范文一：CTP胶原三肽

?袁宏丽

?武汉肽类物质研究所副研究员从生物活性肽的发酵法制取、分离、活性功能的量效关系、应用开发等研究。参与10余项重大研究项目。参与完成自选项目《罗非鱼鱼皮、鱼鳞胶原肽制备工艺研究》课题的研究，该课题荣获武汉市科技进步二等奖。

?

?参与大豆肽国家标准的制订工作，及发明专利的申报。参加多个多肽专著的编写

胶原美容产品——时尚

EsteeLauder/雅诗兰黛

弹性胶原

活肤霜

UTU 胶原三肽洁颜油HR 胶原蛋白丰润

密集晚霜

胶原

产品

UTU CTP胶原

三肽果饮伊丽莎白雅顿ElizabethA

rden水分保湿面膜

FANCL HTC胶原蛋白粉Dior迪奥魅惑粉漾润唇膏

皮肤内的网状结构①胶原流失、持水能力下降②水油平衡破坏水分流失胶原三肽①补充胶原促进胶原、

透明质酸分泌重建网干燥粗糙状结构

②锁住水分、脂类恢

复水油平衡增加皮肤

持水能力

美白篇

色斑形成的罪魁祸首

－－皮肤中的黑素细胞及黑色素

色斑形成的影响因素

红外线

劣质化妆品

化妆品或 使用不当

皮肤炎症

紫外线 酪氨酸

酪氨酸酶 O2 黑素细胞

黑色素 营养不良

电脑

避孕药 睡眠灵 怀 孕

睡眠不足

从源头上阻止产生新的黑色素

抑制酪氨酸酶活性试验

相同浓度下 CTP 胶原三肽 对酪氨酸酶的抑制率远强于普通 胶原肽产品，而且优于熊果苷的 美白效果。

图 各受试物抑制酪氨酸酶活性效果表

抗氧化-----抵抗紫外线损伤

健康肌肤的杀手

SOD、 CAT、 GSH-PX

体外抗氧化实验

70 60 50 40 30 20 10 0 自由基清除率% 螯合率% 胶原三肽 胶原肽

结果表明：1.5%CTP 胶原三肽的螯合亚铁能力 高于同种浓度的普通胶原 肽一倍以上，显著降低自 由基攻击脂质造成的脂质 过氧化伤害。

图 体外抗氧化功能测定结果

体内抗氧化实验

SOD活力

180 160 140 120 100 80 60 40 20 0

0.5 0

SOD（U/ml）

MDA含量

2.5

MDA（ nmol/mgprot）

*

**

*

2 * 1.5 1 ** *

结果表明：CTP胶 原三肽能显著提高SOD 活力，降低MDA含量。

空白

模型

CP低

CP高

CTP低

CTP高

空白

模型

CP低

CP高

CTP低 CTP高

图

体外抗氧化功能测定结果

CTP胶原三肽的美白效果

30 25

色素值

20 15 10 5 0 对照组

*

补充CTP前

CTP胶原三肽组

补充CTP后

图6 CTP胶原三肽的美白实验（人群实验 每组10例 实验 4周）

抗皱篇

皮肤中胶原纤维、弹性纤维、透明质酸的网状结构

透明质酸： 保湿因子

胶原纤维： 皮肤的骨架

弹性纤维： 皮肤弹性

胶原三肽在美容产品中的应用

胶原三肽

洗面奶、精华素、精华露、爽肤水、面霜、洁颜油、

唇膏、眼霜、防晒霜、面膜

粉剂、口服液、饮料

1. 使用安全性

对正常皮肤的黑素

胶原三肽属实际无毒物质。

细胞无细胞毒性

作用。

胶原三肽

无过敏反应。

胶原三肽

精贵的理由

由

理

的

贵

精

范文二：肽、肽键与命名(B)

教学目标：了解肽、肽键与命名

教学重点: 肽的命名

教学安排: O 1，O 4—>O5—>O 6；30min

一、肽

氨基酸分子间通过氨基与羧基间脱水，生成以酰胺键相连接的化合物：

键 ：又称肽键。

肽：以酰胺键相连接的氨基酸缩合物称为缩氨酸，简称肽。

二肽：有一个酰胺键相连的肽称为二肽。

三肽：有两个酰胺键相连的肽称为三肽。

以次类推，三肽以上的肽又统称多肽。

二、肽的结构

α-氨基酸的数目决定肽链的长短：二肽，三肽……

α-氨基酸的种类决定肽链的结构、肽链的数目（相当异构体数目）。

如，同种氨基酸组成的二肽只有一种二肽：

两种氨基酸组成的二肽有二种二肽：

甘氨酰—丙氨酸（不同氨基酸组成二肽）

丙氨酰—甘氨酸（不同氨基酸组成二肽）

两种氨基酸组成的二肽有二种，是由于氨基酸形成肽键时连接的顺序不同产生的。 显然，氨基酸的种类越多，理论上的连接顺序也随之增多，如三种氨基酸组成的三肽可有6种，四种氨基酸组成的四肽可有24种，六种氨基酸组成的六肽则有720种。 三、肽的写法

在肽链中，带氨基的一端称为 N 端，有羧基的一端称为 C 端，在书写肽的构造式时，通常将 N 端写在左边，C 端写在右边，如：

四、肽的命名

含有完整羧基的氨基酸作为母体，由 N 端开始，依次称为某氨酰--某氨酸。如，丙氨酰--酪氨酰--甘氨酸：

为了方便，常简称为丙-酪-甘或 Ala-Tyr-Gly 。

范文三：肽键形成部位

在蛋白质合成的过程中, 肽键的形成在核糖体的部位

在蛋白质合成过程中，肽键的形成是在核糖体的大亚基内。

核糖体在细胞中负责完成“中心法则”里由RNA 到蛋白质这一过程，此过程在生物学中被称为“翻译”。在进行翻译前，核糖体小亚基会先与从细胞核中转录得到的信使RNA （messenger RNA，简称“mRNA ”）结合，再结合核糖体大亚基构成完整的核糖体之后，便可以利用细胞质基质中的转运RNA （transfer RNA，简称“tRNA ”）运送的氨基酸分子合成多肽。当核糖体完成对一条mRNA 单链的翻译后，大小亚基会再次分离。

