范文一:d二聚体正常值 D-二聚体异常值
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D-二聚体异常值分析
赵秀丽(泰州市第四人民医院检验科,江苏泰州225300)
【摘方法
要】
目的
通过D-二聚体检测与临床病症的紧密结合,对泰州市第四人民医院D-二聚体异常值进行分析。
采用SysmexCA-1500全自动凝血分析仪对住院的所有患者共计7230例进行血浆D-二聚体分析。结果ICU患
者的D-二聚体阳性率最高,占36.23%,阳性标本达危急值占13%,骨科患者阳性率占18.90%,阳性标本达危急值的占
33%,肿瘤科患者阳性率占18.41%,阳性标本达危急值的
1
占13%。结论
二聚体对该院多病区的患者均具有重要的诊断和治疗价值。
【关键词】
静脉;
栓塞;
骨折;
肿瘤;
实验室技术和方法;
因各病区病种的分布不同,阳性率有所不同,D-
D-二聚
文献标识码:B
文章编号:1009-5519(2012)21-3288-02中图法分类号:R446.112
D-二聚体检测是一种灵敏度高,特异性强的检测项目,是目
前鉴别原发性和继发性纤溶以及鉴别溶栓治疗等方面颇有价值的重要指标[1]。近年来,随着检测方法的不断进步和临床应用的深入研究,D-二聚体的检测在临床得到了广泛的应用。2011年1月至2012年3月本院共检测了7230例住院患者的血浆D-二聚体水平,根据各病区标本阳性率的分布不同,本文对其D-二聚体异常值进行分析。
2
2.2D-二聚体阳性危急值在7230例标本中,阳性标本773
例,其中阳性标本达危急值的共24例,占危急值总例数的3.1%(D-二聚体大于1500μg/L定为危急值)。其中四病区(骨科)阳性标本中达危急值的标本数最多占33%,ICU和七病区(肿瘤科)次之占13%。这说明D-二聚体水平升高是急性创伤后的一种明显表达[2],这也与国内、外相关研究相吻合,是机体创伤后的应激反应,见表2。
表1
各病区患者血浆D-二聚体阳性情况
阳性(n)
阳性率(%)
11.11.21.31.422.1
资料与方法一般资料仪器
选择2011年1月至2012年3月入院的所有住
病区一病区二病区三病区四病区五病区六病区七病区八病区九病区
总例数(n)
院患者共计7230例。
采用SysmexCA-1500全自动凝血分析仪,德国西门子
采静脉血2mL,枸橼酸钠抗凝,抗凝剂与血液之
原装试剂与质控。
标本采集判断标准结
3
果
比为1?9立即混匀,3000r/min离心10min,待检血浆备用。
48902361143152461131510071026277591387230
0102342161014658964920150773
0.0011.4614.4118.906.637.5018.419.534.787.221.6936.2310.6
9
D-二聚体大于500μg/L为阳性。
各病区患者血浆D-二聚体阳性率7230例住院患者中,阳
十病区十一病区
性率最高的为ICU占36.23%,其次为四病区(骨科)阳性率占
18.90%,第3位是七病区(肿瘤科)阳性率占18.41%,说明各病区因病种分布不同,阳性标本所占百分率有所不同,见表1。
ICU合计
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范文二:血浆_1_3_d_葡聚糖对深部真菌感染诊断的研究
? 论著 ? 血浆 β21, 32D 2葡 聚糖对深部真菌感染诊断的研究
赵勇 王红 任爱民 张淑文 张丽霞
(首都医科大学附属北京友谊医院 , 北京 100050)
【 摘要 】 目的 观察血浆 β21, 32D 2葡 聚糖对深部真菌感染诊断的作用 。 方法 将 2005年 8月 ~2006年 6月北京友谊医 院 145例患者 (标本 182份 ) 分为深部真菌感染组和无深部真菌感染组 , 分析比较两组葡聚糖水平 ; 使用 ROC 曲线确定最佳 临界值 。 结果 深部真菌感染组的葡聚糖水平 64. 7±86. 0(25. 5) pg/ml 明显高于对照组 6. 3±21. 0(0. 0) pg/ml (P <0. 001)="" ;="" 血浆葡聚糖用于诊断深部真菌感染的="" roc="" 曲线下面积为="" 0.="" 887(95%的置信区间为="" 0.="" 795~0.="" 979)="" ,="" 使用临界值="" 13.="" 7pg/ml="" 诊断深部真菌感染的敏感度="" 、="" 特异度="" 、="" 阳性预测值和阴性预测值分别为="" 88.="" 9%、="" 90.="" 2%、="" 50.="" 0%和="" 98.="" 7%;="" kappa="" 值="" 0.="" 588(p="">0.><0. 05)="" 。="" 结论="" ="" 血浆葡聚糖水平可用于诊断深部真菌感染="" ,="" 本研究中使用="" gkt="" 25m="" set="" 动态真菌检测试剂盒检="" 测血浆葡聚糖水平诊断深部真菌感染的最佳临界值为="" 13.="">0.>
致性较好 。
【 关键词 】 深部真菌感染 ; 诊断 ; β21, 32D 2葡 聚糖 ; ROC 曲线
【 中图分类号 】 R 446. 53 【 文献标识码 】 A 【 () 205
Study of β21, 32D 2i a of si ve funga l i n fecti on
ZHAO Yong,WANG A i in, HANG Shu 2wen, ZHANG L i 2xia
(B eijing Capita l U n of M ed ica l S ciences A ffilia ted B eijing F riendsh ip Hospita l, B eijing 100050, Ch ina )
