范文一:纸层析法观察转氨基作用
纸纸析法纸察纸基作用氨
原理
氨氨基酸分子上的基纸移到α-纸酸分子上的反纸纸程纸纸基作用;或基移纸作用,。称氨称氨
纸基作用是酸代纸的重要反纸之一~由纸纸催化。纸纸后~原的氨氨氨氨来α-—氨基酸纸成了相纸的α-—纸酸~原的来α-—纸酸纸成纸新的、相纸的α-—氨基酸。
本纸纸纸察谷酸丙纸酸在肌纸中的谷酸氨与匀氨—丙纸酸纸纸;纸氨称GPT,的催化纸行纸基的纸氨程。然后用纸纸析法纸纸反纸系中丙酸的生成。纸便于纸察纸基作用~在反纸中纸加一醋酸体氨氨碘
;或纸醋酸,~以抑制谷酸和丙纸酸的其代纸纸程。—氨它
纸纸
1,0.9% NaCl溶液。
2,PH7.4 0.01mol/L磷冲酸纸液,取0.2mol/LNaHPO溶液81ml与0.2mol/LNaHPO溶液242419ml混~稀纸至匀2000ml。
3,1%谷酸纸溶液,取谷酸氨氨1g ~加水20ml~用5%KOH纸到中性~然后用pH7.4 0.01mol/L磷冲酸纸液稀纸至100ml。
4,1%丙纸酸纸溶液,取丙纸酸1g加pH7.4 0.01mol/L磷冲酸纸溶液溶解成100ml。
5,0.25%一酸纸溶液,取一醋酸碘碘0.25g加水1ml~用5%KOH纸到中性~然后加pH7.4~0.01mol/L磷冲酸纸液成100ml。;一醋酸可用一纸醋酸代替,。碘
6,2%HAc
操作
1,肌纸的制纸;由纸纸室准纸室制纸,匀
取小白一只~猛纸纸部纸死后~立剪纸放血~取肌肉若干纸兔即0.9%NaCl溶液洗去血纸后~称取肌肉纸100g置纸纸纸器中~再加匀0.01mol/LpH7.4磷冲酸纸液500ml磨成纸。匀2.纸基反纸,取小纸管氨2支纸~所加纸纸以滴纸纸位。号
12纸 号
纸 纸
1010肌纸匀
将2号管置沸水浴中5分纸~然后取出冷却
1%谷酸纸氨1010
1%丙纸酸纸1010
0.25%—碘醋酸纸55
混后同置匀40?水浴中保温45分纸;或60分纸,。在保纸程中~纸加振纸。取出管各温两
加入2%醋酸2滴~再同置沸水浴中5分纸~使蛋白纸完全凝固~冷却后~心;离200r/min,5分纸~;或置静10分纸,~上液作基酸的纸纸析。将清氨
附 基酸的纸纸析氨
原理
纸析法又色纸分法~原指有色物纸在吸附纸上因吸附能力不同而得到分的方法。后称离离
来离离此方法也纸用于无色物纸的分。纸析法除了吸附纸析以外~纸有子交纸纸析、分配纸析和纸和纸析等。纸纸析是分配纸析中的一纸。
分配纸析是利用不同的物纸在互不相溶的溶纸中的分配系不同而得到分的。通常两个数离
用a表示分配系。数
溶纸在固定相中的纸度;Cs,
a= —————————————
溶纸在流纸相中的纸度;CL,
一纸物纸在某溶纸系纸中的分配系~在一定的度下是一常。数温个数
纸纸析是以纸作纸惰性支持物的分配纸析~纸纸纸上的纸基具有纸水性~因此以纸纸吸附的水作纸固定相~而通常把有机溶纸作纸流纸相。有机溶纸沿着纸纸自下而上流纸的~纸“上行法”~自上称
而下流纸的~纸“下行法”。称
将称氨即两纸品点在纸纸上;此点纸原点,~纸行展纸~纸品中的纸纸溶纸;如各纸基酸,在相溶纸中不纸行分配。由于纸的分配系不同~不同的溶纸流纸相移纸的速率不等~于是就纸断它数随将
些溶纸分出~形成距原点不等的纸析点。离来
溶纸在纸纸上的移纸速率用Rf纸表示~
原点到纸析点中心的距离
Rf=———————————————————
原点到溶纸前沿的距离
只要件;如度、展纸溶纸的纸成、纸纸的纸量等,不纸~条温Rf纸是常。故可根据数Rf纸作定性分析。
纸析后~各纸溶纸在纸纸上的位置可用适的化或物理方法纸理而使其纸示出。纸于基当学来氨
酸常用纸三纸使之纸色。
纸 纸
1,纸和水的,取酚 50 g重蒸纸;隔水加纸溶化~量取酚50ml。,与25ml水~在分液漏斗中充分混~于暗纸放置纸夜;匀7—10小纸,~分成纸~收集下纸液放入棕色中保存。注意两清瓶,在重蒸纸和移取纸~纸必防止纸在皮纸上~若纸在皮纸上~立用酚即70%酒精擦洗~以免腐纸皮纸。
