范文一:显微鉴定
植物细胞的结构
紫色洋葱细胞
碘化铋钾的配制:直接用碘化铋钾0.85g ,加冰醋酸10ml 与水40ml 溶解后,摇匀,即得。 水合氯醛的配制:
稀甘油配制:
稀碘液配制:
碘-碘化钾溶液配制:
临时装片的制作方法
操作步骤口诀:擦、滴、取、展、盖、染、吸。
1、准备
擦——用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净
滴——把载玻片放在实验台上,用吸管在载玻片上滴一滴蒸馏水
2、制片
取(撕、刮、切、挑)——用镊子从洋葱鳞片叶内表皮上撕取一小块方形透明薄膜
放(展、抹)——将撕下的洋葱鳞片叶内表皮浸入载玻片上的水滴中,用镊子轻轻展平
盖——用镊子轻夹盖玻片的一边,使盖玻片另一边先接触载玻片上的水滴,而后慢慢地把盖玻片轻轻盖在材料上,尽量避免气泡产生。如有气泡,可用镊子从盖玻片的一侧掀起,然后再慢慢重新盖上。如有水溢出盖玻片,用吸水纸吸干净
3、染色
染——滴一滴染液(中性红试液、碘化钾试液)在盖玻片一侧,用吸水纸在另一侧吸引,直至染液浸润到标本的全部,如有染液溢出,用吸水纸吸干净
洋葱内表皮细胞注意识别下列各部分:
(1)细胞壁为植物细胞所特有。为细胞的最外层,比较透明。调节细调焦螺旋可见两细胞间实际上为三层;两侧为相邻两个细胞的细胞壁;中间是两个细胞共有的胞间层。
(2)细胞质:为无色透明的胶状物,紧贴在细胞壁以内,被中央大液泡挤成一薄层,仅细胞两端较明显。
(3)细胞核:埋在细胞质内;贴近细胞侧壁的只见其窄蔺,呈扁圆形,贴在上、下整的可见其宽面,呈球形。仔细观察,可见包在细胞核外面的核膜,细胞核内有1—3个发亮的颗粒,即核仁。(有的细胞看不见细胞核是因为该细胞被撕破,只剩一半了)
(4)液泡:位于细胞中央,占细胞体积的大部分,由于澈泡内充满细胞液;所以比细胞质更透明。
植物细胞后含物
1. 观察马铃薯淀粉粒
淀粉粒在形成时,先从一个点(脐点)开始,向外层层沉积,形成许多同心的层次——层纹(直链淀粉和支链淀粉交替沉积而成)。
切取马铃薯一小块,用刀片刮少许混浊液,置于载玻片上,或用马铃薯块直接涂片,加蒸馏水一滴,盖上盖玻片。
2. 观察半夏淀粉粒和草酸钙针晶
草酸钙结晶类型:蔟晶、针晶、方晶、砂晶、柱晶。
1. 用牙签挑取少许半夏粉末,置于载玻片的蒸馏水滴中,搅匀,盖上盖玻片,将标本片置显微镜下观察。
2. 水合氯醛透化装片:在载玻片中央加水合氯醛试液1-2滴,用牙签挑取半夏粉末适量,置于水合氯醛试液中,拌匀,置酒精灯上微热,并用牙签不断搅拌,稍干(切勿烧焦),离火微冷,再上法处理1-2次,最后滴加稀甘油,盖上盖玻片。
半夏草酸钙针晶:存在于薄壁细胞中,成束或散在,针晶束呈淡黄色或深灰色,散在的则无色透明,有较强的折光性。
表面标本片
主要用于叶片、萼片、花瓣和雄蕊等表皮的表面特征观察
1)整体封藏法——适用于很薄的叶片、萼片、花瓣
方法一:剪取2小片置载玻片中央(0.5cm 见方,一正一反)→加水合氯醛溶液2~3dr(加热透化)→反复2~3次至透明状→加稀甘油1~2dr →盖盖玻片→清洁→观察
方法二:剪取材料1cm 见方→放入小烧杯或试管中→加水合氯醛溶液2~3ml 隔石棉网(△) →透明状(约10分钟)→取出材料切开成等大的2片 一正一反面置载玻片→加稀甘油2~3dr →盖盖玻片→清洁观察
2)表皮撕离法——适用于较厚的叶片、萼片、花瓣
将药材的表皮直接用尖头镊子撕离下来,如带有其它各组织时用解剖刀轻轻除去,表皮正面朝上置载玻片中央→加水合氯醛溶液2~3dr微透化一次→稀甘油1~2dr →盖盖玻片→清洁观察。
操作:以镊子自下表面夹住少许叶片,往 一侧撕取表皮。将撕下的表皮外表面朝上 置于滴有1~2滴水的载玻片上,使其自然展 开,盖片观察。
? 粉末临时制片操作要领
粉末用量:米粒大小。 每次滴加装置液2~3滴。 每次滴加装置液后需要搅拌均匀。 控制搅拌范围约为盖玻片大小。 如加热透化,则重复进行3~4次,沸即离火,勿烧干、焦。
加盖玻片时应先一侧接触装置液,缓缓 放下,最后抽出镊子,以排除气泡。
以吸水纸吸去溢出的装置液。
稍放置待凉后,镜检。
? 水装片或斯氏液装片
适用于观察淀粉粒。
装置液:蒸馏水或斯氏液(甘油醋酸)。
不可加热,否则淀粉粒糊化。
? 水合氯醛加热透化装片
适用于除淀粉粒、菊糖以外的大多数组织、细胞、细胞后含物的观察。 装置液:水合氯醛(水合三氯乙醛)、 稀甘油。
需要加热。
? 水合氯醛或乙醇装片
适用于观察菊糖。
装置液:水合氯醛或乙醇。
不可加热,否则菊糖溶解。
? 水合氯醛装置液的作用
使细胞膨胀, 便于观组织、细胞及其 内含物特征。
去除细胞表面或内部杂质。
增强透明度。
? 稀甘油装置液的作用
增加透明度。
防止气泡生成。
防止水合氯醛结晶析出。
(一)粉末制片技术和大黄的鉴别实验参考内容:
大黄粉末:淡黄棕色气微特殊,味苦涩。镜检:①淀粉粒,甚多,单粒,大多圆形,多角形或类圆形,脐点星状、十字形、三叉状、人字形、裂缝状或点状、大粒层纹明显。复粒较多,由2~7分粒组成,各分粒脐点明显。②草酸钙簇晶较大,极多,棱角大多短钝,有的边缘棱角不清晰。③导管主要为网纹导管,非木
化,也有具缘纹孔和螺纹导管。
掌叶大黄草酸钙簇晶 网纹导管
螺纹导管 淀粉粒
① 升华时应缓缓加热,温度过高,易使药粉焦化,在载玻片上产生焦油状物,影响对升华物的观察或检识。温度的控制可通过调整酒精灯火焰与石棉板的间距来实现。
② 样品粉末用量一般约0.5g ,过少不易产生足够量的升华物。
③ 可在载玻片上滴加少量水降温,促使升华物凝集析出。
④ 无金属片,可用载玻片代替。
微量升华:(检查游离蒽醌)可见黄色菱状针晶或羽状结晶。(因升华温度不同结晶形状各异)+碱→红色
(二) 徒手制片和麦冬横切面鉴别
徒手切片法:
● 指用刀片把植物新鲜材料切成薄片,封藏于水中即可观察(临时水装片),通常不经染色或简单染色。亦可经脱水与染色制成永久制片。
● 优点:临时水装片简单方便;不经化学药物处理,基本保留了植物活体的状态。 ● 材料不能太大,表面不超过3-5mm 。关键是平而薄,无需很完整,只需一角就够了。 ● 临时制片种类很多,包括涂片、压片等
● 一般用左手的大拇指、食指和中指3个手指拿住材料,使材料略突出在指尖之上,避免切片时割伤手指;用右手平稳地拿住刀片,把刀口放在经解剖刀削平的材料平面中间,轻轻地压住它,以均匀的动作,从刀片刀口下方起,斜着向后拉切。切时用臂力而不是腕力,且不必太用力,否则就不易切薄。
● 在切的过程中,决不能以刀片直接挤压材料,或以刀片来回拉割材料,并且要始终保持材料与刀片在水平状态,否则会由于切面偏斜而影响观察。
● 切片应该薄而透明,形状不要求非常完整,可用刀不同部位一次作几个切片,然后用蘸水的毛笔取下切片,置于盛水的培养皿中,备用。
● 柔嫩的器官,例如幼叶,难以直接拿住进行切片,需借助一些维持物。一般用胡萝卜根或土豆块茎作为维持物,把要切的材料夹于其中,进行切片,以利于把握操作。 ● 将切下的薄片放在载玻片上时,要先在玻片中央加一滴水,把材料放到水滴中,然后用镊子夹住盖玻片,将盖片的一侧先接触到载玻片中央的水滴,然后用镊子顶住盖片的另一侧,慢慢放下,使盖玻片与载玻片之间充满水,如有气泡,要掀起盖片,重新放置。
● 徒手制作的切片可以直接在光镜下观察,也可以经过简易的组织化学染色,以使结构看得更清楚,同时可观察到细胞各部分的化学成分。
● 常用的染料有:0.1%亚甲基蓝、0.5%~1%中性红或1%番红水溶液等。
● 染色的方法是将切片放在载玻片上后,用吸水纸吸去多余的水分,滴上一滴染料,经过1~2min 后,用水冲洗一下,盖上盖玻片,在显微镜下观察。
范文二:冬虫夏草子囊孢子的显微观察
冬虫夏草子囊孢子的显微观察 't用tEDIBLEFUNGl
组排列.重复3发.在相同的警理条件下互比每天采菇称重. 2结果与分析
2.1?菇生长情况从试验观察来看,?菇喷适当浓度的植物 动力2003,菌丝色泽洁白,浓密健壮,生长明显比对照好.生长期 喷植物动力2003的菇太肉厚,不易开伞,转潮快,菇质量好. 2.2不同时期曩麓效果试验结果经方差分析,处理间F一 8.07(F=3.6O),处理间差异达极显着其中菌丝期+子实体 期趾理表现最佳.其次是子实体期优于菌丝期经过产量差异比 较表明,1000mg/kg和800mg/kg处理产量均极显着高于对照 在菌丝期+子实体期处理小区的分别增产2982和27.47; 在子实体期处理小区的分别增产24.65和2I'l3.在菌丝期 喷施的也增产l7.87和l3.83(表I)
寰1?藉嚷矗檀枷动力2003小区试验产量
注:番期产量均为3十重复平均值
从小区试验的实际产量来看,不论那个时期喷施,产量均由 较低浓度向较高浓度呈上升趋势这说明用较高的浓度喷施效 果最好同时也说明.全程喷施比单独一个时期喷施效果好 2.3经济效益从试验结果.?菇喷施植物动力2003,可增收
,可得500元.扣除聩施 菇约25Okg/1OOm.菇售价按2~,/kg计
l0发(每次用1小包植物动力2003成本7.8元)成本78元.可 纯增收422元.因此,?菇喷施植物动力2003是一项花工少,成 本低.效益好的增产措施
3小结与讨论
1蘑菇在菌丝期,子实体期.菌丝期十子实体期喷施适当浓 度的植物动力2003稀释溶{葭,对?菇的质量和产量都有不同程
度的提高.经对3十喷施时期对比,增产效果表现为菌丝期十子 实体期>子实悻期>菌丝期.
3?2三种不同浓度,在本试验浓度范围内.表现为高浓度喷施 效果优于低浓度.至于最佳台适浓度范围有待进一步试验. 33应用植物动力2003作为?菇增产的辅助措施是可行而经 挤有效的施用方法简便易行又不增加菇农用工.成本低,效益 显着.可以推广应用.