翻译的具体过程是：氨基酸分子在氨基酰-tRNA 合成酶的催化作用下与特定的转运RNA 结合并被带到核糖体上。一个激活的tRNA 进入核糖体的A 位与mRNA 相配，肽酰转移酶在邻近的氨基酸间建立一个肽键，此后在P 位上的氨基酸离开它的tRNA 与A 位上的tRNA 结合，核糖体则相对于mRNA 向前滑动，原来在A 位上的tRNA 移动到P 位上，原来在P 位上的空的tRNA 移动到E 位上，然后在下一个tRNA 进入A 位之前被释放。

范文四：A．肽键 B．磷酸二酯键

A(肽键 B(磷酸二酯键

C(二硫键 D(氢键

E(糖苷键

3(下列哪种碱基通常只存在于mRNA而不存在于DNA中?

A(腺嘌呤 B(胞嘧啶

C(鸟嘌呤 D(尿嘧啶

E(胸腺嘧啶

4(酶能加速化学反应的进行是由于哪一种效应?

A(向反应体系提供能量 B(降低反应的话化能

C(降低底物的能量水平 D(提高底物的能量水平

E(提高产物的能量水平

5(构成需氧脱氢酶辅酶的维生素是

A(核黄素 B(硫胺素

C(钴维生素 D(磷酸吡哆醛

E(生物素

6(DNA复制时不需要

A(DNA指导的DNA聚合酶 B(引物酶

C(DNA连接酶 D(拓扑异构酶

E(RNA指导的DNA聚合酶

7(参与肝脏初级结合胆汁酸生成的氨基酸是

A(组氨酸 B(丙氨酸

C(蛋氨酸 D(亮氨酸

E(甘氨酸

8(血浆中含量最多的蛋白质是

A(清蛋白 B(α1-球蛋白

C(α2-球蛋白 D(β-球蛋白

E(γ-球蛋白

9(DNA复制时，以5'-TAGA-3'为模板，合成下列哪种互补结构?

A(5'-TCTA-3' B(5'-ATCT一3'

C(5'一UCUA一3' D(5'一GCGA一3'

E(5'一TCTC一3'

10(正常静息状态下，大部分血糖被哪一器官作为燃料?

A(肝 B(脑

C(肾 D(脂肪

E(肌肉

11(一分子葡萄糖酵解时净生成ATP的分子数为

A(1 B(2

C(3 D(4

E(36

12(合成胆固酵的限速酶是

A(HMGCoA合成酶 B(HMGCoA裂解酶

C(HMGCoA还原酶 D(甲羟戊酸激酶

E(鲨烯环氧酶

13(转氨酶的辅酶含有下列哪种维生意?

A(A B(B1

C(B2 D(pp

E(B6

14(人体内嘧啶核苷酸分解代谢的主要最终产物是

A(β丙氨酸及β-氨基异丁酸 B(尿酸

C(尿素 D(尿苷酸 E(尿囊素

范文五：全保护RGD三肽的合成方法研究

2003年第 23卷 第 5期 , 493~498

有 机 化 学

Chinese Journal of Organic Chemistry

V ol. 23

, 2003 N o. 5, 493~498? 研究简报?

全保护 RG D 三肽的合成方法研究

杨大成 a , b 　　 范 　 莉 a 　　 钟裕国 Ξ, b Ξ

(a 西南师范大学化学化工学院 重庆 400715)

(b 四川大学华西药学院 成都 610041)

摘要 　 以两条路线 、 多种偶联试剂 (DCC , E DCI , C DI , EE DQ ) 合成了全保护三肽 Arg 2G ly 2Asp (RG D ) . Boc 2Arg (T os ) 2OH 经上 述偶联剂短时活化 , 于合适条件下与 TsOH ? G ly 2OBzl 缩合 , 均获得良好收率 (43%~97%) . 经 Pd (OH ) 2/H 2还原得到的 Boc 2 Arg (T os ) 2G ly 2OH 于 22~27℃ 与 HCl ? Asp (OcHex ) 2OBzl 偶联得到全保护三肽 Boc 2Arg (T os ) 2G ly 2Asp (OcHex ) 2OBzl (T M ) , 反应 收率分别为 7614%(DCC/H OSu ) , 6417%~7813%(DCC/H OBt ) , 6617%~7719%(E DCI/H OBt ) . Boc 2G ly 2OH 和 HCl ? Asp 2 (OcHex ) 2OBzl 经 DCC/H OBt 或 C DI 活化 , 可得到碳端二肽 Boc 2G ly 2Asp (OcHex ) 2OBzl (收率分别为 2%, 8915%) , 该二肽脱 Boc 后与 Boc 2Arg (T os ) 2OH 反应 , 经 DCC/H OBt , E DCI/H OBt , C DI , DCC/H OSu 活化 , T M , 其反应收率分别 为 4014%, 7318%, 6718%, 8414%.

