范文一:肾活检病理组织切片 PAM
肾活检病理组织切片 PAM —Masson染色法改良
尹 忠① 师锁柱① 张雪光① 谢院生① 陈香美①
PAM—Masson染色能在同一切片上既显示。肾小球基底膜,又可
观察免疫复合物的沉积,因此 PAM —Masson染 色是肾
活检病理组织切片染色中最为重要的染色之一。然而长期以
来 PAM 染色耗时长,Masson复染着色不良,给肾活检病理诊
断带来不利影响。我们通过实践摸索,在常规的染色方法基础
上进行改良,获得较好效果,现介绍如下。
材料与方法 2ainr,镜下观察;(7)人 5%硫代硫酸钠水溶液 1~2min,水洗, 1%醋酸水洗;(8)复染 Masson液 10min,1%醋酸水洗;(9)入1%亮绿 1-2min,1%醋酸水洗;(10)脱水、透明、封片。 结 果
1 材料 将临床住院患者肾活检组织经 10%福尔马林
固定,常规脱水、透明、包埋,取 8块 肾活检病理诊断剩下的石
蜡块,每块连续切2tan切片 2张,分别采用常规 PAM~Mas—
son染色和改良法染色。
2 染液配制 六胺银染液配制:取 3% 6次甲基四胺25n1l,5%硝
酸银 2.5ml,蒸馏水 22.5ml,5%硼砂 4.5ml,混 常规法所染的切片背景较暗,Masson着色不良;经改良法 所染的切片基底膜、网状纤维为黑色,免疫复合物红色,红细胞 鲜红色,胞浆粉红色,胶原纤维绿色,背景清晰,对比鲜明。 讨 论 PAM —Masson染色方法实际是六胺银和马松三色两种染 色方法的叠加染色,由于基底膜可清楚显现,所以免疫复合物的定位更为精确I】J,但常规方法仅 72℃六胺银染一步就需耗
底膜显示亦不清晰,背景灰暗,复染 Masson着色不良,给肾活检
病理诊断工作造成极大影响。我们经多次实验,反复摸索, 0.8g,冰醋酸 1.0rnl,蒸馏水 100rnl,变色酸 2R0.6g,亮绿 SF
合过滤,72℃预热 20 min以上。Masson染液配制:磷钨酸 时 60min左右 ,组织长时间在高温条件下极易从切片脱落,基 在组织切片入六胺银染液前加染氨基硫脲水溶液 5~10min, 大大加速了银离子对基底膜等的染色力,使银染时间缩短 40min左右,即由原来的 60min减至 20min左右,同时也改善
脱蜡入水后,我们用强酸酸化的重铬酸钾水溶液铬化处理 0.4g混匀溶解即成。铬化液配制:10%重铬酸钾水溶液与10%三氯醋酸水溶液等量混合。 3 染色步骤 3.1 I组 常规法:(1)常规切片脱蜡入水;(2)人 1%过碘酸水了背景的色调,减弱了六胺银液对细胞核的着染。另外在组织切片溶液 l5~20min,水洗 ;(3)入六胺银染液 (72℃)40~60rain,镜下
观察;(4)入 1%氯化金水溶液 1~2min,镜下观察;(5)入 5%硫代
硫 酸钠水溶液 1~2min,水洗 ,1%醋酸水洗; 30ainr,使组织切片能够很好的对酸性染料着色l2],为复染Masson液提供了有利条件,获得了组织结构清晰、对比鲜明、直
(6)复染 Masson液 10min,1%醋酸水洗;(7)入 1%亮绿 1~2min,1%醋酸水洗;(8)脱水、透明、封片。 3.2 Ⅱ组 改良法:(1)常规切片脱蜡入水;(2)入铬化液30rain; 观的染色结果。 参 考 文 献 1.邹万忠.肾活检病理学.北京:北京大学医学出版社,2006.252.2.龚志(3)入 1%过碘酸水溶液 15~20min,水洗;(4)入 0.5%
氨基硫脲水溶液 5~10 min,水 洗;(5)入六胺银染液(72℃)l0~
20min,镜下观察;(6)人 1%氯化金水溶液 1~ 锦,詹铬洲.病理组织制片和染色技术.上海:上海科学 技术出版社,1994.9. (收稿:2008—07—18)
① 解放军总医院肾科,全军肾脏病研究所暨重点实验室 (北京 100853)
范文二:肾组织石蜡切片免疫荧光染色的新方法
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JNephrolDialyTransplantVol.20No.3Jun.2011
·实验室方法·
肾组织石蜡切片免疫荧光染色的新方法
张明超
摘
要
郑春霞黄倩马怡王伟伟曾彩虹
目的:探讨高温修复联合酶消化法在肾组织石蜡切片进行免疫荧光染色及其在病理诊断中应
用的可行性。方法:选取南京军区南京总医院全军肾脏病研究所经肾活检明确诊断为肾小球疾病的患
者:狼疮性肾炎、抗肾小球基膜肾炎、致密物沉积病、轻链沉积病(κ)及淀粉样变性(λ)各4例,感染后肾小球IgA肾病12例。采用高温修复(EDTA8.0高压锅加热)联合膜性肾病及膜增生性肾小球肾炎各6例,肾炎、
IgA、IgM)、C1q)、酶消化(胃蛋白酶)法对肾组织石蜡切片分别进行免疫球蛋白(IgG、补体(C3、轻链(κ、λ)染色,并将石蜡切片免疫荧光染色与冰冻切片进行比较。结果:石蜡切片经高温修复联合酶消化法进行免疫IgG、IgA、C1q阳性率、分布部位和强度与冰冻切片免疫荧光染色结果相一致。石蜡切片IgM和C3荧光染色,
染色分布部位与冰冻切片无差别,阳性率和染色强度略低于冰冻切片,但不影响诊断。κ、λ轻链沉积的阳性率、分布部位和染色强度与冰冻切片一致,轻链沉积病和淀粉样变性患者石蜡切片染色部位显示得更加清晰。石蜡切片的诊断符合率达100%,且结构更清晰,免疫复合物沉积部位较冰冻切片容易判断。方法。
关键词
肾活检组织
高温修复
胃蛋白酶
石蜡切片
免疫荧光
结论:
石蜡切片高温修复联合胃蛋白酶消化法进行免疫荧光染色为肾活检冰冻组织无肾小球提供可靠的替代
AnewapplicationonimmunofluorescencestainingforparaffinembeddedhumanrenaltissuesZHANGMing-chao,ZHENGChun-xia,HUANGQian,MAYi,WANGWei-wei,ZENGCai-hong,LIUZhi-hongResearchInstituteofNephrology,JinlingHospital,NanjingUniversitySchoolofMedicine,Nanjing210002,China
ABSTRACT
Objective:Theaimofthisstudyistoexploretheapplicationofheatantigenretrievalcombined
stainingforparaffinembeddedhumanrenaltissues.