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?《它用1t"》一辑部可譬如下书刊:94~食用菌》 生年6期价7元}97《食用蕾》2,6期价14元;98~食用菌》 合订奉价25元{99~食用蕾》空年价20元{2000~食用菌》4 ,6及增刊赞16元{2001~食用菌》皇阜价20元,奇订末28喜 元《食用菌百期文献索引》价23元;《香菇栽培学》价32 元;《花香菇高产优质栽培技术》价13元《中国竹荪驯化栽毫 培大观》价8元;《食用菌遗传育种债5元.敖汇《食用菌》荟 鳙辑部.附盲注明.地址:上海市北翟站2901.邮编:201106彦 船靶s撕靶船}$澌se靶毫?靶鲍9?}却?脚
冬虫夏草子囊孢子的显微观察
李玉玲
(青海省畜牧善医辩学院,西宁810003)
摘要奉文通过对青海省冬虫夏草子囊孢子的显强观察,发现 成熟的子囊孢子太多上,下粗细均匀,一般274~332pmx5.5, 68,有许多横隔,横隔隔鼓20,45间,横隔隔距约8.2, 10.5【?.冬虫夏草Cordycepssinensis(~erk.)Sacc.与其近肇斡甘肃 虫草C~rdycepsgansu~isZhang,WangetYah,翻孢虫草C~dy= cepsc5f.Zhang,YapgE.tLi和扭虫革Cordycepioidemv~ifler分 类地位上的真正关系需要从子囊孢子的动态发育和DNA的分子 水平上作进一步的观察研究才能璃定.
关?调冬虫夏草子囊孢子显微观察
文章簟号10008337(2002)0010--O1 冬虫夏草Cordycepssinensis(Berk.)Sacc,通称虫 草,是我国名贵的真菌药物和高级滋补品.主要产于青 海,西藏,四川,云南等地区的高原或高山地带.繁殖生 长在海拔3000m以上至雪线附近的高山灌丛和高山草 甸带.近年来,由于发现了它多种新的蓊理作用.研究和 开发都得到了更快的发展.本文主要报遣冬虫夏草子囊 孢子的显微观察结果.
1材料与方法
1,1标本来源标本采自青海省玉树州,采集的鲜标 本用清水洗去表面泥土后,待用.
l2制作标本片用尖细的解剞针从子座不同膨大程 度,子囊壳喙部可见的同一标本上挑取不同部位的子囊 壳于清洁的载片上,滴加少量乳酸石炭酸棉蓝染色液, 盖好盖片后,用铅笔的橡皮头部轻敲盖片使子囊壳破裂 放出子囊,染色30,60秒,用滤纸从盖玻片边缘吸去多 余染色剂,封片胶封片后,供显微观察用.
2结果与讨论
经过光学显微镜的观察结果发现,子囊其外围是颜 色较浅的子囊壁,顶端是子囊帽.成熟的子囊孢子大多 上,下粗细均匀,一般274,332~m×5.5,6,8,有许.am 多横隔,横隔隔数20,45间,横隔隔距约6.2, 10jm.成熟的子囊孢子中也有个别粗细不一,一般两 端略细,中间略粗.未成熟的子囊通常尾部突然变细,变 细部分约73pm,内部的子囊孢子看不到横隔.子囊帽 圆锥状钝圆收缩,底部与子囊外壁平顺光滑连在一起, 高约377pm,宽约92m,中心部有一突出的狭长短 柱子囊孢子成熟后,子囊帽内的狭长短柱消失. 目前分离自冬虫夏草的无性型种类繁多.国内外已
1r??1IEnIBI甩FUNGI
报道的冬虫夏草的无性型及与其相关的种类就涉及到 1o属l0余个种,这种现象在其它真菌中并不多
见"?.青海玉树虫草子囊孢子与其它虫草子囊孢子 的显徽观察,结果见表1
表1不一虫簟手?囊子墨鼍疆?簟暴
从表l中可以看出,冬虫夏草Cordycepssinens~ (Berk.)Sacc.与其近缘种甘肃虫草Cordycepsgansuen Zhang,WangetYan,阀孢虫草Cordycepscrassi, Zhang,YangetLi和拟虫草Cordycepioideusstifler虽 然在宏观上与冬虫夏草相似,但是从其子囊孢子的形状 和太小仍有很太的差异,它们在分类地位上的真正关系 需要从子囊孢子的动态发育和DNA的分子水平上作 进一步的观察研究才能确定.
?寿文献
陆鲁生.虫草.昆明?云南科拄出版社.1986 1敬一兵.
2龙勇诚动物学研究.1987?8t1).47 3邓叔群中国的真菌.北京:科学技术出版牡,1983 4Zha"gK.WagC.YahMlmMyculSocjalmn,3O:895,299. 1989
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十八个平菇菌株引种品比试验
杜适普石景尚橱先庭采晓希王瑞芹
(河南三门蛱市农生科学研究所,472143) 我国地城江阏.气候髓纬度不阿而差异较太.不同品种或阿 一
品种在不同气候条件下+台表现出不同柏性状.为使豫西晋东 地区的平菇栽培用户对其所用菌种的品种特性有详细了解从 而获得更好的经济效益,我们从不同纬度的多个地区引进18个 平菇品种+进行了品比试验现将结果报告如下:
1材料与方法
1.1供试品种?941,?印尼4号,@庆丰518(~l自甘肃玉门 科普菌种站)?841@ZP一1@怫罗里达,?商温g31,@侧5, @812@1012(引自福建三明真菌研究所):?新选1号,@ 5526,@F8(引自同南新乡市农科所菌种厂);@清丰1号,固广
温831(引自河南省农科院食用苗技术般务部);@平杂17(引自 上海农林公司);@9903,@南京1号(引自河南鹤壁市同心公 司).
母种采用PDA培养}原种培养基:麦粒87.本屑1().石 膏3,石灰适量pH7左右}栽培种墙荐基为:棉子壳88%.麦 麸l0,石膏,石灰各1.pH自然.都按常规方洼制作.栽培料 为i棉子壳9O,麦麸8%,石膏2%.石灰适量.pH7,7-5舍木 量65采用熟料袋栽方式.
1.2试验方法采用17em×33cm曲折角聚丙婿袭袋裁.每袋 装湿辩lkg(折台干辩400g).袋?套上醺一.打运气孔,棉花寡 口,高压灭菌2.5小时冷却.每个品种2O袋.赦无曹室内一螭单 点接种,置培养室内常规养菌.认真观察记录菌丝生长情提.现 蕾时间.子实体性状尊.计两期菇产量.以每袋平均值进行分析. 2试验结果
2.1备品种菌墼长势由表1可以看出平杂17,9903两菌株 吃辩最快.生长势矗强,菌丝粗壮.浓密洁白.长蔫袋时同最短为 38天;其次是印尼4号,941.{II丰1号和广温831菌株,菌丝长 蔫袋的时间分别为:39天和40天.庆丰518蕾株菌丝体虽然也 粗壮堆白.但其生长遵度最慢.长椭袋的时婀最长,需要55天. 裹4?试?锋?蕾生长?况(王)
苗株名称蔚墼长势满袋菌株名称董笪长势满袭
941枉壮,赦密,洁白4O1012鞍粗壮,洁白49
印尼4号较粗壮,赦密,洁白39新选1号粗壮,漱密洁白49 庆丰518较粗壮,维密,洁白555928粗壮,漱密洁白 841较弱,灰白.无光{荦48F8较辍壮,囊白52
ZP-1较粗牡,浓密,洁白47靖丰1号粗壮,雏密,洁白4O 佛里达较粗壮,浓密,蒲白51广沮831粗壮,谁密,洁白40 高温831较粗壮,洁白40平杂17粗壮,漱密,祷白38 侧8较韫壮,洁白499903韫壮,谁密,洁白38
812较粗壮,洁白49南京1号粗壮,洁白53 2.2子实体性状由表2可以看出:在】8个参试品种中.平杂 '
一
ll—
范文三:_冬虫夏草的分子鉴定方法
华西药学杂志 W C J ·P S
2017, 32(2) ∶ 205 207
作者简介 :段庆梓 (1984— ) , 男 , 硕士 , 从事药品质量控制的研究工作 。 Email :dqzcell@163.com *通信作者 (Correspondent author ) , Email :109250825@qq.com
冬虫夏草的分子鉴定方法
段庆梓 , 尚
柯 , 张 良 , 郑 萍
*
(成都市食品药品检验研究院 , 四川 成都 610045)
摘要 :目的
建立专属性强的冬虫夏草分子鉴定方法 。 方法
通过在 ITS 1区设计冬虫夏草的特异性引物 , 并进行不同条件
的优化试验 , 建立冬虫夏草的酶联免疫吸附法 (PCR) 鉴别体系 。 结果 建立的酶联免疫吸附法 (PCR) 体系对冬虫夏草有 164
bp 条带的扩增 , 而伪品无扩增现象 。 结论 所建立的 PCR体系能够准确 、 快速的鉴别冬虫夏草及其伪品 。
关键词 :中药材 ; 冬虫夏草 ; 伪品 ; 酶联免疫吸附法 ; 分子鉴别
中图分类号 :R28
文献标志码 :A
文章编号 :1006-0103(2017) 02-0205-03
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2017.02.029
Identification of Cordyceps sinensis by Molecular method
DUAN Qingzi , SHANG Ke , ZHANG Liang , ZHENG Ping *
(Chengdu Institute for Food and Drug Control , Chengdu , Sichuan , 610045P.R.China ) Abstract :OBJECTIVE
To identifiy Cordyceps sinensis was mostly focused on macroscopical , microscopic , or chemical characteris-tics lacking specificity.METHOD
The collected samples were amplified and sequenced before alignment.We designed highly specif-ic primers in ITS 1region and optimized PCRsystem in different conditions.RESULTS
The identification of PCRfor C.sinensis was
established , which could amplify 164bp bands of C.sinensis , while other species could not be amplified.CONCLUSION PCRsystem
has been successfully used to establish in this paper and it can effectively identify C.sinensis and its adulterants.Key words :Traditional Chinese medicinal meterials ; Cordyceps sinensis ; Adulterants ; ITS ; PCR; Molecular identification CLC number :R28
Document code :A
Article ID :1006-0103(2017) 02-0205-03
冬 虫 夏 草 为 麦 角 菌 科 真 菌 冬 虫 夏 草 菌
Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫 幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体 , 具有补肾
益肺 、
止血化痰的功效 [1]
。 由于冬虫夏草的人工培 育技术尚未突破 , 其来源仅依靠野生采挖 , 市场供应 量有限 , 因此 , 市场上流通的冬虫夏草掺杂 、 造假现 象屡见不鲜 。 鉴别冬虫夏草的方法有性状鉴别 、 显 微鉴别和理化鉴别 , 仅能实现冬虫夏草与单一伪品
的鉴别 , 专属性不强
[2-6]
; 而针对冬虫夏草的分子鉴 别研究也只是通过 DNA 片段的测序来比较相似度 , 该方法也不能形成鉴别的质量标准
[7-8]
