高中生物《选修一》知识点总结

范文一：高中生物《选修一》知识点总结

2、制作葡萄酒过程中，将温度严格控制在_________?，时间控制在_________d左选修1知识结构

右，可通过出料口对发酵的情况进行及时的监测。

果酒和果醋和制作 3、制作葡萄醋的过程中，将温度严格控制在__________?，时间控制在_______d1、概念:利用微生物或其他生物的细胞在有氧或无氧条件下繁殖或积累其代谢产物的过程。

左右，并注意适时通过充气口_________。 2、类型:

四、课题延伸 (1)根据是否需要氧气分为: 和。

果汁发酵后是否有酒精产生，可以用____来检验。在_____条件下，重铬酸钾与酒精(2)根据产生的产物可分为: 、、等。

一、基础知识(一)果酒制作的原理反应呈现____________。检测时，先在试管中加入发酵液2mL，再滴入物质的量的1(菌种是，属于生物，新陈代谢类型，有氧时，浓度为3mol/L的_______3滴，振荡混匀，最后滴加常温下______________________3进行，大量繁殖，反应式为 ;无氧时，能进滴。要想使检验结果更具有说服力，应该检验已知的酒精作对比。

微生物的实验室培养行，反应式为。

一、基础知识 2(酵母菌繁殖的最适温度 ?左右，酒精发酵一般控制在 ?。

1.培养基 3(自然发酵过程中，起作用的主要是附着于上的野生型酵母菌。也可以在

(1)培养基的种类:从物理性质分包括培养基和培养基等，从功能上分包括果汁中加入人工培养的酵母菌。

和，从化学成分上分为和。 (二)果醋制作的原理

(2)培养基的化学成分一般都含有、、、四类营养成分， 1(菌种是，属于生物，新陈代谢类型为。只有在氧气充足时，(3)在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对、才能进行旺盛的生命活动。变酸的酒表面观察到的菌膜就是在液面大量繁以及等的要求。

殖形成的。 2.无菌技术:获得纯净培养物的关键是。 2(当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的分解成，当缺少糖源(1)消毒是指

实验室常用的消毒方法是、，化学药剂消毒法。时，醋酸菌将变为，再将乙醛变为，反应简式

(2)灭菌是指为 ,

常用的灭菌方法有、、， 3(醋酸菌的最适合生长温度为 ?。醋酸发酵一般控制在 ?

二、实验操作二、实验设计制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.

1、流程图 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤:

葡萄发酵发酵 ,,,, ? ? ? ?倒平板(调PH应在灭菌前进行)

,, (2)倒平板的过程

2.纯化大肠杆菌

(1)微生物接种的方法中最常用的是和。其目的都是分三、操作提示

离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。 (一)材料的选择与处理土壤中分解尿素的细菌的分离与计数选择______的葡萄，榨汁前先将葡萄进行_______，然后再出去_______。 1(尿素只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。 (二)防止发酵液被污染 2(以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是: 1、榨汁机要清洗_______，并_______。2、发酵瓶要清洗_________，用体积分数? ;? 。

3(PCR( )是一种在体外将。此项技术的自________的酒精消毒。3、装入葡萄汁后，_________充气口。

动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶。 (三)控制好发酵条件

4(实验室中微生物的筛选应用的原理是:人为提供有利于生长的条件(包括 1、葡萄汁装入发酵瓶时，要留出大约______的空间。

2、外植体消毒等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。

(1)选取菊花茎段时，要取 ____________________。 5(选择培养基是指。

(2)无菌技术包括培养基灭菌和植物材料(外植体)的消毒。培养材料进行表面消毒时，一6(常用来统计样品中活菌数目的方法是。即当样品的稀释度足够高时，

方面要考虑_______________;另一方面还要考虑植物材料的__________。不同药剂、不同植培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的。通过统计平板上的菌落数，物材料，甚至不同器官要区别对待。就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的(3)过程:流水冲洗?软刷刷洗?流水冲洗平板进行计数。另外，也是测定微生物数量的常用方法。 ?过程流水冲洗?软刷刷洗?流水冲洗__________?无菌吸水纸吸干外植体表面?体积分数7(一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目。这是因为为__________的酒精中摇动2,3次，持续__________?无菌水清洗?无菌吸水纸吸干外植体

。因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。表面?质量分数为0.1,的__________溶液中1,2min?无菌水中至少清洗3次 9(设置对照实验的主要目的是，提高实3、接种

接种前，用体积分数70%的酒精将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。所有的接种操作必须在酒验结果的可信度。

3精灯旁进行，并且每次使用器械后，都要用火焰灼烧灭菌 10、用比例法计算菌落数目和活菌数目(血球计数板的容积0.1mm)。

4、培养菊花的组织培养

接种后的锥形瓶最好放在__________中培养。培养期间定期消毒，温度控制在18-22?，并一(植物组织培养的相关概念和基本过程且每天用日光灯光照12h 1. 植物组织培养的相关概念 5、移栽:将幼苗移栽到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中。 (1)细胞分化:植物的个体发育过程中，细胞在__________、__________和__________上都6、栽培

会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化的原因是________ 附:一般来说，容易进行__________的植物，也容易进行组织培养。不同。果胶酶在果汁生产中的作用 (2)细胞的全能性:__________的植物细胞仍然具有发育成为__________的潜能。细胞全能一、果胶与果胶酶的作用

1.果胶是植物及的主要组成成分之一，由聚合而成的一种性是组织培养的基本原理。

高分子化合物，不溶于。 (3)愈伤组织:由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过__________过程形

2(果胶酶成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种__________的呈无定(1)果胶酶的作用是分解，瓦解植物的，把果胶分解成可溶性形状态的__________。的。 (4)脱分化:由________的植物组织或细胞产生______的过程，称为脱分化，又叫去分化。 (2)果胶酶不是特指某一种酶，而是分解的一类酶的总称，包括酶、 (5)再分化:脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成__________，这个过酶和酶等;果胶酶的化学本质是蛋白质，也能被蛋白酶水解掉; 程叫做再分化。 (3)果胶酶具有酶的通性:只改变反应，不改变反应的平衡点。 (6)外植体:用于离体培养的植物器官或组织片段。二、酶的活性与影响酶活性的因素

2. 植物组织培养的基本过程 1(酶的活性是指酶一定化学反应的能力，其高低用一定条件下酶所催化的某一

化学反应的来表示。酶反应速度用内，中反应物的或

产物的表示。组织培养组织培养离体的植物组2(影响酶活性的因素常提的是、和酶的抑制剂等。愈伤组织根、芽等脱分化再分化织、器官或细胞 3. 探究温度和pH对酶活性的影响及探究果胶酶用量的两个实验都要注意实验的基本原则: 器官原则和原则，理解实验中温度梯度或pH梯度的变化在分析问题时也要用原则分析。人为使用植物激素控制三、果胶酶的用量

二(影响植物组织培养的因素生产果胶时(为了使果胶酶得到充分利用，控制好酶的用量，用量多少常通过手段探究。 MS培养基的成分包括:大量元素N P S Ka Ca Mg;微量元素:B Fe Cu Zn ;有机物:蔗糖、四、实验设计

氨基酸、维生素等;植物激素:生长素和细胞分裂素。 (菊花茎段的组织培养比较容易，不1.探究温度和PH对果胶酶活性的影响

必添加植物激素) (1)实验设计包括、设置具有一系列梯度的和、加入果胶酶反应三、实验操作过程一段时间、。

1.制备MS固体培养基 (2)该实验的自变量事或，因变量是，检测因变量是通过测定果汁

的或来实现的。 3、样品的加入和洗脱

血红蛋白的提取和分离 ?准备:打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的的缓冲液与凝胶面，关闭出口。一、基础知识 ?加样:用吸管小心地将1mL透析后的样品加到色谱柱的顶端，注意。加样后打(一)凝胶色谱法开下端出口，直到样品后，关闭下端出口。 1、凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效?洗脱:小心加入物质的量的浓度为20mmol/L的 (PH7.0)到适当高度，连接缓方法，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度 ;而冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。待接近色谱柱时，用试管收集。相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移(四)纯度鉴定: SDS---聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质分子量小的最先析出。

动速度。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。三、操作提示

(二)缓冲溶液胡萝卜素的提取萃取法 1、缓冲溶液的作用是。一、基础知识

2、缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。 1. 胡萝卜素是，化学性质比较，不溶于水，微溶于，易溶于等3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了有机溶剂。根据双键的数目可以将胡萝卜素划分为 α、β、γ三类。是其中最

