考马斯
规格:250ml
500ml
公司提取试剂盒不同样
大鼠可溶性CD30配
大鼠可溶性CD40配
大鼠干细胞因
大鼠基质细胞衍生因
考马斯
大鼠血管生成素受
大鼠含免疫球蛋白样环和上皮长因子
许多因素都能够影响质粒的产量,包括细菌培养的体,质粒的拷贝数,培养的种类及所使用的菌株。纯化的质粒需后续处即可用于 DNA的各分子生物学操作,但若用于体外转录实验,还需配合核糖考马斯亮
NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶中,定的。但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之氢键的解而变性。在溶液ii的naoh浓度为0.2mo1 ,加抽提液时,该系统的ph就高达12.6,因而促使染色体dna="" 质粒dna="">3时,就会引起双链之氢键的解而变性。在溶液ii的naoh浓度为0.2mo1>
SDS:SDS是离子型表面活性剂。主要功能有:(1)溶解胞膜上的脂质与,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。(2)解聚细胞中的核蛋白。(3)SDS能与蛋结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的合物,使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸作,所以在以后的提取过程中,须把它去除干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA 时)受到干扰。 DNA 溶液DNA 以水态稳定存,当加入乙醇,乙醇会夺去DNA 周围的水分子,使DNA 失而易于聚。一般实验中,是加2倍积的无水乙醇与DNA 相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA 在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA 失也增大,用多次醇沉淀时,就会影响收得。折中的做法是初次沉淀DNA 时可用95%乙醇代替无水酵,最后的沉淀骤考马斯亮蓝染液(常规法)要使用无水乙醇。也可用0.6倍体积异丙醇选择性
快速考马斯亮蓝染色
Mini VE 凝胶快速考马斯亮蓝染色
1. 剥离凝胶置于小盒中(如1ml枪头盒),使凝胶平展,在盒中加
2. 室
3. 弃去试剂A(可选用射器吸取),加入100ml试B,用微波炉最
4. 弃去
5. 加入100ml 试剂C,用微最大功
6. 弃
7. 加入100ml剂D,用微炉大功
8. 室温轻摇
9. 加入100ml试
考马斯亮蓝染色
考马斯亮蓝的两
时间:2010-07-10 15:26|来源:实验室前沿|
考马斯亮蓝染色法——标准方法
1(电后,将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加5倍于凝胶体积的0(25,马亮蓝R—250(溶解于50,
2(室温下振摇
3(去除染色液,收集保存可
4(依次在25,甲醇、7(5,乙酸中室振摇下脱色。灵实验室
注:?使用加热的液或脱色液可以缩短染色脱色的时间。将染液脱色液在微波炉或水浴中加热(大约50-6013)。染色时间可缩短至20min,脱色时间1—2h。?加入泡橡胶(绵)、羊毛状物或其他物品吸收染料,以快脱色时间,特别是在室温
考马斯亮蓝染色法——快速方法
1(凝胶放入一洁净的玻璃或塑料培养皿中加
2(室温下振摇
3(去除染色液,收集保存可重复使用多次,用水洗未与凝{实验室前沿}
4(加入数体积的脱色液(25,甲醇、7,乙酸)。必要时更换脱色液,凝胶加温或在脱色液中放入海绵、滤纸等吸
考马斯亮蓝染色法——最高灵敏度
1(染色前,考马斯蓝G-250(系考马斯亮蓝R-250的二甲基化衍物)必须纯化。因为商品制剂中的杂质可增染色背景。在250m17(5,乙酸中溶解4g染料,加热到70?;加44g硫酸,溶,冷却过滤或置室温离心(3000g,10min),去除上液,让染料干燥。
2(配染色液:在500m1 2,磷酸中溶解30g硫铵,待其完全溶解后,加入溶于10m1水中的0(5g纯化的考马斯亮
3(电泳后,将凝胶放入一洁净的玻璃或塑料容器中加5倍于凝
4(室温下振摇温育1h或更长时间。
5(排干液体。摇动考马斯亮蓝G—250染液,使大
6(室温下振
7(将染液倒回贮液瓶以备重复使用。用水或常脱色清洗凝胶并