关键词 　 精氨酰 -甘氨酰 -天冬氨酸 , β2环己基天冬氨酸苄酯 , N ε22N α2叔丁氧羰基精氨酸 , 合 成 , 偶联

Protected RG D Tripeptide

Y ANG, Da 2Cheng a , b 　　 FAN , Li a 　　 ZH ONG, Y u 2G uo Ξ, b

(a School o f Chemistry &Chemical Engineering , Southwest China Normal Univer sity , Chongqing 400715)

(b West China School o f Pharmacy , Sichuan Univer sity , Chengdu 610041)

Abstract 　 C om plete protected Arg 2G ly 2Asp (RG D ) tripeptide , Boc 2Arg (T os ) 2G ly 2Asp (OcHex ) 2OBzl (T M ) , was synthesized via tw o synthetic routes and with different coupling reagents. A fter activated by coupling reagents such as DCC , E DCI , C DI and EE DQ in short time , Boc 2Arg (T os ) 2OH was coupled with TsOH ? G ly 2OBzl to produce N 2 terminal dipeptide Boc 2Arg (T os ) 2G ly 2OBzl (1) in suitable reactive condition in 43%~97%yield. Boc 2Arg (T os ) 2 G ly 2OH (2) , obtained from the catalytic hydrogenation of 1, reacted with HCl ? Asp (OcHex ) 2OBzl (3a ) to give the protected RG D tripeptide in the yields of 7614%(DCC/H OSu ) , 6417%~813%(DCC/H OBt ) and 6617%~ 7719%(E DCI/H OBt ) , respectively. C 2T erminal dipeptide Boc 2G ly 2Asp (OcHex ) 2OBzl (4) was prepared by the couplingof Boc 2G ly 2OH with HCl ? Asp (OcHex ) 2OBzl (3a ) with the coupling reagents of DCC/H OBt and C DI (8112%, 8915%yield ) . Deprotecting Boc group , 4reacted with Boc 2Arg (T os ) 2OH through the coupling reagents of DCC/H OBt , E DCI/H OBt , C DI and DCC/H OSu to form the target m olecule in the yields of 4014%, 7318%, 6718%and 8414%, respectively.

K eyw ords 　 arginyl 2glycyl 2aspartic acid , benzyl β2cyclohexylaspartate , benzyl glycinate , N ε2tosyl 2N α2tert 2butyloxy 2 carbonyl arginine , synthesis , couple

　　 精氨酰 -甘氨酰 -天冬氨酸 (Arg 2G ly 2Asp , RG D ) 三肽是

细胞粘附蛋白的识别位点 [1], 含有 RG D 序列的多肽许多都

具有抗粘附性能 , 可抑制肿瘤细胞与内皮细胞和基底膜的粘 附 , 加速肿瘤细胞脱附 , 阻止肿瘤细胞滞留 , 从而抑制肿瘤细

ΞE 2mail :yangdc -2000@163. net

Received July 8, 2002; revised September 28, 2002; accepted N ovember 31, 2002.

胞的转移 [2]. 因此研究 RG D 序列肽的合成具有重要意义 .

RG D 三肽分子较小 , 仅有少数文献描述 RG D 肽的合成 过程 . Hirano 等 [3]提及了 RG D 的合成路线

:

　　二 环 己 基 碳 二 亚 胺 (DCC ) 为 偶 联 剂 , 三 氟 甲 磺 酸

(TFMSA ) 全脱保护 . 该文无操作步骤 , 仅有元素分析及氨基

酸组分分析结果 .

K awasaki 等

[4]

在合成 RG D 2aPEG 时 , 给出了其合成路线

:

二肽合成用活泼酯法 , 偶联则 用 DCC/HOBt 法 . , 再与 aPEG (氨基聚

乙二醇 ) 偶联 . , 收率 , R

f ,

[α]D , 元素 分析值 , 无波谱表征 .

上述 两 条 合 成 路 线 均 是 从 C 2端 向 N 2端 逐 步 合 成 ,

Hirano 等的方法较为简单 (因其目的仅在于合成无保护 RG D ) , K awasaki 等将三肽合成与后续偶联全盘考虑 , 采用较

少保护的氨基酸 , 是一个有借鉴意义的合成策略 .

我们的合成目的是要将其它分子与三肽 RG D 偶联 , 要 求其碳端 COOH 和氮端 NH 2的保护基的脱除方法迥异 , 保证

RG D 易于与其它分子连接 ; 合成策略是先得到肽 , 后与其它

分子偶联 . 因此 , 设计了三肽 RG D 的合成路线 (Schemes 1, 2) .

Scheme 1

Scheme 2

三肽 Boc 2Arg (T os ) 2G ly 2Asp (OcHex ) 2OBzl (T M ) 的合成 ,

Scheme 1是从 N 2端向 C 2端逐个合成 ,Scheme 2却从 C 2端向

N 2端延伸 . T M 的 NH 2, CO 2H 分别以 Boc , Bzl 保护 , 使其在以

HCl/EtOAc 酸解脱 Boc 或 H 2/Pd (OH ) 22C 催化氢解去 Bzl 时 ,

另一保护基均不受影响 , 有利于在此分子两端分别连接其它 分子 . 本文报道 RG D 三肽的不同合成方法及其实验结果 .

1　 实验部分

1. 1　 仪器及药品

Electrothermal IA6304型熔点测定仪 (英国制造 , 温度未

经校正 ) ;ACE 2400核磁共振仪 (瑞士 Bruker 公司 , 400MH z ,

015%T MS 为内标 ) ;H60型柱层析硅胶 (青岛海洋化工厂 ) ; G F 254薄层层析板 () ;2F 21型三用紫外分析

仪 () Boc 2(T os 2(四川省农科院 ) ; EDCI (or

) ; 羰基二咪唑 (CDI ) ) ;DCC (上海化学试剂站 ) . HOBt 按

]制备 , 得白色晶体 , 收率 6616%, m. p. 156~158℃

(lit [5a]55%, 157℃

) , 其结构经 1H NMR 证实 . N 2乙氧甲酰 222乙氧基二氢 喹 啉 (EEDQ ) 按 文 献 [5a ]制 备 , 收 率 7619%,

m. p. 64~66℃ (lit [5a]71%, 66~67℃

) , 其结构经 1H NMR 证实 . 甘氨酸苄酯对甲苯磺酸盐 (TsOH ? G ly 2OBzl ) 按文献 [6]制备 , 收率 7514%, m. p. 13115~13215℃ (lit [6]84%, 132~

134℃ ) , 产品结构经 1H NMR 证实 . N 2叔丁氧羰基 2β2环己基 天冬氨酸苄酯 [Boc2Asp (OcHex ) 2OBzl , 3]按文献 [7]制备 , 收

率 72%, m. p. 63~65℃ (lit [7a]55%, 6518~6613℃

) . 饱和 HCl 2EtOAc 溶液、 饱和 HCl 2EtOH 溶液参照文献 [5b ]制备 , 封

口后冷冻存放备用 . 乙酸乙酯经无水硫酸钠干燥后使用 , 三 乙胺通氮重蒸 , 苄基溴减压蒸馏后使用 , 四氢呋喃加钠用时

蒸馏 , 其它试剂均为市售的化学纯或分析纯产品 .

