爷丶高调登场
范文一：细菌抗酸染色法
细菌抗酸染色法
关键词: 细菌 抗酸 染色
1、原理与应用
结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色，若加温或延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒精处理也不易脱色，经此染色后，结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色，而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。
2、材料
(1)结核病人痰
(2)抗酸染色液
(3)玻片、片夹、滤纸片、竹签、空平皿、污物盆。
3、方法
(1)取洁净的竹签沾取痰中血丝或脓性痰，在清洁无油脂玻片上涂开。涂抹区约拇指盖大。用过的竹签放到空平皿内待高压灭菌。
(2)涂片自然干燥后，用片夹挟住玻片一端，通过火焰固定。
(3)涂抹面用滤纸片盖上，然后往滤纸片上滴加石炭酸复红染液，使滤纸片完全被染液浸湿，持玻片在小火上加温片刻然后离开火焰，此时可见到玻片上冒出蒸气。待蒸气消失后再加温，
如此反复3,4次，约5min，加温时随时添加染液勿使纸片干涸。 (4)玻片冷却后，用接种环挑去滤纸扔到污物盆内，流水冲洗玻片。 (5)滴加3%盐酸酒精脱色，至涂抹均匀部位基本没有红色再脱下为止，水洗。 (6)滴加吕氏美蓝染液30sec，水洗。
(7)吸干、镜检。
4、溶液配制
萋,尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液
(1)石炭酸复红液:硷性复红4g，溶于95%酒精100ml，作成饱和溶液，再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成。
(2)3%盐酸酒精液。
浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成。
(3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液
美蓝2g，溶于95%酒精100ml中，作成饱和液。再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合均匀即可。
范文二：革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌
革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。
基本概念
自然界存在多种多样病菌，如何将这些病菌加以鉴别、分类 ，并选择有效药物进行治疗这是很重要的问题。革兰氏染色法，能够把细菌分为两大类:采用这种染色方法，是先用龙胆紫(亦称结晶紫)来染细菌，所有细菌都染成了紫色，然后再涂以革兰氏碘液，来加强染料与菌体的结合，再用95%的酒精来脱色20,30秒钟，有些细菌不被脱色，仍保留紫色，有些细菌被脱色变成无色，最后再用番红或沙黄复染1分钟，结果已被脱色的细菌被染成红色，未脱色的细菌仍然保持紫色，不再着色，这样，凡被染成紫色的细菌称为革兰氏阳性菌(G+菌);染成红色的称为革兰氏阴性菌(G-菌)。
实际意义
常见的革兰氏阳性菌有:葡萄球菌(Staphylococcus)、链球菌(Streptococcus)、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等;常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等。
在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感(结核杆菌对青霉素不敏感);而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感(但奈瑟氏菌中的流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感)，而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。
结构特点
革兰氏阳性菌细胞壁较厚，约20,80nm。肽聚糖含量丰富，有15,50层，每层厚度1nm,约占细胞干重的50,80%。此外，尚有大量特殊组份磷壁酸(teichoic acid)。磷壁酸是由核糖醇(ribitol)或甘油(glyocerol)残基经由磷酸二键互相连接而成的多聚物。磷壁酸分壁磷壁酸(wall teichoic acid)和膜磷壁酸(membrane teichoic acid)两种，前者和细胞壁中肽聚糖的n-乙酰胞壁酸连结，膜磷壁酸又称脂磷壁酸(l ipteichoic acid)和细胞膜连结，另一端均游离于细胞壁外。磷壁酸抗原性很强，是革兰氏阳性菌的重要表面抗原;在调节离子通过粘肽层中起作用;也可能与某些酶的活性有关;某些细菌的磷壁酸，能粘附在人类细胞表面，其作用类似菌毛，可能与致病性有关。此外，某些革兰氏阳性菌细胞壁表面还有一些特殊的表面蛋白，如a蛋白等，都与致病有关。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构显著不同，导致这两类细菌在染色性、抗原性、毒性、对某些药物的敏感性等方面的很大差异。