【 Abstract 】 O bjecti ve To study β21, 32D 2glucan on the diagnosis of invasive fungal infecti on . M ethods One hundrend forty five patients fr om Beijing Friendshi p Hos p italwere divided int o t w o gr oup s according t o whether or not be diagnosed as invasive fungal in 2 fecti on . Plas ma level of β21, 32D 2glucan in t w o gr oup s were deter m ined and compared . Op ti m al cut 2off value was established with ROC curve . Results Patients diagnosed as invasive fungal infecti on showed a higher p las ma level of BG than that of contr ol gr oup. (P <0. 001)="" a="" rea="" under="" curve="" (auc="" )="" was="" 0.="" 887(95%confidence="" interval="" bet="" w="" een="" 0.="" 795and="" 0.="" 979)="" when="" bg="" level="" was="" ap="" 2="" p="" lied="" t="" o="" diagnose="" invasive="" fungal="" infecti="" on="" .="" the="" sensitivity,="" s="" pecificity,="" and="" positive="" and="" negative="" p="" redictive="" values="" f="" or="" bg="" were="" 88.="" 9%、="" 90.="" 2%、="" 50.="" 0%and="" 98.="" 7%,="" res="" pectively,="" with="" kappa="" value="" of="" 0.="" 588.="" conclusi="" on="" ="" level="" of="" bg="" could="" be="" used="" for="" diagnosis="" of="" invasive="" fungal="" infecti="" on="" .="" op="" ti="" m="" al="" cut="" 2off="" value="" of="" p="" las="" ma="" bg="" with="" gkt="" 25m="" set="" for="" diagnosis="" of="" invasive="" fungal="" infecti="" on="" in="" this="" ex="" 2="" peri="" m="" ent="" should="" be="" 13.="" 7pg/ml="" which="" exhibited="" fine="" consistency="">0.>
【 Key words 】 invasive fungal infecti on; β21, 32D 2glucan; diagnosis; ROC curve
[Chin J Mycol, 2007, 2(4) :2022206]
随着免疫抑制患者的增多 , 临床中发生深部真 菌感染的机会也越来越多 。 一般来说 , 深部真菌感 染通常发生于危重患者 , 对于这些患者的治疗成功 与否很大程度上取决于能否快速识别入侵的病原 菌 。 近年来出现了一些快速诊断技术如高分辨 CT (HRCT ) 、 检测真菌抗原和核酸等非培养诊断技 术 , 这些技术与 Prentice [1]提出的深部真菌感染危 险 分层相结合使得深部真菌感染早期诊断和及时
作者简介 :赵勇 , 男 (汉族 ) , 硕士 , 主治医师 . E 2mail:yyyyinternal@ hot m ail . com
通讯作者 :王红 , E 2mail:wanghong0315@yahoo. com. cn 治疗成为可能 。其中通过检测体液中真菌抗原或 代谢物来诊断深部真菌感染的研究很多 [2, 3], 其中 之一就是关于真菌的细胞壁成分 — β21, 32D 2葡 聚 糖 。 本研究的目的是比较这种新的检测方法与传 统实验室的培养方法在深部真菌感染诊断方面的 准确性 。
1 材料与方法
1. 1 病例选择
北京友谊医院感染内科 2005年 8月 ~2006年 6月住院肺炎患者以及其他科室可能感染真菌的
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? 中国真菌学杂志 2007年 8月 第 2卷 第 4期 Chin J Mycol, August 2007, Vol 2, No . 4
