秦寿i
范文一：浅谈真空采血管相关知识（含常用抗凝剂知识）
浅谈真空采血管相关知识 2010-11-11 154455 分类: 工作 标签: 字号大中小 订阅 .
真空采血管在国内外的历史发展以及现状:
本世纪40年代初，真空采血技术被发明，它省略了抽拉针管和推血入试管等不必要的步骤，利用真空管中预先制造的真空自动吸血入管，很大程度上减少了溶血的可能。40年代美国BD公司率先推出商品真空型采血系统，其它医疗器械公司也先后推出自己的真空采血产品，至80年代，一种称为安全管盖(HEMOGARDTM)的全新管盖问世。安全管盖由套在真空管外的特殊塑料罩和新设计的橡胶管塞组成。二者结合在一起，减少了医疗工作者与管中内容物接触的可能，也减少了管盖拔出后内容物外溅的机会。塑料罩形成一个双井形凹陷结构，防止手指与管塞顶端及尾端残留血液的接触。这种带有安全管盖的真空采血管极大地减少了医疗工作者从采血到血样处理的全过程中沾染血样的可能，当年安全管盖荣获全美最佳工业设计大奖。真空采血系统由于其干净安全、简单可靠的特点已在世界范围内被广泛采用，并被NCCLS推荐，成为采血的标准器械。
真空采血管90年代中期开始在我国部分医院使用。目前，大多数大中城市中型以上的医院已普遍接受了真空采血方式。作为临床血液采集和检测的新方式，真空采血器是对传统采血、储血方式的一场革命。
真空采血系统主要由三部分构成:(1)双向无菌针头:一端连接真空管，另一端进行皮肤穿刺。由于双向无菌针头专为采血特别设计而成，与注射用针头不同，针尖斜面成15度，表面特殊润滑，更锋利、进针方便。一次静脉穿刺后，可以抽取单个或多个血样。(2)持针器:持针器内径13 mm。配合规格统一的采血管使用，一端连接双向针头，另一端接真空管。持针器可以重复使用. (3)真空管:真空采血管标准直径13 mm，长75 mm或100 mm，由高质量玻璃或塑料制成。虽然大小恒定，但由于管内真空度不同，可以抽取不同体积。管内含各种添加剂(抗凝剂和促凝剂等)，无需自己配制、添加，减少了工序，方便、快捷;避免了自行配备添加剂的不准确，并且可以满足各种检验对血样的要求;新型PET材质的真空采血管避免了玻璃试管破损后血液外溢的不安全。。
真空采血管分类和制作原理
目前医院使用的真空采血管主要有以下几个类别:
1.无添加剂的干燥空管(白头管):采血管内壁均匀涂有防止挂壁的药剂(硅酮)，避免血细胞附壁,防止离心时细胞破碎,释放细胞内物质至细胞外,影响试验结果。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固，等血清自然析出后，离心使用。主要用于血清生化(肝功、肾功、心肌酶、淀粉酶等)、电解质(血清钾、钠、氯、钙、磷等)、甲状腺功能、药物检测、艾滋病检测、肿瘤标志物、血清免疫学。
2.促凝管(红头管):采血管内壁均匀涂有防止挂壁的硅酮，同时添加了促凝剂，如凝血酶、蛇毒、硅石粉、硅碳素、纤维蛋白酶等,可使血液在10,30 min 凝固。促凝剂能激活纤维蛋白酶，使可溶性纤维蛋白变成不可溶性的纤维蛋白聚体，进而形成稳定的纤维蛋白凝块，如果想快点出结果时，可采用促凝管。一般用于急诊生化。
3.含有分离胶及促凝剂的采血管(黄头管):管壁经过硅化处理，并涂有促凝剂可加速血液的凝固，缩短检验时间。管内加有惰性分离胶，惰性分离胶是一种聚合高分子材料,不溶于水,具有抗氧化,耐高温,抗低温,高稳定性之特性,比重约在1.04,1.05。血清的比重在1.026,1.031 之间,红细胞的比重在1.092,1. 095 之间。离心时,分离胶液化移到管中央,介于血清或血浆与血液有形成分之间,离心完毕后,固化形成屏障,使血清或血浆与细胞完全分离,保证了血清化学成分的稳定,冷藏下48 h 无明显改变。惰性分离胶管内可加有肝素,可达到快速分离血浆的目的,样本又可较长时间保存。分离胶与PET管具有很好的亲和性，确实起到隔离作用。高品质分离胶在离心后血清中不产生油滴，因此不会堵塞机器。主要用于血清生化(肝
功、肾功、心肌酶、淀粉酶等)、电解质(血清钾、钠、氯、钙、磷等)、甲状腺功能、药物检测、艾滋病检测、肿瘤标志物、血清免疫学。
4.管内含有抗凝剂的采血管:
1) 含有肝素钠或肝素锂的采血管(绿头管):肝素是一种含有硫酸基团的粘多糖，分子量15000 ,因有硫酸基团,带有强大的负电荷，具有加强抗凝血酶灭活丝氨酸蛋白酶的作用，从而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用。肝素是一种极佳的抗凝剂,对血液成分干扰少,不影响红细胞体积,不引起溶血,适用于做红细胞渗透脆性试验、血气、血浆渗透量、红细胞压积、血沉及普通生化测定。因肝素具有抗凝血酶的作用,不适于做血凝试验。过量的肝素会引起白细胞的聚集,不能用于白细胞计数,因其可使血片染色后背景呈淡蓝色,故不适于做白细胞分类。由于肝素不能使离体后的血小板离散,成为单个颗粒或细胞通过微孔,可造成血小板计数减低,白细胞计数及淋巴细胞计数偏高。商品肝素常含有磷酸盐,可使无机磷测定偏高。肝素抗凝血应于短时间内使用,否则搁置过久血液又可凝固。 2) 含有乙二胺四乙酸(EDTA)以及其盐的采血管(紫头管):乙二胺四乙酸是一种氨基多羧基酸，可以有效地鳌合血液中的钙离子，鳌合钙会将钙从反应点移走将阻止和终止内源性或外源性凝血过程，从而防止血液凝固，与其他抗凝剂比较而言，其对血球的凝集及血细胞的形态影响较小，并且可以抑制血小板的聚集,适用于一般血液学检验。EDTA 溶液pH 与盐类关系较大,低pH 可使细胞膨胀。EDTA2K2 可使红细胞体积轻度胀大,采血后短时间内平均血小板体积(MPV) 非常不稳定,半小时后趋于稳定。EDTA2K2 使钙、镁下降,同时使肌酸激酶(CK)、碱性磷酸酶(ALP) 减低,因这些酶测定需要这些金属离子;EDTA2K3 的最佳浓度是1. 5 mg ml ,如果血少,EDTA 浓度增高,中性粒细胞会肿胀分叶消失,血小板会肿胀、崩解,产生正常血小板大小的碎片,使分析结果产生错误。EDTA由于螯合钙的作用强,使二磷酸腺苷(ADP) 不能引起血小板聚集,另外EDTA 能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体聚合,不适用于血凝及血小板功能检查,亦不适用于钙、钾、钠及含氮物质测定。国际血液学标准化委员会(ICSH) 推荐使用的抗凝剂是EDTA2K2 ,EDTA2Na2 与EDTA2K2 比较结果无明显变化,但其溶解度低,抗凝速度慢,不适合末梢血的抗凝。EDTA 抗凝的末梢血也宜15 min 后测定,否则血小板有暂时聚集使血小板假性减少,白细胞假性升高,直方图异常。
