天堂蒜薹之歌
范文一：腺垂体功能减退症病人使用糖皮质激素治疗的护理体会
龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn
腺垂体功能减退症病人使用糖皮质激素治疗的护理体会
作者：郭汝兰
来源：《中国保健营养·中旬刊》2013年第09期
【摘 要】目的：探讨腺垂体功能减退症使用糖皮质激素患者的护理方法。方法：10例垂体功能减退症患者的内科治疗，加强药物治疗作用的观察，做好临床护理工作，积极抢救垂体危象患者。结果：经治疗和临床护理患者疗效满意，好转出院。结论：通过临床护理工作使患者能维持正常的代谢和生活，提高患者对自身病情观察和自我护理能力。
【关键词】腺垂体功能减退；糖皮质激素；护理体会
【中图分类号】R473 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）09—0249—02 腺垂体功能减退症病人在治疗上应用激素替代治疗，特别是在垂体危象的时候，糖皮质激素缺乏多，很严重，应积极补充。糖皮质激素由肾上腺皮质束状带细胞合成和分泌，包括可的松、氢化可的松等，药理作用包括抗炎作用、免疫抑制作用、抗毒作用、抗休克作用，以及对血液成分有一定的影响等。补充糖皮质激素后，病人的体力和精神面貌可有明显改善，血压回升，排泄水负荷的能力增强。临床上应用广泛，最常用于自身免疫性疾病、结缔组织病等。同时由于药物的特殊性，大部分患者需长期服用，其副作用如感染、水钠潴留、高血压以及自我形象的改变等，都会慢慢显现出来，所以对于使用糖皮质激素的患者，实行正确的护理尤为重要。以下是我科对腺垂体功能减退症使用糖皮质激素的患者实施护理干预的体会，如下： 1临床资料
1.1 一般资料 2013年1月—5月我科收治10例腺垂体功能减退症患者，在院期间及出院都给予糖皮质激素治疗。其中男6例，女4例，平均年龄59.2岁，病程平均13年。其中有6例患者入院时诱发垂体危象前期给予紧急抢救和处理，输液时间均在一周以上。
1.2 治疗方法 静滴氢化可的松200-400mg/日，根据病情调整剂量，之后改口服氢化可的松20-30mg/日或强的松5-7.5mg/日，补充激素的同时处理诱发因素，如感染，寒冷等
2.护理
2.1一般护理 严密观察患者生命体征及意识状态，发现有垂体危象的可能及时通知医生，积极进行抢救和治疗。给予安静环境，症状明显者卧床休息；病情容许时适当运动，以利于机体康复，但避免过度劳累和剧烈运动；改变姿势、体位时动作缓慢，以防发生直立性低血压引起晕厥；患者入厕或活动时，给予协助，避免跌倒。给予高热量、高蛋白、高维生素、易消化
范文二：腺垂体功能减退症病人使用糖皮质激素治疗的护理体会
腺垂体功能减退症病人使用糖皮质激素治疗的护理体会
【摘 要】目的：探讨腺垂体功能减退症使用糖皮质激素患者的护理方法。方法：10例垂体功能减退症患者的内科治疗，加强药物治疗作用的观察，做好临床护理工作，积极抢救垂体危象患者。结果：经治疗和临床护理患者疗效满意，好转出院。结论：通过临床护理工作使患者能维持正常的代谢和生活，提高患者对自身病情观察和自我护理能力。
【关键词】腺垂体功能减退；糖皮质激素；护理体会
【中图分类号】r473 【文献标识码】a 【文章编号】1004—7484（2013）09—0249—02
腺垂体功能减退症病人在治疗上应用激素替代治疗，特别是在垂体危象的时候，糖皮质激素缺乏多，很严重，应积极补充。糖皮质激素由肾上腺皮质束状带细胞合成和分泌，包括可的松、氢化可的松等，药理作用包括抗炎作用、免疫抑制作用、抗毒作用、抗休克作用，以及对血液成分有一定的影响等。补充糖皮质激素后，病人的体力和精神面貌可有明显改善，血压回升，排泄水负荷的能力增强。临床上应用广泛，最常用于自身免疫性疾病、结缔组织病等。同时由于药物的特殊性，大部分患者需长期服用，其副作用如感染、水钠潴留、高血压以及自我形象的改变等，都会慢慢显现出来，所以对于使用糖皮质激素的患者，实行正确的护理尤为重要。以下是我科对腺垂体功能减退症使用糖皮质激素的患者实施护理干预的体会，如下：
范文三：腺垂体功能减退的护理查房
护理查房
时间： 2016-5-19 16:00 主持人：刘丽
地点：内分泌科会议室 主讲人：谢盼盼
主题：腺垂体功能减退症
护理查房 （√） 查房形式：个案（√） 疑难（ ） 教学（ ）
护理病例讨论：（ ） 病例类型：死亡( ) 出院(√) 在院（ ）
一、查房目的：1、评价责任护士的护理效果，2、了解病人的需要，对护理的工作中存在的问题提出改正意见。3、介绍先进的护理，指导下一步护理工作。
二、病例介绍
基本资料：患者，女性，55岁，公务员，因垂体瘤放疗术后18+年，咳嗽咳痰1周，加重伴乏力、呕吐1天，于2016-4-20 12:23入院。
既往有“乙型病毒性肝炎”病史，否认结核、疟疾病史，否认高血压、心脏病史，否认糖尿病、脑血管疾病、精神疾病史，否认外伤、输血史，否认食物、药物过敏史，预防接种史不详。患者于2014年12月8日因尿频、尿痛、纳差、乏力1周 第一次入住我院我科。诊断为：1. 腺垂体功能减退症 垂体危象 2.垂体放疗术后 3.低钾、低钠、低氯血症 4.尿路感染 5.病毒性肝炎 乙型 慢性，入院后，予补钠、补充糖皮质激素（氢化可的松 50mg），“哌拉西林他唑巴坦钠
4.5g Bid”抗感染，“泮托拉唑钠注射液 40mg QD”抑酸护胃 等对症支持治疗，曾因发生垂体危象转ICU 治疗，予以抗感染、补充激素、维持水电解质平衡、预防应激性溃疡等对症支持治疗后，患者神志、反应能力较前好转，复查电解质示血钠、血氯大致正常，改“醋酸泼尼松片2.5mg*口服*Qd”替代激素治疗，患者病情好转，生命体征平稳，后转入我科，继续予以口服“醋酸泼尼松龙 5mg每日清晨顿服”、“左甲状腺素片 25ug 口服 每天1次”替代治疗。
体格检查：体温36.3℃ 脉搏74次/min 呼吸17次/min 血压140/90mmHg发育正常，营养良好，正常面容，神志清楚，精神尚可。
入院诊断：
1. 腺垂体功能减退症 垂体危象？2. 垂体瘤术后3. 咳嗽咳痰查因：肺部感染？4. 病毒性肝炎 乙型 慢性
