输尿管支架管细菌生物膜形成的

范文一：输尿管支架管细菌生物膜形成的影响

广州中医药大学

硕士学位论文

中药对在体输尿管支架管细菌生物膜形成的影响姓名:甘澍

申请学位级别:硕士

专业:中西医结合临床

指导教师:王树声

20070401

中文摘要

美国的统计资耩显示,尿路感染在感染性休克致死亡者中占第3佼,目前仍是人类健康所丽临的最严重的威胁之一。细菌生物膜是近年来国际研究的热点,文献报道将近60%的院内感染均有细菌生物貘存在,虽常发生在等管与体陡禳入物上,鲡泌尿外科常用的输尿管支架管;在生物膜的僳护下,细菌对抗生素的抵抗力比游离于生物膜外的细菌高1000倍。潮外耳前尚未有明确防治纲菡生杨麒形成的方案,抗生素是预防生物膜形成的唯一方法。国内体外实验研究已证明清热解毒类中药对细菌、病毒等瘸原体爨有良好豹季牵帚《和杀灭{乍用。中药成分复杂,其抗蓊梳铜的多样性可能使英成为杀灭生物膜中具有耐药基因定殖菌的最佳药物。中药的广谱抗菌性及无耐药性的优势明显。闲此探讨中药对生物联的形成影响,可为中药抗菌襁裁提供薪的瑗论,扩大围手术期中药应用范围,提升中药在闺手术期的作用。

露的

观察中药对术后留羲输尿管支架管表面细菌生物膜形成的影响,研究中药抑制支架管细菌生物膜的作用,评价其疗效。

方法

采用随机对照的研究方法,纳入自2006年阻来,我院行输尿管镜碎石取石术(URL) 后并留置输尿管支架管的患者共40例。随机分为4组,即空囱组、中药组、抗生索组、中药+抗生素组。按组别不同分别给予4周治疗后,拔除输尿管支架管,将其预处理后制成病理切片,用扫描电子显微镜观察支架管表瓤细菌生物膜结构,并进行量化评分。通过统计学分析,探讨中药对细菌生物膜形成的影响。

结果

采用SNK—q检验对组间差异进行分析,中药组与抗生素缀之间差异不明显(P> 0.05);空白组与中药组、空白缀与抗生素组、空白组与中药+抗生索组、中药组与中药+抗生素组、抗生素组与中药+抗生素组之间均有明显差异(P<>

结论

1.中药对预防细菌生物膜形成有效。

2.中药与抗生素对预防细菌生物滕形成效果相当。

3.中西结合治疗可增强对纲萤生物膜的季审制作用。

关键词细菌生物膜;输尿管支架管;中医药

The lnfluence of Trad ltional of Baoter laI Biofi Im C}1i nese MediCiRe on the Formatlon from the DoubIe J Stents

Abstract

SpeciaI ity:Surgery

Author:Ganshu

Tutor:Wang shusheng

According to the US statistics,the infectious shock death caused by urinary infection WaS ranked no.3,till nOW,it i S still one of most serious threats for human hem th.Ever since recent years,bacterial biofiim was the hotspot for international research。According to the reports of 1iterature, bacterial biofilm was reported to be existed in 60%of the nosocomial infections,which usually occurred at the pipe and implant,such as the double j stents used in urology.Under the protection of biofilm,the resistant capability of bacteria to antibiotic is i000times higher than the bacteria diSSOCiated from biofilm.Furthermore.there is no definite solution for the formation of biofiIm.Till now,as the only solution for this,antibiotic WaS introduced for the defence of such kind of formation.Proved by domestic out—body research.traditional Chinese medicine(TCM)in the category of Qing Re jie Du has decent restraint and elimination function for the pathogeny 1ike bacteria,virus and etc.The ingred Jent of TCM is complex,and the diversity of its anti—bacteria system may make it as the perfect mediciRe for the elimination of colonization bacteria,whjch exists in the biofiIm and possesses drug resistance gene.As a result,the broad—spectrum antibiosis and no drug resi stance of TCM has the ext}aordinary advantage.Therefore, serious study of the influence from the TCM to the biofiim could not only provide a new theory for TCM anti—bacteria system。but also enlarge the app]ication range of TCM in the perioperative period,furthermore,it could enhance the function of TCM in such period.

Objective

Observing the inflHence of TCM to the biofilm on the double j stents surface after operation:researching the function and curative effect eva]uation of

TCM in biofi lm restraint.

Method

Selecting 40cases of patients from 2006who had double J stents

after ureteroscopic 1ithotomy(URL)operation as a randomized controIIed clinical

trial? Randomized

them, into four groups, i.e. blank

group,TCM group,

antibiotic group,TCM+antibiotic

group.After four weeks different

therapy,pull out the double j

stents,pretreating it,and also making it as

pathological sl ice and observing it by scanning electron

microscope,then uslng statistic analyse and rating, at last serious studying the inftuence

from the TCM to the biofiIm by

analysiS of variance. ;

Results

Using SNK—q inspection to analyze group

difference, as a resuIt.TCM group has no significant difference with antibiotic group(P>O.05).The

di士士erences were reported to be existed between blank

group and TCM group,

blank group and antibiotic group,blank

group and TCM+antibiotic gr。up,TCM

group and TCM+antibiotic group,antibiotic

group and TCM+antibiotic group (P<>

Conclusion

1.TCM has effect on the protection of bacterial

2.TCM and antibiotic have the similar

effect bacterial biofi Im formation.

biofilm formation. on the protection of

3?Combination of TCM with western medicine enhance the

restraint function OD bacteria biofi tm.

Key words:bacterial biofi lm;Double J Stents;Traditional Chinese Medicine

广州中医药大学学位论文原创性声明

本人郑重声明:所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均己在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名删日期:口7年r月,。日

关于学位论文使用授权的声昵

本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位硷文的规定,同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。

(保密论文在解密后应遵守此规定)

论文作者签名盟!趟沦文导师签

日期:矽年f月,。同

中药对在体输尿管支架管细茵生物膜形成的影响

引言

美国的统计资料显示,感染仅次于心血管疾病与肿瘤,位于死因的第3位。其中尿路感染在感染性休克致死亡者中占第3位,可见尿路感染仍是人类健康所面临的最严重的威胁之一。

而将近60%的院内感染均有细菌生物膜存在,且常发生在导管与体内植入物上。细菌生物膜(bacterial biofiIm)是近年来国际研究的热点,它是各种不周细菌组成的细菌社会。特点是外被以较厚的糖蛋白质膜,细菌之间借助一种多肽分子相互传递信息,相互支持,知道在抗生素治疗下,何时减慢代谢及如何利用环境优势,延长存活时间。在生物膜的保护下,细菌对抗生素的抵抗力比游离于生物膜外的细菌高 1000倍,不容易被消灭。

输尿管支架管作为泌尿系腔镜手术后常规使用的植入物,为细菌生物膜的生长及泌尿系感染的发生提供了载体。目前抗生素是现代医学预防细菌生物膜形成的唯一方法,但是即使如此,细菌仍可在输尿管支架管表面黏附、定殖和生存。另外,大量、滥用抗生素导致的细菌耐药性是另一个重大的问题。临床分离培养的浮游菌与生物膜模式中的细菌生物学特性有极大区别,临床根据培养的浮游菌药敏结果很难杀灭生物膜里的定殖菌。

