霍乱弧菌肠毒素的组成及致病机制
霍乱弧菌肠毒素的组成及致病机制
霍乱弧菌肠毒素的组成及致病机制?
专家意见:
你好,霍乱弧菌肠毒素是霍乱弧菌产生的一种外毒素,霍乱肠毒素致病机理如下:毒素由A和B两个亚单位组成,A亚单位又分为A1和A2两个肽链,两者依靠二硫链连接.A亚单位为毒性单位,其中A1肽链具有酶活性,A2肽链与B亚单位结合参与受体介导的内吞作用中的转位作用.B亚单位为结合单位,能特异地识别肠上皮细胞上的受体.1个毒素分子由一个A亚单位和4?6个B亚单位组成多聚体.霍乱肠毒素作用于肠细胞膜表面上的受体(由神经节苷脂GM1组成),其B亚单位与受体结合,使毒素分子变构,A精致单位进入细胞,A1肽链活化,进而激活腺苷环化酶(AC),使三磷酸腺苷(ATP)转化为环磷酸腺苷(cAMP),细胞内cAMP浓度增高,导致肠粘膜细胞分泌功能大为亢进,使大量体液和电解质进入肠腔而发生剧烈吐泻,由于大量脱水和失盐,可发生代谢性酸中毒,血循环衰竭,甚至休克或死亡.
肉毒梭菌污染婴儿的奶粉的主要问题是其产生的肠毒素
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肉毒梭菌污染婴儿的奶粉的主要问题是其产生的肠毒素
专家意见:
意见建议:肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的细菌,在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力,是毒性最强的毒素之一。肉毒杆菌是一种致命病菌,在繁殖过程中分泌毒素,是毒性最强的蛋白质之一。
请问汤臣倍健清好清畅胶囊能用来排肠毒素吗,
基本信息:女42岁病情描述:你好,我想咨询汤臣倍健清好清畅胶囊可以用于排肠毒素吗,服用方法怎么样,
专家意见:
你好,汤臣倍健清好清畅胶囊主要作用改善胃肠道功能(润肠通便)。适宜人群1.便秘者、排便不畅者。2.有口臭症状者。3.暗疮、色斑增多,皮肤干燥发黄松弛的女性。用法用量每日2次,每次1-2粒(大便通畅者,调整服用量,以保持每天排便1-2次为宜)。忌食辛辣、生冷、油腻食物。注意日常饮食,尽量清淡点。平时应该注意一下服
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药的剂量,平时在饮食方面也注意一下。你平时可以多吃含纤维素的食物,可以适当的摄入高钾食物。
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霍乱弧菌的分离与鉴定
霍乱弧菌的分离与鉴定
濮阳市疾病预防控制中心
一、标本的采集和送检: 1.标本的采集:
1) 粪便标本:应争取在发病早期、服用抗菌药物之前采集; 2) 采便方法:可用棉拭采取自然排出的新鲜大便,亦可用直肠棉拭采便管由肛门插入直肠内3~5厘米处采取。 3) 采样要求:
? 水样便采取1~2毫升,成形便采取指甲大小的粪量。病人呕吐物、沾染粪便的衣物、尸体的肠腔和口腔内容物亦可作为检材。 ? 外环境样本可采取病人的污染衣物、剩饭菜、可疑食品、抹布、污水、坑塘水、井水、公厕粪便、苍蝇等。
? 按1:10比例臵入碱性蛋白胨水增菌液中,迅速送往实验室。 4)肛拭采集的注意事项:
1.棉拭子要用竹签,圆形、光滑以免采样时易断; 2.棉拭子做的要稍大而紧固(避免采集时脱落); 3.采集者应穿戴一次性手套;
4.采集前将棉拭子用碱性蛋白胨水(APW)蘸湿,多余的液体紧靠管壁挤出;
5.采集时要求被采集者双腿分立、微屈、手扶墙或凳子趴下,劝其用
单手或双手协助分开股沟(或采集者用左手分开股沟),右手持棉拭子轻轻旋转插入肛门内约4~5cm(幼儿约2~3cm)处,转动数秒钟从紧靠肛环边的隐窝旋转擦取直肠表面黏液后退出;
6.棉拭子在推进时如感觉遇到阻力,应调整角度后缓缓旋转推进,避免用力过大或推进太快造成肛壁出血而影响病原菌的检出;棉拭子进入的深度一定要够,否则采集的有效标本量会很少;
