王子不爱灰姑娘
6-810090
本卷包括40小题，1-30小题每题1分共30分；31-40小题每题2分共20分。 . 红细胞内铁含量降低时，细胞内的血红蛋白含量也减少，这个事实说明铁的作用是 A 以化合物形式存在 B 红细胞的结构物质
C 调节离子平衡 D 调节渗透平衡和pH值 2. 下列与体液免疫有关系的细胞结构是
?细胞膜 ?线粒体 ?内质网 ?高尔基体 ?中心体 ?细胞核 ?核糖体 A ?? B ??? C ???? D ?????? 3. 人体细胞中的水除了充当溶剂外。也能参与化学反应，例如参与 A 光合作用 B 呼吸作用 C 脱水缩合 D 过氧化氢的分解 4. 乳酸杆菌的全部遗传信息储存于它的
A 细胞核中 B 脱氧核糖核苷酸中 C 拟核与质粒中 D DNA和RNA分子中 5. 玉米的叶肉细胞、根尖成熟区表皮细胞、维管束鞘细胞共有的一组细胞器是 A 线粒体和中心体 B 叶绿体和线粒体
C 液泡和叶绿体 D 线粒体和核糖体
6. 关于人体内蛋白质的叙述，错误的是
A 合成蛋白质的氨基酸全部为必需氨基酸 B 蛋白质也可被氧化分解释放能量 C 蛋白质经分解后可生成必需氨基酸 D 有些蛋白质具有调节新陈代谢的作用 7. 人体细胞在正常分化过程中，一般不会出现的是
A 细胞形态发生改变 B 细胞器数量的改变
C 细胞内m RNA的种类、数量不同 D 细胞核内遗传物质改变 8. 当病人患癌症后，癌细胞容易扩散和转移的主要原因是
A 在适宜条件下，癌细胞能够无限增殖 B 癌细胞的形态和结构发生变化
C 癌细胞细胞膜上的糖蛋白等物质减少 D 癌细胞内的水分减少 9. 人体出现组织水肿的原因可能是
?血浆中蛋白质含量过少 ?血液中尿素含量过高 ?血糖含量过高 ?淋巴循环受阻
A ?? B ?? C ?? D ?? 10. 辅酶II形成还原型辅酶II的反应方程式为
A．NADP
＋－＋－＋＋2e十H?NADPH B．NADP＋2e十H?NADPH
－＋－＋C．NADP+e+H?NADPH D．NADP十e＋H?NADPH
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11. 圆褐固氮菌是一种能在土壤中独立进行固氮的微生物，其新陈代谢的类型属于
A 自养需氧型 B 自养厌氧型 C 异养需氧型 D 异养厌氧型 12. 柴茉莉的遗传信息储存在它的
A DNA和RNA分子中，在细胞核与细胞质中
B DNA分子，在细胞核与细胞质中
C DNA或RNA分子，在细胞核或细胞质中
D DNA分子，在细胞质中
13. 下列变异属于染色体结构的变异的是
A 镰刀型细胞贫血症 B 能分泌胰岛素的大肠杆菌 C 人类的猫叫综合症 D 人类的21三体综合征 14. 用15N标记某种碱基，让其进入分裂旺盛的细胞中，起初出现在细胞核中，然后逐渐
转移到细胞质基质和核糖体上。一般地说，不被标记的碱基可能是 A 胸腺嘧啶 B 鸟嘌呤 C 腺嘌呤 D 尿嘧啶 15. 黄色圆粒和绿色圆粒豌豆杂交，其子代的表现型统计结果如右
图所示，则杂交后代中新表现型个体占的比例为
A 1/3 B 1/4
C 1/9 D 1/16
16. 如图表示某细胞中一条染色体上DNA含量的变化情况,有关该图的说法中不正确的是
A该图可表示有丝分裂过程中一条染色体上DNA
含量的变化
B 该图可表示减数分裂过程中一条染色体上DNA
含量的变化
C c点表示细胞分裂后期，着丝点一分为二
D e点时的细胞数目是a点时的两倍
17. A和a为控制果蝇体色的一对等位基因，只存在于X染色体上。在细胞分裂过程中，发生该等位基因分离的细胞是
A 初级精母细胞 B 精原细胞 C 初级卵母细胞 D 卵原细胞 18. 右图是一个哺乳动物细胞的示意图，它属于
A 精巢中的细胞 B 受精卵
C 骨髓干细胞 D 雄配子
19. 生长素类似物不宜用于
A 苹果的疏花疏果 B 培育无子黄瓜 C 单倍体育种 D 除去水稻地里的双子叶杂草
20. 多细胞动物进行细胞之间的信息传递，可分为直接传递和间接传递两种。下列哪类物
质在细胞之间起间接传递信息的作用？
A 维生素 B 激素 C 单糖 D 脂肪 21. 下列关于兴奋在神经元间的传递的叙述中，错误的是
A 只能从一个神经元的轴突传递到另一神经元的细胞体或树突
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B 兴奋到达突触小体时，突触小泡释放递质，递质进入突触间隙 C 递质到达突触后膜，可以引起突触后神经元的兴奋或抑制 D 依靠形成局部电流回路进行神经元间的兴奋传递
22. 当细菌外毒素再次侵入人体后，主要是体液免疫发挥作用，其“反应阶段”和“效应
阶段”的免疫过程分别是