2,0.1—0.25% 纸三纸丙纸;或乙醇,溶液。
3,0.1 谷酸溶液,纸纸基作用纸纸中的纸纸氨将氨3~用pH7.4 0.01mol/L磷冲酸纸液稀纸10倍。
4,0.1丙酸溶液,取丙酸用氨氨pH7.4 0.01mol/L磷冲酸纸液配制。
操作
1,向纸析缸中入纸和水的;其深度纸装酚1.5cm,。
2,取纸 4.5cm~纸18cm纸纸一~;手指不可接纸面,在纸纸一端条触条 2cm纸一水平纸;原纸,划~在此纸上以纸隔相等的距用纸四直纸离笔画个径2—4mm的小纸圈~纸明纸。号
3,用毛纸管向各小圈中央点上各纸不同的基酸溶液~纸纸之。例如,第一点纸谷酸氨并氨~第二点纸丙酸~第三点及第四点纸纸基作用纸纸中的氨氨1号及2号径纸管溶液。点纸直以3mm纸宜。
4,待干燥后可重纸点纸一、二次~再干燥。然后此纸入上述准纸好的纸析缸中。先纸纸将条插将条
纸于璃缸的棒上;或用棉纸代替,~纸纸其高度~使纸的下端浸入纸挂玻内横玻条酚内 1 cm ( 勿使基酸小点溶纸直接接氨与触)~然后把盖盖纸。;如纸20所示,。
纸20上行法纸纸析
5,纸1—1.5小纸~溶纸上升至纸当10—15 cm高纸~取出纸纸~置烘箱烘干或用纸吹纸吹干~使酚蒸纸。
6,已烘干的纸纸浸入纸三纸酒精溶液~再置干燥箱中烘干;或用纸吹纸吹干,~纸纸在纸的将
不同位置上~可纸紫纸色的斑点出纸~用纸描纸溶纸前沿和斑点的中心位置。笔
纸果
纸算出各基酸的氨Rf纸。
附注
1,纸纸析法不纸可以用于基酸的分和定性~纸可以用于定量纸定;把紫色斑点剪下~用氨离来
硫酸纸乙醇溶液洗下比色,~更可以纸用于糖、纸生素、抗菌素、有机酸等小分子物纸的脱来
分和分析。离
2,各纸基酸在同一纸纸件下;相同的溶纸、度、纸纸纸量,各有其特有的、不纸的氨条即温Rf纸~纸是我纸纸定基酸的重要根据。氨并氨且同一基酸的Rf纸也可溶纸~纸纸纸量或操作随况温情;如度等,的不同而改纸。例如在溶纸中Rf纸相近的二纸基酸在乙溶纸中可能氨Rf植相差纸多。因此纸了纸底分某一混离氨双合基酸溶液;例如蛋白水解液,~常可用更纸溶纸或向纸析的方法。
范文二:纸层析法观察转氨基作用
纸层析法观察转氨基作用
原理
氨基酸分子上的氨基转移到 α-酮酸分子上的反应过程称为转氨基作用(或称氨基移换 作用) 。转氨基作用是氨酸代谢的重要反应之一,由转氨酶催化。经转氨后,原来的 α-— 氨 基酸变成了相应的 α-— 酮酸,原来的 α-—酮酸则成为新的、相应的 α-— 氨基酸。
本实验观察谷氨酸与丙酮酸在肌匀浆中的谷氨酸 — 丙酮酸转氨酶(简称 GPT )的催化 进行转氨基的过程。 然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。 为便于观察转氨基作用, 在反应中须加一碘醋酸(或—溴醋酸) ,以抑制谷氨酸和丙酮酸的其它代谢过程。
试剂
1. 0.9% NaCl溶液。
2. PH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲液:取 0.2mol/LNa2HPO 4溶液 81ml 与 0.2mol/LNaH2PO 4溶液 19ml 混匀,稀释至 2000ml 。
3. 1%谷氨酸钾溶液:取谷氨酸 1g , 加水 20ml , 用 5%KOH调到中性, 然后用 pH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲液稀释至 100ml 。
4. 1%丙酮酸钠溶液:取丙酮酸 1g 加 pH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲溶液溶解成 100ml 。
5. 0.25%一碘酸钠溶液:取一碘醋酸 0.25g 加水 1ml , 用 5%KOH调到中性, 然后加 pH7.4, 0.01mol/L磷酸缓冲液成 100ml 。 (一碘醋酸可用一溴醋酸代替) 。