7.采集的标本拭子应立即臵入APW内,手接触的部分在管口折断弃去。填写采样登记表(单),并在采样管上填写被采集者的样品编号、姓名、性别、年龄,尽快送检。 二、快速诊断: 1.直接镜检:
为争取最快速度作出诊断,采取病人“米泔水样”大便或呕吐物,悬滴法镜检(最好用暗视野),可见具有流星状动力的细菌。 2.特异性制动试验:
? 取检材或新鲜碱性蛋白胨水培养物一滴,臵于载玻片上,再加霍乱弧菌O1多价或O139诊断血清,加盖玻片,用暗视野显微镜观察,3分钟内流行状运动细菌被抑制的即为阳性,此法优点是快速而特异,操作简便,可
? 菌,免疫血清最好是不加防腐剂的。 3.早期玻片凝集试验:
? 埃尔托弧菌在TCBS、4号琼脂及庆大霉素平皿上生长较快,37℃
培养8~10小时,在其他杂菌尚未生长或长出很小菌落的情况下,埃尔托型菌落直径可达1~2mm。将已长出较大半透明菌落或湿润菌苔的平皿取出,直接用霍乱多价血清做玻片凝集,阳性者可做初步报告。琼脂平皿继续培养,接常规培养时间再作一次复查。
4.霍乱弧菌胶体金免疫层析快速检测:
(1)原理:采用胶体金免疫层析双抗体夹心法,检测标本中霍乱弧菌。以胶体金作为标记物,交联抗霍乱弧菌(O1群/O139群或O1群E1Tor型小川血清型、稻叶血清型)单克隆抗体,与样品中的霍乱弧菌(O1群/O139群)结合。形成双抗体夹心一步法,呈现出目测可见的红色条带,显色程度与抗原含量成正比。 (2)特点:
? 灵敏度高、特异性强,操作简便、快速,省力省时; ? 对于典型霍乱病人水样或米泔样便结果准确、易于判读; ? 但对于含霍乱弧菌少的粪便标本易出现假阴性; ? 对脓血便标本易出现假阳性。 3)操作步骤:
? 将检测卡放臵与洁净、干燥的工作台上; ? 实验前,请将试剂恢复至室温;
? 用吸管取病人水样便样品2~3滴,加入检测 卡一端的加样孔,计时并观察反应结果; ? 2-15分钟内观察结果,20分钟之后结果不能
判读 。
(1) 滤样纸(加样区);
(2) 玻璃纤维膜,膜上吸附着干燥的金标抗原 ; (3) 硝酸纤维素膜,膜上包被的抗原和抗体呈线状; (4) 吸水纸。 三、直接分离、培养:
? 急性期病人水样大便标本在增菌培养的同时可用选择性培养基直接划线分离。目前常用的强选择性培养基有TCBS琼脂、4号琼脂和庆大霉素琼 脂等。
? 臵37℃10~14h孵育培养。 四、APW增菌、分离:
? 所有粪便标本都应经过增菌,尤其是恢复期病人,带菌者或用过抗菌药物的病人标本含菌量少,单靠直接分离不易检出,需经碱胨水37℃增菌6~8小时后分离(
夏日可将运送时间计算在
内);
? 标本含菌量少时,为提高检出率可实行2次增菌,取第一次碱胨水增菌后的培养物表层液0.1~0.2毫升,接种于8~10毫升的碱胨水中,37℃培养6~8小时后再做分离;
? 霍乱弧菌好氧,易形成的菌膜,故在取出增菌管时动作要轻,接种环于菌膜下取一满环,划线接种于TCBS或4号琼脂平板37℃10~14h孵育培养。 五、血清学凝集试验: 1.玻片凝集试验:
? 自分离培养基上挑取可疑菌落与O1群霍乱多价诊断血清、O139群霍乱诊断血清以及稻叶、小川型诊断血清做玻片凝集试验; ? 同时注意做盐水凝集对照试验。 2.要求及注意事项:
? 有的标本可能同时存在非O1群霍乱弧菌,可疑菌落较多时,应挑选5个以上的菌落逐个进行玻片凝集检查;
? 必要时,取原划线菌苔边缘透明部分再做玻片凝集(对一次流行的首批病人进行检验时尤应注意)。
? 平皿分离未获分散的单个菌落,而在密集部位仍有可疑菌落时,应将该部分再做分离或经增菌后再做分离;
? 从恢复期病人分离出菌落典型但不凝集的弧菌,这时应以霍乱粗糙型血清做玻片凝集,以确定是否为粗糙型或NAG弧菌; ? 注意当霍乱弧菌在4号及庆大霉素培养基上生长过久(超过36