A 记忆细胞? 效应B细胞、产生特异性抗体与外毒素结合 B 效应B细胞?产生抗体、特异性抗体与外毒素结合 C 记忆细胞?B细胞、释放免疫活性物质与外毒素结合 D B细胞 ?效应B细胞、释放免疫活性物质消灭外毒素 23. 在临床治疗上已证实，将受SARS病毒感染后治愈患者（甲）的血清，注射到另一
SARS患者（乙）体内能够提高治疗效果。甲的血清中具有治疗作用的物质是
A 疫苗 B 外毒素 C 抗原 D 抗体 24. 下列说法不正确的是
A 干扰素常用来治疗病毒感染引起的疾病
B 用DNA分子探针可检测水体中的病毒
C 控制相同数量的氨基酸组成的蛋白质，原核基因与真核基因长度相同 D 肾上腺素与甲状腺素在调解体温过程中属于协同作用 25. 下列所述环境条件下的微生物，能正常生长繁殖的是 A 在缺乏生长素的无氮培养基中的根瘤菌
B 在人体表皮擦伤部位的破伤风杆菌
C 在新配制的植物矿质营养液中的酵母菌
D 在活的鸡胚细胞中培养禽流感病毒
26. 某同学在进行探究大肠杆菌群体生长规律实验时， 正确操作是
A 在调整期扩大接种 B定期检测菌体数目 C在稳定期连续培养 D 随时调整pH 27. 国家卫生部和农业部都已经确认，导致2005年6月24日四川资阳市发生不明原因疾病发病和死亡的罪魁祸首是猪链球菌2号。下列有关猪链球菌的说法正确的是
A 组成猪链球菌遗传物质的核苷酸有8种
B 猪链球菌产生的可遗传的变异来自基因突变和染色体变异 C 猪链球菌无核膜，无细胞器，具有细胞壁，且遗传物质是RNA D 猪链球菌的基因编码区是连续的，无外显子和内含子。 28. 下列有关生物工程技术的叙述中，不正确的是
A DNＡ连接酶的催化作用与黏性末端的碱基互补有关 B 能在培养条件下无限传代的细胞系，往往带有癌变的特点 C 接种后处于调整期的细菌代谢旺盛，体积增长较快 D 体细胞杂交技术是人为造成染色体变异的方法，它突破了自然生殖隔离的限制
29. 下列关于基因工程应用的叙述，不正确的是
A 基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因
B 基因诊断的基本原理是DNA分子杂交
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C 基因探针可以检测镰刀状细胞贫血症
D 质粒是基因工程最常用的运载体
30. 有关植物体细胞杂交的叙述正确的是
A 经过融合的体细胞必须用秋水仙素处理后自交可育
B 克服了自然界物种形成时一般需要的地理隔离而直接获得杂种植株
C 可用灭活的仙台病毒做诱导剂
D 一定能把两个植物体的优良性状集中在杂种植株上
31. 下列关于生命物质基础的叙述，正确的是
A 组成细胞的主要元素中含量最多的是C
B 蛋白质分子的多样性只与氨基酸的种类、数目和排列顺序有关 C 葡萄糖存在于叶绿体和线粒体中
D 多糖是自然界中含量最多的糖类
32. 下列关于细胞的说法正确的一组是
?含细胞壁结构的细胞必定为植物细胞 ?含中心体的细胞必定为动物细胞 ?同一动物体不同组织细胞中线粒体含量不同 ?植物细胞必定含叶绿体 ?自养生物不一定是绿色植物
A ?? B ?? C ?? D ?? 33. 下列关于构成生物体的元素的叙述中，正确的是
A 生物群落中，碳以CO
形式在生产者、消费者和分解者之间传递 2
B 氧是构成有机物的基本元素之一，光合作用制造的有机物中的氧来自HO 2
C 落叶与正常叶相比，Ca和Mg的含量基本不变
D 微量元素B能促进花粉萌发和花粉管的伸长
34. 下图示真核生物染色体组成。1、2、3、4分别表示
A胸腺嘧啶、非编码区、内含子、外显子 B尿嘧啶、非编码区、外显子、密码子
C胸腺嘧啶、非编码序列、外显子、内含子 D尿嘧啶、非编码序列、内含子、外显子
35. 下列对谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸的叙述，正确的是
A 运用连续培养技术可以使菌种都处在对数期，体积增长较快
B 将培养液中的C?N比控制在3?1，有利于提高产量
C 培育出不能合成谷氨酸脱氢酶的菌种，可以提高产量
D 发酵过程中pH呈酸性，代谢产物将会是琥珀酸和乳酸
36. 基因工程技术可使大肠杆菌合成人的胰岛素。下列叙述 正确的是
A 常用不相同的限制性内切酶分别处理目的基因和质粒
B DNA连接酶和RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶
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C 可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒
D导入大肠杆菌的目的基因 一定能成功表达
37. 右图代表荠菜个体发育的某一时段。相关叙述不正确的是
