盐析法_范文大全网

范文一：盐析法

盐析法

（1）从标本中取合适样本，幼虫头部，成虫腿或胸部，样本取出后置于装有无菌水的1.5ml 离心管或小烧杯中，浸泡10min 。

（2）标本从无菌水中取出后用吸水纸吸干。

（3）将标本置于另一个1.5ml 离心管中，加入300ul 提取缓冲液，用研磨棒粉碎（先加100ul ，剩下200ul 用于冲洗）。

（4）将匀浆置于65℃水浴60min 。

（5）向匀浆中加入50ul 冷的8M NaAC，将离心管冰浴15min 。

（100ml 的8M NaAC（分子量 82.03）取65.62g NaAC，溶于100ml 双蒸水）。

（6）以11000r/min离心20min 。

（7）将上清液移入1.5ml 的离心管，每管100ul 。

（8）加入100ul 异丙醇，混匀，11000r/min离心15min ，弃上清液。

（9）在留有沉淀的管中加入100ul 已预冷的70%乙醇漂洗，11000r/min离心5min ，弃上清

液。

（10）重复9.

（11）自然干燥2-3h ，溶于30ul 无菌水中，-20℃保存。

提取缓冲液配制100ml

0.2M 蔗糖 6.84g

0.1M Tris 1.2g

0.1M NaCl 0.58g

0.05M EDTA 1.46g

SDS 5g

dd 水定容至100ml

用NaOH 调节pH 至9.2

范文二：盐析法

盐析法综述

摘要：沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。盐析法是其中的一种，盐析法是在中药水提液中, 加入无机盐至一定浓度, 或达饱和状态, 可使某些成分在水中溶解度降低, 从而与水溶性大的杂质分离。常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。

关键词:沉淀法；盐析；原理；方法评价；蛋白质盐析沉淀法

沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。

有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。、非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子非离子多聚物是六十年代发展起来的一类重要沉淀剂，最早用于提纯免疫球蛋白、沉淀一些细菌和病毒，近年来逐渐广泛应用于核酸和酶的分离提纯。最常用的是铅盐法，可以用于除去杂质，也可用于沉淀有效成分。沉淀法通常是在溶液状态下将不同化学成分的物质混合, 在混合液中加人适当的沉淀剂制备前驱体沉淀物, 再将沉淀物进行干燥或锻烧, 从而制得相应的粉体颗粒。一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。在生化制备中, 许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。

对沉淀形式的要求

（1）沉淀的溶解度要小，以保证被测组分能沉淀完全。

（2）沉淀要纯净，不应带入沉淀剂和其他杂质。

（3）沉淀易于过滤和洗涤，以便于操作和提高沉淀的纯度。

（4）沉淀易于转化为称量形式。盐析法

胶体的盐析

胶体的盐析是加盐而使胶粒的溶解度降低，形成沉底析出的过程，是胶体的聚沉现象的一种

如向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种作用就叫做盐析。这样析出的蛋白质仍可以溶解在水中，而不影响原来蛋白质的性质。因此，盐

析是一个可逆的过程。利用这个性质，可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质

盐析法的原理

盐析的原理是蛋白质在高浓度盐的溶液中，随着盐浓度的逐渐增加，由于蛋白质水化膜被破坏、溶解度下降而从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀分离各种蛋白质。在盐析时，蛋白质的溶解度与溶液中离子强度关系可用下式表示：

Log S0 =β

则 Log S=β－K S ×I

式中 S0 是蛋白质在纯水（离子强度 I=0）中的溶解度，S 为蛋白质在离子

强度为 I 的溶液中的溶解度，K S 为盐析常数。上述公式中当温度和 pH 一定时，

S 0 仅取决于蛋白质的性质。因此对于同一蛋白质，在一定温度和 pH 时，S 0 是一常数。

盐析常数 KS 主要取决于盐的性质（盐的离子价数和离子平均半径）, 也和蛋

白质的性质有关。不同的蛋白质在同一种盐溶液中的 KS 值不同，K S 值愈大，

盐析效果愈好。

从上述公式可知在温度和 pH 一定的同一种盐溶液中，不同蛋白质有各自一定的β和 KS 值。可以通过改变盐的离子强度来分离不同的蛋白质。这种方法

称“K S 分段盐析法”。

对于同一种盐溶液，如果保持离子强度不变，通过改变温度和 pH 来改变β值，也可达到盐析分离的目的。这种方法称为“β分段盐析法”。蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。