患者共 145例 (其中男 88例 , 女 57例 ) , 平均年龄 65. 1岁 (17~85岁 ) , 其中诊断为真菌感染患者 (真阳性 ) 共 16例 , 诊断标准按照欧洲肿瘤研究治 疗组织 (E ORTC ) 深部真菌感染合作组 (I F I CG ) 和 国家过敏及感染类疾病研究所 (N I A I D ) 真菌病研 究组 (MSG ) 对深部真菌感染的定义和分类进行判 断 [4], 判断过程结合临床 , 病例出院后进行总结 。 按照 Mennink 2Kersten [5]的研究 , 只有确诊和高度疑 似深部真菌感染才被认为真阳性 , 只有非深部真菌 感染被认为真阴性 , 其中确诊和高度疑似深部真菌 感染患者的一般信息详见表 1。
1. 2 标本采集
感染内科入选患者进行抗生素治疗 1周后采 血 , 分送血浆葡聚糖检和血真菌培养 , 同时送检痰 、 尿 、 便真菌培养及真菌涂片 , 特殊患者留取腹水和 脑脊液真菌培养 。取样过程监测保持尽量无菌原 则以减少污染 , 样本接种于我院实验室标准真菌培 养基 , 真菌的识别使用传统方法 [6]。 全院其他科室 诊断可能存在深部真菌感染的患者立即采血及留 取其他标本同前 , 视病情情况决定 1周后是否再次 留取标本 。共留取用于检测血浆葡聚糖的标本 182份 , 其中来自确诊病例和高度疑似病例 (真阳 性 ) 共 18份 , 其余为可能感染病例 (18份 ) 和无深 部真菌感染病例 (146份 , 真阴性 ) 。
表 1 深部真菌感染患者病例情况 Tab . 1 L ist of patients with invasive fungal infecti on
编 号 年
龄
性
别
原发病诊断
广谱
抗生素
使用
激素
免疫
抑制剂
有否真菌感染 转归
葡聚糖 pg/ml
181男 AHP 、 MODS 、
肺炎
是 咽拭子 白念珠菌 p r obable 好转 28. 830
276男 S BE 是 否 无改变 痰 、 尿、 CSF 白念珠菌、
热带念珠菌 p r obable
好转 23. 950
371男 肺炎 、 ARF
上消出血
是 否 否
左肺斑片影、
双侧胸水
痰 白念珠菌 p r obable 死亡 0. 000
485女 胆管癌、 肝转移、
双肺炎 、 D I C
是 否 否
右肺斑片影、
双侧胸水
痰 白念珠菌 p r obable 死亡 0. 000
577男 肺梗塞、 双肺炎 是 否 否 双肺斑片影 痰 热带念珠菌 p r obable 死亡 26. 970
678男 肺炎、 肺癌 ? 是 否 否 双肺斑片影、 胸水、
右下肺空洞
痰
热带念珠菌、
克柔念珠菌 p r obable
好转 51. 870
764男 慢支、 肺炎 、
胸膜炎
是 否 否 左下斑片影 痰
白念珠菌、
其他念珠菌 p r obable
好转 23. 780
864男 肺炎、 脑梗塞 是 是 否 右下肺实变 痰、 支气管
灌洗液
白念珠菌 p r obable 好转 118. 500
972男 肺炎 、 显微镜下
多血管炎
是 是 否 左下肺斑片影 痰 其他念珠菌 p r obable 好转 13. 830
1069女 泌感、 房颤 、
脑梗塞
是 否 否 左下肺斑片影 痰、 尿 热带念珠菌 p r obable 好转 58. 370
1175男 肺炎、 风心病 、
呼吸衰竭
是 否 否 右肺斑片影 痰 热带念珠菌 p r obable 死亡 217. 100
1274男
胃癌、 食道
转移、 膀胱癌
是 否 否
右肺斑片影、
双侧胸水
痰 其他念珠菌 p r obable 死亡 18. 130
1374女 腹膜炎、 尿毒症 是 否 否 无改变 无 无 p r obable 好转 18. 180 1449男 肺炎 是 是 否 左肺斑片影 无 无 p r obable 好转 18. 830 1562男 肺炎、 MODS 是 是 否 双肺斑片影 痰 白念珠菌 p r obable 死亡 44. 610
1675女 尿毒症 (血透 ) 、
腹膜炎
是 否 否 双肺斑片影 腹水、 血 白念珠菌 p r oven 好转 315. 200
注 :AHP . 急性出血坏死性胰腺炎 , S BE . 亚急性心内膜炎 ,MODS . 多脏器功能不全综合征 , ARF . 急性肾功能不全
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中国真菌学杂志 2007年 8月 第 2卷 第 4期 Chin J Mycol, August 2007, Vol 2, No . 4
1. 3 仪器与试剂
MB 280微生物动态快速检测系统 、 T01智能恒 温仪 、 冰浴槽以及 GKT 25M Set 动态真菌检测试剂 盒 , 均由北京金山川科技发展公司提供 。
1. 4 血浆 1, 32β2D 葡聚糖检测方法
用无热原抗凝采血管采取静脉血 2m l, 3000转 /min 离心 , 取上清 0. 1m l, 加入 0. 9m l 的样品处 理液 D 中 , 混匀后置于 70℃ 恒温 10m in, 取出后立 刻放入冰水浴中 , 为待测血浆样品 。 待测血浆样品 0. 2m l 直接加入酶反应主剂 A 中 , 溶解后移液至标 准玻璃反应管中 , 插入 MB 280微生物快速动态检 测系统中进行反应 , 1h 后自动计算待测血浆中真 菌 β葡聚糖含量 。厂家提供的对照血浆中真菌 β葡聚糖正常值为 <10pg l="">10pg>
1. 5 统计分析
应用统计软件包 SPSS 11. 0进行统计学描述 及检验 , 深部真菌感染组与非深部真菌感染组的血 浆葡聚糖水平为非正态分布 , [(数 ) ]形式 ,
ney ) , 取 P <>
、 涂片真菌是否阳性 诊断深部真菌感染的 ROC 曲线 , 依敏感度和特异 度需要 , 确定本方法检测血浆葡聚糖诊断深部真菌 感染的最佳临界值 , 使用诊断实验的一致性检验 Kappa 值判断一致性满意度 , 取 P <0. 05为具有统="" 计学差异="">0.>