A 当它继续发育时，6代表的结构会逐渐消失，2代表的结构会进一步增大
B 当3的基因型为Aa时，6的基因型可能为AAA、AAa、Aaa、aaa
C 当6的基因型为Aaa时，1的基因型可能为Aa、aa
D 整个结构的有机物含量逐渐增加
38. 关于生态系统稳定性的错误叙述是
A 森林生态系统比草原生态系统的恢复力稳定性高
B抵抗力稳定性高的生态系统，其恢复力稳定性往往较低
C 不同生态系统的抵抗力稳定性和恢复力稳定性是不同的
D生态系统的成分较少、营养结构简单，恢复力稳定性较高
39. 下图表示某植物幼根的细胞呼吸过程中，O
2
的吸收量和CO的释放量随环境中O浓度的变化22
而变化的曲线，其中线段XY=YZ，则在氧浓度为
a时
A 有氧呼吸比无氧呼吸消耗的有机物多
B 有氧呼吸和无氧呼吸释放的能量相等
C 有氧呼吸比无氧呼吸释放的能量多 D 有氧呼吸比无氧呼吸释放的二氧化碳多
40. 人体受到寒冷或过渡紧张刺激时,在神经系统影响下,机体内相应激素的合成和分泌也
会有所变化,下列叙述正确的是
A 寒冷或过度紧张时,下丘脑可合成和分泌促甲状腺激素
B 当血液中促甲状腺激素含量增加到一定程度时,会抑制垂体合成和分泌甲状腺激素
C 当血液中甲状腺激素含量降低时,对下丘脑和垂体的抑制作用加强
D 甲状腺活动的调节过程属于反馈调节,这种调节可使血液中的激素维持相对稳定
本卷包括40小题，1-30小题每题1分共30分；31-40小题每题2分共20分。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
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650 41.（８分）以下是与高中生物实验有关的内容。请回答以下问题：（请填标号）
?细胞质流动观察 ?蛋白质的鉴定
?观察植物细胞有丝分裂 ?脂肪的鉴定
?探索淀粉酶和蔗糖的作用 ?叶绿体的色素提取与分离
3+?比较过氧化氢酶和Fe的催化效率 ?观察植物细胞的质壁分离与复原
?还原糖的鉴定 ?DNA的粗提取与鉴定 （1）在上述实验过程中需做临时装片的是 ；需要水浴加热的是 ；需要用试管并振荡的是 ；需要颜色反应的是 。
（2）在高中生物的某些实验需要酒精，不同实验中所需的酒精浓度不一样，如95%的酒精用于上述 实验中，其作用是 ；50%酒精用于上述 实验中，其作用是 。 42. （10分）血糖平衡是人体健康状况的重要指标之一，人体内有多种激素参与血糖浓
度的调节。请据下图回答有关问题（图中甲、乙、丙表示结构，?、?、?表示物质）：
（1） 图中与?有拮抗作用的激素为 （答名称）。图中血糖调节的 方式为 。人体内葡萄糖代谢的主要途径为 。 （2）临床上把空腹时血糖含量超过 叫做高血糖，糖尿病的病因是图中的
结构受损，使与之相应的激素分泌不足，导致血糖升高。
（3）糖类可以通过 作用生成氨基酸，这种作用能生成 种氨基酸。 （4）小张患上了糖尿病，在一次肝功能的检查中发现转氨酶偏高，仔细检查后医生确定
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小张的肝细胞内不含任何病原体，B超化验单表明小张的肝细胞内有大量的脂肪积累。
则小张可能患上了（ ）
A．肝硬化 B．乙肝 C．脂肪肝 D．甲肝 （5）青少年型糖尿病属于 （单、多）基因遗传病，随着生物技术的发展，将来可
以通过 ，彻底征服糖尿病。
43. （7分）右图示某遗传系谱，两种致病基因位于非同源染
色体上。根据条件分析回答。
（1）若2号不带甲病基因，甲病基因应在 染色体上。 1 2 乙病属于 （显、隐）性遗传病。4号是杂合子的概率
为 。5号和一乙病基因携带者的正常个体婚配，
所生子女中正常女儿的基因型是 。
3 4 5 （2）若2号携带甲病基因，则4号与1号基因型相同的概率
是 。 甲病男（A-a） （3）先天性心脏病是一种家族式遗传病。已知某男子及其父亲、祖父、祖母都患病，他乙病女（B-b） 的两个姑姑中有一位患病，且这位患病姑姑的女儿也是此病患者。其余成员均正常。请
根据题中信息并参照上图，画出此病的遗传系谱图。
44.（9分）图甲表示利用溶液培养法栽培某植物的简图．图乙表示该植物光合作用强度
与光照强度的关系．请分析回答下列问题：
（1）若用放射性
32p标记培养液中的KHPO，则一段时问后在叶肉细胞中能够检测到放24
射性的结构或物质有 。(从下列选项中选择，用序号表示)
A．核糖核酸 B．脂肪 C．ATP D．高尔基体 E．辅酶? F．核糖
2+（2）若该装置不通气，则培养一段时间后发现叶片发黄(此时培养液中不缺Mg)。分析
其原因可能是 。正常通气状况下，
2+当植物缺乏Mg时。图乙中曲线b点位置应 (填“左移”、“右移”或“不变”)。
