANK (抑制TRAF6), A20 (抑制 TRAF6和 RIP1), ATG16A (抑制炎性激活) and SHP-1 (抑制 IRAK1 和IRAK2)被认为是阻止由于增强的或延长的TLRs信号引起的炎性疾病。黄色，TLRs;绿色，刺激因子; 粉色, 负调节因子; 蓝色，靶基因。

TLR信号的负调节

TLR诱导反应的负调节，对于抑制炎性反应和有害的免疫反应是非常重要的。目前，已经发现了在多个水平上抑制TLR信号通路的负调节因子。这些负调节因子包括接头分子的剪切变异体及其相关蛋白，泛素连接酶，脱泛素酶，转录调节因子和小RNA。本文我们重点关注了TLR介导免疫反应的负调节因子，其破坏或变异导致体内持续的炎症。

TANK 结合TBK1和 IKKi，并且与NF- κB 和IRF3的活化都有联系。TANK缺陷的小鼠自发形成自身免疫性肾小球肾炎，这种情况可以通过用抗菌素治疗抑制，或是MyD88和IL-6缺乏。尽管有完整的Ⅰ型干扰素诱导反应，TANK缺陷的巨噬细胞和B细胞表现出更多的NF- κ B活化和在应对TLR配体时产生更多的IL-6。TANK缺陷的细胞还表现出加强的TRAF6 泛素化。因此，TANK还充当巨噬细胞和B细胞TRAF6泛素化的负调节因子（图

3）。

编码自噬相关分子Atg16L1的基因的变异被认为与克罗恩氏病有关。Atg16L1缺陷的小鼠高度易感葡聚糖硫酸酯钠引起的急性结肠炎，可以通过用IL-1 β和 IL-18的抗体治疗来阻止。而且，来自这些小鼠的巨噬细胞表现出更多的半胱天冬酶-1的活化，响应LPS也产生更多的IL-1 β和 IL-18。在缺少Atg16L1时，由LPS导致的半胱天冬酶-1过度活化需要TRIF，这表明Atg16L1负调节TRIF依赖通路，并导致半胱天冬酶-1活化（图3）。而且，取自Atg16L1缺陷小鼠的小肠潘氏细胞表现出应对小肠损伤相关基因的更高表达。因此，Atg16L1对小肠炎症抑制是必要的。

TLR刺激迅速诱导产生调节蛋白Zc3h12a，Zc3h12a包含一个CCCH型锌指结构域和RNA酶结构域。Zc3h12a通过RNA酶活性降解3′非翻译区的IL-6mRNA和IL-12p40mRNA。在应对TLR激动剂时，Zc3h12a缺陷的巨噬细胞持续产生显著多的IL-6和IL-12p40，但是正常量的TNF，而Zc3h12a缺陷的小鼠具有更高的血液免疫球蛋白水平和自身抗体产物。这些结果共同表明，Zc3h12a通过影响mRNA稳定性和阻止自身免疫来负调节TLR诱导的炎性反应（图3）。另一个锌指蛋白，Xfp36，可阻止自身免疫性关节炎的发生。Xfp36结合TNFmRNA3′非翻译区富含AU成分，并通过脱腺苷化移走poly（A）尾巴，进而导致降解（图3）。因此，这些锌指蛋白通过不同的机制来控制mRNA的稳定性。

A20是有TLR刺激诱导产生具有两种酶活性的蛋白，它可作为E3泛素连接酶和脱泛素化酶。体外分析表明，A20通过调节RIP1和TRAF6来限制NF- κ B的活化。A20缺陷型小鼠由于自发的多器官炎症和多种恶病质而过早死亡，这表明A20在体内有抗炎性作用。同时缺失A20和MyD88使小鼠免于过早死亡，并减少这些小鼠的炎症反应。而且，服用抗生素可防止恶病质。因此，A20可以禁止由共生菌诱发的TLR信号。带有编码酪氨酸磷酸化基因SHP-1变异的小鼠，形成炎性损伤与应答TLR刺激时巨噬细胞的异常活化有关。MyD88缺陷抑制这种炎症，这表明SHP-1负性调节MyD88依赖通路。据报道，SHP-1还抑制IRAK1 和IRAK2的功能。

PAMP识别中的非TLR胞浆PRRs

先天免疫系统通过RLRs、NLRs和一种未知的dsDNA感受器识别胞浆PAMPs。RLRs (RIG-I, Mda5和LGP2)是解旋酶，通过接头分子IPS-1来识别病毒的RNA和信号，诱导抗病毒反应。NLRs代表了PRRs的一个大家族，应答包括多种PAMPs、非PAMP粒子和细胞