3) 含有柠檬酸钠抗凝剂浓度为3.2,(0.109molL)的采血管(蓝头管):柠檬酸钠通过作用于血样中钙离子鳌合而起抗凝作用，大部分凝血试验都可用枸橼酸钠抗凝,它有助于?因子和?因子的稳定。另外,用枸橼酸钠抗凝的血浆做活化部分凝血活酶时间(APTT) 试验,其对肝素的敏感性远远高于草酸盐抗凝血浆,当APTT试验用于监控接受肝素治疗的患者时, 这一点显得非常重要。枸橼酸钠6 mg 才能抗凝1ml血,碱性强,不适于血液化验,亦不适于做生化检测,枸橼酸钠对MPV 及其他凝血因子影响极小,可用于血小板功能分析。血小板的聚集作用随血浆中枸橼酸钠的浓度降低而增高,因此在贫血患者应加入较正常人为多的抗凝剂。对于血液凝固试验来讲,如果血液比例过低,APTT 时间会延长,凝血酶原时间(PT) 结果亦会有显著改变。PT 测定,3.8%的抗凝剂比3.2%的国际标准化比值(INR) 值高, 其差别变化一般在0.7,2.7个INR 单位之间。由于枸橼酸钠毒性小,也用于血液保存。同时枸橼酸钠在水中溶解慢,故只能配成水剂而不能用粉剂。抗凝剂与血比例为1:9时，主要用于纤溶系统(凝血酶原时间、凝血酶时间、活化部分凝血酶时间、纤维蛋白原)。采血时应注意采足血量，以保证检验结果的准确性，采血后应立即颠倒混匀5-8次。
4) 含有柠檬酸钠抗凝剂浓度为3.8,的采血管(黑头管)其抗凝剂与血液的体积比为1:4，一般用于血沉检测，抗凝剂比例过于偏高时，血液被稀释，可使血沉加快。 5) 管内含有草酸钾氟化钠(1份氟化钠3份草酸钾)(灰头管):草酸钾是最常用的抗凝剂,优点是溶解度大,与血液混合后可迅速与血中的钙离子结合,形成不溶解的草酸钙,使血液不
凝固。常配成10%溶液,0.1ml(10 mg)可使5ml 血液不凝固。常用于血液生化测定,但不适于钾、钙的测定,草酸钾还抑制乳酸脱氢酶(LDH) 、ALP、淀粉酶(AMY) 的活性。由于生成不溶性的草酸钙沉淀,红细胞会出现锯齿状,白细胞出现空泡,淋巴及单核会变形,不易做血片检查。草酸可影响血液中某些成分的活性及与钙形成的不溶性沉淀物可影响自动凝血仪测定时光电终点的观察,所以草酸钾很少用于血液学分析及血凝测定。而氟化钠是一种弱效抗凝剂，浓度达6,10 mgml 血液才有抗凝作用,但它是血糖测定的优良保存剂, 使用时应注意缓慢颠倒混匀，2 mgml 血液即能抑制糖分解。一般常同草酸钾合并使用,其比例为氟化钠1 份,草酸钾3 份,此混合物4 mg 可使1 ml 血液在2,3d 内不凝固和抑制糖分解。一般用于血糖检测，不能用于尿素酶法测定尿素，也不能用于检测碱性磷酸酶和淀粉酶的检测。因氟化物可激活尿素酶、淀粉酶。氟化钠用量大时可造成溶血。
自动化仪器的大量使用及血液的保存对血样原始性状稳定性提出了更高的要求,使真空采血技术突破了仅仅只为安全的要求,而准确性、标本的原始性状、维持时间及管机配合、试管强度等性能指标都不能忽视,如何正确使用真空采血管以及真空采血管本身的优劣都将影响标本原始性状及检测的准确性
一、真空采血管的正确使用:
1、将瓶塞穿刺针(不要将乳胶护套拔下)从采血管中心垂直刺入真空管内，管中预设的真空将使所需要的血液流入管中，应按管壁上的刻度值控制采血量;
2、当第一管采完后，拔出瓶塞穿刺针再刺入另一真空管，如此重复操作，可实现一针多管采血;
3、保证血液与管内附加剂正确混合，采样后立即轻轻倒置真空管五至八次。当最后一管采样完毕，将针头抽离静脉，管中的负压可将管中残存的约0.4ml的血吸入管内。
4、多管采血顺序:先抽普通(血清管)，再抽速凝管，最后抽抗凝管。 二、真空采血管本身的优劣
(一)、相关材料的性能指标
1. 空采血管的材质现在采血管多为玻璃材料,普通玻璃的pH相差甚远,溶血的可能性大大增加,而拉管工艺制作的玻璃试管线性沟密布,深浅粗细无常导致细胞的挂壁,相比较中性玻璃(药用玻璃)的优势很明显。中性玻璃具有耐压,溶出物少,分子排列紧密,拉伸时沟槽少等优点,但仍有表面负电荷过强,pb2+、Zn2+、K+、Fe2+的相对溶出等缺点。这些都可能改变血液标本的原始性状,因此玻璃试管在使用前应进行无菌和内壁处理。传统的内壁处理就是硅化,即将硅油分散在乙醚与乙醇中,涂覆管壁晾干或烘烤即成。由于硅油是一种惰性极强的混合物,不可能与玻璃表面发生任何性质的化学作用,只是粘附在试管内壁,牢度较低。另外硅油对预先加入的抗凝剂的有机酸根具有包覆作用,使试剂的络合能力丧失,造成凝血。目前最好的处理方法为钴60照射,去离子水冲洗,确保无菌、光滑、无异物,有效防止溶血。对无添加剂的采血管内壁涂有硅酮,避免血细胞附壁,防止离心时细胞破碎。但从环保和安全性去考虑，塑料材料的真空采血管,质轻便于运输,破损率小,用后可直接高压灭菌或焚烧销毁，将会是真空采血管材质选择的一个很大的趋势。
