范文一:酮体的生成
实验二 肝脏中酮体生成作用
[目的]
通过实验了解和验证肝组织的生酮作用。
[原理]
在肝脏中,脂肪酸b-氧化不完全,经常生成乙酰乙酸、b-羟丁酸和丙酮,这三者称为酮体。酮体是机体代谢的中间产物,在正常情况下,其产量甚微;患糖尿病时,机体大量动员脂肪氧化,肝组织生成酮体的量会超过肝外组织利用率,便可出现酮尿症、酮血症,导致酸中毒。
本实验以丁酸为底物,与新鲜肝匀浆(含有生成酮体的酶系)保温后可形成酮体。酮体可与含亚硝基铁氰化钠的显色粉反应产生紫红色化合物,而经同样处理的肌肉匀浆则不产生酮体,故不产生显色反应。 [试剂]
1(0154mol,L(0.9%)氯化钠溶液。
2(洛克氏(Locke)溶液。将氯化钠0.9克、氯化钾0.042克、氯化钙0.024克、碳酸氢钠0.09克、葡萄糖0.1克混合溶于水中,溶解后如水至100毫升。
3(0.5mol,L丁酸溶液。取44.0克丁酸溶于0.1mol/L氢氧化钠溶液中,并用0.1mol,L氢氧化钠稀释至1000毫升。
4(0.067mol,L磷酸缓冲液(pH=7.6)。量取0.067mol,L磷酸氢二钠溶液86.8毫升和0.067mol,L磷酸二氢钠13.2毫升混合即得。
5(0.92mol,L(15%)三氯醋酸溶液。
6(显色粉。亚硝基铁氰化钠1克,无水碳酸钠30克,硫酸钠50克,混合后研碎。
[操作]
l(匀浆的制备:将小白鼠或兔处死,立即取出肝脏和脏肉,剪碎,分别放入匀浆器中,加入生理盐水(按每克组织加3毫升水的比例}研磨成匀浆。
2(取试管四支,标号,按表操作:
管 号
试 剂(滴)
1 2 3 4 5
磷酸缓冲液(PH7.6) 15 15 15 15 —
罗氏溶液 15 15 15 15 —
丁酸 30 — 30 — —
蒸馏水 — 30 — 30 30
1
丙酮 — — — — 30
肝匀浆 15 15 — — —
肌匀浆 — — 15 15 —
3(摇匀混合,置离心机运转5分钟(3000转,分)。另取试管四支或有凹的白瓷反应板一块,标号,分别提取离心出的上清液,按表操作。
比较四管颜色反应,并说明原因。
[思考与分析]
1(为什么说做好本实验的关键是制备新鲜的肝匀浆?
2(为什么脂肪酸在肝内正常中间代谢产生的酮体量很少?在什么情况下血中酮体含量升高,甚至导致酮症酸中毒?