小时)时,会出现菌落粘稠、血清凝集假阴性现象; ? 故应取新鲜培养物(10~14h)作凝集试验,凝集的菌落立即转种营养琼脂平板。
? 小川型菌株有时在稻叶型单价血清中可出现弱凝集,这并非彦岛型,而是小川型含有少量C抗原成分的缘故; ? 首例病人应以两个单价血清的试管凝集试验确定。 六、初步鉴定试验:
1.氧化酶试验:在非选择性或非鉴别性培养基如营养琼脂的新鲜培养物上滴加氧化酶试剂1滴,并使其流开。或将菌落用竹签或牙签挑至滴有试剂的滤纸上,在1分钟内出现粉红-紫红-紫蓝色(有的最后呈黑紫色)为氧化酶阳性。
(肠杆菌科细菌多不变色或变成粉红色后很快退色为氧化酶阴性)。 氧化酶试验注意事项:
试验时避开含铁物质(如接种环)。不能直接取产酸培养基上的菌落,不能取含还原剂的培基及含亚碲酸盐培基上的菌落(亚碲酸盐培养基可抑制氧化酶),以免出现假阳性和假阴性。
2.拉丝试验:在玻片上加一滴试剂,取一接种环被检菌的新鲜琼脂培养物在试剂旁边研磨均匀,再与试剂混合制成浓厚悬液。阳性者很快(30S内)由混变清并变得很粘稠,用接种环挑取时,可以拉出细丝来。 阴性者呈均匀悬液状态,与蒸馏水对照相同。(古典型、埃尔托型和O139群霍乱弧菌均阳性。)
弧菌科菌属氧化酶试验、拉丝试验鉴别表
3.O/129(二氨基二异丙基喋啶)敏感试验:
? 用接种环或灭菌棉拭子在含0.5%氯化钠的普通平皿上均匀涂抹待检菌,放上10μg、150μgO/129磷酸盐药敏纸片各一片,37℃培养过夜。凡药敏纸片周围出现抑菌圈者为敏感。 ? 古典型、埃尔托型霍乱弧菌二者均敏感; ? O139群霍乱弧菌10μg、150μg均不敏感。 七、初步结果报告:
霍乱弧菌以血清学鉴定为主,结合菌落形态、特征和初步生化反应可做出 判定。
凡具备弧菌菌落特征、与O1群或O139群多价血清凝集,O1群
并可用单价血清分型即可判定。
首例病人应辅以氧化酶、拉丝试验、O/129敏感试验。基层CDC至此即可上报。
上报国家需做生化、噬菌体-生物分型试验。
报告名称--“稻叶/小川型O1群埃尔托型霍乱弧菌”或“O139群埃尔托型霍乱弧菌”。 八、 生化鉴定试验:
九、噬菌体-生物分型: 1. 古典型和Eltor分型:
? 目前仍依靠第IV组霍乱噬菌体常规稀释液(106/毫升)裂解试验、多粘菌素B敏感试验、鸡血球凝集、V-P和溶血试验进行
两种生物型的鉴别仅作参考。
埃尔托型已出现大量非溶血菌株,因此溶血试验已不能作为区别两个生物型的主要方法。
O1群霍乱弧菌古典型和El-Tor生物型的鉴别
(1)噬菌体分型:
? 根据五株国内分离的5种弧菌噬菌体 (VP1~VP5)将埃尔托型霍乱弧菌分成32个噬菌体型 (见下表)。
方法:利用双层琼脂平皿法进行噬菌体滴皿裂解试验。
(2)生物分型:
? 根据菌株的溶原性、对溶原噬菌体的敏感性、山梨醇发酵试验和溶血试验等四个生物学性状,将埃尔托弧菌分成12个生物型 。
埃尔托霍乱生物分型表
埃尔托霍乱弧菌噬菌体-生物分型表
十、O1群与O139群霍乱弧菌的鉴别:
十一、霍乱菌种的登记、保存、上送和管理: 1.霍乱菌株的登记:
基层实验室所检获的阳性菌种及可疑菌种,均应作好菌株来源详细情况的登记工作,包括编号、被检人或物名称、菌株来源(病人、带菌者或外环境)、分离地点(地址)及初步鉴定结果(见省CDC “河南省霍乱监测方案”附表),一式两份,一份自己保存,一份随菌种上送。 2.霍乱种株的保存:
对初步鉴定的霍乱弧菌及可疑菌株(包括不凝集弧菌),均应接种半固体菌种管培养基,经37℃过夜培养,用胶塞或石蜡封口,室温保存,切勿放入冰箱,因霍乱菌种半固体的最佳保存环境是18~25℃(一般可存活4~5年)。 ? 霍乱弧菌在4 ℃ ~8℃以下极易死亡。
3.霍乱种株的上送:
菌、毒种的上送工作是程序,也是制度。