，必须保持体外的pH与体内的。主要的组成成分。与β-胡萝卜素化学结构类似的胡萝卜素约有100多种,它们大多存在于蔬(三)电泳菜中。等蔬菜是提取天然β-胡萝卜素的原料。

2.工业生产上，提取天然β-胡萝卜素的方法主要有三种，一是从1、电泳是指。中提取，二是从

2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基中获得，三是利用生产。本课题所提供的方法只能提取胡萝卜素团会带上。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。电的，若要获得β-胡萝卜素，还需要进一步的。泳利用了待分离样品中各分子的差异以及分子本身的、的不同，使带电分3.提取胡萝卜素的实验流程、、、、。子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。二、实验设计

3、两种常用的电泳方法是和，在凝胶中加入SDS，1、萃取剂(石油醚)的选择:较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，且不与水互溶。电泳速率完全取决于，因此，在测定蛋白质分子量时通常使2、影响萃取的因素:萃取的效率主要决定于萃取剂的性质和使用量，同时还受到原料颗粒的用。大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间。

二、实验操作 3、胡萝卜素提取装置的设计萃取装置

蛋白质的提取和分离一般分为四步: 、、和。 4、干燥时要注意控制温度和时间，温度太高和时间太长会导致胡萝卜素分解。 (一)样品处理三、纸层析法鉴定量做基线-------对照点样-------干燥层析--------对比观察 1、红细胞的洗涤:洗涤红细胞的目的是，分离红细胞，采用离心

的方法。再加入，缓慢搅拌10min，离心，如此重复洗涤三次，直

胡橙至，表明红细胞已洗涤干净。

2、血红蛋白的释放:在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。

3、分离血红蛋白溶液:将搅拌好的混合溶液高速长时间离心(2000r/min)10分钟后，试管叶黄中的溶液分为4层。第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，

第3层是红色透明液体，这是，第4层是的暗红色沉淀物。将试管中的液

体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的。 a 蓝 (二)粗分离:透析

取1mL的血红蛋白溶液装入中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为b 黄 20mmol/L的 (PH7.0)中，透析12h。透析可以去除样品中的杂质，或

用于更换样品的缓冲液。

(三)纯化:凝胶色谱操作

1、制作凝胶色谱柱

2、装填凝胶色谱柱

装填时凝胶要缓慢倒入色谱柱内，装填时要轻轻敲动色谱柱，使凝胶装

填，色谱柱内不得有存在，一旦发现，必须重装。装填完后，立即连接缓

冲液洗脱瓶，充分洗涤平衡凝胶，使凝胶。

范文二：高中生物选修一知识点总结

高中生物选修一生物技术实践知识点总结

专题一传统发酵技术的应用

1、：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。

2、果酒制作中用到的微生物是，它是生物，代谢类型为，

其生殖方式分为有性繁殖和无性繁殖，其中无性繁殖主要是，也有分裂生殖和孢子

生殖。在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，。方程式为在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。方程式为。

左右最适宜酵母菌繁殖，酒精发酵时一般将温度控制在。在葡萄酒

自然发酵的过程中,起主要作用的是，在发酵过程中,随着酒

精浓度的提高, ,使葡萄酒呈现深红色.

3、果醋制作中用到的微生物是，它是生物，代谢类型是 ,生

殖方式为。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成；当

缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为，再将其变为醋酸。醋酸菌最适生长温度

为，控制好发酵温度使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。

4、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋）

5、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒

精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。排气口要

通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接，其目的是

；制

果醋时，应该

6、发酵产物的检测：酒精检验：可以用来检验。在条件下，重铬酸钾与

酒精反应呈现。

7、发酵过程中的注意事项：发酵装置要清洗干净，并进行酒精消毒，果酒制作时要注意排气，每

次排气时只需瓶盖，不要完全揭开瓶盖；果醋制作时要注意一直通入，因

为醋酸菌对氧气的含量特别敏感，进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起

醋酸菌死亡。

专题二微生物的培养与应用

1、培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微

生物培养的物质基础。

·培养基按照物理性质可分为液体培养基、、。在液体培养

基中加入凝固剂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼

脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征如菌落

的大小等可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生

活生产，应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的

运动及菌种保藏等。

·按照成分培养基可分为（是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种

类比例明确，常用于微生物的分离鉴定）和（是用化学成分不明的天然物质配

制而成，常用于实际工业生产）。

·按照培养基的用途，可将培养基分为培养基和培养基。分别对这两种培养基各

举两个实例

。

培养基的化学成分包括等。碳源：能为微生物的代

谢提供的物质，异养微生物只能利用碳源，单质碳不能作为碳源。氮源：能

为微生物的代谢提供的物质，只有固氮微生物才能利用N2。培养基还要满足微生物生

长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培

养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物

是则需要提供无氧的条件。

2、无菌技术：获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。

消毒与灭菌的区别：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人

体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用。

则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有、干热灭菌、。

灭菌方法：

①接种环、接种针、试管口等使用灭菌法；

②玻璃器皿、金属用具等使用灭菌法，所用器械是； ④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。 ③培养基、无菌水等使用灭菌法，所用器械是。

3、制作牛肉膏蛋白胨固体培养基方法步骤：计算、称量、、、倒平板。

在这个过程中如果要调整培养基的PH，应该在哪一步之前进行？

平板冷凝后，将平板倒置的原因是。

确定培养基制作是否合格的方法：将未接种的培养基，

说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。

4、微生物接种的方法最常用的是和。用这两种方法接种的目的是：

使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。

平板划线法：①操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；

每次划线前灼烧接种环是为了，使下一次划线时，接种环上

的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减

少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境

和感染操作者。

②在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是：。

③在作第二次以及其后的划线操作时，从上一次划线的末端开始划线的原因是的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

5、统计菌落数目：（1）测定微生物数量的常用方法有和。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长

的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。为了保证结果准确，一般设置3～5个平

板，选择菌落数在的平板进行计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数

目，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。并且实验一定要设置。

统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的。

每克样品中的菌落数=（C/V）*M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表

涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M代表稀释倍数

6、菌种的保存

（1）对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。，这里的温度应该是。

（2）对于需要长期保存的菌种，可以采用的方法。

专题三植物的组织培养技术

1、植物组织培养的原理：具有某种生物全套的任何一个活细胞，都具有发育成

的能力，即每个生物细胞都具有这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的，构成不同组织和器官。

2.植物组织培养的过程：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织，这个过程称为植物细胞的，或者叫做。愈伤组织的细胞排列化的呈无定形状态的薄壁细胞。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等

器官，这个过程叫做。最后将形成的试管苗移栽到地里，可以发育成完整的植物体。

3、影响植物组织培养的因素：

材料：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。一般来说，容易进行无性繁殖的植物容易进行

组织培养。菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的作材料。

营养：离体的植物组织和细胞，对营养、环境等条件的要求相对特殊，需要配制适宜的培养基。常

用的培养基是培养基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、

Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、、蔗糖等。

激素：植物激素中和是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激

素。其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。

环境条件：PH、温度、光等环境条件。

4、操作流程

配制MS固体培养基：配制各种：将各种成分按配方比例配制成的浓缩液。

·使用时根据母液的浓缩倍数，计算用量，并加蒸馏水稀释。

·配制培养基：应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，并用蒸馏水定容到1000毫升。

其中大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的；蔗糖提供碳源，维持细胞；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以营养为主，MS培养基则需提供大量营养。并往往还要添加。

外植体的消毒：主要使用的酒精和溶液。

接种：接种过程中插入外植体时朝上。

移栽：栽前应先打开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根部培养基。然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。栽培

专题四酶的应用与研究

1、酶是所产生的具有作用的一类特殊的，其化学本质是，从而使反应能够迅速的进行。影响酶活性的因素：① ② pH ③酶的抑制剂

2、果胶是植物一种高分子化合物，不溶于水。果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括半乳糖醛酸酶、能使果胶水解为，并使果汁变得澄清。

专题五ＤＮＡ和蛋白质技术

课题6 血红蛋白的提取和分离

一、实验原理

蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。

1．凝胶色谱法（分配色谱法）：

（1）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程，流动；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程，流动。

（2）分离过程：

混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子

洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。因此，这一过程中缓冲液的目的是。

（3）作用：分离蛋白质，测定生物大分子分子量。

2．缓冲溶液：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3， NaH2PO4/Na2HPO4等）。作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。

3．凝胶电泳法：

（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。

（2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、等。

（3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于。并且此时测定的应该是的相对分子质量。

二、实验步骤

1．样品处理

①红细胞的洗涤

洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时采用低速短时间离心分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。