应激在内的多种刺激。NLRs中，Nod1和Nod2识别细菌细胞壁成分的降解产物，而NLRP3 (NALP3)响应各种刺激形成炎性体复合物，通过半胱天冬酶-1促进IL-1β和 IL-18的分泌。而且，细胞可通过未知通路触发Ⅰ型干扰素的诱导来响应来自病原的dsDNA和自身未能完全降解的dsDNA，尽管STING 和TBK1都是dsDNA触发信号所必需的成分。DAI (ZBP1-DLM1)已被确定为dsDNA的公认胞浆感受器，它在响应dsDNA时增加Ⅰ型干扰素的产生。但是，DAI缺陷型小鼠在用dsDNA刺激时有完整的Ⅰ型干扰素诱导，这表明DAI是多余的。AIM2包含一个pyrin和HIN-200DNA结合结构域，与dsDNA结合，并与ASC形成炎性体，触发IL-1 β产生。半胱天冬酶-1依赖的IL-1 β产生需要AIM2，但是，在应答dsDNA刺激，可递呈DNA给宿主细胞质的牛痘病毒（双链DNA病毒）和兼性细胞内的革兰阴性菌图拉弗朗西斯感染时，AIM2对于Ⅰ型干扰素的诱导不是必要的。而且，AIM2缺陷的小鼠相对于对照小鼠更易遭到F. tularensis的致命感染，可能是因为IL-1 β产生的缺陷。因此，AIM2是dsDNA诱导的IL-1 β生产而不是Ⅰ型干扰素的关键成分。磷酸酶Eya被认为是与STING和IPS-1相互作用的分子，可加强dsDNA和RLR信号传递中编码β干扰素的基因的启动子，尽管其生理学作用尚不清楚。这些类型的胞浆PRRs可由许多细胞表达，包括免疫和非免疫细胞，如成纤维细胞和上皮细胞，而且可识别与TLRs共有的PAMPs。在感染期间的获得性免疫反应的背景下，这些PRRS特有的作用和共有的作用都已经得到了研究。

在所有的PRRs中，TLRs主要在抗原递呈细胞如DCs和巨噬细胞，已经B细胞中表达，而且，许多TLR激动剂触发抗体反应以及TH1和TH17反应。多个水平的证据都表明TLR在获得性免疫中有关键作用。已经被pDCs的TLR7和其它细胞的RIG-1感应的一个感染流感病毒的体内模型，表明发动B细胞和CD4+T细胞反应需要TLR7而不是RIG-1。在疫苗模型中，TLR7表现为保护性免疫。而且，感染淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒后CD8+T细胞的分化需要TLR7，而不是RIG-1。这些数据共同证明了TLR7在诱导有效的抗病毒的获得性免疫反应中的作用。然而，TLRs还不足以诱导足够强烈的获得性免疫反应，因为CD8+T细胞应答A型流感病毒时不需要TLR7或RLRs。A型流感病毒可以活化NLRP3f炎性体，触发IL-1 β产生，并且获得性免疫的形成也需要这一通路。尽管，有几种机制曾被认为是触发NLRP3炎性体活化的，但已证实，A型流感病毒诱导的NLRP3炎性体活化是独有的，病毒编码的M2离子通道负责触发这种活化。

虽然胞浆PRRs对形成适应性免疫的相对贡献仍不清楚，但它已被认为，非抗原呈递细胞（非- APC）的PRRS的胞浆信号参与促进了DC-介导的获得性免疫反应。Poly(I:C)被用作免疫佐剂，并由TLR3和Mda5识别。TLR3 在 CD8 α+ DCs中有高表达量， CD8 α+ DCs对凋亡的病毒感染细胞有高吞噬活性。TLR3缺陷型DCs在它们吞噬负载dsRNA的细胞和病毒感染的细胞时，不能够发动CD8+T细胞反应。因此，在DCs中TLR3识别从病毒感染细胞传递来的dsRNA触发DC变异，并将病毒抗原呈递给MHCⅠ类分子，这刺激CD8+T细胞反应（图2）。这一过程，涉及到交叉引导，可以有最初被感染的细胞分泌的Ⅰ型干扰素和其它的细胞因子促进，在这些细胞中Mda5参与了病毒的识别和细胞因子的产生。实际上，一个用于评价poly(I:C)在TLR3和/或Mda5信号成分缺陷的小鼠中的佐剂效应的研究表明，针对特异抗原的抗体的产生和CD4+和 CD8+T细胞的分化是同时受到TLR3和Mda5介导的通路的调控。而且，一个研究展示了在DCs、单核细胞和间质细胞中poly（I:C）被Mda5识别和结果诱导Ⅰ型干扰素的产生，为人类免疫缺陷病毒Gag蛋白疫苗设计的的小鼠模型的TH1反应需要这一过程。这表明，APCs和非APCs的PRR信号以及它们的相互作用足够发动一个强烈的获得性免疫反应。非抗原递呈细胞在构建获得性免疫反应中关键作用，已经由DNA疫苗的研究得到解释，DNA疫苗综合了有抗原序列的质粒和其它使先天免疫反应成为可能的因素。理想的B细胞和T细胞反应的诱导不需要TLR9、RLR或DAI，但