革兰氏染色的结果取决于细菌细胞壁的结构即革兰氏染色原理为: G，菌:细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。
Gˉ菌:肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄
复染后呈红色。革兰氏阳性菌细胞壁厚约20-80nm，有15-50层肽聚糖片层，含20-40%的磷壁酸。革兰氏阴性菌细胞壁厚约10nm，仅2-3层肽聚糖，另外还有脂多糖、细菌外膜和脂蛋白。
放线菌(Actinomycete)是另一大类革兰氏阳性菌，根据DNA中鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)的含量，放线菌被称为高G+C革兰氏阳性菌，而厚壁菌被称为低G+C革兰氏阳性菌。如果细胞的第二层膜是衍生特征，这两类革兰氏阳性菌可能是细菌基部的分支，否则它们可能组成关系相对较近的单系群。它们被认为可能是古细菌和真核生物的祖先，因为它们都缺乏第二层
膜，并且具有一些生化上的相似性，比如含有固醇类。此外，尽管恐球菌-栖热菌(Deinococcus-Thermus)类细菌结构上类似革兰氏阴性菌，但也可被染成革兰氏阳性 原理学说
革兰氏染色原理目前有三种观点:等电点学说、化学学说和渗透学说。 等电点学说
革兰氏阳性菌的等电点在pH2-3，比阴性菌(pH4-5)低，加之碘为弱氧化剂，可降低革兰氏阳性菌的等电点，致使两类菌的等电点差异扩大，因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴性菌更强。
化学学说
碘液在菌体内与结晶紫结合后又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合，此结合物不易被丙酮酒精脱掉，呈革兰氏染色阳性。因革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐，故对碘与结晶紫结合物摄取少，且不牢固，易被丙酮酒精脱色而呈革兰氏染色阴性。 渗透学说
乙醇使阳性菌所含粘肽多糖脱水而致细胞壁间隙缩小，通透性降低，在菌体内保留了染料-碘复合物，呈紫色。阴性菌含粘肽少，细胞壁变化不大，通透性不受影响，菌体内的染料-碘复合物较易透出，失去紫色，被复染成为红色。
范文三：细菌染色标本检查方法之抗酸染色法—萋-尼抗酸染色法
细菌染色标本检查方法之抗酸染色法—萋-尼抗酸染色法
(1)实验材料
?染色液。石炭酸复红液、碱性美蓝溶液、3%盐酸酒精。
?菌种。含结核分枝杆菌的痰标本。
?其他。普通玻片、酒精灯、接种环及显微镜等。
(2)实验方法
?涂片
a、直接涂片和厚膜涂片。用接种环挑取约0.01ml脓性或呈干酪样部分痰液，制成10mm*10mm大小的均匀薄涂片，或取上述标本约0.1ml，制成20mm*15mm大小的厚膜涂片。自然干燥，火焰固定后，行抗酸染色或金胺“0”荧光染色，镜检。
b、集菌涂片。?、沉淀集菌法。取痰液2—3ml，40g/lNaOH1—2倍量混匀。经103.43Pa高压灭菌20—25min(或煮30min)，3000r/min离心30min，弃上清液，取沉淀物涂片做抗酸染色或金胺“0”荧光染色镜检;П、漂浮集菌法。取晨痰2—3ml放入100ml三角瓶内，加1—2倍量40g/lNaOH溶液，经103.43Pa高压灭菌20—25min(或煮30min)。冷却后滴加汽油0.3ml，瓶口盖玻璃纸加塞，塞紧瓶口，置振荡器或手摇振荡10min，再加蒸馏水至满瓶口而又不外溢，静置10—15min，将已编号的洁净载玻片盖在瓶口上，静置15—20min，取下载玻片并迅速将载玻片翻转至浸膜向上，或用接种环取瓶口液面物涂于载玻片上，自然干燥，火焰固定后做抗酸染色或金胺“0”荧光染色，镜检。
?染色
a、初染，在已固定的结核分枝杆菌痰标本涂片上放一小块滤纸片，之后滴加数滴石炭酸复红液后，将标本片放在火焰高处徐徐加温，当涂片上液体出现蒸汽时离开火焰(切不可煮沸)，待玻片稍冷却后补充染液(以防干燥或玻片断裂 )，如此维持染色3—5min，待玻片冷却后用水冲洗，甩干。
b、脱色，在涂片上滴加数滴3%盐酸酒精，轻轻晃动玻片，直至无红色液体流下为止，一般作用1—3min，水洗，甩干。
c、复染，滴加数滴碱性美蓝液于涂片上，作用1min后，水洗，甩干。用吸水纸印干标本片或 自然干燥后油镜检查。
(3)结果判断和报告
结核分枝杆菌染成红色，菌体细长，有时微弯，呈分枝状排列，有时着色不均匀，呈颗粒状。非抗酸菌及标本中其他细胞均染成蓝色。
?直接涂片和厚膜涂片结果
—:仔细观察至少300视野未发现抗酸菌;
士:300个视野内发现1—2个抗酸菌(全部涂膜镜检3遍);
+:100个视野内发现1—9个抗酸菌(全部涂膜镜检1遍);
2+:10个视野内发现1—9个抗酸菌;
3+:每个视野内发现1—9个抗酸菌;
4+:每个视野内发现9个以上的抗酸菌。
?集菌涂片结果。按“发现抗酸染色 阳性细菌”或“未发现抗酸染色阳性细菌 ”报告。 (4)注意事项
?每张载玻片只允许涂1份标本，不得涂2份或2份以上标本，以免染色过程中菌体脱落而导
