范文一:新鲜冰冻血浆的病毒灭活方法及其应用
新鲜冰冻血浆的病毒灭活方法及其应用
新鲜冰冻血浆(FFP)几乎含有全部凝血因子,主要用于多种凝血因子缺乏伴有严重贫血的患者,也用于大量失血或凝血试验异常而需要施行侵入性操作的患者以预防出血。虽然对FFP供者进行了严格的筛选和实验室病毒检测,但经血传播病毒的危险性仍然存在,原因在于:1)检测方法灵敏度有限;2)“窗口期”问题;3)新病毒的出现;4)目前我国检测病毒的种类仅为HIV 1/2、HBV、HCV;因此,检测结果阴性并不能排除病毒感染的可能。据估计,输用血浆的危险程度为10 000 U可发生75次不良反应,每1 000名患者有3 7起不良反应发生。1项研究在分析了48年来应用未经病毒灭活血浆和经病毒灭活血浆后发生不良反应需要救治的花费,发现应用病毒灭活血浆至少每年为美国节约200万美元,如果考虑非感染性并发症,如输血相关性急性肺损伤(TRALI),可以为英国每年节约5万英镑,1,。目前欧洲各国都已禁止使用未经病毒灭活的血浆,国内应用FFP非常广泛,但病毒灭活尚未普遍进行。目前国内外几种病毒灭活技术正在临床应用,血浆成分及其衍生物主要采用有机溶剂去污剂法(SD)和亚甲兰加可见光法(MBR),补骨脂素加光照血浆(PLT)已经在欧洲应用。核黄素加光照(PRT)对血浆、红细胞和血小板3种成分中的病毒可能均有灭活作用,但仍处于研发阶段;除SD法外其它灭活剂的作用都是针对病毒核酸的,2,。现就血浆病毒灭活的方法和应用作一简介。
1 SD法
1.1 灭活方法 SD法由纽约血液中心发明,通常用磷酸3 N丁酯(TNBP)和吐温-80或胆酸钠,二者协同作用可以溶解和去除病毒的脂包膜而使其灭活。SD法处理血浆是将,2 500人份的同型、融化的FFP混合与1,TNBP和1,去污剂TritonX 100,在37?孵育4h,用蔬菜油浸出液萃取之后,用C 18层析柱清除溶剂和去污剂。由此制备的血浆经无菌过滤,200ml分装,再次于-30?冰冻保存。该法约使血浆稀释10倍,残留的微量TNBP(
1.2 优点 SD通过破坏脂包膜病毒外膜结构的完整性或靶细胞受体识别位点,使之丧失感染性,故对脂包膜病毒有较好的灭活效果。国外评价了几种病毒灭活方法后都认为,SD法对含脂包膜病毒的灭活效果最好,如HBV、HCV和HIV,3,4,。实验表明SD处理可使黑猩猩感染HBV和HCV的剂量(CID50)分别减少106和l05以上,使组织培养感染HIV的剂量(TCID50)减少106以上。SD法能有效杀灭非典型性肺炎(SARS)冠状病毒,但对非脂包膜病毒如HAV和B19病毒无灭活作用。研究证实经SD处理后的血浆蛋白质量合格,制备技术简单,有利于大规模生产和临床应用,5,,且不会导致红细胞溶血,不会影响血小板的形态及功能。研究还证实SDP中凝血因子和蛋白抑制因子(PI)在冻溶后4?保存8h或常温保存6h均较稳定,融化后除了蛋白S(PS)外,所有凝血因子和PI的活性在融化后4?储存6d至少还有0 5 IU/ml,6,,保持了较高的质量,应用效能和安全性也没有因为PS和纤维蛋白抑制因子活性降低而受到限制。SDP混合后可通过血浆抗体和过敏原的中和作用消除TRALI,也可明显减少过敏反应的发生,并可移除残余的血细胞、细胞碎片和细菌,移除血管性血友病因子(vWF)等大分子物质。从质量角度而言,SDP汇集易于标准化,且易于过程质量控制,同一批中的各种凝血因子、纤维蛋白原(Fg)及总蛋白含量都是相同的,能给出准确含量,易于临床参照使用。1份研究报告显示,2×106U的SDP和11×106U经SD处理的血液制品输用后,尚未见发现病毒传播。因此认为SDP对临床使用有实际意义,适合大多数患者选择应用。
1.3 缺点 SD法处理血浆后对凝血因子活性影响很大,Doyle等,7,研究发现,经SD处理后,血浆F?、F?和PS分别下降31%、28%和50%;而Heger等,6,研究SDP在冻溶后4?保存8h或常温保存6h后的凝血因子活性,发现F?、F?、F?、F?、vWF:Ag、Fg和PC
(蛋白C)水平至少平均含有94%,F?、F?、F?和抗凝血酶(AT)水平至少平均含有78%,立刻融化后F?下降到83%,PS下降到43%,与FFP相比有很大差异,且FFP中F?活性下降晚于SDP,8,。虽然经SD处理后血浆中各种凝血因子均有不同程度的下降,但是仍能满足临床的应用要求。从处理工艺上讲,大量混合后血浆原始成分可能发生变化,如大分子在vWF SDP及其制备的冷沉淀中缺失,在某种程度上又增加了感染病毒的危险性,其后还需去除血浆中的稳定剂或有毒的化学物质,技术要求高,投资大,且SD法处理还不能对血浆中的未知病毒灭活。
1.4 临床应用 SDP已成功地用于治疗DIC和因大量输血引起的凝血因子缺乏的患者,临床适应证同FFP,即主要用于各种凝血因子缺乏的患者和血栓性血小板减少性紫癜的患者,不能用做血浆容量扩充剂和蛋白支持疗法。SDP可代替各种凝血因子制剂,用于心脏手术和各种创伤性失血、烧伤、低蛋白血症、各种失血性休克以及血液置换治疗,对于TTP的治疗效果也很好。SDP副反应非常少,临床表现包括寒战、腹痛、气短等,总反应率为0 6,,发生变态反应比FFP低。有研究对比较了应用SDP和FFP对心脏手术后患者凝血功能紊乱治疗的效果,发现它们均使Fg、F?、AT、PC、游离PS、α1 抗胰蛋白酶和纤溶酶原升高,PT和APTT下降,两者没有明显不同;但应用FFP后PS活性明显增加,PI明显下降,对凝血酶原片段(F1+2),D二聚体(DD)或Fg降解产物(FDP)没有明显影响;两者临床止血效果无明显不同,均无不良反应,提示2种成分对改善止血和纤溶的效果一样,这已经在严重的PS和PI缺陷的患者治疗中得到证实,9,。但是若患者有出血危险,准备外科手术或侵入性操作时,只能补充相应成分缺乏的血液,而不能应用SDP,10,。SDP中的Triton X 100能够改变α2 抗纤维蛋白酶活性,应用时应考虑可能发生纤溶的危险,11,,特别是对有肝病、继发性F?缺陷和先天性或者获得性PS缺陷的患者应小心使用。 2 MBR法