withpepsindigestiononimmunofluorescence(IF)
Methodology:Renal-biopsyproved9groupsofglomerulardiseasesfromResearchInstituteofNephrology,JinlingHospitalwereenrolled,theyweremembranousnephropathy(n=6),membranoproliferativeglomerulonephritis(n=5),lupusnephritisincludingclassⅣ(n=2)andclassⅣ+Ⅴ(n=2),IgAnephropathy(n=12),anti-GBMdisease(n=4),densedepositdisease(n=4),acutepoststreptococcalglomerulonephritis(n=6),light-chaindepositiondisease(kappa)(n=4),andprimaryamyloid(lambda)(n=4).Paraffin-embeddedsectionsofrenalpH=8.0)combinedwithbiopsytissueswereprocessedbyusingheatantigenretrievalwithpressurecooke(EDTA,
pepsindigestionandimmunofluorescencestainingofIgG,IgA,IgM,C3,C1q,κ、λlightchain.AndthenweF)withheatantigenretrievalcombinedwithpepsincomparetheimmunofluoresencestainingoffrozensections(IF-digestionparaffin-embeddedsections(IF-P).
Results:IF-PofIgG,IgA,andC1q,wasinaccordancewiththatof
frozensectionsinpositiverate,distributionpatternandstainingintensity.IF-PofIgMandC3wasthesamewithIF-Findistributionpattern.However,theintensityandpositiveratewasinferiortoIF-F,whichwasnotinfluentondiagnosis.OnehundredpercentofdiagnosticaccordanceratewasobtainedinIF-P.Furthermore,thestructureofparaffinsectionswereclearerthanthatoffrozensections,whichledtomoreeasierjudgmentofthelocationofimmunecomplexdeposits.biopsytissues.
[作者单位]南京军区南京总医院全军肾脏病研究所(南京,210002)《肾脏病与透析肾移植杂志》?2011年版权归编辑部所有
Conclusion:IF-Pisagoodalternativeforimmunofluoresencestainingintheconditionof
frozentissueswithoutglomerula.Thismethodisusefulforretrospectivestudyonparaffin-embeddedsectionsofrenal
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paraffinsections
pepsin
immunofluorescencestaining
Keywordsrenalbiopsytissuespressurecooker
免疫荧光检查是肾活检诊断必不可少的手段之一。然而,行免疫荧光检查的冰冻组织常无肾如何弥补这一缺憾,文献有众多方法。我们小球,
采用高温高压联合酶修复法进行抗原修复,效果甚佳。材料与方法
选择在南京军区南京总医院全军肾脏病研究所住院经肾活检明确诊断的患者502例Ⅳ型,2例Ⅳ+Ⅴ型)、例。狼疮疮肾炎(LN,
抗肾小球基膜(GBM)肾炎、致密物沉积病、轻链沉积病(κ)及淀粉样变性(λ)各4例,感染后肾小球
IgA肾炎、膜性肾病及膜增生性肾小球肾炎各6例,肾病12例。
冰冻切片:冰冻组织切片(3μm)吹干,
10%小牛血清封闭10min,分别加DAKO公司异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔多克隆抗IgG(1∶200)、
方法
IgA(1∶100)、IgM(1∶50)、C3(1∶50)、C1q(1∶50)、κ(1∶100)、λ(1∶200)抗体,室温孵育40min,流水冲洗,吹干,甘油封片,荧光显微镜观察。
石蜡切片:肾活检组织经10%甲醛固定,切取1.5μm的切片,用防脱片剂(多聚赖氨酸)处理过的载玻片进行捞片,烤片。经二甲苯充分脱蜡,100%~75%梯度酒精至水,3%H2O2封闭内源性过氧化物酶10min,将切片入EDTA缓冲液(pH8.0),高温高压煮沸至喷气,保温2min,自然冷却后水洗,PBS加胃蛋白酶(Invitrogen公司)室温消化5min,洗,加10%小牛血清室温孵育10min,加DAKO公IgA、IgM、C3、C1q、司兔多克隆抗IgG、κ及λ抗体,室温孵育2h,PBS洗,加FITC标记的猪抗兔IgG室温孵育30min,水洗,吹干,甘油封片,荧光显微镜观察。
结果分析采用免疫荧光半定量分析,按荧光强度0分:无荧光;0.5分:荧光很弱;1分:可见荧光;2分:较强荧光;3分:强荧光。
病例选择
结果
冰冻组织切片肾小球平均5个(3~8个),石蜡组织切片肾小球14个(9~26个)。冰冻和石蜡组织切片染色的平均强度分析结果见表1。石蜡切片免疫荧光染色的分布、强度与诊断用的冰冻切片染色基本一致,诊断符合率达100%(表2,图1)
IgA、IgM、C3、C1q在冰冻和膜性肾病患者IgG、石蜡切片阳性染色均为颗粒状沉积于血管袢。IgA、
C3、C1q在患者中的阳性比例相同。IgG和C1q染C3石蜡切片染色强度略弱于冰冻切片色强度一致,