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（3）在曲线a点，该植物叶肉细胞中能够产生ATP的部位是 和 。
2+（4）正常通气状况下，培养较长时间后，图甲装置中含Ca量最大的叶是 。(填图中序号)
（5）现已知该植物光合作用和呼吸作用的最适温度分别为25?和30?，乙图曲线表示该植物在25?时光合作用强度与光照强度的关系．若将温度提高到30?的条件下(原光照强度和CO浓度不变)，理论上图中相应点的移动分别是：a点 (填“上移”、“下2
移”或“不动”);b点 (填“左移”、“右移”或“不动”); d点 (填“上移”、“下移”或“不动”)。
45.（8分）右图为细胞融合过程示意图，请据图作答：
（1）若A、B是植物细胞，则其融合形成的D细胞培养成植珠，还
要应用____ _______技术。
（2）若A、B是动物细胞，则一般取自幼龄动物的器官或组织，然后
用 处理使细胞分散开来。A、B到C的过程中，常用的、
不同于植物细胞的手段是用__ _______诱导细胞融合。
（3）若该过程用于制备干扰素，A为小鼠_________细胞，在获得此
细胞之前，应给小鼠注射相应的抗原，此时的B为___________细胞。 （4）从A、B到C的过程中，可形成3种类型的C细胞（假设仅考虑两个细胞的融合）。
若该过程用于制备单克隆抗体，应筛选出符合要求的D细胞，方法是用特定的
___________培养基培养，筛选出的D细胞称为__ _________；常用的培养方法有体外
培养和体内培养两种：前者是在___________培养基中培养，后者是在动物的腹腔内增殖。 46. (8分)果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌通过有氧呼吸使数量增多，无氧呼吸产生酒
精。为了探究酵母菌所进行的呼吸作用类型，请根据所给的实验材料和用具设计实验。 实验目的：探究酵母菌的呼吸类型。
实验原理：酵母菌是兼性厌氧型，既能进行有氧呼吸，也能进行无氧呼吸，但产物不同。 实验材料和用具：酵母菌培养液、带橡皮塞的玻璃钟罩两个、100mL烧杯4个、两根弯曲的带有红色液滴的刻度玻璃管、NaOH溶液、清水、凡士林。（提示：假设酵母菌培养
液中以葡萄糖作为呼吸底物）
实验方法：?将实验材料和用具按右图（装置1）安装好。
?如果想得到实验结论还必须同时设计另一个实验，请指出另一
个实验装置应如何设计。
结果预测和结论：（用表格表示或文字表述）
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第?卷答案
本卷包括40小题，1-30小题每题1分共30分；31-40小题每题2分共20分。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 B D B C D A D C C B C B C A B 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 D C A C B D A D C D B D A A B
D C D A B C B A C D 评分标准：以下各题每空1分，答不全不得分。
41.（1） ????, ???, ?????, ?????。
（2）?或?，解离组织细胞（提纯DNA）；?，洗去浮色
42.（1）胰高血糖素和肾上腺素 神经体液调节 氧化分解供能
（2）130mg/dL 甲 （3）转氨基 12
（4）C （5）多 基因治疗或器官移植 43.（1）X 隐 5/6 BbXAAAaX或BbXX
（2）4/9
（3）本小题2分，其中绘图1分，图注1分，
患病男
患病女
正常男
正常女
44. (1)ACDE (2)缺氧不能进行有氧呼吸，产生能量少，抑制了根对矿质元素的吸收;右移
(3)细胞质基质;线粒体(顺序可调) (4)? (5)下移;右移;下移
45.（1）植物组织培养 （2）胰蛋白酶 灭活的（仙台）病毒
（3）效应T淋巴 骨髓瘤细胞 （4）选择 杂交瘤细胞 液体 46. 实验方法?：装置同1，用等量清水代替NaOH溶液，其他相同。（2分） 结果预测和结论（6分）：
现象 结论
装置1中液滴左移，装置2中液滴不移动 只进行有氧呼吸 装置1中液滴不移动，装置2中液滴右移 只进行无氧呼吸 装置1中液滴左移，装置2中液滴右移 既进行有氧呼吸，又进行无氧呼吸
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细胞色素P450含量测定
细胞色素 P450酶含量的测定步骤
一.微粒体的制备
1. PH=7.4磷酸缓冲液的配制
1.36g 磷酸二氢钾 +0.1mol/L NaOH(aq)79ml, 用水稀释至 200ml 即可。