。 核糖体 DNA 中的 ITS 区 (约 700bp , 被 5.8S rDNA 分割为 ITS 1和 ITS 2两个片段 ) 具有进化速率快 、 高度重复 、 且不易受药材外部环境和加工因素影响的特点 , 成 为植物系统发育和分类研究的重要分子标记 [9]
。 现对收集的样品进行 ITS 区 DNA 测序比对 , 并结合 GenBank 中已提交的相关序列信息 , 在冬虫夏草的 ITS 1区设计特异性引物 , 并通过不同退火温度 、 不同 模板量 、 不同酶量 、 不同循环数等一系列的耐受性试 验 , 建立了针对冬虫夏草的酶联免疫吸附法 (PCR) 鉴别体系 。 该方法能对所收集的 13批冬虫夏草实
现有效扩增 , 而 4批伪品 (亚香棒虫草 、 马脊贝 、 湖
北虫草和凉山虫草 ) 无扩增现象 , 从而实现冬虫夏 草与其伪品之间的鉴别 。
1
实验部分
1. 1
仪器 、 试药及设计
LS -96G PCR仪 (美国 Fisher ) ; PowerPac Basic
电泳仪 (美国 Bio -Rad) ; GelDoc 310凝胶成像仪 (美国 UVP ) 。 13批冬虫夏草中 8批 (C1-C8) 购自 成都中药材市场 , 其余 5批 (C9-C13) 及 4批伪品 (C14-C17) 均购自成都市金鑫中药饮片公司 , 冬虫 夏草及其伪品的样品信息见表 1; 新型植物基因组 DNA 提取试剂盒 (天根生物科技公司 ) ; Taq DNA 聚 合酶 (TransGen 公司 ) ; 引物 、
dNTP (上海生工生物工 程有限公司 ) ; DL1000Marker 、
Loading Buffer (大连 Takara 公司 ) ; Gold View 染料 (SolarBio 公司 ) ; 其余
试剂均为分析纯 。 对不同批次冬虫夏草及其伪品的 ITS 区进行测序比对 , 并结合 GenBank 中已提交的 冬虫夏草相关序列 , 在 ITS 1区设计了冬虫夏草的高 特异性引物 (表 2) 。
表 1冬虫夏草及其伪品的样品信息
Table 1Information of Cordyceps sinensis and fake
No.药材名 产地
C1-C8冬虫夏草 西藏拉曲
C9-C13冬虫夏草 青海玉树
C14亚香棒虫草 湖北
C15马脊贝 西藏林芝
C16湖北虫草 湖北
C17凉山虫草 四川凉山
表 2冬虫夏草 PCR鉴别的特异性引物
Table 2Specific primers for Cordyceps sinensis by PCRidentification
Primers 引物序列 (5’ -3’ ) 位置
CC -F1AGCGGAGGGATCATTATCGAGTCA upsteam
CC -R1GCTTGCTTCTTGACTGAGAGAT downstream
1. 2方法与结果
1. 2. 1冬虫夏草及其伪品 DNA 的提取 分别称取 C1-C17样品各 1g (均选取完整个体 , 包含子座和 虫体 ) , 置研钵中充分研磨成极细粉 , 各取 10mg 于 1.5mL 离心管中 , 依照新型植物基因组 DNA 提取 试剂盒说明操作 , 最终溶于 50μL 灭菌的超纯水中 , 于 -40? 保存备用 。
1. 2. 2特异性 PCR试验条件的优化 以冬虫夏草 (C1) 和亚香棒虫草 (C14) 、 马脊贝 (C15) 、 湖北虫草 (C16) 、 凉山虫草 (C17) 为代表性试验材料 , 对 ITS 1
的 PCR扩增体系进行不同退火温度 、 Taq 酶量 、 DNA 模板量及不同循环数的优化 。 分别设置退火温度为 55、 60、 65、 68? , 结果表明 :在 55 65? 范围内 , 冬 虫夏草正品能扩增得到 164bp 的亮带 , 68? 时扩增 条带开始变弱 ; 伪品在此范围内均未扩增 。 由图 1可见 :冬虫夏草引物的特异性较好 , 为保证 PCR反 应的重复性 , 确定 PCR退火温度为 65? 。 在 25μL 反应体系中 , 分别加入 0.1μL (0.5U ) 、 0.2μL (1 U ) 、 0.4μL (2U ) 、 0.8μL (4U ) Taq 酶 。 结果表明 :当 Taq 酶用量为 0.1μL 时 , 冬虫夏草有微弱的扩 增 ; 当 Taq 酶用量在 0.2 0.8μL 时 , 冬虫夏草均扩 增出 164bp 的亮带 ; 伪品均未扩增 , 由图 2可见 :冬 虫夏草引物的特异性较好 , Taq 酶不会引起假阳性 结果的产生 。 为了能够准确地判定实验结果 , 确定 25μL 体系中 Taq 酶用量为 0.2μL , 即 1U 。 对 25μL 的 PCR反应体系中模板 DNA 的用量进行考察 , 分别设置为 0.1、 0.3、 0.5、 0.7、 1、 2、 4、 8μL , 结果表 明 :模板量为 0.1 8μL 时均有 164bp 的扩增 , 空 白对照无扩增 。 但随模板浓度加大到 1μL 时 , 扩增 条带的亮度最高 (图 3) ; 随着模板浓度的继续增加 , 扩增效果逐渐变弱 , 并出现弥散的拖带现象 。 为防 止模板浓度过高抑制 PCR反应 , 选择 25μL 体系中 加入 1μL 作为最终模板浓度 。 分别选用 25个循环 和 30个循环进行考察 , 结果表明 :25和 30个循环 均有 164bp 的条带扩增 , 但 25个循环的扩增较弱 , 不易于识别 ; 而 30个循环能得到清晰的扩增条带 , 故将循环次数确定为 30个循环 (图 4)
。
图 1不同退火温度对冬虫夏草的鉴别
Figure 1Different annealing temperature for identification of Cordyceps sinensis
M.DL1000marker ; 1和 5为 55? ; 2和 6为 60? ; 3和 7为 65? ; 4和 8为 68? ; 1-4.冬虫夏草 ; 5.湖北虫草 ; 6.凉山虫草 ; 7.亚香棒虫 草 ; 8.
马脊贝
图 2不同 Taq 酶用量对冬虫夏草的鉴别
Figure 2Different Taq volume for identification of Cordyceps sinensis
M.DL1000marker ; 1和 5为 0.1μL ; 2和 6为 0.2μL ; 3和 7:为 0. 4μL ; 4和 8为 0.8μL ; 1-4.冬虫夏草 ; 5.亚香棒虫草 ; 6.马脊贝 ; 7.湖北虫草 ; 8.
凉山虫草
图 3模板量对冬虫夏草扩增结果的影响
Figure 3Effect of different DNA volume on identification of Cordyceps sinensis
M.DL1000marker ; 1 8分别为 0.1、 0.3、 0.5、 0.7、 1、 2、 4、 8μL sample ; 9
为空白对照
图 4循环数对冬虫夏草鉴别结果的影响
Figure 4Effect of different cycles on identification of Cordyceps sinensis
M.DL1000marker ; 1和 2为 25个循环 ; 3, 4为 30个循环 ; 1-4.冬虫 夏草
602华 西 药 学 杂 志 第 32卷
1. 2. 3
冬虫夏草 PCR鉴别方法的建立 在实验条
件优化和方法学考察的基础上 , 最终确定冬虫夏草 的 PCR鉴别方法 。 称取冬虫夏草 (完整个体 ) 约 1g , 置研钵中充分研磨成极细粉 , 再取 10mg 于 1.5
mL 离心管中 , 依照新型植物基因组 DNA 提取试剂
盒说明提取基因组 DNA , 以所提 DNA 为模板进行 PCR扩增 。 PCR反应体系为 :在 200μL 离心管中 进行 , 反应总体积为 25μL , 包括 PCR缓冲液 2.5μL , dNTP (10mmol ·L -1) 0.25μL , 鉴 别 引 物 (10
μmol ·L -1) 各 0.2μL 、 Taq DNA 聚合酶 (5U ·μL -1
) 0.2μL 和模板 1μL , 用无菌双蒸水补足反应体积 。 PCR反应参数 :95? 预变性 3min , 30个循环反应 (95? 、 30s , 65? 、 40s , 72? 、 30s ) , 72? 延伸 5min , 于 4? 保温 。 最后将 PCR反应液进行琼脂糖 凝胶电泳得到鉴别图谱 。
1. 2. 4
冬 虫 夏 草 正 、 伪 品 的 PCR鉴 别 结 果 用
“ 1. 2. 3” 项建立的 PCR鉴别方法对 13批冬虫夏草 样品及 4批伪品进行扩增 (图 5、 6) , 结果显示 :所有
的冬虫夏草 (C1 13) 均有 164bp 的扩增 , 且条带单 一 、 扩增效果较好 ; 而伪品均无任何扩增现象 。
因 图 513批次冬虫夏草的 PCR鉴别结果
Figure 5
PCRidentification of collected 13batches Cordyceps sinensis
M.DL1000marker ; 1-13.冬虫夏草 C1-C13; 14.
空白对照
图 6冬虫夏草及其伪品的 PCR鉴别结果
Figure 6
PCRidentification of Cordyceps sinensis and adulterants
M.DL1000marker ; 1.冬虫夏草 ; 2.亚香棒虫草 ; 3.马脊贝 ; 4.湖北虫 草 ; 5.凉山虫草
此 , 该方法能够准确的对冬虫夏草及其伪品进行区
分 , 在冬虫夏草的分子鉴别方面具有较强的专属性 , 能够准确地实现冬虫夏草与其伪品的鉴别 。
2讨论
分子手段作为动植物中药材的鉴别方法已经有
了很多的应用 ,
如 蕲 蛇 、 乌 梢 蛇 、 川 贝 母 等 [1]
。 因 此 , 很有必要开展对冬虫夏草的分子研究来提高其
鉴别的专属性 。 文中通过测序并设计冬虫夏草的高 特异性引物 , 进行了一系列 PCR扩增体系的优化试 验 , 最终确立了冬虫夏草的 PCR鉴别体系 。 该方法 能够对所收集的 13批冬虫夏草扩增出 164bp 的单 一条带 , 而 4批伪品 (亚香棒虫草 、 马脊贝 、 湖北虫 草和凉山虫草 ) 无任何扩增现象 ,
从而实现了对冬 虫夏草与其伪品之间的鉴别 。 文中所建立的冬虫夏 草 PCR分子鉴别方法与传统的性状 、 显微 、 理化鉴 别相比 , 体现了明显的专属性优势 , 还具有快速 、 简 便 、 可操作性强等优点 , 可以作为冬虫夏草药材的有 效鉴定方法 。 参考文献 :
[1]中华人民共和国国家药典委员会 .中国药典 [S ].北京 :中国 医药科技出版社 ,
2010.[2]
陈小秋 , 刘宝玲 , 赵中振 , 等 .冬虫夏草与其混淆品的性状及 显微鉴别研究 [
J ].中国中药杂志 , 2011, 36(9) :1141-1144.[3]
高明 , 王俊升 , 曾金玲 , 等 .冬虫夏草与几种常见伪品的鉴别 [J ].中药材 , 2011, 34(2) :213-216.
[4]朱国强 , 曹倩 .冬虫夏草及其混伪品的鉴别 [J ].中国中医药 信息杂志 ,
2003, 10(3) :46-47.[5]王钢力 , 石岩 , 魏玉海 , 等 .近红外光谱鉴别冬虫夏草道地药 材 [J ]
.中草药 , 2006, 37(10) :1569-1571.[6]宋文军 .野生冬虫夏草红外分析与鉴别 [J ].天津师范大学学 报 :自然科学版 ,
2007, 27(3) :16-18.[7]翁榕安 , 李树华 .冬虫夏草与其混伪品北虫草的 ITS 测序鉴别 [J ].湖南师范大学学报 :医学版 , 2008, 5(3) :42-45.[8]
徐丽 , 王小平 , 张雪峰 .冬虫夏草与其他品系虫草及其混伪品 的 18S rRNA基因测序鉴别研究 [J ].中国医药指南 , 2012, 10(12) :413-415.