需要TBK1和STING。特别地，细胞转移实验已经解释了在造血细胞和非造血细胞中dsDNA的识别都是DNA疫苗在体内的辅助性所需要的。

图4：TLRs和免疫疾病的内源激动剂。由死亡细胞如HMGB1释放的内源分子和热休克蛋白及ECM的成分被TLR2, TLR4或TLR2-TLR4识别。β淀粉和氧化的LDL都是被TLR4-TLR6与其共受体CD36一同识别。感染后产生的氧化的磷脂和抗菌肽β防御素2被TLR4识别。这些内源分子被细胞表面TLRs识别并导致炎症和修复反应。自身RNA和DNA月LL37一同被内在化到内涵体，并分别被TLR7和TLR9识别。HMGB1自身的 DNA复合物通过RAGE被内在化并被TLR9识别。包含免疫复合物的自身核酸分子同Fc受体如Fcγ RIIa被内在化，并刺激TLR7和TlR9。凋亡过程中自身DNA分子的不完全降解可能被胞内DNA感受器感知并活化TBK1。TLR7、TLR9和一种目前未知的DNA感受器识别自身核酸分子，导致Ⅰ型干扰素的产生，并促进自身免疫和炎性疾病。

细胞表面TLRs的内源配体

已经越来越明了，除了应答PAMPs，TLRs响应内源宿主分子并触发炎性反应。这些内源分子中的大多数都是由与细胞死亡、伤害和肿瘤细胞产生的，包括胞外基质的降解产物、热休克蛋白和高迁移率蛋白，它们充当细胞表面TLRs才刺激因子（图4）。而且，死亡细胞和含免疫复合物的自身抗原都含有自身核苷酸，由它们释放的染色体DNA和核蛋白复合物可刺激胞内TLR7和TLR9，并导致系统性自身免疫病的形成（图4）。

作为损伤和炎症的结果，ECM被胞内蛋白酶分解，并清除出细胞。据报道，部分被清除出细胞的成分可以活化TLR2或TLR4，或活化两者（图4）。这些成分包括双糖链蛋白聚糖、透明质酸、多功能蛋白聚糖、纤连蛋白额外域A和表面活性蛋白A。双糖链蛋白聚糖因诱导产生炎性细胞因子和趋化因子，并且这种诱导会因TLR2和TLR4 的缺陷而完全丧失。双糖链蛋白聚糖缺陷的小鼠对酵母聚糖和LPS导致的休克有高抵抗性，并具有低TNF

凝聚

物和单核细胞渗透入肺，这这证明了biglycan-TLR2-TLR4通路在增强细菌诱导的肺损伤中的作用。透明质酸碎片在肺损伤后释放并聚积，能够刺激巨噬细胞通过TLR2和TLR4产生趋化因子。在透明质酸参与的非传染的肺损伤小鼠模型中，TLR2和 TLR4双重缺陷的小鼠呈现低存活率，与较少的招募炎性细胞，增强的上皮细胞凋亡和更多的组织损伤，表明TLR2-TLR4介导的透明质酸的识别促进炎症和修复反应。额外区A和表面活性蛋白A也是有TLR4识别。

除了ECM成分，其它的细胞成分如HMGB1和热休克蛋白充当TLRs的配体（图4）。HMGB1是一种核非组蛋白，是脓毒性休克和缺血性再灌注模型的促炎性调节物，并被TLR2、TLR4或TLR9识别。HMGB1的无效化抗体抑制肝脏缺血再灌注模型的损伤，并且在这一模型中，TLR4缺陷的小鼠表现较低的损伤。这一发现表明，在非感染的状态下，TLR4响应内源分子并介导炎性反应。胞浆HMGB蛋白HMGB1, HMGB2和 HMGB3作为通用的核酸感受器，活化TLRs、RLRs和DNA感受器的作用已被阐明。热休克蛋白，包括Hsp60, Hsp70, Hsp22 和 gp96，也被认为与通过TLR2, TLR4或TLR2-TLR4活化巨噬细胞和DC，诱导促炎性调节物有关，尽管，尚不清楚这种效果是否是由于这些用大肠杆菌产物准备重组蛋白受到污染。

TLRs还参与某些病理状态下的炎性反应。在非感染的炎性疾病如动脉粥样硬化和阿尔茨海默氏病，氧化低密度脂蛋白蛋白和β -淀粉样蛋白，分别触发无菌炎症并以依赖于TLR4和TLR6的方式识别（图4）。这一识别可能是通过TLR4-TLR6异二聚体在清道夫受体CD36的协助下完成的。多功能蛋白聚糖是一个在肿瘤细胞中积聚的蛋白聚糖，通过TLR2、TLR6和CD14刺激肿瘤浸润髓样细胞产生TNF，加速肿瘤细胞新陈代谢。TLR2和多功能蛋白聚糖有直接联系。因此，TLR2对多功能蛋白聚糖的识别和最终的炎性环境可以支持肿瘤细胞的生存。