按照《中华人民共和国传染病防治法》、卫生部规定:各疫点市(县)在本年度疫情结束后必须立即收集整理当地分离到的所有霍乱菌株和可疑菌株,认真登记、造册,连同菌种一并派专人(2人)护送上级市(地)CDC;市(地)防疫站收集、整理所辖市、县上送菌种后,再届时按毒菌种管理规定上送省CDC,最后由省CDC统一进行编号、登记、整理备案,并进行血清学、生化学及噬菌体-生物分型鉴定、药物敏感性测定后上报国家CDC 和卫生部。 4.霍乱种株的管理:
相关法规:《中华人民共和国传染病防治法实施办法》和卫生部菌种管理委员会制定的《中国医学微生物菌种保藏管理办法》。 菌(毒)种的保藏由国务院卫生行政部门指定的单位负责。 一、二类菌(毒)种的供应由国务院卫生行政部门指定的保藏管理单位供应。三类菌(毒)种由设有专业实验室的单位或者国务院卫生行政部门指定的保藏管理单位供应。
认真做好登记,统一编号,冻干保存,按期传代、鉴定,并作好有关检验记录。在保存过程中发生菌、毒种变异或死亡,应及时上报科主任及主管部门。
当地所检出的地方菌、毒株应及时上报,因工作需要暂时保留的菌、毒株也应按上级规定的时间进行销毁处理。
新发现的菌、毒种,要做好原始记录,一并上报主管部门复核确认。
使用一类菌(毒)种的单位,必须经国务院卫生行政部门批准;使用二类菌(毒)种的单位必须经省级政府卫生行政部门批准;使用三类菌(毒)种的单位,应当经县级政府卫生行政部门批准。 一、二类菌(毒)种,应派专人向供应单位领取,不得邮寄;三类菌(毒)种的邮寄必须持有邮寄单位的证明,并按照菌(毒)种邮寄与包装的有关规定办理。
未经上级主管部门批准,任何单位及个人不得以工作之便,进行国际间各类菌、毒种交流。做好菌、毒种生物安全防范工作。
传染病的菌(毒)种分为下列3类
一类:鼠疫耶尔森氏菌、霍乱弧菌;天花病毒、艾滋病病毒(4种);
二类:布氏菌、炭疽菌、麻风杆菌;肝炎病毒、狂犬病毒、出血热病毒、登革热病毒;斑疹伤寒立克次体SARS病毒(9种); 三类:脑膜炎双球菌、链球菌、淋病双球菌、结核杆菌、百日咳嗜血杆菌、白喉棒状杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、破伤风梭状杆菌;钩端螺旋体、梅毒螺旋体;乙型脑炎病毒、脊髓灰质炎病毒、流感病毒、流行性腮腺炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒(17种)。
国务院卫生行政部门可以根据情况增加或者减少菌(毒)种的种类。
十二、确诊报告:
? 至此霍乱弧菌整个的鉴定程序(血清学、生化学、噬菌体-生物分型、药敏)全部完成,该由省疾病预防控制中心向国家卫生部、CDC报告鉴定结果。
? 国家规定首例霍乱病人的病原菌必须立即做到确诊报告。以后续发病例则可以先做到初步诊断,至疫情结束后再进行噬菌体-生物分型、药敏等试验。 ? 最终确定报告霍乱名称应为:
例1:O1群埃尔托型霍乱弧菌小川型1b。 例2:O139群埃尔托型霍乱弧菌。 分子生物学技术应用: (一)PCR/MPCR毒力基因检测;
(二)染色体DNA提取;染色体DNA限制性内切酶酶切图 谱制备; (三)核酸分子CT、16srRNA分子杂交; (四)脉冲场电泳(PFGE)分子分型;
(五)限制性片段长度多态性(RFLP)、随机扩增多态性DNA片段(RAPD)、重复基因组回复序列(Rep-PCR)、肠杆菌基因间重复一致序列(ERIC)、扩增片段长度多态性(AFLP) PCR分子指纹分析技术及扩增DNA测序等。
(一) PCR/MPCR诊断技术:
根据霍乱毒素亚单位毒力基因(ctxA)、古典生物型霍乱毒素协同调
节菌毛A基因(C-TCPA)和El-Tor生物型霍乱弧菌不同的TCPA基因编码序列(E-TCPA),采用PCR/MPCR(多重PCR)技术可快速而准确检测霍乱弧菌的毒力基因。 2.方法:
⑴模板制备 将菌落从平皿上取下,溶于三蒸水或直接从细菌的LB培养液中取出一部分煮沸10分钟,12000r/min离心30秒后,取上清直接用于PCR扩增。
