茚三酮检测蛋白质

范文一：茚三酮检测蛋白质

使用茚三酮检测蛋白质

与指纹形成物质中的氨基酸反应生成蓝紫色物质鲁赫曼紫（RP），使潜在指纹与背景形成反差。在室温和适当湿度下，潜在指纹可在24小时后显出。加热处理可使指纹即刻显出。

参考配方：储存液：25g茚三酮溶于100ml无水乙醇和60ml冰醋酸，搅拌均匀。工作液：30ml储存液加入1000ml三氯三氟乙烷，均匀混合即可。

检测方法：将检材浸泡在茚三酮溶液中30秒，或者将溶液滴于纸张上，取出晾干，过一小时或稍微加热自然显出。如果茚三酮溶液显现的指纹反差小，可用580nm的窄波段光观察，580nm是鲁赫曼紫的最大吸收峰

附：茚二酮

茚二酮是茚三酮的一种衍生物，呈淡黄色粉末状，和人体汗液中的氨基酸反应生成分红色物质。适合于显现渗透性客体上的汗液手印。配方：100mg茚二酮 + 1ml冰醋酸 + 9ml乙酸乙脂 + 90ml石油醚。将检材放入溶液中浸泡、晾干，置于温度85℃、相对湿度65%的环境中反应5分钟。用510nm或530nm光照射检材，佩带橙色眼镜观察，可以看到手印发出黄橙色荧光。

范文二：茚三酮

茚三酮反应：+0.2%茚三酮试液 →蓝或蓝紫色（氨基酸、多肽、蛋白质

茚三酮试验，取检品的水溶液1ml ，加入茚三酮试液2－3滴，加热煮沸4－5分钟，待其冷却，呈现红色棕色或蓝紫色（蛋白质、胨类、肽类及氨基酸）。氨基酸与茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被还原成仲醇，与所后成的氨及另一分子茚三酮缩合生成有蓝紫色的化合物。

【注】①茚三酮试剂主要是多肽和氨基酸的显色剂，反应在1小时内稳定。试剂溶液pH 值以5－7为宜，必要时可加吡啶数滴或醋酸钠调整。 ②此反应非常灵敏，但有个别氨基酸不能呈紫色，而呈黄色，如脯氨酸。

我整理的关于茚三酮测定氨基酸显色反应的一些总结：

1. 原理：除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应生成黄色物质外，所有的α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。该反应分两步进行，首先是氨基酸被氧化，产生 CO2 、NH3和醛，而水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所生成之还原型茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。此反应的适宜pH 为5～7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH 条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能显示反应，因此是一种常用的氨基酸定量方法。但也有些物质对茚三酮也呈类似的阳性反应，如β-丙氨酸、氨和许多一级胺化合物等。所以定性或定量测定中，应严防干扰物存在。

2. 试液的配制：KCN －乙二醇甲醚－茚三酮溶液：称取1.25g 重结晶茚三酮溶于25ml 经重蒸馏的乙二醇甲醚中使成5%溶液。将2.5ml10mmol/L KCN 溶液用乙二醇甲醚溶液稀释至125ml 充分混合。然后将125mlKCN —乙二醇甲醚溶与25ml 茚三酮－乙二醇甲醚溶液相混合，置试剂瓶待用，正常情况下应为浅黄色。

乙二醇甲醚(CH3OCH2CH2OH, methyl cellusolve)的处理：将5g 硫酸亚铁加在500g 乙二醇甲醚中，振摇1─2小时。过滤除去硫酸亚铁（若滤液混浊没有关系），再在蒸馏瓶中蒸馏，收集沸点121─125℃部分，此时应为透明无色液体。KCN －乙二醇甲醚－茚三酮溶液配制后必须隔夜才能应用。配制后1星期内稳定，若超过1星期则灵敏度降低，不宜作定量。