6. 2%HAc
操作
1.肌匀浆的制备(由实验室准备室制备)
取小白兔一只,猛击头部处死后,立即剪颈放血,取肌肉若干经 0.9%NaCl溶液洗去血 污后,称取肌肉约 100g 置电动匀浆器中,再加 0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液 500ml 磨成匀浆。
混匀后同置 40℃水浴中保温 45分钟(或 60分钟) 。在保温过程中,时加振摇。取出两管 各加入 2%醋酸 2滴,再同置沸水浴中 5分钟,使蛋白质完全凝固,冷却后,离心(200r/min)
5分钟, (或静置 10分钟) ,将上清液作氨基酸的纸层析。
附氨基酸的纸层析
原理
层析法又称色层分离法,原指有色物质在吸附剂上因吸附能力不同而得到分离的方法。 后来此方法也应用于无色物质的分离。 层析法除了吸附层析以外, 还有离子交换层析、 分配 层析和亲和层析等。纸层析是分配层析中的一种。
分配层析是利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得到分离的。 通 常用 a 表示分配系数。
溶质在固定相中的浓度(Cs )
a= —————————————
溶质在流动相中的浓度(CL )
一种物质在某溶剂系统中的分配系数,在一定的温度下是一个常数。
纸层析是以纸作为惰性支持物的分配层析, 纸纤维上的羟基具有亲水性, 因此以滤纸吸 附的水作为固定相, 而通常把有机溶剂作为流动相。 有机溶剂沿着滤纸自下而上流动的, 称 为“上行法”;自上而下流动的,称为“下行法”。
将样品点在滤纸上(此点称为原点) ,进行展开,样品中的种种溶质(如各种氨基酸) 即在两相溶剂中不断进行分配。 由于它们的分配系数不同, 不同的溶质随流动相移动的速率 不等,于是就将这些溶质分离出来,形成距原点不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率用 Rf 值表示;
原点到层析点中心的距离
Rf=———————————————————
原点到溶剂前沿的距离
只要条件(如温度、展开溶剂的组成、滤纸的质量等)不变, Rf 值是常数。故可根据 Rf 值作定性分析。
层析后, 各种溶质在滤纸上的位置可用适当的化学或物理方法处理而使其显示出来。 对 于氨基酸常用茚三酮使之显色。
试剂
1.饱和水的酚:取 50 g重蒸馏酚(隔水加热溶化,量取 50ml 。 )与 25ml 水,在分液漏斗中 充分混匀,于暗处放置过夜(7— 10小时) ,分成两层,收集下层清液放入棕色瓶中保存。注 意:在重蒸馏和移取酚时,务必防止溅在皮肤上,若溅在皮肤上,立即用 70%酒精擦洗,以 免腐蚀皮肤。
2. 0.1— 0.25% 茚三酮丙酮(或乙醇)溶液。
3. 0.1 谷氨酸溶液:将转氨基作用实验中的试剂 3,用 pH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲液稀 释 10倍。
4. 0.1丙氨酸溶液:取丙氨酸用 pH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲液配制。
操作
1.向层析缸中装入饱和水的酚(其深度约 1.5cm ) 。
2.取宽 4.5cm ,长 18cm 滤纸一条, (手指不可接触纸面)在滤纸条一端 2cm 处划一水平线 (原线) ,在此线上以间隔相等的距离用铅笔画四个直径约 2— 4mm 的小圆圈,标明号码。 3.用毛细管向各小圈中央点上各种不同的氨基酸溶液,并记录之。例如:第一点为谷 氨酸, 第二点为丙氨酸, 第三点及第四点为转氨基作用实验中的 1号及 2号试管溶液。 点样直 径以 3mm 为宜。