1. 2　 Boc 2Arg(Tos) 2G ly 2OB zl (1) 的制备

1. 2. 1　 DCC 法

在 150m L 园底烧瓶中加入 Boc 2Arg (T os ) 2OH , DCC 和 HOBt , 以 THF 适量溶解 , 冰水放置 . 另一个 100m L 园底烧瓶 中加入 TsOH ? G ly 2OBzl , DMF 溶解 , 等摩尔 Et 3N 中和 , 室温下 搅拌 . 015h 后 , 混合反应液 , 搅拌反应 ,T LC 监测反应进程 . 反应结束后 , 滤掉反应产生的 DCU , 减压旋蒸 , 得无色油状 物 . 油状物用 EtOAc 溶解 , 饱和 NaCl 溶液洗涤 2次 , 反复用 EtOAc 提取水层 , 合并 EtOAc. EtOAc 层用饱和 NaHCO 3洗 3次 , 饱 和 柠 檬 酸 洗 2次 , 再 用 饱 和 NaCl 洗 至 中 性 . 无 水 Na 2SO 4干燥 , 过滤 , 旋干得白色泡状固体 . 硅胶柱层析 , 石油

醚 -丙酮 (10∶ 1~1∶ 1, V ∶ V ) 梯度洗脱 , 减压旋蒸 , 得白色泡 状固体 . P 2O 5真空干燥 , 得产品 1, 结果见表 1(Entries 1~

10) . 1H NMR (CDCl 3) δ:7175(d , J =810H z , 2H , T os

22, 62H ) , 7146(brs , 1H , HNSO 2) , 7135~7128(m , 5H , Ph ) , 7122(d , J =810H z , 2H , T os 32, 52H ) , 6144(brs , 2H , 2NH ) ,

6110(brs , 1H , NH ) , 5148(d , J =618H z , 1H , B oc 2NH ) , 5112

494　　　　　　 有 机 化 学 V ol. 23, 2003

(s , 2H , CH 2Ph ) , 4129(brs , 1H , Arg α2CH ) , 4114~4108 (dd , J =516, 1810H z , 1H , G ly α2CH 2) , 3198~3192(dd , J =512, 1810H z , 1H , G ly α2CH 2) , 3120(s , 2H , Arg δ2 CH 2) , 2138(s , 3H , T os CH 3) , 1182~1180and 1159~1151 (m , 4H , Arg β2, γ2CH 2) , 1141(s , 9H , 3×Boc CH 3) . 1. 2. 2　 E DCI 法

在 100m L 圆底瓶中加入 Boc 2Arg (T os ) 2OH (860mg , 2 mm ol ) , EDCI (1190mg , 6mm ol ) , HOBt (320mg , 214mm ol ) , THF (5m L ) , 室温 (25~27℃ ) 搅拌约 015h. 在另一个 50m L 圆底瓶中加入 TsOH ? G ly 2OBzl (1350mg , 4mm ol ) , DMF (4 m L ) 溶解 , 等摩尔 Et 3N (0156m L ) 中和 , 室温下搅拌 . 反应液 混合 , 搅拌反应 ,T LC 监测反应进程 . 停止反应 (48h ) 后 , 减压 旋蒸 , 得黄绿色油状液体 , 常规后处理 , 得黄色油状物粗品 . 硅胶柱层析 , 石油醚 -丙酮 (9∶ 1~1∶ 1, V ∶ V ) 梯度洗脱 . 减压 旋蒸 , 得白色泡状固体 . P 2O 5真空干燥 , 得产品 1730mg , 收 率 6512%, m. p. 86~88℃ . 产品结构经 1H NMR 证实 . 1. 2. 3　 C DI 法

按上述 EDCI 法操作 , 将 EDCI , HOBt 换为 CDI , 投料全 部减半 , 结果见表 1(Entry 12) , m. p. 85~88℃ .

1H NMR 证实 .

1. 2. 4　 EE DQ 法

100m L T 2OH 和 EEDQ , 无 水 THF 溶解 , 搅拌 . 另 1TsOH ? G ly 2OBzl , 无水 THF 及足量 NM M. 搅拌 0. 5h , 两液混合 , 搅拌 ,T LC 监测反应 进程 . 反应毕 , 减压旋蒸 , 得浅黄色油状物 . 加入 EtOAc 及饱 和 NaCl 溶液 , 振摇静置 , 分出酯相 , EtOAc 萃取水相 (2×20 m L ) . 合并 EtOAc 相 , 用饱和 NaHCO 3洗 2次 , 饱和柠檬酸洗

至 T LC 检测无 EEDQ , 再用饱和 NaCl 洗至中性 . 无水 Na 2SO 4干燥 , 过滤 , 减压浓缩得黄色粘稠液体 . 勿需柱层析 , 直接在 冰浴下用石油醚 (30~60℃ ) 研磨固化 . 置冰箱冷冻 , 次日抽 滤 , 得白色固体 . P 2O 5真空 干 燥 即 得 产 品 1, 结 果 见 表 1 (Entryies 14~16) .