②血红蛋白的释放

在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。

注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。

2．粗分离

①分离血红蛋白溶液

将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为，第2层为，第3层是，第4层是。 ②透析

取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为

20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h。透析可以去除样品中分子量较的杂质，或用于更换样品的缓冲液。

3．纯化

调节缓冲液面：打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝 ↓ 胶面平齐，关闭出口。

加入蛋白质样品：用吸管将透析后的样品沿管壁环绕移动加到色谱柱的顶端。加样后， ∣ 打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全渗入凝胶层后，

↓ 关闭出口。

调节缓冲液面：加入20mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度

2．缓冲溶液：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3， NaH2PO4/Na2HPO4

等）。作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。

3．凝胶电泳法：

（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大

小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。

（2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、等。

（3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形

成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于。并且此时测定的

应该是的相对分子质量。

二、实验步骤

1．样品处理

①红细胞的洗涤

洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时采用低速短时间离心分离红

细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五

倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄

色，表明红细胞已洗涤干净。

②血红蛋白的释放

在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。

注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利

于血红蛋白的释放和分离。

2．粗分离

①分离血红蛋白溶液

将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为，第

2层为，第3层是，第4层是。

②透析

取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为

20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h。透析可以去除样品中分子量较的杂质，或用于更换样

品的缓冲液。

3．纯化

调节缓冲液面：打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝

↓ 胶面平齐，关闭出口。

加入蛋白质样品：用吸管将透析后的样品沿管壁环绕移动加到色谱柱的顶端。加样后，

∣ 打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全渗入凝胶层后，

↓ 关闭出口。

调节缓冲液面：加入20mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度

↓

洗脱：连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。

↓

收集分装蛋白质：待时，用试管收集。

4.纯度鉴定------SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）

三、注意事项

1、电泳技术:在的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大

小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯

的目的.

2．为什么凝胶的装填要紧密、均匀？

如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的

样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。

3．装填完后，立即用洗脱液洗脱的目的：使凝胶装填紧密

4．加入柠檬酸钠有何目的？为什么要低速、短时离心？为什么要缓慢搅拌？

防止；防止白细胞沉淀；防止红细胞破裂释放出血红蛋白。

5．与其他真核细胞相比，红细胞的特点及这一特点对进行蛋白质的分离的意义

哺乳动物及人的成熟的红细胞是双面凹圆饼状，没有细胞核和细胞器。其含有的血红蛋白是

有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集脱液。这使血红蛋白

的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。

6．如何检测血红蛋白的分离是否成功

如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区

带、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效

果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。

四、血红蛋白有条肽链，每条肽链环绕一个亚铁基团，可携带。血红蛋白因含血红素而呈现

专题六植物有效成分的提取

23、胡萝卜素性质：色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油

醚等有机溶剂。依据碳碳双键的数目划分为三类。其中最主要的组成成分为β-胡

萝卜素。作用：①治疗夜盲症、幼儿生长发育不良、干皮症等疾病；②常用于食品色素；③使癌变

细胞恢复成正常细胞。提取β－胡萝卜素的方法主要有三种：①从植物中提取②从大面积养殖的

24、实验步骤：①粉碎：使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度。

②干燥：脱水温度太高，干燥时间太长会导致胡萝卜素。

③萃取：

萃取剂的选择：具有较高的，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与混溶

一般来说，原料颗粒，萃取温度，时间，需要提取的物质就能够充分溶解，萃

取效果就好。因此萃取前，要将胡萝卜进行粉碎和干燥。

萃取过程应该避免明火加热，采用，这是因为有机溶剂都是易燃物，直接使用明

火加热容易引起。为了防止加热时有机溶剂挥发，还要在加热瓶口安装装置。

④过滤：除去萃取液中的

⑤浓缩：蒸发出有机溶剂，萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置。

25、胡萝卜素的鉴定：方法：，原理为色素在层析液中的不同，溶解

度大的扩散速度。具体方法为在滤纸下端距底边2㎝处做一基线，在基线上取A、B、C、D

四点。A、D点点，作对照，B、C点点提取的样品。用毛细吸管吸取样品进行点样，点

样应该快速细致，在基线上形成直径２ｍｍ左右的圆点，每次点样后，可用吹风机将溶剂吹干，注

意保持滤纸干燥。等滤纸上的点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，至于装有１ｃｍ深的石油

醚的密封玻璃瓶中。等各种色素完全分开后，观察标准样品中位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带。

范文三：高中生物选修一知识点总结

高中生物选修一

课题一果酒和果醋的制作

1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。 2、有氧发酵：醋酸发酵

无氧发酵：酒精发酵乳酸发酵

3 (主要) 分裂生殖孢子生殖 4、有氧：酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。 C6H12O6＋6O2→6CO2＋6H2O （酶） 5、无氧：酵母菌进行酒精发酵。 C6H12O6 →2C2H5OH＋2CO2 （酶） 6、20℃左右最适宜酵母菌繁殖酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃

7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。

1、醋酸菌：异养需氧型生殖方式：二分裂

2、氧气、糖源充足：醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；

缺少糖源：醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。2C2H5OH＋4O2→CH3COOH＋6H2O 3、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。

4、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋） 5、酒精检验：重铬酸钾 [酸性] 重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。

6、排气口要与一个长而弯曲的胶管相连接目的：防止空气中微生物的污染。开口向下目的：利于二氧化碳排出。使用该装置制酒时，应关闭充气口；制醋时，充气口应连接气泵，输入氧气。

疑难解答

（1）你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？

应该先冲洗，再除去枝梗，避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。

（2）你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？

先冲洗葡萄，再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗干净，进行酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。

（3）制葡萄酒时，为什么要将温度控制在18～25℃？制葡萄醋时，要将温度控制在30～35℃？

温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。20℃左右最适合酵母菌的繁殖。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为30～35℃，因此要将温度控制在30～35℃。

课题一微生物的实验室培养

1、培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微

生物培养的物质基础。

2、液体培养基:应用于工业或生活生产固体培养基:应用于微生物的分离和鉴定

半固体培养基:常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。

3、合成培养基：用成分已知的化学物质配制而成，成分种类比例明确，用于微生物的分离鉴定。天然培养基：用化学成分不明的天然物质配制而成，用于实际工业生产。

4、选择培养基：加入某种化学物质，以抑制不需要微生物生长，促进所需微生物的生长。鉴别培养基：根据微生物的特点，加入某种指示剂或化学药品，来鉴别不同类别的微生物。 5、培养基的化学成分包括：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子 6、碳源： CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。

异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。

7、氮源： N2、NH3、NO3、NH4（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）

8、培养基还需满足pH 特殊营养物质氧气的要求。 Eg: 培养乳酸杆菌:添加维生素. 培养霉菌: pH调至酸性.

培养细菌:将pH调至中性或微碱性.培养厌氧型微生物:提供无氧的条件

9、无菌技术

①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

10、消毒与灭菌的区别

消毒：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不

包括芽孢和孢子）。煮沸消毒法，巴氏消毒法（酒精、氯气、石炭酸）紫外线消毒。灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灼烧灭菌、干热

灭菌、高压蒸汽灭菌。

灭菌方法：

①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；

②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱； ④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。

制作牛肉膏蛋白胨固体培养基

（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。（2）倒平板操作的步骤：

①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。 ②右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。

③将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，再将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖。

④等待平板冷却凝固然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。 ·倒平板操作的讨论

1.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 2.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

答：可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 3.倒平板的时候，不慎将培养基溅在皿盖与皿底上，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

答：不能空气中的微生物会在皿盖与皿底上生长。

纯化大肠杆菌

(1) 微生物接种的方法；平板划线法稀释涂布平板法。

(2) 用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而

能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。

·平板划线操作的讨论

1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？

答：第一次灼烧接种环：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。

划线前灼烧接种环：杀死上次划线残留在环上的菌种使菌种逐渐变少以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环：及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。

（3）涂布平板操作的步骤：

①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。②取少量菌液，滴加到培养基表面。 ③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。 ④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

菌种的保存

（1）斜面保存敢有管藏

课题二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1、尿素：一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶（尿素最初是从人

2、筛选菌株

（1）实验室中微生物的筛选应用的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止

其他微生物生长。

（2）选择性培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微

生物生长的培养基，称作选择培养基。（3）配制选择培养基的依据

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。

例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培

养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

3、统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法：稀释涂布平板法显微镜直接计数。（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值。

统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

4、设置对照

5、实验设计

（1）土壤取样：同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。铲去表层土，在距地表约的土壤层取样。（2）样品的稀释：测定土壤中细菌 10 10（3）微生物的培养与观察

细菌30~37℃ 1~2天放线菌25~28℃ 5~7天霉菌25~28℃ 3~4天每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果

在一定的培养条件下同种微生物表现出稳定的菌落特征。形状、大小、隆起程度、颜色

放线菌 10 10

10 真菌 10

5 23

疑难解答

（1）如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？

统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值每克样品中的菌落数=（C/V）*M 其中，C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml） M：稀释倍数

课题一菊花的组织培养

植物组织培养的基本过程

(1) 细胞分化：在生物个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。 (1)愈伤组织: 离体的植物组织或细胞，通过细胞分裂而形成（脱分化）

特点：细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。

植物细胞工程

(1)每个生物细胞都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来本质：选择性表达 (1)植物组织培养技术的应用有：快速繁殖培育脱毒作物；制作人工种子

影响植物组织培养的条件

材料：生长旺盛嫩枝（容易诱导脱分化和再分化）营养： MS培养基

其大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。

存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强趋势。在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。

环境条件：PH、温度、光等环境条件。

不同的植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花的组织培养，一般将pH控制在5.8左右，温度控制在18~22℃，并且每日用日光灯照射12h.