悬浮液:7.5ml 磷酸缓冲液 +2.5ml甘油混合,即可。
2. 取植物幼苗 1g ,放在预冷的研体中研磨并加入预冷缓冲液 4ml 。
3. 把匀浆离心(9000r/min) 15min ,再取上清液离心(100000r/min) 60min, 弃上清液, 得沉淀。
4. 然后加适量悬浮液进行悬浮,后 -80C 下保存。
5. 微粒体蛋白浓度用 Bradford 法测定。
注:以上操作均在 4C 下完成。
二.蛋白质含量的测定
1. 蛋白质染色剂的配制:称取 100mg 考马斯亮蓝 G-250溶于 50ml95%的乙醇中,加 入 100ml85%(W/V)的磷酸,待用时将溶液稀释到 1000ml 。
2. 标准曲线制备
(1) . 称取 50mg 牛血清蛋白,溶于蒸馏水并定容到 50ml 容量瓶中,配成浓度为 1mg/ml的标准蛋白溶液。
(2) . 取 7支试管分别加入 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4ml 1mg/mL标准液, 用蒸馏水补足 2ml 。
(3) . 取 8支试管, 0号试管加 0.1ml 的蒸馏水, 1— 7号试管分别加入 0.1ml (2) 中的标准蛋白稀释液,然后加 5ml 考马斯亮蓝染色剂,充分振荡,反应 2分钟后于 595nm 处测定吸光值。绘制标准曲线。
3. 样品蛋白含量测定
将样品稀释到蛋白浓度约为 0.1— 0.8mg/ml, 取 0.1ml 样品再加 5ml 考马斯亮蓝 G-250,混匀后振荡,反应 2分钟后于 595nm 处测定 OD 值,以蒸馏水为空白凋零。在 依据标准曲线,算出样品蛋白浓度。
三. P450酶含量测定:
用 PH=7.4的磷酸缓冲液将微粒体细胞色素 P450酶液稀释到蛋白浓度为 1mg/mL, 加入 4mg 连二亚硫酸钠, 反应 4min , 将其平分到比色皿中, 在紫外分光光度计上扫描基线, 然后向样品杯中通入 CO 30s,稳定 5min ,在波长 400— 500nm 范围内扫描得到 P450-CO 复 合物吸收光谱。
公式:
P450含量(nmol/mg蛋白) =[△ OD (450-490nm ) *1000]/[91*微粒 体蛋白浓度(mg/mL) ]
拟穴青蟹细胞核DNA含量的测定
拟穴青蟹细胞核DNA含量的测定 第46卷第3期
2007年5月
厦门大学(自然科学版)
JournalofXiamenUniversity(NaturalScience)
Vo1.46No.3
May2007
拟穴青蟹细胞核DNA含量的测定
方旅平,曹文清,林元烧,王鹏峰,柳燕
(厦门大学海洋学系,福建厦门361005)
摘要:以拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)的血淋巴细胞为材料,刀额新对虾(Metapenaeusensis)的血淋巴细胞为参照
系,利用倍性分析仪结合外标定法测定其细胞核DNA含量.拟穴青蟹的血淋巴的细胞核DNA含量是2.677pg/2c.此
外,本文作者还发现拟穴青蟹血淋巴与肌肉组织细胞核DNA含量存在差异.报道了我国拟穴青蟹细胞核DNA含量,并
且提供了拟穴青蟹的细胞遗传学特征,为蟹类系统重建与演化过程分析提供新资料.
关键词:拟穴青蟹;细胞核DNA含量;刀额新对虾
中图分类号:Q959.223.63文献标识码:A文章编号:0438—0479(2007)03—0403—03
青蟹属(Scylla)在中国大陆东南沿海有4个种,
其中拟穴青蟹[Scyllaparamamosain(Estampador, 1949)]是最主要的种类[1].以往有关青蟹的生殖生理
学,养殖生物学的研究较多[2],但有关其遗传学,细
胞生物学的研究较少[4],特别是有关其细胞核DNA
含量的研究报道更少,国外已见报道的有锯缘青蟹
(Scyllaserrata)[6],国内未见.并且,国外已有对蟹类 的相关研究绝大部分是采用福尔根法.本文不仅报道 了拟穴青蟹的细胞核DNA含量,而且在研究中还发 现血淋巴与肌肉组织细胞核DNA含量存在差异. 1材料与方法
1.1材料来源
拟穴青蟹,刀额新对虾均购于厦门市场,购买后暂 养于过滤海水中.
1-2拟穴青蟹血淋巴与肌肉样品的制备
随机选取1O个拟穴青蟹个体进行测定.取少量肌 肉组织置于500LPBS缓冲液(pH7.4)中,剪碎,振 荡15S,过滤至上样管中,再加入500LPBS缓冲液. DAPI染色,冰浴,备用.
1肝素生理盐水溶液润湿的注射器从围心腔中 吸取少许血淋巴置于500LPBS缓冲液中,过滤至上 样管中.DAPI染色,冰浴,备用.
1.3刀额新对虾参照样品的制备
随机选取1O个刀额新对虾个体进行测定,样品制 备方法同拟穴青蟹样品制备方法.