(1.5vs1.2)。冰冻切片IgM在1例患者为阳性,而石蜡切片是阴性。另1例患者IgA冰冻切片染色为0分,而石蜡切片染色为0.5分。
LN患者(2例Ⅳ型,2例Ⅳ+Ⅴ型)IgG、IgA、IgM、C3、C1q在冰冻和石蜡切片分别为颗粒状沉积于系膜区(Ⅳ型)和系膜区及血管袢(Ⅳ+Ⅴ型)。1例冰冻切片C3染色为2分,而石蜡切片染色为1分,其余染色强度在两种切片无差别。
IgA肾病中所有患者冰冻和石蜡切片IgA染色分布和强度均一致。C3在两种切片的染色分布一致,但石蜡切片染色强度弱于冰冻切片(1.5vs1.0)。
膜增生性肾小球肾炎和抗GBM肾炎中IgG染色分布和强度均一致。冰冻切片C3染色在两种疾病中阳性比率均为66.7%(4/6),石蜡亦为66.7%(4/6),但平均染色强度也低于冰冻切片。上述几组病例中出现C3染色的不一致性,均为石蜡切片染色弱于冰冻切片,但对诊断结果无影响。
链球菌感染后肾小球肾炎和致密物沉积病患
C3染色在两种切片均为阳性,者中,分布也一致,染色强度石蜡切片略弱于冰冻切片,但对诊断无影响。
所有患者κ、λ染色分布和强度均一致,且轻链沉积病和淀粉样变性患者石蜡切片染色部位更清晰。
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表1
肾小球疾病MNMPGNLNIgAN抗GBM肾炎DDDPIGNLCDDRA
n6641244644
JNephrolDialyTransplantVol.20No.3Jun.2011
不同肾小球疾病肾活检组织冰冻切片和石蜡切片免疫荧光染色比较
IgG
F
P2.5+(6/6)0.7+(4/6)2.5+(4/4)0.2+(4/12)3.0+(4/4)
F0.3+(2/6)0.2+(2/6)1.8+(3/4)1.9+(12/12)0.1+(1/4)
-0.7+(4/6)
0.2+(2/6)
--
C1q
F0.1+(1/6)0.8+(4/6)2.0+(4/4)
00.1+(1/4)0.1+(1/6)
P0.1+(1/6)0.7+(4/6)1.8+(4/4)
00.1+(1/4)0.1+(1/6)
F2.3+(5/6)1.5+(5/6)2.0+(4/4)1.7+(10/12)2.0+(3/4)
-0.3+(2/6)2.8+(4/4)
0.3+(2/6)2.8+(4/4)κ
P2.3+(5/6)1.5+(5/6)2.0+(4/4)1.7+(10/12)2.0+(3/4)
F2.3+(5/6)1.3+(5/6)2.3+(4/4)1.6+(10/12)1.8+(3/4)
-0.5+(3/6)
-2.5+(4/4)
2.5+(4/4)0.5+(3/6)
0.2+(2/6)IgA
P0.3+(2/6)0.2+(2/6)1.9+(4/4)2.1+(12/12)0.1+(1/4)
F0.1+(1/6)1.5+(5/6)1.5+(3/4)0.4+(6/12)0.4+(2/4)2.8+(4/4)0.8+(5/6)
--
λ
P2.3+(5/6)1.3+(5/6)2.3+(4/4)1.6+(10/12)1.8+(3/4)
IgM
P0(0/6)1.2+(4/6)1.3+(3/4)0.2+(4/12)0.1+(1/4)2.5+(4/4)0.3+(3/6)
C3F1.5+(5/6)1.7+(4/6)2.3+(4/4)1.5+(10/12)2.0+(4/4)
-2.7+(6/6)
--
2.7+(6/6)0.8+(4/6)2.7+(4/4)0.3+(4/12)3.0+(4/4)
-0.8+(4/6)
--C3P1.2+(5/6)1.1+(4/6)2.0+(4/4)1.0+(10/12)1.8+(4/4)
肾小球疾病MNMPGNLNIgAN抗GBM肾炎DDDPIGNLCDDRA
n6641244644
2.3+(6/6)
F:冰冻切片免疫荧光;P:石蜡切片免疫荧光;MN:膜性肾病;MPGN:膜增生性肾小球肾炎;LN:狼疮性肾炎;IgAN:IgA肾病;抗GBM肾炎:抗肾小球基膜肾炎;DDD:致密物沉积病;PIGN:链球菌感染后肾小球肾炎;LCDD:轻链沉积病(κ);RA:肾淀粉样变性(λ
)
讨论
这些离子螯合成沉淀是抗原热修复的关键
[1-3]
,因
而抗原修复的选择就显得很重要。常用微波炉和高压锅加热变性。微波作用于醛乙氨基的交联,使之断裂而暴露抗原决定簇
[4]
2+
甲醛是最常用的固定剂,固定过程中Ca和其他二价离子与蛋白质形成紧密复合物封闭抗原,使
。高压锅加热是抗原修
肾脏病与透析肾移植杂志第20卷第3期2011年6月
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表2
诊断膜性肾病
石蜡切片诊断肾小球疾病的比例
石蜡切片诊断的百分比
6/6(100%)6/6(100%)4/4(100%)12/12(100%)4/4(100%)4/4(100%)4/4(100%)6/6(100%)4/4(100%)4/4(100%)
进行消化。文献报道链菌蛋白酶、胰蛋白酶对肾脏病免疫复合物沉积荧光染色具有较好的效果。目前国内外肾组织石蜡切片抗原修复方法李[7]
兵等随机选取20例肾活检组织,对高温高压修复、胰酶抗原修复和无抗原修复进行比较。发现石蜡切片胰酶抗原修复组与冰冻切片免疫荧光染色结果基本符合;高温高压修复组出现较多的假阴性结果;无抗原修复组染色效果较差。董鸿瑞等
[8]
膜增生性肾小球肾炎狼疮性肾炎IgA肾病
抗肾小球基膜肾炎糖尿病肾病致密物沉积病
链球菌感染后肾小球肾炎轻链沉积病(κ)肾淀粉样变性(λ)
选择
LN、IgA肾病,乙肝相关的膜性肾病、比较微波加热、
胰蛋白酶和胃蛋白酶抗原修复法的异同。结果无抗原修复基本无荧光着色,微波加热和胰酶抗原修复
而胃蛋白酶修复效石蜡切片免疫荧光染色效果差,
果好。两家单位得出的结论不一致,我们分别重复
了两个单位的实验方法,不论用哪种方法阳性率都很低。
Fogazzi等[9]选择了10例IgA肾病、8例膜增生性肾小球肾炎和10例LN,利用链霉蛋白酶消化石蜡组织,对照了冰冻切片和石蜡切片免疫荧光染色强度,发现在不同疾病的主要免疫复合物(如IgG在
IgA在IgA肾病,IgG和C1q膜增生性肾小球肾炎,
在LN)免疫荧光强度出现较高的一致性。Qualman
[10]
和Keren报道了52例肾活检病例,利用胰酶消化
复的一种简单有效的方法。同时利用EDTA与
