范文一:!#$基因敲除小鼠认知功能障碍的跳台实验
中国行为医学科学%’’4年9%月第9&卷第9%期a2@>*8#S5N@1Y>#M1PLNJA+>,HN+N=QNM%’’4,V#P9&,O#
?9’44?
?基础研究?
幼龄!
杨秀丽
张文高
郑广娟
明。研究证实,!
[%]
要的危险因素,主要于晚发型的散发性、家族性!H有关。!
[(]泛应用于!G的研究中。近年来国外许多研究发现!
[9]
到正常234567&8小鼠的认知水平。本研究将采用传统跳台
实验,进一步对!
材料与方法
一、动物
由北京大学医学院动物科技部提供的!
二、方法
9*,然后通电,记录3=>*内小鼠受到电击的次数(错误次数);%?@后重新测试,记录3=>*内小鼠第9次跳下平台的时间,即潜伏期,以及3=>*内小鼠受到电击的总次数。若3=>*内小鼠未跳下平台,潜伏期按3=>*计算。
%
结
果
一、234567&8小鼠和!
二、234567&8小鼠和!
(G雄),!
讨
论
中枢神经系统内1
磷脂的动态平衡,从而参与调节突触可塑性的维护以及神经细胞受损时的修复,但!
作者单位:%&&’((青岛,青岛市海慈医疗集团神经内科(杨秀丽);山东中医药大学张文高(张文高、郑广娟)
*>-G)>等[3]发现,!
害,程度与年龄呈正相关,研究者也认为这正是!
损伤后的病理改变严重,受损神经元修复缓慢[&,4]
,进一步表明
1
0>-1;1K1等[D]的研究发现1
保护作用,在服用维生素$等抗氧化剂后1
马区的凋亡细胞明显减少,生命周期也有所延长[C]。!
小鼠认知功能障碍的研究成果将有助于阐明1
参
考文献
9杨秀丽,张文高,郑广娟,等
L#MM>G水迷宫观察
(81K>N*8,
O1G-1PN).,0#MQ,-R
VN>*QNM;GW,L1*-NL,8,*;LX,N-1P
6#=*>-G)>6,OUG)1!,A@#@1=>$,N-1P*-M1+NPP,P1M>M#*>*-@NQM1>*G#S!
&.#P1R,
\1N-1*>$,]PNT!,N-1P
1GG#+>1-NJ>*-M1*N,M1P1*;>#;N*>+MNG
%’’(,9D?:%&?I%4(
4^#MGQ,M;@0,L1+M1NWL,21MGKNPP^G*N,M#
(收稿日期:%’’4‘’3‘%’)
(本文编辑:冯学泉)
(雌)(
范文二:30日龄Fmr1基因敲除小鼠的跳台实验观察_
Vol, 28 No, 528 5 第 卷 第 期 实 验 动 物 科 学 October201 1 2011 ANIMAL SCIENCE10 LABORATORY 年 月
櫴櫴櫴櫴櫴毷 櫴毷毷 ?研 究 论 著 櫴
* 30Fmr1日龄基因敲除小鼠的跳台实验观察
1123 222戴 丽 军 黄 月 玲 沈 岩 松 张 维 雯孙 卫 文 李 敏 雄 陈 盛 强 510260 ) ( 1. 510182 ) ( 2. ,,广州医学院实验动物中心 广 州 广州医学院第二附属医院 广 州
( 3. 510340 ) ,广州医学院第三附属医院 广 州
。 30 KO WT : 30 Fmr1 摘 要 目 的 对 日 龄 的 基因敲除小鼠的跳台实验进行观察 方 法 采 用 日 龄 的 鼠 和 鼠 分 别 连
2 d ,。 KO WT 续 进 行 的 跳 台 实 验 根据所获得的数据进行 多因素方差分析处理 结 果 同 周 龄 鼠 的 潜 伏 期 比 鼠
( P ,0 . 05 ) ; KO WT ( P ,0 . 05 ) ; KO WT 、明 显 少 而 鼠的错误次数比 鼠 明 显 多 不 同 周 龄 鼠 或 鼠 的 潜 伏 期 错 误 次
( P ,0 . 05 ) ; 1 KO 2 ( P ,0 . 05 ) ; 1 WT 数 无 差 异 第 天 鼠的潜伏期和错误次数 与 第 天 相 比 无 差 异 第 天 鼠的潜伏
2 ( P ,0 . 05 ) 。 30 Fmr1 。期和错 误 次 数 与 第 天相比有显著差异 结 论 日 龄 基因敲除小鼠存在认知功能障碍
: ; Fmr1 ; ; ; 关 键 词 跳 台 实 验 基 因 敲 除 小 鼠 认 : Q95 -: A1006 )617 9 ( 2011 ) 05 -0003 -04: 中 图 分 类 号 文 献 标 识 码 文 章 编 号 知 331
人与动物的 行 为是在中 枢 神经系统控制下的极
。其 复 杂 的 过 程 这 一过程起 始 于内外环境的变化对 1 材 料 和 方 法
,相 应 感 觉 器 官 的 刺 激 结果表现为个体对这种变化
( 、) ,1. 1 的 反 映 动 作 行 为 和 情 绪 这 一过程中介于个体 实 验 动 物
Fmr1 KO ) ( ) / ) ) ( 。基 因 敲 除 型 纯 合 子 及 其 中 枢 系 统 的 处 理 特 征 这就 是 心理学所研究的认知
( : 、、、、野( WT) ( + / + ) FVB 过 程 包 括 感 觉 直 觉 注 意 学 习 记 忆 和 思 生 型 纯 合 子 近 交 系 小 鼠 由 荷
兰 ) 、 ( 、、、、维 意 向 过 程 情 绪 情 感 动 机 意 向 意 志 及 伊 拉 斯 塔 斯 大 学 细 胞 生 物 学 及 遗 传 学 研 究 中 ) 。 意 志 行 为 和 人 的 人 格 和 个 性 小 鼠 跳 台 实 验 是 认 OostraB A ,心 教 授 惠 赠 广 州 医 学 院 实 验 动 物 中 心 ,知 行 为 研 究 中 常 用 的 方 法 之 一 对 评 价 认 知 过 程 。饲 养 及 繁 殖 所有实验动物的操 作 及 饲 养均 符合 。有 重 要 意 义 。7 d ,国家标 准 动 物实验前置于 实 验 室 适 应 环 境 X ( fragile X syndrom) e ?2 ) ? ,。 脆 性 综 合 症 是 最 常 见 的 自 由 进 食 和 饮 水 实 验 时 保 持 室 内 安
( 23室 温 。静 30 ,。1 ),、选 取 两 个 品 系 日 龄 小 鼠 分 两 组 进 行 实 验 遗 传 性 智 力 低 下 性 疾 病 之 一 表现为智力低下 行 为
KO 115 2 ) WT 186 ; 。 、。 Fmr1 组 只 组 只 实 验 动 物 的 基 因 型 异 常 巨 睾 症 基 因 敲 除 鼠 缺 乏 正 常 的
,11 ,。Fmr1 ,X ,鉴 定 参 照 文 献 蛋 白 作 为 人 类 脆 性 综 合 症 的 动 物 模 型
1. 2 、、实 验 仪 器表 现 为 巨 睾 症 记 忆 力 缺 失 行 为 异 常 和 智 力 低 下
,1 :8 , DT-200 : 。 Fmr1 ( KO ) 小 鼠 跳 台 测 试 仪 成 都 泰 盟 科 技 公 司 有 关 基 因 敲 除 小鼠认 知 功能的
,9 :1 0, 。,产 品 产 品 控 制 部 分与反应部分采用可插拔连研究有不 同 的 结 果本 研 究采用 跳 台实验的
,。,30 Fmr1 ,接 便 携 可 靠 控 制 部 分 一 侧 是 液 晶 显 示 屏显 示 方法对 日 龄 基因敲除小鼠进 行 观察 为
实 验 进 、X 开 展 脑 的 发 育 及 老 化 过 程 分 析 脆 性 综 合 症 提
( 、) 、、。行时的数据潜伏期次数实时变化实验日期定 时 供 行 为 学 实 验 的 参 考 依 据
、; ,时间电压等参数另一侧是输 入 键 盘用 来 进 行 启 动
。6 , 和基本设置反应部分为 个大小相同的反应箱每2011 )0 1 )0 7: 收 稿 日 期 * No. 815101700100005) ; ( No. 2005 B60302004) ( 2008 B030301371) : ( 基 金 项 目 广 东 省 自 然 科 学 基 金 项 目 广 东 省 科 技 计 划 项 目
( 2009 B030801368 ) ( 2009 B060300018 ) ; ( No. 2008184 ) ; ( 04 -k-广东省中医药管理 局 建 设 中 医 药 强省科研基金项目 广州医学院科研立项项目
53 ) ; ( No. 2008 A52 )广州市中医药中西医结合科研立项项目
: ( 1972 )) ,,,。 : 。 E-mail: ling161 @ 126 ,c om 作 者 简 介 黄 月 玲 女 实 验 师 学 士 研 究 方 向 实 验 动 物 学
: E-mai: ijundai@ 21 cn, comll通 信 作 者 戴 丽 军
0. 5 cm 个箱的 底 部 为 间 距 正 负 极 相 间 的 不 锈 钢 栅
,,棒右上角各有 一 个 用 来 给 小 鼠 躲 避 电 击 的 平 台平 2 结 果
,。台带有红外线探测器确认小鼠是否站上平台
1. 3 2. 1 跳 台 实 验 方 法实 验 动 物 模 型 检 测
,5 min, 2. 1. 1 先 进 行 基 本 设 置 定 时 为 电 压 设 置 为Fmr1 : WT 基 因 敲 除 小 鼠 行 为 学 观 察 与 比
32 V,,,KO 、,然 后将小鼠分别 放 入 每个反应槽的平台上 让 较 小 鼠 脑 心 和 脾 的 脏 器 系 数 较 小 肾 的 脏
,3, 器 ,,; ,,小 鼠 有 短 暂 的 记 忆 盖上 透明带气孔的盖子 按 启 动 系 数 较 大多 动 易 激 惹 同 窝 小 鼠 之 间 常 斗
,殴 ,32 V , 按 钮 反 应 槽 下 方的不锈钢栅 棒 马 上通 电 压 ,。易 发 癫 痫 繁 殖 力 相 对 较 差
,,: 1 刺 激 小 鼠 可 见 小 鼠 不 停 因 电 击 而 蹦 跳 直 至 找 到 并 2. 1. 2 跳 台 实 验 数 据 分 析 结 果 从 表 可 以 看
,出 。,跳 上 平 台 平 台 上 的 红 外 探 测 器 信 号 改 变 显 示 屏 1 KO 1 WT 第 天 的 鼠 与 第 天 的 鼠 相 比 电 击 次 数
有 。1 显 示 潜 伏 期 参 数 开 始 计 时 小 鼠 第 次 从 平 台 上 跳
( P ,0 . 001 ) ,( P 显 著 差 异 潜伏期时间有 显 著 差 异 ,5 min 下 槽 底 的 时 间 为 潜 伏 期 若 小 鼠 内 未 跳 下 平
, ,5 min ,台 潜 伏 期 按 计 算 并记录小鼠从潜伏期 过 后
0. 01) ,Fmr1 说 明 基 因 敲 除 型 小 鼠 的 学 习 功 能 比 野 。 2 d ,1 受 到 电 击 的 总 次 数 跳 台 实 验 分 完 成 第 天
。2 KO 2 WT 生 型 小 鼠 差 第 天 的 鼠 与 第 天 的 鼠 相 ,2 是 观 察 小 鼠 的 学 习 功 能 第 天是 观察小鼠的记忆
,,比 电击次数无明显差异 潜 伏 期 时 间 无 明 显 差 异 说 ,。功 能 观 察 小 鼠 的 潜 伏 期 和 错 误 次 数
Fmr1 明 基 因 敲 除 型 小 鼠 的 记 忆 功 能 与 野 生 型 小 1. 4 统 计 学 分 析
。 1 KO 2 KO 鼠 无 明 显 差 别 第 天 的 鼠 与 第 天 的 珋? x? S ) ,WT ( 实 验 结 果 用 均 数 标 准 差 表 示 与
( P ,0 . 001 ) 、鼠 相 比 电击次数有明显差异 潜 伏 期 时 KO SPSS foWr indows 10. 0 鼠 两 组 数 据 的 比 较 使 用
( P ,0 . 001 ) ; 1 WT 2 间 有 明 显 差 异 第 天 的 鼠 与 第 ,。 软 件 完 成 采 用 多因 素方差 分析对数据进行 分 析
WT 、天 的 鼠 相 比 电 击 次 数 无 明 显 差 异 潜 伏 期 时 P 0. 05 。, 为 有 统 计 学 意 义
( P ,0 . 001 ) 。间 有 明 显 差 异 珔1 Fmr1 ( x ? S)表 跳 台 实 验 基因敲除型与野生型小鼠学习和记忆功能的比较