国内体外实验研究已证明清热解毒类中药对细菌、病毒等病原体具有良好的抑制和杀灭作用。中药成分复杂,其抗菌机制的多样性可能成为杀灭生物膜中具有多药耐药基因定殖菌的最佳药物。中药的广谱抗菌性及无耐药性的优势明显。因此探讨中药对生物膜的形成影响,中药对在体细菌生物膜的形成是否有抑制作用,作用的环节及时期,对定殖细菌菌落是否有抑制或协同杀伤作用,可为中药抗菌机制提供新的理论, 扩大围手术期中药应用范围,提升中药在围手术期的作用。

本研究从细菌生物膜典型三层结构的出发,通过扫描电子显微镜观察分析细菌生物膜结构的变化,以期了解中医药对细菌生物膜形成的影响,从而为中医药在外科围手术期的运用提供理论依据。

中药对在体输尿管置架管细菌生物膜形成的影响

第一部分文献综述

一、中医文献关于中药抗细菌感染的研究

中药抗菌作用的理论及疗法在《急救仙方》、<外科证治全书》、《景岳全书》等古文献里均有描述。近年中药抗菌实验、临床研究成为热点,目前的研究主要集中="">

中药抗细菌感染的作用

1.1单味中药的抑菌作用:

中药对离体细菌抑制作用的研究主要分为单味中药与成方的研究两大类,主要研究的剂型为水煎剂。单味中药的抑菌实验研究文献较多。吕俊华等Ⅲ用K—B纸片扩散法探索蒲公英浸出液滤纸片对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌抑菌作用,发现蒲公英对上述细菌均有明显抑菌作用。绞股蓝的体外抗菌活性试验01中发现绞股蓝对金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌有杀灭作用,而对其它细菌在同样浓度下则为抑制作用。黄连、连翘、板蓝根、穿心莲等中药对铜绿假单胞菌,金黄色葡萄球菌,大肠埃希菌,肺炎克雷伯菌等临床常见致病菌的体外抑制作用亦得到证实啪。大黄体外抑菌试验“3发现,金黄色葡萄球菌尤其对其敏感。蔡璇等嗍对连翘、大青叶、夏枯草、盐肤木树皮的实验研究表明中药有较广的抑菌谱,可对139株微生物有不同程度的抑制作用。欧阳录明等”3报道:生大蒜汁、七叶一枝花、丁香、一口钟、虎杖、土槿皮、木鳖子、野菊花等8种中草药对离体白色念珠菌有明显抑制作用。

除了对l临床常见致病菌的研究外,对于临床耐药菌群,单味中药也显示出了强大的抑菌作用。栾耀芳等”1对引起医院感染的重要病原菌,耐甲氧西林的葡萄球菌(MRS) 进行中药体外抑菌实验。发现黄连、黄芩、黄柏、大青叶、公英、贯众等中药对MRS 有不同程度的抑制作用。20种清热解毒中药对MRSA体外抑菌的研究”1亦提示黄连、黄柏、白头翁、金银花、连翘、栀子,虎杖等抑菌效果明显,且MRSA对清热解毒类中药无抗药性。刘平等Ⅲ采用琼脂对倍稀释法分别检测5种中药对产ESBLs和AmpC酶菌株的抑菌作用。结果黄芩、黄连、黄柏、连翘和千里光对产ESBLs和AmpC酶菌株均有不同程度的抑菌作用,其中黄芩抑菌效果较好。

1.2中药成方的抑菌作用:

中药成方是临床运用的常见方式,体外抑菌实验表明成方亦具有明显的抑菌作用。姬志伟等报道“1:采用平皿打孔法,选用临床分离常见致病的需氧菌和厌氧茵涂布于培基表面、打孔,分别加入大承气冲剂、大黄、灭滴灵、先锋霉素6号和生理盐水,观察其抑菌作用。结果显示:大承气冲剂对金葡菌、粪链球菌、大肠杆菌、单形类杆菌、变形梭杆菌和脆弱类杆菌高度敏感,大承气冲剂对临床致病的需氧菌和厌氧菌均有一定的抑菌作用。王孝先“”研究发现:黄芩汤、白头翁汤、葛根芩连汤对肠道菌株有不程度的抑菌作用。葛根芩连汤抗伤寒杆菌活性和体外配伍抗菌药的实验观察

广州中医药大擘2007届硕士学位论文

…1表明:该制剂对伤寒杆菌、甲副伤寒杆菌有一定的抗菌活性。加味猪苓汤抗菌作用研究“2’发现与原方猪苓汤进行了比较,加味猪苓汤具有更强的抑菌作用。

在临床耐药菌群抑菌研究方面,中药成方也有不俗表现。陈林娜等“”运用血清药理学检测方法,采用自制中药成方“肺炎1号”临床分离的MRSA菌株、产ESBLs肺炎克雷伯菌的进行抑菌试验。结果表明:自制中药复方制剂“肺炎l号”含药血清对临床分离的MRsA菌株和产ESBLs的肺炎克雷伯菌株表现出较明显的抑菌作用。MRS对青霉素类、内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、克林霉素及四环素等通常都不敏感,可供临床选择的抗生素甚少。产ESBLs和高产AmpC酶肠杆菌科细菌是导致头孢菌素类耐药的主要原因,由于携带ESBLs和AmpC基因的质粒往往同时携带氨基糖苷类、喹诺酮类等耐药基因““,使这两类产酶菌株常对多种抗生素耐药,临床治疗难度较大,中药对这类细菌的抑制作用显得尤其可贵。

2.中药抗菌成分的多样性

中药抗感染的成分大致可分为有机酸、生物碱、黄酮、挥发油、甙类、醌类等主要成分“”,如黄连的有效成分为生物碱(主要为:小檗碱、掌叶防己碱、非洲防己碱、药根碱、黄连碱等)、酚酸类(主要为阿魏酸、3,4一二羟基苯乙醇葡萄糖甙等)、黄柏酮及黄柏内酯,主要抑菌成分为小檗碱;黄芩的根是清热解毒最常用的中药,化学成分主要为黄酮类,其包含黄芩甙元、黄芩甙、黄芩素、黄芩素一7一O—D一葡萄糖甙、汉黄芩素等几十种:黄柏主要抑菌成分为小檗碱;大黄主要抑菌成分为蒽醌衍生物,其中以大黄酸、芦荟大黄素作用最好;败酱草主要抑菌成分为挥发油如败酱烯、皂甙、环烯醚萜等:蒲公英主要抑菌成分为萜类、黄酮类一木犀草素;槐角主要抑菌成分为生物碱、黄酮类、脂肪酸;地榆主要抑菌成分为三萜皂甙、黄酮类、鞣质;皖贝母主要抑菌为成分皖贝甲素、皖贝乙素、皖贝丙素等;北豆根主要抑菌成分为脂溶性总碱、北豆根多酚羟基和蝙蝠碱等;虎杖主要抑菌成分为大黄素、白藜户醇;地坍椒主要抑菌成分为木犀草素、黄酮等。绞股蓝的抑菌成分是绞股蓝皂苷及黄酮等,化学结构属于达玛脂烷醇类”…。黄芩的主要成分黄芩苷对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌有体外抗菌作用“”。李巧如等“”研究发现丁香水提取液、醇提取液及挥发油对多种细菌、真菌具有抑制和杀灭作用。广藿香水提物和挥发油对沙门菌、大肠杆菌、志贺菌,金黄色葡萄球菌等常见肠道致病菌均有一定的抑制作用“”。