致阴阳结果混淆。使用过的玻片要彻底清洗干净后才能再次使用，以防抗酸菌遗留在玻片上。 ?抗酸染色时切勿使用染色缸。用于吸水的滤纸只能1片1张，不可重复使用。镜检时每检查 1份标本后，均需揩拭油镜头。滴加香柏油的玻璃棒或竹签不得触及玻片。 ?抗酸染色时，脱色剂脱色时间宁长勿短，结核分枝杆菌脱色时间长至10—20min而不被脱色;而非抗酸菌则易脱色，故延长脱色时间有一定的鉴别作用。
?为了防止实验室感染，可先将待检的结核分枝杆菌标本高压灭菌后，涂片染色。这样既安全又不影响实验结果(此法仅用于大规模实验)。
范文四：细菌的革兰氏染色法
实验二 细菌的革兰氏染色法
一、实验目的
学习细菌的革兰氏染色原理和方法。
二、实验原理
单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。
复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。
革兰氏染色机制：由于G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。而G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。
三、实验材料
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（24h培养物）、革兰氏染色液一套
四、实验步骤
1. 涂片
2. 固定
3. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。
4. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。
5. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15-20秒，后立即用流水冲洗。
6. 复染：滴加番红染色液，染3－5分钟，水洗后用吸水纸吸干。
7. 镜检：观察染色结果并绘图。
五、实验结果
记录所观察到的两种菌革兰氏染色颜色的差别，并绘图。
如图所示，被染为紫色的部分即为金黄色葡萄球菌，红色部分即为大肠杆菌。
六、问题与讨论
要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？哪一步是关键？Why?
按照操作顺序来看
1、首先，必须强调的是实验过程中全程的无菌操作：玻片的消毒、接种环的杀菌以及实验所用材料试管的无菌使用；
2、其次，是金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌的刮取过程中，它们的量一定要适中，以免过多影响后期观察结果；
3、再者，涂片操作结束后，通过酒精灯的烘烤将细菌固定，要注意控制烘干的程度，防止细菌全被烧死；
4、接下来的染色过程中，注意各染色剂染色的时间长度，尤其是95%乙醇脱色的时长，18秒为适宜时长；
5、最后，就是吸干水分，注意油镜的使用，先在低倍镜下找视野，再转成高倍镜、油镜。
关键步骤：我认为是95%乙醇脱色的这一步。因为如果脱色过度，会使革兰氏阳性菌呈假阴性，以致观察时整个视野都是红色；如果脱色不够，会使革兰氏阴性菌呈假阳性，以致观察时整个视野都是紫色，影响观察结果，干扰实验。
七、实验小结
这次实验让我真真正正感受到了做实验的乐趣。每一个操作步骤都必须精准地完成，少有偏差，就会对实验结果产生很大影响，就比如我第一次试验就是脱色时间较长，用了20秒，以致油镜观察时，视野全是红色；第二次试验则是脱色时间较短，只能依稀看到一点被染成
红色的大肠杆菌；第三次则吸取教训，把握每一步，最后看到了紫红相间的视野。期待下一次实验课。
范文五：细菌的荚膜染色法
细菌的荚膜染色
1 实验目的
? 掌握细菌的荚膜染色法(固氮球菌)
? 熟炼显微镜使用
2 实验原理
? 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚
膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热
固定，以免荚膜皱缩变形。
? 负染色法
3 实验器材
? 涂片染色用的细菌培养物
– 荚膜染色(钾细菌)24h的斜面培养物。
? 用滤纸过滤后的墨汁、复红染色液。
? 显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸等。
4实验步骤
? (1)制片:取洁净的载玻片一块，加蒸馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并涂布。
? (2)干燥:将涂片放在空气中晾干或用电吹风冷风吹干。
? (3)染色:在涂面上加复红染色液染色3—5min。
? (4)水洗:用水洗去复红染液。
? (5)干燥:将染色片放空气中晾干。
? (6)涂黑素:在染色涂面左边加一小滴墨汁，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触墨汁，使墨汁沿玻片后
缘散开(夹角30度)，然后推向另一侧，使黑素在染色涂面上成为一薄层，并迅速风干。
? (7)镜检:先低倍镜，再高倍镜油镜观察。
? 观察:背景、菌体、荚膜、细菌形态等，并绘图。
5 实验记录(绘图)
6 思考题
? 荚膜负染法为什么不用热固定,
? 为什么包在荚膜内的菌体着色，而荚膜不着色,