⑵系统配制 在0.2mlEppendorff管中按顺序加入下列成份:三蒸水12.8μl,10×PCR缓冲液(含有100mmol/LTris-HClpH8.3,50mmol/LKCl,15 mmol/LMgCl2,0.1%(gelatin)2μl,dNTPs0.8μl(每种dNTP的终浓度为0.2mmol/L),引物0.5μl×6(每种引物终浓度为0.5μmol/L),模板DNA1μl,TaqDNA聚合酶0.4μl(1.2U)。
⑶扩增反应 采用两步法进行PCR扩增,首轮循环94℃5分钟,68℃1分30秒;后续循环94℃30秒,68℃1分30秒(29个循环);末轮循环72℃7分钟(扩增之前每管加一滴石蜡油)。
⑷结果检测 扩增后的样品管中加入溴酚蓝载样液2μl,通过1.2%的琼脂糖凝胶(含0.5μg/ml溴化乙锭)与相应的标准分子量(Marker)一起电泳,电泳结束后,通过紫外灯观察结果并照相。
霍乱弧菌的检验程序
霍乱弧菌的检验程序
临床细菌实验室接到高度疑似患者标本,应尽快地进行检验。具体处理方法如下。
1. 临床标本(患者排泄物、呕吐物、肛拭、肛管内容物及残留、剩余食物等)直接涂片,观察动力,再做制动试验以及革兰染色,镜检发现革兰阴性、细小、直的、微弯、逗号状的杆菌。疑似者即予电话报告
2. 标本直接接种:①血琼脂平板;②弧菌鉴别性平板(4号琼脂平板、碱性琼脂平板);③接种碱性胨水
3. 保留原始标本(不可置于冰箱冷藏)
4. 35℃孵育上述所有平板及胨水
5. 6~8h后:①取碱性胨水培养物涂片(直接观察动力、做制动试验)染色镜检;②移种鉴别性琼脂平板和血琼脂平板;③霍乱红试验;④观察血琼脂平板,见有微小菌落生长。立即涂片染色,霍乱多价血清凝集,氧化酶试验。如符合霍乱弧菌的推断性鉴定,可作出早期初步报告。
6. 继续孵育过夜后,做玻片凝集试验。自分离平板上挑取可疑菌落与霍乱多价诊断血清做玻片凝集试验,所用血清的效价应在1:80~1:160,如过浓,则稀释后再做凝集。将稀释血清滴加在洁净的载玻片上,挑取可疑菌落混悬于血清内,即刻(一般不超过10s)出现肉眼可见的明显凝集者为阳性。菌落应以生理盐水作对照,不发生凝集。为了提高阳性检出率,
应多挑可疑菌落进行玻片凝集。将O1群霍乱多价血清凝集阳性菌落再做氧化酶、涂片染色镜检,初步推断性鉴定,将此高度疑似菌株,报告当地疾病控制中心做最后鉴定。
霍乱弧菌的检测
1.涂片检查:取新鲜送检标本涂片2张,干燥后,用乙醇或甲醇固定,分别用革兰染色剂1:10稀释的石碳酸复红染色,用油镜检查,观察有无革兰阴性呈鱼群排列的弧菌。
悬滴检查:取患者粪便,制成悬滴标本或圧滴标本,检查细菌的动力,霍乱弧菌古典型和EL-Tor型常呈穿梭状及活泼的活动,在悬滴涂片中加O1群霍乱弧菌诊断血清后,在显微镜下观察,若原运动活泼的现象停止,为制动试验阳性。
2.培养:取疑似患者粪便直接接种于碱性蛋白胨水中,进行增菌,同时划线接种于碱性琼脂平板或TCBS平板及血液琼脂平板,孵育于35℃。增菌培养孵育6h后,取表面菌膜移种于上述平板上,进行分离培养,并同时涂片,革兰染色和悬滴标本,检查形态及活动力。
各种分离培养的平板在孵育18~24h后观察菌落,挑取可疑菌落,先与生理盐水混匀,观察有无自凝现象。再用O1群霍乱多价血清做玻片凝集试验,立即出现明显凝集者为阳性,有条件者再做血清分型。
如在选择培养基生长典型菌落,运动活泼呈穿梭状,氧化酶
阳性的革兰阴性弧形菌并与霍乱多价诊断血清凝集者,可判定为O1群霍乱弧菌。在霍乱流行期间,根据上述结果并结合临床即可对病人作出霍乱病的早期诊断。并立即向当地疾控部门报告信息。
注:霍乱弧菌诊断血清试剂的使用方法
于洁净玻片上滴1滴血清,然后取少量被检菌落与血清混匀,轻轻摇动玻片,1分钟内肉眼判断结果,试验应以生理盐水做阴性对照。
检验结果的解释:于1分钟内呈明显凝集者为阳性,呈均匀浑浊者为阴性。
霍乱弧菌的采样送检
霍乱弧菌的一些基本特征
一、 霍乱是如何传播的?