1. 3　 Boc 2Arg(Tos) 2G ly 2OH (2) 的制备

在 250m L 圆 底 瓶 中 加 入 1, THF 溶 解 并 加 入 适 量 Pd (OH ) 22C , 通 H 2除 O 2后 , 在通 H 2下搅拌反应 . T LC 监测反 应进程 . 反应毕 , 抽滤 , 旋干 , 得白色泡状固体 . 此固体纯度己 较高 , 可直接用于后续反应 . 分析之用 , 可经硅胶柱层析 , 石 油醚 -丙酮 (2∶ l ~l ∶ 2, V ∶ V ) 梯度洗脱 . 减压旋蒸 , 得白色泡 状固体 . P 2O 5真空干燥 , 得纯品 2, m. p. 122~131℃ ; 1H NMR (CDCl 3) δ:7122(d , J =716, 2H , T os 22, 62CH ) , 7122 (d , J =716H z , 2H , T os 32, 5) , 6152(brs , 2H , 2×NH ) , 6131(brs , 1H , NH ) , 51(1H , NH ) , 4126(s , 1H , Arg α2CH ) , 41(s ,

2

) (s , 1H , G ly CH 2) , 3128~ 31(, Arg 22, 38(s , 3H , T os CH 3) , 1179~ , 2CH 2) , 1139(s , 9H , 3×Boc CH 3) 1 , 还原反应主要在 9~15℃ , 25~℃ 进行 , 反应时间多为 12~30h , 温度低时间长 , 反之则 短 , 柱后收率 93%~95%.详细结果不再列表 .

1. 4　 Boc 2G ly 2Asp(Oc H ex) 2OB zl (4) 的制备

Boc 2Asp (OcHex ) 2OBzl 常规脱 Boc 得 HCl ? Asp (OcHex ) 2 OBzl (3a) , 真空干燥 , 待用 .

1. 4. 1　 DCC/H OBt 法

100m L 圆底瓶中加入 Boc 2G ly 2OH (460mg , 216mm ol ) , DCC (640mg , 3112mm ol ) , HOBt (420mg , 3112mm ol ) , 冰水

表 1　 1制备实验结果 a

T able 1　 Experimental results of the preparation of 1

Entry C oupling reagent Boc 2Arg (T os ) /TsOH ? G ly 2OH/

coupling reagent

T emp. /℃ T ime/h Weight/mg Y ield/%

1DCC 112/210/11214~161198207113 2DCC 112/210/11217~191188607418 3DCC 112/212/11225~264919308319 4DCC 112/118/11225~265117907718 5DCC 110/210/21011~151209208010 6DCC 110/115/11311~13b 19655418 7DCC 110/210/1120~14c 82157504212 8DCC 110/115/1139d 1677907617 9DCC 110/210/11510~111196605619 10DCC 110/210/1154~81433355811 11E DCI 110/210/31025~27487306512 12C DI 110/210/31025~27495609714 13DCC e 1101/115/11676~121233155211 14EE DQ 110/210/1159~101035406218 15EE DQ 110/1152/11528~9625409010 16EE DQ 110/115/1156~1270260433f 　 a Activating condition ; b -5℃ /2215h ; c -5℃ /12h ; d 9℃ /1h ; e DCC/H OSu ; f column chromatography twice. 594

N o. 5杨大成等 :全保护 RG D 三肽的合成方法研究

冷却 , 无水 THF (15m L ) 溶样 , 冷冻 . 另一反应瓶中加入 3a (680mg , 210mm ol ) , DMF (118m L ) 溶样 , 等摩尔 NM M 中和 . 活化结束 (15h ) , 两液混合 , 搅拌 ,T LC 监测反应进程 . 17~20℃ 反应 68h , 滤出白色固体 , 减压旋蒸得到油状物 . 常规后处 理 , 硅胶柱层析 , 石油醚 -丙酮 (8∶ 1~3∶ 1, V ∶ V ) , 梯度洗脱 得无色透明粘液 . P 2O 5真空干燥 , 即得产品 4750mg , 收率 8112%.1H NMR (CDCl 3) , δ:7138~7127(m , 5H , Ph ) , 7107 (d , J =810H z , 1H , NH ) , 5118(ABq , J =1210, 2618H z , 2H , CH 2Ph ) , 4193~4188(m , 1H , CH ) , 4171~4166(m , 1H , CH ) , 3190~3185and 3183~3177(dd , J =516, 1712H z , each 1H , G ly CH 2) , 3105~2199and 2184~2178(dd , J =414, 1712 H z , each 1H , Asp β2CH 2) , 1145(s , 9H , Boc CH 3) , 1154(m , 10H , cHex 22~62CH 2) .

1. 4. 2　 C DI 法

100m L 圆底瓶中加入 Boc 2G ly 2OH (700mg , 319mm ol ) , CDI (730mg , 415mm ol ) , 无水 THF (15m L ) , 全溶后 , 搅拌 . 315h 后加入 3a (1025mg , 310mm ol ) , DMF (2m L ) , NM M (014m L ) 的混合液 . T LC 监测反应进程 . 27℃ 反应 1715h 后 , 减压旋蒸 , 得油状物 . 常规后处理 , 得无色透明粘液 ,

物已很纯净 , 可用于后续反应 . 分析之用 , , 醚 /丙酮梯度洗脱 , 减压旋蒸 , P 24 1. 24g , 收率 8915%.1H .