感染同样是TLRs识别的内源分子释放的触发因素（图4）。抗菌肽β防御素2，可直接中和入侵的微生物，它是由应答感染的黏膜组织和皮肤产生的，通过TLR4活化未成熟的DCS诱导上调共刺激分子，导致有效的免疫反应的诱导。TLR4和TRIF缺陷的小鼠可避免由于供给灭火的禽流感病毒引起急性肺损伤。这种病毒触发氧化磷脂的产生，氧化磷脂的产生承担通过TLR4-TRIF轴的急性肺损伤。因此，通过TLR4通路响应氧化应激是控制急性肺损伤的关键。

不合理的TLR介导的对自身核酸的识别

正常情况下，自身的核酸分子并不活化先天免疫反应。自身核酸分子在被内噬溶酶体中的TLRs识别前就已经被血清核酸酶合适的降解。TLR7和TLR9在细胞内的位置对于避免与胞外自身核酸分子接触是非常重要的。另外，蛋白水解成熟TLR9的（及可能TLR7 ）用于防止泄漏到细胞表面的TLR9不合适的识别自身DNA是很重要的。可能这些保护在炎性和自身免疫状态下已经被破坏。例如，当自身核酸分子与内涵体蛋白形成复合物时，它们可能会变得抵抗核酸酶并增加与体内TLRs，反过来促进并维持自身免疫过程。而且，发现TLR7和TLR9从内质网到内噬溶酶体的转移是由LPS配体外的部分诱导的，这证明了炎性实际上可以增加核酸分子与TLR7和TLR9的接触的可能性。

在系统性红斑狼疮中，抗体与核酸或核蛋白有高凝聚。来自病人的血浆可促进pDCs产生Ⅰ型干扰素，且其浓度与病情严重程度有关。自身核酸分子或核蛋白被抗体结合后通过DCsd的Fc γ RIIa受体被内在化，然后传递给包含TLR7和TLR9的小泡，导致Ⅰ型干扰素的产生（图4）。而且，这些免疫复合物结合到B细胞表面抗原受体并被内在化以活化这些TLRs，导致自体反应B细胞的活化。因此，DCs和B细胞的协同活化，对于自身免疫疾病的形成和维持是很重要的。

HMGB1既可以结合抗原又可以结合自身DNA。这些HMGB1-DNA复合体结合到RAGE上，并被转移到早期内涵体让TLR9识别，导致pDCs和B细胞的活化（图4）。LL37是由嗜中性粒细胞和角质形成细胞产生的抗菌肽，牛皮癣的皮肤损伤部位高表达LL37。LL37与坏死细胞释放的自身DNA和RNA形成聚合物，被内吞并保留在pDCs的内涵体中，然后分别活化TLR9和TLR7。在小鼠中发现的TLR7的复制体对TLR7配体有超反应。这些小鼠产生针对包含RNA自身抗原的抗体的同时还形成肾炎。降植烷是一个在植物中发现的异戊二烯烷烃，被注入到腹膜腔里后可诱导小鼠产生狼疮样疾病。随后的自身抗体的产生需要干扰素信号。这种情况下Ⅰ型干扰素产生的来源是未成熟的单核细胞而不是pDCs，需要TLR7而不是RLRs。在这种模型下，U1小型核糖核蛋白活化TLR7，尽管Fc受体对Ⅰ型干扰素的产生是必不可少的。

虽然，TLR7和TlR9在表达、位置、信号通路和靶基因表达上都是相似的，它们在小鼠自身免疫疾病发病机理中的作用是不同的。在MRLlpr/ lpr 小鼠上，TLR7缺陷导致更少对RNA相关抗原的自身抗体，并导致系统性免疫疾病如系统性红斑狼疮。但是，TLR9缺陷导致相关及效用。表明，TLR9介导的通路现在TLR7反应。

似乎自身免疫病也可由不合适的对自身核酸分子清除引起。人类和小鼠的狼疮样综合症都与编码血浆DNA酶Ⅰ的基因的边缘有关。缺乏溶酶体DNA酶Ⅱ的小鼠会在巨噬细胞中积累不完全消化的DNA，并有更高的Ⅰ型干扰素和TNF浓度，并形成自身免疫症如慢性关节炎。值得一提的是，DNA酶Ⅱ缺失的情况下Ⅰ型干扰素会增加而不依赖TLRs。编码修复核酸外切酶的基因的变异已在Aicardi-Goutières syndrome中发现，具有产生更多Ⅰ型干扰素有关的致命脑炎的特点。TREX1在细胞中的丢失导致来自复古元素的DNA的积聚，它负责诱导干扰素反应。编码核酸外切酶FEN1的基因突变的小鼠在凋亡细胞中也有更多的未消化DNA，并易患自身免疫病、慢性炎症和癌症。而且，编码RNA酶H2的成分SAMHD1的基因突变也与Aicardi-Goutières syndrome有关，还与抗病毒先天免疫反应的负调控有关。尽管这些不合适的核酸分子引起自身免疫的机制还所知甚少，但针对核酸的胞浆PRRs很可能参与了这一过程（图4）。