[9]
王冲之 .中药质量控制的分子生物学方法研究 [D ]南京 :中 国药科大学博士学位论文 ,
2003.收稿日期 :2015-05-11
7
02第 2期 段庆梓 , 等 。 冬虫夏草的分子鉴定方法
范文四:冬虫夏草与其混淆品的性状及显微鉴别研究
冬虫夏草与其混淆品的性状及显微鉴别研究
1*12112
陈小秋,刘宝玲,赵中振,林文健,罗国伟,陈虎彪
(1.卫生署中医药事务部,香港;2.香港浸会大学中医药学院,香港)
[摘要]目的:提供一种既简单又方便的方法,来区分正品冬虫夏草及其混淆品。方法:采用性状鉴别法,观察虫草类的虫体及子座,以及粉末显微鉴别法。结果:性状鉴别方面,冬虫夏草的正品及混淆品可通过子座的有无或形状,菌膜、虫体气门的排列方式和虫体颜色等特征区分。显微鉴别方面,则可从虫体体壁细胞的表面纹理,及背、足部短刚毛的有无、长短、形状和排列方式等各方面鉴别其品种。结论:该方法简单易行,可用于鉴别冬虫夏草的正品及混淆品。
[关键词]冬虫夏草;正品;混淆品;鉴别;显微;短刚毛
冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌
Cordyceps sinensis (Berk.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆
[1]
虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。近年来
是一种常用的贵重中药材。由于其适生迅速发展,
卫生署中药主任刘宝玲教授鉴定。
2方法与结果2. 1
性状鉴别方法
大小、色泽和表面等特对5种虫草的虫体形状、
征进行鉴别。某些特征需采用实体显微镜观察。
2. 2显微鉴别方法
把5种虫草的虫体研磨粉碎成中粉,以水合氯醛试液封藏。用显微镜观察虫体粉末的体壁特征(《中国药典》2010年版一部附录等。照显微鉴别法
II C )项下的方法制片观察。2. 3性状鉴别研究2. 3. 1
冬虫夏草(样本号1 4)
虫体表面黄色至
30 40个。足8对,棕黄色。环纹明显,其中4对明显。气门浅黄色至黄棕色,点状,背部有1对近头部的气门较明显。子座上部稍膨大,顶端不圆钝。
2. 3. 2亚香棒虫草(样本号5 7)虫体表面浅黄20 30个。足8对,色至深棕色。环纹稍明显,不明显,大小相近。气门浅黄色至黄棕色,点状,多数,分布不规则。子座上部多膨大,顶端圆钝,有时可见2个或以上的分枝。
2. 3. 3凉山虫草(样本号8 9)
虫体表面黄棕色
环境的限制,生长在西藏、青海及四川西部,海拔3000m 以上,采收困难,生长年期长等原因,故现时仍难以人工培植,只有野生品种供应。又因其疗效
[1]
有补肺益肾,止血,化痰等功效,另现代药显著,
理研究指出,冬虫夏草还具有免疫调节、抗肿瘤、降
[2]
血压、抗衰老和抗病毒等多种作用,故现多作为保健用途。人们对其需求越来越大,但在资源短缺的情况下,价格不断上升。同时,冬虫夏草及其混淆一般较难以理化方法鉴别。本研究以品(虫草类),
来源于不同产地的虫草样本进行了性状及显微鉴别的研究。1
材料
Axioplan 2universal microscope 光学显微镜,Stemi 2000-C 实体显微镜,徕卡(Leica )IM 50软冬虫夏草C.sinensis 产自西藏及四川(1 4号
样本);亚香棒虫草C.hawkesii ,香港购,产地不明(5 7号样本);凉山虫草C.liangshanesis ,产自四川及云南(8 9号样本);新疆虫草C.gracilis ,产自新疆(10号样本);阔孢虫草C.crassispora ,产自云南(11号样本)。阔孢虫草由云南丽江市食品药品检验所黄云先主任鉴定;其余的虫草品种由香港
[稿件编号]20101012003[通信作者]
*
件。
至橙棕色。环纹不明显,去菌膜后,可见20 30个环纹。足8对,不明显。气门不明显。缺子座或细长,顶端不圆钝。2. 3. 4
新疆虫草(样本号10)虫体表面棕黄色至
30 40个。足8对,红棕色。环纹明显,其中4对
阔孢虫草(样本号11)
虫体表面棕黄色至
141点状,多数。缺子座。明显。气门棕黑色,2. 3. 5
,。、陈小秋,硕士,主要研究方向为中药材鉴别研究,
Tel :
明显。子座多卷曲,上部多明显膨大,基部较细,顶
端圆钝。
5种虫草的外形及区别见图1,2
。
2. 4
粉末显微鉴别研究
2. 4. 1冬虫夏草(样本号1 4)
虫体背部体壁细
胞浅黄色至黄色。具大量的丛生刺状毛;上部较窄,
基部较宽;顶端细尖。虫体足部具短刚毛,黄色至橙黄色,排列不规则;顶端钝圆,基部渐阔,有些上部略呈钩状。并具丛生微刺。
2. 4. 2亚香棒虫草(样本号5 7)
虫体背部体壁
细胞浅黄色至黄棕色,可见深棕色斑点及网状纹理,
侧面观呈紧密排列纵向延长的柱形细胞。虫体足部具短刚毛,黄色至棕黄色,排列整齐;棒状或基部渐型刚毛。阔;可见V-2. 4. 3凉山虫草(样本号8 9)
虫体背部体壁细
胞金黄色至褐黄色,沟纹明显;侧面观呈波浪纹排列。虫体足部具短刚毛,浅黄色至金黄色,排列不规则;顶端钝圆,基部较阔。2. 4. 4新疆虫草(样本号10)
虫体背部体壁细胞
黄色至棕黄色;表面观呈网状纹理;侧面观呈紧密排列纵向延长的柱形细胞。虫体足部具短刚毛,红黄色至棕黄色,排列不规则;顶端钝圆,基部较阔,有的呈椭圆形。
2. 4. 5阔孢虫草(样本号11)虫体背部体壁细胞金黄色,具有不规则的鱼鳞状纹理;侧面观呈层纹状或横向纹理。虫体足部具短刚毛,后者黄色至棕黄色,排列整齐;棒状或基部渐阔;有些上部
图1
冬虫夏草与其混淆品的外形
略呈钩状。
5种虫草显微特征区别见表2,4
。图3,
图2冬虫夏草与其混淆品的性状鉴别(环纹及气门)
·1142·
表2
部位特征体壁细胞表面观
冬虫夏草浅黄色至黄色
冬虫夏草与其混淆品的主要显微特征比较
亚香棒虫草
凉山虫草金黄色至褐黄色;沟纹明显呈波浪纹排列
新疆虫草黄色至棕黄色;呈网状纹理
呈紧密排列纵向延长的柱形细胞
浅黄色至金黄色;排列不规则;顶端钝圆,基部较阔
红黄色至棕黄色;排列不规则;顶端钝圆,基部较阔,有的呈椭圆形
黄色至棕黄色;排列整齐;棒状或基部渐阔;有些
上部略呈钩状
阔孢虫草金黄色;具有不规则的鱼鳞状纹理
呈层纹状或横向纹理
浅黄色至黄棕色;可见深棕色斑点及网状纹理
体壁细胞侧面观具大量的丛生刺状毛
呈紧密排列纵向延长的柱形细胞黄色至棕黄色;排列整齐;棒状或基部渐阔;可见V-型刚毛
短刚毛黄色至橙黄色;排列不规则;顶端钝圆,基部渐阔,有些上部略呈钩状
图4
图3
冬虫夏草与其混淆品的显微特征图(体壁细胞)
冬虫夏草与其混淆品的显微特征图(足)
3. 2显微方面
5种虫草的背部及足部,有着不同的特征。背
33. 1
讨论性状方面
部主要观察虫体体壁细胞的纹理及短刚毛或刺状毛
的有无;足部主要观察短刚毛形态及颜色。虫体特5种虫草中只有冬虫夏草有刺状毛,征,主要分布在背部及足部。另外,冬虫夏草的短刚毛排列方式与亚香棒虫草和阔孢虫草不同。
[参考文献]
[1]中国药典.一部[S ].2010:106.
[2]唐毅,陈仕江,马开森.名贵中药材冬虫夏草的真伪经验鉴别
[J ].重庆中草药研究,2008,52(2):1.
冬虫夏草与其他4种虫草属混淆品的主要区别
有4点。环纹:冬虫夏草与新疆虫草环纹明显。其他虫草的不太明显。足部特征:冬虫夏草和新疆虫草均为足8对,其中4对明显。气门:亚香棒虫草的气门为多数,冬虫夏草的背部有1对近头部的气门
点状,多数。子
较明显。而新疆虫草的气门棕黑色,座:。
143
[3]Hu Yani ,Kang Tingguo ,Zhao Zhongzhen.Studies on microscopic
identification of animal drugs' remnant hair (1)Identification of
Cordyceps sinensis and its counterfeits [J ].Nat Med ,2003,57(5),163.
Studies on macroscopic and microscopic identification of
Cordyceps sinensis and its counterfeits
CHAN Siutsau 1*,LIU Baoling 1,ZHAO Zhongzhen 2,LAM Markin 1,LAW Kwokwai 1,CHEN Hubiao 2
(1.Chinese Medicine Division ,Department of Health ,Hong Kong 852,China ;2.School of Chinese Medicine ,Hong Kong Baptist University ,Hong Kong 852,China )
[Abstract ]
Objective :To provide a rapid ,simple ,accurate and reproducible identification method from which Cordyceps
sinensis can be distinguished from other species.Method :To observe the larva and stroma of Cordyceps family with macroscopic identi-fication method ,and with powder microscopic identification method.Result and Conclusion :For macroscopic ,only stroma of C.inflated ,and un-obtuse at the tip ,the caterpillar annulations of C.sinensis and the C.gracilis is distinct ,about sinensis is mostly non-20-30,and feet of above two are 8pairs ,4of 8pairs are relatively distinct.The above appearance shows its unique characteristic.For microscopic identification ,only C.sinensis exists microtrichia ,the tip is pointed.The arranging order of stubby setae is irregular ,the tip is blunt while the basal is gradually broader ;the top of some setae bends slightly like a hook.