2
范文二:酮体的生成和利用
酮体的生成和利用
【实验目的】
了解酮体的生成部位及掌握测定酮体生成与利用的方法。
【实验原理】
在肝脏线粒体中,脂肪酸经β-氧化生成的过量乙酰辅酶A缩合成酮体。酮体包括乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮三种化合物。肝脏不能利用酮体,只有在肝外组织,尤其是心脏和骨骼肌中,酮体可以转变为乙酰辅酶A而被氧化利用。
本实验以丁酸为基质,与肝匀浆一起保温,然后测定肝匀浆液中酮体的生成量。另外,在肝脏和肌肉组织共存的情况下,再测定酮体的生成量。在这两种不同条件下,由酮体含量的差别我们可以理解以上的理论。本实验主要测定的是丙酮的含量。
酮体测定的原理:在碱性溶液中碘可将丙酮氧化成为碘仿。以硫代硫酸钠滴定剩余的碘,可以计算所消耗的碘,由此也就可以计算出酮体(以丙酮为代表)的含量。反应式如下:
CHCOCH十3I十4NaOH CHI十CHCOONa十3NaI十3HO 332332
I十2NaSO NaSO十2NaI 2223246
【实验材料】
1. 实验器材
试管;移液管;锥形瓶;滴定管及架。
2. 实验试剂
(1) 0.1% 淀粉液。
(2) 0.9% NaCl溶液。
(3) 15% 三氯乙酸。
(4) 10, NaOH溶液。
(5) 10, HCl溶液。
(6) 0.5mol/L丁酸溶液:取5ml丁酸溶于100ml 0.5mol/L NaOH中。
(7) 0.1mol/L碘液:I12.5g和KI 25g加水溶解,稀释至刻度1L,用0.1mol/L NaSO2 223
标定。
(8) 0.02mol/L NaSO: 24.82g NaSO?5HO和400mg无水NaCO溶于1L刚煮沸的223223223
水中,配成0.1mol/L溶液,用0.1mol/L KIO标定。临用时将标定NaSO溶液3223
稀释成0.02mol/L。
【实验操作】
1.标本的制备:
将兔致死,取出肝脏,用0.9% NaCl洗去污血,放滤纸上,吸去表面的水分,称取肝组织5g置研钵中,加少许0.9% NaCl至总体积为10ml,制成肝组织匀浆。另外再取后腿肌肉 5g,按上述方法和比例,制成肌组织匀浆。
2.保温和沉淀蛋白质:
取试管3只,编号,按下表操作:
管号 A B C 试剂
肝组织匀浆 — 2.0 ml 2.0 ml
预先煮沸的 — — 2.0 ml 肝组织匀浆
pH 7.6的 4.0 ml 4.0 ml 4.0 ml 磷酸盐缓冲液
正丁酸 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml
43?水浴保温60分钟
肌组织匀浆 — 4.0 ml — 预先煮沸的 4.0 ml — 4.0 ml 肌组织匀浆
43?水浴保温60分钟
15%三氯醋酸 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml
摇匀后,用滤纸过滤,将滤液分别收集在3支试管中,为无蛋白滤液。
.酮体的测定 3
取锥形瓶3只,按下述编号顺序操作:
编 号 1 2 3 试 剂
无蛋白滤液 5.0 ml 5.0 ml 5.0 ml
0.1mol/L I-KI 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml 2
10% NaOH 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml
摇匀,静置10分钟,向各管中加入10% HCl 3ml,加1%淀粉液1滴呈兰色,分别用0.02mol/L NaSO滴定至溶液呈亮绿色为止。 223
【实验结果与计算】
肝脏生成的酮体量(mmol/g)=(C,A)×NaSO的摩尔数×1/6 223
肌肉利用的酮体量(mmol/g)=(C,B)×NaSO的摩尔数×1/6 223
A: 滴定样品1消耗的NaSO ml数。 223
B: 滴定样品2消耗的NaSO ml数。 223
C: 滴定样品3消耗的NaSO ml数。 223
【思考题】
为什么只有在肝外组织,酮体才可以被氧化利用,
Experiment 11 Production and Degradation of Ketone Bodies
【Purpose】
Understand the production organs and master the method used for production and degradation of ketone bodies measurement.
【Principle】
Within the mitochondria of liver, the excess acetyl-CoA produced during fatty acid β-oxidation is converted to acetoacetate, β-hydroxybutyrate, and acetone, this group of molecules
is called the ketone bodies. Liver can not use ketone bodies as an energy source. Only in several tissues out of liver, most notably cardiac and skeletal muscle, ketone bodies are converted to acetyl-CoA, the acetyl-CoA is then oxidated to generate energy .
We use butyric acid as initial stuff in this experiment, the butyric acid is heated with the liver plasm, and then measure the content of ketone bodies in liver plasm. Moreover, measure the content of ketone bodies under the condition of coexistence of liver plasm and skeletal muscle in reaction system. We can comprehend the above theories from the difference of the ketone bodies content under the two different conditions. We determine the content of acetone in this experiment.