盐析法的方法学评价

盐析法简单方便，可用于蛋白质抗原的粗提、丙种球蛋白的提取、蛋白质的浓缩等。盐析法提纯的抗原浓度不高，只用于抗原的初步纯化。

且盐析用盐也要求严格，盐的盐析作用要强，有较大的溶解度，必须是惰性的，来源广泛且便宜。

蛋白质的盐析

盐析法提纯蛋白质时应考虑以下几个条件的选择：盐析法分为两类，第一类叫Ks 分段盐析法，在一定PH 和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液；第二种叫b 分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH 和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。

从破碎材料或细胞器提出的蛋白质是不纯的，需进一步纯化。纯化包括将蛋白质与非蛋白质分开，将各种不同的蛋白质分开。选择提取条件时，就要考虑尽量除去非蛋白质。一般总是有其它物质伴随混入提取液中。但有些杂质（如脂肪）以事先除去为宜。先除去便于以后操作。

原理：盐析法对于许多非电解质的分离纯化均适合。对蛋白质和酶的提纯应用也最早。至今还广泛使用，一般粗抽提物经常利用盐析法进行粗分。也有反复用盐析法得到纯的蛋白质的例子。其原理是蛋白质在低盐浓度下的溶解度随盐液浓度升高而增加。球蛋白当盐浓度不断上升时，蛋白质的溶解度又以不同程度下降并先后析出（盐析）。这是由于蛋白质分子内和分子间的电荷的极性基团有静电引力。当水中加入少量盐时，盐离子与水分子对蛋白质分子一的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大。但盐浓度增加一定程度时，水的活度降低，蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质相互聚集而沉淀析出。盐析法是根据不同蛋白质在一定浓度盐溶液中溶解度降低程度不同达到彼此分离的方法。

盐的选择：如上所述，蛋白质在水中溶解度取决于蛋白质分子上离子基团周围的水分子数目，即取决于蛋白质的水合程度。因此，控制水合程度，也就是控制蛋白质的溶解度。控制方法最常用的是加入中性盐。主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用最广的是硫酸铵，它的优点是温度系数小而溶解度大。在这一溶解度范围内，许多蛋白质均可盐析出来，且硫酸铵价廉易得，分段效果较其它盐好，不易引起蛋白质变性。应用硫酸铵时对蛋白氮的测定有干扰，另外缓冲能力较差，故有时也应用硫酸钠，如盐析免疫球蛋白，用硫酸钠的效果也不错，硫酸钠的缺点是30℃以下溶解度太低。其它的中性盐如磷酸钠的盐析作用比硫酸铵好，但也由于溶解度太低，受温度影响大，故应用不广。氯化钠的溶解度不如硫酸铵，但在不同温度下它的溶解度变化不大，这是方便之处。它也是便宜不易纯化的试剂。硫酸铵浓溶液的PH 常在4.5～5.5 之间，市售的硫酸铵还常含有少量游离硫酸，PH 值往往降至4.5 以下，当用其他PH 值进行盐析时, 需用硫酸或氨水调节。

盐析时注意的几个问题：

盐的饱和度不同蛋白质盐析时要求盐的饱和度不同。分离几个混合组成的蛋白质时，盐的饱和度常由稀到浓渐次增加。每出现一种蛋白质沉淀进行离心或过滤分离后，再继续增加盐的饱和度，使第2 种蛋白质沉淀。例如用硫酸铵盐析分离血浆中的蛋白质饱和度达20%时，纤维蛋白原首先析出；饱和增至28～33%时，优球蛋白析出；饱和度再增至33～50%时，拟球蛋白析出；饱和度大于50%以上时清蛋白析出。

PH 值 pH 值在等电点时蛋白质溶解度最小易沉淀析出。因此盐析时除个

别特殊情况外，pH 值常选择在被分离的蛋白质等电点附近。由于硫酸铵有弱酸性，它的饱和溶液的pH 值低于7，如所要蛋白质遇酸易变性则应在适当缓冲液中进行。

蛋白质浓度在相同盐析条件下蛋白质浓度愈高愈易沉淀。使用盐的饱和度的极限也愈低。如血清球蛋白的浓度从0.5%增至3.0%时, 需用中性盐的饱和度的最低极限从29%递减至24%.某一蛋白质欲进行两次盐析时, 第1 次由于浓度较稀, 盐析分段范围较宽, 第2 次则逐渐变窄. 例如胆碱酯酶用硫酸铵盐析进时，第1 次硫酸铵饱和度为35%至60%,第2 次为40%至60%。蛋白质浓度高些虽然对沉淀有利, 但浓度过高也易引起杂蛋白的共沉作用. 因此, 必须选择适当浓度尽可能避免共沉作用的干扰。