8(为了使体染料固定在蛋白上,可再加入5倍体积的20,硫酸铵并于室下振摇温育过夜。凝胶固定后,可重复染增大灵
常规考马斯亮蓝染色液
常规考马斯
简介:
考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以马斯亮蓝R250为染料可用于SDS-PAGE或变性PAGE等蛋白电泳胶的常规染色或Western转膜后PAGE胶残余蛋白的。采用常规色方至少1h,采用快速染方法一般数分钟即可。本染液经改良,不含有的甲醇,但含有刺激气味的
操作步骤(仅
(一)常规染
1、PAGE电泳结束后取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色中,保染色液可
2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓摇动,室温染色1小时或更长时间。体的染色时间取决于凝胶厚度和染色时的温度。凝胶较厚,温度较低,则染色间宜适当延长。凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。通常染色凝胶的颜色色液的颜色常接,在染色液中几乎看不清胶时,可以认为已染色充分。染色时或更长时间会对最终的染色效果生负面
3、出染色液。染色液可
4、加入适量色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。Leagene推荐脱色的配方是:40%乙醇,10%
5、置于水平摇床侧摆摇床上缓慢动,室温脱色。期间更换脱色液2~4,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且白条带染色果达到预期。通常蛋白条在
6、完成脱色后凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中凝胶会发生溶涨。如需避免溶,可把胶保存含20%甘油水溶液,
(二)快速染
1、PAGE电泳结束后取胶放入适量考马斯蓝染色液中,微波加热至接沸腾或刚刚沸
2、随在染色液温度较高的情况
3、出染色液。染色液可以回
4、入适量脱色液,确保染色
5、微炉加热至接近沸腾或刚
6、随后脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动。此通常可观察到比较
8、完成脱色后,把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水的凝胶会发生溶涨。如需避免溶,可把胶保在含20%甘油水溶液,
注意事项:
1、染色时,果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加,可以大大加快染色速度。加热时宜尽量免沸腾,以免出现暴
2、脱色期间以在脱色液中加入一片吸水纸,可以使分染料吸附在吸水纸上,快脱色。脱时间过长也会导蛋
3、如果希望色的背景更低,希望获得更加清晰的蛋白带,可以加入适量的室温馏水进行涤。通过蒸馏水洗可
4、常染色脱色方法耗时较长,但检测灵度
5、为您的安全和健康,请穿实验
最优考马斯亮蓝染色Protocol
考马斯亮蓝染色
推荐选用前种染色方法,另有传统考马斯亮蓝染色和网上经验,染色效果好,不推
操作步骤:
1、 取SDS-PAGE凝胶,经超纯水漂洗; (以下步操作皆在
2、 定:将凝胶放入相应的
3、 染:取出凝胶,放入相应的染色液中,过夜
4、 色(胶体法&改良法):凝胶入纯
脱色(Neuhoff法):取出凝,用 0.1 M Tris-H3PO4冲液(pH6.5)漂洗2分钟。再25%乙醇淋洗<1 min。然后再用10%乙
试剂的配制:
1、胶体考
固定液:40%甲
染色液:1.6%磷酸、8%硫酸铵、0.02% CBB-G250、20%乙醇
脱色液:H2O
2、改良考
固定液:40%甲
染色液:10%磷酸、10%硫酸铵、0.12% CBBG250、20%
3、Neuhoff染色法:
固定液:12%三氯醋酸
染色液:2%磷酸、10%硫酸铵、0.02% CBB-G250、使用振摇。染色
色液,加入1/4
脱色所需:0.1 M Tris-磷酸缓冲液(pH6.5)、25%乙
4、传统考马斯
固定液:45.4%甲
染色液:45.4%甲醇、4.6%乙酸、0.1% CBB-G250
脱色液:5%甲醇、7.5%乙酸
5、 网上方法:
固定液:40%甲
染色液:30%甲醇、10%乙酸、0.125% CBB-G250
脱色液:30%甲
比对照片:每