4.待干燥后可重复点样一、二次,再干燥。然后将此纸条插入上述准备好的层析缸中。先 将纸条悬挂于玻璃缸内的横玻棒上(或用棉线代替) ,调节其高度,使纸条的下端浸入酚内
约 1 cm ( 勿使氨基酸小点与溶剂直接接触 ) ,然后把盖盖紧。 (如图 20所示) 。
图 20上行法纸层析
5.经 1— 1.5小时,当溶剂上升至约 10— 15 cm高时,取出滤纸,置烘箱烘干或用电吹风 吹干,使酚蒸发。
6.将已烘干的滤纸浸入茚三酮酒精溶液, 再置干燥箱中烘干(或用电吹风吹干) , 这时 在纸的不同位置上,可见紫红色的斑点出现,用铅笔描绘溶剂前沿和斑点的中心位置。 结果
计算出各氨基酸的 Rf 值。
附注
1. 纸层析法不仅可以用于氨基酸的分离和定性, 还可以用于定量测定 (把紫色斑点剪下来, 用硫酸铜乙醇溶液洗脱下来比色) ,更可以应用于糖、维生素、抗菌素、有机酸等小分子物 质的分离和分析。
2.各种氨基酸在同一实验条件下(即相同的溶剂、温度、滤纸质量)各有其特有的、不变 的 Rf 值, 这是我们鉴定氨基酸的重要根据。 并且同一氨基酸的 Rf 值也可随溶剂, 滤纸质量 或操作情况(如温度等)的不同而改变。例如在溶剂中 Rf 值相近的二种氨基酸在乙溶剂中 可能 Rf 植相差较多。 因此为了彻底分离某一混合氨基酸溶液 (例如蛋白水解液) , 常可用更 换溶剂或双向层析的方法。
范文三:纸层析法观察转氨基作用
重庆医科大学基础医学院教案用纸(首页) 第 次数 授课时间 教案完成时间 学 科 生物化学实验 年 级 专业、层次 教 师 职 称 授课方式(大、班) 学时
科学出版社《生物化课程(章、基本教材或主要参纸层析法观察转氨基作用 学与分子生物学实节) 考书 验》(1) 教学目的与要求:
学习氨基酸纸层析的基本原理。
掌握氨基酸纸层析的操作技术。
教学重点、难点:
氨基酸纸层析的基本原理。
氨基酸纸层析的操作技术及注意事项。
大体进程及教学方法:
采用多媒体教学,主要介绍ALT催化的转氨基反应原理、氨基酸纸层析的基本原理、实验操作过程及注意事项。以讲授、示教、学生操作为主。
实施情况:
重庆医科大学基础医学院教案用纸(续页)
基本内容 辅助手段和时间分配
【实验目的】 采用多媒体辅助教
1(学习氨基酸纸层析的基本原理。 学。
2(掌握氨基酸纸层析的操作技术。 教师讲授和示教【实验原理】 30min,其余时间安排
学生操作和分析讨
1(转氨基反应原理 论。
2(纸层析的原理
【实验步骤】
1(肝匀浆制备
2(转氨基反应
3(层析
4(显色和结果分析
【注意事项】
1(层析液中含有腐蚀性酚,取用时注意安全,防止溅到皮
肤及眼睛。
2(操作中接触滤纸前要洗手擦净,并尽量避免手与滤纸中
间部位接触。
3(点样点不宜过大,直径小于0.5cm。
【思考题】
为什么对照管是1个色斑,而测定管是2个色斑,这些色
斑分别代表什么物质,又是如何证明的,
范文四:圆形纸层析法鉴定转氨基作用的实验改进
圆形纸层析法鉴定转氨基作用的实验改进
圆形纸层析法鉴定转氨基作用的实验改进
【关键词】 实验室技术和方法 氨基酸类 展层剂 迁移率 传统实验中常用的苯酚是一种有毒物质,有强烈的刺激气味,对皮肤有较强的腐蚀性,而且价格较贵。2007年6月通过不断的比较与反复试验,将实验中原有的苯酚和水改进为无水乙醇?水?尿素的配方,目的在于降低实验试剂对人体的危害,简化实验步骤,降低实验成本。 1 材料与方法 1.1 材料 新鲜猪肝组织1 g、1,谷氨酸溶液、1,丙酮酸溶液、0.25,碘乙酸溶液、0.1,丙氨酸、0.01 mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液、0.1,茚三酮乙醇溶液、原展层剂(苯酚、水)、新展层剂(无水乙醇、水、尿素)。 1.2 实验方法 1.2.1 肝匀浆制备 取新鲜猪肝1 g置于研钵中研碎,加预冷的0.01 mol,L(pH7.4)的磷酸盐缓冲液4 ml,磨成匀浆。 