2. 密封胶塞密封胶塞的质量直接影响到试管的真空性能及血液样本的原始状态,推荐使用丁基橡胶而不用天然橡胶。天然橡胶填料外渗严重,是一种可致溶血的材料,许多有机填料和助剂(包括石蜡油,硅油,柔软剂,着色剂等) 在真空状态下会沿玻璃管壁往下爬,这类物质尤其影响真空干燥的肝素类物质的水溶性而导致凝血。另外其气透性及水透性也不符合真空管的技术要求,真空丢失严重,管塞结合部可见塞屑粘壁严重。而丁基橡胶具有良好的塞封性能,溶出物大大减少,使得采血管即便是在101.3 kPa 的负压时仍能在24 个月内保持真空恒定。真空恒定使采血对象即使有血压及血液粘度的差别,以及采血环境温度的变化仍能保持采血量的相对准确,实际采血量误差可控制在?5%以内。误差的来源主要是血液粘度的变化
和操作偶然误差,另一方面则是试管口径的细微差别。
现代采血管多采用双层管帽设计,在内层涂有润滑剂的橡胶软塞外面套有纹面塑料管盖,使开启极为轻松,其侧滑式的开启方式可防止血液的飞溅。胶塞脊形的设计,使盖更加牢固,盖子顶部凹下部分可保证防止接触血液标本,减少对操作人员的血源污染。采用国际通用的头盖颜色标记采血管用途,鲜明夺目,极易分辨,避免采血时用错添加剂以及送检样本与检测项目不符。
3、试管的直径国标试管的直径是11. 6,12. 0 mm ,而现代医学检验中的自动生化分析仪以及血液分析仪,大多为美国、日本产品,其样品架内卡直径为13 mm ,国标管显然过小。直接上机后无法固定而程度不同的倾斜,偏离探针运作时的轴心,探针被击伤的可能性大大增加。而真空采血管多采用13 (16)mm ?75 mm、13 (16)mm ?100 mm 的规格,适用于日立、贝克曼2库尔特、东芝、奥林巴斯、岛津、雅培、拜尔、罗氏、Dade2Bering、法玛西亚等仪器直接上机使用。
4、双向采血针以及持针器即静脉穿刺针和管塞针,中间软管连接,形成采血系统,一次进针,多管采血。针头切割边缘,长度及角度采用电脑设计,专门应用于静脉穿刺,切割边缘极为平滑,新型硅胶外膜,使患者的不适及采样后遗留的疼痛感大大减轻。针管内表面极度光滑,管壁最薄,采血速度快,细胞破损少。
管塞针的止血护套在脱离胶塞时能永久封住针头,护套回弹毋需时间积累,效率极高。护套防止疲劳时限应超过24 个月,该时限内连续冲击30 次,回弹复位率应达100%。
持针器的设计多为静脉穿刺和管塞穿刺针双向直通式,采样时只需换双向针头,可反复使用。BD公司的pronto 持针器。采用卡环设计,采样后只需轻按绿色卡环,即可卸下双向采血针,快速简便,与其配套的设计还有废针丢弃盒,避免采血者被污染针头所伤。北京创格公司的上插式(直角式) 持针器,回血清晰,采血量易观察不易穿透静脉。奥地利greiner 的偏心嘴管的持针架Holdex 刺入静脉角度好,使用方便。
(二)、添加剂的正确使用
由于血液分析的多样性,添加剂包括多种成分,如抗凝剂、促凝剂、缓冲剂、保护剂、分离胶等。其品种、性能、浓度直接影响血样的性状和检测结果。真空采血技术则在品种、浓度方面做到规范一致,并能长期维持其有效性,使添加剂对检测结果的影响降到最小。 真空采血管制作和使用过程中容易出现的问题
虽然真空采血管由于其操作简便、干净安全、准确可靠，正为各医院普遍应用。但在临床使用过程中，时有各种问题发生，影响了标本的顺利采集。以下几点是真空采血管使用中应注意的几个问题:
1. 取血时患者应松弛,环境温暖,防止静脉挛缩。束膊时间不可过长,禁止拍打手臂,否则可造成局部血液浓缩或激活凝血系统。握拳2 min 后可使钾的血清浓度增加1.0,1. 5 mmol L。血液采集应一针见血, 以防止组织损伤,外源性凝血因子进入试管,影响试验结果。
2. 样本采集血量要充足,真空的存在易使血球破裂,若使用不足血样,采血后应开启瓶塞片刻。血液与抗凝剂的比例必须精确,抗凝剂在血标本中的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度进而影响实验结果。钙的绝对浓度越高,PT、APTT凝固时间越短。
3. 使用含促凝剂或分离胶的采血管时,一定要等血液凝固后再离心,否则血清中易出现凝块而造成仪器堵孔。血清管(红)一般要等0.5,1h ,含促凝剂的要等10,30 min ,肝素管(绿) 混匀后充分抗凝后即可离心分离血浆,分离胶管(黄)5,10 min 后离心。
4. 推荐的采血顺序为凝血管(血清管) ?枸橼酸钠管?肝素或EDTA 管?草酸钾2氟化钠管?血沉管。主要原因是第一管内往往含有组织液,易造成凝血,不适于做血凝测定。
5. 采血完毕后,先将最后一支试管抽离持针器,然后将针头由静脉拔出,如有漏血,除针头安装不严外,多见于止血保护套剥下或止血护套回弹过慢或不能回弹到位所致。
6、由于真空管的负压相对较大，采血初始，血液流入管底速度快，红细胞相互撞击可致破裂，临床偶见溶血。对此在采集血标本时，倾斜双向采血针采血管侧针头，使其靠近采血管侧壁，血液沿管壁缓缓流下，避免红细胞直接撞击造成破裂，形成溶血。 7、由于双向采血针采血管端乳胶护套松动或针头刺出乳胶护套，至使双向采血针密封不严。静脉穿刺时，血液沿双向采血针采血管端漏出。对此在采血前检查并安紧乳胶护套，遇有针头刺出则重新套好针头，以保持其密闭性。
8、由于穿刺针头贴于血管壁或采血管内无负压，而形成的血液流入不畅现象，可以在保证静脉穿刺成功的前提下，调节针头方向至血液流入采血管，若无效则更换采血管。 9、由于采血管内负压不足，而导致的采血量不足，可以将注射器针头自采血管胶塞处刺入，抽吸采血管内空气使之形成负压至采足血标本。原有血容量较少时也可直接更换采血管。 真空采血管的好坏对分析过程中起到如何重要的作用
预置真空度，严格控制采血量:
多数情况下，静脉血样的质量取决于血液和抗凝剂的比例，但是使用针头-注射器-试管采血，抗凝剂的配制、添加、采血的多少都很难严格控制，所以血液和抗凝剂的比例也很难准确。血液和抗凝剂的比例过高或过低都会影响血样的质量。血液比例过高时，由于抗凝剂相对不足，血浆中出现微凝血块的可能性增加。微凝血块可能阻塞检验仪器，影响一些检验指标。采血相对过多时，试管里剩余空间少，采血后混匀血液和抗凝剂变得更加困难;而充分混匀血样，使之达到均匀一致是得到准确血液学检验结果的前提。传统采血无法保证混匀血液和抗凝剂及其比例。血液比例过低，抗凝剂相对过剩，对很多检验会造成严重影响。对于血液凝固试验来说，当血液和0.129 molL或0.105 molL枸橼酸钠的比例由9?1降至7?1时，部分活化凝血酶时间测定试验的结果就会有显著的延长;降至4. 5?1时，凝血酶原时间试验的结果就会有显著改变。用含有K3-EDTA的管子采血后，白细胞的形态会发生改变，这种改变和时间及EDTA浓度有关。K3-EDTA的最佳浓度是1.5 mgml，如果血少，EDTA的浓度增高中性粒细胞会肿胀、分叶消失，血小板会肿胀、崩解、产生正常血小板大小的碎片，这些改变都会使血常规检验和血细胞计数得出错误结果。这一点在使用自动血细胞分析仪时尤为重要。
安全、有效，保证血液标本的运输、存储及预处理
1、标本的采集:真空采血技术为带盖封闭系统，采血后管中尚有充分空间，可颠倒混匀，确保血液和抗凝剂混合充分。由于静脉穿刺必然会对皮肤、组织和静脉造成一定程度的损伤，严格讲，为了减少组织促凝血酶原激活酶的影响，最初采集的2,4ml血应该弃之，然后再采实验用血。使用真空采血系统，一次静脉穿刺后，其所采集的第一管血可以用于血生化等其它检验，第二管用于血栓和止血实验。同时取血量可根据检测需要而定，如:常用抗凝剂为0.109 molL枸橼酸钠。它能有效地阻止因子?、? 的降解，并可稀释血浆和血液，但需严格按1?9比例抗凝。真空采血管预置抗凝剂和真空度，真空耗尽自动停止进血，确保1?9比例。而如果使用传统注射器采血很难做到上述严格要求。
2、标本的运输:最好在实验室内采血，或尽快送至检测地点，严防剧烈振动、日光直射和异物落入。如果使用真空采血系统，真空管的管塞可以防止因二氧化碳散失而导致的PH值改变。血样是具有生物危险性的物品，即使是从病房或门诊运送血样到检验科，也应该小心血样外溅。试管往往没有管盖，使用传统针头,注射器,试管采血的医疗机构更应该注意运送中的危险。真空采血系统的真空管均带有管塞，避免运送过程中标本的污染，保证医护人员的安全。
3、血样贮存:当必须贮存血样时，应遵循以下原则:(1)为了防止蒸发，血样应贮存在封闭的容器中。即使贮存在冰箱里，蒸发的危险依然存在。(2)血样贮存的温度越低，血样保存的时间越长。注意，对于有些检验指标，血样不能深冷冻，如:做血液形态学检验的EDTA
抗凝全血，做脂蛋白电泳的血清或血浆，测载脂蛋白AI及B，脂蛋白X及低密度脂蛋白-胆固醇的血清或血浆，纤维蛋白单体阳性血浆等。(3)惰性分离介质(如友利公司黄头管使用的惰性胶体)能够提高血清和血浆的产量，而且可以让血清保留在原管中。 (4)血样保存时应竖直放置以加快凝血。(5)避免晃动血样，产生溶血。(6)贮存中注意避光，尽量隔绝空气。(7)血样深冷冻再溶解后，应重新混匀几次，防止检测物质分布不均。(8)推荐贮存期限，生化检验，冰箱贮存1周;免疫学检验，冰箱贮存1周;血液学检验，室温1天;血液凝固检验，冰箱贮存1天; 毒理检验，冰箱贮存6周。
4、血样预处理:标本应尽快离心，有溶血的血浆会引起血小板活化和凝血时间缩短，应弃之不用。使用真空采在系统，可以最大限度地避免溶血。 血样离心后，理想
范文二：ACD抗凝剂
如果是提取全血中的DNA 的话，应用酸性的柠檬酸葡萄糖（ACD ）效果最好！若条件不便可 以应用EDTA 替代！
抗凝剂ACD 的配制方法：
（酸性）柠檬酸葡萄糖溶液B （ACD ）（用于新鲜抽提或者是冻存的血样品）
柠檬酸钠：1.32%（M/V）
柠檬酸：0.48%（M/V）
葡萄糖：1.47%（M/V）
一般20ML 新鲜血液中加入3.5ML ACD抗凝剂。比例依次类推！！
血液可以在0度条件下保存数天，或者是零下70度条件下无限期保存！
从全血中制备基因组DNA ，ACD 做为抗凝剂要优于EDTA ，因为他更加能保
存高分子质量的DNA ，然而，血样常常被收集于用定量EDTA 作为抗凝剂的
小管中。
2.1.2.2 血样的采集 用 16 号针头从牛颈静脉处采血，每头牛采集 30~40 mL，每 10ml 新鲜血
样加 0.2 ml
的 ACD 抗凝剂。-20℃冷冻，冰壶中带回实验室，-80℃条件下无限期保存
2.1.5.2 采集血样所用溶液 抗凝剂 ACD（A-柠檬酸，C-柠檬酸三钠，D-葡萄糖）的配制方法：柠檬酸 2.4
g ，柠檬酸三钠 6.6 g 克，葡萄糖 7.35 g，加 50 ml 水溶解。每 10 ml 新鲜血
样加 0.2 ml 的ACD 抗凝剂。血液可以在 0℃条件下保存数天，或者是 -70℃条
件下无限期保存。
注意事项：做全血DNA 提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！
范文三：抗凝剂
抗凝剂
应用物理或化学方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。能够阻止血液凝固的化学试剂或物质，称为抗凝剂或抗凝物质。 如天然抗凝剂（肝素，水蛭素等） Ca+2鳌合剂（柠檬酸钠，氟化钾）
基本信息
抗凝剂
医疗用途：治疗静脉炎，阻止血块在静脉里形成。
体育用途：避免促红细胞生成素使血液变稠。
应用物理或化学方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。能够阻止血液凝固的化学试剂或物质，称为抗凝剂或抗凝物质。
如天然抗凝剂（肝素，水蛭素等）
Ca+2鳌合剂（柠檬酸钠，氟化钾）
原理：使凝血酶原不能激活，Ca+2是凝血因子IV ，其他的是蛋白类》.
