范文一:过氧化氢中氧元素的化合价为-1价
????? 过氧化氢中氧元素的化合价为-1价,如下三个反应中( ) (1)过氧化氢+硫化氢------2硫化氢+硫 ,
(2)过氧化氢------2水+氧气 ,
(3)过氧化氢+氯气-----2氯化氢+氧气所起的作用 ,
A. 起相同的作用 B。 起不同的作用 C. 只起氧化作用 D。只起还原作用
分析:第一个反应中,应该生成水和硫,过氧化氢是氧化剂,O从
-1价变成-2价
(2)中,过氧化氢即是氧化剂又是还原剂,O从-1价变成-2价
和0价
(3)中,O从-1价都变成了0价 豆丁致力于构建全球领先的文档发布与销售平台,面向世界范围提供便捷、安全、专业、有效的文档营销服务。包括中国、日本、韩国、北美、欧洲等在
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范文二:过氧化氢酶(CAT)活性的测定
过氧化氢酶(CAT)活性的测定:紫外吸收法
一、 目的与要求
过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中,其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系,故常加以测定。
二、原理
过氧化氢酶(catalase)属于血红蛋白酶,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水和分子氧,在此过程中起传递电子的作用,过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。过氧化氢在240nm波长下有强烈吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液的吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 三、材料、仪器设备及试剂
(一) 材料:小麦或其它叶片
(二)仪器设备:1. 研钵;2.紫外分光光度计;3. 离心机;4. 恒温水浴;
5. 容量瓶。
(三)试剂:
1. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液(pH7.8: 0.2mol/L Na2HP04 91.5 ml; 0.2mol/L NaH2P04 8.5 ml);
2.0.1 mol/LH2O2 (30%的H2O2溶液5.68ml稀释至1000ml)
二、 实验步骤:
1、酶液提取 称取新鲜植物叶片或其它组织0.5g,置于研钵中,加入2~3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨匀浆后,转入25ml 容量瓶中,并用缓冲液冲研钵数次,合并冲洗液,并定容到刻度。混合均匀,将容量瓶置5℃冰箱中静置10min,取上清液在4000r/min下离心15min,上清液即为过氧化氢粗提液,5℃下保存备用。
2、测定 10ml试管3支,其中2支为样品测定管,1支为空白管,按表1-1顺序加入试剂。
25℃预热后,逐管加入0.6ml0.1mol/l的H2O2,每加完1管立即记时,并迅速倒入石英比色杯中,260nm下测定吸光度,每隔1min读数1次,共测4min,待3支管全部测完后,按式(1-1)计算酶活性。
3、结果计算 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位(μ)。
过氧化氢酶活性(μ.g-1min-1)=ΔA240*Vt/(0.1*Vl*t*FW)
式中 ΔA240 : As0-(As1+As2)/2;
As0 :加入失活酶液的对照管吸光值; As1,As2 : 样品管吸光值;
Vt :粗酶提取液总体积(ml); Vl :测定用粗酶提取液体积(ml); FW : 样品鲜重(g);
0.1 : A240每下降0.1为1个酶活单位(μ); t : 过氧化氢到最后一次读数时间(min)