病情及治疗过程：1、完善常规检查。2、告病重，暂予以注射用兰索拉唑护胃、维生素C 注射液+维生素B6注射液补液、盐酸氨溴索注射液化痰、注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠4.5g 静滴Q8h 抗感染治疗。
2016-4-21检查结果回报：钾3.45mmo1/L、钠124.00mmo1/L、氯88.90mmo1/L、碳酸氢根20.10mmol/L、渗透压265.99m0sm/kgH2O、C-反应蛋白10.00mg/L、乙肝+丙肝:乙肝表面抗原阳性、乙肝核心抗体阳性。1. 患者目前血压低、低钠低氯，垂体危象可能性大，予以“5%葡萄糖氯化钠注射液500ml+氯化钾注射液10ml ，0.9%氯化钠注射液250ml+维生素C 注射液2g+维生素B6注射液0.2g ivbydrip ”补液、下午6点复查电解质，密观患者生命体征及病情变化；2. 患者仍有咳嗽咳痰，予以强力枇杷露止咳，余继续当前抗感染、化痰、护胃、激素替代治疗方案，
4-22患者仍有咳嗽，阵发性较剧烈，少量白色粘稠痰，伴呕吐、乏力，余无特殊不适。神清，精神较差，反应迟钝，对答切题，查体合作。
4-23患者诉咳嗽咳痰较前稍好转，余无特殊不适，睡眠欠佳，余一般情况尚可。予以停病重。
4-24患者诉昨晚出现腹泻，解大便3次，大便不成形，量中等，咳嗽咳痰、乏力呕吐等症状较前好转，，睡眠情况较前改善，余一般情况尚可。检查结果回报：复查电解质:正常；复查粪常规+粪便隐血(OB):正常。处理：患者无明显原因出现腹泻，予以“双歧杆菌三联活菌胶囊 420mg 口服 tid ”改善肠道菌群。 4-25会诊意见回报：诊断考虑：焦虑障碍。处理意见：1. 代力新 口服 早晚各一粒；2. 阿普唑仑 口服 0.8g qn。患者目前服用甜梦口服液，睡眠情况尚可。 4-26患者诉腹泻较前好转，大便成形。患者目前病情好转，无明显咳嗽咳痰，今予以停用注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠。
三、现存的护理诊断及措施
1. 潜在并发症 垂体危象
（2） 避免过度劳累、情绪激动，预防感染，注意保暖，慎用镇静、安眠药及降血糖药，以防诱发垂体危象。
（3）告知患者及家属理解激素替代治疗需长期甚至终身坚持，同时保证给药的准确性。
（4）耐心倾听患者感受，并使患者理解激素替代治疗可以补充，恢复所丧失的各种功能，树立疾病信心。
2. 活动无耐力 与低钠低氯有关
1、 评估个体对活动的反应：（1）测量静息时的脉搏、血压和呼吸。（2）如生（1）密切观察病情生命体征、精神状态，警惕垂体危象发生的可能。
命体征异常，需增加活动时，应与医生协商。（3）活动后马上检查生命体征。（4）休息3分钟，然后测量生命体征。（5）若有生命体征异常及不适症状，应中断活动/降低活动的程度、频率及时间。
2、 逐渐增加活动：（1） 制定活动安排和目标。（3） 合理安排休息活动时间。
（4） 从床上活动逐渐过渡到做/站/在房间内行走，根据病人耐力决定。（5） 活动时穿舒适的鞋以给足部以支持。（6） 准备好日常活动的环境/设备，帮助增加活动量，鼓励其进展情况。
3、 认识活动时保存能量的方法：（1） 活动中间要休息，一天休息数次，饭后休息一小时。（2） 将用品放在易拿到的地方。（3） 协助生活或活动。（4） 出现疲倦/心肌缺血症状立即停止活动（脉搏加快、呼吸困难、胸痛）。
3. 营养失调 低于机体需要量
（1）提供可口的、不油腻的、高营养的、易于咀嚼的食物，如鱼、蛋。
（2）注意少量多餐，当病人感恶心、呕吐时，暂停进食。
（3）指导病人进易消化的优质蛋白，如动物瘦肉、鱼肉、蛋类、奶类，进食各种新鲜蔬菜、水果，以补充维生素类。
（4）加强口腔护理，保持口腔湿润、清洁，以增进食欲。
（5）病人进餐时，给病人充分的咀嚼、吞咽时间。
（7）体重、查血象，掌握数据的变化情况。
4. 焦虑
（1）耐心倾病人诉说，查明原因并进行心理疏导。
（2）在医疗保护制度允许范围内，让病人了解病情及检查结果，减少病人的疑虑。
（3）对病人提出的问题给予及时、积极意义上的解答。
（4）进行适当消遣活动，如散步、娱乐，使肌肉放松，消除紧张情绪。
（5）遵医嘱予以用抗焦虑药。
5、舒适度的改变 与剧烈咳嗽有关
（1）遵医嘱予以用止咳化痰、消炎药。
（2）指导有效咳嗽，为患者拍背，促进痰液的排出。
（3）饮食以清淡为主，多饮水。
（4）咳嗽加剧时，应卧床休息，必要时遵医嘱予以吸氧。
6. 知识缺乏 缺乏腺垂体功能减退症的相关知识
（1）通过交谈确认病人对疾病和未来生活方式的顾虑，评估学习的需要以及影响学习的因素，给予解释或指导。
（2） 提供一个安静没有干扰的学习环境，如：床边、示教室。
（3） 学习开始时，让病人及家属明确学习的目的。
（4） 让病人和家属共同参与计划和目标的制定过程。
（5） 帮助学习者把所学到知识运用到日常生活中。
（6） 使用各种方法提供信息，如：解释、讨论、示教、图片、书面材料、录像。
（7） 鼓励病人提出问题，耐心给予解答。
四 、健康教育
1、避免诱因 避免过度劳累，注意保暖，保持皮肤清洁，防止发生感染
2、饮食指导 指导患者进食高热量、高蛋白、高维生素、易消化的食物，并少量多餐
3、用药指导 指导患者必须严格遵医嘱按时按量服用药物，不得随意增减药物的剂量，并使病人认识到随意停药的危险性
4、观察与随访 指导患者如有感染、发热、外伤、腹泻、呕吐、头痛等症状出现，应立即就诊。外出时随身携带识别卡，以防发生意外。
五、讨论
华连莲（护师）在护理诊断中，焦虑 因与病情反复发作有关。
姜毅辉（主管护师）患者在长期使用激素时，应告知激素不能随意加药也不能随意停药，应该咨询医生。
王华（主管护师） 潜在并发症 消化道出血
护理措施：指导病人遵医嘱正确服药，学会观察药效及不良反应，服药强的松期间应定期复诊，若出现上腹部疼痛或出现呕血、黑便时，应立即就医。
六、总结
通过查房，对腺垂体功能减退症有了系统的了解。规范了查房的流程。能帮助我们更好的护理病人，提高护理质量。
范文四：腺垂体功能减退症的临床表现
腺垂体功能减退症的临床表现
1.腺垂体功能减退
腺垂体功能低减是以垂体的靶腺即性腺、甲状腺及肾上腺皮质继发性功能减退为表现的。性腺功能减退出现最早、最普遍，出现甲状腺、肾上腺皮质功能减退的表示病情较重。Sheehan综合征患者腺垂体毁损超过75%时方出现临床症状，有持续的甲状腺、肾上腺功能低减者，毁损已超过95%.可见垂体的储备功能相当强大。实际上，产后大出血造成Sheehan综合征时最早受影响的是生长激素、最早的表现是产后无乳汁分泌。