前景展望

在过去的十年中，在认识TLRs识别抗原和在宿主防御中的作用上，我们已经取得了巨大的进步。许多TLRs的结果分析阐明了TLR同二聚体或TLR异二聚体识别PAMP的机制，而且参与NF-κB, AP-1和 IRF蛋白活化的许多信号分子也都已经被鉴定出来，并做了具体描述。目前研究的焦点是TLR信号的综合调控，包括转录后调控如泛素化、磷酸化和mRNA的稳定性以及TLRs和它们的信号复合物的时空调控。而且，发现负调控的丢失与炎性疾病有直接关系，这表明药物抑制TLR反应可以有效的治疗这类疾病。

在一些非感染的疾病状态下的组织损伤可以活化TLR信号的发现，表明内源分子可充当TLR激动剂，尽管尚不清楚，这一反应对于维持稳态如组织修复是否有生物学意义，又或者这种识别仅仅是偶然现象。值得关注的是，微生物感染触发被修饰的内源分子的产生（如HMGB1、氧化磷脂、β防御素2和核酸），这些内源分子被TLRs或其它胞浆PRRs识别。这或许表示，这些内源分子和PAMPs一同充当通过TLRs和或PRRs激活先天免疫反应的佐剂，并在帮助抵抗微生物感染的获得性免疫中发挥关键作用。而且，已经越来越清楚的知道，在非免疫细胞中的胞浆PRR信号在促进DC成熟及随后特异抗原T细胞的活化中发挥作用。因此，在设计有效的疫苗佐剂时，应用可以刺激免疫和非免疫细胞的PAMPs和或内源激动剂或许会是有用的手段。

了解TLR活化中转录网络的复杂性并界定随后的免疫反应是当前研究的热点。系统生物学的手段是非常有用的，这一途径已成功预测了多种转录因子，如ATF3和 C/EBPδ，是

IL-6转录的调节因子，这已经在敲除相关基因的细胞中得到证实。应用小干扰RNA来认识复杂的TLR转录网络的综合分析还只是刚刚开始。由于不同的细胞型、不同的TLR有不同的TLR信号，而且微生物抗原包含多个PAMPs，需要重视积累用各种TLR激动剂或抗原刺激的细胞型基因表达图谱的认识。为了全面了解不同PRRs在宿主防御抵抗感染中的协同作用，需要体内、体外和计算机模拟等各种手段的综合应用。

感想：本文中，作者介绍了TLRs的结构、类型、分布、功能及其配体的最新研究进展。重点阐述了各种TLRs介导的信号通路及其调节机制，介绍了其信号传导过程中的调节因子，及其影响因素。同时还介绍了非TLR胞浆模式识别受体及信号传导机制。最后，总结了TLRs的研究现状，并对将来研究的方向做出了推断。

在我将来要从事的家禽遗传育种工作中，抗病育种长期受到研究者的青睐。但家禽由于其特殊的生理构造及连续的选育，而对病原菌的耐受性很差。TLRs是研究最为深入的一类模式识别受体,TLRs及其信号途径是连接先天性免疫和获得性免疫的桥梁,TLRs不仅参与了抗病毒、细菌及寄生虫感染早期先天性免疫应答,并在获得性免疫应答中也发挥作用。但相对于哺乳动物TLRs 的研究,有关鸡TLRs研究尚处于起步阶段。对鸡TLRs信号通路的深入了解将有助于我们进一步弄清禽类疾病相关微生物感染的发病机制,为抗病选育、相应疾病的治疗和疫苗研制等方面的研究提供新的切入点。

范文三：B-受体阻滞剂类药物有哪些

β受体阻滞剂:最近公布的多种β受体阻滞剂对死亡率影响的荟萃分析显示，心肌梗死后患者长期接受β受体阻滞剂二级预防治疗，可降低相对死亡率24％。具有内在

拟交感活性的β受体阻滞剂心脏保护作用较差。要指出的是，目前被广泛使用的β受体阻滞剂阿替洛尔，尚无明确证据表明能影响患者的死亡率。

推荐使用无内在拟交感活性的β受体阻滞剂。β受体阻滞剂的使用剂量应个体化，从较小剂量开始，逐级增加剂量，以能缓解症状，心率不低于50次/min为宜。常用β受

体阻滞剂剂量见表2。

表2常用β受体阻滞剂

药品名称

常用剂量

服药方法

选择性

普奈洛尔

美托洛尔

美托洛尔缓释片

阿替洛尔

比索洛尔

阿罗洛尔

10－2Omg

25-100mg

50-2OOmg

25－5Omg

5-lOmg

每日2-3次口服

每日2次口服

每日1次口服

每日2次口服

每日1次口服

每日2次口服

非选择性

β1选择性

α、β选择性

二)减轻症状、改善缺血的药物

减轻症状及改善缺血的药物应与预防心肌梗死和死亡的药物联合使用，其中有一些药物，如β受体阻滞剂，同时兼有两方面的作用。目前减轻症状及改善缺血的主要药物包括三类：β受体阻滞剂、硝酸酯类药物和钙拮抗剂。

l.β受体阻滞剂：β受体阻滞剂能抑制心脏β肾上腺素能受体，从而减慢心率、减弱心肌收缩力、降低血压，以减少心肌耗氧量，可以减少心绞痛发作和增加运动耐量。用药后要求静息心率降至55－60次/min，严重心绞痛患者如无心动过缓症状，可降至50次/min。