( 1 )( 2 ) 学 习 功 能 第 天 记 忆 功 能 第 天 / 组 别 小 鼠 只 / s/ / s/ 潜 伏 时 间 错 误 次 数 次 潜 伏 时 间 错 误 次 数 次 *### vb, ko 1. 81 ? 3. 12 F11594. 96 ?105 . 64 183. 82 ? 122. 63 0. 67 ? 1. 32 ? ?Fvb, wt 186 209. 51 ? 138. 22 0. 59 ? 1. 68 0. 67 ? 1. 32 135. 73 ? 121. 70 ? * # ## * st st st st ,, P ,0 . 01 ; P ,0 . 005 ; P ,0 . 001 ; Fvb. KO 1 vs Fvb.W T 1 : 潜 伏 期 时 间 P ,0 . 01 ; Fvb. KO 1 vs Fvb.W T 1 : 错 误 次 数 ,P ,0 . 001 ; # nd nd ## nd nd * st F nd Fvb. KO 2 vs Fvb.W T 2 : P ,0 . 05 ; Fvb. KO 2 vs Fvb.W T 2 : P ,0 . 05 ; Fvb, KO 1 vsvb, KO 2 : ,P ,错 误 次 数 潜 伏 期 时 间 错 误 次 数 ,,st F nd ? st nd ? ? st nd 0. 001 ; Fvb, KO 1 vsvb, KO 2 : P ,0 . 001 ; Fvb, WT 1 vs Fvb, WT 2 : P ,0 . 05 ; Fvb, WT 1 vs Fvb, WT 2 潜 伏 期 时 间 错 误 次 数 潜 P ,0 . 001 ,伏 期 时 间 ,们 的 操 作 成 绩 或 反应时间进行研究 从 而 评 价 记 忆
。,、3 效 果 记忆包括许多种类 如 空 间 记 忆 环 境 恐 惧 性 讨 论
、,记 忆 关 联 性 记 忆 等 目 前 较 常 用 的 评 价 小 鼠 记 忆
,神 经 系 统 协 调 机 体 正 常 活 动 又受相关器官功 能
,、能 的 制 约 常 被 视 为 最 复 杂 最敏感的功能系统之 , ( associative learning) ,,力 的 实 验 方 法 多选用 小鼠的关联性记忆能力 即 通 过 对 小 鼠 施 加 外 来 剌 激
。一 动物的正常 行 为是神经 系 统功能完整性的一种 、,如 电 击 灼 热 等 手 段 来 建 立 剌 激 与 小 鼠 行 为 的
联 ,表 现 行 为 的 任 何 改变都可以反映 神经系统功能的
,。系 从而评价小鼠的关 联 性 记忆 能力 ,状 况 动 物 行 为 学 实验方法是检测 各种因素对神经
X ( fragile X syndrom,eFXS) 脆 性 综 合 症 是 最 常 。功 能 影 响 的 重 要 手 段
,见 的 遗 传 性 智 力 低 下 性 疾 病 之 一 发 病 率 仅 次 记忆是人类 和 动物赖以 生 存所不可缺少的重要
于 ,脑 功 能 之 一 人 和 动物的内在心理 过程是无法直接
Down 2 % :6 % ,,综 合 征 占 非 特 异 性 智 力 低 下 的 在 ,观 察 到 的 只 能 根 据观察到的刺激 反应来推测脑内
X 40 % 。 —Fmr1 连 锁 智 力 低 下 中 占 其 致 病 基 因 基
: 30 Fmr1 55 ??第 期 黄 月 玲 等 日 龄 基因敲除小鼠的跳台实验观察
FXS 、。缺 失 患 者 存在有不同程度的 智 力 低 下 注 意
、、、、力 障 碍 视 觉 运 动 整 合 障 碍 癫 痫 发 作 性 格 改 变 参 考 文 献 、、、、、孤 独 活 动 过 度 自 闭 感 觉 过 敏 大 睾 丸 特 殊 面
, 1 , Warren S T, Sherman S L , The fragile X syndrome I n The 。容 和 焦 虑 等 社 会 行 为 的 异 常 上 述 临床多样性可Metaboic and M oecuar Bases of n herited Disease lllI 1 )Fmr1: 能与以 下 因 素 有 关 基 因 表 达 程 度 的 变 异 导 致 , M ,,M cGraw-Hill Companies, 2001 ,1 : 1257 :129 0 ,
FMRP ; 2 ) 产 量 的 不 同 其他背 景 基因直接或间接对 Bakker C E, Oostra B A, Understanding fragile X syndrome: , 2 , FMRP ; 3 ) 。,FXS 的 影 响 环 境 因 素 因 此 为 了 发 现 患 insights from anima modes,J,, Cytogenet GenomRee s,2003 , ll
,FXS 、者 发 病 的 复 杂 机 制 患 者 的 智 力 行 为 等 方 面 的 100 : 111 :12 3 ,
,,,Fm r1 戴 丽 军 叶 炳 飞 黄 月 玲 基 因 敲 除 小鼠脏器重量和脏 3 , , 。 Fmr1 相 关 问 题 正 成 为 研 究 热 点 基 因 敲 除 鼠 缺 乏 ,J,, ,2009 ,19 ( 6 ) : 60器系数的比较 分 析中国比较医学杂志 Fmr1 ,、正 常 的 蛋 白 表 现 巨 睾 症 行 为 异 常 和 听 源 性 :6 2 , 。Fmr1 ( KO ) 惊 厥 有 关 基 因 敲 除 小 鼠 神 经 功 能 尤 Kooy R F, Ofmice and the rafgile X syndrome ,J,, Trends , 4 , ,9, 。 Yan其 是 认 知 功 能 的 研 究 正 逐 步 得 到 重 视 等 在 Genet,2003 ,19 : 148 :15 4 ,
Huber K M,Gallagher S M,Warren S T,et al, Altered synaptic FVB × C57 BL /6 J MWM 杂 交 背 景 采 用 隐 藏 平 台 实 , 5 , plasticity in a mouse m odel of fragile X mental retardation,KO WT ; 验 中 发 现 鼠 逃 避 潜 伏 期 比 鼠 长 而 采 用 ,J,,Pr oc Natl Acad Sci,U, S, A, 2002 ,99 : 7746 :775 0 , 6 d ,KO 1 放 射 迷 宫 连 续 实 验 中 鼠 第 天 空 间 记 忆 Peter K T, Kenneth J M, James S M , The fragie X mentall , 6 , ,10, WT ; neurC57 BL /6 J I和 工 作 记 忆 比 鼠 长 等 在 背 retardation protein is required for type-mentabotropic gutamate l?
receptor-dependent translation of PSD-95,J,, Proc Natl Acad ,景 采 用 放 射 迷 宫 实 验 发现两者逃避 潜 伏 期 无差
Sci,U S A, 2003 ,100 ( 24 ) : 14374 :1437 8 , 。 ,异 不 同 实 验室的 研究结果互不相同 有 必 要 对
Hagerman R J, Physica and Behaviora Phenotype ,M,, n:llIFmr1 ,, 7 , 基 因 敲 除 鼠 的 认 知 功 能 进 行 进 一 步 的 研 究 Fragie X Syndrome: Diagnosis, Treatment and Re search, 3 rd l跳 台 实 验 也 是 目 前 常 用 的 测 定 鼠 类 记 忆 方 法 之 edition, ( Hagerman R J and HagermanedPs J eds) ,B atim ore: l,,,一 操 作 简 单 易 行 动 物 间 的 差 异 较 小 因 此 本研究The JohnsH opkins University Press, 2002 ,3 : 109 ,
。选择了跳台实 验 方 法 O’Donnell W T,Warren S T, A decade ofm olecular , 8 , studies of fragile X syndrome ,J,, Annu Rev Neurosci 2 d KO 我 们 的 实 验 结 果 发 现 在 检 测 中 小 鼠
2002 , 25 : 315 第:33 8 , , 9 , 1 WT ,天 的 错 误 次 数 明 显 比 正 常 小 鼠 多 而 潜 伏 期 Yan Q J,Asafo-Adjei P K,Arnold H M,et al, A phenotypic and WT ,KO 却 明 显 比 正 常 小 鼠 短 这 表 明 小 鼠 较 正 常 molecular characterization of the mfr1 -tm1 Cgr fragile X mouse
WT ,KO 2 小 鼠 学 习 能 力 均 明 显 下 降 尽 管 鼠 第 天 的 ,J,, GenesB rain Behav,2004 ,3 : 337 :35 9 , ,10, Ineur Y S, Sluyter F, de Wit S, et al, Behavioral and WT ,错 误 次 数 和 潜 伏 期 比 小 鼠 有 增 高 的 趋 势 但 无
neuroanatomical characterization of the Fmr1 knockout mouse ,KO WT 统 计 学 意 义 反 映 鼠 的 记 忆 巩 固 能 力 不 比 ,J,, Hippocampus,2002 ,12 : 39 :4 6 , ,11, ,2 鼠 低 下 第 天 实验结果说明了小 鼠对记忆巩固至 ,,,。 PCR Fmr1 邢 州 孙 卫 文 黄 月 玲 等 使 用 方 法 检 测 基 因 24 h。KO 少 能 维 持 上 述 实 验 结 果 表 明 鼠 存 在 学 习 ,J,,,2009 ,9 ( 5 ) : 12 ,敲除小鼠基因 型现 代 医 院
、,能 力 下 降 记 忆 能 力 并 无 障 碍 提示反复的学习可以
KO 。改 善 鼠 的 记 忆 能 力
Behavioural Comparison of Fmr1 Knockout Mice at 30 Days Agei n Step-down Test
1 2 3 2 HUANG Yue-ling,SHEN Yan-song,ZHANG Wei-wen,SUN Wei-wen,
2 2 1 LI Mn-xong,CHEN Sheng-qang,DAI L-uniiiij
( 1. The Laboratory Animal Research Center of uGangzhou Medical College,Guangzhou 510182 ,China) ( 2. The seconda ffiliated hospital of Guangzhou Medical College,Guangzhou 510260 ,China)
( 3. The Third affiliated hospital of Guangzhou Medical College,Guangzhou 510260 ,China)
Objective This study wase sdigned to observe thceog nition of Fmr1 knockout mice at 30 days Agein Abstact: r
step-downte st, Method Fmr1 knockout mice were identified using the PCR technical and step-down teesrte wusedi n the study, nmas were tested for twyos ,d aThe atency and the number of errors recweorrdee d, The data Aill
was naalyzed with multifactor variance analysis, Result KO mice obviously had the shortleatre ncy than WT mice, and KO mice obviously had more errors thWaTn mice ( P ,0 . 05 ) ; On the first day,the latency and the numbeorf errors oKf O mice had no iffderence compared itwh the second d(a yP ,0 . 05 ) ; On the first day,the latency and
number of errors of WT mice had s ignificant difference compared i thw the second da( y P , 0 .
