巢式病例对照研究

范文一：巢式病例对照研究

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［分类ｐ号】１Ｒ１【ｃ图　１文献　标识码】Ｂ【章编号】０１— ７（３０６１０—７０８　文　４６６２０）３— ０５３

Ｏ

式巢例病对照研究（ｓｅ　ｅａｏｏｔｔｄ　又）Ｎｅ　ｔｄＣ－ｓＣｎｒＳｌｕｙ

Ｒｏｕｒ　ｄｉｅＭ “等￣ｓ１用采前性方瞻在法坦桑尼亚村农地区究研　

Ｖ２发病Ｖ间之关系。他的选择１７们２在例２Ｈ内年［ｖ　阳套称式病叠对照研究例队列内病或例照对究（ａ研－ｎｒＣｌＳＨ一Ｈ与ＩＣｍｔｏ　ｏ

ＳｕｙＮｔ　ｅ　　ｈｒ，是）病将例照对研究和队研列　ｔｄ　ｓｉａＣｏｏｔｄｅ

转ｎ病阴例作为观测对象，非匹方配选法６６Ｈ择Ⅳ阴性　对３例，检测照究对研象Ｈ的一Ｓ体抗，分析ＳＨ２Ｖ２一Ｖ与ＨⅣ 病之发

　的间关系。

　究

进组合行形后的一成种新的研究法方即在对一，事先个确定

好　的列队进随行观察的访基上础，再用病应例对研照究（要主　是

匹病例对照配研究）的计设思进行路研究分析。　

２１２回顾巢性式例对照病究研（￣．．Ｒ

ｅｖｔ　￣ａｅＮｅＣ　ｄ

ｎＣｌｒｄｔ）这：设种计类是型根研究开据始前的一之　ｏ段ｏ　ｔｕｙＳ

１设计理　原

式病巢例照对研究将病是例对照研究与队列研究的重新　组合后形成的一种新的设计路思其，设计原理是首先，根据一　

特定时的情间况选某择人一作群为研究Ｆ￣ＡＴ根据，现在的况情　Ｊ

定病例组确和照组，对在时１司其的上牛　为从去到过在现。　这寺种型的设类效计率高，能更很陕出果结但要求，有信完整息的　列且队队该列的生物标本学先事已集并保收，存故— 般很找难　完全符合条到件的队列。ＫｃｂｒＧ等回顾　性查２０调０ｓａ　￣Ｊ０　　克以上生儿５新　例８，新生儿水病例脱Ｏ，随ｌ选机对择照　ｌ３１例３４￣２根据临，床病和２历～３）龄４内话电问身询发体育　０状｛０６－￣４况

，结果发现应尽完早全母乳喂奶。　上述两种类型巢的病式例对照研究在料资的计统分和　析

定的条件确某一个人群定作研究为的队，收列队列集中个成　每

的员关有资料信息／和生物标，对本该队列访一随时段间，或　

将发生

在该队列内的疾病的发病新全部例挑选出来组，病成例　组，并为每

个病例取选一定量的数研对究象作对照组；对照为组均产生　该队于内部，属于其对列的病应发病例尚时发生未　

同相疾病人，的且并年按龄、性别、社会阶层因素等进行匹配　

（即危险抽集样，）然后分别抽病出组例和对组的相照关　资此

结果的推论

方等面处的理是同的相。　

料

及物生本标进行检、整理，查后按最例病照研对（究主要　是２按２对照的择选方法类分　．

配匹病例照对研）究的析方分进行资料法的计分统析推和。论　

２

１２．．匹巢式配病例照对究研（ｔｅＮｔ　ｅａ－ｏｔｌＭａｃｄｓＣ￣－ｅｒｎ　ｄｈＣｏ

Ｓｕ）：种类型的对照是这用匹配的法进行选择方的也就，　ｄｔｙ

２研究类型

　２１按列确定的队时间分　类

是每．当列队发生内个新病一的同例时在，队该列内按部年龄、　性别因素等选条件择同相相或近、当的时尚未发相同生疾的病

一２

１前瞻性１巢式病例照研对究（ｓｐｔｒｅ（ｍ　ａＮ－ｅ．．ｏｅＰｉｖｍｚｃｔ９Ｃ＿　Ｃｎｌｔｒ）ｄ：这设种类计型是在究开始研根据时一定的ｏ　ｔ　ｏｕｙＳ条件选择某一人作为群列，队后前然瞻地性访随一的定间确时　病定例组和对照，其组时在间上的特点为现在到从将来。　