只要无禁忌证，β受体阻滞剂应作为稳定性心绞痛的初始治疗药物。β受体阻滞剂能降低心肌梗死后稳定性心绞痛患者死亡和再梗死的风险。目前可用于治疗心绞痛的β受体阻滞剂有很多种，当给予足够剂量时，均能有效预防心绞痛发作。更倾向于使用选择性β1受体阻滞剂，如美托洛尔、阿替洛尔及比索洛尔。同时具有α和β受体阻滞的药物，在慢性稳定性心绞痛的治疗中也有效。

在有严重心动过缓和高度房室传导阻滞、窦房结功能紊乱、有明显的支气管痉挛或支气管哮喘的患者，禁用β受体阻滞剂。外周血管疾病及严重抑郁是应用β受体阻滞剂的

相对禁忌证。慢性肺心病的患者可小心使用高度选择性β1受体阻滞剂。没有固定狭窄的冠状动脉痉挛造成的缺血，如变异性心绞痛，不宜使用β受体阻滞剂，这时钙拮抗剂是首选药物。

推荐使用无内在拟交感活性的β受体阻滞剂。β受体阻滞剂的使用剂量应个体化，从较小剂量开始。常用药物剂量见表2。

2.硝酸酯类:硝酸酯类药为内皮依赖性血管扩张剂，能减少心肌需氧和改善心肌灌注，从而改善心绞痛症状。硝酸酯类药会反射性增加交感神经张力使心率加快。因此常联合负性心率药物如β受体阻滞剂或非二氢吡啶类钙拮抗剂治疗慢性稳定性心绞痛。联合用药的抗心绞痛作用优于单独用药。

范文四：电商模式有哪些

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电商模式有哪些

田园优选(w-w-w-t-y-e-g-o-c-o-m)是重庆第一家生鲜电商平台，成立于2013年初，正式上线运营是2013年10月份。公司主要致力于改善中国食品安全现状，将电子商务和体验式商业有机结合，打造新型的O2O体验式电商，重塑农产品供应链，实现从田间到餐桌的全程监控，为消费者提供绿色、优质、安全的食材，确保山城市民“舌尖上的安全”。

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水果:产自新疆阿克苏红旗坡农场。具有果面光滑细腻、色泽光亮、果肉细腻、果核透明等特点。果香浓郁、甘甜味厚、汁多无渣。阿克苏苹果富含丰富的维生素C、纤维素、果胶。

大米:五常稻花香大米是黑龙江五常市种植的一种稻花香水稻生产的大米。五常大米生长在五常市面向西南的一个C型盆地的一个地貌，黑龙江属于季风气候，当暖流流过时一定是从西南飘过来，这样暖流会形成一个漩涡形成一个回流，所以五常的活动积温要比其他的地方高2~3?，这样就有利于水稻在4~9月份达到优质水稻所需要的的活动积温，米的品质不只是因为活动积温的高，五常稻花香大米受产区独特的地理、气候等因素影响，干物质积累多，直链淀粉含量适中，支链淀粉含量较高。由于水稻成熟期产区昼夜温差大，龙轮五常原生米中可速溶的双链糖积累较多，对人体健康非常有益。其品质可谓上乘，米粒均匀，色泽光亮，醇厚绵长，芳香四溢。五常稻花香大米成饭食味清淡略甜，棉软略粘，芳香爽口，饭粒表面油光艳丽，剩饭不回生，是百姓餐桌上的首选，是日常生活中做米饭的佳品。

蜂蜜:蜂蜜是昆虫蜜蜂从开花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中酿制的蜜。蜜蜂从植物的花中采取含水量约为80%的花蜜或分泌物，存入自己第二个胃中，在体内转化酶的作用下经过30分钟的发酵，回到蜂巢中吐出，蜂巢内温度经常保持在35?左右，经过一段时间，水份蒸发，成为水分含量少于20%的蜂蜜，存贮到巢洞中，用蜂蜡密封。蜂蜜的成分除了葡萄糖、果糖之外还含有各种维生素、矿物质和氨基酸。1千克的蜂蜜含有2940卡的热量。蜂蜜是糖的过饱和溶液，低温时会产生结晶，生成结晶的是葡萄糖，不产生结晶的部分主要是果糖。

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禽和蛋:旧院黑鸡因主产于四川省万源市旧院镇而得名，是一个肉蛋兼用型品种，全身羽毛黑色带翠绿色光泽，乌皮乌肉和白皮两种;蛋壳浅褐色，少数蓝色(被中科院命名为:“世界稀有，中国独有，万源特有”，素有生命之源绿色食品之美称。1982年列为四川省优良品种;1983年列为全国地方优良品种。旧院黑鸡肉和蛋的硒含量和氨基酸含量均远高于当地土鸡和良种鸡。旧院黑鸡通过有机产品质量认证，并获农业部农产品地理标志认证保护，“万源旧院黑鸡(蛋)”产地证明商标被国家工商总局商标局核准注册。