生长激素缺乏在成年人常症状不明显，在腺垂体功能减退的患者有肾上腺皮质功能减退时与生长激素缺乏协同作用，临床表现为空腹血糖降低或容易发生低血糖症。无功能性垂体腺瘤早期瘤体较小时症状不明显、大多数患者腺瘤增大达到2cm时才出现垂体功能低减的表现。功能性垂体腺瘤在一种垂体激素分泌过多的同时，可有其他垂体激素分泌不足。腺垂体功能减退症发生在儿童以生长、发育障碍为主要表现。临床出现性腺与甲状腺（或肾上腺）两个腺体功能减退基本都是腺垂体功能减退。
继发性垂体靶腺功能低减，需与原发性性腺、甲状腺及肾上腺皮质功能减退症鉴别。
2.肿瘤压迫的表现
在垂体瘤等肿瘤性占位病变引起的腺垂体功能减退症患者可有肿瘤压迫症状，最常见的表现是头痛及视神经交叉受压引起视野缺损（见垂体腺瘤）。大腺瘤压迫引起脑脊液循环障碍或垂体卒中时，可发生急性颅压增高、剧烈头痛、喷射性呕吐、视功能障碍、海绵窦综合征甚至昏迷等危险。一些垂体腺瘤或鞍旁病变压迫、浸润垂体柄或下丘脑，使多巴胺对垂体PRL细胞的作用减弱，血中PRL水平升高，出现泌乳、月经紊乱、不育等，需与垂体PRL瘤鉴别。此情况一般血PRL水平升高大多
尿崩症，儿童腺垂体功能减退、生长发育障碍伴有中枢性尿崩症时，大多为颅咽管瘤或生殖细胞瘤或其他占位性病变。颅咽管瘤影像学检查半数以上见病变内有钙化。
3.腺垂体功能减退症危象
垂体功能减退症严重病例，因感染（占70%）、劳累、中断治疗等原因，应激情况下，腺垂体功能不足、尤其肾上腺皮质激素分泌不足更加突出，使腺垂体功能减退病情急骤加重，出现垂体危象，表现为严重厌食、恶心、呕吐的胃肠道症状，神志障碍、休克、低血糖、高热和昏迷（个别低体温性昏迷）。腺垂体功能低减患者服用常规剂量的镇静、安眠药也可以诱发危象、低血糖昏迷。化验检查除了垂体及其靶腺激素水平低下外，还有水电解质紊乱等，需立即抢救治疗。Sheehan综合征最易发生垂体危象。
范文五：山羊腺垂体细胞的分离培养与鉴定
第 38卷 第 1期 2010年 1月
西北农林科技大学学报 (自然科学版 )
Jo urnal of N o rthwest A &F U niver sity (N at . Sci . Ed . )
Vo l . 38N o . 1 Jan . 2010
山羊腺垂体细胞的分离培养与鉴定 *
尹慧勇 , 赵晓娥 , 马保华
(西北农林科技大学 动物医学院 , 农业部家畜生殖生理和胚胎工程重点开放实验室 , 陕西 杨凌 712100)
[摘 要 ] 【 目的 】 探讨山羊腺垂体细胞的分离和培养方法 , 为 其体外分 泌特性研究 奠定基础 。【 方法 】 采 集山 羊腺垂体 , 分别用胰蛋白酶 、 胶原酶 、 胰蛋白酶和胶原酶混合 、 胰蛋白酶和透 明质酸酶 混合对其进 行消化 , 所获细 胞培 养后采用免疫细胞化学法进行鉴定 , 评价细胞消化结 果和腺垂体 细胞的生长 特性 。【 结果 】 山羊腺垂体 组织在 37℃ 条件下 , 以 1g /L Ⅳ 型胶原酶 和 1g /L 透明 质酸酶混合 消化 2. 5~3h , 消化效 果较好 ; 所得细胞 在培养 24h 开始 贴 壁 , 72h 后细胞主要呈多 角形或梭形 , 连接成片 , 培养 6d 左右细胞即 可铺满培养器皿的 细胞生长面 。 免疫细胞 化学 鉴定结果 显示 , FS H 阳性细胞胞质呈蓝色 , P RL 阳 性细胞胞质呈蓝褐色 ; 放射免疫分析法测定表明 , 分离 、 培养的 腺垂 体细胞具有激素分泌活性 。【 结论 】 采用筛选的消化和分离方法可获得山羊腺垂体细胞 , 所获腺垂体细胞体外培 养体 系 , 可用于体外研究腺垂体细胞的功能和内分泌调控 作用 。
[关键词 ] 腺垂体细胞 ; 免疫细胞化学 ; 放射免疫分析 ; 山羊
[中图分类号 ] Q813. 1+1[文 献标识码 ] A [文章编号 ] 1671-9387(2010) 01-0011-06
Isolation , culture and identification of goat anterior pituitary cells
YIN H ui -yong , ZHAO Xiao -e , M A Bao -hua
(Key Labor atory o f Anima l Reprod uctive P hysiolog y an d Embryo Biotechnolo gy , Ministry o f Ag ricu lture ,
College o f Veterinary Medicine , Northwest A &F Univer sity , Yang ling , S haan xi 712100, China )
A bstract :【 Objective 】 T his paper focuses o n the establishment of a m ethod o f the g oat ante rio r pituita -ry cells in vitro . It can set a basis fo r the study of secretion characte ristics in v itro . 【 M ethod 】 T he effects of different enzym es , including try psin , co llagenase Ⅳ, trypsin plus hyaluronidase , co llag enase Ⅳ plus hyalu -ronidase on ante rio r pituitary in g oat w ere discussed . Im munocytochemical staining identification w as con -ducted and grow ing characters evaluated . 【 Result 】 The results showed that the tissues presented best di -g estion by 1g /L collagenase Ⅳ plus 1g /L hy aluro nidase , at 37℃ 2. 