或个几对象作个该病为例对照的，每病个可例择选ｌＯｌ～　

匹配对照＋（但常最用Ｋ４个的匹对照配。）～５　２２２匹配不式病巢对照研究例ｍａｃ（ｅｓ　ｄＣｓ－．．ＵｎｔｄｅｔＮ　￣ａ　ｅ

Ｃｈｎｒｔｌ）ｄ这种类型：的对照择选时不要任求条件的何　ｏｔｏＳｙ

ｕ继教医　０第第１ｌ５续育学２３　　卷期７

维

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匹配，只要求在病例发病时该象尚未对患所研的究疾病可即。　

暴露的素因经过ｌ的年变迁能会有可改所变（Ｏ饮食如习惯饮　、水习惯肠、相道关疾等病），都有能与当初基可线调查时有　所

不同。这些改变能会影可响结判论断的准确性。

陈　坤　采用该方进行法肠癌结直肠和癌险危素因研究。　

上述种两法方在设计、资料的统计分析方法等方面不完　

全

相，从目前能同集到收的资来看料绝大多数巢，式例病对　照研

究选择是的前种一型类，为因匹巢配式病例对照究研效的率　明显高于后者，且结果也易释解。

４　设计步骤【　４１

定研究目的：研究的是目确定

设步计骤的出发点故，必　．确须明本确次研究目的的，确定本次研究所要分的析疾病暴、

　３研特点　

究巢式例病照对究研将是两种同不的流病行分学析法方相　合组一的新种方，法此它因与统传方相法比有一些独特之。处　

３１统传的病例对照研究相Ｅ巢式：病例对研究照病例比　对与．　

露

协变量等、。　４２确定研究队列．巢：病式例照对究必须研在究研实施期初　确

定一个合适的群人作研究为队列。Ｉ０ｊ确定的根据不的同研究　人歹

目的，可选择以—般人群（例某如个几个农村或乡镇或城社　

区市，也）以可择职业人群选（例某个工厂或单位如的不同业职　

研究照有以下点优：）（巢病例式对研究照中的例与病对　照　１来

自于同队～，列此因降了低效估应计的时选偏择且倚比可性好；　）（巢式病例照对究中研的露资料暴在是疾病诊前收　断　２

集的如果，研结究果显示暴露疾病与存关在，联那该么联关　

的与群人），还可以是一特些殊人群（如患某疾种病的　人

群）例。　另外，对于列队的本量的样小必大有须个科一的学　估计，进入队列人数的不能过少否，可则能收集不足到的病　够例，也但不过宜多，则否作工过量大。—般来讲，巢病例式　

对照观察中队列人数应的据根发病率、例病的组暴露率、对照　

组

果推因断的间顺序时相符，而且合回偏忆小倚或可以避，因　免

果联系

的断推有更力；）（式病巢例对研究照统的计率和效　　

３验效率高于病检对照例究研，而且以可算疾计频率病例如累　

（

积病发率）。　３２

．与传统列研队究相比：巢式例病照研对比究统传ＩＵ　研　

究

的暴露率、许误允、０差和ｐ（Ｉ【类错误与 Ⅱ错误类）大的小等

　因来素定。确首先据病根例对研照的样本究估计公式计算出量　

有以下优点：（比）队列研究节约大了量的力人、物力财　　和１

力；（）式病巢对照研究可例于罕用病见研的究，为因需　不　２

所需病例的例组数，再用例病组的估计例数以除发率病计巢　算

病例式对照研究需所的研究列队人的数　

。要众多

研究对的。象例，如ＩＫ　２年在（９３１９）　橡Ｊｉ１７２－９５

胶工人中查仅发现调９冽道癌食病例根，据研究队列胶橡人工　性别中年龄和配原则选匹择Ｊ　，结发现果，橡胶人工　的照对道食癌的险危度

轻度上升能可与业职露于粉暴和化尘溶学有　

剂。关

　３４．确观察期限定根：据研所究病疾的征和特究研实施程中过　的实际情况，定确一　重个观的期察作为限对研究队进行列　随的访间时。访随的间时适应中，短则不过能集收到够足病的　例