肉:荣昌猪主产于重庆荣昌和隆昌两县，后扩大到永川、泸县、泸州、合江、纳溪、大足、铜梁、江津、璧山、宜宾及重庆等10余县、市。荣昌猪，产于重庆市荣昌县和四川省的隆昌，主要特性:体型较大，头大小适中，面微凹，耳中等大、下垂，额面皱纹横行、有旋毛，体躯较长，发育匀称，背腰微凹，腹大而深，臀部稍倾斜，四肢细致、坚实。

季节性食品:黄秋葵，龚小娅葡萄，奉节脐橙等。

物流配送

配送时间:田园优选以16:00-次日16:00为一个订单日，当日16:00之前订单次日配送，16:00之后订单算作次日订单，配送时间顺延一天。

配送费用:99元(包含)起免运费，即订单满99元及以上田园优选将免费为客户送货到家。

配送范围:重庆主城九区—渝中区、江北区、南岸区(主城)、渝北区(主城)、沙坪坝区(主城)、九龙坡区(主城)、巴南区(主城)、大渡口区(主城)，北碚区(主城)。以上区域的一些乡镇和部分偏远地区不在配送范围内。

范文五：电商模式有哪些

电商模式有哪些

篇一:电商模式有哪些

如题，电子商务的主要模式有哪些, 电子商务的主要模式有哪些,

篇二:电商模式有哪些

如题，电子商务的模式都有哪些, 电子商务的模式都有哪些,

篇三:电商的模式有哪些

据统计，电子商务目前拥有B2B、B2C、C2C、B2M、C2B、M2C、B2A(即B2G)、C2A(即C2G)模式，但随着电子商务的发展，以后会向哪个模式发展或衍生什么样的模式那就要看以后的市场该如何变化了。

1、B2B = Business to Business

商家(泛指企业)对商家的电子商务，即企业与企业之间通过互联网进行产品、服务及信息的交换。通俗的说法是指进行电子商务交易的供需双方都是商家(或企业、公司)，她(他)们使用了Internet的技术或各种商务网络平台，完成商务交易的过程。

2、B2C = Business to Customer

B2C模式是我国最早产生的电子商务模式，以8848网上商城正式运营为标志。B2C即企业通过互联网为消费者提供一个新型的购物环境——网上商店，消费者通过网络在网上购物、在网上支付。由于这种模式节省了客户和企业的时间和空间，大大提高了交易效率，节省了宝贵的时间。

3、C2C = Consumer to Consumer

C2C同B2B、B2C一样，都是电子商务的几种模式之一。不同的是C2C是用户对用户的模式，C2C商务平台就是通过为买卖双方提供一个在线交易平台，使卖方可以主动提供商品上网拍卖，而买方可以自行选择商品进行竞价。 C2C的典型是百度C2C、淘宝网等

4、B2M = Business to Manager

B2M是相对于B2B、B2C、C2C的电子商务模式而言，是一种全新的电子商务模式。而这种电子商务相对于以上三种有着本质的不同，其根本的区别在于目标客户群的性质不同，前三者的目标客户群都是作为一种消费者的身份出现，而B2M所针对的客户群是该企业或者该产品的销售者或者为其工作者，而不是最终消费者。

5、M2C = Manager to Consumer

M2C是针对于B2M的电子商务模式而出现的延伸概念。B2M环节中，企业通过网络平台发布该企业的产品或者服务，职业经理人通过网络获取该企业的产品或者服务信息，并且为该企业提供产品销售或者提供企业服务，企业通过经理人的服务达到销售产品或者获得服务的目的。而在M2C环节中，经理人将面对Consumer，即最终消费者。

6、B2A = Business to Administration

商业机构对行政机构的电子商务，指的是企业与政府机构之间进行的电子商务活动。例如，政府将采购的细节在国际互联网络上公布，通过网上竞价方式进行招标，企业也要通过电子的方式进行投标。

7、

篇四:电子商务模式有哪些

电子商务模式随着其应用领域的不断扩大和信息服务方式的不断创新，电子商务的类型也层出不穷，主要可以分为以下四种类型:

1(企业与消费者之间的电子商务(Business to Consumer，即B2C)。如:京东。

2(企业与企业之间的电子商务(Business to Business，即B2B)，如:阿里巴巴。

3(消费者与消费者之间的电子商务(Consumer to Consumer 即C2C)。C2C商务平台就是通过为买卖双方提供一个在线交易平台，使卖方可以主动提供商品上网拍卖，而买方可以自行选择商品进行竞价。如:淘宝网。

4(线下商务与互联网之间的电子商务(Online To Offline即O2O)。这样线下服务就可以用线上来揽客，消费者可以用线上来筛选服务，还有成交可以在线结算，很快达到规模。该模式最重要的特