3.中药抗细菌感染的机制

中药抗细菌感染目前的研究绝大部分仍然停留观察在中药提取液的体外抑菌疗效的水平,缺乏对中药抗细菌感染的具体机制作较为系统深入的研究。文献报道”” 绞股蓝的抑菌作用机理可能与增强白细胞的吞噬功能有关。另有研究表明单一使用中药抑菌作用很弱,但当中药与其它药物协同作用时却表现出较强抑菌作用,其中的具体机制尚不明确。如黄连治疗痢疾疗效肯定,其与TMP(甲氧苄啶)合用对福氏痢疾杆菌及志贺氏痢疾杆菌的抗菌活性增加…1。常明向报道””TMP对香连丸的抗菌作用具有

中药对在体输尿管支榘管细菌生物膜形成的影响

协同作用。关洪全发现啪1生姜对伤寒杆菌、霍乱弧菌等微生物有杀灭作用,但作用较弱,而与醋酸合用时,对空气中落下杂菌和引起食物发霉腐烂的主要真菌则有较好的抑制作用。孔繁智嘲,徐锡鸿嘲1,孙大锡哺1等对中药成方研究后,认为中药抗感染的作用机制可能与中药对抑制细菌的粘附作用有关。细菌粘附是生物膜形成的先决条件,80%以上的感染性疾病是由生物膜细菌引起的,人体内如牙面上的牙菌斑,体内人工装置(人工心瓣膜,各种体内导管)上都有细菌生物膜广泛存在嘲’“。是否中药抗菌抑菌的机制与影响细菌生物膜的形成有关,值得进一步深入研究。

二、现代医学对细菌生物膜的研究

尿管相关性尿路感染(cAUTI)是最常见的医源性感染,CAUTI的发病机理研究在近年有较大的进展,其中,生物膜是研究的热点。因此,CAUTI的高发病率和难治性与尿管表面的生物膜形成有密切的关系。本文就近年相关研究作一综述。

1生物膜的形成及结构

细菌在固体表面黏附以及生长都是自然现象。生物膜的定义为细菌及其细胞外产物在表面聚集形成的一种有序群落。细菌很少作为一个孤立的有机体单独存在,而是多数细菌或几种细菌形成生物膜结构,并借助一种多肽分子在细菌间相互进行交流, 相互合作抵御机体免疫或药物的清除作用。细菌生物膜的微观结构及特性目前研究较明确啪1,生物膜的形成主要包括几个主要的步骤:1.植入物条件膜的沉积;2.细菌的附着:3.细菌靠胞外聚合物在植入物表面的黏附及锚定;4.细菌的生长、繁殖和播散汹1。在植入物置入尿路早期,尿液中的Tamm-Horsfali糖蛋白、各种的离子、多糖和其他成分短时间内向植入物表面弥散并吸附形成条件膜㈨,条件膜的形成使植入物表面的特性发生改变,这对于许多没有直接或强力黏附机制的病原体来说,条件膜的形成是非常重要的”“。随后是细菌的接近和附着。细菌黏附的能力受静电和疏水性相互作用、离子力、渗透压和尿PH值影响的”1。最初的黏附是可逆的,包括了疏水性和静电力在内。然后由细菌多糖产生不可逆的附着,使细菌锚定于植入物表面。最后细菌依据其菌种特性产生定殖。细菌在植入物表面的生长率及播散方式对定殖都很重要。这些方式是影响生物膜表面分布的菌种特性。细菌定殖标志生物膜结构的形成。在这一阶段,细菌形成保护性微环境以对抗许多抗生素和宿主的免疫防御机制。微菌落是生物膜的基本结构单位,微菌落相互融合连接形成大片均~的生物膜。根据所包括的菌种,微菌落由10一26%的细胞和75--90%细胞外聚多糖(EPS)基质组成。生物膜含有“液体通道”,使细胞生长所需的必需营养和氧气得以传输…1。生物膜中的细菌分泌化学信号调节种群密度依赖基因的表达,对生物膜的形成也有重要作用…1。总的来说,生物膜通常由3层构成:连接膜:附着于组织或生物材料表面。基底膜:包含致密的菌群。表面膜:最外层,浮游菌可从其表面被释放后自由飘浮和播散懈l。 2生物膜中细菌的生物学特性

广州中医药大学2007届硕士擘住论文

目前,对于生物膜的研究已深入分子生物学领域,但研究较少。Eiichi Ando啪1等回顾性分析了109组尿路感染病人耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)隔离群的生物膜形成,以及生物膜形成能力和致病性决定子/临床背景之间的关系,提示MRSA在尿路的定殖和感染可能由某些致病力决定子的基因产物所促进。而Yuko Seno㈣等研究了352组尿路感染病人粪肠球菌隔离群的某些致病因子基因编码、抗生素抵抗的流行率和转移性、生物膜的产物,以及与其相关的病人的医疗记录,发现积聚了致病基因的粪肠球菌隔离群易于在尿路中形成持久的生物膜。生物膜中细菌的抗生素易感性是另一显著特点,抗生素的应用是目前预防生物膜形成的可能性之一。但是即使是在抗生素存在的情况下,细菌仍可在尿管和输尿管支架管表面黏附、定殖和生存…。生物膜中细菌的生物学行为以及表型均与浮游菌不同;生物膜的检测也是一个问题,因为实验室程序是利用浮游菌去辨别感染的㈨。因此,抗生素治疗生物膜的失败归因于治疗机制的变异,包括“”:糖蛋白复合物阻碍抗生素穿透生物膜的全层(外抵抗力)。研究显示,生物膜的表膜影响营养的转运,干扰抗生素的运输“1’“。细菌生物膜内的营养扩散受限,产生细菌增长率的空间梯度,导致细菌生物膜内细菌表型的多样性。位于生物膜浅层、生长越快的细菌对抗生素越敏感。反之越不敏感。慢生长细菌表面抗生素结合蛋白的表达量非常少,使得抗生素治疗无效。生物膜内的细菌激活许多基因,改变了细菌外壳、靶分子和抗生素易感性(内抵抗力)。目前观点是,基因转变导致表型改变,当65_80个蛋白质分子改变时产生的抗药性所起的保护作用,比细胞外聚多糖基质所形成的外抵抗力要大的多“”。生物膜中的细菌可以感应外部环境,在生物膜内互相沟通以及传递基因信息和质粒m’”1。生物膜内细菌常能在比杀死同种浮游菌高1000一1500倍浓度的抗生素中生存㈣。