实验操作步骤

(1)配制MS固体培养基：配制各种母液计算用量，并加蒸馏水稀释。配制培养基 (2)外植体的消毒： 70%的酒精 0.1%的氯化汞溶液无菌水

(3)接种：接种过程中插入外植体时形态学上端朝上 (4) 培养 (5) 移栽 (6)栽培

范文四：高中生物选修一知识点总结

高中生物选修一生物技术实践知识点总结

专题一传统发酵技术的应用

课题一果酒和果醋的制作

1、发酵:通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。

2、有氧发酵:醋酸发酵谷氨酸发酵 ·无氧发酵:酒精发酵乳酸发酵

3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌 ·酵母菌的生殖方式:出芽生殖 (主要 ) 分裂生殖孢子生殖

4、在有氧条件下,酵母菌进行有氧呼吸,大量繁殖。 C6H 12O 6+6O 2→ 6CO 2+6H 2O

5、在无氧条件下,酵母菌能进行酒精发酵。 C 6H 12O 6→ 2C 2H 5OH +2CO 2

6、 20℃左右最适宜酵母菌繁殖酒精发酵时一般将温度控制在 18℃ -25℃

7、在葡萄酒自然发酵的过程中 , 起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌 . 在发酵过程中 , 随着酒精浓度的提高 , 红葡萄皮的色素也进入发酵液 , 使葡萄酒呈现深红色 . 在缺氧呈酸性的发酵液中,酵母菌可以生长繁殖,而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。

8、醋酸菌是单细胞细菌 (原核生物 ), 代谢类型是异养需氧型 , 生殖方式为二分裂

9、当氧气、糖源都充足时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸;当缺少糖源时,醋酸菌将乙醇变为乙醛,再将乙醛变为醋酸。 2C2H 5OH +4O 2→ CH 3COOH +6H 2O

10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感,当进行深层发酵时,即使只是短时间中断通入氧气,也会引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最适生长温度为 30~35℃,控制好发酵温度,使发酵时间缩短,又减少杂菌污染的机会。③有两条途径生成醋酸:直接氧化和以酒精为底物的氧化。

11、实验流程:挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒(→醋酸发酵→果醋)

12、酒精检验:果汁发酵后是否有酒精产生,可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。先在试管中加入发酵液 2m L ,再滴入物质的量浓度为 3mol/L的 H 2SO 43滴,振荡混匀,最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液 3滴,振荡试管,观察颜色

13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的;排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的;出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接,其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用该装置制酒时, 应该关闭充气口;制醋时,应该充气口连接气泵,输入氧气。

疑难解答

(1)你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗?为什么?

应该先冲洗,然后再除去枝梗,以避免除去枝梗时引起葡萄破损,增加被杂菌污染的机会。 (2)你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染?

如:要先冲洗葡萄,再除去枝梗;榨汁机、发酵装置要清洗干净,并进行酒精消毒;每次排气时只需拧松瓶盖,不要完全揭开瓶盖等。

(3)制葡萄酒时,为什么要将温度控制在 18~25℃?制葡萄醋时,为什么要将温度控制在 30~35℃?

温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。 20℃左右最适合酵母菌的繁殖。因此需要将温度控制在其最适温度范围内。而醋酸菌是嗜温菌,最适生长温度为 30~35℃,因此要将温度控制在 30~35℃。

课题二腐乳的制作

1、多种微生物参与了豆腐的发酵,如青霉、酵母、曲霉、毛霉等,其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。代谢类型是异养需氧型。生殖方式是孢子生殖。营腐生生活。

2、原理:毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。

3、实验流程:让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制

4、酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行前期发酵和后期发酵。

前期发酵的主要作用:1. 创造条件让毛霉生长。 2. 使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。

后期发酵主要是酶与微生物协同参与生化反应的过程。通过各种辅料与酶的缓解作用,生成腐乳的香气。

5、将豆腐切成 3cm×3cm×1cm的若干块。所用豆腐的含水量为 70%左右,水分过多则腐乳不易成形。 *水分测定方法如下:精确称取经研钵研磨成糊状的样品 5~10g(精确到 0.02mg) ,置于已知重量的蒸发皿中,均匀摊平后,在 100~105℃电热干燥箱内干燥 4h ,取出后置于干燥器内冷却至室温后称重,然后再烘 30min ,直至所称重量不变为止。

样品水分含量(%)计算公式如下:

(烘干前容器和样品质量 -烘干后容器和样品质量 )/烘干前样品质量

·毛霉的生长:条件:将豆腐块平放在笼屉内,将笼屉中的控制在 15~18℃,并保持一定的湿度。

来源:1. 来自空气中的毛霉孢子, 2. 直接接种优良毛霉菌种

时间:5天

·加盐腌制:将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中,同时逐层加盐,随着层数的加高而增加盐量,接近瓶口表面的盐要铺厚一些。加盐腌制的时间约为 8天左右。

·用盐腌制时,注意控制盐的用量:盐的浓度过低,不足以抑制微生物的生长,可能导致豆腐腐败变质;盐的浓度过高会影响腐乳的口味

·食盐的作用:1. 抑制微生物的生长,避免腐败变质 2. 析出水分,是豆腐变硬,在后期制作过程中不易酥烂 3. 调味作用,给腐乳以必要的咸味 4. 浸提毛酶菌丝上的蛋白酶。

·配制卤汤:卤汤直接关系到腐乳的色、香、味。卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的。卤汤中酒的含量一般控制在 12%左右。

·酒的作用:1. 防止杂菌污染以防腐 2. 与有机酸结合形成酯,赋予腐乳风味 3. 酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系,酒精含量越高,对蛋白酶的抑制作用也越大,使腐乳成熟期延长;酒精含量过低,蛋白酶的活性高,加快蛋白质的水解,杂菌繁殖快,豆腐易腐败,难以成块。

·香辛料的作用:1. 调味作用 2. 杀菌防腐作用 3. 参与并促进发酵过程

·防止杂菌污染:①用来腌制腐乳的玻璃瓶,洗刷干净后要用沸水消毒。②装瓶时,操作要迅速小心。整齐地摆放好豆腐、加入卤汤后,要用胶条将瓶口密封。封瓶时,最好将瓶口通过酒精灯的火焰,防止瓶口被污染。

疑难解答

(1)利用所学的生物学知识,解释豆腐长白毛是怎么一回事?

豆腐生长的白毛是毛霉的白色菌丝。严格地说是直立菌丝,在豆腐中还有匍匐菌丝。

(2)为什么要撒许多盐,将长毛的豆腐腌起来?

盐能防止杂菌污染,避免豆腐腐败。

(3)我们平常吃的豆腐,哪种适合用来做腐乳?

含水量为 70%左右的豆腐适于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳,不易成形。

(4)吃腐乳时,你会发现腐乳外部有一层致密的“皮”。这层“皮”是怎样形成的呢?它对人体有害吗?它的作用是什么?

“皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝(匍匐菌丝),对人体无害。它能形成腐乳的 “体”,使腐乳成形。

课题三制作泡菜

·制作泡菜所用微生物是乳酸菌 ,其代谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下,降糖分解为乳

酸。分裂方式是二分裂。反应式为:C 6H 12O 6

?→

?酶 2C

3H 6O 3+能量含抗生素牛奶不能生产酸奶

的原因是抗生素杀死乳酸菌。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。乳酸杆菌常用于生产酸奶。 ·亚硝酸盐为白色粉末,易溶于水,在食品生产中用作食品添加剂。

·膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康,国家规定肉制品中不超过 30mg/kg,酱腌菜中不超过 20mg/kg,婴儿奶粉中不超过 2mg/kg。亚硝酸盐被吸收后随尿液排出体外,但在适宜 pH 、温度和一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。

·一般在腌制 10 天后亚硝酸盐含量开始降低, 故在 10天之后食用最好

*测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件下, 亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与 N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料, 与已知浓度的标准显色液目测比较,估算泡菜中亚硝酸盐含量。

专题二微生物的培养与应用

课题一微生物的实验室培养

·培养基:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质,是进行微生物培养的物质基础。

·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂 (是从红藻中提取的一种多糖,在配制培养基中用作凝固剂)后,制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产, 固体培养基应用于微生物的分离和鉴定, 半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。

·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成,其中成分的种类比例明确,常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成,常用于实际工业生产。

·按照培养基的用途 ,可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物生长,促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的,用以鉴别不同类别的微生物。 ·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。

·碳源:能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如 CO 2、 NaHCO 3等无机碳源;糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。

·氮源:能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如 N 2、 NH 3、 NO 3-、 NH 4+(无机氮源)蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有机氮源)等。只有固氮微生物才能利用 N 2。

·培养基还要满足微生物生长对 pH 、特殊营养物质以及氧气的要求。例如,培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素 ,培养霉菌时须将培养基的 pH 调至酸性 ,培养细菌是需要将 pH 调至中性或微碱性 ,培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件

·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵,要注意以下几个方面:

①对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。

②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。

③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?

答:无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

·消毒与灭菌的区别

消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法 , 巴氏消毒法 (对于一些不耐高温的液体)还有化学药剂 (如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、紫外线消毒。

灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。

灭菌方法:

①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法;

②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱 ;

③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅。

④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯。

制作牛肉膏蛋白胨固体培养基

(1)方法步骤:计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

(2)倒平板操作的步骤:

①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞。 ②右手拿锥形瓶,将瓶口迅速通过火焰。

③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基(约 10~20mL )倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖。

④等待平板冷却凝固,大约需 5~10min 。然后,将平板倒过来放置,使培养皿盖在下、皿底在上。

·倒平板操作的讨论

1. 培养基灭菌后,需要冷却到 50℃左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?

提示:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。

2. 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?

答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。

3. 平板冷凝后,为什么要将平板倒置?

答:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。

4. 在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?

答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。

纯化大肠杆菌

(1)微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。

(2)平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。

(3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。

(4)用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是:使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从

而能在培养基表面形成单个的菌落,以便于纯化菌种。

(5)平板划线法操作步骤:

①将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红。②在火焰旁冷却接种环,并打开棉塞。

③将试管口通过火焰。④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。

⑤将试管通过火焰,并塞上棉塞。⑥左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖。注意不要划破培养皿。⑦灼烧接种环,待其冷却后, 从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作,在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。⑧将平板倒置放入培养箱中培养。

·平板划线操作的讨论

1. 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么?

答:操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。

2. 在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线?

答:以免接种环温度太高,杀死菌种。

3. 在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线?

答:划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

(6)涂布平板操作的步骤:

①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。②取少量菌液,滴加到培养基表面。

③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却 8~10s 。

④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

涂布平板操作的讨论

涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求,想一想,第 2步应如何进行无菌操作?

提示:应从操作的各个细节保证“无菌”。例如,酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围;等等。

菌种的保存

(1)对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法。

①临时保藏方法

将菌种接种到试管的固体斜面培养基上,在合适的温度下培养。当菌落长成后,将试管放入 4℃ 的冰箱中保藏。以后每 3~6个月,都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。 ② 缺点 :这种方法保存的时间不长,菌种容易被污染或产生变异。

(2)对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法。

在 3mL 的甘油瓶中,装入 1mL 甘油后灭菌。将 1mL 培养的菌液转移到甘油瓶中,与甘油充分混匀后,放在 -20℃ 的冷冻箱中保存。

疑难解答

(1)生物的营养

营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。营养物质是指维持机体生命活动,保证发育、生殖所需的外源物质。

人及动物的营养物质:水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。

植物的营养物质:矿质元素、水、二氧化碳等三类。

微生物的营养物质:水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。

(2)确定培养基制作是否合格的方法

将未接种的培养基在恒温箱中保温 1~2天,无菌落生长,说明培养基的制备是成功的,否则需要重新制备。

课题二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

尿素是一种重要的农业氮肥,尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后,才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为他们能合成脲酶

尿素最初是从人的尿液中发现的

筛选菌株

(1)实验室中微生物的筛选应用的原理

人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、 pH 等),同时抑制或阻止其他微生物生长。

(2)选择性培养基

在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。

(3)配制选择培养基的依据

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如,培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物;培养基中不加入氮元素,可以选择培养能固氮的微生物;加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

统计菌落数目

(1)测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。

(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确,一般设置 3~5个平板,选择菌落数在 30~300的平板进行计数,并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,因此,统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

采用此方法的注意事项:1. 一般选取菌落数在 30~300之间的平板进行计数 2. 为了防止菌落蔓延, 影响计数,可在培养基中加入 TTC 3.本法仅限于形成菌落的微生物

设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测试的条件以外,其他条件都相同的实验,其作用是比照试验组,排除任何其他可能原因的干扰,证明确实是所测试的条件引起相应的结果。

实验设计

实验设计包括实验方案,所需仪器、材料、用具和药品,具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

(1)土壤取样:同其他生物环境相比,土壤中的微生物,数量最大,种类最多。在富含有机质的土壤表层,有更多的微生物生长。从富含有机物、潮湿、 pH ≈ 7的土壤中取样。铲去表层土,在距地表约 3~8cm 的土壤层取样。

(2)样品的稀释:样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中,通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落数在 30~300之间、适于计数的平板。

测定土壤中细菌的数量,一般选用 104 105 106

测定放线菌的数量,一般选用 103 104 105

测定真菌的数量,一般选用 102 103 104

(3)微生物的培养与观察

不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌 30~37℃ 1~2天

放线菌 25~28℃ 5~7天霉菌 25~28℃ 3~4天

每隔 24小时统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止因培养时间不足而导致一楼菌落的数目。一般来说,在一定的培养条件下(相同的培养基、唯独及培养时间),同种微生物表现出稳定的菌落特征。形状、大小、隆起程度、颜色

疑难解答

(1)如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数?

统计某一稀释度下平板上的菌落数,最好能统计 3个平板,计算出平板菌落数的平均值

每克样品中的菌落数 =(C/V) *M 其中, C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数, V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml ), M 代表稀释倍数

课题三分解纤维素的微生物的分离

纤维素,一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物,是地球上含量最丰富的多糖类物质。

纤维素与纤维素酶

(1)棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物,木材、作物秸秆等也富含纤维素。

(2)纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即 C 1酶、 C X 酶和葡萄糖苷酶 ,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成葡萄糖, 为微生物的生长提供营养。

纤维素分解菌的筛选

(1)筛选方法:刚果红染色法。能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。

(2)刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理

刚果红是一种染料,它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时,刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红-纤维素的复合物就无法形成, 培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样,我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

分离分解纤维素的微生物的实验流程

土壤取样→选择培养(此步是否需要,应根据样品中目的菌株数量的多少来确定)→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落

(1)土壤采集选择富含纤维素的环境。

(2)刚果红染色法分离纤维素分解菌的步骤倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板

(3)刚果红染色法种类

一种是先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应,另一种是在倒平板时就加入刚果红。课题延伸

对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选后,只是分离纯化的第一步,为确定得到的是纤维素分解菌,还需要进行发酵产纤维素酶的实验,纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。纤维素酶的测定方法,一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。疑难解答

(1)为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌?

由于生物与环境的相互依存关系,在富含纤维素的环境中,纤维素分解菌的含量相对提高,因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。

(2)将滤纸埋在土壤中有什么作用?你认为滤纸应该埋进土壤多深?

将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集,实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约 10cm 左右腐殖土壤中。

(3)两种刚果红染色法的比较

方法一是传统的方法,缺点是操作繁琐,加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂;其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便,不存在菌落混杂问题,缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质,可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊,因为培养基中纤维素占主要地位,因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。方法二的另一缺点是:有些微生物具有降解色素的

能力,它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈,与纤维素分解菌不易区分。 (4)为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物?