茚三酮重结晶：即使AR 级的茚三酮，由于保管不当，常带微红色，配成溶液后也带红色，影响比色测定，故需重结晶一次方可应用。5g 茚三酮溶于15ml 热蒸馏水中，加入0.25g 活性炭，轻轻摇动，若溶液太稠不易操作，可酌量加水5─10ml ，30分钟后用滤纸过滤，滤液放冰箱中过液，次晨即见微黄色结晶出现，过滤，再以1ml 冷水洗涤结晶，置于干燥器中干燥，最后装入棕色试剂瓶中保存。

从原理上就可以看出还原型茚三酮是反应过程中生成的，所以我想也就不必非要在配液时候用还原型茚三酮了，而且还原型茚三酮在常态下能否稳定存在还是个问题，也就是说你不一定能找到还原型的茚三酮试剂。

关于显色剂的不同浓度我想可能是考虑了紫外检测器的置信区间，即0.3-0.7范围内的数值比较准确，你配制的显色剂与反应液作用后吸光度应该在此范围内，否则应该降低显色剂的浓度，以使吸光度落在紫外置信区间内。

范文三：氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮微板法)

氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮微板法)

简介：

氨基酸(Aminoacid，AA)是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态，植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。另外，氨基酸还能反映灼伤、伤寒等方面情况。

Leagene 氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮微板法)(AminoAcid Assay kit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下，能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans 紫)，其吸收峰在波长处，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比。该试剂盒主要用于检测血清、尿液、植物组织、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

编号

名称

TC2151100T 1ml 250ml 60ml 5.3ml

Storage

试剂(A):氨基酸标准(50μg/ml)试剂(B):AA Lysis buffer 试剂(C):茚三酮显色液试剂(D):AA Assay buffer 使用说明书

4℃RT RT 避光RT 1份

自备材料：

1、去离子水或无氨蒸馏水2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、离心机5、60%乙醇6、96孔板7、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，植物组织：AA Lysis buffer 按一定比例加入AA Lysis buffer 匀浆或研磨，用去离子水稀释，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于氨基酸的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AA Lysis buffer 进行适当匀浆，离心，留取上清即为氨基酸粗提液，4℃保存备用，用于氨基酸的检测。

④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer 进行恰当的稀释。

2、配制茚三酮工作液:取适量的茚三酮显色液、AAAssay buffer，茚三酮显色液：AA

Assay buffer 按一定的比例混合，即为茚三酮工作液。4℃避光密闭保存，2周有效。3、配制维生素C 工作液:取出1支维生素C，准确溶解于去离子水，混匀。预冷备用。保

存1周有效。注意：该试剂盒提供的维生素C 及其配制的工作液为过量。

4、配制系列氨基酸标准溶液：取出氨基酸标准恢复至室温后，以氨基酸标准按下表继续稀

释：

加入物(ml)

氨基酸标准(50μg/ml)去离子水或无氨蒸馏水含氮量(μg)

10.0080.9920.4

20.0160.9940.8

30.0240.9961.2

40.0320.9981.6

50.040.9962

5、AA 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意

避免产生气泡。如果样品中的氨基酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。

加入物(μl)

去离子水或无氨蒸馏水系列氨基酸标准(1-5号管)待测样品茚三酮工作液维生素C 工作液

空白管80——12040

标准管—80—12040

测定管——8012040

混匀，80℃中加热15min，迅速冷却。

6、AA测定：当呈现蓝紫色时，补加乙醇，混匀。立即置于96孔板，以空白调零，以酶标仪测定吸光度。

计算：

以系列氨基酸标准(1-5号管)含氮量为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲

线，根据测定管的吸光度进而计算其含氮量。

根据如下公式计算具体样品中氨基态氮的含量：

植物组织样品AA(μg/g)=C×VT /(W×V S ) 式中：C=从标准曲线上查得的氨基态氮含量(μg)V T =样品稀释总体积(ml)=40W=样品鲜重(g)