The ketone bodies measurement principle is shown below: In alkaline aqua the iodine can oxidize acetone to become iodoform , titrate the remainder iodine in the reaction system with hyposulphite, we can calculate the consumption of iodine according to the result of hyposulphite titration, we can also calculate the content of ketone bodies (take acetone as to represent) according to the titration result.The equation of Reaction is as follows:
CHCOCH十3I十4NaOH CHI十CHCOONa十3NaI十3HO 332332
I十2NaSO NaSO十2NaI 2223246
【Materials】
1. Apparatus:
Tubes, Pipets, Flasks Burettes and burette support.
2. Reagents:
(1) 0.1% aqua of starch.
(2) 0.9% aqua of NaCl.
(3) 15% trichlorine acetic acid.
(4) 10% aqua of NaOH.
(5) 10% aqua of HCl.
(6) 0.5mol/L butyric acid: Dissolve 5ml butyric acid in 100ml 0.5mol/L NaOH.
? 0.1mol/L aqua of iodine: Dissolve I 12.5g and KI 25g in distilled water, dilute the 2
solution to 1L, demarcate the solution with 0.1mol/L NaSO. 223
? 0.02 mol/L NaSO: Dissolve 24.82 g NaSO ? 5 HO and 400 mg anhydrous NaCO 223223223
in 1L fresh boiled water to get 0.1 mol/L solution, demarcate the solution with 0.1 mol/L KIO. 3
Dilute the solution to 0.02 mol/L just before using.
【Procedures】
1. Preparation of the specimen:
Execute the rabbit, take out the liver, scour off the blood with 0.9% NaCl, put the liver on
filter paper to suck away the surface humidity, weigh 5 g of the liver organize, place it into the mortar, add a few 0.9% NaCl to total volume 10 ml. Then take 5 g muscle of rear leg, make it into the liver organization plasm according to above- mentioned method and comparisons.
2. Heat preservation and precipitation of the protein:
Take three tubes, number the tubes and operate as the table followed:
Tube No. A B C Reagent
The liver organization plasm — 2.0 ml 2.0 ml
The liver organizationn plasm that 2.0 ml — — boiled in advance
Phosphoric acid salt buffer liquid of 4.0 ml 4.0 ml 4.0 ml pH7.6
orthobutyric acid 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml
Heat preservation at 43? water bath for 60 minutes.
The muscle organization plasm — 4.0 ml —
The muscle organization plasm that 4.0 ml — 4.0 ml boiled in advance
Heat preservation at 43? water bath for 60 minutes.
15% trichlorine acetic acid 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml
Filter with the filter paper after shaking evenly, collect the filtrate respectively in 3 tubes, then we get the filtrate without protein.
3. Determination of the ketone bodies
Take 3 flasks, operate as below-mentioned serial number in proper order:
Flask No 1 2 3 Reagent
Filtrate without protein 5.0 ml 5.0 ml 5.0 ml
0.1mol/L I-KI 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml 2
10% NaOH 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml
Place Statically for 10 minutes after shaking evenly, add 10% HCl 3ml to each tube, and add one drop of 1% starch liquid to each tube, then we can see the solution presents the color of orchid, titrate with 0.02mol/L NaSO until the solution presents the color of bright green respectively. 223
【Result and calculation】
Ketone bodies produced in liver( mmol/g)=(C,A)×Moore content of the NaSO ×1/6 223
Ketone bodies consumed in muscle ( mmol/g)=(C,B)×Moore content of the NaSO ×1/6 223
A: volume of the NaSO(ml) consumed during titration of sample 1 223
B: volume of the NaSO(ml) consumed during titration of sample 2 223
C: volume of the NaSO (ml) consumed during titration of sample, 223
【Advisement after experiment】
Ketone bodies are oxidated to generate energy only in several tissues out of liver. Why?