05 ) ,C onclusion Fmr1 knockout mice displayed cognitive impairment in the step-dowtens t, Key words: step-downte st; Fmr1 ; knockou; t mice;
cognition
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾 櫴櫴櫴櫴櫴毷 櫴毷毷 ?动 态 信 息 櫴
( )有望根治帕金森病 干 细 胞 移 植
,,。 帕 金 森 病 是 一 种 常 见 的 中 老 年 疾 病 我 国 已 逐 渐 进入老龄化国家 帕 金森病发病率也 越 来越高 目
,前 ,,、,,帕 金 森 病 治 疗 方 法 有 两 种 一种是药物治疗 主 要 以 多 巴 类 抗 胆 碱 等 药 物 随 着 帕 金 森 病 程 进 展 药 效 也 下
; ,DBS 。,降 第二种 是外科手术治疗 主要是脑深部核团毁损和 电 刺 激 这 两 种 方 法 只 是 对 症 治 疗 不 能 解 决
。帕 金森 患者大脑内 多 巴胺介质 缺 乏或不足的问题 ,帕 金 森 病 发 病 机 理 是 多 种 因 素 导 致 大脑黑质和纹状体细胞受损变性 分泌多巴胺介质逐步减少 所
。致 ,,,目 前 尚无 法使这些受损 和变性的细胞恢复 彻 底 治 疗 帕金森病就需对因治疗 神 经 干 细 胞 脑 移 植 后 可 代 替
,。。 受 损 黑 质 和 纹 状 体 细 胞 功 能 恢复多巴胺介质水平 神经干 细胞给帕金森病治 愈 带 来新 希望
,。,通 过 人 工 移 植 人 类 干 细 胞 可以减轻患有帕金森病 的 猴子的病症 哈佛医学 院 一研 究小组的报告称 干
,“”。 细 胞的作 用不仅仅 是 取代那些 发 生病变的坏细胞 它 还 可 能劝 说 大 脑 自 我 治 疗 此 项 研 究 使 得 干 细
。胞 移 植 技 术 向 着 人 体 试 验 又 迈 进 了 一 大 步
,,。500 帕 金 森 病 破 坏 神 经 细 胞 使其不能产生多巴胺 从而导 致 人 体运动和平衡 系 统 障碍 全 世 界 每 人
1 。 ,,中 就 有 人 受 此 病 困 扰 目前的 治 疗方法大多是通过药物来提高多巴胺 的 水 平 但 效 果 勉 强 且 持 续
。时 间 很 短
,,干 细 胞 是 一 种 基 原 细 胞 可以发展成为多种不同类 型 的细胞 人们一直期望由此 找 到 一 种根 治帕 金森病
。《》,,的 办 法 该 小 组 发 表 在 近 期 的美 国 自 然 科 学 进 展 杂 志 上 的 报 告 称 分 离 干 细 胞 在 实 验 室 中 使 其 大 量
,。,生 长 繁 殖 然 后将培养好的 干细胞注入患有严重帕金森病 的 猴子的大脑里 在 治 疗 前 猴 子 只 能 用 手 挣 扎
,,2 ,,着 在 别 人 的 帮 助 下 移 动 有时甚至根本不能动弹 但 在 治 疗 个 月 后 猴 子 不 仅 可 以 走 动 还 可 以 自 己 进 “?: ,成 员 之 一 的 神 经 科 学 家 理 查 德斯 得 曼 说它 们 尽 管 不 如 正 常 的 猴 子 那 样 好 但 治 疗 的 效 果 是 令 人 激 动 。。食 小 组 的 。”对那 些初患此病 或 病症较轻 的 猴子效果会更好
。 ,最令人惊奇 的 也许是这 些 移植的干细胞是如何 发 挥 作 用 的 研 究 人 员 发 现 只 有 一 小 部 分 干 细 胞 发
,。 展 为 能 产 生 多 巴 胺 的 神 经 元 这尚不足以取代所有因 病 而 失 的 神 经 元 但 是 有 一 部 分 干 细 胞 发 展 成 为 新
———。,型 细 胞 一种能产 生 神经营养 物 质的支持性脑细胞 研 究 人 员 观 察 到 大 量 产 生 多 巴 胺 的 神 经 元 并 不
。“是 直 接 由 移 植 的 干 细 胞 发 展 而 来 这 说明干细胞的植入给神经元的复活和 血 管 生 长 注 入 了强 心 ”,,。剂 同 时 减 少 了 炎 症 和 神 经 元 的 退 化 从 而帮助大脑自我疗伤
?: “,。 英 国 神 经 科 学 家 约 翰森 德 恩 说过 去 一 直 认 为 植 入 的 干 细胞通过取代 受 损的细胞而起作用
现 在
范文三:【word】 幼龄ApoE基因敲除小鼠认知功能障碍的跳台实验
幼龄ApoE基因敲除小鼠认知功能障碍的跳
台实验
2007年l2月第16卷第l2期ChinJofBehavioralMedSei,December2007,Vol16,No.12
幼龄ApoE基因敲除小鼠认知功能障碍的跳台实验
杨秀丽张文高郑广娟
近年来,ApoE基因敲除(ApoEknockout,APOEKO)小鼠作
为一种新型动物模型应用于研究apoE缺失在乙酰胆碱神经损
害所致认知障碍过程中发挥的作用.笔者曾对ApoEKO小鼠
进行水迷宫测试,结果发现ApoEKO小鼠在获取信息阶段存在
认知功能障碍,但给予足够训练后,ApoEKO小鼠的表现能够达
到正常C57BIM6J小鼠的认知水平….本研究将采用传统跳台
实验,进一步对ApoEKO小鼠的认知功能进行评估.
材料与方法
一
,动物
由北京大学医学院动物科技部提供的ApoEKO小鼠与
C57BIM6J小鼠各20只,均为12周龄,雌雄各半,体质量20,
25g.
二,方法
1.跳台试验:首先让小鼠在箱内平台上适应3min,然后通
电,记录5min内小鼠受到电击的次数(错误次数);24h后重新
测试,记录5min内小鼠第1次跳下平台的时间,即潜伏期,以
及5min内小鼠受到电击的总次数.若5min内小鼠未跳下平
台,潜伏期按5min计算.
2.统计分析:数据以?s表示,采用SPSS13.0软件包进行
配对t检验.
结果
一
,C57BIM6J小鼠和ApoEKO小鼠跳台错误次数比较
第1天,C57BIM6J小鼠的错误次数为(2.32?1.59)次
(雌),(2.40?1.42)次(雄),ApoEKO小鼠的错误次数为(2.60
?3.20)次(雌),(2.50?3.20)次(雄);第2天,C57BIM6J小
鼠的错误次数为(0.62?0.43)次(雌),(0.70?1.07)次(雄),
ApoEKO小鼠的错误次数为(2.18?1.56)次(雌),(2.10?
1.86)次(雄).第1天和第2天ApoEKO小鼠比C57BIM6J小
鼠的错误次数多,均差异有显着性(P<0.05,P<0.01);2组小
鼠雌雄间均差异无显着性(P>0.05).
二,C57BIM6J小鼠和ApoEKO小鼠跳台潜伏期比较
C57BIM6J小鼠的跳台潜伏期为(233.20?68.44)s(雌),
(219.70?61.95)s(雄),ApoEKO小鼠的跳台潜伏期为(70.70
?34.01)s(雌),(65.60?23.65)s(雄).两种小鼠比较,差异
有显着性(P<0.05);2种小鼠雌雄间差异无显着性(P>
0.05).
讨论
中枢神经系统内apoE主要参与维护胆固醇,磷脂的动态
平衡,从而参与调节突触可塑性的维护以及神经细胞受损时的
修复,但ApoE在中枢神经系统中的作用机制至今尚未完全阐
作者单位:266033青岛,青岛市海慈医疗集团神经内科(杨秀丽)
山东中医药大学张文高(张文高,郑广娟)
?
1077?
?
基础研究?
明.研究证实,ApoEe4等位基因是阿尔茨海默氏病(AD)最主
要的危险因素,主要于晚发型的散发性,家族性AD有关..
ApoEKO小鼠能够在自然膳食下形成动脉粥样硬化(As),且病
理学改变与人类极为相似,甚至能够形成纤维斑块,首先被广
泛应用于As的研究中』.近年来国外许多研究发现ApoEKO
小鼠的认知功能出现障碍J,但有关幼龄鼠的研究较少.Lom—
nitski等发现,ApoEKO小鼠的中枢胆碱能神经系统受到损
害,程度与年龄呈正相关,研究者也认为这正是ApoEKO小鼠
出现认知功能障碍的主要原因.ApoEKO小鼠脑组织遭受意外
损伤后的病理改变严重,受损神经元修复缓慢’,进一步表明
apoE具有神经保护作用.本研究跳台实验结果发现,2d检测
中ApoEKO小鼠的错误次数明显比正常C57BIM6J小鼠多,而
第2天的潜伏期却明显比正常C57BIM6J小鼠短,这表明
ApoEKOI]~鼠较正常C57BIM6J小鼠学习记忆功能均明显下降,
进一步证实幼龄ApoEKO小鼠的认知功能已经出现障碍.国
外许多研究已经证实氧化应激与衰老的相关性已经得到公认,
Kitagawa等的研究发现apoE通过抗氧化作用发挥它的神经
保护作用,在服用维生素E等抗氧化剂后apoEKO小鼠脑内海
马区的凋亡细胞明显减少,生命周期也有所延长L9j.ApoEKO
小鼠认知功能障碍的研究成果将有助于阐明apoE在神经系统
的生理病理中发挥的重要作用,从而进一步理解正常衰老的发
生发展与痴呆的发病机制.
参考文献
1杨秀丽,张文高,郑广娟,等.ApoE基因敲除小鼠认知功能障碍的
Morris水迷宫观察.中国康复医学杂志,2006,21:121—123.
2唐军,徐海伟,周光纪,等.阿尔茨海默病转基因小鼠的研究现状与
展望.中国行为医学科学,2006,15:190—192.
3JawienJ.NastalekP.KorbutR.Mousemodelsofexperimentalathero—
sclerosis.JPhysiolPharmaco1.2004.55:503—17.
4VeinbergsI,ManteM,JungMW,eta1.Synaptotagminandsynaptie
transmissionalterationsinapolipoproteinE—deficientmice.ProgNeuro—
psyehopharmacolBiolPsychiatry.1999,23:519I531.
5LomnitskiL,NyskaA,ShohamiE,eta1.Increasedlevelsofintracellular
ironinthebrainsofApoE—deficientmicewithclosedheadinjury.Exp
183. ToxicolPathol,2000,52:177—
6PolaR,GaetaniE,FlexA,eta1.Peripheralnerveisehemia:apolipopro—
teinEdeficiencyresultsinimpairedfunetionalrecoveryandreductionof
associatedintraneuralangiogenicresponse.ExpNeurol,2003,184:264—
273.
7HorsburghK,MacraeIM,CarswellH.Estrogenisneuroprotectiveviaan
apollpoproteinE—dependentmechanisminamousemodelofglobalische—
mia.JCerebBloodFlowMetab,2002,22:1189—1195.
8KitagawaK,MatsumotoM,HoriM,eta1.Neuroproteetiveeffectofapoli—
poproteinEagainstischemia.AnnNYAeadSci,2002,977:468475.
9VeurinkG,LiuD,TaddeiK.eta1.Reductionofinclusionbodypathology
inApoE—deficientmicefedacombinationofantioxidants.FreeRadieBi一
0lMed,2003,34:1070—1077.