1-1) (
范文三:过氧化氢的生产技术_钱志均
2007年第1期 川 化13
过氧化氢的生产技术
气体厂
钱志均
摘 要 概述了我国过氧化氢生产的发展情况, 重点介绍了蒽醌法生产过氧化氢生产原料的选择, 氢化、氧化、工作液后处理技术的发展。
关键词 过氧化氢 氢化 氧化 后处理
0 前 言
纯净的过氧化氢又叫双氧水(H , 早在2O 2) 1818年, L . J . T h e n a r d 在研究碱金属的过程中就发现了这种化合物, 但直到19世纪中叶, 过氧化氢才开始形成为商品。到20世纪80年代, 过氧化氢已经成为一种重要的无机化工原料和精细化工产品, 被广泛应用于化学品合成、纸浆和纺织品的漂白、金属矿物处理、环保、电子和军工及航天等各个领域。
随着全球经济的快速发展, 过氧化氢的生产正向着大规模、高技术、自动化控制的方向发展, 特别是进入20世纪90年代以来, 随着过氧化氢在造纸、环保以及电子行业等应用领域的不断拓宽, 其市场需求量也在不断增长。据《欧洲化学新闻》报道, 目前全世界的过氧化氢生产能力约为2900k t /a, 产量接近2400k t /a(以100%过氧化氢计) 。
过氧化氢的生产工艺最早始于湿选工艺法, 后来发展到电化工艺法和有机物氧化法。目前, 许多大公司和生产厂家积极开发了其他全新的生产工艺, 有的已接近大规模工业化。这些方法主要有空气阴极法、氢氧直接合成法、甲基苄基醇氧化法、异丙醇氧化法和燃料电池法。
我国工业过氧化氢生产多采用有机物氧化法, 其主要为催化剂搅拌釜氢化工艺的蒽醌法和钯催化剂固定床氢化工艺的蒽醌法。由于其工艺原理的特殊性, 这两种方法生产的过氧化氢不能用于食品行业。
据不完全统计, 目前国内用蒽醌法生产过氧化氢的企业有70余家, 其中采用钯催化剂固定床的65%左右, 采用镍催化剂搅拌釜氢化工艺的生产能力占总生产能力的35%左右。因此, 我国工业过氧化氢生产发展的研究对象主要是蒽醌法生产过氧化氢。1 生产原料
蒽醌法生产过氧化氢的工艺流程是:配制岗位用重芳烃、磷酸三辛酯和2-乙基蒽醌配成工作液(其中重芳烃∶磷酸三辛酯=3∶1, 蒽醌浓度大于100g /L) 后, 通过泵送入系统, 与氢气进行混合, 再一起进入氢化工序, 并进行加氢反应, 反应后的氢化液与空压站送来的空气一起在氧化塔内进行氧化反应, 反应出来的氧化液被送至萃取塔用纯水萃取分离, 过氧化氢从萃取塔底部出来后, 经过净化后送至成品室进行包装, 工作液从萃取塔顶部出来, 经过脱水和再生后, 回到氢化工序循环使用。
目前, 我国蒽醌法生产过氧化氢的主要原料是含有工作载体的工作液、氢气、含氧气体和催化剂等。1. 1 工作液
工作液主要是由工作载体和溶解工作载体的溶剂组成。
工作载体主要是蒽醌类物质, 要求工作载体在循环氢化、氧化的过程中具有良好的化学稳定性, 同时所选的蒽醌及其氢化物在溶剂中具有较大的溶解度。目前应用最多的是2-乙基蒽醌(E A Q ) , 也可以采用其他2-烷基蒽醌, 如2-戊基蒽醌、2-特丁基蒽醌、2-三丁蒽醌等。在目前的生产过程中, 更多的是采用两种或两种以上的蒽醌,
14川 化 2007年第1期
能满足过氧化氢的生产要求, 目前国内大多数生产厂家采用空气氧化技术, 个别生产厂家采用富氧氧化技术。
1. 3 氢化催化剂
催化剂在氢化过程中起着非常重要的作用, 用于蒽醌氢化的催化剂一般有镍系和钯系两种。镍系主要指雷尼镍, 雷尼镍是由铝镍合金粉经碱液处理和用芳烃脱水后制得的。镍一般用于催化剂搅拌釜氢化工艺的蒽醌法, 由于镍具有遇空气自燃、易中毒等缺点, 现已很少使用; 钯对氢气有吸附作用, 钯催化剂是当前蒽醌氢化反应使用最多的催化剂。钯催化剂一般分为钯系固定床催化剂和悬浮床催化剂, 应用中多将钯均匀地沉积在一定载体上, 使金属钯的表面最大限度地与工作液和氢气接触并发生反应。钯催化剂有条形催化剂和球形催化剂两种类型, 载体主要为氧化铝、二氧化硅和二氧化钛等, 也可以为碳酸钙、碳酸锶、碳酸钡等碳酸盐类。据相关研究报道, 在相同条件下, 球形钯催化剂比条形钯催化剂的反应活性高20%~30%。