5-3h ; anterio r pituitary cells became adhe rent after 24h of culture ; the form of spindle o r poly gonal cells w ere found after 72h of culture ; they cove red pe tri dish afte r 6d of culture . Im muno cy tochemical staining show ed that the cy toplasm of positive FSH cells show ed blue colo r , and the cy to plasm of PRL positive cells show ed blue brow n colo r , radioim mu -noassay sho wed secre te activity . 【 Conclusio n 】 The co nclusion can be draw n that anterio r pituitary cells can be o btained by the digestio n and separation me thod sugg ested in this article . The sy stem is a useful mo del fo r the study of functio n and endocrine regulatio n of g oat anterior pituitary cells in vitro .
Key words :anterio r pituitary cell ; immunocy tochemical ; radioimmunoassay ; goa t
腺垂体是机体重要的内分泌腺体 , 由生长激素 细胞 、 促乳素细胞 、 促甲状腺细胞 、 促性腺激素细胞 *[收稿日期 ] 2009-05-04
[基金项目 ] 陕西省科学技术研究发展计划 (农业攻关 ) 项目 (2005K02-G4-1) ; 农业部农业结构调整重大技术研究专项 (05-07-03B ) [作者简介 ] 尹慧勇 (1983-) , 男 , 河南驻马店人 , 在读硕士 , 主要从事动物胚胎工程和生殖内分泌研究 。
E -m ail :yinhuiyong830102@yahoo . com . cn
[通信作者 ] 马保华 (1965-) , 男 , 陕西城固人 , 教授 , 博士 , 硕士生导师 , 主要从事动物胚胎生物技术与动物生殖毒理研究 。
E -m h
DOI :10. 13207/j . cn ki . jn wafu . 2010. 01. 029
和促肾上腺皮质激素细胞等细胞构成 [1], 在机体的 生长发育 、 生命活动 、 内分泌调节以及衰老死亡过程 中均具有重要意义 。 Vale 等 [2]建立了 大鼠腺垂体 细胞的单层培养模型 , 由于该模型在一定时间内保 持了细胞的活力和功能 , 能在体外研究腺垂体细胞 对促性腺激素释放激素的反应 , 因而被用于人和家 畜的研究中 。 Krsm anovic 等 [3]用大鼠研究 GnRH 刺激促黄体素 (Luteinizing hormo ne , LH ) 合成和分 泌的机理 , Farnw o rth 等 [4]用大鼠研究 了肿瘤坏死 因子 α对垂体促性腺激素细胞的增殖作用 , Baratta 等 [5]用 绵羊 研 究了 激 活 素 和雌 激 素 对 促 卵泡 素 (Follicle stim ulating ho rm one , FSH ) 分泌 的调节 , Kaw akam i 等 [6]在猴上研究了卵泡抑素对 FSH 分 泌的调节作用 , 但目前对山羊腺垂体细胞体外培养 模型的研究鲜见报道 。 为了探讨山羊 垂体促乳素 (Prolactin , PRL ) 和 FSH 的 分泌生理及其 相互关 系 , 本研究对山羊腺垂体细胞进行了分离培养 , 通过 形态观察 、 免疫细胞化学 、 放射免疫分析等技术对其 进行了鉴定 , 并根据其特定时期的分泌特性 , 建立了 山羊腺垂体细胞的体外无血清培养模型 , 以期为进 一步研究山羊腺垂体细胞体外分泌特性奠定基础 。
1 材料与方法
1. 1 材 料
1. 1. 1 山羊垂体 山羊垂体来源于陕西杨凌示范 区屠宰场秋冬季的成年母山羊 , 山羊临床检查健康 , 用肉眼观察其卵巢上黄体的有无 , 以判定其所处的 生殖时期 。
1. 1. 2 主要试剂 DM EM /Ham ' s F12培养液 、 新 生牛血清 (Gibco ) , Ⅳ 型胶原酶 、 胰蛋白酶 、 透明质 酸酶 、 H EPES 、 胰岛素 、 转铁蛋白 、 亚硒酸盐 、 牛血清 白蛋白 V 片段 (Sig ma ) , 兔抗鼠 FSH 抗体 、 兔抗鼠 PRL 抗体 、 SABC 试 剂盒 、 SABC -AP 试 剂盒 、 DAB 显色试剂盒 (武汉博士 德公司产品 ) , PRL 、 FSH 和 LH 放射免疫测定试剂盒 (天津九鼎医学生物工程 有限公司 ) 。
1. 1. 3 培养液 基础培养液为添加 HEPES 10~15 mmol /L 、 青霉素 100IU /mL 、 链霉素 100IU /mL 的 DM EM /H am ' s F12。 在基础培养液中补加新生牛血 清即为细胞生长培养液 。 无血清培养液为基础培养 液加入胰岛素 5μg /mL 、 转铁蛋白 5μg /m L 、 亚硒酸 盐 25nmol /L 、 牛血清白蛋白 V 片段 0. 003g /mL 。 1. 2 山羊腺垂体的采集
, 2+2+ 磷酸盐缓冲液 (PBS ) 中 , 在超净工作台内 , 用 PBS 冲 洗数次 , 用眼科剪分 离腺垂体 , 再用 PBS 冲洗数次 洗净血迹 , 将腺垂体剪碎成约 1mm 3的小块 , 移入 平皿中 , 用基础培养液吹洗数次 。 静置片刻待组织 沉淀后 , 吸弃上清 , 再用基础培养液洗 2次 , 以尽可 能除去红细胞 , 备用 。
1. 3 山羊腺垂体组织的消化