2.1 灭活方法MBR法病毒灭活技术自20世纪90年代初期发展起来,目前主要集中于血浆病毒灭活的研究和临床应用,在欧美等发达国家己开展多年,是一项比较成熟的技术。MB属于吩噻嗪类染料,是一种光敏染料,可高效灭活含脂包膜病毒,包括逆转录病毒、疱疹病毒、囊膜病毒、黄热病毒等。MBR灭活病毒的原理为:不可逆的插入病毒核酸,诱导断裂缺口产生,导致病毒功能和遗传结构基础破坏,从而达到灭活病毒的效果。病毒灭活的效果与MB的浓度和接受光照的强度有关。实验证明极低浓度的MB(0 01μg/ml)与卤素灯光照结合可高效灭活血浆中的模型病毒。1966年,Pohi首次使用MBR血浆病毒灭活的方法,处理程序:首先冻融血浆,冻融后加入MB, (85—120)μg/U,,光源为白色荧光灯。该方法自1993年起在德国、瑞士等国输血中心使用,收到良好的临床效果,目前已在欧洲多数国家正式获准用于FFP的病毒灭活处理。
2.2 优点 实验表明MBR法几乎可灭活所有的含脂包膜的病毒,如经血传播的HBV、HCV、HIV 和HTLV等均有较好的灭活效果,12,,特别适用于单袋FFP的病毒灭活,但对无包膜病毒没有效果。经MBR处理后的血浆(MBRP)中Fg、F?和F?等的回收率均,75%,能够满足临床应用要求。MBRP中丙种免疫球蛋白的二级结构没有明显的改变,基本保持完整,大多数血浆蛋白活性未受影响,处理前后血浆抗体活性没有明显改变,vWF多聚体没有明显的改变,AT?、PC和vWF:Ag没有减少,MB移除过滤(MBRF)后没有激活C3a、C5a、F1,2和F?a,13,。MBR法可以避免血浆大量混合增加传播病毒和其它病原体的危险,对单人份血浆处理方法简单,效果好;而且用MBR法处理不会像SD法那样造成明显的vWF丢失,vWF多态性结构没有改变,但活性有下降。此外,MBR是治疗氰化物和亚硝酸盐中毒的解毒剂,临床使用剂量比血浆消毒的剂量要大数百倍,在毒理学方面对人体是比较安全的。MBR法用于单袋血浆处理,处理后对MB的去除也较为简单,临床使用效果肯定,未见副作用。MBR法具有高效、安全、简便、毒性低等特点,可大大降低因输血造成的病毒传播,
比较适用于我国血站系统。
2.3 缺点 研究发现采用高浓度MBR和延长光照时间处理血浆后,大多数血浆蛋白都有复杂的改变,包括纤维蛋白γ链、甲状腺激素结合蛋白和载脂蛋白A ?,因此应用MBR时浓度要严格限制,14,。有研究对MBR处理10份A型血浆后进行评估,凝血因子的损失程度为:Fg 23%,F?10%,F? 26%,F? 11%和F? 13%,13,。而Aznar等,15,研究发现MBP凝血因子的活性平均丧失25,,其中F? 29,,Fg 39,,F? ?16,,vWF 18,。vWF活性丧失明显低于F?。用MBRP和冷沉淀对血管性血友病和F? ?和Fg缺乏症患者有一定的影响。MB和红光处理血浆对血浆的聚合凝结有影响,形成结构更为紧密的纤维凝块,但对纤维蛋白形成凝块的稳定性或纤溶没有影响,16,。虽然经MB处理和过滤后血浆F?和F?丧失15,,光照进一步导致10,—15,的其它凝血因子丧失,F?和vWF回收率降低,但是不影响冷沉淀的制备,17,。MBR处理后的冷沉淀丧失最多的是F? (23%),其次是Fg、F? ? 和瑞斯托霉素辅因子活性(vWF:RCo),分别是18%、14%和13%,vWF:Ag的丧失最小,仅3,, 对凝血系统的抑制因子很受有影响。经MBR处理后,Fg浓度有轻微减少,活性却下降31,,纤维蛋白的聚合指数仅有轻微的改变,在MBRF后也没有明显的改变;TT延长了6s,经MBRF后没有进一步的改变。这种体外的改变类似于纤维蛋白功能失调患者的血浆改变,但通常没有明显的临床症状,18,。
MBR法对非脂包膜病毒,如HAV、B19等无效。另外,由于MBRP中各种凝血因子含量和总蛋白含量非标准化,所以临床使用无准确参考剂量。
2.4 临床应用 MBRP的适应证同FFP。MBRP及由其制得的冷沉淀均是临床无病毒传播的有效制品,可安全地治疗血管性血友病,F? ?和Fg缺乏症等。应当指出,MBRP不能用于血浆扩充和蛋白支持疗法。MB 冷上清(经MB处理后的FFP,制备冷沉淀后上清液)可以用于治疗血栓性血小板减少性紫癜,纠正全部或者部分凝血酶原复合物缺陷,特别是F? 和F?不足,19,。
3 S 59及光化学处理法