(收稿日期:2007—05—20)
(本文编辑:冯学泉)
范文四:Morris+水迷宫与小鼠跳台测试小鼠学习记忆能力的比较研究
综合理论
研究2014年第36期读写算
Morris水迷宫与小鼠跳台测试小鼠学习记忆能力的比较研究
周烨文
(西北民族大学生命科学与工程学院730030)
【摘要】目的研究比较学习记忆能力测试仪器Morris水迷宫和小鼠跳台的使用方法的科学性及实验数据的参考价值。方法
于造模14天后连续训练5成年雄性KM小白鼠40只,分为正常对照组15只,痴呆模型组25只,模型组KM小鼠结扎两侧颈动脉,
(P<>
(P<0.05)(p>0.05)痴呆模型组前两天测试结果差异性显著,但第3天与第4天的测试无显著差异。结论Morris水迷宫实验设计
原理更加科学,影响因素更少,更具科学性与分析参考价值。
【关键词】Morris水迷宫小鼠跳台方法科学性学习记忆能力1.材料与方法1.1材料
1.1.1实验动物清洁级健康KM雄性小鼠50只(18~22克/只),购自兰州大学医学院实验动物中心。
购自成1.1.2仪器MT-200水迷宫、DT-200小鼠跳台测试箱,
都泰盟科技有限公司。
1.2方法
1.2.1小鼠的筛选与分组将采购小鼠连续五天进行水迷宫实
(水迷宫耗时>30s)验,将学习记忆能力低下小鼠淘汰。余下小鼠
随机分为对照组小鼠15只,实验组小鼠25只。
1.2.2动物模型的制备用2.5%水合氯醛以1.0ml/100g的剂
常规消毒,颈正中切量腹腔注射麻醉小鼠,仰卧固定在手术板上,
缝口,分离双侧颈总动脉,将痴呆模型组的小鼠两侧颈动脉结扎,
合伤口,然后放回笼中保温(26℃)饲养并连续3d肌注20万u青
但不结霉素钠。假手术组的麻醉及手术过程与痴呆模型组相同,
扎颈总动脉。
1.2.3Morris水迷宫实验打开MT-200水迷宫视频跟踪分析系
加入水温为25℃±1℃的自来统(S7200),确定平台在某一象限,
水,没过平台2cm,使用白色素将水染为乳白色。训练时分别从各
设置实验时间为120s,象限1/4弧度处将动物头朝池壁放入水中,
自动摄像系统和计算机分析处理系统记录每只小鼠的定位航行用时(指小鼠入水后找到平台的时间)。若120s后不能找到平台,则以
训练连续进行4天,120s计算,并结束本次实验。每天1次。在第1,2
[3
天实验结束后将其引导至平台停留15s,以后2天不再引导]。每次
如灯光、实验员站位等各种参进行水迷宫实验时,要求试验环境,
空气清新及水温恒定。照物保持一致,而且保持安静、
将参加实1.2.4小鼠跳台实验打开DT-200小鼠跳台测试箱,
验验的各组小鼠先放入反应箱铜栅处自由活动3min,熟悉实验环境。然后通以32V交流电,设置实验时间为5min,小鼠受到电击后
记录各将寻找跳台以躲避电击。实验时将实验鼠直接放上跳台,
组小鼠第一次跳下平台的时间(潜伏期)和10min内从跳台跳下的错误次数(记作错误次数)。测验时若小鼠停留在平台的时间超过10min,其潜伏期以10min计。连续训练4天,每天1次。环境要求同水迷宫测试。
1.2.5统计学处理数据以均数±标准差(X±S)表示,采用SPSS19.0软件进行统计分析,以LSD法进行两两组间比较。以P<><>
2.结果
2.1Morris水迷宫实验痴呆模型组水迷宫定位航行时间较对
(P<>
见表2。
讨论
[4]
而且Morris水迷宫实验的原理是利用小鼠厌恶停留在水中,
体力不允许长时间处于水中的本能反应为刺激,使其需及时找到平台停留。经过训练,可通过数据评价其学习记忆能力以及空间位
[5]
故逃离至置认知能力。而小鼠跳台的原理则为小鼠因平台狭小,
面积宽阔的电栅,而小鼠受电击后被动回避性条件反射返回平台。这种被动回避可表现出小鼠受电击后不敢在跳下电栅而下一次错误跳下平台特点,即应激刺激的学习性和遗忘性。根据两种仪器的实验原理,可知Morris水迷宫实验的主导因素为小鼠自身生理因
声素,受环境因素影响较少;而小鼠跳台实验受环境因素如气味,
活跃程度等有关,并音等影响较大以及与测试时小鼠的精神状况、
停留在跳台而不且长时间停留在跳台测试箱中,小鼠产生适应性,
适应感降低。本次实验数据表明,Morris水迷宫实验4天的测试结果皆与对照组有显著性差异(P<>
随着测试时间的后移,潜鼠跳台实验数据则差距较大,不够稳定,
(P>0.05)伏期与错误次数与对照组相比差异皆不显著,这与上述
[6]
的影响因素不无关系。据罗小泉等人研究表明,Morris水迷宫采用每天1次训练的结果作为评价指标,不包含小鼠的瞬时记忆能
数据更具科学性力,仅仅反映的是小鼠的短时记忆或是长时记忆,
与说服力。结合本次实验,Morris水迷宫实验4天测试结果皆差异
(P<>
小鼠不再或长时间不再受电时记忆能力的影响,在第一次电击后,
(P>0.05)击,结果差异不显著。综上所述,Morris水迷宫主要侧重空间
学习记忆的测定,实验原理科学,影响因素少,方法敏感度较高,但需
数据分析复杂;小鼠跳台侧重被要对动物进行多次训练,操作繁杂,
实验影响因素较多,敏感度低、动回避条件反射,设计原理还存不足,
重现性差。Morris水迷宫实验更具科学性与分析参考价值。参考文献
[1]叶翠飞,李斌,安文林等.避暗反应测定大鼠学习记忆功能方法的探讨[J].中国实验动物学报,2009,8(03):164-169.
[2]王莹,杨文微,罗菊花等.避暗实验测定小鼠学习记忆功能方法的研究[J].大理学院学报,2011,10(6):25-27
(1992-)研究方向:组织作者简介:周烨文,男,汉族,广东省广州市人,西北民族大学生命科学与工程学院2011级动物医学专业本科生,
免疫学。352
Morris 水迷宫与小鼠跳台测试小鼠学习记忆能力的比较研究
作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):
周烨文
西北民族大学生命科学与工程学院 730030读写算(教育教学研究)Duyuxie2014(36)
引用本文格式:周烨文 Morris 水迷宫与小鼠跳台测试小鼠学习记忆能力的比较研究[期刊论文]-读写算(教育教学研究) 2014(36)
范文五:小鼠实验
1(实验动物环境可分为:
, 外环境。是指实验动物设施或动物实验设施以外的周边环境。如气候或其他自然因
素、邻近的民居或厂矿单位、交通和水电资源等。
, 内环境。指实验动物设施或动物实验设施内部的环境。内环境又细分为大环境和小
环境。前者是指实验动物的饲养间或实验间的整体环境状况;后者是指在动物笼具
内,包围着每个动物个体的环境状况,如,温、湿度,气流速度,氨及其他气体的
浓度,光照,噪音等等。
实验动物环境条件,对动物的健康和质量,以及对动物实验结果有直接的影响,尤其是高等级的实验动物,环境条件要求严格和恒定。因而,对环境条件人工控制程度越高,并符合标准化的要求,生活这样环境中的动物,就越具有质量上的保证,一致性的程度就越高,动物实验结果就有更好的可靠性和可重复性,也使同类型的实验数据具有可比较的意义。 影响实验动物环境的因素及其控制:
, 气候因素。包括有温度、湿度、气流和风速等。在普通级动物的开放式环境中,主
要是自然因素在起作用,仅可通过动物房舍的建筑座向和结构、动物放置的位置和
空间密度等方面来作有限的调控。在隔离系统或屏障、亚屏障系统中的动物,主要
是通过各种设备,对上述的因素予以人工控制。在国家制定的实验动物标准中,对
各质量等级动物的环境气候因素控制,都有明确的要求。
, 理化因素。包括有光照、噪音、粉尘、有害气体、杀虫剂和消毒剂等。这些因素可
影响动物各生理系统的功能及生殖机能,需要严格控制,并实施经常性的监测。普
通级动物要在适当的范围内,采取有效的措施,对此予以监控;尤其是清洁级以上等
级的动物,应通过实验动物设施内的各种设备,按国家颁布的各个等级标准,严格
予以控制。
, 生物因素。是指实验动物饲育环境中,特别是动物个体周边的生物状况。包括有动
物的社群状况、饲养密度、空气中微生物的状况等。例如,在实验动物中许多种类,
都有能自然形成具有一定社会关系群体的特性。对动物进行小群组合时,就必须考
虑到这些因素。不同种之间或同种的个体之间,都应有间隔或适合的距离。对实验
动物设施内空气中的微生物有明确的要求,动物等级越高要求越为严格。国家标准
规定,亚屏障系统设施内空气落下的菌数少于或等于12.2个/皿时,屏障系统2.45
个/皿时,隔离系统0.49个/皿时。
2(对实验动物设施的环境条件,国家有标准化的规定,检测项目包括温度、相对湿度、气六速度、梯度压差、空气洁净度、空气落菌数、氨浓度、噪声、照度和换气量等。
, 环境检测的项目
空气洁净度的指标包括有:空气落菌数,是检测空气生物洁净度的指标,用血琼脂培养基,置于被检房舍的空间,暴露30分钟后,计算培养基上的落菌数;尘埃粒子测定,是空气洁净级别的指标,10-20平米的房间布点3-5个,用专用仪器测定,数据作统计分析。 此外还有下列七项指标的测定:温度、湿度测定,包括日温差、温湿度的均匀性等;气流速度测定,使动物处在合理的风速区域;换气次数,测定送风口或出风口的风速,然后参照风口面积和房间容积计算;静压差测定,用压差计测定设施内各区域的压差,分析设施内气流走向的合理性;噪声测定,用噪声计,选离墙壁1米,距地面1.2-1.5米的测点测定;照度测定,常用仪器是照度计,采用多测点测定,检测光照的均匀性;氨浓度测定,该检测项目通常是在设施运转后进行的监测项目,反映室内的换气情况、动物的合理密度和设施的管理水平。
, 实验动物设施的维护
实验动物设施的各项环境指标是通过是相关设备的运转来实现及维持的,环境指标值无时不在动态的变化之中。对设施的环境监测和维护,是实验动物设施经常进行的工作。日常维护的重点有以下三个方面:
空气过滤系统的维护,系统中有初效、中效和高效三级过滤,过滤材料在工作时会沾染粉尘,逐渐造成堵塞,而影响设施内的空气质量。初效过滤材料应2周至3个月更换一次,过滤材料经清洗、干燥,可重复使用;中效材料3至18个月更换一次,经清洗、干燥也可重复使用;高效材料一般1--3年更换一次,一般不重复使用。材料更换的次数取决于空气使用量和周围空气的质量。勤换初效和中效材料,可减少对高效材料的更换,因为更换高效过滤材料会在一定时间内造成设施内环境因素的不稳定。
空调系统的维护,空调系统主要控制温、湿度两个重要的环境指标,空调的热交换部件要经常清洗,并要经常检查制冷剂有否泄漏,自动控温装置是否有效。
灭菌系统的维护,注意高压灭菌装置和饮水灭菌系统是否有效,要经常监测,不可疏忽大意。此外,还有传递窗的紫外线灭菌是否有效,传递渡槽的消毒液要及时更换等一些日常的维护
工作也不能忽视。总之做好设施的维护工作,反映了设施的管理工作水平,要健全制度,建立岗位责任,在管理上下功夫。
3.实验动物的房舍设施
这里指的实验动物设施是实验动物和动物实验设施的总称,是为实现对动物所需的环境条件实行控制目标而专门设计和建造的。实验动物设施依其使用功能的不同,划分为各个功能区域,各自有不同的要求。
实验动物设施的等级及其规划结构要点
按照“实验动物环境与设施”国家标准(1994)规定,实验动物环境设施分为四等,控制程度从低到高,依次为开放系统、亚屏障系统、屏障系统和隔离系统。
, 开放系统