3导尿管生物膜

导尿管留置7天以后,尿管表面,尤其在内腔多己形成细菌生物膜,因此长期使用导尿管都会导致感染””。Gabnderton等Ⅲ1在置入3—83天的50根尿管中发现44根有生物膜。导尿管引起的感染有两种传播方式:腔外感染通常是黏附的细菌生物膜沿尿管上行扩散,腔内感染通常是浮游菌在急速的尿流中靠跳跃运动超前其所黏附的生物膜…1。导尿管感染多数由腔内上行感染引起,少数由腔外途径引起。最近发现34%的 CAUTI与引流系统的腔内污染有关“”。Nickel等“”在实验中证实细菌在腔内上行移动速度(32--48d,时)比腔外(72—168,J,时)快。Nicolle等呻1发现铜绿假单胞菌可在导尿管腔内逆尿流运动,大约在细菌附着后24,时,生物膜开始形成,并很快逆尿流在管腔内上行发展(1~2Cm/h),并认为细菌上行运动速度.与浮游型细菌在尿液涡流中跳跃式运动有关。

4输尿管支架管生物膜

细菌生物膜可以在完全留置于尿路的输尿管支架管上生成。Reid等””首次报告了双J管生物膜的形成,发现90%硅胶双J管被细菌黏附定殖,但是临床检测到的尿路感

中药对在体输尿管支架管细茼生物膜形成的影响

染发病率却只有27%。更多值得注意的数据表明45%的黏附病原体以低数量出现(101—102/cIII,),55%以小型和大型微菌落生物膜出现(>2X102—10‘7)。应用传统实验操作难以检测生物膜形成的难题,被一个237根输尿管支架管的大样本测试研究所确认。它表明实际上68%的支架管被细菌定殖,但只有30%的病人发现菌尿㈨。所以, 尿培养阴性并不能排除细菌定殖支架管的可能性。该研究证明了置入时间长度和感染发生之间的关系。

5抗生素和生物膜

抗生素可有效对抗浮游菌和清除粘膜表面黏附的微菌落,但是却经常不能根除尿管上的细菌生物膜。根据部分体外和体内的研究,B一内酰胺类和氨基糖甙类抗生素可以抑制新生物膜生长的形成和扩散。另一方面,氟喹诺酮类如氧氟沙星、左氧氟沙星和环丙沙星,因为其良好的穿透性,故对新旧生物膜均有效。如环丙沙星可以快速地在尿路中达到较高的药物浓度,对一般的病原体有效。它能穿透生物膜,使导管表面的药物浓度(<1.ong l/cm="对抑制细菌粘附有显著作用,并在结束抗生素治疗1或2周后,仍然在生物膜中存在帆”。大多数研究者认为抗生素只能通过清除无保护的" 游离细菌,以及阻止或抑制生物膜表面细菌的代谢活动来减缓生物膜的形成ⅲ’娥刚。="">

CAUTI生物膜包括经尿道或耻骨上留置尿管、肾造瘘管和输尿管支架管等。医源性血液感染原因中,CAUTI占第二位”1。cAUTI,感染的预防是首要的,最有效方法是限制尿管使用,尽可能地缩短保留时间。但是生物膜的形成仍是CAUTI的主要问题, 因此调整生物材料的表面被认为是预防细菌生物膜最有希望的策略。为此,许多不同的技术已被设计出来,如混有控释的抗生素或消毒剂(美满霉素、利福平、庆大霉素、呋喃妥因)的植入物表面;金属银浸渗植入物表面(和其他金属);调整植入物表面以改变或增加其疏水性,或使其产生具有内在抗菌活性的功能基团;肝素和磷酸胆碱包被的抗黏附表面等呻’”“。

若干不同的疾病预防方法已经在研究之中,并取得一些有前景的结果。未来的目标是:制定简单的诊断和量化生物膜感染的方法:发展能有效对抗生物膜模式的抗菌剂;识别生物膜细菌的靶分子和参予生物膜形成的尿液成分;研究生物材料表面和尿液之间的相互作用;发明一种理想的、能够抵抗蛋白质和细菌黏附的植入物外膜。

广州中医药太学2007届硕士擘住论文

第二部分临床研究

一、研究内容:

将已纳入研究的病例随机分为空白对照组、抗生素组、中药组、抗生素+中药组, 治疗4周后拔除输尿管支架管,扫描电镜下观察输尿管支架管细菌生物膜结构的连续性、完整性情况,评价其对输尿管支架管生物膜结构的影响,并探讨中药对输尿管支架管细菌生物膜的抑制作用。

二、研究方法

1-病例选择:广东省中医院2006年3月至2007年3月泌尿外科行输尿管镜取石术 (ureteroscopic Iithotomy,URL)后并留置输尿管支架管的患者。

2.研究对象的纳入标准:.

(1)性鄹不限,年龄在20~55岁。

(2)首次手术者。

(3)术后中医辨证为湿热蕴结型的患者。

(4)尿常规(白细胞2+以下)、尿细菌培养为阴性,已行URL手术并留置输尿管支架管的患者。

(5)符合并已纳入广东省中医院泌尿外科URL临床路径的患者。

附:中医辨证诊断标准:

对中医关于石淋的证候分型进行文献回顾,结合我科对于石淋手术后证候分析, 认为最常见的证型是湿热下注型。辨证标准主要根据《中华人民共和国国家标准?中医临床诊疗术语证候部分》、《中医外科学》制定:

湿热下注型:恶寒发热,腰痛,少腹急满,小便频数短赤,溺时涩痛难忍,淋沥不爽,舌苔黄腻,脉弦滑或滑数。

3.病例排除标准:

(1)不符合上述纳入标准者。

(2)可能影响本研究的效应指标观测者,如低蛋白血症等。

(3)合并有脑血管、肝、肾和造血系统等严重危及生命的原发性疾病、未控制的恶性肿瘤患者及精神病患者等。

(4)合并其他部位感染如肺部感染等,必须用抗生素治疗的。

(5)孕妇、哺乳期妇女。

4.药物的选择

(1)中药的选择:

尿感宁颗粒(iF大青春宝药业):国家中药保护品种、国家基本医疗保险用药、 8

中药对在体精尿管支架管细菌生物膜形成的影响

专治急慢性尿路感染。

尿感宁颗粒优点:使用安全方便、疗效可靠的抗尿路感染的中成药。具有清热解毒、利尿通淋的功效,适用于淋证的湿热下注型。

药理作用:经浙江大学国家医药管理局新药研究中心研究显示,尿感宁冲剂具有:抗感染作用:体外抑菌试验表明尿感宁冲剂对伤寒杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、粘质沙雷氏菌、白葡菌、绿脓杆菌,大肠埃希氏菌均有一定抑菌作用,MIc为 25mg/ml一50mg/ml。

抗炎作用:对角叉菜胶诱导的小鼠腹腔白细胞聚集有明显抑制作用。

利尿作用:对水负荷大鼠具有利尿作用,与对照组比较有显著差异。

解痉作用:离体试验显示尿感宁冲剂可解除因Carbacol、HistamineS[起的家兔膀胱平滑肌、输尿管平滑肌痉挛。 ;

增强免疫作用:尿感宁冲剂能明显增加腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

临床验证:浙江省中医院、浙江医科大学附属第二医院、浙江省建工医院、浙江省人民医院用尿感宁冲剂治疗急性尿路感染和慢性尿路感染急性发作患者308例,结果显示:临床痊愈96例,显效130例,有效71例,显效率、总有效率分别为73.4%和96.4%; 尿频涩痛、恶寒发热、小便淋漓不尽、小腹胀满、腰痛等临床症状明显改善;对尿细菌清除和降低尿白细胞数亦有显著疗效:治疗前后各项安全性指标无明显异常变化。规格:每袋装5克(无蔗糖)。