1.2.2 转氨基反应 取2支试管,分别标记为测定管和对照管,测定管内加入肝匀浆10滴,对照管内加入煮沸过的肝匀浆10滴,然后两支管内都依次加入0.25,碘乙酸5滴、1,谷氨酸10滴、1,丙酮酸钠10滴,在40 ?水浴箱中保温10 min,加入5,三氯醋酸2滴,最后在沸水中加热5 min冷却后,离心5 min,取上清液备用。 1.2.3 标记划线 取圆形滤纸(直径 cm)8张,用铅笔从圆心画长度各1 cm的端点作为点样处,在各点对应的滤纸边缘标上“谷”、“丙”、“对”、“测”字样。 1.2.4 点样 取4根毛细管,用顶端分别沾取测定管、对照管、0.1,谷氨酸、0.1,丙氨酸样品液,在滤纸相应点样处点样,每处点2次。 1.2.5 层析和显色 在8个直径为5 cm的表面皿中分别加入4种不同的展层剂,即苯酚?水(4?1)和无水乙醇?水?尿素(分别为:80?20?0.5、70?30?0.5、60?40?0.5三种
比例),每种展层剂平行做两份。将表面皿置于直径为10cm培养皿正中,把滤纸平放在培养皿上,使灯芯浸入展层溶剂中,取另一同样大小的培养皿反向盖上,溶剂将沿灯芯上升到滤纸,并向四周扩散,待溶剂前沿扩散至滤纸边缘约1 cm时,取出滤纸,用铅笔划出溶剂前后,在烤箱中烤干。由于无水乙醇?水?尿素展层剂中直接加入了茚三酮,故从烤箱中取出的6张滤纸上有紫色的弧形色斑;而原配方的
展层剂中没有加入茚三酮,故从烤箱中拿出的滤纸要喷0.1,茚三酮乙醇溶液,再放入烤箱中第二次烤干,才出现紫色的弧形色斑。用铅笔描出色斑轮廓,计算迁移率Rf值,取两份平行结果的平均值。 2 结果 经过转氨基作用后,谷氨酸与丙氨酸在四种展层剂中的迁移率见表1。从8张滤纸的层析图谱结果看到,苯酚?水和乙醇?水?尿素(80?20?0.5)这4张滤纸上,氨基酸分离效果较为明显,而乙醇?水?尿素(70?30?0.5)和乙醇?水?尿素(60?40?0.5)
这4张滤纸的氨基酸无法分离。表1 两种氨基酸在四种配方中的迁移率(略) 3 讨论 3.1 纸层析图谱和迁移率
从4张能分离氨基酸的纸层析图谱结果可以看到,对照管中没有发生转氨基作用,只有一个色斑,而测定管中发生了转氨基作用,有两个色斑。 从谷氨酸和丙氨酸的点样色斑相比较得出,距点样处近的是谷氨酸,距点样处远的是丙氨酸。4张纸层析图谱的色斑都分得很明显,证明新旧两种配方的展层剂均能较好的分离氨基酸。从表1的结果也可看到,通过两种不同配方的展层剂分离出来的氨基酸迁移率基本相同,说明用新配方制成的展层剂也能达到分离氨基酸的目的,而且效果很好。
范文五:纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用实验的新方法
污染及防治
2010 NO.08
科技资讯
纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用实验的新方法
魏涛
(徐州医学院基础学院 江苏徐州 221004)
摘 要:通过对展开剂配方、层析温度、显色方法等研究,解决了原实验既污染环境、危害人体健康又浪费时间的问题,从而找到了纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用实验的新方法。结果表明,此方法简单易行,耗费低廉,基本上不污染环境,是一个值得在高校生物化学实验室推广的新实验方法。
关键词:展开剂 转氨基 新实验方法中图分类号:TQ文献标识码:A文章编号:1672-3791(2010)03(b)-0145-02
“纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用”是生物化学的一个基础性实验,总结近几年的实验教学经验,笔者发现过去的实验方法(参阅徐州医学院生物化学实验教学用的《生物化学实验指导》),有几种实验试剂和几个实验步骤需要改进,例如:实验试剂所用的展开剂(酚水饱和液)、用丙酮配制的茚三酮溶液等有毒试剂易挥发,污染环境,影响师生身体健康;实验步骤肝匀浆在沸水中加热10分钟等操作不方便,且比较复杂、费时。针对上述问题,结合我校实际情况,笔者进行了大量的实验摸索,找到了一种切实可行、又相对环保、效果良好的新实验方法。
1 材料和仪器
新鲜家兔肝脏0.5g、0.1mol/L丙氨酸溶液、0.1mol/Lα~酮戊二酸溶液、1%谷氨酸溶液、0.1mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液、0.5%茚三酮丙酮溶液、原展开剂(苯酚、水)、新展开剂(正丁醇、冰醋酸、水),低速台式离心机、恒温循环水浴箱、匀浆器、红外线干燥器、微波炉、圆形定性滤纸(直径9cm)、三角烧瓶、康维皿、离心管、试管、喷瓶、牙签等。
2 实验方法
2.1肝匀浆制备
取家兔一只,放血后处死,取出肝脏,去除结缔组织,立即用冷生理盐水洗去肝脏表面血液3~5次,取肝0.5g,剪碎后放入匀浆器,加入0.1mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液1.0mL,迅速研成匀浆后再加入pH7.4磷酸盐缓冲液3.5mL混匀后,将肝匀浆液等份加入两个三角烧瓶内,其中一份存放在冷藏箱内,另一份用微波炉煮沸3~5次约5分钟(旧实验将肝匀浆放入沸水中加热10分钟)。
2.2酶促反应过程
(1)取两支离心管,编号:a(测定管)、b(对照管),a管加入0.5mL肝匀浆,b管加入煮沸的肝匀浆0.5mL。(2)两管内依次各加入0.1mol/L丙氨酸溶液0.5mL、0.1mol/Lα~酮戊二酸溶液0.5mL、0.1mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液1.5mL,摇匀。(3)两管均放到恒温循环水浴箱保温37℃,1小时后取出。(4)旧方法把测定管放到沸水浴中煮沸5分钟,取出冷却;新方法可省略此步骤。(5)两管皆离心3500rpm5分钟,把上清液分别加入两支小试管中,标清管号,供层析用。2.3标记
用肥皂水把手洗干净,操作中尽可能少用手接触滤纸,以免污染滤纸;取出滤纸一张放在干净的白纸上,以圆点为中心,约0.6cm半径,用铅笔轻轻划圆线作基线,在线上四等分处标清四点标号做为点样原点,在各点对应滤纸边缘标上“测”、“对”、“谷”、“丙”字样,以免混淆。2.4点样
旧方法用4根毛细管分别沾取对照管、测定管、谷氨酸、丙氨酸在滤纸相应的点样原点点样,经实验我们发现点1滴液体过多,样品扩散的位置过大。新方法改用10uL的微量进样器,每滴5uL,标准样各点2滴共10uL,这样每滴的量较小,量也好控制,而且点样均匀,层析效果很好[1]。2.5层析
先用牙签在滤纸圆心处轻轻打一小孔(铅笔芯粗细),再取同样滤纸一条(约2×2cm),卷成灯芯状,上端插入滤纸中心孔中。取5个直径8cm的98干燥的康维皿,向其内室中分别加入不同的展开剂10mL,即酚∶水溶液饱和液和正丁醇∶冰醋酸∶水溶液(3∶2∶1,4∶1∶2,4∶2∶3,4∶2∶4四种比例)。把滤纸平放在上述康维皿上,使纸芯下端浸入展开剂溶液中,盖上康维皿盖[2]。旧实验方法在常温下层析(约40分钟),新方法将康维皿
放在红外线干燥器中层析(约15分钟),层析结束,取出滤纸,原实验方法用吹风机吹干滤纸(约5分钟),新实验方法将滤纸放入干燥器内烤干(约2分钟)。2.6显色
旧方法用喷瓶向上述滤纸上均匀喷上0.5%茚三酮丙酮溶液,用吹风机吹干滤纸,可见出现同心弧紫色斑。新方法将一定量
[3]
的茚三酮加到展开剂中(值得注意的是用展开剂配制茚三酮溶液时,如果配好展开剂后再放入茚三酮,则茚酮不容易溶解,由于茚三酮溶于正丁醇,所以可先将茚三酮称量好,放入小烧杯,用正丁醇溶解,再转入试剂瓶,最后加入其他试剂,摇匀即可。),故从干燥箱内拿出时即出现同心弧紫色斑,用铅笔圈下各色斑,比较色斑的位置及颜色深浅,并计算各色斑的Rf值,以此判断结果。其计算公式如下:Rf=溶质层析点中心到原点中心距离(X)/溶剂前沿到原点中心的距离(Y)