[Key words ]Cordyceps sinensis ;true product ;counterfeits ;identification ;microscopic ;stubby setae
doi :10.4268/cjcmm20110907
[责任编辑
吕冬梅]
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·1144·
范文五:中药显微鉴定
庄博:1145608
显微鉴定是一门专业技术,是用显微镜观察药材切片的组织构造或粉末的细胞及其后含物特征,描述显微鉴别点,制订显微鉴别依据。制片:一般作横切面片或粉末片,必要时可作纵切面片或解离组织片等。植物的根、根茎、藤茎、皮、木类药材,以组织切片为主;叶、花、果实、种子等以表面制片或粉末片为主;全草包括根、茎、叶、花、果实、种子等,采用组织制片或粉末片时,可选择1~2个有明显鉴别作用的特征;全草的粉末应以混合粉末为主。为配合中成药的显微分析,动物类及矿物类药材均以粉末片为主。
第一节:根类药材
被子植物的根,根据其维管系统,可分为双子叶植物根的初生构造、次生构造或单子叶植物根。 1. 双子叶植物根的初生构造(例:细辛)
表皮 皮层 内皮层 维管束鞘 初生韧皮部 初生木质部
特点:皮层宽,中柱小,木质部束及韧皮部束数目少,相间排列,初生木质部呈星芒状,一般无髓。 2. 双子叶植物根的次生构造(例:甘草) 周皮 皮层 次生韧皮部 形成层 次生木质部
特点:表层为木栓组织;皮层狭窄;韧皮部较发达或较狭窄;形成层环多明显;木质部由导管、管胞、木纤维、木薄壁细胞及木射线组成;中央大多无髓,少数有明显的髓部。
性状:粉防己质重坚脆,粉性,易折断;粉防己质坚硬,略粉性,不易折断
横切面:防己科粉防己 落皮层、木栓层→皮层(窄,稀疏散有石细胞;布有短棒晶及小方晶)→韧皮部(半圆形)→ 形成层(束内明显)→木质部(深入中心,数束)→射线宽,无髓部。
马兜铃科广防己 皮层石细胞断续成环,布有簇晶、短棒晶及小方晶;韧皮部狭长,向外侧渐尖;
形成层呈环状; 木质部2或多分枝; 射线较窄及髓部有异型维管束等区别于粉防己。
粉末: 粉防己 可见小方晶和小棒晶。淡黄色石细胞,孔沟、层纹明显。单粒淀粉直径至26μm ;复粒2~8分粒,分粒较小。木纤维为韧型纤维。另可见具缘纹孔及网纹导管,木薄壁细胞,木栓细胞等。
广防己 可见簇晶。 石细胞壁较厚,孔沟具分枝。 单粒淀粉直径至30μm ;复粒2~7分粒,分粒较大
等区别于粉防己。
湘防己:称钩风的根横切面具异常构造,有2~7轮同心性维管束环层。
木防己:呈圆柱形,屈曲不直,表面黑褐色。质较坚硬,不易折断。断面黄白色,无粉质。皮层石细胞连成环带,方晶众多而大
宜宾防己:髓部较大,三生构造额外形成层呈不规则多角形;皮层细胞偶见方晶。 汉中防己:无三生构造,皮层有间断的石细胞 群,偶见纤维群。 3、单子叶植物根类药材:
一般无木栓组织,其表皮细胞外壁有时增厚,也有表皮发育成数列根被细胞,壁木栓化或木化; 皮层宽广,占根的大部分,内皮层凯氏(带) 点通常明显; 中柱小,木质部束及韧皮部束数目多,相间排列成一圈; 中央髓部大多为薄壁细胞或细胞壁木化增厚。 麦冬:
表皮细胞1列或有残存,有的细胞分化成根毛;
根被细胞2~5列,类方形、类长方形或多角形,有的有纵长纹孔。
皮层宽广,14~27列细胞;外皮层细胞类长方形,外壁及侧壁微木化,其间夹有分泌细胞,含黄色油状物; 含草酸钙针晶束的粘液细胞类圆形,含细柱状草酸钙针晶束的粘液细胞显著小于一般细胞; 紧接内皮层为1(~2)列石细胞,长多角形或类多角形,内壁及侧壁增厚;
内皮层细胞类方形或类长方形,壁全面增厚,木化,胞腔类圆形,通道细胞壁薄,非木化。 中柱约占根的1/5~1/8; 中柱鞘1~2列薄壁细胞;
韧皮部束15~24个,与木质部束交替排列; 木质部内侧由木化细胞相连接; 髓薄壁细胞壁非木化。
麦冬 根被(2~5列,外有表皮及根毛)→外皮层(外、侧壁微木化,夹有分泌细胞)→皮层(针晶束;含柱晶的细小细胞)→石细胞环带(1~2列,内及侧壁增厚)→内皮层(全面增厚,有通道细胞)→中柱鞘(1~2列薄壁细胞)→韧皮部束及木质部束(15~28个,交替排列;木质部束与木化细胞相连)→髓。
湖北麦冬 有表皮无根被;有针晶无柱晶;内皮层细胞仅侧壁增厚;韧皮部束、木质部束为3~14个等区别于麦冬。 粉末鉴定:①麦冬 根被及表皮碎片;分泌细胞与外皮层细胞相间排列;草酸钙针晶及柱晶;石细胞三面增厚、一面薄,孔沟密,纹孔扁圆形或狭缝状、排列整齐;内皮层细胞全面增厚,纹孔类圆形;韧型纤维。
②湖北麦冬 粉末组成与麦冬的区别要点:无根被;有针晶无柱晶;内皮层细胞仅径向壁增厚。 ③石细胞及内皮细胞常被作为麦冬类块根粉末的专属性鉴别特征。
单子叶植物与双子叶植物根的主要区别点
单子叶植物:无形成层,韧皮部束和木质部束数目多,相间排成一圈,无射线,有髓 双子叶植物:多为次生构造(木栓层、韧皮部、形成层、木质部)。 4根的异常构造
1) 髓维管束(髓束):可由木质部及韧皮部组成,如广防己,在根中央,初生木质部内方有一个方向和外面的正常维管束相
反的异型维管束;也可能仅有韧皮部(桔梗科)。
2) 木间韧皮部:在正常维管束木质部的内方或外侧,有韧皮薄壁细胞群存在,这些薄壁细胞群完全被木质部分子所包围,
故称为木间韧皮部。如华山参、矮莨菪等有明显的木间韧皮部;秦艽根的上部,中柱被异常木栓环分隔成4束,每束木质部中心有一个韧皮薄壁细胞群。
3) 多环维管束:在中央维管束的外方,有多个同心性维管束环;这些三生维管束是在正常维管束停止活动后,由原中柱鞘
细胞产生新的形成层,形成薄壁组织后再分化成的维管组织。以后又在外方的薄壁组织(中柱鞘衍生组织)中产生新的形成层。如牛膝的中心部位是两个扇形的外韧型维管束,其外方又有多数小型的无限外韧型维管束,连续排列成数环,俗称“筋脉点”,一般川牛膝有异型维管束环常有7~9轮,怀牛膝的异型维管束环则是3~4轮,这是它们的区别点之一。又如商陆在正常维管束外,先后形成数个同心性形成层环,每形成层环外侧是韧皮部,内侧是木质部,束间均为薄壁细胞。也称“罗盘纹”
4) 复合维管束:三生维管组织出现在正常构造的皮层,中柱鞘,韧皮部或髓部中,散在或呈环状排列,其三生形成层均呈
小环状,对正常形成层而言是异心型的,如蓼科何首乌、大黄等。
(1)性状鉴定 注意月腺大戟饮片具大理石样纹理,是为异心型维管束;狼毒大戟为同心型维管束。
(2)横切面组织鉴定 月腺和大狼大戟具双于叶植物根次生构造的共同特点(由外向内):木栓层→皮层→韧皮部→形成层→木质部→木内异型维管束。由于出现木内异形维管束,故形成了根类药材的异常构造。 ①月腺大戟 异心型维管束(部分外方为木质部,内方为韧皮部,中间为额外形成层)。乳汁管直径23~58μm ,
含鲜黄色颗粒或团块状物。
②狼毒大戟 同心型维管束(首轮维管束,外方为木质部,内方为韧皮部;次轮向外为韧皮部,向内为木质
部,此后各轮交替变化)。乳汁管直径40~102μm ,含无色或白色乳汁。
海芋:天南星科,维管束星散状,有草酸钙针晶及簇晶,无乳汁管。 大狼毒:无异形构造,木纤维同心环状,有的末端分叉。 商陆:异常构造同心环状,无乳汁管,有的含草酸钙针晶。 沙参
落皮层厚68~358μm ,由木栓石细胞及木栓细胞组成;木栓石细胞环带1~3,木栓细胞2~7环。皮层窄。 乳汁管存在于韧皮部,常与筛管群伴生。菊糖结晶存在于少数导管或其附近的薄壁细胞中
脑纹样结构:本品三生构造起源于次生或三生韧皮部外侧的薄壁细胞,或三生韧皮部外侧与栓内层内侧薄璧细胞同时参与三生构造的形成,如此周而复始,使根变粗。由于在新的三生维管束形成同时,中央的次生维管组织及内侧的三生维管束仍在继续生长,导致相互间的拥挤及嵌列,形成沙参根紊乱的脑纹样结构。
粉末:有节乳汁管常连接成网状,直径12~56 μm 。菊糖结晶扇形、类圆形或不规则形。
第二节:根茎类药材
首先根据中柱、维管束的类型,区别其为蕨类植物、双子叶植物或单子叶植物的根茎。
根茎类药材常有分泌组织,如川芎、苍术、白术用油室,菖蒲、香附有油细胞,半夏、白芨、天麻有黏液细胞。少数有异常构造(如大黄)。
根状茎与块茎横切面组织构造类似,鳞茎类药材是以鳞叶入药,组织特殊,有鳞叶表皮和薄壁组织组成,鳞叶表皮可见气孔,维管束不发达(如贝母)。 1蕨类植物的根茎
表皮及下皮:细胞壁增厚,有特化的表皮毛(如骨碎补)或鳞片,下皮细胞数十列。 皮层基本薄壁组织:细胞壁薄,有细胞间隙,或生有间隙腺毛(如绵马贯众);
中柱:组成中柱的维管束散列于基本薄壁组织中;有原生中柱,木质部位于中心,韧皮部位于四周,外有中
柱鞘及内皮层(如海金沙根茎);双韧中柱,木质部呈圆筒状,其内外侧各有韧皮部及内皮层(如金毛狗脊);网状中柱,根茎横切面上可见数个分体中柱断续排列成环(如绵马贯众);
蕨类植物根茎的韧皮部由筛管与薄壁细胞组成,木质部只有管胞;其薄壁细胞中的内含物主要是淀粉粒-蕨淀
粉。
2、双子叶植物根茎的特点:
木栓层:最外层多为木栓组织,木栓细胞数列至数十列,细胞壁栓质化或木质化;有的木栓层内有石细胞(如
苍术、白术),少数无木栓层而保留着表皮层(如白前、白薇)。 皮层:可见根迹或叶迹维管束,皮层中还可见纤维或石细胞(如黄连)。
中柱:为无限外韧型维管束,环状排列,有的维管束外方有纤维或石细胞,称中柱鞘纤维或石细胞(如北豆
根、黄连等);韧皮部可见韧皮纤维(如升麻)。
髓部:中心有髓,主要是薄壁细胞,少数有石细胞(如三角叶黄连)。
1)大三叶升麻(关)根茎横切面:
后生皮层细胞外壁木栓化增厚,有的外壁和垂周壁呈乳头状增厚,突入胞腔。 皮层较宽。 中柱鞘纤维束有(10~)35~100个纤维,纤维多角形,壁稍厚。 维管束多达60个,环列;
韧皮部细胞径向排列较整齐;形成层不甚明显; 木质部导管较多,单个散在或2~7个成群。 射线宽2至多列细胞。 髓部宽大。
本品薄壁细胞含淀粉粒。
2)兴安升麻(北)根茎横切面:皮层有纤维束;维管束约30个;木质部导管较少;射线宽约至10余列细胞。
3)升麻(西)根茎横切面:偶见中柱鞘纤维束;维管束约22个;韧皮部束狭长尖,偏斜,木质部束宽狭不一。呈连珠状;射线宽8~40列细胞。髓部较小,偏心性。
粉末:大三叶升麻纤维管胞无色,后生皮层周壁瘤状增厚。兴安升麻一端明显分叉,偶有3叉分支。 落新妇:草酸钙簇晶 麻花头:菊糖多,呈伞形。 3单子叶植物根茎