霍乱一般是通过被污染的水、 食物及日常生活接触而传播。 例如, 由于霍乱菌在酒精中仍可以存活, 生吃的醉虾、 醉蟹往往成为传染源; 还要注意不喝生水,桶装水最好烧开后饮用。
霍乱传播途径
1.经水传播:在霍乱的传播中,水的作用最突出,水源易被病人吐 泻物和污物所污染, 易感者既可因直接饮用生水而感染, 也可通过食 物、餐具的污染而感染。
2.经食物传播:霍乱弧菌在食品上存活时间可达1-2周或更长, 条件适宜时还可以繁殖,故食物被污染可形成食物型爆发、流行。 3.经生活接触传播:霍乱也可经接触被污染的物品而传播,特别是 手的污染更易导致感染, 接触传播多在人员密集、 卫生条件差的情况 下发生。
4.经苍蝇传播:夏秋季苍蝇活动频繁,易将病菌带到食物上,起一 定的传播作用。
二、霍乱弧菌有六怕
一般说,霍乱弧菌有六怕,即怕热、干燥、直射日光、酸、茶及一般 消毒剂,而在低温、潮湿、碱、低盐及低营养物的不良环境条件下可 长期存活。
怕热不怕冷:霍乱弧菌对热敏感,55℃湿热中10分钟死亡,煮沸 立即死亡。
怕干不怕湿:霍乱弧菌在干燥2小时或直射阳光下1~2小时即可死 亡,在污染的潮湿衣服上可存活5周。
怕酸不怕碱:霍乱弧菌在酸性环境中可存活1~5分钟, 霍乱弧菌耐 硷力较强,适宜在PH8.4~PH8.8环境中生长。
怕咸不怕淡:钠离子可刺激弧菌生长。
怕氯不怕酒:霍乱弧菌怕各种含氯消毒剂, 1%漂白粉澄清液5分钟 即可杀死该菌。
怕茶不怕奶:将霍乱弧菌放入装有浓茶的试管中,证实茶水可灭菌, 在4%茶水中菌可存活1小时,而在乳制品中其可存活2~3周。
霍乱弧菌在未经处理的粪便中,可存活数天;在冰箱内的牛奶、鲜肉 和鱼虾水产品中存活时间分别为 2~4周、 1周和 1~3周;在室温下 存放的新鲜蔬菜中,可存活 1~5天;在砧板和布上可存活相当长时 间;在玻璃、瓷器、塑料和金属上存活时间不超过 2天。霍乱弧菌古 典生物型在外界环境中生存能力不强,而爱尔托生物型抵抗力较强, 在河水、井水、池塘水和海水中可存活 1~3周,甚至更长,有时在 局部自然水中也能越冬。 爱尔托生物型弧菌可粘附于海洋甲壳类生物 表面,分泌甲壳酶,分解甲壳作为营养而长期存活,如爱尔托生物型 弧菌被人工饲养的泥鳅、鳝鱼吞食后,可在其体内生长繁殖,然后排 入水中。
三、标本的采集和送检
1、标本的采集:
标本一般以病人粪便为主, 重点注意有无像米泔样大便必采, 采样方 法可用棉拭子采取自然排出的新鲜大便, 亦可用棉拭子采由肛门插入 直肠内 3-5CM 处采取,水样便采取 1-3ml 即可,成形便取指甲大小 即可,在某些情况可采病人呕吐物。
2、标本的送检:
采得的标本应立即接种于培养基中, 无需冷藏, 尽快送往实验室培养, 送检标本时应填写样本送检单,写明姓名、性别、年龄、地址、发病 时间、及临床诊断等。试管上应写上姓名、性别、年龄,标本必须妥 善包装,放置坚固的送检箱内专人送检。
泾县疾病预防控制中心 检验监测科 2012年 4月 27
日
市疾控中心开展霍乱外环境采样监测
更新时间:2010-5-28 9:39:10
霍乱是由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病,它发病急,传播快,波及范围广, 是《中华人民共和国传染病防治法》规定强制管理的甲类传染病。
目前 , 尽管霍乱的流行规律尚不十分明确 . 但一般情况下 , 经水传播是霍乱流行 最重要的传播方式已是毋容置疑的了。沿海水域 , 河口和内陆河流 , 湖泊等自然水体 是霍乱弧菌的自然生境 , 水体中所携带的产毒霍乱弧菌在人群霍乱的发生和传播发 挥了重要作用。
为了解我市霍乱弧菌在外环境中的存在和动态变化情况,来及时发现病例、识 别暴发, 为制定防治策略和措施提供科学依据。 徐州市疾病预防控制中心疾控科于 5月 25日安排专业人员,对我市范围内与广大群众生活息息相关的解台闸、秦洪港和
云龙湖等水体开展了霍乱外环境采样监测工作。 相关图片:
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致病过程中的作用
霍乱毒素(CT)是霍乱弧菌引起腹
要原因,而霍乱弧菌只有定居在小肠里才能分泌毒 素,有关它的定居机理目前还知道的不多,据报 导,菌毛或甘露糖敏感的血细胞凝集素缺失都可能 降低霍乱弧菌的定居能力;运动性在其定居过程中 也是必须的,缺乏运动性的霍乱弧菌,其小肠粘附 力将会降低;霍乱弧菌的鞭毛外包着一层与外膜连 结的鞘,它不仅在霍乱的免疫中起着特殊作用,且与 菌体的定居作用有关.