，过长则浪费人、力物力和时间。　

４

收４集资和料生标本：物究队研确定后，列开始收集即队列　．

３

３．选用条：件以在下情况特时别宜用适式巢例对病照究研：　（在瞻性队前研究列随访开的始后出又现了种一的新病因假　１）设，这而种素未因被量测或测量者贵昂时，巢用病例式对研　

照内

每成个的基员资料础（姓名年、龄性别、民、、族业职文、化　度、婚姻史、住程址等）相，关暴资料（露研据究目根的　），协量变料资（吸烟、酒、饮性慢病史、并发症史、流产　史、

会社阶层饮食　习惯生活嗜、好家、族史身高、体重、　、

究很

有；利（）在究某研生些物学前体（ｌｉｃｇＦｃｔ　　２ＢｏｏｉＰｅｒ￣－ｒ）９某些与病疾联系的时（５变异与肿瘤的关），系　巢。如ＰＳ３

式病对照研例不究仅对物生学体的检前测省省时钱且，可以确　

知在病发疾生前些物这就质在存体于内。　

腰围臀围、Ｉ、、心率、血糖ｎ等，）以队列内每个成员及的　ｏｒ物生标本（血清、白细胞、其或它组织标本）并等妥保存善，

　以备将来检查所用。　

３４缺点

：巢式病例对照研究也存一些在缺点：（）式巢病　．　

例１对研照究在计统率效上队比列研略究损失有尽管，省了人节　

５４访并随定确例病组：对研究队列进行随访，确以定预定在．　观察期内所限新有发生的研究病的病例疾，作为研的究病例　组。除集病收组成例员发病况情外，还应集生活质量收疾病　、负担伤、残况隋、死亡等方的面息信。　６对４照的定：确确对照定有２．种方法，其一是研从究队中　列发病未人的间随机抽取中；其二在是个每例病发病时即立该　

在、力物力和力财无疑也部，分减了少统信计息量（；巢式　）　２病例照研对究索探病因的能力赖依评于价究因素研水平能　的力

，这可能会导致测量倚偏或遗漏例如。，陈　锎查坤结肠癌　和肠癌直危险素因发时现该，研项究随访时历１，年研究　Ｏ

所７Ｃ　ＩＭＩＬＴ　＇００＿６ｌＮＮＩ　Ａ￣ｖ＿Ｉ№３　Ｉｃ（Ｉ．ＮＯｌ．

１Ｎ２

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队列中选择一定数量的到

该病例病发尚未发展时成病该例病　的，人按年和龄性等与别该病例行匹配，进而确从立对照（该方法称密度　样或危抽集险样抽）。在大绝多数式病巢例对研照　中究选用都后者匹作对照配。　采用匹对照选择时应配注意下以点几（：）每个病匹　例　配对１照数的量定不， —般为１；（）个间匹时配是研究本　～５　２设计本质最特征的（）在某一；个间时上点为对照的作成　　员３，在来的随访后可能会发中展为例病，这影响巢不式对照研　究设的计分析步和骤（；某）一队个列成员可以被选作择　　为

几４种疾的病对照。

　方等）及法其他有的信用。　

息

５５访随ＩＧ．并发症人病：访随队列中９共年生发ＧＩ并发症６６　１Ｊ

。歹『　

５６匹用的配方选择法对照：当每发生一Ｇ个并症病发时，．Ｉ人　即该从列队中选择５名同年病人作为龄照。对　７５资料分析：病例．组对与照组确定后分别抽，出两组有资关　料进行分析。（累）发积病率＝．００　（年龄）＞０　１９００；２／１岁７，ＯＲＩ＝０，９Ｃ％．７．＝３　（透）析，Ｏ　６５Ｏ９Ｉ１Ｏ～；３Ｒ＝８，Ｉ％９．７５　ＣＩ＝２～９１；）（急应理处，ＯＲ．５１Ｉ．７　Ｉ．２．　８３＝９１９，％Ｃ＝Ｉ～０３

　４．０。

４７

．出病抽组例员和成对组照员成有的关料资生物标和本：　病组与对例照确组定后，从收已集好的整研究队列个的料资中抽　出上两述成组的相关资料员并从，本库中标抽出述两组成上员　

