双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有哪些:
双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA。
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时,试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5~160mg/ml。
双缩脲法测定蛋白质含量需注意哪些问题
在使用双缩脲试剂时候,必须注意,必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。(若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液,再加入氢氧化钠[NaOH]溶液,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的。
另外,能与双缩脲试剂发生紫色反应的化合物分子中至少含有两个肽键。因此,二肽无法用它来检验。
【双缩脲反应】作业帮
双缩脲法的原理双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物,这一反应称为双缩脲反应.因为蛋白质中有多个肽键,也能与铜离子发生双缩脲反应,且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律,而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关,所以可用双缩脲法测定蛋白质的含量.双缩脲反应主要涉及肽键,因此受蛋白质特异性影响较小.且使用试剂价廉易得,操作简便,可测定的范围为1~10Mg蛋白质,适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定,能测出的蛋白质含量须在约0?5Mg以上.双缩脲法的缺点是灵敏度差、所需样品量大.干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲液,如TrIs缓冲液,因为它们产生阳性呈色反应,铜离子也容易被还原,有时出现红色沉淀.
双缩脲法测定蛋白质的含量实验分析与讨论怎么写
展开全部 双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有哪些: 双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA。
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。
双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。
当底物中含有肽键时,试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。
可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。
鉴定反应的灵敏度为5~160mg/ml。
双缩脲法测定蛋白质含量需注意哪些问题 在使用双缩脲试剂时候,必须注意,必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。
(若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液,再加入氢氧化钠[NaOH]溶液,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的。
另外,能与双缩脲试剂发生紫色反应的化合物分子中至少含有两个肽键。
因此,二肽无法用它来检验。
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蛋白质与双缩脲发生显色反应的原理
双缩脲反应是指具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应,生成红紫色的络合物.所有的蛋白质均有此显色反应.双缩脲试剂就是指能与具有两个以上肽键的化合物发生红紫色显色反应的试剂.它是NaOH和CuSO4两种溶液.在实验过程中,先在含蛋白质的溶液中加入等体积的NaOH溶液,混合均匀后,再滴几滴CuSO4溶液(量较少).即先后加入NaOH和CuSO4溶液.如果在NaOH中滴几滴CuSO4溶液混合后,再加入到含蛋白质的溶液中,混合液中就没有Cu2+,显色反应就不会发生.除-CONH-有此反应外,-CONH2-,-CH2-,NH2-,-CS-CS-NH2,等基团亦有此反应. 具体方程式和产物分子式见附件,解包后有个图像文件,上边的是方程式,下边的是紫色产物的结构
双缩脲反应的双缩脲反应的定义
展开全部 在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与铜离子(Cu2+)作用,形成紫红色络合物(该物质的分子结构式见图),该反应即双缩脲反应。
铜溶液作用,就会形成紫色或蓝紫色络合物。
注:除-CO-NH-有此反应外,(-CONH2-)、(-CH2-)、(-NH-)、(-CS-CS-NH2)等基团亦有此反应。
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蛋白质双缩脲反应原理
双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物,将尿素加热到180度,则两分子尿素缩合成一分子双缩脲,并放出一分子氨.双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络合物,此反应称为双缩脲反应.蛋白质分子中含有很多和双缩脲结构相似的肽键,因此也能起双缩脲反应,形成红紫色络合物.(生物化学书上的答案)
双缩脲试剂的反应原理
展开全部 答:双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。
双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。
它是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL 氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制。
会遇到蛋白质显紫色。
当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。
可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。
鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
双缩脲试剂中真正起作用的是 硫酸铜,而 氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。
向试剂中加入碘化钾,会延长试剂的使用寿命。
酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。
[1] 需要注意的是,能与双缩脲试剂发生紫色反应的化合物分子中至少含有两个肽键。
因此,二肽无法用它来检验。
一、优点:双缩脲法测定蛋白质测定范围能够是1~10mg蛋白质,操作简单、快捷。
既适合手工操作,又适合自动化分析,重复性好、线性关系好, 双缩脲试剂可以长期保存( 若贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制)。
二、缺点:灵敏度差,测定范围窄,样品需要量大,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,因此它常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。
干扰测定的物质包括有:在性质上是氨基酸或肽的缓冲液,如TrIs缓冲液,因为它们产生阳性呈色反应,铜离子也容易被还原,有时出现红色沉淀。
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双缩脲反应是什么?
紫色络合物分子结构式在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与铜离子(Cu2+)作用,形成紫色络合物(该物质的分子结构式见图),该反应即双缩脲反应. 双缩脲反应是肽和蛋白质所特有的,而为氨基酸所没有的一种颜色反应.一般分子中含有两个氨基甲酪基(即肽键:-CO-NH-)的化合物与碱性 铜溶液作用,就会形成紫色或蓝紫色络合物. 注:除-CO-NH-有此反应外,(-CONH2-)、(-CH2-)、(-NH2-)、(-CS-CS-NH2)等基团亦有此反应.
双缩脲反应的方程式!!
实验 生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定一、实验目的初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
二、实验原理1.还原糖的鉴定原理 生物组织中普遍存在的还原糖种类较多,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。
它们的分子内都含有还原性基团(游离醛基或游离酮基),因此叫做还原糖。
蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基,因此叫做非还原性糖,不具有还原性。
本实验中,用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否,而不能鉴定非还原性糖。
斐林试剂由质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。
Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下,能够生成砖红色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。
其反应式如下:CH2OH—(CHOH)4—CHO+2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH+Cu2O↓+2H2O用斐林试剂鉴定还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色 棕色 砖红色(沉淀)。
2.蛋白质的鉴定原理 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂。
双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液(A)和质量浓度为0.01 g/mL(B)的硫酸铜溶液。
在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。
由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此,蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。
3.脂肪的鉴定原理 脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色,被苏丹Ⅳ 染成红色三、实验过程(见书P18)四、实验用品(见书P18)
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