2 结 果
深部真菌感染组的葡聚糖水平 64. 7±86. 0 (25. 5) pg /ml 明显高于无深部真菌感染组的葡聚 糖水平 6. 3±21. 0pg/ml (P <0. 001)="" ,="" 有统计学="" 差异="">0.>
血浆葡聚糖用于诊断深部真菌感染 ROC 曲线 下面积为 0. 887(P <0. 05)="" ,="" 95%的置信区间为="" 0.="" 795~0.="" 979,="" 详见图="" 1。与单纯依靠各种标本真菌="" 培养或真菌涂片是否阳性对深部真菌感染的提示="" 作用相比如图="" 1所示="" ,="" 后两者的="" roc="" 曲线位于葡="" 聚糖="" 的="" 曲="" 线="" 下="" 方="" ,="" 其="" 曲="" 线="" 下="" 面="" 积="" 分="" 别="" 为="" 0.="" 840="" (95%置信区间="" 0.="" 744~0.="" 936)="" 和="" 0.="" 833(95%置信="" 区间="" 0.="" 738~0.="" 927)="" ,="" 提示血浆葡聚糖水平对深部="" 真菌感染诊断的准确性优于单纯依靠各种标本真="" 菌培养或真菌涂片是否阳性对深部真菌感染的判="" 断="">0.>
不同血浆葡聚糖水平作为界值的敏感度和特 异度详见表 2
。
图 1 ROC 曲线
F i g . 1 of of invasive fungal infecti on
, 本研究认为 GKT 25M Set 动态真菌检测试剂盒检测血浆葡聚糖 水平诊断深部真菌感染的最佳临界值为 13. 7pg/ m l 。 而以血浆葡聚糖水平 13. 7pg/ml 为临界值对 深部真菌感染的诊断敏感度 、 特异度 、 阳性预测值 、 阴性预测值和准确率分别为 88. 9%、 90. 2%、 50. 0%、 98. 7%和 90. 1%, 一致性检验 Kappa 值为 0. 588(P <0. 05)="" ,="" 提示其对深部真菌感染诊断的一="" 致性较好="" 。="" 而涂片真菌阳性和培养真菌阳性对深="" 部真菌感染诊断的="" kappa="" 值分别为="" 0.="" 397和="" 0.="" 449,="" 提示单纯依靠涂片真菌阳性诊断深部真菌感="" 染的一致性不理想="" ,="" 而培养真菌阳性的诊断作用亦="" 不及血浆葡聚糖的作用="" ,="" 只能结合临床进行分析="">0.>
3 讨 论
随着医疗技术的发展 , 危重患者的生存时间越 来越长 , 广谱抗生素广泛的用于危重患者感染的降 阶梯抗炎治疗 , 免疫抑制剂的应用改善了器官移植 患者的器官排异 , 但深部真菌感染 (invasive fungal infecti on, I F I ) 亦较前更常见 。尽管进行有力的抗 真菌治疗 , 深部真菌感染的死亡率仍居高不下 , 原 因之一就是深部真菌感染的早期诊断困难 , 从而造 成抗真菌治疗的延迟 。部分深部真菌感染的诊断 至尸检时才确立 。抗真菌治疗的尽早进行对深部 真菌感染的预后至关重要 [7]。传统的诊断方法通 常敏感性差 , 作为金标准的组织病理学和深部组织
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表 2 不同血浆葡聚糖水平作为界值与其他诊断标准的敏感度和特异度比较
Tab . 2 Comparis on of sensitivity and s peciality a mong different levels of glucan and other diagnostic t ools in diagnosing invasive fungal infecti on 血 葡 聚 糖 (pg/ml )
13. 717. 317. 928. 7113. 4157. 3
培养阳性 涂片阳性
敏 感 度 88. 9%83. 3%77. 8%44%22. 2%16. 7%88. 9%88. 9%
特 异 度 90. 2%92. 1%92. 7%93. 9%98. 8%100%79. 1%77. 6%
培养通常由于其有创性 , 在血小板减少和凝血功能 异常以及其他类型的危重患者并不适用 , 在国内也 时常为患者及家属拒绝 , 导致确诊病例很少 [4]。本 研究的真阳性病例 16例中确诊病例仅 1例 , 为腹 水培养及连续 5次血培养均为白念珠菌 , 加抗真菌 治疗有效使诊断明确 。全部病例中并无深部组织 病理确诊病例 , 与既往文献报道结果一致
15例均为高度疑似深部真菌感染 2生物学并无阳性发现 ,
染 , ,
好转 , , 对 EORTC /I F I CG 和 N I A I D /MSG关于深部真菌感染 的定义和分类中缺少抗真菌治疗反应进行补充 , 有 待于进一步研究确定其合理性 。
本实验为临床前瞻性实验 , 鉴于临床中考虑可 能存在深部真菌感染的患者多已应用广谱抗生素 , 故对于本研究入选患者选取入院使用抗生素一周 后进行采血 , 是考虑到尽量满足确诊深部真菌感染 组和未确诊真菌感染组的可比性 。本文并未对健 康人群的血浆葡聚糖水平进行测定 , 关于我国健康 人群的血浆葡聚糖水平有待于进一步调查 。本实 验的目的是分析血浆葡聚糖水平对深部真菌感染 诊断实验的准确性 , 确定其是否可以用于早期诊断 深部真菌感染 。 β21, 32D 2葡 聚糖是一种多聚糖成 分 , 特异的存在于除结合菌和隐球菌外的其他真 菌 [8]。 1, 32β2D 葡聚糖可以被 G 因子检测出来 , G 因子是马蹄蟹的一种凝血因子 [9]。本研究利用真 菌 β葡聚糖激活酶反应主剂中的相应因子后形成 凝固蛋白 , 根据其浊度变化对真菌 β葡聚糖浓度进 行定量 。 原核生物 、 病毒和人类的细胞都没有葡聚 糖 , 如出现在血和其他无菌体液中则提示深部真菌 感染 , 常见的病原菌为曲霉菌和念珠菌 , 通过葡聚 糖水平测定都可以检测出来 , 甚至有报道卡氏肺囊 虫感染时葡聚糖水平也会出现升高 , 可能与其具有 真菌的特征有关 [10]。有研究表明 [11]新生隐球菌 产生葡聚糖少于念珠菌和曲霉菌 , 而曲霉菌感染时 葡聚糖上升的程度与宿主免疫力和病原的数量有 关 , , 葡聚糖就很 。