1. 3. 1 胰蛋白 酶消 化 向 上述 平皿中 加入 2. 5 g /L 胰蛋白酶液 15m L , 于不同温度 (37℃ 和 4℃ ) 和时间 (37℃ 分别消化 0. 5和 1h , 4℃ 分别消化 8和 10h ) 下进行消化 , 比较不同温度和时间下的消化 率和细胞活率 。
1. 3. 2 Ⅳ 型 胶原 酶消化 向上 述平 皿中 加入 1 g /L Ⅳ 型胶原酶液 15m L , 于不同温 度 (37℃ 和 4℃ ) 和时间 (37℃ 分别消化 1, 2和 2. 5h , 4℃ 分别消 化 8和 10h ) 下进行消化 , 比较不同温度和时间下的 消化率和细胞活率 。
1. 3. 3 Ⅳ 型胶原酶结合胰蛋白酶混合消化 向上 述平皿中加入 1g /L Ⅳ 型胶原酶和 2. 5g /L 胰蛋白 酶的混合消化液 15mL , 于不同温度 (37℃ 和 4℃ ) 和时间 (37℃ 分别消化 0. 5, 1和 2h , 4℃ 分别消化 8和 10h ) 下进行消化 , 比较不同温度和时间下的消 化率和细胞活率 。
1. 3. 4 Ⅳ 型胶原酶结合透明质酸酶混合消化 向 上述平皿中加入 1g /L (或 1. 5g /L ) Ⅳ 型胶原酶和 1 g /L 透明质酸酶的混合消化液 15m L , 于不同温度 (37℃ 和 4℃ ) 和时间 (37℃ 分别消化 2, 2. 5和 3h , 4℃ 分别消化 8和 10h ) 下进行消化 , 比较不同温度 和时间下的消化率和细胞活率 。
1. 4 山羊腺垂体细胞的分离与培养
1. 4. 1 分 离 消化结束后 , 向平皿中加入适量培 养液 (含体积分数 10%血清 ) 终止胰蛋白酶的作用 。 吹打混匀后 , 将细胞悬液经 150μm 筛网过滤 , 除去 粘液和 未 消化 的 组 织 , 收 集 滤液 , 100g 离 心 10 min ; 含 Ⅳ 型胶原酶的滤液于 100g 离心 8min , 弃上 清 , 沉淀中加适量的培养液 , 用移液器头轻轻吹吸 , 100g 离心 8min , 重复以上操作 3次 。
1. 4. 2 培 养 收集沉淀细胞 , 加入适量细胞培养 液 (含体积分数 10%血清 ) 制成 细胞悬液 。 台盼蓝 检测细胞活率 , 调整活细胞密度至 1×105/m L , 按每 孔 1m L 接种到 24孔 培养板 , 于 37℃、 体 积分数 5%CO 2、 饱和湿度条件下培养 。 接种后 2h 连同细 胞吸出 , 并重新接种于另一 24孔培养板内培养 , 培 10
12西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) 第 38卷
继续培养 , 第 4天更换为含体积分数 5%血清的细 胞培养液 , 第 5天更换为 含体积分数 2. 5%血清的 细胞培养液 , 第 6天更换为无血清细胞培养液 。 每 隔 12h 观察细胞贴壁和生长情况 。
1. 5 山羊腺垂体细胞的鉴定
待培养皿 中的 细胞 铺满 皿底 后 , 用 体积 分数 4%的多聚甲醛固定 , 以备鉴定 。
1. 5. 1 FSH 细胞染色 以兔抗鼠 FSH -β抗体作为 一抗 , 按 SABC 免疫组化染色试剂盒的说明进行免 疫细胞化学染色 , DA B 显色 , 核固红复染 , 显微镜下 观察 。 凡细胞质染成蓝色者判为阳性细胞 , 未显蓝 色者判为阴性细胞 。
1. 5. 2 PRL 细胞染色 以兔抗鼠 PRL 抗体为一 抗 , 按 SABC -AP 免疫组化染色试剂盒说明进行免 疫细胞化学染色 , BCIP /NBT 显色 , 核固红复染 , 显 微镜下观察 。 凡细胞 质染为蓝褐色者 判为阳性细 胞 , 未显蓝褐色者判为阴性细胞 。
1. 6 山羊腺垂体细胞分泌功能的检测
细胞培养至第 7天时 , 用 PBS 冲洗 3次 , 用无 血清培养液培养 6h , 收集培养液 , 在陕西省杨凌示 范区医院 , 用放射免疫分析法测定培养液中 FSH 、 LH 和 PRL 的含 量 。 测 定 FSH 的 灵敏 度为 0. 9 mIU /mL , 批内变异系数为 5. 5%,批间变异系数为 8. 7%;测量 LH 的灵敏度为 1. 0mIU /m L , 批内变 异系数为 5. 4%,批间变异系数为 7. 5%;测量 PRL 的灵敏度为 0. 9ng /m L , 批内变异系数为 5. 4%,批 间变异系数为 11. 5%。 重复测定 3次 , 每次 3孔 。 1. 7 数据处理
试验数据用 “ 平均值 ±标准差 (M ean ±SEM ) ” 表示 , 用 SPSS 13. 0fo r Window s 软件处理数据 。
2 结果与分析
2. 1 山羊腺垂体不同消化方案的消化效果
2. 1. 1 胰蛋白酶消化 在 37℃ 条件下 , 胰蛋白酶 消化 30min 左右的消化效果较差 , 得到的细胞量很 少 ; 消化 1h 左右 , 所获得的细胞很少 , 液体粘性加 大 。 在 4℃ 消化 10h 消化效果差 , 液体粘性加大 。 2. 1. 2 Ⅳ 型胶原酶消化 消化获得的细胞数量多 , 但液体粘性加大 , 不易过滤 。
2. 1. 3 Ⅳ 型胶原酶结合胰蛋白酶混合消化 消化 所获得的细胞数量多 , 但液体粘性加大 , 不易过滤 , 细胞活率低 。
2. 1. 4 Ⅳ 型胶原酶结合透明质酸酶混合消化 消 化所获细胞悬液粘度小 , 易过滤 , 镜下观察可见细胞 大多单个存在 , 少量细胞聚成小团 , 细胞悬液中混杂 有少量的红细胞 (较腺垂体细胞小 ) 。 1g /L 台盼兰 染色表明 , 细胞活率在 92%以上 。 Ⅳ 型胶原酶与透 明质酸酶混合 , 于 37℃ 消化不同时间对山羊腺垂体 的消化效果见表 1。
表 1 Ⅳ 型胶原酶与透明质酸酶混合消化对山羊腺垂 体的消化效果
T able 1 Dig estion results of g oa ts anterior pituitary cells by co llagenase Ⅳ plus hyaluronidase
Ⅳ 型胶原酶 质量浓度 /(g ·L -1) Enzyme concentration
消化温度 /℃
Digestion temperatu re
消化时间 /h
Digestion time
消化率
Digestibility