单子叶植物根茎根据形状可分为根状茎类,如玉竹、石菖蒲、知母;块茎类,如天麻;鳞茎类,如贝母、百合等
石菖蒲
表皮:最外层多为表皮,有的可局部形成木栓组织(如姜),或皮层细胞木栓化形成后生皮层(如藜芦)。 皮层:大多较宽,有叶迹维管束,内皮层明显;另皮层可有纤维束或石细胞(石菖蒲 )分布,而白茅根的内
皮层切向壁上嵌有硅质块。
中柱:多散生有多数有限外韧型维管束(玉竹)或周木型维管束(金钱菖蒲);有的以上两种类型的维管束同
时存在,在维管束的周围常有纤维束鞘(如石菖蒲、高良姜)。
单子叶植物根茎的韧皮部由筛管与薄壁细胞组成,木质部由导管、木薄壁细胞及木纤维组成。
表皮细胞外壁增厚,棕色,有的含红棕色物。 皮层宽广,散有纤维束及叶迹维管束; 叶迹维管束外韧型,维管束鞘纤维成环,木化; 内皮层明显。
中柱维管束周木型及外韧型,维管束鞘纤维较少。
纤维束及维管束鞘纤维周围细胞中含草酸钙方晶,形成晶纤维。 薄壁组织中散有类圆形油细胞;并含淀粉粒 。
东贝母:上表皮角质栓少见,细小颗粒状,疏密不一,粉末中淀粉单粒广卵形。
双子叶植物根茎大多有木栓组织;皮层中有时可见根迹维管束;中柱维管束无限外韧型,环列;中心有髓。少数种类有三生构造。
单子叶植物根茎的最外层多为表皮,皮层中有叶迹维管束,内皮层大多明显,中柱中散有多数有限外韧型维管束或周木型维管束。较粗的根茎、块茎等的内皮层不明显。鳞茎的鳞叶表皮可见气孔。
第三节 茎类药材
茎的横切面组织片、纵切片、解离组织片及粉末制片
首先根据维管束的类型及排列,以确定其为双子叶植物茎或单子叶植物茎。 双子叶植物茎的特点:维管束无限外韧型,放射状排列,中央有髓。 单子叶植物茎的特点:维管束为有限外韧型,分散排列,中央无髓。 1双子叶植物草质茎:
表皮:由一层表皮细胞组成,有时可见气孔及毛茸,注意其类型可作为鉴别依据; 皮层:为初生皮层,其外侧常分化为厚角组织(如紫苏梗,在四个棱角下有厚角组织);
中柱鞘:草质茎的韧皮部外方,常有柱鞘纤维(如紫苏梗、天仙藤);或夹杂有石细胞(如天仙藤) ; 维管柱:为无限外韧型维管束,束中形成层明显;次生韧皮部大多成束状或板状,少数成筒状; 髓:较大,且大多由类圆形薄壁细胞组成。 广藿香(茎)横切面: 表皮为1列细胞,有非腺毛; 表皮下有木栓化细胞3~5列。
皮层外侧为4~10列厚角细胞,内侧薄壁细胞有大的细胞间隙,内有间隙腺毛,腺毛常纵向布列,在纵切面观较易察见全形,头部单细胞而大,内含黄色至黄绿色挥发油,柄短,1~2细胞; 薄壁细胞含草酸钙针晶。 中柱鞘纤维束环列;
韧皮部狭窄;木质部于四角处较发达; 髓部细胞微木化,含针晶及片状草酸钙结晶。
相同点:
? 有中柱鞘纤维束环列;维管束以茎的四角处较发达均,有明显的髓部。 ? 非腺毛单列性不分枝,有唇形科型腺毛。气孔均为石竹科型
广藿香粉末:腺鳞头部扁球形,8细胞;柄极短 叶横切面:海绵组织中有间隙腺毛,含草酸钙针晶。
2、双子叶植物木质茎
木栓组织:木栓细胞长方形或类方形,有的细胞壁加厚呈石细胞化 (如络石藤),有时木栓细胞脱落; 皮 层:多为次生皮层;
中柱鞘:常有纤维或石细胞存在(如关木通、桂枝);
韧皮部:由筛管和韧皮薄壁细胞组成,有的有纤维分布(鸡血藤), 有的有分泌组织分布(如大血藤); 形成层:多成环,明显;
木质部:有大直径的导管,有的肉眼能见,习称“针孔”(如关木通、 川木通);
射 线:木质藤茎的射线较木质茎的射线要宽(如关木通),木质 茎的射线较窄,细胞壁常木化(如桂枝);
髓:较小呈圆形或方形,有的髓部有石细胞或厚壁细胞(如络石藤)。 鸡血藤
木栓层为数列木栓细胞,有的含棕色物。
皮层窄,石细胞众多,胞腔内多含棕色物,石细胞周围有的细胞含草酸钙方晶。
维管系统异型,由韧皮部和木质部相间排列成数个偏心性环。每轮韧皮部外侧为石细胞与纤维束组成的厚壁细胞环带。韧皮部分泌细胞多。
髓部小,偏心,环髓分泌细胞较多。 粉末: 1、石细胞 2、纤维与晶纤维 3、草酸钙方晶 4、分泌细胞 5、棕色块 6、导管
3、 木质茎藤类的异常构造
如鸡血藤的韧皮部和木质部成层状排列数轮,正常的维管束圆柱形,偏于一方;由如海风藤的髓部具数个(多达7个)维管束;络石藤具内生韧皮部。
草质茎 木质茎 木质藤茎
最外层 表皮 木栓层 木栓层较厚
皮 层 为初生皮层 多为次生皮层
形成层 束中形成层明显 形成层环明显 次生韧皮部 呈束状或板状 呈筒状结构 呈放射状 次生木质部
射 线 髓射线宽 射线较窄,1~2细胞; 射线较宽,多列细胞 髓 部 较大 较小
5、单子叶植物茎: 单子叶植物茎的最外层为表皮,其内基本组织中散生许多有限外韧型维管束,无髓,如石斛。
第四节、皮类药材
皮(cortex )类生药包括植物的茎皮和根皮,主要指双子叶植物木本茎或根形成层以外的部分(极少数是裸子植物的茎皮),包括韧皮部、皮层、周皮。
1) 皮类生药的组织构造一般包括周皮、皮层、中柱鞘及韧皮部。(有的含有落皮层) 2) 粉末: 除了木部组织、叶肉组织外,其他各种组织都可能存在
木栓组织:杜仲的木栓细胞内壁增厚,细胞内含橙红色物;肉桂的最内层木栓细胞的外壁增厚,细胞内含棕色或红棕
色物;五加皮较老根皮中的木栓细胞壁增厚,形似石细胞
筛管:核桃楸皮中筛管的端壁及侧壁上均有许多筛域,土荆皮有筛胞,筛域在侧壁上
韧皮纤维:如肉桂的纤维多单个散在,壁厚且边缘凹凸不平,胞腔线形;黄柏的纤维呈鲜黄色,成束散在,有晶鞘纤
维;紫荆皮(南五味子的根皮)有嵌晶纤维
薄壁细胞:牡丹皮薄壁细胞中含草酸钙簇晶及淀粉粒、肉桂射线细胞中草酸钙小针晶、秦皮射线细胞中含砂晶、阴香
射线细胞中含方晶 杜仲
老树皮横切面:
落皮层较厚;
韧皮部极厚,有断续的石细胞层约5~6条; 每一石细胞层厚约8列细胞,石细胞壁极厚; 橡胶质团块以近石细胞环层为多见。
幼嫩树皮横切面:
无落皮层;
木栓细胞——内壁特厚;
皮层——约10余列切向延长的薄壁细胞;
中柱鞘部位——有石细胞群,常连续成环,并有少数纤维; 韧皮部——均是薄壁细胞;内侧多见不规则的橡胶质团块。
粉末:
石细胞:多成群,呈类长方形、类方形、类圆形、多角形或不规则形,直径32~80μm ,长至180μm ,壁厚薄橡胶丝:细长条状,稍弯曲或扭曲成团,直径8~16μm ,表面粗糙,显颗粒性。 木栓细胞:成群或单个散在,表面观呈多角形,壁不均匀增厚,纹孔细小而明显,胞腔内常含红棕色物; 此外,筛管分子的端壁具复筛板,侧壁上筛域较小
不匀,厚至28μm ,孔沟明显,有的分枝,有的胞腔内含橡胶质团块。
牡丹皮: 木栓层为4~8列木栓细胞,壁浅红色;
皮层为10余列切向延长的薄壁细胞,靠近木栓层的3~5列细胞壁稍厚;
韧皮部占绝大部分,射线宽1~3列细胞;
本品薄壁细胞含淀粉粒,有的含草酸钙簇晶。
第五节、木类药材
木(lignum )类生药是指木本植物树干、根形成层以内的木质部部分(主要为次生木质部),通称木材。
木材(次生木质部)的主要组成有轴向系统和径向系统两部分;轴向系统包括导管、管胞、纤维和木薄壁细胞;径向系统有射线细胞
1) 横切面:可以看到年轮、射线、导管、木薄壁细胞、木纤维及由它们之间不同的排列组合形成的各种纹理。
傍管薄壁组织:薄壁组织和导管在一起 包括翼状薄壁组织、环管薄壁组织、聚翼薄壁组织
离管薄壁组织:薄壁组织不一定和导管结合,包括星散薄壁组织、带状薄壁组织、界线薄壁组织
2) 径向纵切面:主要观察木射线的高度及类型;导管类型、导管分子的长度、直径及有无侵填体;木纤维大小、壁厚度及
纹孔等
木射线在径向纵切面呈横带状,与轴向的导管、木纤维、木薄壁细胞相垂直;射线的高度指射线细胞的列数;
射线细胞形状:横卧射线细胞 、直立射线细胞
凡射线由同一种细胞组成称同型细胞射线
凡射线由上述两种细胞组成称异型细胞射线
3) 切向纵切面
主要观察射线的宽度、高度、类型及排列成叠生射线,还是交互排列的非叠生射线;木射线切向纵切面上呈梭形,导管、木纤维的观察同径向纵切面。
射线的宽度指最宽处的细胞数
降香:横切面:木射线宽1~2列细胞,细胞径向延长
径向纵切面:射线呈横带状,高大多7~8细胞,可达15个细胞
切向纵切面:射线呈梭状,为同型射线,宽1~2列细胞,高大多7~8(~15)细胞,壁连珠状增厚。
间苯三酚-浓盐酸:木质化的细胞显示红色 苏丹Ⅲ:木栓化、角质化 钌红试液:黏液化红色
第六节、叶类药材
两种切片: 横切片:在距叶柄1/3~1/2处,通过主脉制横切片,观察表皮、叶肉与主脉三个部分的特征;
表面制片:分上下两个表皮,分为表皮、叶肉、叶脉三部分。
1)表皮:复表皮夹竹桃,禾本科植物叶的上表皮细胞有较大的运动细胞,如淡竹叶等;桑科植物如桑叶的表皮细胞较大,内含葡萄状钟乳体。爵床科穿心莲叶的表皮细胞内含螺旋状的钟乳体;唇形科薄荷叶的表皮细胞内含簇状橙皮苷结晶体;豆科番泻叶表皮细胞内则含黏液质。
2)叶肉分为:栅栏组织和海绵组织两部分。
3)叶脉为叶横切面中的维管系统。
叶中脉的基本特征: 叶片中脉横切面上、下表皮的凹凸程度在叶类的鉴定上有其特殊性。
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● 一般叶的中脉上、下表皮内方大多有数层厚角组织,但亦有少数叶的中脉部分有栅栏组织通过,如番泻叶。 中脉维管束通常为一外韧型维管束,木质部位于上方,排列呈槽状或新月形至半月形; 韧皮部在木质部的下方。 有的叶中脉维管束分裂成2~3个或更多个,维管束的外围有时有纤维等厚壁组织包围,如蓼大青叶、臭梧桐叶; 有的为双韧维管束,如罗布麻叶。
有的表皮细胞含粘液质,积聚于内壁。
叶肉为两面栅栏组织,均为1列细胞,上面的栅栏组织细胞较长(约150μm ),下面的较短(50~80μm );
海绵组织2~3列细胞,细胞类圆形,有的含草酸钙簇晶。
主脉上方有栅栏组织通过;
维管束的上下均有微木化的纤维束,并为晶纤维。
狭叶番泻(叶)横切面:与上种近似,仅韧皮部外侧纤维层断续,有的纤维较少。
显微定量鉴别:尖叶番泻脉岛数多(25-30),气孔指数少(11.4-13)。狭叶番泻脉岛数少(19.5-22.5)气孔指数多(17.1-20) 尖叶番泻(叶)表皮细胞1列,外被角质层,上下表皮均有气孔(平轴式)及单细胞非腺毛;
茶叶:分枝状石细胞、气孔较多环式、
穿心莲:叶主脉横切面:上、下表皮均含有圆形、长椭圆形或棒状钟乳体的晶细胞;叶肉栅栏组织一列细胞,贯穿主脉上方。
粉末:上下表皮均有增大的晶细胞,内含大型螺状钟乳体;气孔直轴式。
第七节、花类药材