点是:推广效果可查，每笔交易可跟踪。

ABC

随着电子商务的不断发展，在人们为信誉而担忧的时候，出现了一种新型的电子商务模式ABC模式，被誉为电子商务界继阿里巴巴b2b模式、京东商城b2c模式、淘宝c2c模式之后的第四大模式。是由代理商(Agents)、商家(Business)和消费者(Consumer)共同搭建的集生产、经营、消费为一体的电子商务平台。相互之间可以转化。大家都是这个平台的主人，生产者，消费者，经营者，合作者，管理者，大家相互服务，相互支持，你中有我，我中有你，真正形成一个利益共同体，资源共享，产、消共生而达到共同幸福的良性局面，从而达到共产、共消、共福。淘众福就是这个模式的首创者。

B2C

企业与消费者之间的电子商务(Business to Customer，即B2C)。这是消费者利用因特网直接参与经济活动的形式，类同于商业电子化的零售商务。随着因特网的出现，网上销售迅速地发展起来。其代表是亚马逊电子商务模式

B2C就是企业透过网络销售产品或服务给个人消费者。企业厂商直接将产品或服务推上网络，并提供充足资讯与便利的接口吸引消费者选购，这也是目前一般最常见的作业方式，例如网络购物、证券公司网络下单作业、一般网站的资料查询作业等等，都是属于企业直接接触顾客的作业方式。可成以下四种经营的模式:

?(入口网站(Portal): ex. Yahoo!

?(虚拟社群(Virtual communities):虚拟社群的着眼点都在顾客的需求上，有三个特质,专注于买方消费者而非卖方、良好的信任关系、创新与风险承担。

?(交易聚合(Transaction Aggregators):电子商务即是买卖。

?(广告网络(Advertising Network)

?(线上与线下结合的模式(O2O模式)

B2B

企业与企业之间的电子商务(Business to Business，即B2B)。B2B方式是电子商务应用最多和最受企业重视的形式，企业可以使用

Internet或其他网络对每笔交易寻找最佳合作伙伴，完成从定购到结算的全部交易行为。其代表是马云的阿里巴巴电子商务模式

B2B电子商务是指以企业为主体，在企业之间进行的电子商务活动。B2B电子商务是电子商务的主流，也是企业面临激烈的市场竞争、改善竞争条件、建立竞争优势的主要方法。开展电子商务，将使企业拥有一个商机无限的发展空间，这也是企业谋生存、求发展的必由之路，它可以使企业在竞争中处于更加有利的地位。B2B电子商务将会为企业带来更低的价格、更高的生产率和更低的劳动成本以及更多的商业机会。

B2B主要是针对企业内部以及企业(B)与上下游协力厂商(B)之间的资讯整合，并在互联网上进行的企业与企业间交易。借由企业内部网(Intranet)建构资讯流通的基础，及外部网络(Extranet)结合产业的上中下游厂商，达到供应链(SCM)的整合。因此透过B2B的商业模式，不仅可以简化企业内部资讯流通的成本，更可使企业与企业之间的交易流程更快速、更减少成本的耗损。

C2C

消费者与消费者之间的电子商务(Consumer to Consumer ，即

C2C)。C2C商务平台就是通过为买卖双方提供一个在线交易平台，使卖方可以主动提供商品上网拍卖，而买方可以自行选择商品进行竞价。其代表是eBay、taobao电子商务模式

C2C是指消费者与消费者之间的互动交易行为，这种交易方式是多变的。例如消费者可同在某一竞标网站或拍卖网站中，共同在线上出价而由价高者得标。或由消费者自行在网络新闻论坛或BBS上张贴布告以出售二手货品，甚至是新品，诸如此类因消费者间的互动而完成的交易，就是C2C的交易。

目前竞标拍卖已经成为决定稀有物价格最有效率的方法之一，举凡古董、名人物品、稀有邮票…只要需求面大于供给面的物品，就可以使用拍卖的模式决定最佳市场价格。拍卖会商品的价格因为欲购者的彼此相较而逐渐升高，最后由最想买到商品的买家用最高价买到商品，而卖家则以市场所能接受的最高价格卖掉商品，这就是传统的C2C竞标模式。

2C竞标网站，竞标物品是多样化而毫无限制，商品提供者可以是邻家的小孩，也可能是顶尖跨国大企业;货品可是自制的糕饼，也可能是毕加索的真迹名画。且C2C并不局限于物品

与货币的交易，在这虚拟的网站中，买卖双方可选择以物易物，或以人力资源交换商品。例如一位家庭主妇已准备一桌筵席的服务，换取心理医生一节心灵澄静之旅，这就是参加网络竞标交易的魅力，网站经营者不负责物流，而是协助市场资讯的汇集，以及建立信用评等制度。买卖两方消费者看对眼，自行商量交货和付款方式，每个人都可以创造一笔惊奇的交易。 C2B

消费者与企业之间的电子商务(Consumer to Business，即C2B)。通常情况为消费者根据自身需求定制产品和价格，或主动参与产品设计、生产和定价，产品、价格等彰显消费者的个性化需求，生产企业进行定制化生产。

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