收稿日期:2006—1l一28
基金项目:厦门大学科技创新工程基金项目(2004xdcx204)资助 *通讯作者:wqcao@xmu.cdu.cn 1-4样品测定
实验采用外标定方法.分别比较拟穴青蟹样品与 刀额新对虾参照样2峰的相对位置,计算样品细胞核 DNA含量.在测定过程中各项指标为被测溶液的细胞 浓度:10.cell/L;增益值(Gain):435. 1.5数据处理
以刀额新对虾的细胞DNA含量值4.340pg/2c
计算[7],细胞消光值与血细胞消光值的比值为A;该动 物体细胞的绝对DNA含量为(4.340pg/2c×A). 2结果
2.1刀额新对虾与拟穴青蟹血液血淋巴DNA 相对含量
以刀额新对虾8个个体,拟穴青蟹5个个体的 DNA相对含量计算平均值.
表1刀额新对虾和拟穴青蟹血淋巴细胞DNA含量的相对值 Tab.1RelativeDNAcontentoferythrocyteofMensisand
S.paramamosain
2.2拟穴青蟹血淋巴与肌肉细胞DNA相对含 量(图2,表2)
2.3拟穴青蟹血淋巴DNA含量
拟穴青蟹血淋巴细胞核DNA含量=4.340pg/2c ×(100.32?162.65)一2.677pg/2c. 相关研究中,DNA参照系各有不同.我国已有的
厦门大学(自然科学版)
10o
50
善.
loo
5.
.
050l0o15020o250300 O5Ol0o150200250
Coulter
图1刀额新对虾和拟穴青蟹细胞核DNA相对含量直 方图'
(a)刀额新对虾;(b)拟穴青蟹
Fig.1TheDNAhistogramoferythrocyteofM.ensis
andS.paramamosain loo
兽50
O
O50100150200250 Coulter
图2拟穴青蟹肌肉细胞相对DNA含量 Fig.2TheDNAhistogramofmusclecellsofS.para— m~mosoin
表2拟穴青蟹血淋巴和肌肉细胞相对DNA含量 Tab.2RelativeDNAcontentoferythrocyteandmusclecells
OfS.paramamosain 卑号肌肉肌肉血液血液
…(mean)(cv/)(mean)(cv/)
183.04
277.91
378.25
482.58
583.93
平均81.14
12.95
11.23
11.82
1O.6O
1O.42
11.40
97.13
99.04
102.O6
1O1.O5
102.3O
100.32
9.52
9.34
8.57
7.67
8.O6
8.63
海洋十足目研究中均采用鸡红细胞作为参照系[7, 测定了刀额新对虾的细胞核DNA含量,发现其血淋 巴样品制备简单,快捷,测定结果稳定.且由于倍性分 析仪自身特性,鸡红细胞的细胞核DNA含量又与海 洋十足目的细胞核DNA含量差距较大,造成仪器信 号强弱差异较大,不利于样品测定,甚至无法测定.故 本研究选取刀额新对虾血淋巴作为参照系进行拟穴青 蟹细胞核DNA含量的测定,为今后的研究提供平台. 3讨论
染色体和核DNA是动植物分类与系统发生的一 个重要的基本特征.甲壳动物中已约有230个种类的 单倍体基因组大小被报道,涵盖5个纲,14个目,71个 科[8].已有的甲壳动物数据相对其多样性来说还相当 少.其中,具有重要经济意义的十足目细胞核DNA含 量的报道在动物基因组数据库中共92个,数据相当匮 乏,如梭子蟹科(Portunidae)只有4个种类的DNA含 量被报道,其中青蟹属只有锯缘青蟹(S.serrata)的细 胞核DNA含量被报道,其C—value为2.10pg[g].本研 究报道了我国青接属中的重要经济种类拟穴青接的细
胞核DNA含量,为2.677pg/2c. 锯缘青蟹的细胞核DNA含量采用福尔根反应细 胞光度法测定,而拟穴青蟹细胞核DNA含量是通过 倍性分析仪进行测定,由于采用方法和标准不同,因此 二者结果无法用于比较.测定拟穴青蟹细胞核DNA 含量较之锯缘青蟹细胞核DNA含量值低许多,李志 华等[1叩指出流式细胞仪测定结果偏低,主要原因是流 式细胞仪所测样品为细胞悬浮液,制样过程中有过滤 处理,可能将体积较大,DNA倍体值较高的细胞清除. 倍性分析仪样品制样过程与流式细胞仪相似,因此推 测拟穴青接DNA含量结果偏低也存在相似原因. 纵观甲壳动物DNA含量的研究方法,有85采 用福尔根反应细胞光度法(Feulgendensitometry),流 式细胞术仅占8,福尔根染色图像分析法占6[8]. 叶玉珍等[11]也提出最常用的是Feulgen染色显微荧 光光度法,但该方法分析时间长,操作复杂,而流式细 胞术具有快速,准确,采集数据量大,分析全面和操作 简单等优点.本研究采用的倍性分析仪,其基本原理也 是流式细胞术,通过对该仪器的功能开发,不仅拓展了 该仪器的使用功能,而且提供了一种简单,方便的测定 细胞核DNA含量的新途径.拟穴青蟹的细胞核DNA 含量报道仅是开始,今后将进一步测定其它种类的 DNA含量,为甲壳动物基因组大小数据库提供更多数 据.