Ca2+形成螯合双价金属离子盐,消除甲醛固定产生的不利因素。高温高压比微波处理的切片染色效果好,原因是高压锅加压后可使温度达到120℃,而微波的温度100℃。组织在120℃的高温下,维持蛋白质三级结构的氨基酸侧链基团的次级链断裂,为抗体的结合提供了更多的机会,还能提高一抗稀释[6]
度。酶消化石蜡组织的优点是使细胞膜变性和打开抗原决定簇,人们尝试应用不同种类的蛋白酶
[5]
IgM、石蜡切片,发现石蜡切片与冰冻切片在IgG、
IgA和fibrinogen沉积等阳性一致率达80%~90%。IgM和IgA在膜增生性但高达21例石蜡切片IgG、
IgA肾病,LN肾小球的沉积部位不同。肾小球肾炎,
Nasr等[11]利用链霉蛋白酶消化石蜡组织,发现石蜡切片与冰冻切片IgA在IgA肾病沉积一致率达
88%,κ和λ荧光染色与冰冻切片一致率为96%。而且κ,λ在GBM阳性表达较冰冻组织切片阳性率高而且染色强。
本实验室采用的方法我们在实际工作中尝试了目前国内外的方法,结果均不满意。单独用高温修复肾组织石蜡切片,肾小球毛细血管腔内和肾小管上皮细胞常常出现非特异性着色;而单独用酶消阳性率很低。与已有的抗原修复方法相比,高温化,
修复联合胃蛋白酶抗原修复法不仅能够减少肾组织非特异性背景,还能提高阳性率。对肾组织进行IgG、IgA、IgM、C3、C1q、κ和λ轻链免疫荧光染色基本达到了冰冻切片的染色效果,并且在轻链沉积病和淀粉样变性患者石蜡切片染色部位显示得更加清
IgA肾病、晰。LN、膜性肾病中IgA在石蜡切片有几例强于冰冻切片,可能与免疫复合物沉积不一致有
关。IgM和C3染色石蜡切片染色强度和阳性率低于冰冻切片,但不影响诊断。石蜡切片应用此方法进行免疫荧光染色取得了与诊断用冰冻组织相同的结果,因此,我们认为此方法可以作为冰冻切片无肾小球的替代方法。
有报道利用高压锅热修复会导致组织破碎,尤
[12,13]
。长时间酶消化会使组织结构破其是小组织坏
,我们用防脱片剂(多聚赖氨酸)处理过的载
玻片进行捞片,并且摸索抗原修复合理的温度和时
[5,14,15][8,12]
C1q)还是κ,λ染色,高温修复联合胃蛋白酶修复抗
原法不但使一抗的稀释度较单独用胰酶/胃酶/链霉且对比发现,石蜡切片间接免蛋白酶提高2~20倍,
疫荧光法的荧光淬灭时间长于冰冻切片直接免疫荧
[8]
光法。此外,用厚1.5μm的石蜡切片,节省了珍贵的组织标本。
参
1
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,高压锅煮的时间不能太长,喷气后2min
关闭,酶消化的时间为5~8min,太短消化不足,太长容易把组织消化掉。以切片未脱落、抗原定位准确、间
染色清晰度和背景来判定最佳的修复方法
[16,17]
。
目前国内外石蜡切片修复后仍采用直接免疫荧光法进行染色,其特异性高,节省时间,操作简单,但敏感性差。虽然利用抗原修复方法可以暴露甲醛固定的石蜡切片中的抗原,但抗原敏感性仍较低,因此所用的荧光素标记抗体稀释倍数很低,比冰冻切片的稀释倍数要低10倍左右。而我们尝试用间接免疫荧光法进行染色,发现很好地克服了直接法的不
IgA、IgM)、足。不论免疫球蛋白(IgG、补体(C3、
(下转第254页)
PD对RRF的维持优于血液透析,结果表明,且随着
随访时间延长这种优势更明显。仁济医院前期研究发现RRF较好(≥2ml/min)的患者生存率明显高于较差组(<2ml/min)。在时机选择上,美国NKF-K/DOQI提出,当终末期肾病患者残肾尿素氮清除率(Kt/V)<2.0/周或标准化蛋白氮呈现率(nPNA)<0.8g/(kg·d)时应开始透析。我们发现,与欧美相比,当残肾Kt/V同为2.0/周时,欧洲人的nPNA
·d),为1.28g/(kg而本中心研究的患者nPNA则为0.98g/(kg·d),0.9g/(kg·d)]相似。与美国人[
与欧洲人相比,在相似的RRF情况下,本研究患者的蛋白分解率更低。所以,透析开始时若要保证较
除非有相当的RRF,否则应适时开好的营养状态,始透析。
控制血压高血压一直是导致肾小球硬化的重
要原因之一。研究表明控制血压在正常范围对保护透析患者RRF有益。我们前期研究也发现血压控制较好的患者RRF和透析充分性保持良好,脑血管事件少。研究显示肾素-血管紧张素系统阻断剂(血管紧张素转换酶抑制剂或血管紧张素受体拮抗剂)可延缓RRF丢失。利尿剂对控制血压也有一定作用。其中容量平衡非常重要。但降压过程要避免过低血压或低血容量,因其也是造成RRF丢失和心血管事件的危险因素。
低蛋白饮食联合α酮酸过高蛋白摄入可导致患者血磷升高、加重酸中毒,影响透析充分性并加
快RRF丢失。近年研究显示,低蛋白饮食合并酮酸
可保护PD患者的残余肾功能。我们近年的一项前在保证患者足够热量的基瞻性随机对照研究发现,
础上,规律PD患者每日摄入0.65g/kg的蛋白加上PD液丢失的蛋白量,既能保持氮平衡,又不增加透析的负荷。当联合α酮酸时,能使新入PD患者的RRF得到较好保护,且不出现明显营养不良或炎症。
避免使用肾毒性药物,避免液体失衡,降低腹膜炎发生率肾毒性药物如氨基糖苷类抗生素、造影剂、非甾体类抗炎药都会使RRF下降增快,临床应避免使用。液体的波动过大,会使肾脏的高灌注或
加剧肾脏损害。腹膜炎发生肾缺血情况发生频繁,
会引起腹膜变性,加速RRF丢失,应尽量频率过高,
避免。
使用生物相容性溶液避免使用高糖、高渗透析液,降低葡萄糖降解产物都能提高透析液的生物相容性。近年来,新型PD液的使用如艾考糊精受到关注。在Davies的一项177例的前瞻性研究中发现艾考糊精在随访期间超滤稳定。证实艾考糊精可保护腹膜功能、达到更好的液体超滤、改善小分子溶质的清除保护RRF。
[收稿日期]2011-06-08
(本文编辑
逸
沐)
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶(上接第300页)
14ShiSR,CoteRJ,ShiY,etal.Antigenretrievaltechnique
(Appendix).//InShiSR,GuJ,TaylorCR,eds.AntigenRetrievalTechniques:Immunohistochemistry
and
Molecular
Morphology.
Natick,MA:EatonPublishing,2000,P311-333.