1. 5　 Boc 2Arg(Tos) 2G ly 2H ex) 2OB zl (TM) 的制 备

1. 5. 1　 从氮端二肽 2合成三肽 T M

1. 5. 1. 1　 DCC/H OBt 法

在 150m L 圆底瓶中加入 Boc 2Arg (T os ) 2G ly 2OH , 无水 THF 适量 , 冰浴冷却 , 加入 HOBt , DCC , 冷冻 . 另一 50m L 圆底瓶 中加入 3a , DMF 溶解 , 等摩尔 Et 3N 中和 . 活化结束后 , 两反 应液混合 , 搅拌 ,T LC 监测反应进程 . 反应结束后 , 常规后处 理 , 得淡黄色泡状固体 , 硅胶柱层析 , 石油醚 -丙酮 (10∶ 1~ 1∶ 1, V ∶ V ) 梯度洗脱 , 得白色泡状固体 . P 2O 5真空干燥 , 即得 产品 T M. 1H NMR (DMSO 2d 6) δ:8137(d , J =814H z , 1H , Asp NH ) , 8109(brs , 1H , G ly NH ) , 7163(d , J =814H z , 2H , T os 22, 62H ) , 7139~7130(m , 5H , Ph ) , 7128(d , J =814H z , 2H , T os 32, 52H ) , 7104, 6176and 6155[s , each 1H , Arg NHC (NH ) NH], 6194(d , J =810H z , 1H , Arg α2NH ) , 5111 (ABq , J =1218H z , 2H , OCH 2Ph ) , 4176~4171(dd , J =614, 1414H z , Asp α2CH ) , 4164~4159(m , 1H , cHex 12OCH ) , 3191~3187(m , 1H , Arg α2CH ) , 3179~3168(dd , dd , J = 516, 618H z , 1H , 1H , G ly CH 2) , 3102(brs , 2H , Arg δ2CH 2) , 2182~2176(dd , J =614, 1618H z , 1H , Asp β2CH 2) , 2171~ 2166(dd , J =618, 1618H z , 1H , Asp β2CH 2) , 2134(s , 3H , T os CH 3) , 1137(s , 9H , Boc CH 3) , 1168~1120(m , 14H , Arg β2, γ2CH

2

, cHex 22, 32, 42, 52, 62CH 2) ; 13C NMR (DMSO 2d 6) δ:17215, 17017, 16914, 16911(C O ) , 15619(C N ) , 15517(Boc C O ) , 14113(T os 12C ) , 14018(T os 42C ) , 13610 (Ph 12C ) , 12914(T os 32, 52C ) , 12519(T os 22, 42C ) , 12817, 12811(Ph 32, 52C , 22, 62C ) , 12814(Ph 42C ) , 7815(Boc C 2 O ) , 7218(cHex 12C ) , 6616(Bzl α2C ) , 5413(Arg α2C ) , 4819 (Asp α2C ) , 4510(G ly α2C ) , 4119(Arg δ2C ) , 3616(Asp β2 C ) , 3112(cHex 22, 62C ) , 2915(Arg β2C ) , 2815(Boc CH 3) , 2519(Arg γ2C ) , 2511(, 2314(32, 52C ) , 2112(T os CH 3) .

1.

2, EDCI , HOBt , THF 适 50m L 圆底瓶中加入 3a , DMF 溶解 , 等摩尔 3

N 中和 . 活化结束后 , 两反应液混合 , 搅拌 ,T LC 监测反应 进程 . 反应结束后 , 常规后处理 , 得淡黄色泡状固体 , 硅胶柱 层析 , 石油醚 2丙酮 (10∶ 1~1∶ 1, V ∶ V ) 梯度洗脱 , 得白色泡状 固体 . P 2O 5真空干燥 , 即得产品 T M. 产品结构经 NMR (1H , 13C , 1H , 1H 2COSY ) 证实 .

1. 5. 1. 3　 DCC/H OSu 法

按 B 法操作 , 仅将 HOBt 改为 HOSu.

1. 5. 2　 从碳端二肽 4合成三肽 T M

4常规脱 Boc , 得 HCl ? G ly 2Asp (OcHex ) 2OBzl (4a ) , 真空干 燥 , 待用 .

1. 5. 2. 1　 DCC/H OBt 法

在 150m L 圆底瓶中加入 Boc 2Arg (T os ) 2OH (460mg , 1109 mm ol ) , DCC (265mg , 1127mm ol ) , HOBt (160mg , 1120 mm ol ) , 无水 THF (15m L ) , 冷冻 . 另一 50m L 圆底瓶中加入 4a (0191mm ol ) , DMF (2m L ) , NM M (0112m L ) . 活化结束后 , 两 反应液混合 , 搅拌 ,T LC 监测反应进程 . 反应结束后 , 常规后 处理 , 得黄色泡状固体 , 硅胶柱层析 , 石油醚 -丙酮 (8∶ 1~2∶ 1, V ∶ V ) 梯度洗脱 , 得白色泡状固体 . P 2O 5真空干燥 , 即得产 品 T M 280mg , 收率 4014%, m. p. 147~149℃ . 产品结构经

表 2　 目标分子的合成实验结果

T able 2　 Experimental results of the preparation of T M

Entry C oupling reagent Boc 2Arg (T os ) /3a /

coupling reagent

　 T emp. /℃ T ime/h Weight/g Y ield/%m. p. /℃

1DCC/H OBt 210/212/212/212253611217813140~144 2DCC/H OBt 0166/0166/0187/017922~246501336417136~139 3DCC/H OSu 1165/11821/2115/118225~275001977614142~145 4E DCI/H OBt 0166/0166/1198/019922~246501346617136~140 5E DCI/H OBt 1165/1182/4195/214825~275501997719138~141 694　　　　　　 有 机 化 学 V ol. 23,

2003

NMR (1H , 13

C , 1H , 1H 2COSY ) 证实 1151212　 E DCI/H OBt 法

在 150m L 圆底瓶中加入化合物 Boc 2Arg (T os ) 2OH (375mg , 0190mm ol ) , EDCI (210mg , 1108mm ol ) , HOBt (140mg , 1105mm ol ) , THF (15m L ) , 搅拌 . 另一 50m L 圆底瓶中加入 4a (0175mm ol ) , DMF (4m L ) , NM M (011m L ) . 1h 后 , 两反应液 混合 , 搅拌 ,T LC 监测反应进程 . 反应 (12℃ /17h , 27℃ /17h , 18℃ /20h ) 后 , 常规后处理 , 得白色泡状固体 , 硅胶柱层 析 , 石油醚 -丙酮 (8∶ 1~2∶ 1, V ∶ V ) 梯度洗脱 , 得白色泡状固 体 . P 2O 5真空干燥 , 得产品 T M 0142g , 收率 7318%, m. p.