用补骨脂内酯衍生物S 59进行光化学处理血浆(PCT FFP)已经发展成为输血应用中灭活血浆中病原体和白细胞的重要方法。Singh等,20,用150μmol/L S 59加3J/ cm2的长波紫外线照射含病毒模型血浆,发现处理后血浆病毒灭活水平有对数级减少:HIV 1,6 8/6 4Log、HTLV ?为4 5Log、HTLV ?,5 7Log、HBV和HCV,4 5Log、SARS为5 5Log、西尼罗病毒为6 8Log;对部分细菌、原虫、螺旋体等也有很强的杀灭作用。Fg和F?降低到原来水平的72,—73,,F?、F?、F?、F?、F?、F?、F? ?、PC、PS、AT和α 抗纤维蛋白酶基本不变,说明PCT FFP有广谱灭活病原微生物的作用,并且能够保留充足的凝血因子,可以应用于临床。先天性凝血因子 (F?、F?、F?、F?、F?、F?、F? ?和PC) 缺乏和获得性凝血功能障碍性出血的患者用PCT FFP治疗,效果与FFP一样,21,22,。有研究对S 59加A段紫外光和MB加可见光两种病毒灭活的方法,在3个时间点(处理后立即测定、冷冻储藏30d后和4?融化后24h)测定了凝血因子活性,结果显示:在PCT FFP和MBRP中F?、F?、F? ?、vWF:Ag、ADAMTS 13(血管性血友病因子裂解酶)、DD和PC均相等,在PCT FFP中PT、APTT缩短,而在MBRP中TT、Fg、F?和PS更高,在PCT FFP中F?、F?、F?、F?、vWF和vWF:RCo相等或更高于在MBRP中,在MBRP中的纤溶酶原、AT和血纤维蛋白溶酶抑制物则高于在PCT FFP中。总体上来说,PCT FFP的凝血因子水平和稳定性比MBRP更好,23,。S 59及光化学处理可用于血浆、血小板中病毒,细菌等病原微生物及白细胞的灭活,不利之处是不能用于红细胞制品的灭活,经S 59处理后的血液,需用特殊仪器将其去除。该法目前在欧洲已经开始应用。
4 巴斯德法
国内外已有研究将巴斯德液态加热法(Pasteurization)应用于多种血液制品的病毒灭活。对临床输注用血浆的病毒灭活尚在研究中。巴斯德消毒法血浆是在液体状态下,经60?加热10h,可灭活脂膜病毒(如HCV、HBV、HIV等)和非脂膜病毒(如HAV、B19等)。其优点为可灭活各种病毒、安全性强,缺点为热处理对蛋白损伤较大,特别是凝血因子活性丢失较多。但血浆中凝血因子F?活性丢失25%,Fg丢失20%,免疫球蛋白丢失在10%以内。处理程序:冰冻血浆被混合后,在30?下融化,融化的血浆送到无菌容器中并添加稳定剂,二者混合后60?加热10h,加热后对血浆进行超滤,去除稳定剂并对血浆进行浓缩,除菌分装。
5 核黄素光化学技术
核黄素即维生素B2,是一种多环平面结构的芳香族化合物,它以平面结构插人核酸后,在紫外线A(UA)或可见光的照射下,通过电子转移使核苷酸中鸟嘌呤碱基氧化并形成共价加成化和物,介导核酸骨架链的断裂,达到灭活病毒的目的。研究表明核黄素联合可见光照射灭活血浆病毒技术,具有可靠的安全性,25,26,。有学者将FFP融化后与模型病毒孵育,再加人核黄素,并用UA照射,在照射过程中不断摇匀,将温度控制在30?左右,结果发现该方法可将血浆中模型病毒灭活,而且对有包膜病毒和无包膜病毒都有效。美国研究人员将其应用于血小板、血浆和红细胞悬液中病毒灭活研究,发现使用核黄素经450 nm可见光照射能灭活混入血液制品中的细胞内及胞外HIV、牛腹泻病毒(BVDV,HCV的模型病毒)、伪狂犬病毒和B19病毒等。虽然处理后的血浆凝血因子活性有所下降,但仍处于正常范围内,能够满足临床应用。目前,核黄素光化学技术主要用于血小板制品,欧洲已经有灭活制品问世。核黄素光化学法与其它病毒灭活方法相比,核黄素来源广泛,价格相对便宜,安全无毒副作用,光源吸收广,且对血液及血液制品活性成分的影响较小,具有较为广阔的发展和应用前景。
6 压力循环技术
压力循环技术是2000年美国报道的1项血浆病毒灭活的最新技术,26,,处理程序为:新鲜血浆用干冰冷冻并放入为压力循环技术设计的压力室,接近0?、压力100—200 MPa,经流体静力压至大气压,多次循环以达到病毒灭活的效果。灭活的可能机制为在低温和循环压力下,病毒内多种蛋白质亚单位及蛋白 核酸复合物发生解离,造成病毒的死亡。该技术已成功用于食品消毒,对血浆病毒灭活还处于试验阶段。通过应用接近0?、高压、增加循环次数的方法,使噬菌体浓度在10—20 min内降低近6Log CID50,在血浆蛋白IgG、IgM、F?分别为其初始值的104,、89,、80,的条件下,达到对病毒的灭活效果,27,。
7 去白细胞
用过滤法去除白细胞的效率,99,,在预防输血反应,如非溶血性发热反应、HLA同种免疫和血小板输注耐受等方面,已取得了十分满意的效果;此外,它对防止输血相关病毒的传染也有显著的效果。血浆中的残留白细胞虽浓度较低,但仍可能引起输血反应,更重要的是可携带如CMV、HTLV 1、HIV等输血相关病毒。研究发现,使用去白细胞滤器可有效地防止输血前血清学阴性骨髓移植患者发生CMV感染,还可有效地去除HIV感染的白细胞,28,。虽然血浆在临床使用前要经过一个冻融过程,但据文献报道白细胞的浓度下降却不到1 0Log,29,。所以单一依靠的冻融过程不能完全去除其中的白细胞和其可能携带的病毒,而过滤的方法则可以去除血浆中的白细胞,2 Log,去除率,99 4,,因此是一种很好的病毒去除方法。有不少国家的血浆制品都是经过滤白细胞处理后再用其它的物理化学病毒灭活技术进行病毒灭活,而国内过滤白细胞还未普遍开展,病毒灭活也在发展阶段。
8 结语
目前没有一种病毒灭活技术可以对所有类型的病毒进行灭活而不影响血浆的质量。SD