范文三:酮体生成的实验改进
兵州。 可见, 岐伯确实也是 远时期古位伟一大的乐 学音 家 他很 可能是在全,面 总前人结音成乐 就基的上创础造出适 合队军演 的所谓奏镯铙 鼓、 、 灵角髀、 神钲军乐 , 而又因成为 国历中 上 第一位史乐音学家 。 固然 , 关于岐 的籍伯贯生平和迹等事多众史历虑 疑,要 得 出
一
参考献 文
:I
马司.迁 l】 史 记 (孝武纪本)】 【 .: M 北京 中华 局 书 5,. l9 9
【 张 耀民,2 陆】成. 大阳代古论史【 】 M. 庆 兰州:甘肃 化 文出版社,9 7l9
.【沈 约.3 】宋 书 卷(十 九 ,志第九, 乐 一 )北】京: [ M .华书局,9中 41 7. 【 征.魏 4 】隋( 书十三 卷, 第志 , 八乐上)音 【 .]M 京北: 华书局中, 3 91 . A7
个人令信 服 结论的 ,还有 待考于 学的古一步发展进。
体 生酮成 实验 改的进
龙跃娥
黔(东南 民族职学 院业, 贵 州凯 里 56 0)5 O 0 关
键 :词体 酮 实验 ;进改; 的度浓
酶
(见表 2 )
表。 2恒温时 对间体酮成生的影响加入的时各种试
剂中圈
分类 号 :4 43 文献识标码 :G2 I 1
文章 B编 号:6 11 4(o l9 —19 0 17 — 262 0)01 -5 1l
实 验的
目(
) 选择最佳 1的浓度酶及温时恒。间 () 2 改 用肝及猪猪肉以低实验费用降。
2 原理
)(2将 述上试管匀摇后, 放于置 3。 7C恒水浴温中保温 。( 3 一组)3 O分 ,钟一 组 另 O分4后钟 出各 管取加 入 %三1
5
实本验用丁作酸为物,底与 新鲜匀浆一起保肝温 肝组, 用 利织合成 中体 酮的套全系,酶催 丁酸化合酮成体, 据酮体 根中的 乙 乙酰 酸丙酮酸可与含与亚有酸铁硝氰化 钠显的粉作色用, 生
成紫色红化物合的反 应定酮鉴体的存在 。而经同样处的肌理 匀浆 , 则产不生酮 ,体与显 粉作用无色颜色出现 。
3 验实设计 及结 果
氯乙 酸1. 0升毫匀混 离心, 3分钟 ( o 2o 转份0) 各 。取管 , 上出 清 1液. O毫加入显色粉约升 20, .克 观察颜色变 化 。 ( 4) 结果 O分:钟 4和 3 分钟 2组对照管生0成 颜 色的同相,
分 别紫为红。 色 33 褚 反褚肝肉对体鞠生崴的影响
.(
)1 猪肝匀 及浆猪浆肌的备制。 取出早 晨 杀 的宰猪及 猪肝 约 2肉克分放别入钵 中, 加研生理盐水 1入 .升, O O 毫磨研成 匀
浆。
31 肝
匀 浓度泉 鞠体对 成生影响 的. () 白肝鼠匀浆 制备
的及肌匀的制浆。取小备 白鼠只一, 1 小头处死 断 迅,速 腹剖 出,肝脏 和肌织组 , 分别取入研钵放 中, 加
生理盐人 水 (只一 小鼠肝白脏约 2按 克左右加生入理盐水 1 0.O 升毫 研磨)匀浆。 ,成 ( ) 每组取试2 管 编5后号入加各种试剂 ( 分2组, 支 ,见表1。 ) 表
1肝 匀 浓度浆酮体生对成的响影加时入各种试剂的