132~136℃ . 产品结构经 NMR (1H , 13C , 1H , 1H 2COSY ) 证实 .

1. 5. 2. 3　 DCC/H OSu 法

在 150m L 圆底瓶中加入 Boc 2Arg (T os ) 2OH (360mg , 0. 85mm ol ) , DCC (205mg , 0199mm ol ) , HOSu (115mg , 0199mm ol ) , 无水 THF (15m L ) , 冷冻 . 另一 50m L 圆底瓶中加入 4a (0171mm ol ) , DMF (2m L ) , NM M (0110m L ) . 215h 后 , 两反 应液混合 , 搅拌 ,T LC 监测反应进程 . 12~18℃ 反应 50h 后 , 常规后处理 , 得白色泡状固体 , 硅胶柱层析 , 石油醚 -丙酮 (8∶ 1~2∶ 1, V ∶ V ) 梯度洗脱 , 得白色泡状固体 , /重结晶 . P 2O 5真空干燥 , 得产品 T M 460841,

m. p. 148~150℃ . 产品结构经 1

C , , H 2COSY )

证实 .

1. 5. 2. 4　 C DI 法

100m L 圆底瓶中加入 Boc 2Arg (T os ) 2OH (410mg , 0197mm ol ) , CDI (240mg , 1146mm ol ) , 无水 THF (15m L ) 溶样 , 搅 拌 . 315h 后 , 加入 4a (0181mm ol ) , DMF (4m L ) , NM M (0111m L ) 的混合液 . T LC 监测反应进程 . 27℃ 反应 1615h 后 , 减压 旋蒸 , 得油状物 . 常规后处理 , 得白色固体 , 硅胶柱层析 , 石油 醚 -丙酮 (6∶ 1~1∶ 1, V ∶ V ) 梯度洗脱 , 减压旋蒸 , 石油醚 2丙 酮重结晶 ,P 2O 5真空干燥 , 得纯净产物 T M 420mg , 收率 67.

8%, m. p. 146~148℃ . 产品结构经 NMR (1H , 13

C , 1H , 1H 2

COSY ) 证实 .

2　 结果与讨论

在上述合成路线中 , 均涉及原料 Boc 2Asp (OcHex ) 2OBzl

(3) 的合成 . 3的合成路线 , 一条是将 Boc 2Asp (OcHex ) 2OH (5)

苄酯化

[7a]

, 另一条是 Boc 2Asp 2OBzl (6) 的环已酯化

[8]

.

5苄酯化 , Sugawara 等 [7a]以 DMF 作溶剂 , TEA 为碱 , 与 PhCH 2Br 在室温反应 5h , 收率 55%.更多的研究者采用在 EtOAc 中回流反应 3~5h 的方法 , 收率多数高于 60%[9,10].

T am 等 [8]以 EDCI 为偶联剂 , 让 6与 cHex 2OH 在 0℃ 反应 . 虽

然此方法反应快 (1h ) , 收率高 (90%) , 但起始原料 6的制备 并不比 3的制备更容易 . 我们在制备 3时 , 采用 5为原料 , 试 用过 (1) PhCH 2Br/THF/TEA/10~19℃ ; (2) PhCH 2Br/EtOAc/

TEA/reflux ; (3) PhCH 2OH/DCC/HOBt/THF 以及 (4) PhCH 2OH/EEDQ/THF 等反应试剂、 条件的组合 . 实验发现 :(1) 组合反

应可以得到 3, 收率 56%~72%, 唯一不足是反应稍慢 (24~

35h ) 且残留 PhCH 2Br 不易尽快除尽 ; (2) 组合较好 , 反应较

快 , 收率也好 , 一般可达到 72%以上 (lit [7a]55%) , PhCH 2Br 残留气味少且易除去 , 能较快得到固体 . 组合 (3) 与 (4) 能够 发生反应 , 但反应慢 , 产物较复杂 , 其中原因很可能是酯交换 等副反应在作祟 . 有鉴于此 , 在 3的制备中 , 我们主要采用了 方法 (1) 和 (2) [7b].

Boc 2Arg (T os ) 2G ly 2OBzl (1) 的制备 , 采用了多种偶联试

剂 . 最初试用了 EEDQ 偶 联 反 应 能 够 发 生 , 收 率

43~90; 及 EDCI 法 , 偶联反应

; CDI , 速度既快收率又好 (几乎定 . DDC/HOBt 偶联 . , 影响反应的因素除了溶剂外 , 活化时间极为 重要 :活化时间少于 1h 者 , 偶联反应均能发生 , 尤以 0. 5h 最为可靠 ; 活化时间延长 , 收率渐低 ,12h 尚有 42. 2%的收 率 ,2215h 则仅有 418%的收率 ,35h 则无产物生成 . 此外 , 偶 联反应温度也极大地影响反应速度 . 低于 20℃ , 一般均需

100h 以上方可反应完全 , 若为 25~26℃ , 50h 内可完成反

应 . DCC/HOBt 法的优点是收率较为稳定 , 合适反应条件下收 率都较高 (71%~83%) .