用法用量:开水冲服,一次59,一日3次。

(2)抗生素的选择:

左氧氟沙星(来立信):

药理作用:为氧氟沙星的左旋体,其抗菌活性约为氧氟沙星的2倍,它的主要作用机制为抑制细菌DNA旋转酶活性,抑制细菌DNA复制。本品具有抗菌谱广、抗菌作用强的特点,对多数肠杆菌科细菌,如肺炎克雷白菌属、变形杆菌属、伤寒沙门菌属、志贺菌属、部分大肠埃希氏杆菌、流感杆菌、铜绿假单胞菌、淋球菌等有较强的抗菌活性。对部分葡萄球菌、肺炎链球菌、衣原体等也有良好的抗菌作用。

药代动力学:口服后吸收完全,相对生物利用度接近lOo%。单剂量空腹口服0.Ig 和0.29后,血药峰浓度(Cmax)分别达1.36mg/L和3.06mg/L,达峰时间(Tmax)约为 1小时。血消除半衰期(tl/2B)约为5.1~7.1小时。蛋白结合率约为30%~40%。本品吸收后广泛分布至各组织、体液,在扁桃体、前列腺组织、痰液、泪液、妇女生殖道组织、皮肤和唾液等组织和体液中的浓度与血药浓度之比约在1.1~2.1之间。本品主要以原形自肾排泄,在体内代谢甚少。口服48t]、时内尿中排出量约为给药量的 80%~90%。本品以原形自粪便中排出少量,给药后724,时内累积排出量少于给药量的 4%。

适应症:适用于敏感菌引起的:1.泌尿生殖系统感染,包括单纯性、复杂性尿

广州中医药大学2007届硕士学位论文

路感染、细菌性前列腺炎、淋病奈瑟菌尿道炎或宫颈炎(包括产酶株所致者)。2.呼吸道感染,包括敏感革兰阴性杆菌所致支气管感染急性发作及肺部感染。3.胃肠道感染,由志贺菌属、沙门菌属、产肠毒素大肠杆菌、亲水气单胞菌、副溶血弧菌等所致。4.伤寒。 5.骨和关节感染。6.皮肤软组织感染。7.败血症等全身感染。用法与用量:口服,成人每次0.29,每曰二次,或遵医嘱。

不良反应:见纳差,恶心、呕吐及焦虑、失眠、头晕、头痛、皮疹、及血清GOT、 GPT、总胆红素升高等。程度大多轻微,疗程结束后多可消失。

禁忌症:喹诺酮类药物过敏者,妊娠、哺乳期妇女、18岁以下患者及癫痫患者禁用。

注意事项:严重肾功能不全者、中枢神经系统疾病患者慎用,避免与含铝、镁的制酸剂或铁剂合用。 ;

三、研究对象及方案:

1.样本来源及含量:由我院泌尿外科选取符合纳入标准病例共40例,随机分为以下四组,每组各lO例:空白对照组、抗生素组、中药组、抗生素+中药组。

2.研究方法:

(1)随机方法:采取简单随机化方法。

随机分组:将本样本含量40例及分组数四组输入统计软件包pems3.1中,产生随机数字及分组数,制备随机卡,装入依次编号的不透明信封,信封的编号与卡片上的序号相同,按照纳入患者进入试验的顺序依照信封编号拆封取卡,严格按照卡片序号规定分组及治疗。本课题设空白对照组、抗生素组、中药组、抗生素+中药组各10例。 (2)实验实施:

①空白对照组:术后不予抗生素及中药。

②抗生素组:术后予左氧氟沙星口服至拔管。

③中药组:术后予尿感宁口服至拔管。

④抗生素+中药组:术后予左氧氟沙星及尿感宁口服至拔管。

患者术后4周返院行膀胱镜下输尿管支架管拔除术,收集输尿管支架管。

3.术后4周拔除输尿管支架管,切取输尿管支架管标本经L 5%戊二醛固定及l%锇酸双重固定等处理(具体流程如下),扫描电子显微镜下观察输尿管支架管表面细菌生物膜形成情况并评分。观察所用扫描电子显微镜广州中医药大学电镜教研室提供,德国里奥公司生产,型号:LEO 1430VP。

处理步骤:取lcm长的一段(纵横切)输尿管支架管,经PBS清洗后,用2.5%的戊二醛作前固定2d,时;再次PBS清洗后,用1%的锇酸作后固定1小时;接着用PBS清洗后,然后分别用30%,50%,70%,80%,90%,95%的酒精梯度脱水各10分钟; 最后在100%的酒精中连续脱3次,每次10分钟。接着把经过脱水的输尿管放入临界点

中药对在体靖尿管支架管细菌生物膜形成的影响

干燥仪中经液态C02干燥后,在离子溅射仪中镀膜,最后在LEO-1430VP扫描电子显微镜中观察。

(暴露原貌) (双重固定)

取材一清洁一固定一脱水一千燥一喷镀一观察图l:扫描电子显微镜生物样品制备程序示意图

四、研究观察内容:

1.电镜观察输尿管支架管细菌生物膜三层结构的完整性、连续性情况:

0分:无生物膜结构。

1分:具有连接膜结构。

2分:具有连接膜、基地膜结构。

’ 3分:具有连接膜、基地膜及表层膜完整三层结构。

2.中止、撤出标准

(1)试者依从性差,未能坚持治疗者。

五、研究观察结果:

本研究共对40名患者进行了临床研究,严格按照脱落标准。纳入病例无中止及脱落,共纳入术后患者40例,收集了40例URL术后输尿管支架管。

I.研究对象情况

(1)研究对象背景资料:

空白组:共lO例,男性8例,女性2例,年龄30一52岁,平均年龄40.3岁;

中药组:共10例,男性9例,女性l例,年龄28—46岁,平均年龄42.5岁;

抗生素组:共10例,男性7例,女性3例,年龄33—49岁,平均年龄41.6岁; 中药+抗生素组:共10例,男性8例,女性2例,年龄32—50岁,平均年龄41.2岁。

(2)各组间年龄比较:

广州中医药大学2007届硕士学位论文

表3各组间年龄比较

计算后得出F=1.135,查表FO.05,3,36=2.87,FO.05。结论:按d=0.05水准,认为4组的差别不具有统计学意义,即各组间年龄无统计学差异。

(3)各组间性别比较:

表3各组问性别}t较

运用x2检验进行比较,计算出X2=1.25。查x2界值表,得0.5>P>O.75,以a=O.05水准,不能下4组男性占比率有差异的结论,即各组间性别无明显差异。

2.电镜下观察情况

空白组:

中药对在体精尿管支架管细菌生物膜形成的影响

图2图4

?13一

图3

广州中医药大学2007届硕士学位论文中药绸!