( )
2 组 ,分 2组每试管 取支 ,6 号后按编表 3加各入试种剂
( 表。3 见 )
表 猪3及猪 肉对酮体肝生成 影的时加响的入各种剂 试
()
3将列 上6支试管 摇匀后 ,置于放3。 温恒浴水中保。 温C7
) 4 一组( 3分 钟 , O另一组 4 o 钟后取分出各 加入管 %1三 (5 3)上将试述管匀摇 , 后置放 3 于 。C7恒温浴箱 水保温。中 )( 一组 34 分O钟, 一另组4 0 钟后取分 出,各 管入加 1三 5%氯乙 酸1 . 毫0混匀升, 心离 3分钟 (0转O 。各管取/清液上 2 0 )分约1 . O毫升加入色显粉 约2克0, . 观 颜察色反应。 ( ) 结5 果: 猪的匀肝分浆作 了 3别O分 钟 和 4分o钟 2的组
氯酸 1 毫升混乙匀, O. 离 3心分 钟 (oO o 2转 1 份 。管各上清取
液约
毫升加入1色显约粉0 ,观克察色反映颜( O . .2 色显的粉 制: 配硝亚基铁化氰 钠 2无碳水酸 钠3 , 克, 克 O硫铵 5 酸克 0) 。) 5结(:0果 3分钟 和4 分 钟 2O 组照管对生成的颜相同,色
分 别递为增紫性红色
32 。温时 恒对间鞠体 成的生影 .
响对照
, 组 生成 的颜 与色小白 鼠的肝匀浆实 验生成 的 颜 相色 2 同。
4结
论
( )1佳最匀肝浆渡浓为2 克左右 的脏加肝 1.入毫升生理 o盐
0的肝水浆匀 取1. 0毫 ,7 3升 ℃温时间为恒3 枷 分。 O钟
(
)2组 , 1 分组 取每试 5管 支 编,号按 表2加 入 各种 试 剂
()
2 用猪肝替代小可白的肝脏鼠A 。、
一
9 — 5 1
范文四:酮体的生成和利用
酮体的生成和利用
酮体是脂肪酸在肝内分解氧化时的正常中间代谢产物,它包括乙酰乙酸、β-羟丁酸及丙酮三种有机物质。其中β-羟丁酸含量较多,丙酮含量极微。
(1) 酮体的生成
以乙酰CoA为原料,在肝线粒体经酶催化先缩合,后再裂解而生成酮体,除肝之外,肾也含有生成酮体的酮体系。酮体的合成过程可分三步进行。
① 首先由两分子乙酰CoA在硫解酶的作用下缩合生成乙酰乙酰CoA,同时释放出一分子CoA-SH。【反应式1】 ② 然后,乙酰乙酰CoA再与一分子乙酰CoA结合生成6个碳的3-羟甲基戊二酸单酰CoA(HMGCoA),并释放出CoA-SH,此反应是由HMGCoA合成酶催化的,该酶在肝线粒体含量极高。【反应式2
】
③ 乙酰乙酸被还原生成β-羟丁酸,该还原反应是由紧密结合在线粒体内膜上的β-羟丁酸脱氢酶(此酶在肝中活性极高)催化,还原反应所需的氢由NADH提供。该
+反应速度取决于NADH/NAD 之比值。部分乙酰乙酸还可缓慢地自发脱羧,亦可经乙
酰乙酸脱羧酶催化脱羧生成丙酮。
【肝内酮体的生成】
肝含有合成酮体的酶体系,故能生成酮体,但肝缺乏利用酮体的酶,因此不能氧化酮体,肝产生的酮体需经血液运输到肝外组织进一步氧化分解。
(2) 酮体的利用