3 结果
运用公式Rf=溶质层析点中心到原点中心距离(X)/溶剂前沿到原点中心的距离(Y),计算各色斑的Rf值,以此判断结果,见表1。比较滤纸上色斑位置及颜色深浅可以看到,展开剂酚水饱和液与正丁醇∶冰醋酸∶水溶液(3∶2∶1),这两张滤纸转氨基效果较明显,且Rf值很接近,而正丁醇∶冰醋酸∶水溶液(4∶1∶2),正丁醇∶冰醋酸∶水溶液(4∶2∶3),正丁醇∶冰醋酸∶水溶液(4∶2∶4)这三张转氨基效果不明显。
4 结语
(1)制备煮沸肝匀浆时,旧方法将肝匀浆放在沸水中加热10分钟,新方法用微波炉煮沸3~5次(约5分钟),酶促反应过程中,旧方法把测定管放在水浴中煮沸5分钟,而新方法省去此步骤,相比较新方法节省了时间和能源,且不影响实验结果。
(2)新旧展开剂的比较,旧展开剂配方为苯酚和水,苯酚对皮肤、粘膜有强烈的腐蚀作用,可抑制中枢神经或损害肝、肾功能,人们长期接触苯酚可引起头痛、头晕、咳嗽、食欲减退、恶心、呕吐、皮炎,严重者引起蛋白尿等慢性中毒。另外,苯酚价格较贵,浪费实验经费,且配制试剂时,苯酚常温下是固体状态,需加热溶解后,才能配制展开剂;实验过程中,苯酚易挥发,对环境污染严重,影响人类生产和生活。新展开剂的配方为正丁醇、冰醋酸和水,几乎不损害人体健康,不污染环境,常温下成液体状态,可以直接配制展开剂,节省了很多实验时间。
(3)层析。旧方法在室温下进行层析,用
表
1
氨基酸在不同的展开剂中的迁移率(
R
f
值)
科技资讯 SCIENCE & TECHNOLOGY INFORMATION145
科技资讯
2010 NO.08
SCIENCE & TECHNOLOGY INFORMATION
污染及防治
环境中砷的来源及影响
赵维梅
(鞍山市环境监测中心站 辽宁鞍山 114006)
摘 要:砷广泛存在于自然界中,是一种与环境和人体健康关系密切的元素。本文阐述了环境中砷的来源及其对环境的影响与危害。全面地了解砷的相关知识,不仅对建立砷的分析方法提供了理论基础,而且为了解砷污染的状况及砷污染的治理提供了理论依据。关键词:砷 污染中图分类号:X53文献标识码:A文章编号:1672-3791(2010)03(b)-0146-01
1 砷的性质
砷位于周期表中第四周期,第Ⅵ主族,处于金属与非金属过渡的区域。因此,砷的物理、化学性质与主族元素的性质有很大差异,即具有金属性又具有非金属性。通常情况下可以把砷看作半金属元素。砷是人体非必需元素。砷元素能以多种化合物的形式存在,最常见的砷化物有:砷酸、亚砷酸、一甲基砷酸、二甲基砷酸、砷甜菜碱、砷胆碱、砷糖和砷脂类化合物等。自然界中砷按价态可分为As(III)和As(V);按其形态可分为有机砷和无机砷。不同形态的As具有不同的代谢和致毒机理,以其半致死量(LD50)计,其毒性依次为AsH3>As(III)>As(V)>甲基胂酸(MMA)>二甲基胂酸(DMA)>三甲基胂酸(TMAD)>砷胆碱(AsC)>砷甜菜碱(AsB)。总体来说,无机砷的毒性大于有机砷的毒性。
砷和含砷金属的开采、冶炼,用砷或砷化物作为原材料制成的玻璃、颜料、药物、纸张的生产以及煤的燃烧过程中都可产生含砷的废水、废气和废渣,从而造成对环境的污染。
类致癌因子。
4 结语
砷是一种与环境和人体健康关系密切的
元素。目前砷污染已经受到人们的广泛关注。在我国,砷已被列为实施排放总量控制的指标之一。全面地了解砷的相关知识,不仅对研究砷的分析方法提供了理论基础,而且为了解砷污染的状况及砷污染的治理提供了理论依据。
3 砷的影响及危害
由于砷化物具有强的稳定性,在自然条件下不易分解,易产生残留积累,因此会破坏生态,造成环境污染。