, 有待于扩大 。尽管有许多试剂盒可以检 测葡聚糖 , 但在除日本外的其他国家经验有限 , 国 内目前上市的葡聚糖检测手段有金山川公司的比 浊法 , 一些国内的研究证明其可以有效的诊断深部 真菌感染 。 本研究深部真菌感染组的血浆葡聚糖 水平明显高于对照组 , 提示其对深部真菌感染的诊 断有一定的可行性 。加之其标本采取方法较严格 的传统培养或病理标本采取方法更为方便 , 在临床 中有很大的开发和研究价值 。
Odabasi [12]按葡聚糖高于 60pg/ml 为阳性指 标 , 对 98例血液肿瘤患者进行每周两次的筛选 。 在所有证实深部真菌感染的患者中 (6例念珠菌血 症 , 1例镰刀霉感染 , 1例丝孢酵母菌感染 ) 及高度 疑似深部真菌感染的患者中以出现至少 1例的样 本阳性确定诊断 , 凭借葡聚糖先于临床诊断平均 4d 。 对于确诊和高度疑似的感染 , 单次阳性的敏感 性 、 特 异 性 、 阳 性 预 测 值 和 阴 性 预 测 值 分 别 为 100%、 82%、 40%和 100%。两次阳性的敏感性 、 特异性 、 阳性预测值和阴性预测值分别为 60%、 93%、 50%和 95%。 本研究按葡聚糖高于 13. 7pg/ m l 为阳性指标单次阳性的敏感性 、 特异性 、 阳性预 测值和阴 性 预 测 值 分 别 为 88. 9%、 90. 2%、 50. 0%、 98. 7%, 与文献的报道相差不大 , 但临界值相 差较大 , 考虑可能与试验方法不同有关 , 本文的临 界值是由样本与 G 因子反应后通过比浊法测定并 计算得出 , 是否可与其他文献的临界值进行比较或 ? 5 0 2
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中国真菌学杂志 2007年 8月 第 2卷 第 4期 Chin J Mycol, August 2007, Vol 2, No . 4
用于作为其他方法 (如 EL I S A ) 得出的血浆葡聚糖 水平的正常值有待于进一步在相同样本上测定比 较后决定 。 本研究提示血浆葡聚糖水平对深部真 菌感染诊断的准确性好于单纯依靠各种标本真菌 培养或真菌涂片是否阳性对深部真菌感染的判断 , 分析原因主要是后两者在阳性的情况下不能区分 感染和定植 , 而需要依赖于临床的评价 ; 有研究提 示 [11], 真菌在口腔 、 尿路 、 支气管的定植并不会导 致血浆葡聚糖升高到 20pg/ml 以上 , 从而在鉴别真 菌感染和真菌定植方面更少依赖临床的评价 。
4 结 论
血浆葡聚糖水平可用于诊断深部真菌感染 , 本 研究中使用 GKT 25M Set 动态真菌检测试剂盒检测 血浆葡聚糖水平诊断深部真菌感染的最佳临界值 为 13. 7pg/ml, 使用此临界值对深部真菌感染进行 诊断在本研究中的一致性较好 。但本研究中确诊 深部真菌感染例数较少 ,
致谢 :
, 感谢金山川公司 及时提供的试剂及技术支持 。
参 考 文 献
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[11] Obayashi T, Yoshida M , Mori T, et al . Plas ma 2beta 2D 2glucan measurement in diagnosis of invasive deep mycosis and fungal febrile ep is odes . Lancet, 1995, 345(8941) :17220
[12] Odabasi Z, Mattiuzzi G, O str osky 2Zeichner L, et al . Detecti on of (1, 3) 2b 2Dglucan (BG ) in the serum of leukae m ia patients with invasive fungal infecti ons [abstract M 2902].I n Pr oceed 2 ings of the 42nd I nterscience Conference on Anti m icr obial A 2 gents and Chemotherapy, Sep te mber 27230, 2002; San D iego, California, US A:American Society forM icr obi ol ogy, p. 396
[收稿日期 ] 2007204210 [本文编辑 ] 张 卉
(上接第 224页 )
病 、 糖尿病 、 淋巴瘤 、 霍奇金病 、 晚期肿瘤 、 系统性红 斑狼疮 、 器官移植等患者 [1]。在我国 , 新生隐球菌 性脑膜脑炎以非艾滋病人群散发为主 , 发病率呈逐 年增加的趋势 。慢性粒细胞性白血病感染新生隐 球菌致新生隐球菌性脑膜脑炎的报道少见 。本病 例在综合治疗的基础上 , 应用两性霉素 B 静滴及鞘 内注射等治疗 , 终获治愈 。
参 考 文 献
[1] 赵辨 . 临床皮肤病学 . 第三版 . 江苏 :江苏科学技术出版社 , 2001. 4312433
[收稿日期 ] 2007205231 [本文编辑 ] 卫凤莲
?