法、MBR法对HIV和HCV亚型实际上没有灭活作用,反倒减少了凝血因子和抑制因子的活
性,30,。病毒灭活应根据成分血的具体要求选用恰当的广谱、高效、安全的灭活方法,主
张联合使用2种以上原理不同的去除和/或灭活病毒的方法,严格质量管理和灭活方法的确
认,以最大限度地提高输血的安全性。血浆除应用病毒灭活技术外,还由于其中存在大量的
白细胞,即便经过冷冻和输血前的复溶,白细胞已完全崩解,但白细胞基质仍有可能刺激受
者产生相应的HLA抗体,故还宜采用白细胞过滤技术;另外,血浆中还残留有少量红细胞
基质,其免疫原性已下降到为原来的1%,但是仍有产生相应不规则抗体的可能。因此,寻
求一个理想的病毒灭活方法,如能对广谱病毒及其它病原体灭活,并最大限度保留凝血因子
活性和其它血浆蛋白功能的研究尚在探索中。
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范文二:新鲜冰冻血浆和病毒灭活冰冻血浆部分有效成分探析
新鲜冰冻血浆和病毒灭活冰冻血浆部分有
效成分探析
[摘 要] 目的,探讨病毒灭活冰冻血浆与新鲜冰冻血浆
中部分有效成分的质量变化。方法,采集50袋新鲜血浆,
分成A、B两组,分别对其进行检测,内容包括PT,TT,
APTT,Fg,TP、ALB及凝血因子F?、F?。结果,病毒
灭活冰冻血浆中的总蛋白、凝血因子F?、F?和Fg等的含
量均有一定程度的降低。但大都在30%以内,在可接受的范
围内。结论,采用MB光化学法病毒灭活血浆不影响临床应
用,其利大于弊。
[关键词] 病毒灭活冰冻血浆,凝血因子,因子活性,血
浆蛋白
[Abstract] Objective: To explore virus inactivated frozen plasma and fresh frozen plasma part of effective ingredients of quality changes. Methods: To gather 50 bags fresh plasma, A and B is divided into two groups , detected PT,TT,APTT,Fg,TP,ALB,F?,F?
respectively .Results :The content of TP, F?, F? and Fg in virus inactivated frozen plasma with a certain degree of
1
reduced , but mostly within 30%, in the acceptable range .Conclusions :The MB virus inactivated plasma did
not influence the clinical application, it did More good than
harm .
[Key Words] virus inactivated frozen plasma clotting
factor factor activity plasma protein
新鲜冰冻血浆内含有各种凝血因子及各种血浆蛋白,由
于血浆及其制品的病毒检测方法有一定的局限性及病毒“窗
口期”的存在,新鲜冰冻血浆和全血一样,具有传播艾滋病、
乙型肝炎等输血传播疾病的危险[1],因此输血的危险性依然
存在。为使广大患者能更安全有效地使用血浆,我市血站对
血浆开展了亚甲蓝,MB,光化学法病毒灭活项目。MB光化
学法病毒灭活技术应用于血浆病毒的灭活,其有效性和安全
性已被证实,但MB光化学法病毒灭活的过程对新鲜血浆中
的凝血因子及血浆蛋白等有效成分的质量会产生怎样的变
化,仍有待确认。为此我们通过实验检测血浆中的部分有效
成份的变化并作一分析探讨。
1 材料与方法
1.1样本来源 随机抽取50份常规血液,按照标准操作
规程制备新鲜血浆。每人份一分为二,分2组,A组为不灭
活病毒新鲜血浆,立即进行检测。另一组为B组,进行MB
光化学法病毒灭活后的新鲜冰冻血浆从采集到制备完毕6小
2
时内进行检测。
1.2材料 一次性无菌试管,德国BE-1500自动血凝分析仪,CL-800生化分析仪。严格按照仪器与试剂操作说明的要求进行检测。
1.3资料 ,1,PT,凝血酶原时间,用于外源性凝血因子,?、?、?、?、?,凝血功能的筛查,,2,APTT,活性部分凝血酶原时间,用于检测内源性凝血因子,?、?、?,凝血功能,,3,TT,凝血酶时间,,快速评定止血和血栓形成的有效方法,,4,Fg,纤维蛋白原,。检测PT,TT,APTT,Fg能间接反映血浆中的因子活性水平。2,血浆蛋白的测定,,1,TP,总蛋白,,,2,ALB,白蛋白,
1.4方法 A组为新鲜冰冻血浆,不灭活直接进行测定,B组为灭活冰冻血浆,先对其进行MB,亚甲蓝,光化学病毒灭活后再测定。在血浆进行病毒灭活后进行热封口时留样检验。
1.5统计分析 应用SPSS16.0作t检验分析。
2 结果
2.1两种血浆实验测定结果,见表1,。
表1 两种血浆各指标均值的实验检测结果
2.2各项指标的统计结果比较,见表2,3,。
表2 MB灭活血浆各项指标与正常范围比较的可信区间
2.3表1结果显示,MB病毒灭活处理后血浆的PT,TT,
3