抗生素组:

图5

图7

图8

图6

图9

中药时在体输尿管支榘管细茵生物膜形成的影响

图10

中药+抗生素组:

图11

图13

.15. 图12

图14

广州中医药走学2007届硕士擘住论文

3.电镜评分及统计学分析

具体评分见附录。

(I)方差分析各组评分的分值

表3各组评分后的比较

计算后得出F=23.234,查表FO.05,3,36=2.87,F>FO.05,3,36,所以P< 0.05。结论:按q="">

(2)SNK—q检验分析各组间分值:

根据样本均数从小到大排列,并赋予秩次:

表4各组评分后的比较

根据秩次不同,分别计算q值,以实际q值和相对应的q界值比较,确定对应的P值。 16

中药对在体输尿管支架管细菌生物膜形成的影响

表4两组之间分值的比较

结论:按a=O.05水准,2,3X间,即中药组与抗生素组之间差别无统计学意义。按d=O.Ol水准,其余各两组问差别均具有统计学意义。

第三部分讨论

细菌黏附以及在固体表面的生长形成生物膜是临床医疗中广泛存在的现象,并严重影响着医疗效果。泌尿外科腔镜技术的发展使导管在泌尿手术中扮演着重要的角色,也为细菌生物膜的形成提供了载体,导管生物膜的形成是泌尿外科细菌感染发生、发展及耐药形成的关键因素。抗生素是西医目前预防生物膜形成的主要唯一方法,但是即使如此,细菌仍可在尿管和输尿管支架管表面黏附、定殖和生存。另外,大量、滥用抗菌剂导致的细菌耐药性是另一个重大的问题。临床分离培养的浮游菌与生物膜模式中的细菌生物学特性有极大区别,临床根据培养的浮游菌药敏结果很难杀灭生物膜里的定殖菌。

国外研究发现典型的细菌生物膜由三层结构组成,即连接膜、基地膜、表层膜。要预防及有效的治疗感染、提高临床疗效,唯一的办法是抑制细菌生物膜的形成、破坏其完整的结构。

国内体外实验研究已证明清热解毒类中药对细菌、病毒等病原体具有良好的抑制和杀灭作用,中药成分复杂,其抗菌机制的多样性可能成为杀灭生物膜中具有多药耐药基因定殖菌的最佳药物。

本研究筛选国家认证的临床疗效确切的清热解毒、利湿通淋的复方中成药尿感宁颗粒,治疗URL术后留置输尿管支架管、中医辨证为湿热下注型的患者。40例术后患者分为四组,即空白组、中药组、抗生素组、中药+抗生素组。通过年龄及性别的SNK —q检验确定组间年龄、性别无明显差异(P<>

广州中医药大学2007届硕士学位论文

按组别不同分别给予4周治疗后,拔除输尿管支架管,将其预处理后制成病理切片,用扫描电子显微镜观察导管表面细菌生物膜结构,参照自拟的评分标准进行量化评分,各组均值如下:空白组:3,中药组:2.2,抗生素组:2.1,中药+抗生素组: I.1。采用sNK—q检验对组间差异进行分析,中药组与抗生素组之间差异不明显(P> 0.05);空白组与中药组、空白组与抗生素组、空白组与中药+抗生素组、中药组与中药+抗生素组、抗生素组与中药+抗生素组之间均有显著差异(P<>

中医对于淋证发病机理的认识,认为主要包括外感湿热、饮食不节、情志失调、禀赋不足或劳伤久病等。而石淋主要有湿热下注、气滞血瘀、肾阴虚、肾阳虚4个基本证候。湿热下注是石淋临床最常见证型之一,因此本课题主要针对这一证型的病例进行研究,力求从对细菌生物膜形成影响的角度先探讨中医药抗细菌感染的作用机制,为今后中医药在围手术期的运用提供一些理论依据。 .

中药对在体输尿管支架管细菌生物膜形成的影响

结语

~、结论

1.首次从细菌生物膜形成的角度,采用扫描电子显微镜观察的方法探讨中药对 URL术后湿热下注型细菌生物膜形成的影响。

2.中药对预防细菌生物膜形成有效。

3.中药与抗生素对预防细菌生物膜形成效果相当。

4.中西结合治疗可增强对细菌生物膜的抑制作用。

二、该课题存在的问题及展望

1.存在的问题

(1)病例纳入是我们按照《中华人民共和国国家标准?中医临床诊疗术语证候部分》、 <中医外科学》制定:湿热下注型具体描述为:恶寒发热,腰痛,少腹急满,小便频数短赤,溺时涩痛难忍,淋沥不爽,舌苔黄腻,脉弦滑或滑数。因为以上均为客观指="">

(2)《中医病证诊断疗效标准》中石淋主要有湿热下注、气滞血瘀、肾阴虚、肾阳虚4个基本证候。目前我们只对湿热下注一个证型进行研究,还没能探讨其他证型痔成因。因此,还有待于今后作更进一步的研究。

(3)由于时间仓促及实际条件、经费的限制,本课题只对40例术后4周拔管病例进行了扫描电镜观察及研究,样本量偏小,观察指标较单一,不足以完全反应整体的情况, 因此需要今后进一步扩大样本量,增加研究指标,以提高结论的可信性。

(4)目前国内外尚未对细菌生物膜的三层典型结构观察的公认评分标准,本次扫描电子显微镜下观察的评分标准为自拟,可能存在对膜结构评价的局限性,权威性不足。 2.展望

(1)首次从抑制细菌生物膜形成的角度,初步评价了中药抑制细菌感染的疗效,为进一步研究中医药抗菌机制提供了依据。 ,

(2)作为一种方法学,通过对细菌生物膜典型的三层结构的评分量化,对研究其形成及防治机制提供了一种新的评价方法。

广州中医药大学2007届硕士学位论文

参考文献

[1]吕俊华,邱世翠,张连同等.蒲公英体外抑菌作用研究.时珍国医国药,2002; 13(4):215--216

[2]曾晓黎.绞股蓝的体外抗菌活性试验.中成药,1999;21(6):308-310

[33刘如玉,陈守涛.黄连等8种中药对常引起医院内感染的条件致病菌体外抗菌活性检测.福建中医学院学报,2004,14(2):26—27

r4]姬志伟,罗连城,解基良等.大承气冲剂和大黄的体外抑菌作用.中国中西医结合外科杂志,2003;9(6):451--453

[5]蔡璇,彭松,施金玲.五种中药对139株微生物体外抗菌活性的实验研究.药学服务与研究,2005,5(3):267--270

[6]欧阳录明,黄晓敏,吴兴无等.中草药体外抗白色念珠菌的实验研究.中国中医药信息杂志,2000;7(3):26—27

[73栾耀芳,孔祥山,吴国英.黄芩等8味中药对MRS的抑菌性研究.山东医药,2005; 45(11):74

[8]杨明炜,陆付耳,徐丽君等.20种清热解毒中药对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外抑菌的初步观察.中国药师,2006,9(2):141—142

[9]刘平,叶惠芬,陈惠玲等.5种中药对产酶菌的抑菌作用.中国微生态学杂志,2006; 18(1):39—40

[10]王孝先.黄芩汤、?白头翁汤、葛根芩连汤对肠道菌株抑茵作用的实验观察.中国中医基础医学杂志,2001;7(1):42--44

[11]夏中伟,李应超,江淦达等,葛根芩连汤抗伤寒杆菌抗菌活性和体外配伍抗菌药的实验观察.实用中西医结合杂志,1996;9(7):394

[12]李学林,王树玲,赵曦等.加味猪苓汤抗菌作用的实验研究.中国中医药科技, 1999;6(5):310—311

[13]陈林娜,周立勤,王汉敏等.中药对l临床耐药菌株的体外抑茵试验观察.中华医院感染学杂志,2005:15(1):l 18—120

[14]张致平.抗耐药菌药物研究进展[J].中国临床药理学杂志,2003:19(1):50一55 [15]吴玉红,邵宗鸿.中草药抗感染的研究进展.中国中医药杂志,2004;2 (12):521—524