本文利用转座子诱变产生的霍乱弧菌如下突变 株:03具鞭毛而不能运动的.Oi)不具鞭毛也不能 运动的.(iil)不具鞭毛也不能运动,但具有一个 鞭毛外鞘状结构的.和三种动物模型:(i)兔回肠 攀.(ii)成年兔腹泻(RITARD).(iii)乳鼠.证
明了运动性和鞭毛结构在定居过程中的作用. 材料和方法
菌株和培养基:所用菌株(见表1)用含5O呖
甘油的脑心浸液(BHI)于一70?下保存,生长培
养基是L一琼脂或肉汤或BH1,培养温度35?
兔回肠}攀试验:肠攀制法和以前相同,长度取
10cm,应入菌量是1mL,内含1x10一5x10'CFU, 在引入后的3,6,9,15小时取样险查.
1.FA比率刻定:测出每一回肠襻的长度和内含
肠液,计算其比值(ml/cm).
2.肠液细菌浓度:系列稀释液铺含适量抗生素
的L一琼脂平皿,测定肠液中霍乱弧菌的CFU.
3.肠表面吸附:从肠}攀中部切取0.5—1om,用
pBS冼三遍,称量卮于3~,5mL冷BHI中搅碎搅匀,
匀浆液铺平皿,计算每克材料的CFU,再用下式计
算出吸附于肠表面上的霍乱弧菌百分数;
吸附百分数=100×(肠表面CFU/(肠表面CFU
+肠液CFU))
ic
能hardson,一
了确迂传座子扦入或突变引起的不运动现象的兔且能力相当,395株的突变株KR1能定居l』兔,
胄无多重I,攻应.我们测试了两亲本株N16961;~U395h-~KR3F[有在高剂帚下方才定居.
砭其突变侏的生长特性和产cT情况,发现不论在休为了检查内研究用不运动株有无恢复突变,
内或在体外,所有变异抹都有和亲本相司的生长动我们对来自定居作用研究的全部阳性培养物做了镜
力学,但两亲本的生长持性明显不同,古典型395拎.结果是否定的.
其突变衍生株比EITorN16961及其突变衍生株有.乳鼠试验结果: 较长的逞缓期,而11生长终密度也低于N16961及所有亲本和不运动突变株引起cD一1小鼠的FA
其突变衍宅株.~fESs0nm处.').别.为3,4和s.0一比值都较高.为了观察彼此相近菌株间的生长特
7.4征,我们用全肠测定了每对菌株的输入率和输出
N16961受其变肄株体内cT产量较体外高,在.除KR26/KR131和KR31/KR126~t,,
所有菌株
体外.N1696l和其变异株cT产量相近,在f*~l-,都显示净增长,输入率和输,q4率差别小于6倍.
变异侏要低一些.395株体外cT产量较其变异株.....
高,但在体内二者产量相近.除395株外,两个生,,
物塑及其变异侏'内cT产璧在体内都较高.鞭毛结构可能在两方面对定居起作用,首先,
兔回}攀试验结果鞭毛带来的运动性可以增加菌体和肠表面相互作用 在野生型和其运动突变株接种后9小时.肠液的机会,其次.鞭毛还可能含有与肠粘附有关的
明显增多,凡不运动突变侏FA比值均远低于N16961一些凶予? 和395株,来自同一亲本的不运动突变株,其FA比霍乱不运动突变株动物模型上的研究提示;运
值无显着差刚.在9和164,,时.所有菌株在回饧警动性与霍乱弧菌的毒力直接相关.本文以所用三种
内都呈净增长.动物模对所列运动性突变株的观察证明了运动性 N16961;;~运动突变株KR31(具锻毛)和KR26与霍乱弧菌岣致病性和定居性直相关,而鞭毛结
(不具颧毛)肠轰面吸附能力在9,16小时时比亲构本身并不重要.不运动突变株引起~gJFA比值也较
本弱.395株,~-LA动突变侏肠表面吸附能力(16小低.可能是由TCT产量下降引起的.