细胞活率 /% Cell m otility 2+94
1. 0372. 5++92
3++92
2+93
1. 5372. 5++92
3++92
注 :+.组织块边缘疏松 , 吹打后液体中度浑浊 , 消化率为 50%;++.组织块边缘疏松拉丝 , 吹打后液体明显浑浊 , 消化率为 85%~90%。 Note :+.The edge of the clump s continued to break dow n , after being blow ed , the cu ltured m edium appeared turbid . Digestibility w as 50 percent ; ++.T he edge of the clumps broke dow n and appeared filifo rm , after being suction , the cultured medium appeared obviously tu rbid . Digestibility w as 85percent to 90percent .
由表 1可知 , 1. 0和 1. 5g /L Ⅳ 型 胶原酶与 1 g /L 透明质酸酶混合后 , 于 37℃ 消化 2. 5~3h 的 效果较好 , 因此后续试验均采用 1. 0g /L 的 Ⅳ 型胶 原酶和透明质酸酶混合后 , 于 37℃ 消化 2. 5~3h 。 2. 2 山羊腺垂体细胞的培养特性
用酶消化后的山羊腺垂体细胞呈圆形 , 遮光性 24, 48h 壁生长 , 变平 , 向四周伸展 , 细胞周围伸出大量的突 起 (图 1A ) ; 72h 后细胞主要呈多角形或梭形 , 连接 成片 , 相邻细胞间重新建立了联系 , 可见圆形细胞 核 , 核膜界限清晰 , 核仁分叶 (图 1B ) ; 培养 4d 左右 细胞铺满皿底 80%左右 (图 1C ) ; 逐渐降低培养液中 的血清浓度后 , 细胞生长缓慢 , 6d 左右细胞可铺满 皿底 (图 1D
13
第 1期 尹慧勇 , 等 :山羊腺垂体细胞的分离培养与鉴定
图 1 山羊腺垂体原代细胞的形态观察 (×100)
A . 培养 48h ; B . 培养 72h ; C . 培养 4d ; D . 培养 6d
F ig . 1 Investig ation of g oa t anterior pituitary cells ' mor ph cultured in vitro (pha se -contra st , ×100)
A . The goat anterior pituitary cells on 48h in v itro cultru e ; B . T he goat anterior pituitary cells on 72h in vitro culture ; C . T he goat anterior pituitary cells on 4d in vitro cu ltrue ; D . Th e goat an terior pituitary cells on 6d in vitro cultru e
2. 3 山羊腺垂体细胞的鉴定
免疫细胞化学染色结果显示 , FSH 阳性细胞质
呈蓝色 , 核周染色尤重 。 PRL 阳性细胞胞质呈蓝褐 色 , 阳性细胞聚集在一起呈团状生长
。
图 2 山羊腺垂体细胞的免疫细胞化学染色 (×400)
A . FS H 染色 ; B . P RL 染色
Fig . 2 Immunocyto chemical staining r esult of g oat anterio r pituita ry cells (×400)
A . Positive for FS H ; B . Positive for PRL
2. 4 山羊腺垂体细胞分泌 FS H 、 LH 和 PRL 的含
量
由表 2可见 , FSH 的 分泌值为 (8. 81±0. 21) mIU /mL , LH 的分泌值为 (7. 52±0. 04) mIU /m L ,
PRL 的分泌值为 (29. 05±3. 20) ng /m L 。 表明无血 清培养时 , 山羊腺垂体细胞在第 7天具有较强的分
泌能力 。
表 2 山羊腺垂体细胞分泌 FS H 、 L H 和 PRL 的含量
T able 2 FS H , L H and P RL co ncentrations o f go at anterio r pituita ry cells in culture
重复 Repeat FS H /(mI U ·m L -1)
LH /(m IU ·mL -1) PRL /(ng ·m L -1) 18. 87±0. 11a 7. 55±0. 15a 29. 97±2. 71a 28. 99±0. 66a 7. 63±0. 60a 27. 69±3. 16a 38. 58±0. 25a 7. 39±0. 19a 29. 48±2. 53a 平均 Average
8. 81±0. 21
7. 52±0. 04
29. 05±3. 20
注 :同列数据后标注不同小写字母者表示差异显著 (P <0. 05)="">
Note :Valu es in colum ns with different u perscripts differ sig nifican tly (P <0.>
3 讨 论
由于机械分散细胞的方法对腺垂体细胞损伤较
大 , 故目前主要采用酶消化法分散腺垂体细胞 [7-8]。
但不同动物采用的酶不同 , 在小鼠 [9]和大鼠 [2]
上 , 常
采用胰蛋白酶消化腺垂体 ; 在牛 [10]和猪 [11]
上 , 常采 用胶原酶消化腺垂体 ; 在绵羊上 , H uang 等 [12]先用 3g /L 的胶原酶 , 然后用 2. 5g /L 的胰蛋白酶消化
[13]
垂体进行消化 。 笔者参考 Greg ory 等 [14]
的方法 , 用
不同种类的酶对绵羊的腺垂体细胞进行消化 , 并比 较了不同酶和消化时间对消化效果的影响 。 结果表 明 , 山羊腺垂体细胞消化需要的时间较长 , 使用胰蛋 白酶消化对细胞的损伤较大 , 故不宜采用 ; 而 Ⅳ 型胶 原酶作用温和 , 对细胞的损伤小 。 本试验所采用的 Ⅳ 型胶原酶的 2种质量浓度均可使用 , 但 以采用 1g /L Ⅳ 型胶原酶和 1g /L 透明质酸酶混合后 、 于 3753。