APTT等活性较正常范围的和新鲜冰冻血浆的有不同程度下降,尤其是凝血因子F?、F?,其活性成份分别降低了28.1%和29.9%,导致APTT,内源性凝血因子筛查,和PT,外源性凝血因子筛查,凝血时间延长。TP、ALB在正常的范围内,但比新鲜冰冻血浆的要少,Fg的含量也稍有减少。
2.3.1经统计分析,可认为MB病毒灭活血浆中TP、ALB、FV、F?的均值仍落在国家标准允许的范围内,均差的95%可信区间范围内包含0,,说明经MB病毒灭活后这些活性成分虽然有损失但仍可接受。而PT、TT、APTT、Fg已经偏离正常范围内,均差的95%可信区间范围内不包含0,,这些指标经MB病毒灭活后受影响较大,见表2,。
2.3.2新鲜冰冻血浆与MB病毒灭活血浆比较,见表3,,各指标均存在差异,P均<0.05,,两种处理方法得出的各指标的水平不同。>0.05,,两种处理方法得出的各指标的水平不同。>
3 讨论
MB光化学法病毒灭活血浆中的PT、TT、APTT凝血时间延长,凝血因子及血浆蛋白含量偏低的原因是血浆在进行MB光化学法病毒灭活技术处理的过程中吸附、过滤导致了部分凝血因子和血浆蛋白的损失,同时也会对凝血因子的活性成分造成损伤,导致凝血时间的延长,从而影响血浆的应用效果。尤其是因子F?、F?,虽然F?、F?的检测结果仍在正常范围内,但对比新鲜冰冻血浆而言其活性降低较显
4
著,这是由于凝血因子F?、F?是不稳定因子,在离体后分离、灭活的过程中容易受时间和温度等诸多因素的影响导致其失活,相关专家[2]亦证实血浆经MB法灭活后F?、F?因子活性显著降低。
MB光化学法病毒灭活血浆中的总蛋白、纤维蛋白原、白蛋白等的含量比新鲜冰冻血浆低,差异有统计学意义,与肖泽斌[3]的研究结果大体一致。其原因是由于血浆在病毒灭活时用输血过滤器吸附过滤亚甲蓝的过程中,会吸附一部分血浆蛋白,使其含量受损,但含量仍在正常范围内,仍然符合国家标准,不影响临床输注效果。由此可见,MB光化学法病毒灭活技术会对血浆,FFP,中的APTT、PT、TT、及纤维蛋白原产生一定程度的影响,对凝血因子特别是因子F?和F?的影响较大,而对总蛋白、白蛋白成分的削减不大。
采用MB光化学法病毒灭活技术对血浆进行病毒灭活处理,虽然对血浆中部分有效成分的含量产生一定程度的影响,但大都在30%以内,对临床疗效影响不大,在可接受的范围之内[4]。输注MB光化学法病毒灭活血浆可大大降低因输注血浆而引起的各种输血风险,相对而言使用MB病毒灭活血浆利大于弊是值得临床推广应用的。
参考文献,
[1] Abdel-wahab()I,Healy B,Dzik WH.Effect of
fresh—frozen plasma transfusion on prothrombin time and
5
bleeding in patients with mild coagulation
abnormalities[J],Tr-ansfusion,2006,46(8),1279-1285.
[2]于建华,孙庶丽,王明静等.病毒灭活血浆中有效成分及亚甲蓝残留量的研究[J].中国卫生检验杂志,2010,20,6,,1541.
[3]肖泽斌.亚甲蓝光化学病毒灭活法对血浆质量指标的
影响[J].国际检验医学杂志,2010,31,4,,390-391.
[4]魏延民,王憬惺.新鲜冰冻血浆的临床应用及其安全性研究进展[J].中国输血杂志,2007,20,5,,432-434.
6
范文三:[精品]新鲜冰冻血浆与病毒灭活冰冻血浆部分有效成分的探讨
新鲜冰冻血浆与病毒灭活冰冻血浆部分有效成分的探讨
【摘要】目的 探讨病毒灭活冰冻血浆与新鲜冰冻血浆中部分有效成分的质量变化。方
法 采集50袋新鲜血浆,分成A、B两组,分别对其进行检测,内容包括PT,TT,APTT,Fg,
TP、ALB及凝血因子F?、F?。结果 病毒灭活冰冻血浆中的总蛋白、凝血因子F?、F?和
Fg等的含量均有一定程度的降低。但大都在30%以内,在可接受的范围内。结论 采用MB光
化学法病毒灭活血浆不影响临床应用,其利大于弊。
【关键词】病毒灭活冰冻血浆 凝血因子 因子活性 血浆蛋白
中图分类号:R457.14 文献标识码:B 文章编号:1005-0515(2012)2-039-02
【Abstract】Objective To explore virus inactivated frozen plasma and fresh frozen
plasma part of effective ingredients of quality changes. Methods To gather 50 bags
fresh plasma, A and B is divided into two groups , detected PT,TT,APTT,Fg,
TP,ALB,F?,F? respectively .Results The content of TP, F?, F? and Fg in virus
inactivated frozen plasma with a certain degree of reduced , but mostly within 30%,
in the acceptable range .Conclusions The MB virus inactivated plasma did not influence
the clinical application, it did More good than harm .