1脱苄基即可制得 Boc 2Arg 2(T os ) 2G ly 2OH (2) . Alig 等 [11]

脱除 RG D 非肽模拟物的苄基时 , 采用 H 2/Pd 2C 的方法 , 所用 溶剂包括 HOAc , HCO 2H , EtOH , MeOH ; Boger 等 [12]在脱除

PhCH 2时 , 溶剂采用 THF , 催化剂仍为 10%Pd 2C. Fujii 等 [13]

在将 Boc 2Asp (OR ) 2OBzl 还原为 Boc 2Asp (OR ) 2OH 时 , 以 MeOH 为溶剂 , 另加几滴 HOAc. 基于这些文献和实验经验 , 我们在 将 1的 Bzl 脱除时 , 选用了 10%Pd (OH ) 22C/THF 组合在常压 下反应的方法 , 一般情况下 , 室温下 12h 可脱除完全 , 但考 虑到温度的差异 ,15℃ 以下反应则延长至 30h 左右 ,25~28℃ 则控制在 12h 左右 . 实验结果表明 , 脱除反应很完全 , 柱 层析前收率高于 100%(可能含催化剂 ) , 柱层析后收率在

93%~95%之间 .

Boc 2Asp (OcHex ) 2OBzl (3) 常 规 脱 Boc , 即 得 HCl ? Asp (OcHex ) 2OBzl (3a ) . 将 Boc 2Arg (T os ) 2G ly 2OH (2) 与 3a 偶联为

三肽 Boc 2Arg (T os ) 2G ly 2Asp (OcHex ) 2OBzl (T M ) 时 , 我们采用了

DCC/HOBt , DCC/HOSu , EDCI/HOBt 三种方法 . 总的说来 , 这

三种合成方法差别不大 , 反应速度、 反应收率相近 , 不同点在 于产物纯化的难易 . 相对而言 , EDCI/HOBt 法没有难以除净 的 DCU , 后处理最简单 . 产物 T M 的结构 , 不仅得到 NMR

(1H ,

13

C ) 的支持 , 还得到 1H , 1H 2COSY 谱的佐证 . 在 1H , 1H 2

COSY 谱中 ,8137处双峰与 δ4176~4171的 dd 峰相关 , 后者

又与 δ2182~2166处双 dd 峰相关 ; 我们已经知道 , δ2182~

2166处双 dd 峰为 Asp β2CH 2的典型特征 , 据此我们可确定 δ8137双峰为 Asp α2NH , δ4176~4171的 dd 峰为 Asp α2CH 1

δ8109处单峰 (宽 ) 与 δ3179~3168G ly 双 dd 峰相关 , 那么此

峰应属于 G ly α2NH. δ7163及 δ7128双峰峰形相似 , J 值相 同 , 且与 δ2134CH 3单峰相关 , 因此应为 T os 基上的芳香氢 . δ7139~7130处多重峰与 δ5114~5108dd 峰相关 , 前者是苯 环峰 , 后 者 是 Asp α2CO 2H 苄 基 酯 的 CH 2特 征 吸 收 峰 . δ

6195~6194峰与 δ3191~3187处多重峰相关 , 后者是 Arg α2CH , 前者也就应是 Arg α2NH 峰 . 1H , 1H 2COSY 谱图如下

:

路线 2是一条已知的合成路线 , 因此我们把研究重点放 在了方法的比较研究上 . Boc 2Asp (OcHex ) 2OBzl (3) 以 HCl 2

EtOAc 脱 Boc 时 , 将冰水冷却时间延长至 115h , 这似乎可使

脱保护更完全 , 3a 更纯 . 在制备 Boc 2G ly 2Asp (OcHex ) 2OBzl (4) 时 , 最初采用 DCC/HOBt 法 . 实验表明 , 该法反应速度中等

(17~20℃ /68h ) , 收率可达 8112%, 但除净 DCU 很困难 , 虽

多次滤除 (溶后冷却 , 滤除固状物 ) , 仍不能保证产物 (粘性无 色液体 ) 中不含 DCU. 此外 , 该二肽难于固化 , 冷冻研磨或

CH 2Cl 2/石油醚等混合溶剂重结晶 , 均未如愿得到固体 (更不

用说晶体了 ) . 其后 , 我们又以 CDI 为偶联试剂制备二肽 4. 实验发现 ,CDI 活化的偶联反应很快 ,27℃ /1715h 即反应完 全 . 常规洗涤后 , 粗产物已较纯 , 可以用于后续反应 . 为研究 方法 , 我 们 仍 进 行 了 柱 层 析 . 石 油 醚 /丙 酮 梯 度 洗 脱 , 以

8915%的收率得到纯品 . 企图让产物结晶的努力仍以失败告

终 . 从二肽 4制备三肽 Boc 2Arg (T os ) 2G ly 2Asp (OcHex ) 2OBzl

(T M ) 时 , 我们选用了 DCC/HOBt , DCC/HOSu , CDI , EDCI/HOBt 四种方法 . 实验表明 ,CDI 法反应最快 ,27℃ /1615h 即

反应 完 全 , 纯 化 简 单 , 收 率 中 等 (6718%) ; DCC/HOSu 法

(12~18℃ /50h ) 虽不如 CDI 法反应快 , 但纯化简单且收率

最高 (8414%) ; EDCI 法反应速度和 DCC/HOSu 法相近 (12℃ /17h +27℃ /17h +18℃ /20h ) , 收率也高 (8011%) ; 唯独

DCC/HOBt 法反应既慢 (10~12℃ /5515h +27℃ /1515h ) ,

收率还低 (4014%) . 这些方法所得泡状固体以丙酮 /石油醚 重结晶 , 可得白色晶体 , m. p. 148~150℃ . 经 T LC 法在多种

展开剂中展开及 NMR 检测 , 证实所得晶体就是目标物 T M. 至此 , 我们以两条路线、 多种方法合成了全保护三肽 RG D. 两条路线合成步骤相同 , 最好条件下的总收率相近 ;

Scheme 1每步产物均为固体 , 操作方便 ; Scheme 2合成试剂

相对便利 , 不需较贵的还原剂 Pd (OH ) 22C. 至于活化剂 ,CDI 综合性能最好 (反应快 , 收率高 , 后处理简单 ) ,DCC/HOBt 价 格最便利但实验后处理最麻烦 ,DCC/HOSu , EDCI/HOBt 综 合指数居中 , 实验中可灵活选用 .

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