6
2
? 中国真菌学杂志 2007年 8月 第 2卷 第 4期 Chin J Mycol, August 2007, Vol 2, No . 4
范文三:真菌葡聚糖酶活力测定
前 言
本标准与Novozymes A/S标准方法:EB-SM-0572.02/02 FBG. Fungal Beta-Glucanase activity by Konelab analyzer(英文版)的一致性程度为等同。
附录A为规范性附录。
本标准由诺维信(中国)生物技术有限公司提出。
本标准由诺维信(中国)生物技术有限公司负责起草。
本标准主要起草人:蔺继尚、关越、翟文景。
本标准于2004年04月首次发布。
I
诺维信分析方法
第112部分:用Konelab 分析真菌β-葡聚糖酶活力,FBG
1 范围
本方法规定了使用Konelab分析真菌β-葡聚糖酶活力的步骤。
本方法适用于所有Novozymes内部分析真菌β-葡聚糖酶样品的实验室。
2 原理
β-葡聚糖酶能水解β-葡聚糖,生成还原糖。该反应通过加入含有PAHBAH和铋盐(Bi)的碱性溶液中止。含有的PAHBAH和铋盐能与还原糖形成有颜色的混合物,在405nm下检测。生成的颜色与β-葡聚糖酶活力成比例。该过程由Konelan分析仪自动完成。
2.1 反应条件(反应体系中) 酶反应
β-葡聚糖浓度: 0.50%
β-葡聚糖酶浓度: (1-5)FBG/L
缓冲液: 28 mM磷酸缓冲液
pH: 5.0
温度: 50℃
时间: 20 min
酶空白反应
β-葡聚糖浓度: 0.50%
β-葡聚糖酶浓度: (1-5)FBG/L
缓冲液: 28 mM磷酸缓冲液
pH: 5.0
温度: 50℃
时间: 20 min
显色反应
PAHBAH浓度: 42 mM
酒石酸盐浓度: 56 mM
铋盐浓度: 4.5 mM
NaOH浓度: 146 mM
pH: 碱性
温度: 50℃
时间: 20 min
测定波长: 405 nm
2.2 样品条件(样品溶液中)
工作范围: (6-30)FBG/L
1 3+
Q/12KF 3568.112-2004
定量范围:
3 单位定义
1 FBG等于在给定条件下每分钟生成相当于1μmol葡萄糖的还原糖所需的酶的量。该活力相对于一个Novozymes A/S标准酶测得。
4 样品类型
本方法适用于最终成品,同样也适用于来自发酵、回收和研发的样品。
5 专一性和灵敏度
如果样品在405 nm处有天然的高本底,或样品中酶活力较低而含的还原糖较多,这些都会导致本方法失效。上述情况会掩盖真实的样品本底,这些情况可从实验中不正常的高吸光度发现。
未稀释样品的检测限为6 FBG/L。定量限为13 FBG/L或0.13 FBG/g(样品稀释为1 g到10 mL)。 方法的灵敏度为:0.064 [0.043-0.085] A/(FBG/L)。
6 仪器
Konelab 30分析机,Thermo Clinical Labsystems
稀释器,Hamilton Microlab 1000
分析天平
pH计
7 试剂
7.1 FBG-B(磷酸缓冲液,33mM,pH 5.0)
如配制2 L:
………………………………………………………………… (0.0960±0.0005) g Na 2HPO 4y 2H 2O
KH 2PO 4 …………………………………………………………………………… (8.9864±0.0005) g 去离子水 ……………………………………………………………………………… 加至 2 000 mL 贮存:室温下2周。
7.2 FBG-A(β-葡聚糖,5.9 g/L)
如配制50 mL:
β-葡聚糖(诺维信标准底物) ………………………………………………… (0.2950±0.0005) g FBG-B(溶液7.1) ………………………………………………………………………… 约40 mL 搅拌加热到90℃至溶解,然后冷却到室温。调节溶液的pH到5.00±0.05。
FBG-B(溶液7.1) ……………………………………………………………………… 加至 50 mL 贮存:室温下24小时。
7.3 Brij 溶液(225 mg/L)
如配制1 L:
Brij 35(30%) ………………………………………………………………………………… 750 μL 去离子水 ……………………………………………………………………………… 加至 1 000 mL 贮存:室温下24小时。
7.4 NaOH 溶液(500 mM)
取清洁的锥形瓶到天平上,回零。取4片氢氧化钠到锥形瓶中,计重量为W。然后加入去离子水。最终的重量为50W±0.01 g。
贮存:室温下8小时。
2 (13-30)FBG/L
Q/12KF 3568.112-2004
7.5 PAHBAH 溶液
如配制25 mL:
PAHBAH ……………………………………………………………………………… 0.5000±0.0005 g 酒石酸钾钠 ………………………………………………………………………… 1.2500±0.0005 g 醋酸铋 ……………………………………………………………………………… 0.1380±0.0005 g NaOH(溶液7.4)……………………………………………………………………………… 加至25 mL 贮存:铝膜避光。室温下24小时,或溶液从无色变为浅黄色。