温度由于浓盐液对蛋白质有一定保护作用，盐析操作一般可在室温下进行。至于某些对热特别敏感的酶，则宜维持低温条件。通常蛋白质盐析时对温度要求不太严格。但在中性盐中结晶纯化时，温度影响则比较明显。

脱盐蛋白质用盐析法分离沉淀后，常需脱盐才能获得纯品。脱盐方法最常用的是透析法。透析法所需时间较长，常在低温下进行并加入防腐剂避免微生物污染。透析使用前必须处理，方法是将透析袋置于0.5mol/LEDTA 溶液中煮0.5h, 弃去溶液, 用蒸镏水洗净, 置50%甘油中保存备用。也可用分子筛层析，常用SephadexG-25 柱层析法，上样不要超过床体积的20%。此外，有些金属离子能和蛋白质形成较为专一的结合而使蛋白质沉淀。这虽不是典型的盐析，但在制备蛋白质中有许多成功的例子。锌离子在特定pH 下与胰岛素结合形成沉淀就是这种例子。蛋白质从悬浮液中沉淀出来的速度极慢，必须用强力离心来促进这个过程。

结束语：在生化制备中, 许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。盐析同时又受多种因素的影响，在操作时要注意用硫酸缓冲液稳定pH ，选择合适的饱和度，分步盐析，控制初始蛋白质的浓度，以更好的达到盐析的效果。

范文三：盐析原理

1. 盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。

如:加浓(NH4)2SO4使蛋白质凝聚的过程;在乙酸的酯化反应中加入饱

和碳酸钠溶液，降低乙酸乙酯溶解度，使其分层现象更明显的过程。

2.向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，

使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。向

某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐，可以使蛋白质性质发生改变而凝聚，

进而从溶液中析出，这种作用叫作变性，性质改变，是化学反应，无法复原。

3.把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应

后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物。往锅内加入食盐颗粒，搅拌、

静置，使高级脂肪酸钠与甘油、水分离，浮在液面。(该反应用以制肥皂)

简单的说就是利用高浓度中性盐使蛋白质发生沉淀;蛋白质的溶解度(S)

不同，用于沉淀的盐浓度不同。

盐析结晶原理

盐析结晶是指在盐溶液体系中，加入某种电解质盐析剂, 这种加入的盐析剂，

其离子的水合作用比原溶液中其它盐较强，它使溶液中自由水分子数减小,

从而提高溶液中欲结晶物质在溶液中的有效浓度，使欲结晶物质在溶液中结

晶析出，这就是盐析结晶。

水合作用:(Hydration)

溶质的分子或离子与溶剂的分子相结合的作用称为溶剂化作用，生成水合分子(水合离子)，这一过程放出热量。对于水溶液来说，这种作用称为水合作用，属于化学变化。

大多数的离子在水溶液中都是以水合离子的形式存在。

研究表明，水对阴、阳离子都有较强溶剂化作用，但对阳离子比阴离子有更大的溶剂化作用。因此盐析剂作用主要表现在盐析剂阳离子溶剂化作用上。盐析剂与水结合愈强烈，盐析效应愈强。由于水合数与离子的大小有关，即离子愈小，水合数就愈大，盐析效应也愈强。盐析剂所含阳离子半径愈小，电荷愈多，则对被盐析离子的水化层影响愈大，使被盐析离子脱水愈易，其盐析效应愈强。所以化工生产中常用的盐析剂多是离子势较大的阳离子Li+、Al3+、Fe3+、Mg2+、Sn2+等形成的盐。我们选择了这些阳离子所形成的氯化物和硝酸盐, 并通过探索性实验，确定选用一种较合适的盐析剂。