时)在小剂量凄种状况下和亲本差不多,在高剂量395抹及突变株的研究结果表明z运动性和鞭毛
状况下反而比亲本强,在9小时,395株不运动突变结构在定看过程中都起一定作用,所有不运动突变
株有9oto在1粘骥t,亲本株汉有15%.株的毒力部低于其野生有运动力的亲本,而且其中
RITARD试验结果:具缎毛外鞘状结构'比瓦鞭毛突变株的毒力强前 本实验测试了三个指标:(i)毒力:以死亡时者在试硷疑下能之居,引起腹泻和死亡,后者只
同测定.(ii)腹泻:以腹泻持续时间测定.(iii)定发生在大刘量崎况下., 居力:以排菌持续时间测定.古愧霍乱孤蔺比ElTor变种具有更强的毒力, 亲本株饺不运动突变侏毒力强.N16961不运动我们的试稔岜证了这一结论这可能是由于古典
突变株不管其鞭毛结构如何,毒力相差不大,395株菌具有强的粘附力或定居作用. 的不运动突变株毒力相差较大,具鞭毛外鞘状结构在幼鼠试验中,E1Tor野生型和同基因的突变
的KRl株(Mot一,Sheath一)毒力明显强于KR3株株的FA比值相差不大,不运动突变株中,具鞭毛
(Mo:一Fla一)和不具鞭毛的没有区别.在乳鼠双重感染竞争试
亲本株惑染勺兔子在出观lI复泻特征前就已死验,没有发现运动性或鞭毛结构的作用.N16961
亡.16361的两个不运动突变诛泻弓I发情况相株的运动性恍现霉素和链霉素抗性衍生株在小肠上
近.395侏下运动突变株t扫单有鞭毛外的KR1株端的居能力减弱,全肠试验时,输:率没有变化,
在8.0,9.9两对毅剂量下弓I发了腹泻,而不具任何哥来抗秦抗性的菌株定居能力下降,而其生长率
鞭毛结构的KR3株只有在对数剂疑9.9-F才能引挖没有下.
泻.所用不运动突变株在不同动物模型上产生的结
N16961的两个不运动突变株都可定居被感染果并不一致.在龟回肠襻试呤中运动
株和不运动
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/?幽磐.,.,
通过鉴别分析胃液尿素和pH水平检测
幽门弯曲茵携带者
AmlglioF,
幽门弯曲菌感染常伴发生消化不良症状,治疗 前必须做出早期,可靠的诊断.组织学标本的尿素酶 试验由于快速,费用低,操作简便被视为有效的方 法,但敏感性不足,在我们实验室,这种方法与其 他试验方法如培养,活检组织标本刮取物与胃液颗 粒球的电镜检查相比,其阳性检出率可有62%.本 篇报道根据对胃液尿素和pH的鉴别分析提供了解 决这一问题的可以选择的方法.
方法
将取自经胃镜检查诊断为胃炎患者(男29例, 女25例,平均(SD)年龄48.3(5.7)岁)的54份 胃液标本通过标准培养和电镜检查以测定幽门弯曲 菌.将相同标本进行尿素测定(Beckman:ASTRA4,
自动化稳定器/来源于同一厂家的尿素常规分析成 套工具)和pH测定(pH计).
为了数据均统计学分析,采用了鉴别分析方法 (TMmoduleoftheBMDPstatisticalPackage),
此方法可以将已经其他参考系统分类的患者分为阴 阳两组.
结果
s4份活检组织标本中,31份阴性,23份阳性, 这些数据做为进一步比较的参考.从来源于相同患 者的胃液中检测其他细菌存在时尿素的浓度和PH 水平.幽门弯曲菌感染严格伴随尿素浓度?1Stag/ 地增加了检出幽门弯曲菌的可能性(12例中仅I例). 所得结果表明,同时利用胃液尿素和pH是很 有效的鉴别方式,'其准确分类率为96.3%(2名受 试者分类误差).此判别式函数是0.66304×pH+ 0.16243×尿素一3.94734,计算值大于0的患者为 幽门弯曲菌阴性携带者,其他患者均为阳性携带 者.BMOP程序计算出患者最后归属于哪一组的可 能性(如图).计算这一可能性的公式是E.XP (一4.16+181×pH+O.41×尿素),所有尿素浓 度高于15mg/dl的患者为幽门弯曲菌阴性(全部14 例),其他受试者中PH高于3.5的患者,即胃液颗 粒球中存在着其它菌群者也为阴性(9例中8例), 其余情况的患者为阴性(31例中30例).(见图) 结果显示了患者属于幽门弯曲菌阳性携带者的 可能性
.表示阳性携带者
?
表示阴性携带者
讨论
如果上述试验结果可靠并与其它标准参考试验 结果相符合,这将是一个极其实用的快速,简便的 检测幽门弯曲菌携带者的方法.实际上,直接利用 胃镜活检组织进行尿素酶试验被普遍应用,是由于 株的FA比值差别较大,在乳鼠试验中却无差别. 在RITARD试验中,可以雷到带鞘鞭毛的作用,但
在乳鼠双重感染试验中却不能得到证明,产生这些 区别的原因可能有多种,其中邑括兔,鼠这两种动 物的不同生理状态.发育年龄以及不同的定居因子 或毒素受体的分布等.
在霍乱弧菌致病过程中,兔模型表明鞭毛结构 不起重要作用.RITARD模型表明带鞘鞭毛在古典 菌的定居过程中作用很小,很可能是这些动物模型 对检测定居因子不够敏感所致.
[InfectionandImmunity,199159(8):
2727—2736.杜琳译陈锦荣校]
;31,
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