8 样品和标准
样品的储备液在室温下可贮存8小时。在Konelab样品杯中的样品最终稀释液在室温下可贮存8小时。
8.1 标准 储备液
精确称取(1.3941±0.0005)g的Energex标准品93-11101(标识酶活215.2 FBG/g)到100 mL的容量瓶中。用Brij溶液(溶液7.3)定容。搅拌15 min溶解。然后再用Brij溶液(溶液7.3)稀释10倍备用。 酶标准溶液
按下表用Brij溶液(溶液7.3)稀释储备液到终体积25 mL,得到标准曲线: FBG/L
6
12
17.6
23.1
30 储备液,mL 0.5 1.0 1.467 1.925 2.5 稀释倍数 50 25 17 13 10
8.2 标准对照
在每次分析中使用一个Celluclast标准对照品。
标准对照品用Brij溶液(溶液7.3)稀释到最终浓度在标准曲线的范围之内。
精确称取(1.0000±0.0005)g的Celluclast标准品3-1196到100 mL的容量瓶中。用Brij溶液(溶液7.3)定容。搅拌15 min溶解。然后再用Brij溶液(溶液7.3)稀释300倍备用。
8.3 样品
样品至少稀释:
——固体样品:25倍;
——液体样品:10倍。
如:
称取(1.0±0.1000)g的样品到100 mL的容量瓶中,记重。用Brij溶液(溶液7.3)定容。搅拌15 min 溶解。CT型的颗粒样品一般要溶解在250 mL的容量瓶中,用Brij溶液(溶液7.3)搅拌溶解2小时。最后按估计活性再用Brij溶液(溶液7.3)稀释到活性约为20(范围12-30)FBG/L。
9 试验步骤
9.1 样品的设置
标准、标准对照和样品按如下顺序放置:
——位置1-5:标准(浓度从低到高);
——位置6:标准对照;
——位置7及以后:样品。
一次分析最多能分析37个样品(包括标准和标准对照)。
9.2 Konelab 的设定
3
Q/12KF 3568.112-2004
将溶液FBG-A、FBG-B和PAHBAH分别放置在Konelab的溶液容器中。
选择FBG程序。
FBG的Konelab试验定义见附录A。
9.3 Konelab 自动分析步骤 步骤
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10
11
12 描述 温控装置升温到50℃ 加110 μL的FBG-A到一个空的比色皿中 加110 μL的FBG-B到另一个空的比色皿中 两比色皿在50℃预热480 s 分别加入20 μL的样品 混合均匀 50℃反应1200 s 分别加入60 μL的PAHBAH 混合均匀 50℃再次反应1200 s 读取溶液的吸光度 计算:“结果”= FBG-A的吸光度 - FBG-B的吸光度
9.4 Konelab 信号
“主空白”在Konelab真实样品模式中被叫做“结果”。该值是所有信号(酶反应信号+β-葡聚糖本底+样品本底)减去样品本底得来的。β-葡聚糖本底被保留在所有的结果中。这个本底会在从标准曲线上读数据的时候消除掉。
在工作单上记下“结果”。
如果标准5的“结果”大于3.5,则重新试验。
如果样品的“结果”超出标准曲线范围,则重新稀释样品。
Konelab的操作见文件:EB-TE-0001.02。
10 计算
10.1 标准曲线
以标准点的浓度(FBG/L)为X轴、“结果”为Y轴绘制标准曲线。标准曲线为一次曲线。
步骤
1
2
3
4
5
6
7 描述 从Konelab上读取标准点的“结果” 标准曲线为 S = A + B x “结果”,其中: S = 标准点的活力,FBG/L A = 标准曲线的截距 B = 标准曲线的斜率,(FBG/L)/Abs “结果”= 样品Konelab试验的吸光度 标准曲线的相关系数r2应大于0.990。
10.2 样品
步骤
1
2 描述 从标准曲线的2-5之间读取未知样品的吸光度 按上式计算S。
10.3 样品
4
Q/12KF 3568.112-2004
依下式计算未稀释样品的活力: FBG/g = S ×V ×F W ×1000
式中:
S —— 标准曲线上读出的分析结果(FBG/L)
V —— 容量瓶的体积(mL)
F —— 多次稀释倍数
W —— 样品称重(g)
1 000 —— mL到L的换算因子
结果给出3位有效数字。
11 精确度和准确度
单次测定的变异系数(CV%)在方法确认实验中为2.5%。
方法的重复性为3.3%。
12 存档
所有文件按照本地SOP的要求存档。
13 意外情况 所有与此SOP不符的情况须与负责的化学工程师讨论并记录在案。
5
Q/12KF 3568.112-2004
附 录 A
(规范性附录)
Konelab 试验定义
表1 Konelab试验定义 Full name
Online Name
Test type EB-SM-0572 FBG Photometric Test in use YES LOW H IGH
0.00000 Result unit
Number of Decim.