通常为单走廊专用房舍,采用自然通风或设有排风装置,有防虫、防鼠设施,要求笼具和垫料消毒、使用无污染的饲料,人员进出有一定的防疫措施。这类设施仅适用于普通级动物。该系统通常分为三个区域:前区,包括检疫室、办公室、休息室等;控制区,包括动物饲育室、或动物实验室、清洁走廊、清洁物品储存室等;后勤处理室,包括污染走廊、洗刷消毒室、污物处理设施等。人员、动物和物品原则上按:前区--控制区--后勤处理区的走向运行。
, 亚屏障系统
又称为清洁级屏障系统,用于清洁级动物的饲育。一般设双走廊,也有用层流架作清洁级屏障系统。其设施的结构及设备配置要求都与屏障系统大体相同,只是空气洁净度只要求达到10万级,管理上要求稍低于屏障系统,故称之为亚屏障系统。也分三个区域,即清洁区、污染区和外部区。清洁区包括动物饲育室或实验室、清洁走廊、清洁准备室、清洁物品储存室、检疫室等;污染区包括污染走廊、洗刷消毒室等;外部区包括接受动物室、饲料加工室、库房、更衣淋浴间、办公室、值班室、机房、焚烧炉等。结构通常是双走廊,凡进入清洁区的人员、动物、和物品,甚至空气和水都要经过相应的处理,保证该区域不受微生物的侵染。 进入清洁区的人员、动物和物品要分别遵循一定的运行路线:
1. 人员:更衣--淋浴--更衣--清洁走廊--饲养室或动物实验室--污染走廊--洗刷消毒室--更衣--外部区域。
2. 物品:包装--高压消毒(已包装消毒的可经传递窗,清结笼具经有消毒液的渡槽)--清结准备室--清洁物品储存室--饲养室或动物实验室--(污物经包装处理)污染走廊--外部区域。 3. 动物:动物(带专用包装)--传递窗--检疫室--清洁走廊--饲育室或实验室--(实验后或生产供应)--(经包装)污染走廊--外部区域。
, 屏障系统
主要是用于SPF级动物的饲育。有正压屏障构造、负压屏障构造(生物安全屏障系统)也有用层流架(正压/负压)或隔离器作SPF级屏障系统。屏障系统设施,要求与外界隔离,空气经三级过滤净化后才进入屏障设施之内,空气洁净度为10,000级。除生物安全屏障系统为负压以外,通常应保持为正压,且不低于20--50Pa;出风口设有防空气倒流装置。屏障系统设有清洁和污染走廊,进入系统的笼具、饲料、饮水、垫料、器械等一切物品都要经过严格的消毒灭菌,人员进入要经淋浴、更衣,使用专用的服装,进入的动物要有专用包装,也经严格的消毒处理。系统内的人员、物品和空气等采用单向固定的流通路线,有呼吸系统疾病和皮肤病的人员不能进入系统内。结构要求和进入系统内的人、动物和物品的运行等与亚屏障系统基本相同,但要求更为严格。
, 隔离系统
主要设备是隔离器,分有正压和负压隔离器。隔离器及其辅助装置共同组成的隔离系统,用于饲养SPF动物、无菌动物和悉生动物。隔离器可置于亚屏障系统或开放系统内运转,如在开放系统内,则要严格控制系统内环境的温、湿度。
操作时,工作人员只能通过隔离器上的橡胶手套来进行饲养或实验。物品是通过包装消毒后,由灭菌渡舱或传递窗传入;动物是经由无菌剖腹产的方法进入;进入隔离器的空气,应经高效过滤,保证隔离器内空气洁净度达100级,无菌并维持正压状态。根据实验需要也可维持负压状态,但需要配置空气排放装置,保证空气排放符合标准。
另外,对实验动物设施的房舍设施的建设,如:地面、门窗、墙壁、天花板、走廊及空气净化调节设备与送排风系统等都有详细的要求,例如:地面要求平而不滑,一般不设排水口;墙壁要求保温和隔音,墙涂料耐酸碱,易于消毒清洗;有压力梯度的系统,门应开向压力高的一侧等。总之,设施建设是从质量控制要求的角度,考虑到操作和成本等因素来提出相应的要求。
小白鼠俗称“小鼠”、尖嘴鼠,由于颜色纯白而得名。我国饲养小白鼠历史最早,据记载,公元307,1641年就有人捕获野生小鼠进行饲养,并作为古代僧侣们的祭物。据资料介绍,从18世纪开始,小鼠开始成为实验动物,有的也进行观赏饲养。
一、生物学特性
(一)分类学地位
小白鼠是野生鼷鼠的变种,隶属于动物界,脊椎动物门,哺乳纲,啮齿目,鼠种。我国目前饲养最广泛的是1946年从印度某研究所引入到云南昆明饲养的品种,又名昆明种。50年代由昆明引到北京生物制品研究所,以后输送到全国各地饲养。
(二)形态特生
小白鼠经过人们长期选择,定向培育,已形成许多品种类型。一般人们把它分为普通常用小白鼠和满足特殊需要的特种小白鼠两种。特种小白鼠有高癌鼠、低癌鼠、糖尿病鼠及先天性肌肉萎缩病鼠等。有的将小白鼠根据不同杂交方法和获得遗传特性而划分为近交品系、突变品系、远交和杂交群等。1972年以前,国际上公认的小白鼠近交系已有250多个。各品种小白鼠形态特征略有差异,但基本上相差不多。普通小白鼠体长约8厘米,尾略短或略长于体长,面部尖实,嘴前部有长长的触毛,耳耸立呈半圆形,眼睛大,嘴尖,被毛有纯白色和白斑色。90日龄昆明种小白鼠,体长9,11.0厘米,一般雄鼠大于雌鼠,尾有四小白鼠经过人们无数代的定向选择,生活习性有了一定的改变,环境适应性较差。如果把它们放回到室外环境,往往会因缺乏竞争力而难以生存。在人工饲养条件下的小白鼠,胆小怕惊,温顺,较易捕捉。当它受惊时,尾巴挺直并猛力甩动。夜间比白天活跃,喜群居。白日常集群而卧,下午4,5点钟以后活动加强,尤其在晚上更加活跃。当人在晚上进入鼠舍,即可听到小鼠不停地活动与啃咬所发出的沙沙响声。小白鼠喜阴暗、安静的环境,对环境温度、湿度很敏感,经不起温度的骤变和过高的温度。夏季温度过高常影响种母鼠的受胎率和仔鼠生长发育。冬季室温过低,不仅会影响种鼠的生长繁殖,且易发生多种疾病。小白鼠最适宜的室温是18,22?,相对湿度为50,60,时较理想。此外,小白鼠尚有在干燥角落营巢的习性。 白化小白鼠怕强光,在比较强烈光照下,哺乳母鼠易发生神经紊乱,可能发生吃仔鼠的现象。受到噪音的刺激,也会吃仔鼠。雄鼠好斗,性成熟的雄鼠放在一起,常发生互斗咬伤。雄鼠具有分泌醋酸氨臭气的特征,是引起饲养室内特殊臭气的原因。小白鼠为杂食性动物,可供利用的饲料很多,但作为实验动物饲养,应针对不同类型的小白鼠和各个生长发育阶段来制定合理的日粮标准。健康小白鼠一般能活存18个月至20个月,最长的可活至二年半。但年老的小鼠常体弱毛稀,多死于各种疾病,尤以肿瘤为多。
(一)饲养设施
经过长期入工饲养的小白鼠,对环境的适应性差,不耐冷热,要求生活在清洁无尘,空气新鲜,温度在18,22?,相对湿度50,60,,噪音85分贝以下,氨浓度20PPm(通风换气8,12次/小时的环境中。因此,它对饲养房舍的建筑、环境条件要求比较严格。目前,国外饲
养实验小白鼠多采用全封闭式的饲养设施,室内温度。湿度、光照、通风全部自动控制。国内饲养条件,尽管因陋就简,也要满足小白鼠对生活环境的基本要求。此外,笼具是小白鼠的生活场所,也是从事饲养人员每天都得操作的用具,因而笼具的结构、质量、式样以及重量等,是否合乎科学饲养要求,这对动物的生长繁殖,改善工作人员的劳动条件和提高工作效率等,都是十分重要的。
1(鼠舍
饲养小白鼠的房舍不宜过大,以20,25平方米为宜。这样有利于鼠群的调整及房舍的消毒。如果是平房,每幢房舍之间应有一定的距离,至少不少于15米,这样既可保证周围环境的宽敞,又可较有效地控制疾病的传播。除饲养房舍之外,还应合理设计辅助设施。例清洁消毒室,饲料、笼具、垫料贮藏室以及工作人员的更衣室、消毒室等。
2(鼠罐
当前在国内使用的有白瓷罐。泥瓦罐和塑料罐3种,还包括配备相应的罐盖。白瓷罐外形呈桶状,上口直径22厘米,下底直径18厘米,罐高吸厘米。其优点是上口较大,空气流通,夏季小白鼠居住凉爽,因其不渗水,不易引起铁鼠架的腐蚀。缺点是冬季保温性能差,笨重不易操作。泥瓦罐外形呈鼓状,有二个耳把。上口直径16厘米,下底直径15厘米,中间直径18厘米,罐高17厘米。优点是冬季保温性能好,使用轻便,价格便宜。具有防潮、暗光、价廉以及减少疾病传播等优点,是我国饲养小白鼠的传统用具。缺点是易渗水,腐蚀铁架,长期使用时,鼠粪和鼠尿熏染的臭气大。经过洗刷煮沸消毒,其臭味仍不易除去,有的破损率较大,过于笨重。塑料罐外形呈桶状,上口直径23厘米,下底直径19厘米,罐高14厘米,罐口上缘有卷边,罐重约150克。原料为聚乙烯塑料。其优点是使用轻便,不吸水,耐磨损,便于洗刷消毒,易干燥,贮存方便,耐腐蚀,耐用,破损少,老化后仍可回收,劳动强度轻。各种罐盖的外形结构及其大小都是按照鼠罐上口边缘的外形大小用铁丝编制而成。盖面上有填装饲料及饮水瓶的同斗,其孔大小,以逃不出仔鼠为原则。
3(鼠盒
小型盒长37厘米,宽26厘米,高17厘米。鼠盒可用于一公多母配种生产使用,也可用作待发小白鼠或饲养试验用鼠。利用鼠盒饲养小白鼠,其活动面积较大,但铁皮制作的盒底,容易被鼠的粪尿腐蚀。鼠盒盖的制法与要求同鼠罐。
4(鼠架
鼠架有木制及铁制两种。现在多为铁制的,材料多选用三角铁和薄铁皮(或塑料板)焊接而成。鼠架的大小根据条件、饲养数量等情况而定。一般的尺寸为高171厘米,长160厘米,
宽50厘米,连同架盖分为五层。除顶盖外,每层鼠架可容纳鼠罐12个,每个鼠架分4层,共容纳鼠罐48个。目前国外已推广使用能够拆开的活动鼠架,用不锈钢制成,有很好的防腐性能。
5(饮水器
饮水器是饲养小白鼠的必备用具。常用的有玻璃瓶、塑料瓶和乳头式自动饮水器3种。其中以玻璃瓶使用最为广泛,一般采用容量250毫升和5吗毫升两种型号的玻璃瓶,瓶口使用生理盐水瓶上的瓶塞,从中间打孔插入铝管或玻璃管,其内径为0(5厘米,外径0(7厘米。 6(铺垫物
垫料,能吸附水分、动物的排泄物,维持笼内和动物本身的清洁卫生,垫料应不含挥发性、刺激性物质,无毒性,不会干扰动物实验。垫料的原料常用锯末、木刨花、木屑、碎玉米芯等。垫料的原材料常会携带各种微生物和寄生虫,使用前要经加工处理、消毒灭菌、除虫等。欧洲国家多用白杨木屑做垫料,而美国多用碎玉米芯,考虑到了材料的毒性因素和取材的难易。目前我国实验动物垫料尚未标准化,多采用混合木屑,其成分和毒性都不确定,可喜的是,现已开展了相关的研究,莎适合国情的标准化垫料,指日可待。
(二)饲料
小白鼠属杂食动物,胃容量较小,一般为l,1(5毫升。小白鼠有随时采食的习性,夜间更为活跃。小白鼠的饲料消耗量,随着生长发育和生产繁殖的不同阶段而有所不同,在饲养管理上,须加注意。妊娠雌鼠,饲料消耗量逐渐增加。在产后第一天,饲料消耗量几乎没有增加,第二天开始上升,产后l,12天,仔鼠体重小,需乳量不大,但体重增加的速度较快。产后12,21日龄,仔鼠开始睁眼,体重增大,需乳量和饲料量也随之增多。由于乳量不能满足需要,每日平均增重减少。21日龄离乳到35日龄内,每天饲料消耗量由4克增到5(5,6克,体重增加最快。日龄达35天以后,逐渐稳定。对小白鼠的给饲,一定要根据不同阶段的生长发育特点进行。对睁眼和刚离乳的仔鼠,应加喂营养较高的颗粒料或软料,以满足其生长发育的需要。为增加雌鼠的泌乳量,整个哺乳过程,都应加喂葵花籽,以满足哺乳仔鼠的正常发育。
小白鼠的食量虽小,但对饲料质量的要求相对较高,必须保持营养物质的平衡稳定,富有蛋白质等,否则对其发育、繁殖和抗病能力会造成严重影响。小白鼠对鱼肝油等维生素都很需要,口粮中长期缺乏这些营养物质时,仔鼠生长缓慢,出现死亡。此外,小白鼠的饲料不立经常更换,在饲料品种不稳定的情况下,易引起小白鼠生长停滞,繁殖率下降等现象。纯系小白鼠对营养成分要求高,对营养变化也极为敏感,如DBA,2纯系小白鼠需要高蛋白质低脂肪的饲料。因此应根据不同品系的不同要求制定不同的饲料配方。如生产用种鼠(杂