14
西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) 第 38卷
单用胶原酶进行山羊腺垂体组织消化时 , 会出 现大量的黏性胶状物质 , 而在使用胶原酶配合透明 质酸酶混合消化时 , 这种现象消失 。 笔者认为 , 这种 胶状物质主要是透明质酸 , 其能稳定胶原网状结构 , 保护和润滑腺垂体细胞免受破坏 。 笔者在培养皿底 部平铺胶原蛋白 Ⅰ 对山羊腺垂体细胞进行培养 , 结 果细胞贴壁和生长的速度远大于未铺胶原蛋白的山 羊腺垂体细胞 , 表明山羊腺垂体细胞间质填充的物 质主要是胶原 。 胶原酶和透明质酸酶混合使用 , 能 快速溶解山羊腺垂体细胞间质 , 使细胞分离出来 。 酶消化获得的腺垂体细胞经 3~5d 培养后 , 还 可见到形态不规则的成纤维细胞 [15], 笔者依据这 2种细胞贴壁速度的不同 , 对腺垂体细胞进行了纯化 。 腺垂体细胞含有多种细胞类型 , 为了后续研究的需 要 , 本试验只选择性地鉴定了其中的促乳素细胞和 促性腺激素细胞 。 在培养第 1周 , 随着培养时间的 延长 , 阳性 细 胞的 数 量增 加 , 表 明 培养 细 胞 分泌 FSH 和 PRL 的 量 可能 在 增 加 。 本 试 验 还发 现 , FSH 和 PRL 阳性细胞率随山羊不同生理时期而有 所差异 , 这主要是受到机体内各种细胞因子 、 激素反 馈和负反馈等因素作用的结果 , 至于其具体机制还 有待进一步研究 。
单纯体外培养的腺垂体细胞 , 在一定时期内具 有分泌激 素的功能 。 Goody er 等 [16]在小鼠 上测定 了单纯体外培养时 , 在促分泌因子和抑制分泌因子 作用下 , 腺垂体细胞的动态分泌值 , 认为 LH 、 FSH 在第 6~7天的分泌量达到高峰 , 而 PRL 的分泌量 变化较特殊 , 开始时下 降 , 转而 又持续上 升 。 杨地 等 [17]研究表明 , 体外培养的大鼠腺垂体细胞在第 7天分 泌 功 能 最 强 , GH 、 LH 分 泌 值 最 高 ; No da 等 [18]、 Henderson 等 [19]分别在大鼠和绵羊腺垂体细 胞体外培养的第 7天 , 研究某些因子对其分泌功能 的影响 。 依据以上文献 , 笔者在培养的第 7天 , 对腺 垂体细胞进行了鉴定 , 并对培养液中的激素含量进 行测定 , 这样就保证了鉴定时阳性细胞的数量 ; 鉴定 之前培养液中不含血清 , 可避免培养液中激素对鉴 定结果的干扰 , 也为后续研究某一因子或多因子对 腺垂体分泌功能的调控作用提供了保证 。
本研究所建立的腺垂体细胞的分离培养方法 , 能够获得高产量的细胞 , 利用腺垂体细胞的体外分 泌特点建立的培养模型 , 可以在体外研究垂体细胞 的分泌特性 。 [参考文献 ]
[1] Ooi G T , T aw adros N , Escalon a R M . Pituitary cell lines and their endocrine applications [J ]. M olecular and Cellular E ndo -crinology , 2004, 228:1-21.
[2] Vale W , Gran t G , Amos s M , et al . Cultu re of enzymatically dis -persed anterior pituitary cells :functional validation of a meth -od [J ]. Endocrinology , 1972, 91:562-572.
[3] Krsmanovic L Z , M artinez -Fuen tes A J , Arora K K , et al . Local regulation of gonadotroph function by pituitary gonadotropin -releasing h ormone [J ]. En docrinology , 2000, 141:1187-1195. [4] Farnw orth P E , Th ean E , Roberts on D M , et al . T rans forming g row th factor -b eta3stimulates lactotrope cell grow th by in -creasing bas ic fibroblast grow th facto r from folliculo -stellate cells [J ]. Endocrin ology , 2000, 141:859-867.
[5] Baratta M , W est L A , Tu rzillo A M , et al . Activin modulates differential effects of estradiol on s ynthes is and secretion of fol -licle -s timu lating horm on e in ovine pituitary cells [J ]. Biol , 2001, 64:714-719.
[6] Kaw akam i S , Fujii Y , Ok ada Y , et al . Paracrine regulation of FS H by follis tatin in folliculostellate cell -enriched primate pitu -itary cell cu ltures [J ]. Endocrinology , 2002, 143:2250-2258. [7] Guillemin R , Rosenberg B . Hu moral hy poth alamic con trol of anterior pituitary :a stu dy with combined tis sue cultu res [J ]. E ndocrinology , 1955, 57:599-607.