种类
乙二胺四乙酸
乙二胺四乙酸（EDTA ）盐 EDTA有二钠、二钾和三钾盐。均可与钙离子结全成螯合物，从而阻止血液凝固。
EDTA 盐对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学标准公委员会（International committee standard of
hematology ,ICSH）1993年文件建议，血细胞计数用EDTA 二钾作抗凝剂，用量为EDTA-K2。2H2O1.5-2.2MG （4.45±0.85μmol ）/ml血液。EDTA-NA 与EDTA-K2对血细胞计数影响均较小，但二钠溶解度明显低于二钾，有时影响抗凝效果，其他抗凝剂不适合于血细胞计数。表1-1是几种抗凝剂对白细胞计数的影响，EDTA 影响小板聚集，不适合于作凝血象检查和血小板功能试验。 草酸钠
草酸钠（sodium oxalate）草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。
肝素
肝素（heparin ）肝素广泛在于肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和暑碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的粘多糖，是分散物质，平均分子量为15000（2000-40000）。肝素可加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而具有阻止凝血酶形成，对抗凝血酶和阻止血小板聚集等多种作用。每毫升血液抗凝需要持素15±2.5IU 。尽管肝素可以保持红细胞的自然形态，但由于其常可引起白细胞聚集关使用涂片在罗氏（）染色时产生蓝色背景，因此肝素抗凝血不适全血液学一般检查。肝素是红细胞透渗脆性试验理想的抗凝剂。
枸椽酸钠
枸椽酸钠（trisodium citrate ）枸椽酸盐可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。
枸椽酸钠有2Na3C6H5O7。和2Na3C6H5。11H2O 等多种晶体。通常用前者配成109mmol/l(32g/l)水溶液（也有用106mmol/l浓度），与血液按1：9或1：4比例使用。枸椽钠对凝血V 因子有较好的保护作用，使其活性减低缓，故常用于凝血象的检查，也用于红细胞沉降率的测定。因毒性小，是输积压保养中的成分之一。[1]
临床应用
EDTA
EDTA 是临检工作中最常用和最重要的抗凝剂和试剂之一，其机制是通过与水相中的钙离子形成稳定的螯合物而阻止血液凝固。EDTA 的盐类有钾、钠、锂盐、均溶于水，钾盐较钠盐的溶解度大，全血胞计数最好使用EDTA 的钾盐。EDTA 能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子，故不适于制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。EDTA 还会影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，也不适于做止血学检验和血小板功能检验。用EDTA 抗凝血制备的涂片对粒细胞形态有影响，其影响程度与抗凝血放臵时间和抗凝剂浓度有关。按照ICSH 建议EDTA 的使用浓度为1.4～1.6g/L血液，迅速制备涂片，粒细胞形态特征有微小的改变，有时细胞核
分叶不见，细胞肿胀。如果用放臵时间较长的血液制备的涂片可出现细胞浆内颗粒消失，胞浆和细胞核有空泡，染色质模糊不清。用大于1.5g/L血液浓度制备的血涂片，粒细胞可完全变性，对淋巴细胞和单核细胞也有影响，尤其是血小板，可出现肿胀、破裂而产生碎片，影响其计数，造成结果偏高。获得血浆标本可通过不同的抗凝剂，肝素锂作为抗凝剂在国外应用广泛，而国内多使用肝素钠、EDTA-K2抗凝，与国外有所不同。随着临床医学的发展，近年来糖化血红蛋白检测项目的开展，也使用了EDTA-K2作为抗凝剂，从而减少了对结果的影响。
肝素
肝素是血液化学成分测定中最好的抗凝剂。肝素是一种含硫酸基团的黏多糖，分子量为1.5万，其抗凝机制是与抗凝酶Ⅱ一起，在低浓度能抑制因子Ⅸa 、Ⅷ和PF3之间的作用，并能加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成；还有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X 的作用。肝素的盐类有钠、锂、铵盐。通常用肝素抗凝的剂量是10.0～12.5IU/mL血液。临床常用肝素锂，虽其价格较贵，但抗凝效果较好。因为肝素钠能增加血浆钠的含量，而肝素铵能增加尿素氨的含量。某些生化成分在血清和肝素抗凝的血浆中有明显的区别。在凝血过程中由于红细胞的溶解破坏使血清钾的含量比血浆为高，由于血浆中含有Fg ，其含量比血清高。因此，测定钾离子时，注意血清与血浆之间的差异。另外肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，故不适于白
细胞分类和血小板计数，更不能用于止血学检验。通过试验表明，采血时加入肝素钠抗凝剂后，对测定血液中总蛋白质含量结果有较明显的影响，会使其测得结果高于用血清测得总蛋白质3%～5%。但加入了抗凝剂后，其总蛋白含量低于血清总蛋白质含量，其原因是血液加入肝素钠抗凝剂后，阻断了凝血活酶的生成，阻止了血液凝固，导致纤维蛋白原不能水解转化成纤维蛋白单体，有效阻止了纤维蛋白单体的形成，这些纤维蛋白原仍留在血浆中。而血清是血液经凝固后，纤维蛋白原水解转化为纤维蛋白单体，并因凝固而消耗，离心后随血细胞一并分离出去了。因此，血浆中的总蛋白质量是包含了纤维蛋白原在内的所有蛋白质，而血清中是不含有纤维蛋白原的总蛋白质含量，理论上应该低于血浆中的总蛋白含量。因此在进行血液总蛋白质含量测定时，最好以血清为标本，对一些急诊标本，或是一些因其他原因急需测定的患者，需要用血浆做标本测定总蛋白时，在测出总蛋白后，应扣除纤维蛋白原的含量（一般扣除3%～5%），这样才能与以血清为标本测得的总蛋白含量一致，真实反映患者体内实际总蛋白质之含量。
枸橼酸盐
枸橼酸盐主要用于止血学检验及血沉的测定。因其毒性小，也用于输血保养液中。其抗凝机制是枸椽酸盐与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固，其反应式为Na3C6H5O7+Ca2+→CaC6H5+3Na+。其盐类主要是钠盐。枸缘酸钠有Na3Ｃ