DNA在细胞核内的含量是否恒定一直存有争议. 张晓君等[1提出对于某一物种,细胞内DNA的含量 是一定的,即基因组大小是恒定的,这是物种的代表特 征之一.本文作者发现拟穴青蟹血液与肌肉组织细胞 核DNA含量存在差异,其相对DNA含量分别是
81.14和100.32(Coulter),这与一些学者的研究结果
第3期方旅平等:拟穴青蟹细胞核DNA含量的测定?405? 相似.例如李贽等[1]曾报道牡蛎性腺组织核DNA含 量高于鳃及闭壳肌组织细胞内DNA含量;丁君等[14] 对太平洋牡蛎不同组织DNA相对含量进行研究时也 发现存在差异,提出细胞在发育,分化过程中,不同组 织细胞DNA分子存在着重排,扩增及逸失现象. 在甲壳动物的演化中,DNA含量的多种调节形式 非常重要,多倍体,DNA含量漂移(quantumshifts), 染色质消减(chromatindiminution)这些现象均有出 现.如GrishaninAK等[15]研究Cyclopskolensis与英 雄剑水蚤(Cyclopss,rP乱乱sstrenuus)两个种类各自种 群间的差异时,提出细胞遗传学特征差异包含染色质 消减的时间与数量,并且发现相对于英雄剑水蚤来自 德国的种群,来源于俄罗斯的种群并没有显示出双亲 染色体分立;GrishaninAK等D63测定了草绿刺剑水 蚤(Acanthocyclopsviridis)等种类的地理种群的核 DNA含量,并以染色质消减现象(CD)为基础讨论其 种群分化问题.
对甲壳动物细胞核DNA含量的研究虽然目前还 存在许多争议,但也发现了许多有价值的研究成果. 参考文献:
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DeterminationofCelluarDNAContentofScyllaparamamosain
(Decopoda:Crustacean)
FANGLti-ping,CAOWen-qing,LINYuan-shao,WANGPeng—feng,LIUYan
(Dept.ofOceanography,XiamenUniversity,Xiamen361005,China)
Abstract:UsingtheabsolutevalueofDNAcontentofMetapenaeusensis(4.340pg/2c)asflcomparativestandard,DNAcontent
ofScyllaparamamosainwasdeterminedbyPloidyAnalyser(PartecPA—
I.PartecGermany).TheabsoluteDNAcontentofthespe—
cieswas2.677pg/2c.TherewasvariationinrelativeDNAcontentsofdifferenttissues.TherelativeDNAcontentoferythrocytewas
100.32(coulter),buttherelativeDNAcontentofmusclecellwas82.07(coulter).Thisresultwassimilartosomeotherscholars
findings,sothetheoryofcelluarDNAcontentconstanthadbeenchallengeagain.Notonlythisarticlereportedforthefirsttime
ScyllaparamamosaincelluarDNAcontent,butalsoprovideditscytogeneticscharacteristicandflnewwayforthecrabclasssystem
reconstructionandtheevolutionaryprocessanalysis.
Keywords:Scyllaparamamosain;cellularDNAcontent;Metapenaeusensis
细胞中蛋白提取及含量测定
蛋白提取及含量测定
试剂准备
1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF
PMSF 0.174g
异丙醇 100ml
溶解后，分装于1.5ml 离心管中，－20℃保存
单去污剂裂解液（50mmol/L Tris ·HCl pH8.0，150mmol/L NaCl ，1％TritonX －100，100μg/ml PMSF）：
1mol/L Tris·HCl （pH8.0） 2.5ml
NaCl 0.438g
TritonX －100 0.5ml
蒸馏水至 50ml
混匀后， 4℃保存。使用时，加入PMSF 至终浓度为100μg/ml（0.87ml 裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl ）。
G250考马斯亮蓝溶液（测蛋白含量专用）
考马斯亮蓝G250： 100mg
95％乙醇： 50ml
磷酸： 100ml
蒸馏水至 1000ml
配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤纸过滤，4℃保存。
0.15 mol/L NaCl
NaCl （MW58.44） 0.877g
蒸馏水至 100 ml
高温灭菌后，室温保存。
100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA ）
BSA 0.1g
0.15 mol/L NaCl 1ml
溶解后，－20℃保存。制作蛋白标准曲线时，用0.15 mol/L NaCl 进行100倍稀释成1mg/ml，－20℃保存。
操作步骤：
（一） 蛋白样品制备
（1） 单层贴壁细胞总蛋白的提取：
1、 倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。