花粉粒:有单粒花粉、复合花粉或花粉块
花粉粒的萌发孔——为花粉外壁上的开口或较薄的区域,是花粉萌发时花粉管伸出的地方。
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● 分布在赤道:大多双子叶植物的花粉粒具3个萌发孔,沟长轴与赤道轴垂直; 分布在极面:远极孔(禾本科),近极孔蕨类植物,远极沟如双子叶植物毛茛目的辛夷花、单子叶植物和裸子植物(一个萌发孔) 散布于花粉粒的整个表面:具较多的萌发孔(如石竹有9~18个); 个别无萌发孔(如 杨属植物)。另有异孔、变形孔
花粉壁——分内壁和外壁。
内壁由果胶质和纤维组成,较薄,柔软而富弹性,易被酸碱溶解。
外壁由花粉素和角质组成,较厚,坚硬,具纹饰或雕纹,有的具刺状突起(菊花、红花、金银花、旋覆花)、具辐射状雕纹(洋金花,子午向排列)
红花Flos Carthami:菊科植物红花Carthamus tinctorius L. 的干燥花。
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● 1. 表皮细胞表面观长条形,壁薄,微弯曲,有的细胞外壁凸出呈乳头状或短绒毛状,表面隐约可见纤细纹理;断面观类方形、类圆形或类长方形,有的可见乳头状突起。 2. 草酸钙结晶呈细颗粒状、圆簇状、梭形、类方形或不规则块片。 3. 绒毛状细胞(柱头顶端)大多断离。 4. 花粉粒偶有存在,圆球形,外壁两层近等厚,表面有稀疏的细小刺状雕纹,光切面观外壁边缘稍粗糙,有
时在外壁以内可见较厚的光亮环节。
番红花 Stigma Croci (Saffron):鸢尾科植物番红花Crocus sativus L.的干燥柱头。
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● 1. 表皮细胞表面观长条形,壁薄,微弯曲,有的细胞外壁凸出呈乳头状或短绒毛状,表面隐约可见纤细纹理;断面观类方形、类圆形或类长方形,有的可见乳头状突起。 2. 草酸钙结晶呈细颗粒状、圆簇状、梭形、类方形或不规则块片。 3. 绒毛状细胞(柱头顶端)大多断离。 4. 花粉粒偶有存在,圆球形,外壁两层近等厚,表面有稀疏的细小刺状雕纹,光切面观外壁边缘稍粗糙,有
时在外壁以内可见较厚的光亮环节。
第八节、果实类药材
大多数是果实、种子一起入药,如马兜铃、乌梅、枸杞等;少数药材虽然使用种子,但以果实的形式贮存、销售,临用时再剥去果皮,如巴豆、砂仁等。
果实由果皮及种子组成,由子房壁分化和增大形成的真果的果皮,可分外果皮、中果皮及内果皮。
1) 外果皮:果皮最外层组织,相当于叶下表皮。
通常为一列表皮细胞,外被角质层。有时在表皮细胞间嵌有油细胞,如五味子;表皮细胞有时有附属物存在,如具有毛茸,多数为非腺毛(乌梅、枸杞、覆盆子),少数具腺毛,如吴茱萸;也有的具腺鳞,如蔓荆子偶有气孔存在。有时其表皮细胞中含有色物质或色素,如川花椒;
2)中果皮:内、外果皮之间,相当于叶肉,多为薄壁组织,其间有维管束(外韧、双韧、维管柱);分泌组织(小茴香);结晶等内含物。
陈皮-方晶,枸杞子-砂晶,乌梅-簇晶,山茱萸-菊糖 五味子-淀粉粒
3)内果皮:相当于叶的上表皮,形态变化多。
a、一列薄壁细胞(浆果)五味子、枸杞子
b 、多列石细胞:乌梅、牛蒡子
c 、多列纤维,且上下层纤维相交错排列(连翘,覆盆子)
d 、纤维+石细胞:蒺藜
e 、镶嵌细胞层: 薄壁-小茴香(双悬果)厚壁-花椒 名解:以5~8个狭长的薄壁细胞互相并列为一群,各群以斜角
联合呈镶嵌状,称为“镶嵌细胞”(为伞形科植物果实的共同特征)
f 、为几层紧密排列的薄壁细胞及其突出生长到囊腔的汁囊所组成。如枳实等柑果。
g 、也有的内果皮细胞全为石细胞,如胡椒。
乌梅
1.
2.
3. 内果皮石细胞极多,单个散在或数个成群,淡绿黄色或几无色。呈类多角形、类三角形、三角卵形、类圆形或梭形,边缘稍不平整,有的一边或末端有凹凸,壁甚厚,纹孔较明显,孔沟细密,胞腔形状不规则,常含红棕色物。 种皮石细胞较多,棕黄色、金黄色或淡黄色,侧面观呈贝壳形、盔帽形、类长方形、类方形、类梭形或长条形,外壁呈半月形或圆拱形,层纹细密,孔沟明显。 果皮非腺毛无色或淡黄棕色,多为单细胞,平直或稍弯曲,先端长尖,少数钝圆,表面偶见螺纹交错的纹理,
有的胞腔具2~4菲薄横隔,胞腔内常充满黄棕色物。
杏或山杏,非腺毛基部膨大成头状或三角形,可见壁孔和孔沟。
苦李子,外果皮无非腺毛,表皮细胞中可见呈念珠状增厚的横隔,种皮石细胞淡黄色,孔沟深且明显。
桃肉,非腺毛近基部为柄状,具孔沟,易脱落,柄脱落后,毛茸作纤维状。
山茱萸
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第九节:种子类药材
种皮的结构取决于:①珠被的数目、厚度 ②维管束的排列 ③种子成熟过程中珠被在发育上的变化
豆科:多层性的双珠被形,发育为外种皮时,外珠被表皮发育为一列表皮栅状细胞(种脐区域为两列),具有黏液化能力。内
珠被消失或残存颓废层。
十字花科:外珠被外表皮黏液化、内表皮杯状细胞。(如芥子)
横切面观察点
1)种皮 有的有气孔(胡桃仁);
有的部分细胞形成非腺毛(牵牛子) 或全部分化为厚壁性的非腺毛(番木鳖);
果皮表皮细胞橙黄色,表面观多角形或类长方形,垂周壁连珠状增厚,外平周壁颗粒状角质增厚,胞腔含淡橙黄色物。 中果皮细胞橙棕色,多皱缩。 草酸钙簇晶少数。 石细胞类方形、卵圆形或长方形,纹孔明显,胞腔大 。
有的表皮由薄壁细胞与石细胞组成(杏仁、桃仁);
有的全为石细胞(五味子、天仙子、枸杞子、桅子);
有的表皮为粘液细胞组成的粘液层(芥子(并有下皮)等十字花科种子、车前子);
表皮以下的组织:栅状细胞层、油细胞层、色素层、石细胞、纤维、色素层
2) 胚乳
少数种类的外胚乳不规则地错入内胚乳中,形成错入组织,如槟榔是种皮和外胚乳错入内胚乳,肉豆寇是外胚乳错入内胚乳。 粉末特征:
如决明子为表皮栅状细胞,表面观呈多角形,稍皱缩;断面观呈狭长方形,壁稍厚,有上下两条光辉带。
枸杞子为石细胞,表面观呈不规则形,垂周壁波状弯曲并增厚;断面观内壁及垂周壁呈谷形增厚。
糊粉粒有的拟晶体较大(肉豆蔻) 、糊粉粒中含细小簇晶(小茴香)。
栅状细胞(豆科,牵牛子,菟丝子)
石细胞(五味子、枸杞子、苦杏仁)
硅质块(槟榔、砂仁)
色素细胞(豆蔻、砂仁)
阳春砂:横切面
● ⅰ. 假种皮为长形薄壁细胞,部分已脱落。
● ⅱ. 种皮表皮细胞1列,径向延长,壁厚,外被厚角质层。
● ⅲ. 下皮细胞1列,充满棕色物质。
● ⅳ. 油细胞1列,切向延长,内含油滴。
● ⅴ. 色素层为数列切向延长的薄壁细胞;种脊处有维管束。
● ⅵ. 内种皮为1列径向延长的细胞,内壁及径向壁增厚,非木化,胞腔内含硅质块。
● ⅶ. 外胚乳细胞略成圆柱形;
● ⅷ. 内胚乳细胞略小,多角形,均含淀粉粒。
● ⅸ. 胚位于中央,细胞多角形而小,内含油状物与糊粉粒
第十节:全草类 藿香
第十一节动物类药材
1、 肌肉构造
海马:横纹肌纤维横断面类长方形或长卵圆形,表面平滑可见细点或裂缝状空隙。肌纤维纵断面直径45~144μm,有细密横纹、明暗相间,横纹平直或微波状(不明显) (全体)
蛤蚧:横纹肌纤维横断面类三角形,也有类圆形或类方形。肌纤维纵断面注意横纹呈波峰状(与其横断面呈三角形有关),也有平直或微波状的。 (除去内脏)
地龙:斜纹肌纤维无色,少数淡棕色。肌纤维易散离或相互绞结,大多弯曲或稍平直,直径4~36(~66)μm,边缘不平整,明、
暗相间纹理不明显。 (除去内脏)
2、组织构造 选择
鹿茸:骨碎片棕色、淡黄色或淡灰色。布有较多的骨陷窝,大多呈类圆形或类梭形,大小及排列方向不一,其边缘骨小管呈放射状,较疏。 (雄鹿未骨化密生茸毛的幼角)
乌蛇:骨碎片近无色或淡灰色。呈不规则碎块,骨陷窝长梭形,大多同方向排列,骨小管密而较粗 除内脏全体
海马:骨碎片无色或淡灰色。呈不规则形碎块,骨陷窝呈长条形、裂缝状或类长圆形,排列不规则,边缘骨小管较疏
3、 皮肤及毛发构造
表皮、真皮(有血管)、皮下层
蛤蚧皮肤碎片近无色或淡黄色。表面观细胞界限不清楚,布有棕色或棕黑色色素颗粒,常聚集成星芒状 有隆起
乌蛇皮肤表面观密布棕色或棕黑色色素颗粒,常连成网状、分枝状或聚集成团 ,鳞片具纵直条纹
● 鹿茸(简答)
● ①毛茸 多碎断。毛干表面薄而透明的扁平细胞作复瓦状排列的毛小皮所包围,细胞游离缘短剌状,指向毛
尖。皮质含棕色或灰棕色色素。髓质灰棕或灰黑色,断续或无。毛基部膨大作撕裂状。
● ②表皮角化梭形细胞少,多散在,无色或淡黄色,具折光性;呈类长圆形,略扁,侧面观梭形;直径9~10μm,
长36~77μm 。
4、 角
● 犀角(角质纤维角, 毛发结构)
● 空角(洞角,骨心塞和角鞘----牛、羊角)
● 茸角(叉角,毛发、皮肤和骨---鹿茸)
犀角:多见同心单元,每单元中央为腔隙,周围同心纹理 水牛角横切面波状纹理
羚羊角:角顶部组织波浪起伏明显,峰部有束。束的皮层细胞或基本角质细胞无色透明。
5、 体壁(简答)
全蝎: ① A体壁碎片为几丁质外骨骼,棕黄、绿黄色或黄绿色,有光泽。
B 外表皮表面观呈多角形网格样纹理,表面密布细小颗粒,可见毛窝、细小圆孔及淡棕色或近无色的瘤状突起。
C 断面观外表皮绿黄色,内表皮无色,有横向条纹,内、外表皮纵贯较多长短不一的微细孔道。
②刚毛黄棕色,多碎断。先端锐尖或钝圆,基部稍窄、色淡,体部中段直径8~40μm ,腔壁较平直,具纵直纹理,髓腔
细窄。
③横纹肌纤维近无色或淡黄色,多碎断。明带较暗带宽,明带中有一暗线,暗带有致密的短纵纹理;有的明带与暗带
近等宽,排列细密,并有较长的纵条纹
蜈蚣: A 体壁碎片黄棕色或淡黄棕色。
B 外表皮表面观有多角形网格样纹理,排列整齐,其下散布细小圆孔,有的(在腹部)细小圆孔边缘微拱起,单个散布
或2~4个集成群,大小不一,排列不规则;
C 横断面观外表皮棕色,有光泽,有的隐约可见纵纹理,内表皮无色,有横向条纹,内、外表皮中纵贯较多长短不一的
微细孔道
僵蚕:①菌丝体存在于体壁或淡棕色、半透明结晶块中。菌丝近无色,细长,直径1~5μm ,相互盘缠交织
②气管碎片,具棕色、深棕色或无色的螺旋丝,宽1~5μm ,螺旋丝间有1~3条极细的波状纹理。
③横纹肌纤维近无色或淡黄色,横向波状纹理隐约可见。
④表皮黄白色或灰白色。表面有极皱缩的网格样纹理及纹理突起形成的小尖突,并可见毛窝。