此外, 向催化剂中加入适量的助剂, 改变各组分之间的相互作用, 可以明显提高催化剂的活性、选择性、强度和耐磨性。近年来, 这方面的研究取得了较大的发展。目前, 研究人员已经发现铁系元素和锌助剂有利于钯在载体上的分散, 使氢化效率提高5%~16%,同时还增强了钯催化剂抗失活的能力。进一步的研究还发现, 在钯催化剂中加入适量的稀土金属氧化物能抑制高温处理时A l 2O 3晶粒的增长, 并能增大催化剂的比表面积, 提高金属钯的分散度, 从而提高催化剂的氢化活性。
2 生产工艺及原理2. 1 氢 化
2. 1. 1 氢化反应原理
蒽醌分子中含有环状二元酮结构, 由于蒽醌中的羰基与芳环共轭, 从而降低了羰基的活性, 因此在氢化时需要催化剂。同时, 由于羰基和β位烷基的存在, 对与其相邻的苯环起到了钝化作用, 从而抑制了副反应的发生。
蒽醌在钯催化剂的作用下与氢发生反应, 生, 四氢衍生物的混合物。G l e n n e b e r g 等人提出利用至少两种具有不同取代基团的2-烷基蒽醌或它们的四氢衍生物作为载体, 其中一种组分可以是2-(4-甲基-3-戊稀基) 蒽醌或2-(4-甲基戊基) 蒽醌和它们的衍生物, 另一组分可以是2-(C C 1-6) 烷基蒽醌。
对于溶剂的选择, 一般要求其具有对工作载体溶解能力强, 化学稳定性好, 在水和过氧化氢中的溶解度小, 与水分层明显, 粘度小, 毒性低等优点。在通常情况下, 溶剂一般都是由两种有机物质混合配制而成, 一种主要作为蒽醌的溶剂, 另一种主要作为氢蒽醌的溶剂。在实际应用中, 蒽醌的溶剂多采用高沸点的重芳烃, 国内使用的重芳烃主要有C 9和C 10两种, 以C 9芳烃为主。近年来, 由于C 9芳烃经深加工处理后, 具有更高的附加值, 因此C 10芳烃在双氧水生产领域的应用有呈逐年增长的趋势。氢蒽醌的溶剂则多采用高级脂肪醇类、有机酸或无机酸的酯类, 例如磷酸三辛酯(T O P ) 、醋酸甲基环己酯(M C A ) 、四丁基脲(T B U ) 、二异丁基甲醇(D I B C ) 、醋酸邻甲基环己基酯(2-M C H A ) 等。根据相关研究人员的报道, 在相同的条件下, 氢蒽醌在T B U 的溶解度大于其在T O P 的溶解度, 生成的过氧化氢在两相中的分配系数较大, 并且T B U 与水的密度相差较大, 表面张力大, 因而有利于减少工作液的循环量, 提高氢化效率和萃取装置的生产能力。因此, 应合理地选择蒽醌和氢蒽醌的溶剂。1. 2 氢气和氧气
氢气是生产过氧化氢的主要原料, 约占生产成本的1/4, 由于氢气的特殊性质, 因而不宜采用长距离输送或包装运输, 目前国内许多中、小型过氧化氢生产装置迟迟没有扩建, 就是因为在很大程度上受到了氢气来源的制约。氢气的来源很多, 主要有电解水制氢、合成氨弛放气或原料气制氢、氯碱或氯酸盐工业副产氢、天然气水蒸气转化制氢和甲醇裂解制氢等。通过对各种氢源进行综合性经济评价, 最好的途径是利用化肥企业或氯碱企业副产氢经提纯后进行生产, 这样可以大大节省投资和降低过氧化氢的生产成本。
纯氧在氧化尾气中含量较高, 但存在不安全隐患, 需要用惰性气体对氧化尾气进行稀释, 因此,
同时蒽醌分子中离烷基较远的芳环也容易被氢化, 生成四氢蒽醌, 再氢化成四氢蒽醌氢醌, 或者生成的四氢蒽醌与氢蒽醌发生氢原子迁移, 相关的化学反应方程式如下
:
与蒽醌相比, 四氢蒽醌更加难以被氧化, 而它的氢化产物四氢蒽醌氢醌比氢蒽醌易氧化。同时, 四氢蒽醌的存在增加了蒽醌在工作液中的总的含量, 有利于氢化效率的提高。在生产中一般把四氢蒽醌的含量控制在50%左右, 最高不超过80%。
在以上反应发生的同时, 还会发生一些对生产不利的副反应。例如, 蒽醌中只有1个羰基被氢化, 则生成蒽酚酮, 但它在氧化时不能生成过氧化氢。在活性氧化铝和碱性环境中, 蒽酚酮可以再生成蒽醌, 但它与氢气进一步反应可以生成蒽酮和双蒽酮, 而这两种副产物在一般情况下都不能再生。如果四氢蒽醌进行深度氢化, 则会生成含有2个脂环的八氢蒽醌, 即羰基两侧的芳环被氢化, 八氢蒽醌中的2个脂环易被过氧化氢氧化而生成均苯酸酐, 该副产物由于苯环断裂而无法再生。副反应的发生使工作液中有效蒽醌的量减少, 因此, 在生产过程中要定期向系统内加入蒽醌。2. 1. 2 氢化反应的控制