【Key words】virus inactivated frozen plasma clotting factor factor activity
plasma protein
新鲜冰冻血浆内含有各种凝血因子及各种血浆蛋白,由于血浆及其制品的病毒检测方法
有一定的局限性及病毒“窗口期”的存在,新鲜冰冻血浆和全血一样,具有传播艾滋病、乙
型肝炎等输血传播疾病的危险[1],因此输血的危险性依然存在。为使广大患者能更安全有效
地使用血浆,我市血站对血浆开展了亚甲蓝(MB)光化学法病毒灭活项目。MB光化学法病毒
灭活技术应用于血浆病毒的灭活,其有效性和安全性已被证实,但MB光化学法病毒灭活的过
程对新鲜血浆中的凝血因子及血浆蛋白等有效成分的质量会产生怎样的变化,仍有待确认。
为此我们通过实验检测血浆中的部分有效成份的变化并作一分析探讨。
1 材料与方法
1.1 样本来源 随机抽取50份常规血液,按照标准操作规程制备新鲜血浆。每人份一分
为二,分2组,A组为不灭活病毒新鲜血浆,立即进行检测。另一组为B组,进行MB光化学
法病毒灭活后的新鲜冰冻血浆从采集到制备完毕6小时内进行检测。
1.2 材料 一次性无菌试管,德国BE-1500自动血凝分析仪,CL-800生化分析仪。严格
按照仪器与试剂操作说明的要求进行检测。
1.3 资料 (1)PT (凝血酶原时间)用于外源性凝血因子(?、?、?、?、?)凝血
功能的筛查;(2)APTT(活性部分凝血酶原时间)用于检测内源性凝血因子(?、?、?)
凝血功能;(3)TT(凝血酶时间),快速评定止血和血栓形成的有效方法;(4)Fg(纤维蛋白
原)。检测PT,TT,APTT,Fg能间接反映血浆中的因子活性水平。2)血浆蛋白的测定;(1)
TP(总蛋白),(2)ALB(白蛋白)
1.4 方法 A组为新鲜冰冻血浆,不灭活直接进行测定,B组为灭活冰冻血浆,先对其进
行MB(亚甲蓝)光化学病毒灭活后再测定。在血浆进行病毒灭活后进行热封口时留样检验。
1.5 统计分析 应用SPSS16.0作t检验分析。
2 结果
2.1 两种血浆实验测定结果(见表1)。
表1 两种血浆各指标均值的实验检测结果
2.2 各项指标的统计结果比较(见表2,3)。
表2 MB灭活血浆各项指标与正常范围比较的可信区间
2.3 表1结果显示,MB病毒灭活处理后血浆的PT,TT,APTT等活性较正常范围的和新鲜冰冻血浆的有不同程度下降,尤其是凝血因子F?、F?,其活性成份分别降低了28.1%和29.9%,导致APTT(内源性凝血因子筛查)和PT(外源性凝血因子筛查)凝血时间延长。TP、ALB在正常的范围内,但比新鲜冰冻血浆的要少,Fg的含量也稍有减少。
2.4.1 经统计分析,可认为MB病毒灭活血浆中TP、ALB、FV、F?的均值仍落在国家标准允许的范围内(均差的95%可信区间范围内包含0),说明经MB病毒灭活后这些活性成分虽然有损失但仍可接受。而PT、TT、APTT、Fg已经偏离正常范围内(均差的95%可信区间范围内不包含0),这些指标经MB病毒灭活后受影响较大(见表2)。
2.4.2 新鲜冰冻血浆与MB病毒灭活血浆比较(见表3),各指标均存在差异(P均<0.05),两种处理方法得出的各指标的水平不同。>0.05),两种处理方法得出的各指标的水平不同。>
3 讨论
MB光化学法病毒灭活血浆中的PT、TT、APTT凝血时间延长,凝血因子及血浆蛋白含量偏低的原因是血浆在进行MB光化学法病毒灭活技术处理的过程中吸附、过滤导致了部分凝血因子和血浆蛋白的损失,同时也会对凝血因子的活性成分造成损伤,导致凝血时间的延长,从而影响血浆的应用效果。尤其是因子F?、F?,虽然F?、F?的检测结果仍在正常范围内,但对比新鲜冰冻血浆而言其活性降低较显著,这是由于凝血因子F?、F?是不稳定因子,在离体后分离、灭活的过程中容易受时间和温度等诸多因素的影响导致其失活,相关专家[2]亦证实血浆经MB法灭活后F?、F?因子活性显著降低。
MB光化学法病毒灭活血浆中的总蛋白、纤维蛋白原、白蛋白等的含量比新鲜冰冻血浆低,差异有统计学意义,与肖泽斌[3]的研究结果大体一致。其原因是由于血浆在病毒灭活时用输血过滤器吸附过滤亚甲蓝的过程中,会吸附一部分血浆蛋白,使其含量受损,但含量仍在正常范围内,仍然符合国家标准,不影响临床输注效果。由此可见,MB光化学法病毒灭活技术会对血浆(FFP)中的APTT、PT、TT、及纤维蛋白原产生一定程度的影响,对凝血因子特别是因子F?和F?的影响较大,而对总蛋白、白蛋白成分的削减不大。
采用MB光化学法病毒灭活技术对血浆进行病毒灭活处理,虽然对血浆中部分有效成分的含量产生一定程度的影响,但大都在30%以内,对临床疗效影响不大,在可接受的范围之内[4]。输注MB光化学法病毒灭活血浆可大大降低因输注血浆而引起的各种输血风险,相对而言使用MB病毒灭活血浆利大于弊是值得临床推广应用的。
参考文献
[1] Abdel-wahab()I,Healy B,Dzik WH.Effect of fresh―frozen plasma transfusion
on prothrombin time and bleeding in patients with mild coagulation
abnormalities[J](Tr-ansfusion,2006,46(8):1279-1285.
[2]于建华,孙庶丽,王明静等. 病毒灭活血浆中有效成分及亚甲蓝残留量的研究[J].中国卫生检验杂志,2010,20(6):1541.
[3] 肖泽斌.亚甲蓝光化学病毒灭活法对血浆质量指标的影响[J].国际检验医学杂志,2010,31(4):390-391.
[4] 魏延民,王憬惺(新鲜冰冻血浆的临床应用及其安全性研究进展[J](中国输血杂志,2007,20(5):432-434.