CoteRJ,TaylorCR.Majorfactorsinfluencingtheeffectiveness15ShiSR,
ofantigenretrievalimmunohistochemistry.//InShiSR,GuJ,TaylorCR,eds.AntigenRetrievalTechniques:ImmunohistochemistryandMolecularMorphology.Natick,MA:EatonPublishing,2000,P41-53.
[08-13收稿日期]2010-(本文编辑
逸
沐)
LimperAH.Characterizationoflymphocytepopulationsin16KeoghKA,
nonspecificinterstitialpneumonia.RespirRes,2005,15(6):137.17郑
晖,罗洪英,颜亚晖.免疫组织化学技术常见问题分析及对2007,16(1):126-128.策.中国组织化学与细胞化学杂志,
范文三:肾活检组织冷冻切片免疫荧光染色法简介
学术论文磊
对照组的设立在IHC的标准化中是极其重要。缺乏设计合理的标准对照组,就缺乏 肯定诊断结果的证据。阴性对照是用确定不含待测抗原的组织作为阴性对照组织,阳性 对照是对照组织中含有已知的抗原[7]。在日常工作中,设置阳性对照又是关键中之关 键,因为阑尾中含有多种组织成分如上皮组织、淋巴组织、平滑肌组织、间质、神经组 织、血管、间皮等,所以常选用阑尾组织来做阳性对照。
准确的病理诊断结果离不开良好的IHC质控。只有在各个细节都认真研究,并以制 度的形式固定下来,才能确保一个IHC的结果是真实可信的。然而,对IHC进行质控的 意义绝不局限于上述具体环节。在此之外,需要针对临床病理诊断建立一套完善的质量 监督和评估的体系,并最终实现对病理实验室的全面质控。“全世界的诊断实验室的标 准也将被要求提高到全球接受的科学的评估标准。如果我们不能满足这些要求,就会有 其他人出现来满足他们。”著名病理学家Hardwich已经指出此点。
肾活检组织冷冻切片免疫荧光染色法简介
经皮肾穿刺活体组织检查简称肾活检,是肾脏内科和部分肾脏外科的必不可少的检 查方法,与之相应的病理检查,形成了肾活检病理学和肾活检病理技术。肾活检标本体 积小,以舢计量,要求操作过程中,需要细心和敬业。
肾脏的组织结构复杂,需要做相应的细胞观察,因而切片要薄、显示基底膜和特殊 蛋白的特殊染色。很多肾脏疾病的病因发病机制与免疫异常有关,所以必须进行免疫病 理学、光学显微镜和电子显微镜的病理检查。
肾活检技术包括:1(特殊染色技术。2(免疫荧光染色技术。3(免疫组织化学染色技 术。4(电子显徵镜技术。它们从不同的角度揭示了肾脏内部肾小球、肾小管、肾间质各 种细胞之间的联系和病变程度,为病理诊断提供了充分的科学依据。因肾活检标本体积 小,易粘附于容器壁而影响固定效果,所以在置入固定液后,应适当摇晃,使标本充分 浸泡于固定液中。
246
北京分会瘸理专业委员会 北京分会病 理专业委员会病理技术掌缎
1(冷冻切片荧光法:冷冻切片最大程度的保存抗原,敏感性高、特异性强、操作简 单、省时、快速,成为肾活检病理诊断中一项重要的常用检测方法。
方法:
1(将冷冻切片入PBS液浸洗3次,每次5分钟。
2(将动物抗人的荧光素标记的抗体直接滴加在切片上,如羊抗人的球蛋白抗体。
3(将切片放置在湿盒内,37"C温箱孵育30分钟。
4(入PBS液浸洗3次,每次5分钟。5(用缓冲甘油封片,荧光显微镜下镜检。结果: 异硫氰酸荧光素发绿色荧光,罗丹明发红色荧光。
注意事项:封片后不立即镜检,可将切片放入湿盒内,存入4"C冰箱中保存,当天 镜检荧光强度差异不大,最长可保留一周,但荧光易淬灭,随着时间的延长荧光亮度逐 渐减弱。
2(冷冻切片间接免疫荧光法:与直接免疫荧光法相似,只是先滴加无荧光素标记的 动物抗人抗原的第一抗体(如羊抗人乙型肝炎病毒表面抗原的抗体),然后滴加荧光素 标记的另一种动物抗第一种动物的IgG抗体(如家兔抗羊IgG抗体)。此方法在肾活检 病理检查中,多用于乙肝相关性肾炎诊断的需要。
3(乙肝相关性肾炎冷冻荧光法 染
色方法: 1(冷冻切片,纯丙酮固定
lO分钟。
2(将切片入PBS液浸洗3次,每次5分钟。
3(直接滴加HBsAg、HBcAg抗体于切片上。
4(将切片放置在湿盒内,37。C温箱孵育30 分钟。
5(入PBS液浸洗3次,每次5分钟。
6(滴加含有异硫氰酸荧光素标记的R、M抗体,37?恒温箱 孵育30分钟。
7(入PBS液浸洗3次,每次5分钟。 8(用缓冲甘油封片,荧光显微镜镜检。结果:异硫氰酸荧光素发绿色荧光,罗丹明
发红色荧光。
247
学术论文喜
肾活检组织石蜡切片免疫荧光染色法简介
壁壹韭蔓盎芏堡芏壹蕉垄垂 12塑笪
石蜡切片免疫荧光法对肾活检免疫病理是一项很好的补救诊断方法。石蜡切片免疫 荧光法原理与免疫组化方法相似。可毗解决如下问题:l、冷冻切片无肾小球,无法准 确判断肾小球内有无免疫复合物。2、科研需要对以往积累的病例进行回顾性免疫病理 学研究。3,外地医院需要肾活拴病理会诊,受时间,地点等远程转送的限制。
肾活检组织的石蜡切片免疫荧光染色法与冷冻切片基本相同,但由于组织通过福尔 马林固定、脱水、包埋等程序,导致抗原损失,必须进行抗原修复(使抗原决定蔟与荧 光索标记的相应抗体作用,染色结果虽然较冷冻切片荧光法弱,但仍可做出明确诊断。 染色方法: l_石蜡切片3帅,^62—70?烤藉烤片40
舟钟1小时。 2常规脱蜡至水。
3 PB$浸冼3攻,每次5分钟。 d切片滴加胃蛋白酶(即用型)抗原修复干湿
盒内,37?恒温葙孵育】0分钟。也
可以用微波炉或高压锅进行抗原修复。5将切片
入PBS液浸冼3次,每次5舟钟。
6直接滴加动物抗^的荧光素标记的抗体于切片上。
7将切片放置在湿盒内,37?温箱孵育30舟钟。
8^PBS液浸洗3次,每次5挣钟。
248
范文四:大白鼠肝脾肺肾大脑组织切片制作方法的改进
大白鼠肝脾肺肾大脑组织切片制作方法的
改进 抗生素,防治病毒和真菌感染药品及乙型病毒性肝炎的治疗 和防治外,本例术后安置在有空气层流净化装置的监护室 内,严格隔离,这对防止感染起到重要作用.本例术后未发 生明显感染征象,说明感染并非肝脏移植术后必然的并发 症.