6H5O7ZH?5O 和2Na3C6H5O7+1H2O2种晶体，通常用前者配制0.129 mol/L(3.8%)或0.109mol/L（3.2%）的血溶液，与血液按1:9使用。对于用于监测口服华法令等抗凝剂治疗的患者，测定PT 、APTT 所用的枸缘酸钠浓度（3.2%或3.8%）不应随意改变，因为可能影响到国际标准化比值（INR ）。一般用浓度0.129mol/L的枸缘酸钠比用0.109mol/L浓度时INP 值要高些，另外对不同来源的凝血活酶试剂，对同一正常人或患者血浆的凝固时间可以相差很大。因此每个实验室所使用的凝血活酶试剂的来源应尽可能恒定，配制操作方法应规范化，否则会使凝固时间延长或缩短，或使正常值无规律性。有条件的实验室可采用缓冲抗凝剂，这种试剂对标本经冷冻保存后再进行分析更为适宜。缓冲剂的作用是维持血浆恒定pH 值，防止易变因子失活。[2]
配制
EDTA
常用EDTA 的钠盐或钾盐作为抗凝剂，能与血液中的钙离子结合成螯合物，而是钙离子失去凝血作用，从而阻止血液凝固。 肝素
1%肝素溶液0.1ml 于试管内，旋转试管，使溶液均匀浸湿试管内壁，放入80～100℃烘箱烤干，每管能使5～10ml 血液不凝。急性血压实验时可在充满生理盐水的动脉套管内注入肝素20～25mg 。体内抗凝：500～1000u/kg。 市售的肝素注射液每1ml 含
肝素12500u （相当于肝素钠125mg ，即1mg 相当于100u ）。应臵冰箱内保存。
枸橼酸钠
枸橼酸钠 3.8%的枸橼酸钠溶液1份可使9份血液不凝，用于红细胞沉降速率的测定。因其抗凝血作用较弱而碱性较强，不适用于供化验用的血液样品。做急性血压实验时则用5～7%的枸橼酸钠溶液。
草酸钾
草酸钾 常用于供检验用血液样品的抗凝。在试管内加饱和草酸钾溶液2滴（或10%溶液0.2ml ），轻轻敲击试管，使溶液分散到管壁四周，臵80℃以下的烘箱中烤干（烘烤温度过高，可使草酸钾分解为碳酸钾而失效），每管能使3～5ml 血液不凝。供钾、钙含量测定的血样不能用草酸钾抗凝。
关于保存：新鲜冰冻血浆在-20℃以下可保存1年 [3]
原理
类技术的使用目的在于分离和纯化样品，以及对纯化样品的有关性能进行研究。
一、基本原理 1．离心力Centrifugal force (F) F=mω2r ω：旋转角速度(弧度／秒) r:旋转体离旋转轴的距离(cm) m ：颗粒质量 2．相对离心力 Relative centrifugal force (RCF) RCF 就是实际离心力转化为重力加速度的倍数 RCF=F离心力／F 重力 = m ω2r/mg= ω2r/g g 为重力加速度(980．70g/sec2) 同为转于旋转一周等于2π弧度，因此转子的角速度以每分钟旋转的次数(每分钟转数n 或r/min)表示： 一般情况下，低速离心时常以r ／min 来表示，高速离心时则以g(或数字Xg) 表示。 用“X g”表示每分钟转速可以真实反映颗粒在离心管不同位臵的离心力。
Dole&Cotzias制作了转子速度和半径相对应的离心力列线图(图2—15) 。 3．沉降系数 Sedimentation coefficient (S) 当转子内样品绕着旋转轴离心时，样品沉降率是由样品颗粒的大小、形状、密度和溶剂的粘度、密度以及离心加速度决定的，在一般情况下，样品的沉降特征可以用沉降系数来表示： S：是指单位离心场中粒子移动的速度。 S的物理意义是颗粒在离心力作用下从静止状态到达等速运动所经过的时间。 S在实际应用时常在10-13秒左右，故把沉降系数10-13秒称为一个Svedberg 单位，简写S ，单位为秒，1S 二1×10-13秒。对一定的样品，在一定的介质中，样品沉降系数S 也常保持不变。文献中常用沉降系数以描述某些生物大分子或亚细胞器大小。
二、离心设备 离心技术所使用的设备是由离心转子、离心管及附件等组成。 (一) 离心机 1. 低速离心机 一般最高转速在6000r/min以下。实验室中常用于分离制备。 2．高速离心机 带有能够冷却的离心腔制冷设备，这类离心机的速度控制比上述的低速离心机来得准确，工作时的实际速度和温度可通过仪表显示；配有一定类型及规格的转子，可根据需要选用。此类离心机的最高转速在25000r ／min 以下，常用于生物大分子的分离制备。
3．超速离心机 由四个部分组成，即驱动和速度控制；温度控制；真空系统以及转于。至今超迷离心机最高转速为85000-／min(可达600，000g 左右) 。常用于分离亚细胞器、病毒粒于、DNA 、RNA 和蛋白质分于，在分离时无须加入可能引起被分离物质结构改变的物质，故为观察它们的“天然”结构与功能提供了手段。 (二) 转子 主要有三种： 固定角式转子(fixed—angle rotor)；水平转子(swing—out rotor)；垂直转子(vertical rotor)，还有带状转子(zonal rotor) 和连续转于(continuous rotor) 等。 1．固定角式转子 离心管在离心机中放臵的位臵与旋转轴心形成一个固定的角度，角度变化在14—40°之间，常见的角度有20°、28°、34°及40°等。 因角式转子的重心低，转速可较高，样品粒子穿过溶剂层的距离略大于离心管的直径；又因为有一定的角度，故在离心过程中撞到离心管外壁的粒子沿着管壁滑到管底形成沉淀，这就是“管壁效应”，此效应使最后在管底聚成的沉淀较紧密。 2．水平转于 此类转于静止时，处在转子中的离心管
中心线与旋转轴平行，而在转子旋转加速时，离心管中心线由平行位臵逐渐过渡到垂直位臵，即与旋转轴成90‘角，粒子的沉淀方向同旋转半径方向基本一致，但也有少量的“管壁效应”。 由于此类转予的重心位臵较高，样品粒子沉降穿过溶剂层的距离大于直径。它对于多种成分样品分离特别有效，常用于速率区带离心和等密度离心。 3．垂直转子 离心管垂直插入转于孔内，在离心过程中始终与旋转轴子行，而离心时液层发生90°角的变化，从开始的水平方向改成垂直方向，转子降速时，垂直分布的液层又逐渐趋向水平，待旋转停止后，液面又完全恢复成水平方向。这是因为在进行密度梯度离心前，由于重力的作用，垂直转予的粒子沉淀距离等于离心管的直径，离心分离所徭的离心力最小，适用于速率区带离心和等密度离心，但一般不用于差速离心。
三、离心分离方法 根据离心原理，按照实际工作的需要，目前已有可设计出各种离心方法综合起来大致可分三类 1. 平衡离心法 根据粒子大小、形状不同进行分离，包括差速离心法
(differential velocity centrifugation)和速率区带离心法(rate zonal centrifugation)。 2．等密度离心法(isopynic centrifugation) 又称等比重离心法，根据粒子密度差进行分离，等密度离心法和上述速率区带离心法合称为密度梯度离心法。
3．经典式沉降平衡离心法 用于对生物大分子分子量的测定、纯度估计、构象变化。 (一) 差速离心法 它利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别，在同一离心条件下，沉降速度不同，通过不