对氢化反应控制的主要目的是在提高生产负荷的同时, 尽可能抑制副反应的发生, 从而保证有效蒽醌在工作液中的含量。要减少蒽醌的损失, 最关键的是要选择性能良好的催化剂, 并对氢化温度、压力以及氢化程度进行适当的控制。
氢化反应为放热反应, 若不对反应温度进行适当的控制, 则随着反应温度的升高, 氢化正副反应速率升高, 同时还激活了蒽醌的苯环, 因而氢化副反应也会增加, 从而降低有效蒽醌在工作液中的含量, 特别是刚开始使用的催化剂, 由于活性比较高, 选择性相对较低, 如果氢化温度控制不当, 就会生成较多副产物, 从而影响生产, 增加蒽醌的消耗。
压力对氢化反应也有一定的影响, 因为首先要保持一定的压力, 以使氢气溶解在工作液中, 从而在催化剂表面发生反应。由于钯催化剂对氢有吸附作用, 为了避免钯催化剂由于吸氢过多而造成过度氢化, 因而在操作过程中应保持催化剂表面的湿润度。但是, 与温度相比, 压力对过氧化氢生产的影响不是很明显。
氢化程度在生产控制中是一个很重要的指标, 它是用氢化生成的氢蒽醌在总蒽醌中所占的百分比来表示的。氢化程度因催化剂而异, 并且随其使用时间长短而不同, 特别是新投用的催化剂, 由于其活性较高, 因而应控制较低的氢化程度。2. 2 氧 化
2. 2. 1 氧化原理
在实际生产中, 氢化液一般采用空气进行氧化。目前, 过氧化氢产量较小的生产厂家大多采
工作液的降解主要在氧化和氢化过程中发生, 可分为溶剂降解和蒽醌降解, 其中主要是蒽醌
降解。在降解过程中生成的产物很多, 目前国内还不能将所有的降解产物检验出来。降解所带来的危害很大, 例如, 降解产物溶解在过氧化氢中, 使产品的质量下降; 降解产物使工作液的密度、粘度增大, 降低表面张力, 从而使萃取过程产生乳化; 降解产物还会使催化剂的活性降低, 缩短其使用寿命。
降解产物的再生一般是通过活性氧化铝来进行。通过氢化液白土床可以再生氧化反应中生成的四氢蒽醌的环氧化物, 通过后处理白土床可再生氢化反应中生成的蒽酮等降解物。此外, A k s e -l a 等人发现, 通过电磁波辐照和催化剂的作用可有效再生工作液中的降解物, 对于电磁波辐照, 应
用的是填料塔, 过氧化氢产量较大的生产厂家大多采用的是空塔。氢化反应生成的氢蒽醌和四氢
蒽醌氢醌与氧气接触均生成H 2O 2, 其化学反应方程式如下
:
如果工作液呈微碱性或四氢蒽醌含量过高, 就会生成更多的环氧化物。在生成环氧化物的过程中, 不能得到过氧化氢, 但是在碱性和氧化铝存在的条件下, 环氧化物可以再生成四氢蒽醌。2. 2. 2 氧化反应的控制
氧化反应较氢化反应容易控制, 氧化反应的控制主要是对氧化温度和工作液p H 进行控制, 反应温度一般在45~55℃,p H<7。如果氧化温度过低, 就会造成氧化不完全;="" 氧化温度过高,="" 则会加快副反应的发生,="" 影响氧化效率,="" 甚至降低有效蒽醌的含量。在氧化过程中,="" 工作液呈碱性会加快环氧化物的生成,="" 同时还造成过氧化氢分解,="">7。如果氧化温度过低,>
H a a s 等人发现将氢化液与氧化液混合后进行氧化可减少环氧化物的生成。他们还认为, 当氢化液中有仲胺存在时, 可以提高含有四氢蒽醌类衍生物工作液的氧化速率。2. 3 工作液的后处理2. 3. 1 工作液的干燥
工作液从萃取单元出来后, 经萃余液分离器除去游离水, 然后再经过干燥使水分的含量达到指标要求。现在国内的生产厂家大多选用碳酸钾进行脱水, 碳酸钾能与水结合生成水合物, 从而达到干燥的目的, 同时使萃取出来的工作液由酸性变为碱性。2. 3. 2 工作液的降解与再生
该优先选用微波辐照, 所采用催化剂的有α-A l -A l g O 、Mg S i O 2O 3、γ2O 3、沸石、M3等。该方法