2.5.3各器官功能的支持
肺功能的支持:肝移植术后肺部并发症常见有肺部感 染,肺不张和胸水.肺部感染以加强气道引流为主,根据药 敏使用抗生素治疗.肺不张注意与胸水鉴别,易误诊.由于 长时间的右侧膈下手术操作及低蛋白血症等常引起右侧或 双侧的胸腔积液.积液大多为淡红色,深红色.在不影响呼 吸的情况下,一般不必进行处理.当有感染,出血或由于病 人有大量腹水或肠胀气等原因,呼吸活动受到明显限制,在 腹部情况经过处理而呼吸功能仍未改善时则应及时处理. 本例患者于术后第3天出现肺部感染,肺不张,双侧胸腔积 液,经过选用敏感抗生素,大扶康抗真菌,支气管镜吸痰,胸 腔穿刺抽液等缓解.
肾功能的支持:肝移植术前可能有包括肝肾综合征在内 的肾功能不全,术后肾功能不全发病率也较高.对肾功能的 影响因素包括:与终末期肝病有关的肾功能不良,复杂的肝 移植手术,术后肝功能状态差,抗排斥和抗感染使用的肾毒 性药物以及感染等并发症.其中术中主要因素是血液动力 学的重大改变导致的肾脏低灌注损伤或肾淤血.术后最常 见的损伤因素是FK506的肾毒性作用.本例为术前己有肾 功能损害,术中应用转流术有效的保持了血液动力学的稳
定,保证了术中肾脏的血液灌注和回流.术后维持足够的血 容量,精确控制液体量,密切监测FK506的血药浓度,选用 无肾毒性或肾毒性小的抗生素和抗真菌药物,对避免FK506 造成的肾功能损害有很大作用.另外前列腺素E1的应用保 护肾功能的作用.
2.5.4肝移植术后乙型肝炎复发的预防和治疗肝移植术后 肝炎复发分两种情况:一是受体内原有乙肝病毒感染(骨髓, 血液中单个核细胞,胰腺,肾脏);二是供肝及血液中携带乙 肝病毒引发感染.积国内二十年经验,核苷类似物中阿昔洛 韦及泛昔洛弗已证明无效,拉米夫定不主张单独应用来预防 乙肝复发.小剂量乙肝免疫球蛋白(HBIG)加拉米夫定目前 认为是非常经济而有效的方法.文献报道最高有效率可高 达97.2%.乙肝疫苗在试用中.同时预防移植术后乙肝复 发的另一措施是改变免疫抑制剂的用量,尤其是激素能直接 促进HBV的复发.本例即采用以上方案,术后近3月HBV —
DNA检测阴性,效果良好.
(收稿日期2003—04—12)
大白鼠肝脾肺肾大脑组织切片制作方法的改进 王凤琴孔佑华张金萍
(济宁医学院形态学实验室组织胚胎学教研室) 通过对230只大鼠心,肝,脾,肺,肾,大脑石蜡切片的制 作,发现由于各器官组织结构的不同,其脱水,透明,浸蜡所 需的时间亦不同.因此我们反复摸索,总结出以上各器官脱 水,透明,浸蜡的适宜时间,将其分别处理为三组进行脱水, 透明,浸蜡.现介绍如下:
材料:Wistar大鼠230只,体重250,450g,由原山东医 科大学实验中心提供.
方法:大鼠处死后,立即取心,肝,脾,肺,肾,大脑固定于
10%福尔马林溶液中,按常规方法脱水至80%酒精,心,大脑 为一组,在80%酒精内长期保存,因其对高浓度酒精,氯仿及 石蜡的温度不太敏感,所需脱水,透明,浸蜡的时间最长.肺 和肾为一组,肺取出后,立即用注射器将10%福尔马林固定 液注入肺内,在脱水,透明,浸蜡过程中必须用纱布包裹,使 其不至于漂浮在液面上而影响脱水,透明,浸蜡效果.肾取 出后立即从其前1/5处切开,以利于固定液的浸入,避免肾 小管因固定液渗透慢而引起自溶.肺,肾可在80%酒精内长 期保存,脱水,透明,浸蜡的适宜时间较心,大脑次之.肝,脾 为一组,不宜在80%酒精内时间过长放置,1,2h为宜,因其 对高浓度酒精,氯仿和石蜡的温度特别敏感,脱水,透明,浸 蜡的适宜时间最短,时间稍长会引起组织收缩,变脆难以切 片.以上各器官的适宜时间见附表.
附裹大白鼠心大脑肺肾肝脾脱水透明浸的适宣时问 结果:以上各器官在适宜的脱水,透明,浸蜡时间内,制 作的组织易于切片,在镜下观察结构清晰,典型,不收缩. 讨论:以上各器官脱水,透明,浸蜡的适宜时间是由器官 组织的结构决定的.心脏主要由心肌纤维和其间的结缔组 织构成;大脑由大量神经元及神经胶质细胞组成.由于心肌 纤维,结缔组织和神经纤维脱水,透明,浸蜡需要的时间较 长,因此心脏,大脑的适宜时间最长.肺主要是由呼吸性细 支气管,肺泡管,肺泡囊和肺泡组成,肺泡和肺泡之间的结缔 组织较少;肾脏被膜较薄,其实质由大量泌尿小管组成.由 于肺和肾主要囊状及管状结构构成,所含结缔组织较少,所 以它们需要的适宜时间次之.肝脾被膜极薄,主要有肝细胞 和淋巴细胞构成,所含结缔组织极少,对高浓度酒精,氯仿, 温度特别敏感,适宜时间最短.
(收稿日期2003—04—28)
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19?
范文五:含有中肾旁管的小鼠胚胎组织石蜡切片制备
of No(1 Medical V01(26 Jan(2009新乡医学院学报Journal Xinxiang College
?基础研究?