酮体被氧化的关键是乙酰乙酸被激活为乙酰乙酸辅酶A,激活的途径有两种:一是在肝外组织细胞的线粒体内,β-羟丁酸经β-羟丁酸脱氢酶作用,被氧化生成乙酰乙酸,乙酰乙酸与琥珀酰CoA在β-酮脂酰CoA转移酶(β-ketoacyl CoA transferase)(3-氧酰CoA转移酶),即琥珀酰CoA;乙酰乙酸辅酶A转移酶催化下,生成乙酰乙酰CoA,同时放出琥珀酸。另一途径是在有HSCoA和ATP存在时,由乙酰乙酸硫激酶催化,使乙酰乙酸形成乙酰乙酰辅酶A,后者再经硫解生成两分子乙酰CoA。乙酰CoA进入三羧酸循环被彻底氧化。【肝外组织对酮体的利用】
丙酮不能按上述方式氧化,它可随尿排出。丙酮易挥发,如血中浓度过高时,丙酮还可经肺直接呼出。
肝是生成酮体的器官,但缺乏氧化酮体的酶,故肝中酮体不能氧化;肝外组织缺乏HMG CoA裂解酶,不产生酮体,却可氧化利用酮体。
【酮体的性质】
(3) 酮症
正常情况下,血中酮体含量很少,每1OOml血中酮体含量低于3mg(0.3mmol/L)。但在饥饿、高脂低糖膳食及糖尿病时,脂肪动员加强,脂肪酸氧化增多,酮体生成过多,超过肝外组织利用酮体的能力,引起血中酮体升高,当高过肾回收能力时,则尿中出现酮体,即为酮症(ketosis)。因酮体中乙酰乙酸及β-羟丁酸都是相对强的有机酸,如在体内堆积过多可引起代谢性酸中毒。
饥饿、高脂低糖膳食及糖尿病均造成体内糖氧化利用的减低,呈现胰高血糖素与胰岛素的比值升高,,则大量脂酰CoA转移入线粒体进行氧化,产生大量乙酰CoA。另外还使脂解作用增强,则长链脂酰CoA增多而堆积起来。在线粒体内,此时由于脂酰CoA特别是长链脂酰CoA增多,通过别构抑制柠檬酸合成酶,致使乙酰CoA难于进入三羧酸循环氧化,在肝内堆积的乙酰CoA缩合生成酮体。过多的酮体将随血液循环运至肝外组织氧化利用,肝外组织氧化酮体是有一定限度的。当血酮体过高,如超过肝外组织氧化能力时,则血中酮体将堆积,尿中出现大量酮体,呈现酮症。
【糖代谢紊乱与酮症的关系】
(4) 酮体生成的生理意义
① 肝脏输出酮体为肝外组织提供了能源。
② 肝脏输出酮体对低血糖时保证脑的供能,以维持其正常生理功能方面起着重要作用。
甘油的代谢
甘油在组织细胞内的氧化,必须先在甘油磷酸的催化下,形成α-甘油磷酸,后者脱氢后生成二羟丙酮磷酸,然后再沿糖代谢的途径分解或沿酵解逆行的途径生成糖。肝、肾和肠粘膜等组织含有丰富的甘油磷酸激酶,但在肌肉和脂肪组织细胞内,这种酶的活性很低。
范文五:酮体的生成与利用
酮体的生成和利用
组织特点:肝内生成肝外用。
合成部位:肝细胞的线粒体中。
酮体组成:乙酰乙酸、β-羟丁酸、丙酮。
1、 生成 -氧化2*
乙酰CoA HMGCoA合成酶 羟甲基戊二酸单酰CoA
(HMGCoA)
羟丁酸脱氢酶 β-羟丁酸 NADH
丙酮
CO2
2、 利用
1)
乙酰乙酸
琥珀酰CoA
乙酰乙酸硫激酶 琥珀酰CoA转硫酶 乙酰乙酰CoA 琥珀酸
乙酰乙酰CoA硫解酶
乙酰CoA
三羧酸循环
2)丙酮可随尿排出体外,部分丙酮可在一系列酶作用下转变为丙酮酸或乳酸,进而异生成糖。在血中酮体剧烈升高时,从肺直接呼出。