范文四:病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆在血浆置换治疗中的效果分析
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病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆在血浆置换治疗中的效果分析
作者:丁琪
来源:《中国当代医药》2013年第14期
[摘要] 目的 探讨血浆置换中应用病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆的效果差异。 方法 2012年1~6月洛阳市26例进行血浆置换患者分别采用新鲜冰冻血浆及病毒灭活血浆治疗,并对两组治疗前后的血凝、蛋白等指标进行比较。 结果 应用病毒灭活血浆组治疗后患者PT 、APTT 与治疗前比较差异有统计学意义(P < 0.05),两组治疗前后清蛋白检测差异无统计学意义(p=""> 0.05)。 结论 大量应用血浆制品时,病毒灭活血浆安全性仍较高,但若患者有出血倾向则易选用新鲜冰冻血浆(FFP )做置换液,临床效果更佳。
[关键词] 病毒灭活血浆;新鲜冰冻血浆;血浆置换;效果
[中图分类号] R457.1+4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2013)05(b )-0062-02 亚甲蓝光化学(MB )法灭活血浆中的病毒是一种最安全、有效的适合于临床用单袋血浆病毒灭活的方法,其灭活效果已被大量实验证实[1-2],输注病毒灭活血浆成为当前国内外预防输注血浆制品传播传染病的有效措施,MB 法病毒灭活血浆技术,已被推广应用于全国部分血站。对于MB 法病毒灭活血浆后,对于血浆内有效成分的影响国内各家血站报道不一,但是都一致显示MB 法病毒灭活后的血浆有效成分有所改变[3-4]。但是这些或多或少的改变是否影响临床应用效果,尤其是在血浆置换中大量应用血浆时是否有影响,国内目前尚无报道。笔者对此情况进行了研究,具体如下:
1 资料与方法
1.1 一般资料
2012年1~6月随机采用库存新鲜冰冻血浆。无偿献血者的血液(400 mL/袋),于采集后6 h内分离制备的新鲜血浆(5000 g/min,10 min,4℃),按照操作规程制备成新鲜冰冻血浆(200 mL/袋)。在净化间将血浆与一次性病毒灭活输血过滤器相连。向血浆中加入亚甲蓝,混匀后使亚甲蓝的浓度为1 μg/mL,并在31800LX 强度的光照下4℃摇动照射30 min,然后把经光照后的血浆通过一次性血浆灭活血袋的滤器滤除亚甲蓝,制备成病毒灭活血浆。
同期选择在洛阳市所进行的血浆置换患者26例,其中重症肝病患者19例,有机磷农药中毒7例,患者年龄在15~50岁,中位年龄31岁,其中,男性17例,女性9例,以上病例在血浆置换中12例置换液采用新鲜冰冻血浆,采用病毒灭活血浆14例。
范文五:病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆在血浆置换治疗中的效果分析
[摘要] 目的 探讨血浆置换中应用病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆的效果差异。 方法 2012年1~6月洛阳市26例进行血浆置换患者分别采用新鲜冰冻血浆及病毒灭活血浆治疗,并对两组治疗前后的血凝、蛋白等指标进行比较。 结果 应用病毒灭活血浆组治疗后患者PT、APTT与治疗前比较差异有统计学意义(P 0.05)。 结论 大量应用血浆制品时,病毒灭活血浆安全性仍较高,但若患者有出血倾向则易选用新鲜冰冻血浆(FFP)做置换液,临床效果更佳。
[关键词] 病毒灭活血浆;新鲜冰冻血浆;血浆置换;效果
[中图分类号] R457.1+4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2013)05(b)-0062-02
亚甲蓝光化学(MB)法灭活血浆中的病毒是一种最安全、有效的适合于临床用单袋血浆病毒灭活的方法,其灭活效果已被大量实验证实[1-2],输注病毒灭活血浆成为当前国内外预防输注血浆制品传播传染病的有效措施,MB法病毒灭活血浆技术,已被推广应用于全国部分血站。对于MB法病毒灭活血浆后,对于血浆内有效成分的影响国内各家血站报道不一,但是都一致显示MB法病毒灭活后的血浆有效成分有所改变[3-4]。但是这些或多或少的改变是否影响临床应用效果,尤其是在血浆置换中大量应用血浆时是否有影响,国内目前尚无报道。笔者对此情况进行了研究,具体如下:
1 资料与方法
1.1 一般资料
2012年1~6月随机采用库存新鲜冰冻血浆。无偿献血者的血液(400 mL/袋),于采集后6 h内分离制备的新鲜血浆(5000 g/min,10 min,4℃),按照操作规程制备成新鲜冰冻血浆(200 mL/袋)。在净化间将血浆与一次性病毒灭活输血过滤器相连。向血浆中加入亚甲蓝,混匀后使亚甲蓝的浓度为1 μg/mL,并在31800LX强度的光照下4℃摇动照射30 min,然后把经光照后的血浆通过一次性血浆灭活血袋的滤器滤除亚甲蓝,制备成病毒灭活血浆。
同期选择在洛阳市所进行的血浆置换患者26例,其中重症肝病患者19例,有机磷农药中毒7例,患者年龄在15~50岁,中位年龄31岁,其中,男性17例,女性9例,以上病例在血浆置换中12例置换液采用新鲜冰冻血浆,采用病毒灭活血浆14例。
1.2 方法
光照病毒灭活:(1)采用中保康医疗器具有限公司生产的ZBK-YBM-01型医用血桨病毒灭活柜,操作按说明书;(2)采用上海输血技术有限公司生产的HDME-1医用血浆病毒灭活柜,操作按说明书。