除了可以再生环氧化物等降解物外, 还可使部分四氢蒽醌转变为蒽醌。3 结束语
我国应积极加强对蒽醌法制过氧化氢的研究。选用新型的溶剂和工作载体, 以提高反应载体在溶剂中的溶解度, 同时工作液在反复氢化、氧化过程中尽可能降低降解物的生成量, 研究新一代高效氢化催化剂和提高氧化速率的工艺和方法, 尽可能全面地分析出工作液在反复氢化和氧化过程中所产生的降解物, 从而对氢化反应和氧化反应进行更有效地控制。此外, 我国过氧化氢的生产还需要多样化发展, 并加大对其他生产工艺和方法的研究。
[参考文献]
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(1) :11-144
[4]赵克, 李书显. 双氧水的生产方法与应用[J ].氯碱工业,
2000, 11:22-23
(收稿日期2006-08-14)
范文四:过氧化氢对人体的危害
过氧化氢对人体的危害
1、过氧化氢可致人体遗传物质DNA损伤及基因突变,与各种病变
的发生关系密切,长期食用危险性巨大;
2、过氧化氢可能导致对人类具有致癌的危险性;
3、过氧化氢可能加速人体的衰老进程。过氧化氢与老年痴呆,尤其
是早老性痴呆的发生或发展关系密切;
4、过氧化氢与老年帕金森氏病、脑中风、动脉硬化及糖尿病性肾病
和糖尿病性神经性病变的发展密切相关;
5、作为强氧化剂通过耗损体内抗氧化物质,使机体抗氧化能力低下,
抵抗力下降,进一步造成各种疾病;
6、过氧化氢可能导致或加重白内障等眼部疾病;
7、通过呼吸道进入可导致肺损伤;
8、多次接触可致人体毛发,包括头发变白,皮肤变黄等; 9、食入可刺激胃肠粘摸导致胃肠道损伤及胃肠道疾病; 10、小分子过氧化氢经口摄入后很容易进入体内组织和细胞,可进入
自由基反应链,造成与自由基相关的许多疾病。
范文五:过氧化氢的测定方法
三、过氧化氢酶的活性----紫外吸收法
[原理] H202在240nm波长下有强吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 [仪器与用具] 紫外分光光度计;离心机;研钵;容量瓶250ml1个;刻度吸管0.5ml2支;2ml1支;10ml试管3支;恒温水浴锅。
[试剂] 0.2mol?L-1pH7(8磷酸缓冲液(内含1,聚乙烯吡咯烷酮);0(1mol?L-1H202(用0(1mol?L-1高锰酸钾标定)。
[方法]
1(酶液提取 称取新鲜小麦叶片或其他植物组织0(5g,置研钵中,加入2-3ml 4?下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后,转入25ml容量瓶中,并用缓冲液冲洗研钵数次,合并冲洗液,并定容到刻度。混合均匀,将量瓶置5?冰箱中静置10min,取上部澄清液在4000r.min-1下离心15min,上清液即为过氧化氢酶粗提液,5?下保存备用。 2(测定 取10ml试管3支,其中2支为样品测定管,1支为空白管,按表42-2顺序加入试剂。 25?预热后,逐管加入0.3ml0.1mol的H2O2,每加完1管立即记时,并迅速倒入石英比色杯,240nm下测定吸光度,每隔1min读数1次,共测4min,待3支管全部测定完后,按式42-3计算酶活性。
3(结果计算 以1min内A240减少0(1的酶量为1个酶活单位(u)。
过氧化氢酶的活性(u.g-1min-1)=
式中 Aso--加入煮死酶液的对照管吸光值;
As1,As2-样品管吸光值;
Vt--粗酶提取液总体积(ml);
V1--测定用粗酶液体积(ml);
FW--样品鲜重(g); 0(1-A20每下降0(1为1个酶活单位(u);
t-加过氧化氢到最后一次读数时间(min)。
注意:凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰。
【思考题】
1、影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?