Abs/min 5 Initial absorbance. Dilution limit Secondary dil 1+ Critical limit Reflex test limit 0.000 * * * A Abs/min 0.0 0.0 * * Abs/min * * Abs/min
Acceptance
Dilution 1+
Sample type Automatic 0.0 Sample type 5 Reference class Correction factor LOW H IGH 1.00 In Use
0.00 50.0 °C
Calibration type None
Bias correction in use
Manual QC in use
NO NO Routine QC in use NO
110
Disp. with
Wash reagent Extra FBG-B Add. Volume (ul) Repl. reagent 50 FBG-B
6 Time 480
Q/12KF 3568.112-2004
表1(续) 20 Disp. with Extra Add. Volume (ul) 50
Wash reagent Water Wash reagent None
Time 1200 60 Disp. with Extra Add. Volume (ul) 50
Wash reagent None
point Wavelength (nm) 405 Side wavel. (nm) None
Meas. type Fixed timing
━━━━━━━━━━━━
7
范文四:心超正常值
心超正常值标准
EDV:左室舒张末容积 75~160ml
ESV:左室收缩末容积 24~75ml
SV: 心搏量(每搏量) 60~130ml
FS:左室短轴缩短率 25~50%
EF :射血分数 50~75%
CO:每分输出量(SV ×心率) 4~6L/min
IVSD:舒张期室间隔厚度 1.5cm
AAO :升主动脉内径 <3.7cm
E/A:E 峰A 峰比值 1.0~2.0
PASP :肺动脉收缩压 <40mmHg
升主动脉:2.0~3.7cm
窦管交界(窦上):2.1~3.4cm
主动脉瓣环:1.4~2.6cm
主肺动脉:1.5~2.6cm 右:0.8~1.6cm 左:1.0~
1.5cm 肺动脉瓣环:1.0~2.2cm
下腔静脉:<2.0cm 冠状静脉窦:0.3~0.8cm 右室壁:0.3~0.5cm 肝静脉:0.5~1.1cm 二尖瓣口面积:4~6cm2 EPSS:0~0.7
范文五:血糖正常值
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关爱生命从关注血糖正常值开始~
1 血糖定义
首先,让我们了解一下什么是血糖。血液中的糖称为血糖,绝大多数情况下都是葡萄糖。体内各组织细胞活动所需的能量大部分来自葡萄糖,所以血糖必须保持一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要。正常人在清晨空腹血糖浓度为80,120毫克%。空腹血糖浓度超过130毫克%称为高血糖。如果血糖浓度超进160,180毫克%,就有一部分葡萄糖随尿排出,这就是糖尿。血糖浓度低于70毫克%称为低血糖。
血糖相关疾病具体诊断标准及危害:
1、高血糖? 诊断标准:空腹血糖>6.0mmol/L。餐后血糖>7.8mmom/L。就称为高血糖,(高血糖不是一个疾病诊断标准,而是一项检测结果的判定,高血糖不等同糖尿病)。
? 高血糖危害:如果你的血糖始终或常常高于应有的水平,或者你常出现异常的高血糖,那么你就更容易患各种糖尿病的并发症,而且你将使自己处于可能患危及生命重症(包括癫痫、昏迷,甚至于死亡)危险之中。
2、低血糖 ? 诊断标准:男:Glu<50mg/dl(<2.78mmol/L);
女:Glu<45mg/dl(<2.5mmol/L)(饥饿72小时后正常男性,女性最低值);
婴儿和儿童:Glu<40mg/dl(2.22mmol/L。
? 低血糖危害:如果你的血糖始终或常常低于应有的水平,或者你常出现异常的低血糖,这对神经系统的影响是很大 的,如不及时进行抢救治疗。昏迷超过6小时可造成不能恢复的脑组织损坏,甚至死亡,即使抢救过来,也会变成傻子。低血糖发生后,如果及早给于葡萄糖等治疗,可以迅速缓解;如果无人发觉或治疗不当,可引起死亡。
不论是高血糖还是低血糖都会对我们造成伤害,那怎样的血糖才是正常的呢,让我们先了解一下血糖正常值的标准及参考数据。
2 血糖正常值参考
1、空腹血糖正常值? 一般空腹全血血糖为3.9,6.1毫摩尔/升(70,110毫克/分升),血浆血糖为3.9,6.9毫摩尔/升(70,125毫克/分升)。
? 空腹全血血糖?6.7毫摩尔/升(120毫克/分升)、血浆血糖?7.8毫摩尔/升(140毫克/分升),2次重复测定可诊断为糖尿病。
? 当空腹全血血糖在5.6毫摩尔/升(100毫克/分升)以上,血浆血糖在6.4毫摩尔/升(115毫克/分升)以上,应做糖耐量试验。
? 当空腹全血血糖超过11.1毫摩尔/升(200毫克/分升)时,表示胰岛素分泌极少或缺乏。因此,空腹血糖显著增高时,不必进行其它检查,即可诊断为糖尿病。
2、餐后血糖正常值? 餐后1小时:血糖6.7-9.4毫摩/升。最多也不超过11.1mmol/L(200mg/dl)。
? 餐后2小时:血糖?7.8毫摩/升。
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? 餐后3小时:第三小时后恢复正常,各次尿糖均为阴性。
3、餐后血糖正常值? 孕妇空腹不超过5.1mmol/L。
? 孕妇餐后1小时:餐后1小时血糖值一般用于检测孕妇糖尿病检测中,权威数据表明孕妇餐后1小时不得超过10.0mmol/L才是血糖的正常水平。
? 孕妇餐后2小时:餐后正常血糖值一般规定不得超过11.1mmol/L,而孕妇餐后2小时正常血糖值规定不得超过8.5mmol/L。
通过对血糖正常值的检测,了解血糖标准值有助于您提高做好糖尿病防治。
3 糖尿病诊断标准
糖尿病诊断应尽可能依据静脉血浆血糖,而不是毛细血管血的血糖检测结果。血糖正常值和糖代谢异常的诊断切点主要依据血糖值与糖尿病并发症的关系来确定。目前常用的诊断标准和分类有WHO1999标准和美国糖尿病学会(ADA)2003年标准。我国目前采用WHO(1999年)糖尿病诊断标准。
糖代谢分类糖代谢分类WHO 1999(mmol/L)空腹血糖(FBG)餐后2小时血糖(2hPBG)正常血糖(NGR)<6.1<7.8空腹血糖受损(IFG)6.1-<7.0<7.8糖耐量减低(IGT)<7.0?7.8-<11.1糖尿病(DM)?7.0?11.1IFG 或IGT 统称为糖调节受损(IGR,即糖尿病前期)
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