在选择培养的条件下,可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖,而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“浓缩”的作用。

专题三植物的组织培养技术

课题一菊花的组织培养

植物组织培养的基本过程

细胞分化:在生物个体发育过程中,细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。离体的植物组织或细胞,在培养了一段时间以后,会通过细胞分裂,形成愈伤组织 ,愈伤组织的细胞排列疏松而无规则,是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程,称为植物细胞的脱分化,或者叫做去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗,移栽到地里,可以发育成完整的植物体。

植物细胞工程具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞,都具有发育成完整个体的能力,即每个生物细胞都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来,这是因为在特定的时间和空间条件下, 通过基因的选择性表达,构成不同组织和器官。植物组织培养技术的应用有:实现优良品种的快速繁殖;培育脱毒作物;制作人工种子;培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。

·细胞分化是一种持久性的变化,它有什么生理意义?

使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化,有利于提高各种生理功能的效率。

比较根尖分生组织和愈伤组织的异同

材料:不同的植物组织,培养的难易程度差别很大。植物材料的选择直接关系到试验的成败。植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。一般来说,容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好,容易诱导脱分化和再分化。

营养:离体的植物组织和细胞,对营养、环境等条件的要求相对特殊,需要配制适宜的培养基。常用的培养基是 MS 培养基,其中含有的大量元素是 N 、 P 、 S 、 K 、 Ca 、 Mg ,微量元素是 Fe 、 Mn 、 B 、 Zn 、 Cu 、 Mo 、 I 、 Co ,有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。

激素:植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下,细胞分裂素的作用呈现加强趋势。在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素,其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。

环境条件:PH 、温度、光等环境条件。

不同的植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花的组织培养,一般将 pH 控制在 5.8左右,温度控制在 18~22℃,并且每日用日光灯照射 12h.

4、操作流程

配制 MS 固体培养基 :配制各种母液:将各种成分按配方比例配制成的浓缩液 (培养基母液)。 ·使用时根据母液的浓缩倍数,计算用量,并加蒸馏水稀释。

·配制培养基:应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液,并用蒸馏水定容到 1000毫升。

·在菊花组织培养中,可以不添加植物激素

原因是菊花茎段组织培养比较容易。·灭菌:采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。

·MS 培养基中各种营养物质的作用是什么?与肉汤培养基相比, MS 培养基有哪些特点?

大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐;蔗糖提供碳源,维持细胞渗透压;甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主, MS 培养基则需提供大量无机营养。

外植体的消毒外植体:用于离体培养的植物器官或组织片段。选取菊花茎段时,要取生长旺盛的嫩枝。菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉,用软刷轻轻刷洗,刷洗后在流水下冲洗 20min 左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分,放入体积分数为 70%的酒精中摇动 2~3次,持续 6~7s, 立即将外植体取出,在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分,放入质量分数为 0.1%的氯化汞溶液中 1~2min。取出后,在无菌水中至少清洗 3次,漂洗消毒液。

注意:对外植体进行表面消毒时,就要考虑药剂的消毒效果,又要考虑植物的耐受能力。

接种:接种过程中插入外植体时形态学上端朝上,每个锥形瓶接种 7~8个外植体。外植体接种与细菌接种相似,操作步骤相同,而且都要求无菌操作。

培养:应该放在无菌箱中进行,并定期进行消毒,保持适宜的温度(18~22℃)和光照(12h ) 移栽:栽前应先打开培养瓶的封口膜,让其在培养间生长几日,然后用流水清洗根部培养基。然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间,进行壮苗。最后进行露天栽培。栽培

外植体在培养过程中可能会被污染,原因有外植体消毒不彻底;培养基灭菌不彻底;接种中被杂菌污染;锥形瓶密封性差等。

专题二月季的花药培养

被子植物的花粉发育被子植物的雄蕊通常包含花丝、花药两部分。花药为囊状结构 ,内部含有许多花粉。花粉是由花粉母细胞经过减数分裂而形成的,因此,花粉是单倍体的生殖细胞。被子植物花粉的发育要经历小孢子四分体时期、单核期和双核期等阶段。在小孢子四分体时期, 4个单倍体细胞连在一起,进入单核期时,四分体的 4个单倍体细胞彼此分离,形成 4个具有单细胞核的花粉粒。这时的细胞含浓厚的原生质,核位于细胞的中央(单核居中期 )。随着细胞不断长大,细胞核由中央移向细胞一侧(单核靠边期 ),并分裂成 1个生殖细胞核和 1个花粉管细胞核,进而形成两个细胞,一个是生殖细胞,一个是营养细胞。生殖细胞将在分裂一次,形成两个精子。

注意:①成熟的花粉粒有两类,一类是二核花粉粒,其花粉粒中只含花粉管细胞核和生殖细胞核, 二核花粉粒的精子是在花粉管中形成的;另一类是三核花粉粒,花粉在成熟前,生殖细胞就进行一次有丝分裂,形成两个精子,此花粉粒中含有两个精子核和一个花粉管核(营养核)②花粉发育过

程中的四分体和动物细胞减数分裂的四分体不同。花粉发育过程中的四分体是花粉母细胞经减数分裂形成的 4个连在一起的单倍体细胞;而动物细胞减数分裂过程中的四分体是联会配对后的一对同源染色体,由于含有四条染色单体而称为四分体。③同一生殖细胞形成的两个精子,其基因组成完全相同。

产生花粉植株的两种途径通过花药培养产生花粉植株(即单倍体植株)一般有两种途径 , 一种是花粉通过胚状体阶段发育为植物,另一种是花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织,再将其诱导分化成植株。这两种途径之间并没有绝对的界限,主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。

注意:①无论哪种产生方式,都要先诱导生芽,再诱导生根 ② 胚状体:植物体细胞组织培养过程中,诱导产生的形态与受精卵发育成的胚非常类似的结构,其发育也与受精卵发育成的胚类似,有胚芽、胚根、胚轴等完整结构,就像一粒种子,又称为细胞胚。

影响花药培养的因素诱导花粉能否成功及诱导成功率的高低,受多种因素影响,其中材料的选择与培养基的组成是主要的影响因素

·亲本的生理状况:花粉早期是的花药比后期的更容易产生花粉植株,选择月季的初花期。

·合适的花粉发育时期:一般来说,在单核期 ,细胞核由中央移向细胞一侧的时期,花药培养成功率最高

·花蕾:选择完全未开放的花蕾

·亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度等对诱导成功率都有一定影响

·材料的选取:选择花药时,一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。确定花粉发育时期的最常用的方法是醋酸洋红法。但是,某些植物的花粉细胞核不易着色,需采用焙花青 -铬矾法 ,这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色

·接种和培养:灭菌后的花蕾,要在无菌条件下除去萼片和花瓣,并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时,要尽量不损伤花药 (否则接种后容易从受伤部位长生愈伤组织),同时还要彻底去除花丝 ,因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成,通常每瓶接种花药 7~10个 , 培养温度控制在 25℃ 左右 , 不需要光照 . 幼小植株形成后才需要光照 . 一般经过 20~30天培养后 , 会发现花药开裂 , 长出愈伤组织或形成胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上,以便进一步分化出再生植株。如果花药开裂释放出胚状体,则一个花药内就会产生大量幼小植株,必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开,分别移植到新的培养基上,否则这些植株将很难分开。还需要对培养出来的植株做进一步的鉴定和筛选。

植物组织培养技术与花药培养技术的相同之处是:培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。两者的不同之处在于:花药培养的选材非常重要,需事先摸索时期适宜的花蕾;花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基;花药培养对培养基配方的要求更为严格。这些都使花药培养的难度大为增加。

专题六植物有效成分的提取

课题一植物芳香油的提取

天然香料的来源:植物、动物

不同植物的根、茎、叶、花、果实、种子都可以提取芳香油。

芳香油的提取方法:蒸馏、压榨、萃取等。

芳香油的性质:挥发性强,成分复杂,以萜类化合物及其衍生物为主。

水蒸气蒸馏法:

原理:水蒸汽可将挥发性较强的芳香油携带出来形成油水混合物,冷却后水油分层。

方法:水中蒸馏:原料放在沸水中加热蒸馏。

水上蒸馏:原料隔放在沸水上加热蒸馏。

水汽蒸馏:利用外来高温水蒸气加热蒸馏。

不足:有些原料不适宜于水中蒸馏,如柑橘、柠檬等易焦糊,有效成分容易水解。通常用压榨法 (通过机械压缩力将液相物从液固两相混合物中分离出来的一种简单操作)

萃取法:

原理:芳香油易溶于有机溶剂,溶剂挥发后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。

方法:原料浸泡在溶剂中→得到浸泡液→有机溶剂挥发→芳香油。

不足:有机溶剂中的杂质影响芳香油的品质

蒸馏装置包括:铁架台两个、酒精灯、石棉网、蒸馏瓶、橡胶塞、蒸馏头、温度计、直型冷凝管、接液管、锥形瓶,以及连接进水口和出水口的橡皮管。所有仪器必须事先干燥,保证无水。整套蒸馏装置可分为左、中、右三部分,其中左边的部分通过加热进行蒸馏,中部将蒸馏物冷凝,右边的部分用来接收。安装仪器一般都按照自下而上、从左到右的顺序。拆卸仪器的顺序与安装时相反。具体安装顺序和方法如下。

(1)固定热源──酒精灯。

(2)固定蒸馏瓶,使其离热源的距离如教科书中图 6-2所示,并且保持蒸馏瓶轴心与铁架台的水平面垂直。

(3)安装蒸馏头,使蒸馏头的横截面与铁架台平行。

(4)连接冷凝管。保证上端出水口向上,通过橡皮管与水池相连;下端进水口向下,通过橡皮管与水龙头相连。

(5)连接接液管(或称尾接管)。

(6)将接收瓶瓶口对准尾接管的出口。常压蒸馏一般用锥形瓶而不用烧杯作接受器,接收瓶应在实验前称重,并做好记录。

(7)将温度计固定在蒸馏头上,使温度计水银球的上限与蒸馏头侧管的下限处在同一水平线上。蒸馏装置安装完毕后,可以在蒸馏瓶中加几粒沸石,防止液体过度沸腾。打开水龙头,缓缓通入冷水,然后开始加热。加热时可以观察到,蒸馏瓶中的液体逐渐沸腾,蒸气逐渐上升,温度计读数也略有上升。当蒸气的顶端达到温度计水银球部位时,温度计读数急剧上升。在整个蒸馏过程中,应保证温度计的水银球上常有因冷凝作用而形成的液滴。控制蒸馏的时间和速度,通常以每秒 1~2滴为宜。

分液漏斗的使用方法如下。

(1)首先把活塞擦干,为活塞均匀涂上一层润滑脂,注意切勿将润滑脂涂得太厚或使润滑脂进入

活塞孔中,以免污染萃取液。

(2)塞好活塞后,把活塞旋转几圈,使润滑脂分布均匀。并用水检查分液漏斗的顶塞与活塞处是否渗漏,确认不漏水后再使用。

(3)将分液漏斗放置在大小合适的、并已固定在铁架台上的铁圈中,关好活塞。将待分离的液体从上部开口处倒入漏斗中,塞紧顶塞,注意顶塞不能涂润滑脂。

(4)取下分液漏斗,用右手手掌顶住漏斗顶塞并握住漏斗颈,左手握住漏斗活塞处,大拇指压紧活塞,将分液漏斗略倾斜,前后振荡(开始振荡时要慢)。

(5)振荡后,使漏斗口仍保持原倾斜状态,左手仍握在漏斗活塞处,下部管口指向无人处,用拇指和食指旋开活塞,使其释放出漏斗内的蒸气或产生的气体,以使内外压力平衡,这一步操作也称做“放气”。

(6)重复上述操作,直至分液漏斗中只放出很少的气体时为止。再将分液漏斗剧烈振荡 2~3 min ,然后将漏斗放回铁圈中,待液体静置分层。

蒸馏完毕,应先撤出热源,然后停止通水,最后拆卸蒸馏装置,拆卸的顺序与安装时相反。

玫瑰精油的提取

0.1g/mL氯化钠溶液:促使油水混合物(乳浊液)中油和水的分离。无水硫酸钠:吸收油层中的水分。

实验步骤:①采集玫瑰花:采集盛花期(5月中上旬)的玫瑰花,清水清洗沥干。

②装入蒸馏原料:称取 50g 玫瑰花放入蒸馏瓶,添加 200mL 蒸馏水。

③安装蒸馏装置:按照从左向右、自下到上次序安装水蒸气蒸馏装置。

④加热蒸馏:控制蒸馏时间和速度(1~2滴 /秒),获得乳白色乳浊液;拆卸装置。

⑤分离油层:向乳浊液加入 NaCl 溶液后,利用分液漏斗分离出上面的油层。

⑥除去水分:向油层中加入无水硫酸钠, 24h 后过滤,得到玫瑰油。

注意事项:蒸馏时间不能过短,温度不能过高。

橘皮精油的提取

橘皮精油的主要成分:柠檬烯,主要分布在橘皮中。

石灰水:防止压榨时滑脱,提高出油率,降低压榨液黏稠度,过滤不堵塞筛眼。

小苏打、硫酸钠:促进油和水的分离(用量分别为橘皮质量的 0.25%和 5%)。

实验步骤:①橘皮的处理:将新鲜橘皮用清水清洗沥干。

②石灰水浸泡:用 7~8%石灰水浸泡橘皮 24h 。

③清水漂洗:浸泡好的橘皮用流水彻底漂洗干净,沥干。

④粉碎和压榨:将橘皮粉碎,加入小苏打和硫酸钠后,用压榨机压榨得到压榨液。

⑤过滤压榨液:用布袋过滤,滤液再高速离心处理,分离出上层橘皮油。

⑥静置处理:将橘皮油在 5~10℃冰箱中静置 5~7d ,分离出上层澄清橘皮油。

⑦再次过滤:将下层橘皮油用滤纸过滤,滤液与上层橘皮油合并,得到橘皮精油。

分析:静置处理目的:除去果蜡和水分。

课题二胡萝卜素的提取

胡萝卜素性质:橘黄色结晶,化学性质比较稳定,不溶于水,微溶于乙醇,易溶于石油醚等有机溶剂。

依据碳碳双键的数目划分为 α、 β、 γ三类。

其中最主要的组成成分为 β-胡萝卜素。

作用:①治疗夜盲症、幼儿生长发育不良、干皮症等疾病;②常用于食品色素;③使癌变细胞恢复成正常细胞。

提取 β-胡萝卜素的方法主要有三种:①从植物中提取②从大面积养殖的岩藻中获得③利用微生物的发酵生产

实验步骤①粉碎:使原料与有机溶剂充分接触,增大溶解度。②干燥:脱水温度太高,干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。③萃取

Ⅰ、萃取剂的选择水溶性的:乙醇、丙酮

水不溶性的:石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳等

选择:具有较高的沸点,能够充分溶解胡萝卜素, 并且不与水混溶。

Ⅱ、影响萃取的因素

主要因素:萃取剂的性质和使用量

次要因素:原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等

一般来说,原料颗粒小,萃取温度高,时间长,需要提取的物质就能够充分溶解,萃取效果就好。萃取前,要将胡萝卜进行粉碎和干燥

Ⅲ、胡萝卜素提取

装置的设计:萃取过程应该避免明火加热,采用水浴加热,这是因为有机溶剂都是易燃物,直接使用明火加热容易引起燃烧爆炸。为了防止加热时有机溶剂挥发,还要在加热瓶口安装回流冷凝装置。萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置。在浓缩之前,还要进行过滤,除去萃取液中的不溶物。 ④过滤:除去萃取液中的不溶物

⑤浓缩:蒸发出有机溶剂

鉴定:纸层析法

滤纸:18㎝×30㎝

基线:滤纸下端距底边 2㎝处做一基线,在基线上取 A 、 B 、 C 、 D 四点。

点样:用最细的注射器针头(毛细吸管)吸取样品进行点样。点样应该快速细致,在基线上形成直径2mm左右的圆点,每次点样后,可用吹风机将溶剂吹干,注意保持滤纸干燥。等滤纸上的点样液自然挥发干后,将滤纸卷成圆筒状,至于装有1cm深的石油醚的密封玻璃瓶中。等各种色素完全分开后,观察标准样品中位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带。

1.乙醇和丙酮能够用于胡萝卜素的萃取吗?为什么?

答:胡萝卜素可溶于乙醇和丙酮,但它们是水溶性有机溶剂,因萃取中能与水混溶而影响萃取效果,所以不用它们作萃取剂。

2. 在石油醚、醋酸乙酯、乙醚、苯和四氯化碳这几种有机溶剂中,哪种最适宜用来提取胡萝卜素? 答:在这五种有机溶剂中,石油醚的沸点最高,在加热萃取时不易挥发,所以石油醚最适宜用作萃取剂。

专题五 DNA和蛋白质技术

课题一 DNA的粗提取与鉴定

·提取 DNA 的溶解性原理包括哪些方面?

DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度不同; DNA 不溶于酒精。

·DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度有何特点?要使 DNA 溶解,需要使用什么浓度?要使 DNA 析出,又需要使用什么浓度?