血浆置换法:采用美国血液技术公司生产的MCS+型血细胞分离机,选择血浆置换程序及TPE规程卡、980E耗材,置换液采用新鲜冰冻血浆或病毒灭活血浆。
主要仪器:SORVAL 3BP离心机(美国Thermo 公司),ZBK-YBM-01型医用血浆病毒灭活柜及耗材(淄博中保康医疗器具有限公司),MCS+型血细胞分离机及耗材(美国血液技术公司生产),奥林巴斯全自动生化分析仪。
1.3 观察指标
血浆凝血因子活性侧定:应用国际通用的一期法检测血浆。血浆清蛋白测定: 用双缩脉法检测血浆总蛋白。
1.4 统计分析
应用SPSS 12.0分析软件,分析应用新鲜冰冻血浆和病毒灭活血浆血浆置换两组间的凝血时间、血浆蛋白比较采用t检验。
2 结果
2.1 不同血浆置换前后患者凝血因子比较
应用新鲜冰冻血浆、病毒灭活血浆进行血浆置换治疗后,凝血因子结果见表1。结果显示应用病毒灭活血浆组治疗后患者PT、APTT与治疗前比较差异有统计学意义(P 2.2 不同血浆置换前后患者血浆蛋白比较
应用新鲜冰冻血浆、病毒灭活血浆血浆置换治疗后,血浆蛋白结果表2。结果显示两组治疗前后清蛋白检测差异无统计学意(P > 0.05)。
3 讨论
血浆是可发生经输血传播疾病的主要血液成分之一,近几年的用量持续增加,因此在保证血浆临床输用安全的同时,提高血浆质量和应用效果是非常重要的。病毒灭活作为一种降低输血风险的新技术,除应能有效地灭活血液成分中可能存在的病毒外,更重要的是对血液成分的功能应无显著性影响,保证血液成分的足够疗效。MB光化学法是近年发展起来的新技术[5-6]。光化学法灭活病毒的机制主要是依靠光敏剂在光照射下,产生自由基(一类机制)或单线态氧(二类机制)氧化损伤病毒的分子结构,从而杀灭病毒,由于目前全国各地血站供临床使用的血浆均为单人份血浆,其可能内含的脂质包膜病毒,对人体健康有危害,为了克服此危害,必须对脂质包膜病毒灭活。大量实验数据证明,用亚甲蓝光化学处理血浆可完全灭活血浆内所含的VSV和Sindbis病毒(这2种病毒是国内外公认的血液制品病毒灭活有效性的指示病毒,其中VSV是HIV的模型病毒,Sindbis是HCV的模型病毒,均为RNA脂质包膜病毒),病毒滴度明显下降。同时保证血浆主要凝血因子(Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ)的回收率>80%,白、球蛋白的回收率>90%。血浆蛋白的免疫原性无变化,总蛋白损失轻微[7]。
血浆置换因患者病情需几乎置换出患者体内原有血浆,本研究旨在研究大量应用病毒灭活冰冻血浆后患者体内的凝血状态以及血清蛋白的变化。研究结果表明,大量的新鲜冰冻血浆应用后患者体内的凝血状态以及血清蛋白均无明显变化,但是病毒灭活冰冻血浆应用后,患者体内凝PT、APTT均有所延长,但是延长均在正常范围内,说明病毒灭活冰冻血浆应用量较大时可以影响患者体内凝血。凝血因子绝大多数在肝脏合成,肝实质损伤可导致凝血因子的合成减少,表现为凝血酶原(PT)延长,患者有出血倾向。因此肝病患者在血浆置换过程中,推荐使用新鲜冰冻血浆(FFP)做置换液,临床效果更佳。笔者在多例临床血浆置换术应用当中,根据不同患者、不同病情使用不同血浆(新鲜冰冻血浆、病毒灭活血浆),均获得良好疗效。 有研究表明虽然过滤前后FⅧ和FⅨ因子活性几乎无改变,但是对因子影响最大的是灭活过程[8]。经过MB光化学法对血浆进行病毒灭活处理后,血浆中的FⅨ因子灭活前后变化不大,FⅧ因子水平下降,但活性水平仍大于75%,仍在国家质量标准允许范围内,虽然对因子有一定的损伤作用,但结合其灭活性能,MB光化学病毒灭活工艺对单人份血浆的病毒灭活还是一种比较有效的方法,其对临床输血安全性具有重要意义。临床在应用病毒灭活血浆时,可以适当增加用量,保证治疗效果,如将原来10~15 mL/kg的应用剂量增加25%用量,提高至13~19 mL/kg[2]。
要从根本上控制和杜绝血源性的传染病,除加强筛查以外,还必须对血液进行灭活病毒处理,才能达到输血安全的目的。血液成分的病毒灭活是实现安全输血的唯一途径。尤其在进行血浆置换术中,大量应用血浆制品时,病毒灭活血浆安全性仍较高。
[参考文献]
[1] 王文逸. 利用鸭乙型肝炎病毒感染模型评价血液成分中病毒的灭活效果[J]. 微生物与感染,2006,1(2):21-24.
[2] 李燕. 维生素C对病毒灭活中血浆蛋白活性的保护效应[J]. 中国实验血液学杂志,2006,14(2):394-396.
[3] 王飞. 亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活前后血浆成分的变化[J]. 临床学与检验,2010,4(12):97-99.
[4] 陈志,陈江,逯心敏,等. 重型肝炎患者血浆置换治疗前后凝血功能变化的研究[J]. 国际检验医学杂志,2011,9(22):88-89.
[5] 袁翠云,张长青,任继秀. 血浆置换加血液滤过治疗慢性重型肝炎疗效观察[J]. 医药论坛杂志,2011,9(9):165-168.
[6] 周福元,杨淑玲,陈金军,等. 血浆置换治疗肝功能衰竭临床研究[J].临床合理用药杂志,2011,14(11):289-291.
[7] 潘志敏,刘光俊,王兴,等. 胸腺肽α1配合血浆置换治疗慢性乙型重型肝炎的效果观察[J]. 实用肝脏病杂志,2011,4(10):18-20.
[8] 蔡尚原,张长青,付敏,等. 大剂量HBsAb阳性血浆置换治疗肝衰竭临床研究[J]. 医药论坛杂志,2011,14(8):58-60.
(收稿日期:2013-01-22 本文编辑:林利利)
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