[8] Das G D , H oule J D , Brasko J , et al . Freezing of neu ral tiss ues and their transplan tation in the b rain of rats :tech nical details and his tological observations [J ]. Neu rosci M ethods , 1983, 8: 1-15.
[9] Tu rgeon J L , Shyamala G , W aring D W . PR localization and an -terior pituitary cell populations in vitro in ovariectomized w ild -type an d PR -knock ou t mice [J ]. Endocrin ology , 2001, 142: 4479-4485.
[10] Denniston D J , Th omas M G , Kane K K , et al . Effect of neu -ropeptide Y on Gn RH -indu ced LH releas e from b ovin e anteri -or pituitary cell cultures derived from heifers in a foll icular , lu -teal or ovariectomized state [J ]. Anim Reprod Sci , 2003, 78: 25-31.
[11] 周 虚 , 董 伟 , 庄临之 . 猪垂体细胞单层培养 [J ]. 黑龙江 动 物繁殖 , 2001, 9(2) :4-5.
Zhou X , Dong W , Zhu ang L Z . M on olayer cu lture of porcine pituitary cells [J ]. H eilon gj iang J ou rnal of Animal Reproduc -tion , 2001, 9(2) :4-5. (in Chinese )
[12] H uang E S , M iller W L . Effects of es tradiol -17βon basal and luteinizing hormone releasing hormone -induced secretion of luteinizing h ormone and follicle stimu lating hormone by ovine pituitary cell cultu re [J ]. Biology of Rep roduction , 1980, 23: 124-134.
[13] 马友记 , 张 勇 , 李发弟 , 等 . 褪黑素对体外培养绵羊垂体细 胞 分泌 FSH 和 LH 的影响 [J ]. 家畜生态学报 , 2005, 26(3) :17-20.
M a Y J , Zhang Y , Li F D , et al . Effects of melatonin on FSH s is es in [. 15
第 1期 尹慧勇 , 等 :山羊腺垂体细胞的分离培养与鉴定
Acta Ecologiae Animalis Domastici , 2005, 26(3) :17-20. (in C hinese )
[14] Gregory S J , Tow nsend J , M cNeilly A S , et al . Effects of pro -lactin on the lu teinizing hormone response to gonadotropin -re -leasing ho rm one in primary pituitary cell cultu res du ring the ovine annu al reproductive cy cle [J ]. Biol Reprod , 2004, 70: 1299-1305.
[15] Wilfinger W W , Larsen W J , Dow ns T R , et al . An in vitro m odel for stu dies of in tercellular comm unication in cultured rat anterior pituitary cells [J ]. Tissue -C ell , 1984, 16(4) :483-497.
[16] Goodyer C G , Hall C S , Guyda H , et al . Hum an fetal pituitary in culture :hormone secretion and res ponse to s om atostatin , luteinizing h orm one releasing factor , thy rotropin releasing fac -tor and dibutyryl cyclic AM P [J ]. Clin Endocrinol M etab ,
1977, 45(1) :73-85.
[17] 杨 地 , 吕 文 , 郭 伟 , 等 . 培养鼠腺垂体细胞的形态和分 泌 功能实验研究 [J ]. 现代临 床医学 生物工 程学杂 志 , 2004, 10 (2) :91-93.
Yang D , L ǜW , Guo W , et al . The ex perimental study on cul -tured pituitary cells of SD rats [J ]. J ou rnal of M odern Clinical M edical Bioengineering , 2004, 10(2) :91-93. (in Chinese ) [18] Noda T , Kikuchi M , Kaidzu S , et al . Rat anterior pituitary cells in vitr o can partly reconstruct in vivo topograp hic affini -ties [J ]. Anat Rec , 2003, 272:548-555.
[19] Henderson H L , H odson D J , Gregory S J , et al . Gonadptrop -in releasing hormone stimulates prolactin release from lac -totrophs in photoperiodic species th roug h a gonadotropin -in -dependent m ech anism [J ]. Biology of Reprodu ction , 2008, 78: 370-377.
(上接第 10页 )
[14] 薛庆 善 . 体外 培养 的 原理 与 技术 [M ]. 北京 :科 学出 版 社 , 2001.
Xue Q S . T he prin ciple and principle of cultu re in vitro [M ]. Beijing :Science Pres s , 2001. (in C hinese )
[15] Blon din P , Beaulieu M , Fou rnier V , et al . Analysis of bovine sexed s perm for IVF from sorting to the em bryo [J ]. Theriog -enology , 2009, 71(1) :30-38.
[16] 孔庆学 , 张 涌 . 大 鼠睾丸支 持细胞的 分离纯 化与 鉴定 [J ]. 西北农林科技大学学报 :自然科学版 , 2006, 34(8) :39-43. Kong Q X , Zhang Y . Isolation , pu rification and iden tification of testis S ertoli cells in prepub ertal rats [J ]. J ou rnal of North -w est S ci -Tech University of Agricu lture and Fores try :Nat Sci E d , 2006, 34(8) :39-43. (in C hinese )
[17] 杨君杰 , 刘善荣 , 杨 玲 , 等 . 小鼠睾丸支持细胞的分离培 养与 鉴定 [J ]. 第二军医大学学报 , 2006, 27(7) :741-744.
Yang J J , Liu S R , Yang L , et al . Isolation and iden tification of S ertoli cells from m ou se testis [J ]. Academic J ou rnal of S ec -ond M ilitary M edical University , 2006, 27(7) :741-744. (in Chinese )
[18] 孙祥宙 , 邓春华 , 郭海彬 , 等 . 成人睾丸间质细胞的培养和鉴 定 [J ]. 中华男科学杂志 , 2005, 11(5) :356-358.
S un X Z , Deng C H , Guo H B , et al . Cultu re and identification of hum an adu lt Leydig Cells [J ]. National Journal of And rolo -gy , 2005, 11(5) :356-358. (in Chinese )
[19] S kinner M K . S ertoli cell biology [M ]. California :E lsevier Ac -ademic Press , 2005.
[20] J osep h D R . M utagenes is of es sen tial functional residues of rat androgen -binding protein /sex h ormone -binding globulin [J ]. M olecu lar Endocrinology , 1993, 7(4) :488-496.
16西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) 第 38卷
转载请注明出处范文大全网 » 腺垂体功能减退症病人使用糖皮