范文四：盐析法提取DNA

年第

期

广

东公安科

技总第

期

盐

析提法

取深圳市蛇口安公分

局深圳市罗湖公分安局

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摘

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效相同

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而

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果为同一血样不同方法取提的

讨论

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先

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取而制备且杂

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仅酚饱和的就

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,微

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川

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和酚氯仿抽提法需,

川

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个整作时操间短

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小时左需右

而

饱酚和氯抽仿提至法少需要

我

们以可看用盐析法提取出

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段较用和酚饱氯仿抽提法所

的剪切得作用

。

段片

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因盐析为法避免了有机溶对剂

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对

续后扩的增中

扩增及

指纹谱图分析都极有利。

而且该方法防止了残留有

机

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本文

建立的

、便

提取方法在实际检案中应用效果好良。

具

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考资料目

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范文五：盐析法.doc

盐析法综述

摘要:沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。盐析法是其中的一种，盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,可使某些成分在水中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离。常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。

关键词:沉淀法;盐析;原理;方法评价;蛋白质盐析

沉淀法

沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。

有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。、非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子非离子多聚物是六十年代发展起来的一类重要沉淀剂，最早用于提纯免疫球蛋白、沉淀一些细菌和病毒，近年来逐渐广泛应用于核酸和酶的分离提纯。最常用的是铅盐法，可以用于除去杂质，也可用于沉淀有效成分。沉淀法通常是在溶液状态下将不同化学成分的物质混合,在混合液中加人适当的沉淀剂制备前驱体沉淀物,再将沉淀物进行干燥或锻烧,从而制得相应的粉体颗粒。一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。

对沉淀形式的要求

(1)沉淀的溶解度要小，以保证被测组分能沉淀完全。

(2)沉淀要纯净，不应带入沉淀剂和其他杂质。

(3)沉淀易于过滤和洗涤，以便于操作和提高沉淀的纯度。

(4)沉淀易于转化为称量形式。

盐析法

胶体的盐析

胶体的盐析是加盐而使胶粒的溶解度降低，形成沉底析出的过程，是胶体的聚沉现象的一种

析是一个可逆的过程。利用这个性质，可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质

盐析法的原理

盐析的原理是蛋白质在高浓度盐的溶液中，随着盐浓度的逐渐增加，由于蛋白质水化膜被破坏、溶解度下降而从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀分离各种蛋白质。在盐析时，蛋白质的溶解度与溶液中离子强度关系可用下式表示:

Log S =β 0

则 Log S=β,K×I S

式中 S 是蛋白质在纯水(离子强度 I=0)中的溶解度，S 为蛋白质在离子0

强度为 I 的溶液中的溶解度，K 为盐析常数。上述公式中当温度和 pH 一定时，S

S仅取决于蛋白质的性质。因此对于同一蛋白质，在一定温度和 pH 时，S 是0 0一常数。

盐析常数 K主要取决于盐的性质(盐的离子价数和离子平均半径),也和蛋S

有关。不同的蛋白质在同一种盐溶液中的 K 值不同，K 值愈大，白质的性质 SS盐析效果愈好。

从上述公式可知在温度和 pH 一定的同一种盐溶液中，不同蛋白质有各自一定的β和 K 值。可以通过改变盐的离子强度来分离不同的蛋白质。这种方法S

称“K分段盐析法”。 S

对于同一种盐溶液，如果保持离子强度不变，通过改变温度和 pH 来改变β值，也可达到盐析分离的目的。这种方法称为“β分段盐析法”。

蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。

盐析法的方法学评价

盐析法简单方便，可用于蛋白质抗原的粗提、丙种球蛋白的提取、蛋白质的浓缩等。盐析法提纯的抗原浓度不高，只用于抗原的初步纯化。

且盐析用盐也要求严格，盐的盐析作用要强，有较大的溶解度，必须是惰性的，来源广泛且便宜。

蛋白质的盐析

盐析法提纯蛋白质时应考虑以下几个条件的选择:盐析法分为两类，第一类叫Ks分段盐析法，在一定PH和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液;第二种叫b分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。

从破碎材料或细胞器提出的蛋白质是不纯的，需进一步纯化。纯化包括将蛋白质与非蛋白质分开，将各种不同的蛋白质分开。选择提取条件时，就要考虑尽量除去非蛋白质。一般总是有其它物质伴随混入提取液中。但有些杂质(如脂肪)以事先除去为宜。先除去便于以后操作。