种鼠)和纯系小白鼠的饲料,所含蛋白质成份高于待发小白鼠及一般非生产小白鼠的饲料。一些对营养物质有特殊要求的小白鼠,需要高蛋白饲料,应在饲料中注意调整和补充。军事医学科学院实验动物场的两种饲料配方如下,以供参考。
配方1 配方2
白面25%,麸皮18,,酵母粉1,, 白面25,,麸皮18,,酵母粉1,, 玉米面20,,骨粉3,,高梁面15,, 玉米面20,,骨粉3%,高梁面15,( 鱼粉4%,食盐1%,豆饼面22% 鱼粉4%,食盐1,,豆饼面22,, 鸡蛋1%,鱼肝油1% 骨肉粉2%(鱼肝油1,。
由于各地实际情况的差别,饲料配方也不尽相一致。但在制定小料形式应采取烘烤的块料。块料严格按照配方比例制作。制出的块料及时送烤料室烘烤。温度不宜超过80?,时间要适宜,否则维生素等易遭破坏。烤料室的热源采用高温蒸气为好。配料时是先将鱼肝油与各种饲料混合,然后再加鱼粉(或骨肉粉)、矿物质饲料及酵母粉等。烘制好的饲料,应妥善存放,以免受潮发霉或被其他动物啃咬污染。一旦块料生霉变质,应停止喂给。 (三)管理
1(不同鼠群的管理
不同的鼠群,管理方式、方法或要求是不同的。核心种鼠群担负着为生产鼠群提供种鼠的任务。管理上要求比较细致。当采用一种公鼠与五只种母鼠循环配种时,种公鼠与种母鼠在同一鼠罐中同居10天,然后将怀孕种母鼠单罐饲养,再使种公鼠与另一鼠罐的种母鼠同居10天。依此类推,循环往复进行。根据需要和培育方向,有计划地配种、留种。留种时按1:1的比例进行选留,多余仔鼠予以淘汰。选留的仔鼠,要延长哺乳期至23天,离乳时体重要求达13克以上。保证向生产种鼠群提供优质后代。生产种鼠群交配繁殖频繁,尤其种母鼠的负担重,体质消耗大,要保证供给充足的营养,定时补充少量的葵花籽、麦芽和拌有鸡蛋的软料,保证供给清洁饮水。按照选种、选配的要求,将一只种公鼠与一只种母鼠放在同一鼠罐中进行配种繁殖。配种后20天仍未受孕者,可采取鼠罐之间倒换各公鼠的方法,提高种母鼠的受孕率,并及时作好配种、产仔、离乳等项登记及统计工作。生产繁殖群中离乳后的幼鼠转入待发鼠群饲养。待发鼠群在管理上一定要将雌雄分开,并根据不同日龄、体重、品系等将它们分别放入铁盘中饲养。大型铁盒装15克以下幼鼠60只,25克以上幼鼠30只。不同铁盒中的待发鼠不可混养,以防相互打架咬伤。此外,要严防小鼠逃出盒外,严格淘汰患病的畸形小鼠,待发母鼠盒内严禁混入公鼠。饲养人员每天都应将幼鼠的转入、待发鼠的发出、死亡、淘汰等情况做好登记。
2(不同季节的管理
由于各地气候条件不同,饲养情况也不同。春秋季节昼夜温差大,有时相差15?左右,小白鼠易于引起肺炎、仔鼠腹泻以及鼠痘等疾病,要做好鼠舍的保温工作。秋季应给鼠罐内添加稻草,注意调节鼠舍内的温度和通风换气,保持鼠舍内空气新鲜。为了防止小鼠肠道寄生虫病的蔓延,一定要做好驱虫消毒工作。夏季温度高,湿度大,白天最高温度可达38?以上,小白鼠往往食欲下降,种母鼠的受孕率低,仔鼠生长发育缓慢,死亡淘汰增高。降温防潮是夏季饲养管理中的主要问题。适当减少鼠群的密度,减少种母鼠的带仔数,加强鼠舍的通风,保持室内空气流通新鲜和温湿度适宜。夏季饲料易发霉变质,要把喂饲小白鼠的各种饲料保管贮存好,保持饲料新鲜。饲喂量要适当,少给勤添,不能剩料,保证供给清洁新鲜的饮水。冬季气温低,日照时间短,寒风刺骨,要抓好小白鼠的冬季管理。首先要做好入冬前的准备工作。从物质上准备好垫料、检修门窗及通风保温设备,淘汰老年体弱的种鼠,做好检虫驱虫和消毒工作。其次,做好保温防寒工作,最好有取暖设施,增加鼠舍温度,并保持温度相对恒定。关好门窗,防止贼风侵袭。冬季门窗关闭,要搞好通风换气和粪尿污物清除,注意食物卫生。
3(一般管理原则
饲料饲养。饲料配方要满足小白鼠的营养需要,保持相对稳定,补充0(5,l,的鱼肝油,以满足小白鼠对维生素A(D的需要,否则出现母鼠受孕率低,产仔率下降以及吃食仔鼠等现象。小白鼠是昼伏夜动的动物,采食以夜间为主。因此,鼠罐、盒盖的同斗内要经常保持足够的新鲜干燥饲料。在小白鼠大群饲养中,每周应有2天以上给小白鼠添加饲料,保证不间断地供给小白鼠饲料。小白鼠一昼夜的饲料量见表。小白鼠的备用饲料应严防野鼠、蟑螂等污染。霉雨季节,小白鼠的干块饲料要少做勤做,以防发霉变质。供给青饲料时,如发麦芽,麦芽生好后,用清水冲洗干净,风干之后饲喂。
小白鼠一昼夜的饲料量(单位:克)
小白鼠 饲料
干块料 麦芽每克约19粒 葵花籽每克约12粒
成年5,63,5 0.5,1
幼年1,30.5,0.25 0.1,0.5
清洁卫生。小白鼠的饲养房要保持室外整洁,门窗、墙壁、地面等无尘土,无蜘蛛网,最好是室内每月用0(1,的新洁尔灭喷雾消毒1次,室外用3,来苏尔消毒一次。鼠架每周要用消毒药液的湿布擦洗一次。垫料要保持清洁干燥,放在专用的房间内贮存,严格防止野鼠、猫、狗等窜入。条件允许的情况下,对垫料可采用高压蒸气等方法消毒灭菌。鼠罐、鼠金中的垫料更换次数每周不得少于2次。饮水瓶要每月定期煮沸消毒1次,或用0(2,过氧乙酸浸泡3分钟消毒。饲料最好也使用高压蒸气等方法消毒。
控制温湿度。小白鼠对环境变化很敏感,湿温度过高或过低会直接影响小白鼠的生长发育、生产繁殖,甚至导致小白鼠发生疾病。因此,要保持温湿度相对稳定。饲养小白鼠的适宜温度是18,22?。若高于35?时,明显影响母鼠的受胎和仔鼠的生长,若低于18?时,引起幼鼠的发病或死亡。此外,小白鼠最忌温度忽高忽低,要保持温度相对稳定。这是饲养好小白鼠的一个关键。饲养小白鼠适宜的湿度为50,60,。当温度较低,室内易干燥,可采取在地面上洒水或用温布拖地方法,增加室内的湿度。饲养小白鼠,通风也很重要。通风可以调节室内温湿度,保持空气新鲜。如果密度较大,加上粪尿臭气的蒸发,尤其是冬季关闭门窗,室内空气极易污染,致使小白鼠抗病力下降,易感染疾病,这对小白鼠的生长发育极为有害。对于工作人员的健康,也有一定的影响。因此,要加强鼠舍的通风调节,装置电动排风扇,每天定时排风,或者选择风和日暖的时候,打开门窗,自然通风。 严格防疫。小白鼠对外来刺激敏感,尤其对鼠症病毒非常敏感,一旦发病就无法控制。在小白鼠的饲养管理中,要建立行之有效的严格防疫制度,减少鼠群感染的机会,保持鼠群的健康。凡从外地引进的小白鼠,必须在隔离检疫房内隔离观察饲养1个月,确认无病时才能与原鼠群一起饲养。饲养管理人员进入鼠舍必须经过消毒池(垫)。穿戴好工作衣、帽、口罩和工作鞋,离开鼠舍时要脱去外衣、帽等,并要洗手消毒。严禁非工作人员进入小白鼠饲养房。严格执行消毒防病措施,严防野生动物如野鼠、蟑螂等进入小白鼠饲养设施内。 4(管理日程
饲养小白鼠工作,每周应按计划进行,使其生活保持规律性。每周的工作日程安排如下表。
小白鼠管理日程
星期 工作内容
一 添加块料,检查种鼠出生登记及分离
二 换窝,整理室内外卫生
三 灌换水瓶,整理青饲料并饲喂
四 同星期一工作内容
五 同星期二工作内容
六 同星期三工作内容
七 值班
三、繁殖
(一)种鼠选择
小白鼠的繁殖,多采用随机交配,选择下代种鼠时,不需要考虑亲代的血缘关系。选择标准主要根据双亲的繁殖能力,仔代的生长发育和健康状况。尽量做到每代近交系数上升不超过1,。选种条件是亲代应具有较高生殖能力,如采用雌雄长期同居时,以两胎生产的间隔不得超过30天,每胎产仔能力8只以上,并具有良好的泌乳能力和对周围环境有较高的适应能力。要求生长发育快,体型大,一般应从第2,4胎生下的仔鼠中选留幼种。昆明种体重达12克以上,即可选做种鼠。被选的种鼠应体质强壮,运动活泼,对外界刺激反应敏锐,眼睛鲜红有神,被毛光泽,浓密贴身,尾粗而较长,血管明显,呈粉红色,头部宽广,颈部长度适中,背宽而平直,躯干前后匀称,腹部系紧,胸圆满,四肢短而有力,生殖器正常等条件。
根据不同交配方式的要求,对选留的幼种,填好卡片。如采用不限血缘关系的随机交配,把选留的幼鼠,分清性别,群饲或单饲。如采用避免近亲繁殖的交配,必须把同窝中选留的幼鼠,分开雌雄性别,编好组别,同窝的幼鼠采用相同的编号,配种时不得以同一编号的雌雄鼠交配。在育种过程中,应对发育不正常者及时淘汰。选配时应挑选肥度适中的种鼠进行交配。过瘦说明发育不良,过肥的雌鼠,常因卵巢周围沉积脂肪过多,滤泡的发育少,影响卵巢激素的产生和分泌,阻碍卵细胞的成熟和排出,繁殖率低。雄鼠过肥,也会降低性活动和受精能力。
(二)性成熟与配种
小白鼠发育迅速,性成熟早,在36日龄雄鼠的附来精液中可找到活动的精子。如将同南公母放在一笼内,日龄达57天即可分娩,说明雌鼠在37日龄时,即可发情排卵,进行生殖。小白鼠有明显的性周期,雌鼠20日龄以后,阴道逐渐变薄,不久即可开口,开口的日龄依饲养条件投育状态、不同品系而有所不同。一般36,42日龄的小白鼠即已性成熟。小白鼠性成熟时的标志是母鼠阴道打开,出现求偶现象,有交配的欲望,乐意接近公鼠。公鼠单九下降,精子生成。同时形态和机能上也发生相应的一些变化。据介绍,雄鼠25日龄左右单丸自腹腔落入阴囊,35日龄后单九中出现精子,40日龄后可受精,同时体重增重较快。雌性小白鼠在20日龄以前阴道口闭合,自此以后阴道壁逐渐变薄,阴道开口。这是性成熟的主要标志。小白鼠的性成熟因品系和饲养条件不同而有差异。小白鼠一般在60,90日龄(即2,3个月)体成熟。此时小白鼠体重增长缓慢,是适宜配种年龄,可以根据不同季节、天气冷热、个体情况等,采用适当日龄进行配种繁殖。
(三)发情
小白鼠开始繁殖日龄,多为65,90天。性成熟的雌鼠一年四季都有性的活动,呈周期性发情。一个性周期,又分为发情前期、发情期、发清后第一期、发情后第二期和体情期。母鼠性周期各阶段的特征,可用阴道分泌物涂片和组织学检查加以区分。
小白鼠周期性发情,除妊娠期外,几乎都周期性的排卵。性周期为4,5天,产后12,24小时内还有一次产后发情排卵。由于授乳的原因,性周期受到抑制,仔鼠断乳2,6天后,又开始出现下一个性周期。雌性小白鼠排卵期也为3,4夭,但在排卵期数小时内才允许公鼠交配,其他时间则倦伏于巢内或沿鼠罐爬行。当交配时,常是公鼠追逐母鼠,母鼠双目微闭,匍伏不动或用双爪作半拒绝状,并发出“卿卿”的叫声。公鼠经过几次努力后,方能完成交配。交配后,母鼠阴道口形成特殊的阴道栓,封闭阴道口。阴道栓的形成是公鼠的精液、母鼠的阴道分泌物混合用道上皮细胞等遇空气后迅速变硬,将阴道口封闭的结果。一般在交配后24小时左右自动脱落。在20小时内检查雌鼠有无阴道栓,可以判断小白鼠的交配是否成功。交配方法一般可采用一公多母(1:2或1:4)的交配法和一公一母同居交配法。 (五)妊娠与分娩
小白鼠的妊娠期,因其品种不同而有差异。纯系小白鼠的妊娠期一般19,20天,国内普通小白鼠妊娠期一般18,21天。产后受孕鼠的妊娠期有所延长,其延长时间长短,同小白鼠品系、个体及环境有关。
小白鼠的分娩可昼夜进行,但以晚间为多。临产前表现不安,常不停地整理产窝。分娩过程中,4分钟左右子宫收缩一次,产出一只。胎盘产出后,母鼠将胎盘嚼食。整个分娩过程一般需要一小时左右。分娩后约经12,24小时而出现产后发情,此时著与公鼠交配,亦能受孕。
(六)哺乳