[16]张志清,刘剑,李娟.中药抑菌作用研究进展.中药材,2002;25(9):688— 690

[17]程国强,冯年平,唐琦文等.黄芩苷对跟科常见病原菌的体外抗菌作用.中国医院药学杂志,2001:21(6):347-348

[18]李巧如,刘宗智,任健康等.丁香提取物抗菌机理的探讨.西北药学杂志,2001; 16(6):261—262

中药对在体输尿管支架管细茸生物膜形成的影响

[19]刘琥琥,罗集鹏,赖沛炼等.广东高要与吴川产广藿香提取物对肠道致病菌抗菌作用的比较研究.中药材,1999;22(8):408-411

[203常明向,姚垂宇,刘小平等.黄连联用TMP抗菌作用的实验研究.中国中药杂志, 1994:19(12):748—749

[21]常明向,刘小平,姚垂字等.香边丸联用TMP抗菌作用的实验研究.中国药房, 199516(4):1铲17

[22]关洪全,栗田启幸,大荒田素子等.生姜与醋酸协同抗菌作用的实验研究.中国中医药信息杂志,2000;7(8):23-24

[23]孔繁智,沈永浩,张敏等.加味玉屏风散对慢性支气管炎模型鼠呼吸道细菌粘附性的影响.中华结核和呼吸杂志,1990;13(6):361--332

[24]徐锡鸿,孔繁智,张敏等.加味玉屏风散抗慢支大鼠呼吸道粘膜细菌粘附的实验.浙江中医杂志,1991;26(1):39

[25]孙大锡,王道若,刁憬瑜等.八正散抑制尿道致病性大肠杆菌的菌毛表选和对尿道上皮细胞的粘附的影响.中医杂志,1987;28(I):6l一62

[26]Lambert RJ,Johnston MO,Simons EA.J Appl Microbiol,1999;87(5):782 ~786

[27]Stewart PS,Costerton JW.Lancet,2001:358(9276):135—138

t28]Costerton Jw,Stewart PS,Greenberg EP.Bacterial biofilms:a comnlon

cause of persistent infections.Science, 1999;284:1318一1322

[29]Reid G.Biofilms in urinary tract infections.Curr opin Urol, 1997; 7:61-4

[30]Fletcher M(ed)(1996)Bacterial adhesion:molecular and ecological diversity.Wi ley,New York

[31]Busscher HJ,Stokoos I,Schakenraad JM(1991)Two—dimensional spatial arrangement of.bronectin adsorbed to biomaterialS with different wettabilities.Cells Mater l:49—57

[323Choong S,whitfield H(2000)Biofilms and their role in infections in urology.Br J Urol 86:935—941

[33]Densted 3D,Reid G,Sofer M(2000)Advances in ureteral stent tecnology. World J Urol 18:237—242

[34]Costerton J,Lewandowski Z,Caldwell D,Korber D,Lappin—Scott H(1995) Microbial biofiIms.Annu Rev Microbiol 49:71l一745

[35]Busscher GJ,Bos R,van der Mei HC(1995)Initial microbial adhesion iS a determinant for strength of biofilm adhesion.FEMS Microbiol Lett 128:229—234

.21.

广州中医药大学2007届硕士学位论文

[36]Eiichi Ando,Koicbi Monden,Ritsuko Mitsuhata,et a1.Biofilm Formation among Methicillin—Resistant StaDhvlococcus aureus Isolates from Patients with Urinary Tract Infection.Acta Med.Okayama,2004V01.58,No.4,PP.207—214 [37]Yuko Seno,Reiko Kariyama,Ritsuko Mitsuhata。et a1.Clinical Implications of Biofilm Formation by Enterococcus faecalis in the Urinary Tract.Acta Med.Okayama,2005V01.59,No.3,pp.79—87

[38]Caldwell DE(1995)Cultivation and study of biofilm communities.In: Lappin Scott删,Costerton JW(eds)Microbial biofilms,vol 1195.Cambridge University Press,Cambridge,PP 64—79

[393Costerton Jw.Introduction to biofilm.Int J Antimicrobial Agents, 1999:11:217—21;

[40]Gilbert P.Biofilms:Importance in antibiotic susceptibility and treatment failure.Abstract in a joint meeting organized by the British Biofiim Club and the University of Nottingham.BiofiIms in Medicine:interaction between micro—organi sms and biomaterials 1999:8

[41]Nivens DE,Chambers JO,Anderson TR et a1.Monotoring microbial adhesion and biofilm formation by attenuated total reflection?Fourier transform infrared spectroscopy.J Microbiol Methods,1993; 17:199—213

[42]Caldwell DE.Cultivation and study of biofilm communities.In Lappin Scott咖, Costerton JW eds, Microbial Biofilms.Cambridge:Cambridge University Press,1995:64-79

[433Anonymous.Panel discussion on biofiims in urinary tract infection.Int J Antimicrobial Agents,1999:11:237—9

[44]Stock JB,Stock AM,Mottonen J^l,Signal transduction in bacteria.Nature, 1990;344:395—400

[453Goodman AE,Marshal 1KC.Genetic responses of bacteria at surfaces.In Lappin Scott HM,Costerton JW eds,Microbial Biofilms.Cambridge:Cambridge University Press,1995:81—98

[46]Nickel JC,Downey JA,Costerton.Ultrastructural study of microbiologic colonization of urinary catheters.Urology,1998;34:284—291

[47]Ganderton L,Chawla J,Winters C,Wimpenny J,Stickler D(1992)Scanning electron microscopy of bacterial biofilms on indwelling bladder catheters. Eur J C1in Microbiol Infect Dis 11:789—797

[483Nickel JC,Downey J,Costerton Jw.Movement of Pseudomonas aeruginosa along atheter—surfaces.A mechanism in pathogenesiS of catheter—associated

中药对在体输尿管支架管细菌生物膜形成的影响

infection.Urology,1992:39:93~8

[49]Nickel jc(1991)Catheter—associated urinary tract infection:new perspectives on old problems.Can J Infect Control 6:38—42

[50]Nicolle LE.The chronic indwelling catheter and urinary infection in long—term-care facility redidents.Infect Control Hosp Epdemic,2001;22: 316—321

●

[51]Reid G,Denstedt JD,Kang YS,Lam D,Naus c(1992)Microbial adhesion and biofi lm formation on ureteral stents in vitro and in vivo.J Urol 148:1592—1594

[52]Parsi删A,Mosli HA,A1一Zemaity(1995)Bacteriuria and colonisation of double-pigtail ureteral stents:long—term experience with 237patients.J Endourol 9:469—472

[53]Reid G,Sharma S,Advikolanu K et a1.Effects of ciprofloxacin to urinary catheters and effect on subsequent bacterial adhesion and survival.Colloids Surf Biointerfaces,1993『;1:9—16

[54】Reid G,Sharma S,Advikolanu K et a1.Effects of ciprofloxacin, norfloxacin and ofloxacin on in vitro adhesion and survival of Pseudomonas aeruginosa AKI on urinary catheters.