V S =测定时加入样品体积(ml)=0.8血清、尿液等样品AA(μg/ml)=C×N/VS

式中：C=从标准曲线上查得的氨基态氮含量(μg)N=稀释倍数

V S =测定时加入样品体积(ml)=0.08

注意事项：

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于4℃。

2、氨基酸与茚三酮产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans 紫)在1-1.5h 内能保持稳定，

故稀释后应尽快检测。

3、AA Assay buffer 应密闭保存，防止挥发。

4、空气中的氧气有可能干扰显色步骤，但维生素C 不易加多，否则导致吸光度人为偏大。5、在80℃水浴中孵育加热，可使显色更为稳定。

6、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体

积。

7、所测样本的浓度过高，应用AA Lysis buffer 稀释样品后重新测定。

有效期：6个月有效。

范文四：氨基酸检测试剂盒(茚三酮比色法)

氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)

简介：

氨基酸(Amino acid，AA)是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态，植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。另外，氨基酸还能反映灼伤、伤寒等方面情况。

Leagene氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下，能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans紫)，其吸收峰在波长，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比。该试剂盒主要用于检测血清、尿液、植物组织、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

自备材料：

1、去离子水或无氨蒸馏水 2、研钵或匀浆器 3、离心管或试管 4、离心机 5、 60%乙醇 6、比色杯 7、分光光度计

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按植物组织：AA Lysis buffer按一定的比例加入AA Lysis buffer匀浆或研磨，用去离子水稀释，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于氨基酸的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AA Lysis buffer进行适当匀浆，离心，留取上清即为氨基酸粗提液，保存备用，用于氨基酸的检测。

④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer进行恰当的稀释。

2、配制茚三酮工作液: 取适量的茚三酮显色液、AA Assay buffer，茚三酮显色液：AA

Assay buffer按一定的比例混合，即为茚三酮工作液。避光密闭保存，2周有效。 3、配制维生素C工作液: 取出1支维生素C，准确溶解于去离子水，混匀。预冷备用。保

存1周有效。注意：该试剂盒提供的维生素C及其配制的工作液为过量。

4、配制系列氨基酸标准溶液：取出氨基酸标准恢复至室温后，以氨基酸标准按下表继续稀

5、 AA加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意

避免产生气泡。如果样品中的氨基酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。

比色杯)测定吸光度。

6、AA测定：当呈现蓝紫色时，补加乙醇，混匀。立即以空白调零，分光光度计(1cm光径

计算：

以系列氨基酸标准(1-5号管)含氮量为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲

线，根据测定管的吸光度进而计算其含氮量。根据如下公式计算具体样品中氨基态氮的含量：植物组织样品AA(μg/g)=C×VT/(W×VS) 式中：C=从标准曲线上查得的氨基态氮含量(μg) VT=样品稀释总体积(ml)=80 W=样品鲜重(g)

VS=测定时加入样品体积(ml)=0.8

血清、尿液等样品AA(μg/ml)=C×N/VS 式中：C=从标准曲线上查得的氨基态氮含量(μg) N=稀释倍数

VS=测定时加入样品体积(ml)=0.8

注意事项：

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于4℃。

2、氨基酸与茚三酮产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans紫)在1-1.5h内能保持稳定，

故稀释后应尽快检测。

3、 AA Assay buffer应密闭保存，防止挥发。

4、空气中的氧气有可能干扰显色步骤，但维生素C不易加多，否则导致吸光度人为偏大。 5、在80℃水浴中孵育加热，可使显色更为稳定。

6、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体

积。

7、所测样本的浓度过高，应用AA Lysis buffer稀释样品后重新测定。

有效期：6个月有效。相关：

范文五：脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)

北京雷根生物技术有限公司www.leagene.com

脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)