断增加相对离心力，使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分步沉淀。操作过程中一般是在离心后倾倒的办法把上清液与沉淀分开，然后将上清液加高转速离心，分离出第二部分沉淀，如此往复加高转速，逐级分离出所需要的物质。 差速离心的分辨率不高，沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开，常用于其他分离手段之前的粗制品提取。 2．注意点： ①可用角式、水平式转头 ②可用刹车 ③难以获得高纯度 例：用差速离心法分离已破碎的细胞各组份 (二) 速率区带离心法 1．原理 速率区带离心法是离心前在离心管内先装入密度梯度介质(如蔗糖、甘油、KBr 、CsCl 等) ，待分离的样品铺在梯度液的顶部、离心管底部或梯度层中间，同梯度液一起离心。离心后在近旋转轴处的介质密度最小，离旋转轴最远处介质的密度最大，但最大介质密度必须小于样品中粒于的最小密度。这种方法是根据分离的粒子其在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内分成一系列区带，达到彼此分离的目的。 梯度液在离心过程中以及离心完毕后，取样时起着支持介质和稳定剂的作用，避免因机械振动而引起已分层的粒子再混合。 该离心法的离心时间要严格控制，即有足够的时间使各种粒子在介质梯度中形成区带，又要控制在任意一个粒子达到沉淀前。如果离心时间过长，所有的样品可全部到达离心管底部；离心时间不足，样品还没有分离。由于此法是一种不完全的沉降，沉降受物质本身大小的影响较大，一般是应用在物质大小相异而密度相同的情况。
2．注意点： ①严格控制离心时间 ②粒子密度大于介质密度 ③样品事先配制在较平缓的连续密度的梯度溶液 ④不能用角式转头、只能用水平式转头 ⑤不能用刹车 (三) 等密度离心法 1．原理 等密度离心法是在离心前预先配制介质的密度梯度，此种密度梯度液包含了被分离样品中所有粒子的密度，待分离的样品铺在梯度液或和梯度液先混合，离心开始后，当梯度液由于离心力的作用逐渐形成底浓而管顶稀的密度梯度，与此同时原来分布均匀粒子也发生重新分布。当管底介质的密度大于粒子的密度，粒子上浮；在弯顶处粒子密度大于介质密度时，则粒子沉降，最后粒子进入到一个它本身的密度位臵即粒子密度等于介质密变，此时dr ／dt 为零粒子不再移动，粒子形成纯组分的区带，与样品粒子的密度有关，而与粒子的大小和其他参数无关，因此只要转速、温度不变，则延长离心时间也不能改变这些粒子的成带位臵。
2．注意点： ①离心时间要长 ②可用角式转头或水平式转头 ③粒子密度相近或相等时不宜用 ④密度梯度溶液中要包含所有粒子密度 ⑤不能用刹车 四、梯度溶液的制备 (一) 梯度材料的选择原则： 1．与被分离的生物材料不发生反应，且易与所分离的生物材料分开。 2．可达到要求的密度范围，且在所要求的密度范围内，粘度低，渗透压低，离子强度和pH 变化较小。 3．不会对离心设备发生腐蚀作用。 4．容易纯化，价格便宜或容易回收。
5．浓度便于测定，如具有折光率。 6．对于分析超迷离心工作来说，它的物理性质，热力学性质应该是己知的。 (二) 梯度材料的
应用范围 下面简单介绍几种常用的密度梯度材料的性质及其应用范围。 1．蔗糖：水溶性大，性质稳定，渗透压较高，其最高密度可达1．33g/ml，且由于价格低，容易制备，是现在实验室里常用于细胞器、病毒、RNA 分离的梯度材料，但由于有较大的渗透压，不宜用于细胞的分离。 2．聚蔗糖：商品名Ficoll ，常采用Ficoll —400也就是相对分子重量为400000，Ficoll 渗透压低，但它的粘度却特别高，为此常与泛影葡胺混合使用以降低粘度。主要用于分离各种细胞包括血细胞、成纤维细胞、肿瘤细胞、鼠肝细胞等。 3．氯化铯：是一种离于性介质、水溶性大，最高密度可达1．91g ／nd 。由于它是重金属盐类，在离心时形成的梯度有较好的分辨率，被广泛地用于DNA 、质粒、病毒和脂蛋白的分离，但价格较贵。 4．卤化盐类：KBr 和NaCI 可用于脂蛋白分离，KI 和NaI 可用于RNA 分离，其分辨率高于铯盐。NaCl 梯度也可用于分离脂蛋白，NaI 梯度可分离天然或变性的DNA 。
5．Percoll: 是商品名，它是一种SiO2胶体外面包了一层聚乙烯吡咯酮(PVP)，渗透压低，它对生物材料的影响小，而且颗粒稳定，在冷却和冻融情况下还是稳定的。其粘度高，在酸性pH 和高离子强度下不稳定。它可用于细胞、细胞器和病毒的分离。 五、分析性超速离心 与制备性超速离心不同的是：分析性超速离心主要是为了研究生物大分子的沉降特性和结构，而不是专门收集某一特定组分。因此它使用了特殊的转子和检测手段，以便连续地监视物质在一个离心场中的沉降过程。 分析性超速离心的工作原理：
分析性超速离心机主要由一个椭圆形的转子，一套真空系统和一套光学系统所组成。该转子通过一个柔性的轴联接一个高速的驱动装臵，这轴可使转于在旋转时形成自己的轴。转子在一个冷冻的真空腔中旋转，其容纳二个小室：分析室和配衡室有上下二个平面的石英窗，离心机中装有的光学系统可保证在整个离心期间都能观察小室中正在沉降的物质，可以通过对紫外光的吸收(如对蛋白质和DNA) 或折射率的不同对沉降物进行监视，后一方法的原理是：当光线通过一个具有不同密度区的透明液时，在这些区带的界面上产生光的折射。在分析室中物质沉降时重粒子和轻粒子之间形成的界面就象一个折射的透镜，结果在检测系统的照相底板上产生一“峰”。由于沉降不断进行，界面向前推进，故“峰”也在移动，从峰移动的速度可以得到物质沉降速度的指标. 参考资料
范文四：常用抗凝剂
常用抗凝剂种类及应用
一、基本概念
凝固：将血液从血管中抽出，如果未经抗凝，也不做其他处理，通常在几分钟内便自动凝固。一定时间分离后上层析出的淡黄色液体为血清。血浆与血清的区别是：血清中无FIB
抗凝：应用物理的或化学的方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。离心分离后的上层淡黄色液体为血浆。
抗凝剂：能够阻止血液凝固的化学试剂或物质，称为抗凝剂或抗凝物质。
促凝：帮助血液快速凝固的过程。
促凝剂：帮助血液快速凝固以达血清快速析出的物质。一般成分为胶类物质。
二、常用抗凝剂的抗凝原理及适用
1、肝素是用于血液化学成分检测的首选抗凝剂。肝素是一种含有硫酸基团的粘多糖，是分散相物质平均分子质量为15000。其抗凝原理主要是通过与抗凝血酶Ⅲ结合引起抗凝血酶Ⅲ构型发生变化，加速凝血酶-凝血酶复合体形成而产生抗凝作用。此外，肝素还能借助血浆辅助因子（肝素辅助因子Ⅱ）来抑制凝血酶。常用肝素抗凝剂是肝素的钠、钾、锂、铵盐，其中以肝素锂最好，但其价格较贵，钠、钾盐会增加血液中的钠、钾含量，铵盐会增加尿素氮的含量。通常用肝素抗凝的剂量为10.0～12.5 IU/ml血液。肝素对血液成分干扰较少，不影响红细胞体积，不引起溶血，适用于做细胞渗透性试验、血气、血浆渗透量、红细胞压红积及普通生化测定。但肝素具有抗凝血酶作用，不适合做血凝试验。另外，肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，所以不适合做白细胞分类和血小板计数，更不能用于止血检验。此外，肝素抗凝血不能用于制作血涂片，因为Wright染