[55]Goto T,Nakame Y,Nishida M,Oh Y(1999)In vitro bactericidal activities of beta—lactamases, amikacin and fluoroquinolones against Pseudomonas aeruginosa biofilm in artificial urine.Urology 53:1058—1062

[56]Reid G(1999)Biofilms in infectious diseases and on medical devices. Int J Antimicrob Agents 11:223—226

[57]Dennis G.Maki,Paul A.Tambyah.Engineering Out the Risk of Infection with Urinary Catheters.Emerging Infectious Diseases. V01. 7。No.2, March—April 2001

[58]Reid G,Habash M(2001)Oral fluoroquinolone therapy results in drug adsorption on ureteral stents and prevention of biofiIm formation.Int J Antimicrob Agents 17:317—332

[59]Reid G,Potter P,Dalenay G,Hsieh J,Nicoshia S,Hayes K(2000)Ofloxacin for treatment of urinary tract infections and biofilms in spinal cord injury. Int J Antimicrob Agents 4:305—307

[60]Shigeta M,Komatsuzawa H,Sugai M,Suginaka H,Usui T(1997)Effect of the growth rate of Pseudomonas aeruginosa biofiims on the susceptibility to antimicrobial agents.Chemotherapy 43:137—141

.23.

广州中医药大学2007届硕士学位论文

[61]Sofer M,Denstedt JD(2000)Encrustation of biomaterials in the urinary tract.Curr Opin Urol 10:563—569

中药对在体输尿管支浆管细茁生物膜彤成的影响

宅镜下观察评分:

样本空自组 13 23 33 43 53 63 73 83 93 103

附录

中药经抗生豢组中药+抗生豢组 .25

1“ ; 3

广州中医药大学2007届硕士学位论文

致谢

本课题研究是在导师王树声教授的悉心指导下完成的。值此论文完成之际,谨向我的导师王树声教授表示衷心的感谢!感谢导师多年对我的悉心培养和无微不至的关怀;导师渊博的知识,兢兢业业的敬业精神,严谨的治学态度,一丝不苟的学风和无私奉献的优秀品德,以及实事求是、善良朴实的高尚品质将使我终生受益!

在本课题的开展过程中,得到了陈志强院长,向松涛、白遵光、张策等老师的全力支持和指导,同时也得到了古炽明、王昭辉、代睿欣、许智聪、李源等师兄以及吴少霞护长的无私帮助,在此表示诚挚的谢意!感谢广东省中医院#t--科全体医护人员的大力支持!感谢广州中医药大学电镜中心刘金元老师对我实验的帮助和指导!感谢多年来始终关爱和支持我的家人,是他们默默支持使我能够安一tL,学习,顺利完成学业, 感谢广州中医药大学以及广东省中医院所有带教老师和科室领导,为我提供了很好的学习和实践机会。谢谢大家1

中药对在体输尿管支架管细菌生物膜形成的影响

作者:甘澍

学位授予单位:广州中医药大学

本文链接:http://d.g.wanfangdata.com.cn/Thesis_Y1111484.aspx

下载时间:2009年10月12日

范文二：分泌蛋白的合成和生物膜系统

专题训练（九）分泌蛋白的合成和生物膜系统

班级：考号：姓名：考点一：同位素标记的分泌蛋白的合成过程

1、科学家用含3H标记的亮氨酸的培养液培养豚鼠的胰腺腺泡细胞，下表为在腺泡细胞几种结构中最早检测到放射性的时间表。下列叙述中不正确的是（）

A、形成分泌蛋白的多肽最早在内质网上的核糖体上合成的

B、高尔基体膜向内与内质网膜相连，向外与细胞膜相连

C、高尔基体具有转运分泌蛋白的作用

D、靠近细胞膜的囊泡可由高尔基体形成

高尔基体

2、从某腺体的细胞中提取一些细胞器，放入含有14C氨基酸的培养液中，培养液中含有这些

内质网细胞器完成其功能所需的物质和条件，连续取样测定标记的氨基酸在这些细胞器中的数量，

下图中能正确描述14C氨基酸数量的曲线是 ( )

3、下列四项表示用3H－亮氨酸标记细胞内的分泌蛋白，追踪不同时间具有放射性的分泌蛋白质颗粒在细胞内分布情况和运输过程。其中正确的是 ( )

考点二：生物膜系统

4、下图示意某细胞进行代谢活动前后几秒钟生物膜面积的变化，此过程中最可能合成的物质是

( )

A．呼吸酶 B．抗体

C．性激素 D．血红蛋白

5、下列有关生物膜的叙述,不正确的是（）

A.膜的组成成分可以从内质网膜转移到高尔基体膜,再转移到细胞膜

B.各种生物膜的化学组成和结构相似

C.生物膜是对生物体内所有膜结构的统称

D.生物膜既各司其职,又相互协作,共同完成细胞的生理功能

6、右图表示某动物细胞合成的分泌蛋白运输到细胞外的过程示意图。下列叙述不正确的是（）

A. ②、③膜的组成成分和结构相似

B. 分泌蛋白的分泌借助膜的选择透过性来完成

C. 此图所示各种膜中糖蛋白含量最高的可能是①

D. 细胞内许多生化反应都是在生物膜内或膜表面进行的

7、下列关于生物膜结构和功能的叙述正确的是 ( )

A．细胞核、线粒体、叶绿体都具有双层膜，所以它们的通透性是相同的

B．因为生物膜具有流动性，所以组成膜的各种化学成分在膜中是均匀分布的

C．所有生物膜的结构由外到内依次由糖被、蛋白质、磷脂双分子层组成

D．生物膜在结构和功能上的紧密联系，是使细胞成为有机整体的必要条件

8、右图是表示抗体形成过程中相应细胞生物膜面积随时间变化情况，图中所示三种膜转化顺序及转移方式依次是（）

A．细胞膜→内质网→高尔基体直接接触 B. 细胞膜→高尔基体→内质网直接接触

C．细胞膜→高尔基体→内质网产生“小泡”

D．内质网→高尔基体→细胞膜产生“小泡”

9、在一定时间内让某种动物细胞吸收放射性同位素标记的氨基酸，经检

查发现放射性同位素出现在右图中的①，②，③，④，⑤，⑥，⑦部位。请根据图回答下面的问题：

(1)图中⑦是；①的功能是；

在② 中加工成糖蛋白；③来自；

(2)⑦在［］中形成成熟蛋白。⑤来自；

(3)用标号表示⑦的运输过程：；

(4)由此可以看出，细胞内的生物膜在和上具有

一定的连续性；

(5)⑦的合成、加工和运输过程所需的大量能量是由［］

供给的；

(6)此动物细胞对⑦具有的功能。

专题训练（九）分泌蛋白的合成和生物膜系统答案

1、B 2、A 3、C 4、B 5、C 6、B 7、D 8、D

9、(1)分泌蛋白将氨基酸合成蛋白质(肽链) 内质网内质网 (2)④ 高尔基体高尔基体