母鼠每胎产仔数的多少,主要取决于品种(品系)、使用时间、胎次和饲养管理的条件好坏等。正常情况下,适龄母鼠每胎产仔8,13只。母鼠第7胎以后产仔数逐渐下降。母鼠带仔数量的多少,根据生产的大小和气候条件的变化而决定其带仔数量。在实际大群生产中,由于都是适龄的生产种鼠,生产力高,带仔力强,带仔数多在7只以上,一般以9只为宜。但带仔数超过9只以上,则易影响仔鼠的质量。若因某种原因,母鼠带仔不足9只时,可在清理产窝时,将其他产窝中多余的同龄仔鼠移定其内,进行代乳,基本保证每批母鼠的平均带仔率。仔鼠哺乳期一般18,21天,种用仔鼠,哺乳可延长到23天,但不超过25天。过于延长哺乳时间,影响母鼠的健康和发情。种鼠繁殖使用时间一般为6,8个月(约9,11月龄),即生产5,6胎,这时繁殖力强,带仔好。此后,繁殖能力下降,易出现各种疾病,仔鼠质量越来越差。所以,种母鼠一般繁殖使用6,8个月(约9,11月龄)后必须予以淘汰。
四、疾病防治
(一)鼠痘
鼠痘又名“脱脚病”,是由鼠痘病毒引起的急性传染病。此病传染迅速,发病死亡率高,对小白鼠威胁最为严重。本病的传染源为脱脚病感染。一年四季均可发生,饲养管理不当或卫生消毒、隔离检疫制度不严等因素都会促进本病的发生和传染。症状有急性型和慢性型两种。 急性型(内脏型)被毛蓬松无光泽,软弱无力,食欲消失,无其他局部症状而突然死亡。病情经过迅速,4,6小时可死亡80,90,,也有的经l,2天死亡,急性期未死亡的小白鼠可转为慢性型。慢性型(皮肤型)病鼠嘴、脸肿大(头部肿大,尾部皮肤表面出现小结节或红肿,溃疡糜烂,最后坏死脱落,四肢肿胀,尤以脚掌最为明显,呈半球形。小白鼠不能以患肢着地,肿胀的皮肤表面破溃而流出浆液性渗出物。病理剖检,急性型小白鼠体表淋巴潮红肿大,脾肿大。肝灰褐色或灰黄色,切开时几乎不流血。肠道充血,腹腔、胸腔和心包腔内有浆液性渗出物。病程较长的小白鼠,可见到典型的病变,肝肿大,有灰白色坏死点,脾肿大,呈暗紫色,表面可见多数白色小斑点。慢性型病可见头、尾。四肢皮肤炎性水肿,皮下有浆液性渗出物及坏死性溃疡灶。肝呈暗红色或脂肪性变性,有红色斑点及许多淡灰色坏死灶,脾呈暗紫色,有灰白色坏死灶。腹股沟浅淋巴结肿大。本病主要在干预防,坚持自繁自养,建立封锁防疫的饲养制度。凡从外单位引进的小白鼠,必须隔离检疫观察一个月后,方可转入正常饲养群。加强饲养管理,做好冬季保温,夏季防暑工作。对于不符质量要求的小白鼠要严格淘汰。确立小白鼠原窝同罐育种,防止种鼠育养期间咬伤感染,传播疾病。建立消毒制度,坚持日常的清洁卫生和消毒防病措施,定期消毒灭菌。严禁非工作人员进入小白鼠的饲养房舍,对于必须进入的外来人员,必须严格消毒。
(二)脑脊髓炎
本病是由脑脊髓炎病毒引起的传染病。常呈散发性发生。潜伏期8,13天。病鼠主要表现为麻痹,特别是后肢麻痹。通常是病鼠一后肢先出现麻痹或轻瘫,然后另一后肢也出现同样的症状。此时患肢肌肉松弛无力,患鼠躺卧不起,食欲减少,被毛蓬乱,逐渐消瘦,最后因排粪排尿困难而死亡。急性型病程1,3天,慢性型2,4周。本病主要在干预防。饲养小白鼠的鼠罐、笼具及其他用具应定期用3,石炭酸、5,来苏尔或煮沸消毒,对于预防此病具有重要意义。此外对引进小白鼠要坚持检疫制度,严格淘汰可疑病鼠。
(三)病毒性肺炎
病毒性肺炎是由多种病毒引起的小白鼠传染病。其主要病理变化为气管、支气管炎及小叶性肺炎。病鼠食欲减少,不活泼,被毛蓬松,耳廓发紫,弓背,搔鼻,有鼻漏,呼吸加快,伴有“咯咯”的哇叫声杂音。由于病鼠出汗,被毛潮湿而色发暗,感染后4,14天可引起死亡。病理剖检,肺呈褐色,病变常侵犯上肺叶,波及到下肺叶,呈小叶状散布,以支气管、细支气管周围最为显著。胸腔内有浆液性渗出液,少数病例可见胸膜炎症变化。预防措施是喂饲
富有维生素的全价营养饲料,注意防寒、防潮、防暑,保持鼠舍中温度相对稳定。切忌温度骤变,防止贼风的侵袭,严格检疫制度,及时淘汰病鼠,定期进行预防性消毒。 (四)仔鼠腹泻
仔鼠腹泻是由大肠肝菌引起的哺乳期仔鼠剧烈腹泻,迅速衰竭或伴有败血症,死亡率较高的急性疾病。病鼠病初可见黄色粘液状稀粪粘于肛门周围及尾部,有时粪痴堵塞肛门,难以剥脱。继而排出恶臭水样稀类,污染肛门周围及全身被毛。患鼠迅速消瘦,皮肤松弛形成皱折,尾呈竹节状。此病往往在同窝或同龄乳鼠中迅速传播。病理剖检可见腹腔有多量的液体,消化道发炎,肠粘膜潮红,部分粘膜脱落,肠系膜淋巴肿大,有时可见肝、脾灰白色病灶。预防措施是加强饲养管理,供给小白鼠优质干净并富有维生素的饲料和清洁新鲜的饮水。每年初春及深秋应加强防寒保温工作。鼠舍温度保持相对稳定,及时加垫卧草以保罐温,并要注意稻草,锯末等垫料的消毒。
(五)副伤寒
副伤寒也叫鼠伤寒。是由副伤寒沙门氏菌属引起的小白鼠消化道传染病。此病主要发生在抵抗力减弱的小白鼠,传播快,流行迅速。临床上,小白鼠患病初期,迟钝不活泼,食欲减少,继而停食。病鼠被毛蓬乱,失去光泽,眼结膜发炎,眼睑粘合,腹部膨大,呼吸加快。病鼠出现腹泻,粪便呈粘液泡沫状,味恶臭,黄绿色,有时混有血液。通常可见病鼠的腹部膨大,用食指弹诊,可听到鼓音。预防措施是针对此病多经消化道感染的特点,特别加强小白鼠的饮食卫生,确保饲料新鲜,饮水清洁和食具、笼、盒的清洁。消灭野鼠、逃鼠、苍蝇、蟑螂等。要坚持严格检疫、卫生消毒防病制度,严格淘汰可疑病鼠。定期检虫驱虫,以增强小白鼠体质,预防由其他胃肠道疾病诱发此病。
(六)细菌性肺炎
小白鼠细菌性肺炎是一种散发性疾病,一年四季均可发生,但以冬季发病率为高。病原作为肺炎球菌。正常小白鼠的呼吸道粘膜上就附有肺炎球菌,但由于动物机体的防御能力,如呼吸道粘膜的屏障作用及呼吸道粘膜分泌的溶菌酶等,小白鼠不致发病。当抵抗力下降时,病原微生物有可能乘虚而入。因此,当季节交替,气候突变,室温忽高忽低或室内通风不良、湿度不稳定或营养缺乏等情况下,降低了小白鼠的抗病力,才会诱发此病。患病鼠被毛蓬乱,呼吸音不正常或发出“咕咕”的响声。一旦发病,应迅速查找发病原因,并采取相应的措施,控制疾病的蔓延。严格淘汰病鼠,消灭传染源。使用消毒药物喷洒小白鼠饲养房间,进行喷雾空气消毒。预防性给药是对于食欲尚好的可疑病鼠,投服长效磺胺(SMP)。每只成年鼠每口口服2毫克。如将药液溶于小白鼠的饮水中服用,连续一周,效果较好。预防上认真做好冬季保温和夏季防暑工作,保持室内温湿度相对稳定。特别要防止室内湿度骤变,做好鼠
舍的通风换气工作,保持室内空气新鲜。经常检查鼠群的健康情况,发现病鼠立即淘汰,并对鼠舍进行消毒。
三、分组与标记
(一) 分组原则
实验动物分组应严格按照随机分组的原则进行,使每只动物都有同等机会被分配到各个实验组中去,尽量避免人为因素对实验造成的影响。
(二) 建立对照组
实验动物分组时应特别注意建立对照组。对照组可分自身对照组和平行对照组。 1(自身对照组
自身对照是把实验动物本身在动物实验前、后两阶段的各项相关数据,分别作为对照组和实验组的结果并进行统计学处理。
2(平行对照组
平行对照组分正对照组和负对照组(空白对照组)两种。正对照组是对实验动物实施与实验动物相同但排除了所要观察的目的因子(如治疗手段或药物)的处理,负对照组则不作任何处理,这种方法就是平行对照组。例如要观察某种药物的药效,对实验组动物采用肌肉注射的给药方法;正对照组动物同样进行肌肉注射,但注射的不是药物而是同等剂量的生理盐水,以便排除肌肉注射生理盐水可能产生的影响;负对照组动物则不进行肌肉注射,并与实验组动物和正对照组动物在相同的环境和条件下饲养,作为空白对照。
(三)、标记编号
对随机分组后的实验动物进行标记编号,是动物实验准备工作中相当重要的一项工作。标记编号方法应保证编号不对动物生理或实验反应产生影响,且号码清楚、易认、耐久和适用。目前常用的标记编号方法有染色法、耳孔法、烙印法、挂牌法等标记编号方式。此外还有针刺法、断趾编号法、剪尾编号法、被毛剪号法、笼子编号法等。对小鼠实验的方法常用染色法。
染色法
染色法是用化学药品在实验动物身体明显的部位,如被毛、四肢等处进行涂染,以染色部位、颜色不同来标记区分实验动物,是最常用、最易掌握的方法。
1( 常用染色剂
(1)3% ~ 5%苦味酸溶液,可染成黄色。
(2)0.5% 中性红或品红溶液,可染成红色。
(3)2%硝酸银溶液,可染成咖啡色(涂染后在可见光下暴露十分钟)。 (4)煤焦油酒精溶液,可染成黑色。
2( 染色方法
(1)单色涂染法
单色涂染法是用单一颜色的染色剂涂染实验动物不同部位的方法。常规的涂染顺序是从左到右、从上到下。左前肢为1号、左侧腹部2号、左后肢3号、头部4号、背部5号、尾根部6号、右前肢为7、右侧腹部8号、右后肢9号、不作染色标记为10号。此法简单、易认,在每组实验动物不超过10只的情况下适用。
(2)双色涂染法
双色涂染法是采用两种颜色同时进行染色标记的方法。例如用苦味酸(黄色)染色标记作为个位数,用品红(红色)染色标记作为十位数。个位数的染色标记方法同单色涂染法;十位数的染色标记方法参照单色涂染法,即左前肢为10号、左侧腹部20号、左后肢30号、头部4 0号、背部50号、尾根部60号、右前肢70号、右侧腹部80号、右后肢90号,第100号不作染色标记。比如标记第12号实验动物,在其左前肢涂染品红(红色),在其左侧腹部涂上苦味酸(黄色)即可。双色法色法可标记100位以内的号码。
(3)直接标号法
直接标号法是使用染色剂直接在实验动物被毛、肢体上编写号码的方法。实验动物太小或号码位数太多时,不宜采用此方法。
染色法虽然简单方便,不会给实验动物造成损伤和痛苦,但是长时间实验会使涂染剂自行褪色,或由于实验动物互相嬉闹、舔毛、摩擦、换毛、粪尿和饮水浸湿被毛等原因,易造成染
色标记模糊不清,因而染色法对慢性实验不适用。如果所做慢性实验只能采用此种染色方法,则应注意不断地补充和加深染色。
另外,常用染色剂的毒性对实验动物的影响也是需要注意的一个问题
四(动物实验基本技术
1(实验动物的抓取和固定
小鼠性情较温顺,一般不会咬人,比较容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上,在小鼠向前挣扎爬行时,用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤,将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部,即可将小鼠完全固定。在一些特殊的实验中,如进行尾静脉注射时,可使用特殊的固定装置进行固定,如尾静脉注射架或粗的玻璃试管。如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作,如进行解剖实验则必须先行无痛处死后再进行。
2(实验动物的麻醉方法
麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉,保障实验动物的安全,使动物在实验中服从操作,确保实验顺利进行。
(一)常用局部麻醉剂:普鲁卡因,此药毒性小,见效快,常用于局部浸润麻醉,用时配成0.5,,1,;利多卡因,此药见效快,组织穿透性好,常用1,,2,溶液作为大动物神经干阻滞麻醉,也可用0.25,,0.5,溶液作局部浸润麻醉。
(二)常用全身麻醉剂:
1. 乙醚 乙醚吸入法是最常用的麻醉方法,各种动物都可应用。其麻醉量和致死量相差大,所以其安全度大。但由于乙醚局部刺激作用大,可刺激上呼吸道粘液分泌增加;通过神经反射还可扰乱呼吸、血压和心脏的活动,并且容易引起窒息,在麻醉过程中要注意。但总起来说乙醚麻醉的优点多,如麻醉深度易于掌握,比较安全,而且麻醉后恢复比较快。其缺点是需要专人负责管理麻醉,在麻醉初期出现强烈的兴奋现象,对呼吸道又有较强的刺激作用,因此,需在麻醉前给予一定量的吗啡和阿托品(基础麻醉),通常在麻醉前20,30分钟,皮下注射盐酸或硫酸吗啡(每公斤体重5,10mg)及阿托品(每公斤体重0.1mg)。