５

．８论：ＣＧ结以后，急处理应、年＞０龄Ｂ７Ａ、岁透析会显著地增　Ｇ并发加概率；症Ｇ发症出现对并者患有具更负面的影响ＩＩ。　

忉

参　考献　文

［Ｒｏ］ｒｕｓＭ，ｂｓＡＯ，ｏｓＭａＦ，ｅ　１　１ｄｉｅ　ｇａｉ　ｈ　ｔａ．ｅｐＨｓｍｓｘｐｅｒｉ　　ｌ

ｅｖｕ　ｉｙｐ　　ｎｒｆｓｔｅ１２ｃｅｔｏｎｎｉｅ　ｉｃｒａｅｓｓＨ　Ｉ１ｉＶ　ｅｄｃｅ：ｎａＰｏ　－　ｒ

生的物标进本实验行室相指标的检测关。由只于检测需例病　

和组对照组员成生的标本物，以节约可昂的贵物标本生检测的费　用这正，是巢式病例对研究尤照适用其于生物学前的相体研关　究的原

因之一。　

ｓｅｔｅｓｕｙｉｒｌａｒｚｎ［］ｐｉ　ｃｄｔ　　

ｕａＴｎａｉ．ＡＪＩｖｎ　ａＤＳ２，０；１）（：０２６３

　４４ —．５１　　

４８．

资料的析分和讨论：率对（累积病发率发病、度、密标化　［］

Ｅｓａｏ　２ｃ　ｒｂＪ，ＧＧｚｏｓＶＭ，ｌＡｒｔｎｏ　ｎａ　ｅｍｒｓｇＡ，ｅ　Ｍ１ｔａ．Ｒ　ｅ

—比等）、疾病

与暴露关的程度联Ｒ、Ｏ（ＲＯ９ｏ可信的间估区５０　／计、显著性检验）多、因素分（Ｏ析　Ｉｅｇ因单分析素多、因　　素回分归析非、件条Ｉｇｓｃｊ．廿因分析等素进）行分析（０详细见　