被砷污染的河水会降低生化需氧量,含砷的废水、农药、烟尘都会污染土壤。通常,砷主要集中在土壤的表层约10厘米左右[4],只有在某些情况下可淋洗至较深土层。土壤中的砷大致可分为水溶性砷、吸附性砷和难溶性砷。通常把水溶性砷、吸附性砷总称为可给性[5]
砷,是可以被植物吸收利用的部分。土壤中,大部分砷被胶体吸收或被有机物络合。大多数植物对土壤中的砷具有不同程度的富集作用。富集在植物体内的砷,会严重地干扰作物对其它养分的吸收,破坏植物的正常生理代谢,进而影响光合作用、糖的转化、淀粉和蛋白质等的合成。残留在土壤中的砷很难消失,并且在土壤中积累的砷,很容易通过农作物转移到人体及其它生物体中。
在人体内砷通过食物链不断积累,会给人体造成多种疾病,危害人体的生命和健康[6]。砷在人体中的致毒机理[7~8]主要是含砷的化合物能与含巯基的酶结合,尤其与丙酮酸氧化酶的巯基具有强的结合力,生成丙酮酸氧化酶和砷的复合体,这种复合体可以使酶失去原有的活性,影响细胞的正常代谢,大大降低甚至损伤细胞的功能。此外,砷进入人体内,由于砷酸盐与体内磷酸盐的抗结作用,从而抑制了呼吸链的氧化磷酸化,进而抑制了细胞内的呼吸作用。砷可以在人体内蓄积,对不同年龄段的人造成长期危害。对人体的心肌、呼吸系统、神经系统、生殖系统、造血系统、免疫系统都具有不同程度的损伤。国际癌症研究机构(IARC,1980)、美国环境保护局(EPA)和“国家毒物学计划”都已将砷列为人
参考文献
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2 环境中砷的来源
砷在自然界中广泛存在着。据统计,按照各种元素在不同体系中的含量排名,砷在地壳中的含量居第二十位[1~2],在海水中的含量居第十四位,在人体中的含量居第十二位。砷是地壳的组成成分之一,据报道海水中总砷的浓度[3]一般为1~2μg?L-1,世界自然土壤中砷的平均含量并不高,大约为0.1~9μg?g-1。我国自然土壤中砷的平均含量大约为9.2μg?g-1,高于世界的平均水平。
20世纪50年代以来,我国砷矿的开采日益扩大,砷化物广泛应用于工业、农业、畜牧业、医药卫生及食品加工业等行业。在工业生产中,As2O3被广泛应用于白银冶炼、颜料、玻璃制造等方面;在农业生产中,砷化物主要应用于杀虫剂、除草剂、防腐剂中,例如砷酸铅、砷酸钙用于防治果树、棉花的虫害,甲基砷酸锌用于防治水稻纹枯病;砷化物在畜牧业中主要用于保护鸟类羽毛、兽皮,以及促进幼畜生长的添加剂;在医药卫生方面,As2O3存在于牙科中用于杀死神经药物中;同时,砷化物也被广泛地应用在色素及食品添加剂中。
时较长,而新方法在干燥器内层析,由于温度较高展开剂扩散较快,且基本不影响实验结果,节省了大量时间。另外,原实验用吹风机吹干滤纸,由于吹风机声音较大,不适合在实验室使用,而干燥器避免了这种情况。
(4)显色。旧方法将滤纸从康维皿内取出后,用铅笔标出前沿位置,用吹风机吹干,以质量分数0.5%的茚三酮丙酮溶液喷雾,再用吹风机吹干后显色,经实验发现喷雾不好掌握,如果喷雾不均匀,显色效果不好,而且喷雾用的喷瓶也不是实验室常用仪器,另外由于配制茚三酮溶液用的是丙酮,丙酮容易挥发,污染环境,并且不利于师生身体健康。新方法将显色剂茚三酮加入展开剂中,用展开剂配制成质量分数0.5%的茚三酮溶液,即100mL的展开剂加入0.5g的茚三酮,等层析结束后,将滤纸取出,用铅笔标出前沿位置,再将滤纸放到干燥器烤干即可显色,不用喷雾,节省了时间,也没有有毒物质的危害,且达到了实验的预期效果。
综上,笔者认为通过改进实验方法,使原来既污染环境、危害人体健康,又浪费时间的实验基本上变成了一个绿色实验,也节省了很多时间,所以,此实验方法是一个值得在高
校生物化学实验室推广的新实验方法。
参考文献
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