⑤刚毛黄色或黄棕色,中部直径11~45μm ,表面光滑,腔壁内缘不整齐。
⑥类结晶体,无色,类方形、类长方形或不规则形,直径4~31μm ,长约至40μm ,散理于组织内或聚成群。
⑦脂肪油滴,淡黄色、散在。
⑧桑叶组织(未消化物),可见表皮细胞、气孔,钟乳体,叶肉组织、草酸钙方晶和簇晶等。
中成药的鉴别:
● (1)散剂、胶囊剂:用刀尖或牙签挑取少量粉末,根据要求装片观察。
● (2)片剂:刮取全切面或用乳钵研碎取样装片。
● (3)水丸:用乳钵研成粉末后取少量样品直接透化装片。
● (4)蜜丸:将药丸切开,从切面中央挑取少量装片,或按四分法刮取不同部位装片。必要时还可配合用水溶
解蜜丸,过滤干燥后装片或将蜜丸切碎,加水搅拌洗涤后,置离心管中离心分离沉淀,如此反复处理除去蜂
蜜后透化装片。
一般采用斯氏液或蒸馏水装片观察淀粉粒;用水合氯醛液加热透化后观察细胞组织特征;用70%乙醇装片或水合氯醛不加热观
察菊糖。
小儿惊风散
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● 一、处方 全蝎130g 僵蚕(炒)224g 雄黄40g 朱砂60g 甘草60g 二、性状观察 本品为桔黄色或棕黄色的粉末;气特异,味甜、咸。 三、显微鉴别 1.体壁碎片淡黄色或绿黄色,外表皮表面有网格样纹理、圆孔口及圆形毛窝,并密布细小颗粒。刚毛棕褐色,髓质深红色,埋于皮下的毛基部淡黄色。(全蝎Scorpio )。 2.表皮碎片黄色或黄白色,表面具极皱缩的网格样纹理及纹理突起形成的小尖突;有类圆形毛窝。菌丝体存在于体壁,
菌丝细长无色。气管壁碎片有棕黑色或黄棕色螺旋丝,平行排列,螺旋丝间有波线1~2条。刚毛黄棕色,髓质红棕色。
(僵蚕Bombyx Batryticatus)。
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● 3.不规则形或多面体形碎块棕黄色,具金刚样光泽,半透明,边缘暗黑。(雄黄Realgar )。 4.不规则形碎块或细小颗粒深红色,有金刚样光泽,半透明,边缘暗黑。(朱砂Cinnabaris )。
5.纤维束淡黄色,其周围细胞含草酸钙方晶,形成晶纤维,含晶细胞壁不均匀增厚,微木化。具缘纹孔导管较大,直
径约至95μm,具缘纹孔较密,椭圆形,纹孔口线形。草酸钙方晶类双锥形、类多角形或长方形,直径约16μm。(甘草
Radix Glycyrrhizae)。
六味地黄丸
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● 【处方】 熟地黄160g 山茱萸(制)80g 牡丹皮60g 山药80g 茯苓60g 泽泻60g 【性状】 本品为棕黑色的水蜜丸、黑褐色的小蜜丸或大蜜丸;味甜而酸。 【显微鉴别】 淀粉粒三角状卵形或矩圆形,直径24~40μm ,脐点短缝状或人字状;( 山药) 不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色,直径4~6μm 。(茯苓) 薄壁组织灰棕色至黑棕色,细胞多皱缩,内含棕色核状物。(熟地黄) 草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中,有时数个排列成行。( 牡丹皮) 果皮表皮细胞橙黄色,表面观类多角形,垂周壁略连珠状增厚 (山茱萸) 薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;内皮层细胞垂周壁波状弯曲、较厚、木化、有稀疏细孔沟。(泽泻) 乌蛇(酒制)20g 蜈 蚣 10g 地 龙 10g 胆南星 10g 牛 黄 3.44g 冰 片 1.75g防 风 30g 威灵仙 20g 骨碎补(炒)20g
海风藤 20g 牛 膝 20g 麻 黄 15g 桂 枝 15g 细 辛 10g 草乌(制) 20g 附
子(制) 15g 白附子(制)10g 当 归 15g川 芎 30g 红 花 15g 桃 仁 15g 赤 芍 30g 乳香(制) 20g 熟大黄 15g黄 芩 30g 熟地黄 30g 党 参 30g 白术
(炒) 20g木 香 20g 菖 蒲 15g香附(醋制)20g 草豆蔻 30g 茯 苓 15g 赭 石 20g 散风活络丸
一、以草酸钙结晶为主
1、针晶束长约至90μm ,存在于皱缩的粘液细胞中,粘液细胞长约至95μm 。(胆南星)
2.针晶束长100~116μm ,存在于类圆形或长圆形的粘液细胞中,粘液细胞长约至166μm 。(白附子)。
3.针晶长10~32(~56)μm ,不规则地充塞于薄壁细胞中,薄壁细胞较大。(炒白术)。
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4.草酸钙砂晶充塞于薄壁细胞中,含晶细胞常与石细胞连结;石细胞类圆形、类方形或类长圆形,直径23~58(~78)μm,胞腔中亦含砂晶或暗棕色物。(海风藤)。 5.草酸钙结晶直径约至7μm,散在于薄壁细胞中。(牛膝)。 6.草酸钙结晶呈细小颗粒状,布满于表皮细胞的外壁;角质层厚约至18μm;内陷气孔长圆形,侧面观保卫细胞呈电话筒状。纤维细长,壁厚,亦布满草酸钙细小方晶,形成嵌晶纤维。(麻黄)。 7.草酸钙砂晶存在于根下皮细胞中,细胞表面观类长方形,壁细波状变曲,其间有分泌细胞,类圆形,壁薄,微弯曲,含黄绿色粒状分泌物。(细辛)。 8.草酸钙簇晶直径7~41μm,存在于壁稍弯曲细胞中,常数个纵向排列成行,有的含晶细胞较小或皱缩,内含1至数个簇晶。(赤芍)。
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● 9.草酸钙簇晶大,直径70~106(~124)μm,棱角宽钝。(大黄)。 10.草酸钙方晶存在于纤维束周围的细胞中,形成晶纤维,含晶细胞壁不均匀增厚,木化。分泌细胞类圆形,分布于
薄壁细胞间,直径20~42μm,内含橙黄色或棕红色物。(石菖蒲)。
二、以石细胞为主
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● 11.种皮石细胞橙黄色或淡黄色,多单个散在,侧面观贝壳形、类圆形或类方形,直径25~158μm,底部壁薄,孔沟、纹孔较密,拱起部分壁厚,层纹明显。(桃仁)。 12.木栓石细胞近无色,单个散在或数个成群,多角形或斜方形,一边或一端较尖,直径25~50μm,长约至100μm,孔沟较稀疏。(党参)。 13.石细胞无色,类长方形,直径约至100μm,壁厚5~16μm,层纹明显,纹孔圆形、斜裂缝状或人字形。(制附子)。 14.石细胞黄色,类长方形或方形,直径约至98μm,壁厚2~12μm,孔沟较稀而宽,具不规则条纹状、网状裂纹,纹孔
较大,孔沟较稀而宽。(制草乌)。
三、以纤维或导管为主
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● 15.韧皮纤维色淡,多单个散在,梭形,直径15~38(~48)μm,壁甚厚,木化,具裂纹,胞腔线形。(桂枝)。 16.韧皮纤维淡黄色,单个散在或数个成束,常与薄壁细胞相连,梭形,两端略尖或钝圆,偶见短分枝,直径13~33μm,长51~200(~271)μm,壁甚厚,木化,孔沟细密。(黄芩)。 17.木纤维黄色,多成束,长梭形,末端倾斜且细长,直径15~23μm,孔沟细密,纹孔十字形、人字形。网纹导管分
子短,直径24~74(~106)μm,网孔细长缝状。(木香)。
18.网状螺纹导管直径10~25μm。(川芎Rhizoma Chuanxiong)。
19.纤维管胞淡黄色,数个并列或单个散在,长条形,直径9~29μm,壁较厚,边缘不规则波状弯曲,具缘纹孔排列不
规则,胞壁具螺状增厚的纹理。(威灵仙Radix Clematidis)。
四、以分泌组织为主 ● ●
● 20.分泌细胞长管状,存在于花冠碎片中,直径5~46(~66)μm,内含黄色或红棕色物,有时可见小方晶,直径约至5μm,
周围细胞多皱缩状弯曲。花粉粒深黄色,类圆形、椭圆形或橄榄形,直径41~60(~71)μm,外壁表面有齿状突起,具
3萌发孔。(红花)。
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21.油管多碎断,内含金黄色或黄棕色条块状分泌物,直径80~112μm,其周围无色薄壁细胞多皱缩。(防风)。 22.分泌细胞类圆形,直径40~50(~70)μm,内含黄棕色或棕色分泌物,其周围7~8个细胞作放射状排列。(香附)。 23.纺锤形韧皮薄壁细胞直径15~34μm,表面有微细斜向交错的网状纹理,有的具菲薄横隔。(当归)。 24.鳞片碎片黄棕色或红棕色,体部细胞长条形或不规则形,直径25~50(~75)μm,鳞片边缘具两细胞并生的毛状物,壁微弯曲。(骨碎补)。 25.内种皮杯状细胞成片,黄棕色或红棕色,表面观多角形,直径12~25μm,壁稍厚,非木化,胞腔内含硅质团块。(草豆寇)。 五、其它植物细胞组织
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● 26.薄壁组织淡灰棕色或深棕色,细胞多皱缩,含黑棕色类圆形核状物,直径6~13μm。(熟地黄)。 27.菌丝无色,细长,直径3~8μm。多糖团块无色,不规则分枝状,末端钝圆。(茯苓)。
六、动物组织
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● 28.骨组织碎片近无色,表面具微弯曲的细密纹理,骨陷窝梭形或类圆形,大小不一,骨小管较细而密。横纹肌纤维淡黄色或近无色,侧面观条块状,有细密横纹。(乌梢蛇)。 29.体壁碎片淡黄色或近无色,表面有多角形网状纹理、细小圆孔。气管碎片具棕色的螺旋丝,宽1~5μm,丝间布有
无色点状物。(蜈蚣)。
● 30.斜纹肌纤维无色,易散离或绞结成束,稍弯曲,直径3~8(~38)μm,边缘微波状。(地龙)。
七、非细胞组织
● 31.鲜黄色或棕黄色色素与淀粉粒粘合成团,有的淀粉粒染成黄色。(人工牛黄)。
● 32.淡黄色油滴与小颗粒聚集成团,遇苏丹Ⅲ试液油滴显红色。(乳香)。
● 33.不规则块片暗棕红色,边缘不整齐。(赭石)。
● 34.升华物呈不定形无色片状结晶,遇香草醛浓硫酸试液显紫红色。(冰片)。