原理:盐析法对于许多非电解质的分离纯化均适合。对蛋白质和酶的提纯应用也最早。至今还广泛使用，一般粗抽提物经常利用盐析法进行粗分。也有反复用盐析法得到纯的蛋白质的例子。其原理是蛋白质在低盐浓度下的溶解度随盐液浓度升高而增加。球蛋白当盐浓度不断上升时，蛋白质的溶解度又以不同程度下降并先后析出(盐析)。这是由于蛋白质分子内和分子间的电荷的极性基团有静电引力。当水中加入少量盐时，盐离子与水分子对蛋白质分子一的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大。但盐浓度增加一定程度时，水的活度降低，蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质相互聚集而沉淀析出。盐析法是根据不同蛋白质在一定浓度盐溶液中溶解度降低程度不同达到彼此分离的方法。

盐的选择:如上所述，蛋白质在水中溶解度取决于蛋白质分子上离子基团周围的水分子数目，即取决于蛋白质的水合程度。因此，控制水合程度，也就是控制蛋白质的溶解度。控制方法最常用的是加入中性盐。主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用最广的是硫酸铵，它的优点是温度系数小而溶解度大。在这一溶解度范围内，许多蛋白质均可盐析出来，且硫酸铵价廉易得，分段效果较其它盐好，不易引起蛋白质变性。应用硫酸铵时对蛋白氮的测定有干扰，另外缓冲能力较差，故有时也应用硫酸钠，如盐析免疫球蛋白，用硫酸钠的效果也不错，硫酸钠的缺点是30?以下溶解度太低。其它的中性盐如磷酸钠的盐析作用比硫酸铵好，但也由于溶解度太低，受温度影响大，故应用不广。氯化钠的溶解度不如硫酸铵，但在不同温度下它的溶解度变化不大，这是方便之处。它也是便宜不易纯化的试剂。硫酸铵浓溶液的PH 常在4.5,5.5 之间，市售的硫酸铵还常含有少量游离硫酸，PH 值往往降至4.5 以下，当用其他PH 值进行盐析时,需用硫酸或氨水调节。

盐析时注意的几个问题:

盐的饱和度不同蛋白质盐析时要求盐的饱和度不同。分离几个混合组成的蛋白质时，盐的饱和度常由稀到浓渐次增加。每出现一种蛋白质沉淀进行离心或过滤分离后，再继续增加盐的饱和度，使第2 种蛋白质沉淀。例如用硫酸铵盐析分离血浆中的蛋白质饱和度达20%时，纤维蛋白原首先析出;饱和增至28,33%时，优球蛋白析出;饱和度再增至33,50%时，拟球蛋白析出;饱和度大于50%以上时清蛋白析出。

PH 值 pH 值在等电点时蛋白质溶解度最小易沉淀析出。因此盐析时除个

蛋白质浓度在相同盐析条件下蛋白质浓度愈高愈易沉淀。使用盐的饱和度的

,需用中性盐的饱和度的极限也愈低。如血清球蛋白的浓度从0.5%增至3.0%时

最低极限从29%递减至24%.某一蛋白质欲进行两次盐析时,第1 次由于浓度较稀,盐析分段范围较宽,第2 次则逐渐变窄.例如胆碱酯酶用硫酸铵盐析进时，第1 次硫酸铵饱和度为35%至60%,第2 次为40%至60%。蛋白质浓度高些虽然对沉淀有利,但浓度过高也易引起杂蛋白的共沉作用.因此,必须选择适当浓度尽可能避免共沉作用的干扰。

脱盐蛋白质用盐析法分离沉淀后，常需脱盐才能获得纯品。脱盐方法最常用的是透析法。透析法所需时间较长，常在低温下进行并加入防腐剂避免微生物污染。透析使用前必须处理，方法是将透析袋置于0.5mol/LEDTA 溶液中煮0.5h,弃去溶液,用蒸镏水洗净,置50%甘油中保存备用。也可用分子筛层析，常用

析法，上样不要超过床体积的20%。此外，有些金属离子SephadexG-25 柱层

能和蛋白质形成较为专一的结合而使蛋白质沉淀。这虽不是典型的盐析，但在制备蛋白质中有许多成功的例子。锌离子在特定pH 下与胰岛素结合形成沉淀就是这种例子。蛋白质从悬浮液中沉淀出来的速度极慢，必须用强力离心来促进这个过程。

结束语:在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。盐析同时又受多种因素的影响，在操作时要注意用硫酸缓冲液稳定pH，选择合适的饱和度，分步盐析，控制初始蛋白质的浓度，以更好的达到盐析的效果。

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