简介：

脯氨酸(Proline，Pro)是一种环状的α-亚氨基酸，呈中性，等电点为6.30，水中溶解度比任何氨基酸都大，水中可溶162g 左右，易潮解不易得结晶，有甜味。与茚三酮溶液共热，生成黄色化合物，一旦进入肽链后，可发生羟基化作用，从而形4-羟脯氨酸，是组成动物胶原蛋白的重要成分。羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中，尤其与细胞壁的形成有关，在正常情况下脯氨酸含量较低，但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等)，常有脯氨酸的明显积累，即积累指数与植物的抗逆性有关。在临床、生物材料、工业等方面均有广泛应用。

Leagene 脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中，前者与茚三酮共热发生反应，能产生稳定的红色产物，以分光光度计测定处吸光度，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与脯氨酸浓度成正比。该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

编号

名称

TO111350T 1ml 250ml 80ml 2支

Storage

试剂(A):脯氨酸标准(100μg/ml)试剂(B):PRO Lysis buffer 试剂(C):PRO Assay buffer 试剂(D):茚三酮使用说明书

4℃RT RT RT 避光1份

自备材料：

1、蒸馏水2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、滤纸或纱布5、水浴锅6、比色杯7、分光光度计

操作步骤(仅供参考)：

北京雷根生物技术有限公司

1、准备样品：

www.leagene.com

①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，加入PRO Lysis buffer 后匀浆或研磨，沸水浴(期间经常摇动)，混匀，用滤纸或纱布过滤，滤液即为脯氨酸提取液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于脯氨酸的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用PRO Lysis buffer 进行适当匀浆，留取上清即脯氨酸提取液，4℃保存备用，用于脯氨酸的检测。

④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的脯氨酸，可以使用PRO Lysis buffer 进行恰当的稀释。

2、配制茚三酮显色液:取出茚三酮，准确溶解于茚三酮稀释液，加热搅拌至完全溶解，混

匀，即为茚三酮显色液。4℃避光备用，48h有效。注意：茚三酮稀释液具有一定腐蚀性，请小心操作。

3、配制系列脯氨酸标准溶液：取出脯氨酸标准(100μg/ml)恢复至室温后，以脯氨酸标准

(100μg/ml)按下表继续稀释：加入物(ml)

脯氨酸标准(100μg/ml)蒸馏水脯氨酸含量(μg)

10.010.091

20.020.082

30.030.073

40.040.064

50.050.055

60.060.046

4、PRO 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注

意避免产生气泡。如果样品中的脯氨酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。

加入物(ml)蒸馏水

系列脯氨酸标准(1-6号管)脯氨酸提取液PRO Assay buffer 茚三酮显色液

空白管0.1——1.51.5

标准管—0.1—1.51.5

测定管——0.11.51.5

混匀，沸水浴，溶液呈红色。

5、PRO测定：迅速冷却加入PRO 萃取液，振摇30s，静置片刻，取上清液转移至新的离心管或试管，离心，取上清液备用。以空白调零，分光光度计(1cm光径比色杯)检测标准管520nm 处吸光度；以PRO 萃取液调零，分光光度计(1cm光径比色杯)检测测定管520nm 处吸光度。

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计算：

以系列脯氨酸标准(1-6号管)含量(μg)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定管的吸光度进而计算其脯氨酸含量。根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量：

植物组织样品PRO(μg/g)=C×VT /(W×V S ) 式中：C=从标准曲线上查得的脯氨酸含量(μg)

V T =脯氨酸提取液总体积(ml)W=样品鲜重(g)

V S =测定时加入提取液体积(ml)

血清、尿液等样品AA(μg/ml)=C×N/VS

式中：C=从标准曲线上查得的脯氨酸含量(μg)

N=稀释倍数

V S =测定时加入提取液体积(ml)

注意事项：

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于4℃。2、PRO Assay buffer 应密闭保存，防止挥发。

3、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体

积。

4、所测样本的浓度过高，应用PRO Lysis buffer 稀释样品后重新测定。

有效期：6个月有效。