3(实验小鼠的给药方法
在动物实验中,为了观察药物对机能功能、代谢及形态引起的变化,常需将药物注入动物体内。给药的途径和方法是多种多样的,可根据实验目的、实验动物种类和药物剂型等情况确定。
(一)给药方法
1(注射给药
(1)皮下注射给药
皮下注射给药是将药液推入皮下结缔组织,经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环的过程。作皮下注射常选项背或大腿内侧的皮肤。操作时,常规消毒注射部位皮肤,然后将皮肤提起,注射针头取一钝角角度刺入皮下,把针头轻轻向左右摆动,易摆动则表示已刺入皮下,再轻轻抽吸,如无回血,可缓慢地将药物注入皮下。拔针时左手拇、食指捏住进针部位片刻,以防止药物外漏。注射量约为0.1-0.3ml/10g体重。
(2)皮内注射给药
是将药液注入皮肤的表皮河真皮之间,观察皮肤血管的通透性变化或皮内反应,接种、过敏实验等一般作皮内注射。先将注射部位的被毛剪掉,局部常规消毒,左手拇指和食指按住皮肤使之绷紧,在两指之间,用结核菌素注射器连接4.5针头穿刺,针头进入皮肤浅层,再向上挑起并梢刺入,将药液注入皮内。注射后皮肤出现一白色小皮丘,而皮肤上的毛孔极为明显。注射量为0.1ml/次。
(3)肌肉注射给药
小鼠体积小,肌肉少,很少采用肌肉注射。当给小鼠注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时,采用肌肉注射。操作时1人保定小鼠,另一人用左手抓住小鼠的1条后肢,右手拿注射器。将注射器与半腱肌呈90?角迅速插入1/4,注入药液.用药量不超过0.1ml/10g体重. (4)腹腔注射
左手提起并固定小鼠,使鼠腹部朝上,鼠头略低于尾部,右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两恻进行穿刺,针头刺入皮肤后进针3nm左右,接着使注射针头与皮肤呈45?角刺入腹肌,穿过腹肌进入腹膜腔,当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。固定针头,保持针尖不动,回抽针栓,如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。注射量为0.1-0.2ml/10g体重。
(5)静脉注射
小白鼠和大白鼠:一般采用尾静脉注射,鼠尾静脉有三根,左右两侧及背侧各一根,左右两侧尾静脉比较容易固定,多采用,背侧一根也可采用,但位置容易固定。操作时先将动物固定在鼠筒内或扣在烧杯中,使尾巴露出,尾部用45,50?的温水浸润半分钟或用酒精擦拭使血管扩张,并可使表皮角质软化,以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧,使静脉充盈,用中指从下面托起尾巴,以无名指和小指夹住尾巴的末梢,右手持注射器连4(1/2)号细针头,使针
头与静脉平行(小于30?),从尾下四分之一处(约距尾尖2-3厘米)处进针,此处皮薄易于刺入,先缓注少量药液,如无阻力,表示针头已进入静脉,可继续注入。注射完毕后把尾部向注射侧弯曲以止血。如需反复注射,应尽可能从末端开始,以后向尾根部方向移动注
射。
表1 几种动物不同给药途径的常用注射量(毫升)
注射途径 小鼠 大鼠
腹 腔 0.2-1.0 1-3
肌 肉 0.1-0.2 0.2-0.5
静 脉 0.2-0.5 1-2
皮 下 0.1-0.5 0.5-1.0
(六)经口给药
在急性试验中,经口给药多用灌胃法,此法剂量准确,适用于小白鼠、大白鼠、家兔等动物。
小鼠、大鼠(或豚鼠)用输血针头或小号腰穿针头,将其尖端斜面磨剂,用焊锡在针尖周围焊一圆头,注意勿堵塞针孔,即成灌胃针;亦可用烧成圆头的硬质玻璃毛细管或特制的塑料毛细秋,作为导管。灌胃时将针按在注射器上,吸入药液。左手抓住鼠背部及颈部皮肤将动物固定,右手持注射器,将灌胃针插入动物口中,沿咽后壁徐徐插入食道。动物应固定成垂直体位,针插入时应无阻力。若感到阻力或动物挣扎时,应立即停止进针或将针拔出,以兔损伤或穿破食道以及误入气管。一般当灌胃针插入小鼠3,4cm,大鼠或豚鼠4-6cm后可将药物注入。常用的灌胃量小鼠为0.2-1ml,大鼠1-4ml,豚鼠为1-5ml。
表2 常用实验动物的最大给药量和使用针头规格
动物名称 项 目 灌 胃 皮下注射 肌肉注射 腹腔注射 静脉注射
小白鼠 最大给药量 1ml 0.4ml 0.4ml 1ml 0.8ml
使用针头 9(钝头) 5(1/2) 5(1/2) 5(1/2) 4
大白鼠 最大给药量 1ml 1ml 0.4ml 2ml 4ml
使用针头 静脉切 6 6 6 5
开 针
4(采血方法
采血方法的选择,决定于实验的目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定,血液涂片以及酶活性微量分析法等,可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时,若需反复多次,应自远离心脏端开始,以免发生栓塞而影响整条静脉。例如,研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱,需要比较动、动脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及 K+、Na+、CI-离子浓度,必须采取动脉血液。 采血时要注意:?采血场所有充足的光线;室温夏季最好保持在25-28?,冬季,15-20?为宜;?采血用具有采用部位一般需要进行消毒;?采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥;?若需抗凝全血,在注射器或试管内需预先加入抗凝剂. (1).割(剪)尾采血 当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒,然后浸在45?左右的温水中数分钟,使尾部血管充盈。再将尾擦干,用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm,让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取,采血结束,伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口,割破尾动脉或静脉,收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml,大鼠0.3,0.5ml。
(2).鼠尾刺血法 大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查),可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭,再用酒精消毒和擦拭,使鼠尾充血。用7号或8号注射针头,刺入鼠尾静脉,拔出针头时即有血滴出,一次可采集10,50mm3。如果长期反复取血,应先靠近鼠尾末端穿刺,以后再逐渐向近心端穿刺。
(3).眼眶静脉丛采血 采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套),应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧,使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3,4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm),使采血器与鼠面成45?的夹角,由眼内角刺入,针头斜面先向眼球,刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度,小鼠约2,3mm,大鼠约4,5mm。当感到有阻力时即停止推进,同时,将针退出约0.1-0.5mm,边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中,当得到所需的血量后,即除去加于颈部的压力,同时,将采血器拔出,以防止术后穿刺孔出血。 若技术熟练,用本法短期内可重复采血均无多大困难。左右两眼轮换更好。体重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml;体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml,可适用于某些生物化学项目的检验。
(4).断头取血 采血者的左手拇指和食指以背部较紧地握住大(小)鼠的颈部皮肤,并作动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈,约1/2-4/5的颈部前剪断,让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0.8,1.2ml;大鼠约5-10ml。
(5).心脏采血 鼠类的心脏较小,且心率较快,心脏采血比较困难,故少用。活体采血方法与豚鼠相同。若做开胸一次死亡采血,先将动物作深麻醉,打开胸腔,暴露心脏,用针头
刺入右心室,吸取血液。小鼠约0.5-0.6ml;大鼠约0.8-1.2ml。
(6).颈动静脉采血 先将动物仰位固定,切开颈部皮肤,分离皮下结缔组织,使颈静脉充分暴露,可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉,离心端结扎,向心端剪口将血滴入试管内。
(7).腹主动脉采血 最好先将动物麻醉,仰卧固定在手术架上,从腹正中线皮肤切开腹腔,使腹主动脉清楚暴露。用注射器吸出血液,防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织,夹住动脉近心端,用尖头手术剪刀,剪断动脉,使血液喷入盛器。
(8).股动(静)脉采血 先由助手握住动物,采血者左手拉直动物下肢,使静脉充盈。或者以搏动为指标,右手用注射器刺入血管。体重15-20g 小鼠采血约0.2-0.8ml,大鼠约0.4-0.6ml。 小鼠采血的几个问题:
1。最大安全采血量:小鼠循环血量占体重的6%,或50-70mi/kg 采血占全血量的10%不会对机体造成严重的不良影响。3-4周后可以重新采集一次。 特别注意的是:老年小鼠血量降低。疾病会加重不良反应,所以必须考虑这些影响因素。 采血后应补充响应体积的液体
如果需要很短时间反复采血,比如每天一次,每次的采血量不应超过全血的1%。 30g*6%=血量1.8mls
1.8mls*10%=0.18mls(最大安全采血量)
2。隐静脉采血法
隐静脉采血法是小量、反复小鼠采血的常用方法。特点是不用麻醉
3。颈静脉采血法
隐静脉采血法也是小量、反复小鼠采血的常用方法。特点是需要麻醉
4。心脏穿刺采血法。
麻醉动物
将动物仰放
局部酒精消毒
用塑料注射器,从动物的左侧胸部,肋沿下,心尖部向右侧15-30度角刺入心脏,给小负压,小心操作
转载请注明出处范文大全网 » !#$基因敲除小鼠认知功能障
0.05)(p>