2、 每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS （0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1min 洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将PBS 弃净后把培养瓶置于冰上。
3、 按1ml 裂解液加10 μl PMSF（100mM ），摇匀置于冰上。（PMSF 要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。）
4、 每瓶细胞加400 μl 含PMSF 的裂解液，于冰上裂解30min ，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。
5、 裂解完后，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml 离心管中。（整个操作尽量在冰上进行。）
6、 于4℃下12000rpm 离心5min 。（提前开离心机预冷）
7、将离心后的上清分装转移倒0.5min 的离心管中放于－20℃保存。
（2） 组织中总蛋白的提取：
1、将少量组织块置于1～2ml 匀浆器中球状部位（或者在1.5ml 离心管中加入少量裂解液，将其剪碎），用干净的剪刀将组织块尽量剪碎。
2、加400 μl(250ul)单去污剂裂解液裂（含PMSF ）于匀浆器中，置于冰上进行匀浆。
3、几分钟后再碾一会儿再置于冰上，要重复碾几次使组织尽量碾碎。
4、裂解30 min 后，即可用移液器将裂解液移至1.5ml 离心管中，然后在4℃下12000rpm 离心5min ，取上清分装于0.5ml 离心管中并置于－20℃或－70℃保存。
（3） 加药物处理的贴壁细胞总蛋白的提取：
由于受药物的影响，一些细胞脱落下来，所以除按（一）操作外还应收集培养液中的细胞。以下是培养液中细胞总蛋白的提取：
1、 将培养液倒至15ml 离心管中，于2500rpm 离心5min 。
2、 弃上清，加入4ml PBS并用枪轻轻吹打洗涤，然后2500rpm 离心5min 。弃上清后用PBS 重复洗涤一次。
3、 用枪洗干上清后，加100 μl 裂解液（含PMSF ）冰上裂解30min ，裂解过程中要经常弹一弹以使细胞充分裂解。
4、 将裂解液与培养瓶中裂解液混在一起4℃、12000rpm 离心5min ，取上清分装于0.5ml 离心管中并置于－20℃保存。
（二） 蛋白含量的测定
（1） 制作标准曲线
1、从－20℃取出1mg/ml BSA，室温融化后，备用。
2、取18个1.5ml 离心管，3个一组，分别标记为0μg ，2.5μg ，5.0μg ，10.0μg ，20.0μg ，40.0μg 。
3
4上比色分析。
（2） 检测样品蛋白含量
1、取足量的1.5ml 离心管，每管加入4℃储存的考马斯亮蓝溶液1ml 。室温放置30min 后即可用于测蛋白。
2、取一管考马斯亮蓝加0.15mol/L NaCl溶液100 μl ，混匀放置2分钟可做为空白样品，将空白倒入比色杯中在做好标准曲线的程序下按blank 测空白样品。
3、弃空白样品，用无水乙醇清洗比色杯2次（每次0.5ml ），再用无菌水洗一次。
4、取一管考马斯亮蓝加95 μl 0.15mol/L NaCl NaCl溶液和5μl 待测蛋白样品，混匀后静置2min ，倒入扣干的比色杯中按sample 键测样品。
注意：每测一个样品都要将比色杯用无水乙醇洗2次，无菌水洗一次。可同时混合好多个样品再一起测，这样对测定大量的蛋白样品可节省很多时间。
JCI：科学家发现细胞内铁离子水平调节新机制 [一点资讯]
2017年4月3日讯 /生物谷BIOON/ --美国西北大学医学院的科学家们最近发现了一条新的途径能够调节细胞内的铁离子水平，或有助于开发新的治疗方法对铁过量或铁缺乏的病人进行治疗。
在这项发表在国际学术期刊JCI上的文章中，科学家们首次阐述了去乙酰化酶sirtuin家族成员SIRT2如何维持细胞内铁离子的平衡。该家族的蛋白在肿瘤形成、代谢和炎症中都发挥重要作用。
'因为sirtuins家族蛋白调节的所有生物过程都需要铁离子参与，因此我们决定研究sirtuins。我们认为SIRT2可能通过某种方式直接调节了铁离子水平，确保SIRT2能够发挥正常功能，'Hossein Ardehali教授这样说道。'铁缺乏是最世界上常见的营养缺乏，但是我们还不知道在细胞水平上铁离子水平如何受到调节。'
在培养的细胞模型和动物模型中，研究人员证明缺乏SIRT2会导致细胞内铁离子水平下降，通过进一步研究他们还发现SIRT2通过结合和修饰一个叫做NRF2的转录因子实现对铁离子水平的调节，对NRF2的修饰最终引起细胞内铁离子外运的下降使细胞内铁离子水平增加。研究人员还观察到缺失SIRT2基因会导致细胞在应对铁缺乏时的存活能力下降。
研究人员进一步在被诊断为铁过量（血色素沉着症）的病人肝脏样本中研究了细胞铁离子对SIRT2表达水平的影响。他们发现铁过量与人类肝脏中SIRT2表达水平降低存在相关性。
'了解这些代谢紊乱的分子基础可以帮助我们进行治疗选择，现阶段治疗手段还比较有限。'Ardehali这样说道。
在此之前人们认为只有铁调控蛋白能够控制铁离子水平，直到2012年Ardhelai实验室发现了另外一条信号途径能够在细胞内保存铁离子，该研究成果曾发表在国际学术期刊Cell Metabolism上
'铁是细胞内的重要分子，不可能只有一条调控途径，了解到这一点才会有更多的发现。'Ardehali这样说道。现在他的研究团队正在研究SIRT2在不同器官中的作用。（生物谷Bioon.com）
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