2、过氧化氢酶与哪些生化过程有关?
参考文献 【1】Mukherjee S P,Choudhuri M A.Determination of glycoalte oxidase activety
H2O2 content and catalase activity.Physiol Plant.1983(58):167-170
【2】蒋明义,郭绍刚,渗透胁迫下稻苗铁催化的膜脂过氧化作用.植物生理学报.1996.22(1):6-12
【3】林植芳,李双顺等.衰老叶片和叶绿体中H2O2的积累与膜脂过氧化的关系,植物生理学报.1998,14(1):16-22
【4】邹琦.植物生理生化实验指导.北京:中国农业出版社,1995 【5】【美】吉尔鲍特GG.缪辉南,陈石根等译.酶法分析手册.上海:上海科学技术出版社,1982
实验材料:小白菜
注意事项:
1、 三角瓶、容量瓶等务必要清洗干净。
2、 研磨时CaCO3不要加得太多,大半匙即可,且要洒均匀。
3、 过滤时不必全部过滤完,有20ml滤液即可。
4、 把握好实验进度,不拖延时间,以免酶液失活。
5、 滴定时速度不要过快,以免过量(最快不要超过1秒/滴)。最佳终点为最后半滴加入后蓝色消失。
6、 每次滴定起点一致,都从零开始。
7、 左手操纵活塞,右手摇三角瓶,溶液要摇成漩涡状。
8、为了保证实验的平行性,四个三角瓶里所加的试剂应该来自同组药品,中途不要试剂瓶(使用别组药品)。
结果分析:
但本实验的不确定因素很多,比如气温高低、样品差异、试剂新旧,因此较难达到老师的水平。
结果偏低的主要原因:1、实验时间过长,酶液失活;2、器皿未洗干净,残存酸或碱,酶活性下降;3、样品滴定过量。
结果偏高的主要原因:1、空白样滴定过量。
小知识:
1、 加入过氧化氢之前为什么要保温平衡,
答:为了使三角瓶中的溶液温度达到过氧化氢酶的最适酶促反应温度。过氧化氢酶的酶促反应最适温度为20,25?,受实验室条件限制,如果室温在这个范围内则不进行水浴,在空气中保温。
2、 为什么有个别组在加入KI溶液后有黑色沉淀出现,
答:因为KI溶液放置时间过长易被空气中的氧气所氧化,出现单质I2,这样再加上被过氧化氢所氧化而得的I2,就可能在三角瓶中出现单质I2过饱和,从而析出变成沉淀。遇到这种情况应该更换KI溶液重做。
3、为什么不能用NaOH代替H2SO4终止酶活性,
答:H2SO4除了利用强酸性终止酶活外还参与氧化还原反应,参与KI生成I2的氧化还原反应; NaOH虽然有强碱性可以终止酶活,但不能参这个反应,这样无法测出过氧化氢的量。 【转帖】过氧化氢酶活性的测定方法
过氧化氢酶
--------------------------------------------------------------------------------
:pH值范围4-9,而以7.0,37?最适。冷冻、冻干、阳光、氧气降酶活。用Beers&Sizers法(改进型)测定。见[德]B 施特尔马赫著,钱嘉渊译 酶的测定方法 p186-188。 1.试剂:
(1)1N氢氧化钠溶液:称2g,用蒸馏水定容至50ml。
(2)磷酸盐缓冲液(pH7.0):取0.68g磷酸二氢钾,溶于75ml蒸馏水,用1N氢氧化钠溶液将pH调至7.0,定容至100ml。
(3)底物溶液:现配。用磷酸盐缓冲液把0.6ml过氧化氢(30,的H2O2)稀释至100ml。 (4)酶液浓度应为5-20u/ml。
2.操作:
用移液管将1.0ml底物溶液和1.9ml蒸馏水滴入一只1厘米比色皿,并调水温至25?。为检查在不加酶的情况下吸光度是否也降低,在240nm处以蒸馏水为参比测定吸光度,若吸光度的降低幅度超过0.01,则在计算主值时须减去此值。取另一比色皿,加入上述溶液,并加0.10酶溶液,在240nm处以蒸馏水为参比在连续5分钟内测定吸光度(每隔1分钟读取一次结果,直至每分钟吸光度的降低值达到稳定为止)。
3.计算:在上述条件下,每分钟酶促分解1umol过氧化氢的酶量定为1个酶活力单位。 U/mg = E240×3 / 0.0436×Ew
式中:E240—240nm处每分钟内吸光度的降低值
Ew—每0.10ml所用酶液中含酶的重量(mg)
0.0436—240nm处1umol过氧化氢的吸光度
3—反应混合液的总体积。
5] 波钦诺克 X H 著.植物生物化学分析方法.荆家海,丁钏荣译.北京:科学出版社,1981.205,207
参考文献
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【4】邹琦.植物生理生化实验指导.北京:中国农业出版社,1995
【5】【美】吉尔鲍特GG.缪辉南,陈石根等译.酶法分析手册.上海:上海科学技术出版社,1982
三、过氧化氢酶的活性----紫外吸收法
[原理]
H2O2在240nm波长下有强吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 [仪器与用具]
紫外分光光度计;离心机;研钵;容量瓶250ml1个;刻度吸管0.5ml2支;2ml1支;10ml试管3支;恒温水浴锅。
[试剂]
0.2mol?L-1pH7(8磷酸缓冲液(内含1,聚乙烯吡咯烷酮);
0(1mol?L-1H2O2(用0(1mol?L-1高锰酸钾标定)。
[方法]
1(酶液提取 称取新鲜小麦叶片或其他植物组织0(5g,置研钵中,加入2—3ml 4?下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后,转入25ml容量瓶中,并用缓冲液冲洗研钵数次,合并冲洗液,并定容到刻度。混合均匀,将量瓶置5?冰箱中静置10min,取上部澄清液在4000r.min-1下离心15min,上清液即为过氧化氢酶粗提液,5?下保存备用。
2(测定 取10ml试管3支,其中2支为样品测定管,1支为空白管,按表42—2顺序
加入试剂。
表 42-2 紫外吸收传测H2O2样品测定液配制表
管 号 S1 S2 S3
粗酶液(mI)
PH7.8磷酸(ml)
蒸馏水(ml)
0.2 0.2 0.2
1.5 1.5 1.5
1.0 1.0 1.0
25?预热后,逐管加入0.3ml0.1mol的H2O2,每加完1管立即记时,并迅速倒入石英比
色杯,240nm下测定吸光度,每隔1min读数1次,共测4min,待3支管全部测定完后,按式
42-3计算酶活性。
3(结果计算 以1min内A240减少0(1的酶量为1个酶活单位(u)。
过氧化氢酶的活性(u.g-1min-1)= (42-3)
式中
Aso——加入煮死酶液的对照管吸光值;
As1,As2—样品管吸光值;
Vt——粗酶提取液总体积(ml)
V1——测定用粗酶液体积(ml)
FW——样品鲜重(g)
0(1—A20每下降0(1为1个酶活单位(u)
t—加过氧化氢到最后一次读数时间(min)。
[注意]
凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰。
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