含有中肾旁管的小鼠胚胎组织石蜡切片制备
梁琳琳,朱桂金
(华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖中心,湖北武汉430030) 摘要: 目的基于雌性小鼠胚胎连续石蜡切片进行中肾旁管定位,探讨制备高质量的含中肾旁管的小鼠胚胎组 织
d、17(5 d、19(5 d小鼠的胚胎,聚合酶链式反应(PCR)鉴定性别,取雌性鼠胚石蜡包 切片的方法。方法正常孕15(5
埋,连续横断切片(每4张取1张行HE染色后获取连续切片图像。根据雌性小鼠胚胎生殖管道解剖走形,识别并定位 中肾旁管。结果获取含不同发育天数中肾旁管的小鼠胚胎切片。结论利用石蜡包埋连续切片对中肾旁管进行 解 剖定位,是有效获得含中肾旁管的小鼠胚胎石蜡切片的方法。关键词: 鼠胚;中肾旁管;石蜡切片 中图分类号:R361+(2文献标识码:A文章
编号:1004-7239(2009)01(0001—03
section of tissue with ductof Preparation paraffin mOll舶embryonic paramesonephric LANG Lin(1in(ZHU Gui-jin
Medwd Med&ine (Reproductive Center,Ton百i Hospital,ro,硒i College of Huazhong University of Science,Technology,Wuhan 430030,China) To a method of of sections of mOUSe tissue Abstract: Objective preparation higIl quality p衄Iffin investigate embryonic with duct location of duct in serial sections of based On the block mouse paramesenephric paraffin paramesonephric of normal d Methods 15(5 d,17(5 d,19(5 w?identified The sex mouSe by polymerase pregnancy embryos embryonic( thechain reaction female were embedded in the were sectioned (PCR),and serially paraffin block,and specimem embryonic four section(The duct was located and to the and of recqgllized hematoxylin—eosine(HE)every paramesenephric dyed according The microtome female mouse with of tract of section anatomy embryonic(Results embryonic paramesonephric weltt reproductive tO is obtained(Conclusion The and Serial sections Can be used locate the paraffin embedding paramesonephric,and duct all effective method to obtain section of mouse tissue with duct( paraffin paramesonephric embryonic mouSe sectionwords: Key embryonic;paramesonephric duct;paraffin 人类和动物生殖器官分化发育机制的研究一直 研究对象,尝试对其石蜡包埋连续横断面切片进行分
析,以获取含有中肾旁管的小鼠胚胎切片。 是生命科学中的重要研究领域。对影响中肾旁管发
育及退化的相关因素分析亦引起重视。雌性鼠胚由 1材料与方法于缺乏雄激素和抗苗勒氏管激素,在同源异形框
(盒)基因(homeobox genes,HOX)、WNT基因及相 1(1实验动物成年雌、雄昆明小鼠,均购自华中 关因子等有序协调表达调控下,中肾管退化,而中肾 科技大学同济医学院动物房,体质量(25 4-3)g。动
物在可控温度(23 4-2)oC,相对湿度(55?10),的 旁管则继续发育?引。这一过程异常可能会导致雌 不锈钢笼子内单独饲养,每天灯照13 h,处在黑暗环 性生殖道畸形和子宫性不孕旧J。为研究基因、因子在1 境1 h。食物、水正常供给。阴道涂片观察雌性小 雌性胚胎生殖管道发育过程中时空性表达,需制作不 鼠动情期,见大量无核角化细胞者为发情期,即与雄 同发育时期的雌性生殖管道切片。然而,中肾旁管无 性小鼠以2:1比例同笼。次日清晨检查小鼠阴栓, 相关特异性标记物。因此,根据解剖部位的不同,定见阴栓当天被定为怀孕0(5 d。 胎中肾旁管切片的位中肾旁管和中肾管,就变得相对重要。而含小鼠胚 1(2主要试剂和仪器聚合酶链式反应(polymerase 定位及获取方法,国内外均未见详chain reaction。PCR)试剂盒购自武汉凌飞科技有限 细报道。本实验以不同发育天数的雌性小鼠胚胎为公司;SRY引物由上海基康生物技术有限公司提 收稿日期:2008—1I—Ol 供;其他常用试剂均为国产分析纯;HPIAS-1000图基金项目:围家“973”科学基金资助项目(编号:2007CB948104) 作者简介:梁琳琳(1980一),女,河南郑州人,博士研究生在读,研究 像分析系统。 方向:生殖医学。d、19(5 1(3取材分别取怀孕15(5 d、17(5 d的正 通讯作者:朱桂金(1944一),女(广西南宁人,教授,博士生导师,研 究方向:生殖医学。 常发育雌鼠各5只,颈椎脱臼处死孕鼠。无菌条件下
万方数据
?2? of Medical V01(26 No(1 Jan( 2009 新乡医学院学报Journal Xinxiang College
mol?L“ 为胚鼠组织水平横切面。每4张切片取2张开腹,取出两侧子宫,取出胚胎。胚鼠在0(1
buffered saline,PBS)中分 60?水浴箱中展平,捞片。1张行HE染色,编磷酸盐缓冲液(phosphate 置
号, 离。截取胎鼠头部、胸部,其余组织在新配置体积分 中性树胶封片。另1张根据切片目的,待用。学显微镜观察HE染色并照相,识别中肾PBS冲洗后 用光 数4,多聚甲醛中固定,4?过夜,次13 转人体积分数为70,酒精中保存M1。 空间解剖结构。 旁管发育 1(7 1(4小鼠胚胎性别鉴定 图像采集在同济医学院病理科用HPIAS一
1000图像分析系统,对所获的HE染色图片每组约1(4(1基因组制备将取出的胎鼠头、胸制成细胞
张,按编号顺序采集图像。悬液。细胞经洗涤、沉淀后,按试剂盒说明书操作方 50 法提取细胞基因组DNA。2 结果1(4(2引物设计根据小鼠Y染色体特异的 SRYHE染色图片见图l。以脊髓定位,将切片分基因核苷酸序列?刮以及引物的设计要求合成Y。Y:
为
背侧、腹侧。在腹腔中,以直肠或膀胱定位,中肾旁管 1对引物,其核苷酸序列分别为Y。:5’一GT-
位于二者之间,上皮细胞呈单细胞管腔状,周围环绕 GAGAGAGGCAAGTrGGC-3’,Y2:5’-TCTI'AAACTCT—