在 0.14mol/L时溶解度最小;较高浓度可使 DNA 溶解; 0.14mol/L可使

DNA 析出。

·在溶解细胞中的 DNA 时,人们通常选用 2mol/LNaCl溶液;将 DNA 分子析

出的方法是向溶有 DNA 的 NaCl 溶液中缓慢注入蒸馏水,以稀释 NaCl 溶液。

酒精是一种常用有机溶剂,但 DNA 却不能溶于酒精(特别是 95%冷却酒

精),但细胞中蛋白质可溶于酒精。

从理论上分析,预冷的乙醇溶液具有以下优点。一是抑制核酸水解酶活性,防止 DNA 降解;二是降低分子运动,易于形成沉淀析出;三是低温有利于增加 DNA 分子柔韧性,减少断裂。

·采用 DNA 不溶于酒精的原理,可以达到什么目的?

将 DNA 和蛋白质进一步分离。

·提取 DNA 还可以利用 DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时,应选用怎样的酶和怎样的温度值?

蛋白酶,因为酶具有专一性,蛋白酶只水解蛋白质而不会对 DNA 产生影响。温度值为 60~80℃,因为该温度值蛋白质变性沉淀,而 DNA 不会变性。

补充:DNA 的变性是指 DNA 分子在高温下解螺旋,其温度在 80℃以上,如在 PCR 技术中 DNA 变性温度在 95℃。

·洗涤剂在提取 DNA 中有何作用?

洗涤剂将细胞膜上的蛋白质,从而瓦解细胞膜。

·当鉴定提取出的物质是否是 DNA 时,需要使用什么指示剂进行鉴定?

在沸水浴条件下, DNA 遇二苯胺呈现蓝色。

原理总结:通过利用不同浓度 NaCl 溶液溶解或析出 DNA ,可以从细胞中提取和提纯 DNA ;再利用酒精进一步将 DNA 与蛋白质分离开来,达到提纯的目的;最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是 DNA 。

实验材料的选取

不同生物的组织中 DNA 含量不同。在选取材料时,应本着 DNA 含量高、材料易得、便于提取的原则。

本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。一是因为鸡血细胞核的 DNA 含量丰富,材料易得; 二是鸡血细胞极易吸水胀破,而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长。

鸡血细胞破碎以后释放出的 DNA ,容易被玻璃容器吸附,所以在提取过程中为了减少 DNA 的损失,最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液。

破碎细胞,获取含 DNA 的滤液

·若选用鸡血和洋葱作实验材料,则怎样获取含 DNA 的滤液?

在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用玻棒搅拌,过滤后收集滤液;切碎洋葱,加入一定量洗涤剂和食盐,搅拌研磨,过滤后收集滤液。

·为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?

答:蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂 (细胞膜和核膜的破裂 ) ,从而释放出 DNA 。

·在以上实验中,加入蒸馏水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么?过滤时应当选用(滤纸、尼龙布)。血细胞在蒸馏水中大量吸水而张裂;洗涤剂瓦解细胞膜;食盐溶解 DNA 物质;选用尼龙布进行过滤。

·在处理植物组织时需要进行研磨,其目的是什么?研磨不充分产生什么结果?

破碎细胞壁,使核物质容易溶解在 NaCl 溶液中;研磨不充分会使 DNA 的提取量减少,影响实验结果,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。

。具体做法。 10mL 鸡血+20mL 蒸馏水→同方向搅拌→ 3层尼龙布过滤→滤液

去除滤液中的杂质

为什么反复地溶解与析出 DNA ,能够去除杂质?

用高盐浓度的溶液溶解 DNA ,能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使 DNA 析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此,通过反复溶解与析出 DNA ,就能够除去与 DNA 溶解度不同的多种杂质。

最初获得的 DNA 滤液含有蛋白质、脂质等杂质,需要进一步提纯 DNA 。

方案一的原理是 DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质,不分解 DNA ;方案三的原理是蛋白质和 DNA 的变性温度不同。

方案二与方案三的原理有什么不同?

答:方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的 DNA 与蛋白质分开;方案三利用的是 DNA 和蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋白质变性,与 DNA 分离。

析出与鉴定

·在滤液中仍然含有一些杂质,怎样除去这些杂质呢?得到的 DNA 呈何颜色?

滤液与等体积的冷却酒精混合均匀,静置 2~3分钟,析出的白色丝

状物就是 DNA 。 DNA 呈白色。

·怎样鉴定析出的白色丝状物就是 DNA 呢?

具体做法。试管 2支,编号甲乙→各加等量 5mLNaCl 溶液→甲中放

入少量白色丝状物,使之溶解→各加 4mL 二苯胺,混合均匀→沸水浴

5min →观察颜色变化

实验操作

制备鸡血细胞液????加柠檬酸钠,静置或离心

↓

破碎细胞,释放 DNA ? 加蒸馏水,同一方向快速通方向搅拌

↓→过滤,除去细胞壁、细胞膜等。

溶解核内 DNA ???? 加入 NaCl 至 2mol/L,同一方向缓慢搅拌

↓

DNA 析出?????? 加蒸馏水至 0.14mol/L,过滤,在溶解到 2mol/L溶液中

↓→除去细胞质中的大部分物质。

DNA 初步纯化???? 与等体积 95%冷却酒精混合,析出白色丝状物

↓→除去核蛋白、 RNA 、多糖等。

DNA 鉴定?????? 二苯胺,沸水浴,呈现蓝色

注意事项:在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固;鸡血静置或离心以提高细胞悬液浓度;使用塑料烧杯;使用尼龙布过滤;玻棒沿同一方向搅拌;玻棒搅拌要缓慢(细胞破裂快速搅拌);玻棒不要碰到烧杯壁;二苯胺试剂要现用现配等。

范文五：高中生物选修一知识点总结一

听写题答案

专题一传统发酵技术的应用

1.1 果酒和果醋的制作

1.从发酵类型上分析，果酒制作是酒精发酵，果醋制作是醋酸发酵或需氧发酵。

2.果酒制作的菌种为酵母菌，果醋制作的菌种为醋酸菌。

3.酵母菌是单细胞真菌，是真核生物，同化作用类型是异养型，异化作用类型是兼性厌氧性；培养酵母菌的适宜温度是18-25℃，最适宜的温度是20℃。在无氧和酸性条件下，酵母菌能够正常生存，绝大多数微生物不能正常生活。

4.果酒制作初期通入氧气是为了使酵母菌有氧呼吸，进行出芽生殖，增加酵母菌数量，反应式为：C6H12O6+6O2+6H2O→6CO2+12H2O+能量，此时由线粒体基质产生CO2；后期密封是使酵母菌无氧呼吸产生酒精，

反应式为：C6H12O6→2CO2+2C2H5OH+能量，此时由细胞质基质产生CO2。

5.发酵瓶应用70%的酒精消毒。葡萄应该先冲洗后去枝梗，可以避免葡萄破损引起的杂菌污染。

6.发酵液体积为发酵瓶容积的2/3，留1/3的空气，是为了给酵母菌的有氧呼吸提供氧气同时缓冲菌体呼吸作用产生的CO2。

7.发酵过程中要定期拧松瓶盖，是为了排出呼吸作用产生的CO2，同时防止杂菌污染。

8.检测酒精应使用酸性重铬酸钾，由浓硫酸创造酸性环境，颜色由橙红色变为灰绿色。

9.醋酸菌是原核生物，与酵母菌相比结构上最大的特点是没有成形的细胞核；它的新陈代谢类型是异养需氧型；30-35℃适合其生长。

10.当糖源和氧气都充足时，醋酸菌将葡萄糖转化为醋酸；当糖源缺乏，氧气充足时，醋酸菌将酒精氧化为乙醛，再氧化为醋酸，反应式为：C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O

11.实验装置中，充气口在酒精发酵时关闭，醋酸发酵是开放；排气口始终开放，相连的软管细而长，有利于排出呼吸作用产生的CO2，同时避免空气中微生物的污染。

12.在果汁制作果酒进而制作果醋的过程中，酵母菌的数目先增加后减少，培养液的PH值持续下降。

1.2 腐乳的制作

1.制作腐乳使用的菌种是毛霉、青霉、曲霉和酵母菌，其中主要是毛霉的作用。

2.菌种可以产生蛋白酶和脂肪酶，蛋白酶可以将蛋白质分解为小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可以将脂肪水解为脂肪酸和甘油。在多种微生物的协同作用下，豆腐形成腐乳。

3.制作腐乳豆腐含水量控制在70%。

4.制作腐乳时，加入盐的目的是：析出豆腐中的水分，防腐杀菌，调味和抑制蛋白酶的活性；加盐的方式

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