色后出现深蓝色背景，影响显微镜减产。肝素抗凝血应于短时间内使用，否则放置过久血液又可凝固。
2、乙二胺四乙酸盐(EDTA盐)。EDTA能与血液中Ca2+结合成螯合物，凝血过程被阻断，血液不能发生凝固。EDTA盐有钾、钠、锂盐，国际血液学标准化委员会推荐使用的是EDTA-K2，其溶解度最高，抗凝速度最快。EDTA盐通常配成质量分数是15%的水溶液，每ml血液加
1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml 15%EDTA溶液。EDTA盐可在100℃下干燥，抗凝作用不变。EDTA盐不影响白细胞计数及大小，对红细胞形态影响最小，抑制血小板的聚集，适用一般血液学检测。如果抗凝剂浓度过高，渗透压上升，会造成细胞皱缩。EDTA溶液pH与盐类关系较大，低pH可使细胞膨胀。EDTA-K2可使红细胞体积轻度膨胀，采血后短时间内平均血小板体积非常不稳定半小时后趋于稳定。EDTA-K2使 Ca2+、Mg2+下降，同时使肌酸激酶、碱性磷酸酶降低，EDTA-K2的最佳浓度为
1.5mg/ml血液，如果血少，中性粒细胞会肿胀分叶消失，血小板会肿胀、崩解，产生正常血小板的碎片，使分析结果产生错误。EDTA盐能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合，不适于血凝和血小板功能检测，也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。此外，EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子，故不适合制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。
3、枸橼酸盐主要是枸橼酸钠，其抗凝原理是能与血液中的Ca2+结合形成螯合物，使Ca2+失去凝血功能，凝血过程被阻断，从而阻止血液凝固。枸橼酸钠有Na3C6H5O7·2H2O和2Na3C6H5O7·11H2O两种晶体，通常用前者配成3.8%或3.2%的水溶液，与血液按照1:9体积混合。大部分凝血试验都可用枸橼酸钠抗凝，它有助于Ⅴ因子和Ⅷ因子的稳定，并且对平均血小板体积及其他凝血因子影响较小，可用于血小板功能分析。枸橼酸钠细胞毒性较小，也是输血中血液保养液的成分之一。但是，枸橼酸钠6mg才能抗凝1ml血液，碱性强，不适用于血液分析和生化测验。
三、各种一次性真空采血管用途
优点
1、安全：易于彻底销毁，减少医源性传染病。
2、方便：一次静脉穿刺可采集多管标本，减少不必要的重复操作，省时省力，减轻病人痛苦，容易混匀。
3、形势需要：与发达国家接轧，发达国家已有长达60年的使用经验，国内二级以上医院已经采用。
4、标识清楚，满足不同标本采集的需求。
黄头管（或橘红管）：用于生化、免疫等一般检验。标有3、4、5ml刻度。一般采血3ml±。橘红管含有促凝剂，抽血时混匀几次。(在冬天或急诊时使用，促进血液尽快凝固，便于血清分离)
蓝头管： 凝血项目检查、PLT功能分析、纤溶活性测定。精确采血至2ml刻度（静脉血1.8ml+0.2ml抗凝剂）。1：9。颠倒混匀5次以上。
黑头管：0.32ml3.8%枸椽酸钠抗凝管。用于ESR检验。精确采血至第1条标志线，0.4ml抗凝剂 +静脉血1.6ml）。缓缓颠倒混匀8次。
紫头管：血细胞分析、血型鉴定、交叉配血、G-6-PD测定部分血流变试验免疫学试验。静脉血0.5-1.0ml。抗凝剂：EDTA盐。颠倒混匀5次以上或弹拨混匀。
绿头管：主要急诊生化、普通生化、血流变试验、血气分析、免疫学试验、RBC渗透试验。采血量3.0-5.0ML。抗凝剂：肝素钠/肝素锂。颠倒混匀5次以上 。
四、几点注意事项：
1、特殊病人静脉采血应避免输液端。
2、蓝头管、黑头管采血量必须精确。
3、蓝头管采血尽量放在第2位(红头管之后)。
4、抗凝管至少颠倒缓缓混匀5次以上，紫头管采因采血较少可轻轻弹拨混匀。
范文五：抗凝剂的使用
几种常用抗凝剂的合理使用
应用物理或化学方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。能够阻止血液凝固的化学试剂或物质，称为抗凝剂或抗凝物质。抗凝剂的种类很多，性质各异。因此，必须根据检验目的恰当选择，才能获得预期效果。现将我院临床检验常用抗凝剂的种类及使用方法简介如下。
一、枸橼酸钠：枸橼酸钠可与血液中钙离子形成可溶性螯合物从而阻止血液凝固。常用于临床检验中凝血象的检查，其使用浓度为109mmol/l，例如我实验室APTT 、PT 的检查，抗凝剂与血液比例为1：9。也用于血沉的测定，抗凝剂与血液比例为1：4。
二、乙二胺四乙酸盐（EDTA ）：EDTA 的二钠、二钾和三钾盐，均可与血中钙离子形成螯合物，从而阻止血液凝固。通常配成15g/l水溶液，用于实验室使用。EDTA 盐对血小板形态和血细胞形态影响很小，因此适用于血液常规检查，特别是血小板计数，但影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，故不适于做凝血象检查和血小板功能试验。此外，此抗凝剂特别适用于红细胞比积测定，室温放置48小时红细胞体积不变。因此，我实验室EDTA —K2抗凝的全血用于血常规检查。
三、肝素：肝素与抗凝血酶Ⅱ一起，低浓度时抑制凝血因子IXa5、PF3之间的作用，加强抗凝血酶Ⅲ（AT —Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用。因此，肝素具有抗凝能力强，不影响血细胞体积，不易溶血等优点，是一种较好的抗凝剂。可用于红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积测定和多种生化分析，也是抗血栓药物之一。但过量肝素可引起白细胞聚集和血小板减少，故不适用于白细胞分类和血小板计数，更不能用于凝血象检查。由于肝素抗凝时间短，久置易失效，价格昂贵，所以凡能使用普通抗凝剂者，一般不用肝素。如用肝素抗凝的血液，就应在短时间内完成检测。我实验室血流变检测和血气分析用肝素作为抗凝剂。
四、草酸钠：草酸钠可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。草酸钠通常用0.1mmol/l浓度，与血液按1：9比例使用，主要用于凝血象检查。现在我实验室已淘汰。
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