GAAGAAGAGAC-3’。 间质细胞。孕19(5 d,靠近尾部,可见中肾旁管单腔 1(4(3 PCR扩增及电泳PCR循环参数为90?, 结构(图1(a。),向上逐渐分为双腔(图1一a2),后
与输30 尿管并行(图l—a,),至卵巢。孕17(5 d,靠近尾部,s;55?,30 S;70?,90 s,重复30个循环。扩增
可 产物在含溴化乙锭的20 见未退化的中肾管(2条管腔)与中肾旁管(2g?L。1琼脂糖凝胶中电泳
后,在紫外灯下直接观测结果并照相"J。雄性小鼠 腔)共存(图l—b。),中肾旁管位于中肾管之条管 可见中肾管(单管腔)和中肾旁管(单管腔)对 间。向上 出现较明显的阳性条带,雌性小鼠不出现阳性条带。 称排列(图l—b,),头部可见中肾管和中肾旁管位于膀胱周围 浓1(5包埋取雌性胚胎,剪去四肢、尾巴。用上行
组织问质上(图1一b,)。孕15(5 d,尾部仅见中肾管, 度梯度的乙醇脱水(乙醇浓度通常由50,开始, 通过浓度递增至100,),二甲苯透明,浸蜡,常规石 未见中肾旁管(图1(C。)。中部可见中肾旁管(2条管 蜡
包埋。注意在包埋时使胎鼠尾部朝下。 腔)与中肾管(2条管腔)并存(图1-c:),向上,在膀胱
1(6切片及观察常规进行连续切片,每张片厚 组织周围的间质上,可见一突出的圆形物,可见中肾
旁管(单管腔)与中。肾管(单管腔)并存(图1-4斗m。注意调整刀刃与组织的角度,保证所获切片
c,)。
图l雌性鼠胚中肾旁管解剖定位(HE染色, x40)d雌性胚胎:cl吒3:孕15(5 d雌性胚胎P:中肾旁管;M:中肾管;U:输尿管;R:直肠;B:图aI(a3:孕19(5 d雌性胚胎;bI?b3:孕17(5 膀胱 duct localization in female mouse Anatomical of embryonic(HE Fig(1 paramesonephric staining-x 40) 15(5GD GD GD _I?a3:female embryonic embryonic 17(5;ct-。3:female embryonic 19(5(bl-b3:female 万方数据P:Paramesonephric duct;M:Mesonephric duct;U:Ureter;R:Rectum;B:Bladder
?3?of Medical V01(26 No(I Jan( 2009 新乡医学院学报Journal Xinxiang College
(1)取材时应鉴定胎鼠性别,以保证所获胚鼠为雌 3讨论性胚鼠;(2)修剪标本时,应保留少许尾部组织,切 雌雄两性胚胎发育早期均形成2套生殖系统。 忌过多剪去盆腔组织;(3)包埋时应注意使胚鼠的 中肾管首先在间介中胚层形成,由中肾通达泄殖腔, 尾部朝下,并尽量避免标本倾斜;(4)切片时调整刀 是前d 刃与组织的角度,使切片为水平位的横切面;(5)捞 时,肾管演变的继续。随后,在小鼠胚胎约11(5 在中肾管的诱导下,发育中的尿生殖嵴前外侧表 片后迅速在镜下观察湿片,利用石蜡与组织,以及组 面的体
表皮内陷腔上皮纵行凹陷,开始形成中肾旁管。这种 织与组织之间的反差辨认中肾旁管,可以随时注意 朝泄殖腔延沿着午非氏管侧面延伸至尾部,而后内侧 中肾旁管的变化;(6)要注意小鼠胚胎的天数不同, 伸,呈漏斗状?J。 尤其是15(5 d胚鼠,中肾旁管位置较高。
中肾旁管开始位于中肾管外侧,而后经其腹侧 实践证明,应用上述方法有利于含有中肾旁管 伸向胚体尾端内侧。在尿生殖窦背侧,左右中肾旁 小鼠胚胎切片的制备,可提高获取含中肾旁管切片 管互相紧贴,中间有一隔膜分开。汇合后的中肾旁 的成功率。为进一步研究两性生殖管道分化机制, 管继续向尾端J。 对生殖管道发育异常等多种疾病病因分析等提供实 延伸直达尿生殖窦后壁【9生殖导管的发育随个体染色体及性腺的不同而 践标本。异。在性腺发育为睾丸的胚胎,中肾管特别发达,和 残存的中肾小管一起,分化为雄性的附睾管和输精
参考文献: 管;中。肾旁管则迅速退化,只剩下少and differentiation of the female [1]Angdinei c(Morphogenesis genital J。在 许残迹【8 tract(Genetic determinism and epithelium—stromal interactions[J](性腺发育为卵巢的胚胎,中肾旁管在HOX基因、 RevMedChir SocMedNatlasi,2007,111(1):200-209( WNT基因和SOX基因等有序协调调控下,形成输of Dll HS(Molecular mallerian [2] H,Taylor regulation development by 卵管、子宫、部分阴道及相关腺体?o|。 Hox N YAcad鼬,2004(1034):152—165( genes[J](Ann a,(Identification and 目前,对人类和动物性别决定与分化发育机制 R,et [3]Philibert P,Biason?Lauber A,Rouzier mutation of new WNT4 28 functional a analysis gene among 的研究,多集中在对其关键基因调控上。对发育调
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S(Anti-MaHefian and[8]Xavier F,Allard hormone,beta-eatenin d、17(5 d、19(5 本实验选取孕15(5 d的雌性小鼠胚胎 mllllerian duct Cell 1Endocr,no,2003,21 regression[J](Mol 为实验对象,对雌性小鼠胚胎进行石蜡包埋及连续横(1-2):115—121 (断面切片。采用每4张取2张,1张HE染色,l张待 LP(Mflllefian Obstet anomalies[J](Clin [9]Shulrnan C(rn?o,2008,51
用的方法。每个鼠胚可获含有中肾旁管的HE染色 (2):214-222(of mammalian female the [10]Yin L(Development reproductive Y,Ma 片子40,50张。用HPIAS一1000图像分析系统将所
Biochem。2005。137(6):677—683(lract[J](J 得片子按编号从尾部开始摄片。根据2套生殖系统 on cell [11]Okadal A,SatoT,OhtaY,et“(Effect ofdiethylstilbestml 在解剖部位上的不同,分析并定位鼠胚石蜡切片中中and of factor in thegrowth proliferation expression epidermal 肾旁管和中。肾管,成功获取不同发育天数的小鼠胚胎 rat female developing reproduetive tract[J](EndocrinolJ ,2001,
含中肾旁管的组织切片。 170(3):539-554((本文编辑:徐自超英文编辑:徐自超)作者认为,为获取切片,关键是中肾旁管的辨认 及准确定位。以下诸方面有利于达到上述目的:
万方数据
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