）５和讨论。　

ｈ

ｓｏ１ａ『ａｏｎｔｆ　ｏｎｔｌｄｙｄａｐ１ｔＩ　１ｏｒｅｚｎａ　ａｅｈｒｏｎ：ａｔｓｅｅ　　ｎｔｄａｓｃｅ－

　ｃｎｌｒｔｄ［ｏ】ｔ　ｏｕｙＪ．ｒＡｈＰｅｉ　ｔｏｃｅＭｅ，２０；１６ｓｃ　ｄａｒｄＡｌｓ　ｄＯ２５

（　：１５６．２）５—１１　

　［坤陈，剑蔡刘，希永，等．肠癌和直肠癌　３３］结研照究［］Ｊ中．流华行学病杂志，０；２２（）４：４　０９１２３６—４１

５

用应例　

Ｒ实ｃｔｅｈＭＨ　　Ｉ采用式病巢对例照研究方，法了一项作　冠动状搭脉桥术（ＡＢＣＧ后胃肠并）发的危险度症评价研究，　

过程其和结如果。下　

吴传，深东丰周，陈，等汶南林．Ａｌ县ｅｍｅ病危因险素的巢　式河ｚｉｒｈ病例对照分析［］Ｊ．中心理国卫生杂志２，０；１（）：４ —２　０３２７８５

．ｉＫＬＹ＆ｕＳＺ．ｅ０　　ｓｏｐｇｅ『ａｈｃａａｎｃｅｒａ　　ｎｄｏｃｃｕａｔｉａ『ｐｏｎ

　ｅｐ

ｓｒ　ｏｒｂｅ：Ａ　ｅｔｄｃｓ — ｏｔｓｕｙＪｏ．ｘｏｕｅ　ｔｕｂｎｓｒｅ　ｅａｃｎｒｔＩｄ］［　　Ａｎ

　ｎｃｃｏｕ　Ｙｇ．２ＨＯｐＯＯ４４：（）３：５５　５５３９—．

５１究目的：评冠状价脉动桥术搭ＡＢ（．ＣＧ研）后胃肠（ＩＧ）　并发

的症危度。险　５

确定２队列将：连续９住院例病７３５病例为作观察队　．　年４

例玲，周旭，徐胡亮天等．，糖型尿病高人危的早期预群测其评及　２

［】Ｊ价中．国公共生，２卫Ｏ４；Ｏ２）（：３２２４．０９３—９　

Ｒｅｃ　ｈｔＭＨ，Ｓｍｉｈ，ＪｏＷｄｓｏＳＥ，ｔｅ．Ｐａｒｄｉｒ　ｎｄｏｔ

　Ｍ　　１ｅｔｓｃａ　ｏ

ｔｕｃｍｏｓｅｏｆｇａＳｔｏ１ｅｓｎ　ｔ　ｒｎＩｔａｐｌ『ｉｃｔａｎｏｓｎｔａｅｎｓｉｉ　ｐ　ｔｉ　ｕｅｒｎｄｏｉｇｎ　ｇｃｏｏｎｒｙａａｒｅｂｙｓｓｙｒｇｔｓｕｅｒｇｒ　ｔｒ　ｐａ　ａｆ　ｒ：ｙａ

　列

，中其６例出现Ｇ发并症，用采式巢例病照研对究，择选　６Ｉ：配１对照病例对，３共０对照例病。５个３　

ｏｐｃｉｅｐｅｔｄｃｓ－ｃｔ　ｏｄｔ［］　ｉ　ｒｓｅｔ，ｓｅｎ　ａｅｏｎｒｌｕｙｄ．ＡｍＣｄｏｖｌｓ　

５

３确定观察期：共察观９。．年　

Ｓｒｕｇ，２ＯＯ４；１８（）：７４７　７５２－４９．

５４

资收料集：对研究队列内每的个成员都记录 —其股况情，．

【稿Ｅ期收：０２— —２１］ｌ０２５５　

包

括并Ｇ症的发关情有（况Ｉ发病程、过情病、疗过治程治疗、　

【

文编辑贾：云鹰］本　

继医教　第０第１　７续学育２７　３卷Ｊ

期

范文二：巢式PCR

巢式PCR

目录巢式PCR的定义: 巢式PCR反应: 巢式PCR的实验步骤: 巢式PCR的应用

巢式PCR的定义:

巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR)，使用两对(而非一对)PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物(因为他们在第一次PCR扩增片段的内部)结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。巢式PCR的好处在于，如果第一次扩增产生了错误片断，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。因此，巢式PCR的扩增非常特异。巢式PCR反应:

巢式PCR通过两轮PCR反应，使用两套引物扩增特异性的DNA片断。第二对引物的功能是特异性的扩增位于首轮PCR产物内的一段DNA片断。第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在内引物的存在下进行第二轮扩增。从而提高反应的特异性。

巢式PCR反应模式图:

巢式PCR的实验步骤:

第一步:目标的DNA模板蓝色的第一对引物结合。第一对引物也可能结合到其他具有相似结合位点的片段上并扩增多种产物。但只有一种产物是目的片断(图中未显示可能的多种产物)。

第二步:使用图中红色标记的第二套引物对第一轮PCR扩增的产物进行第二轮PCR扩增。

由于第二套引物位于第一轮PCR产物内部，而非目的片断包含两套引物结合位点的可能性极小，因此第二套引物不可能扩增非目的片断。这种巢式PCR扩增确保第二轮PCR产物几乎或者完全没有引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染。

巢式PCR的应用

一般应用于动物方面。如:病毒，梅毒螺旋体，HIV，肿瘤基因等

在RACE(rapid-amplification of cDNA ends)中，也利用巢式PCR增加特异性

在Illumina公司平台的第二代高通量测序中，也应用类似巢式PCR的原理，进行目的片段的扩增。

如图，首先在目的片段通过TA克隆，引入一个片段，然后在特定的一个Flow Cell固定大量的特异探针，通过PCR反应的特异性，扩增目的片段，然后继续应用于下一步测序

巢式PCR，可以在10的六次方基因组背景下检测到一个拷贝的病毒基因，也不像二次PCR容易产生成片的产物，是效果最好的PCR，但也因此是最容易污染的PCR。

范文三：巢式PCR

巢式 PCR 目录

巢式 PCR 是一种变异的聚合酶链反应 (PCR), 使用两对 (而非一对) PCR 引物扩增完整的片段。第一对 PCR 引物扩增片段和普通 PCR 相似。第二对引物称为巢式引物(因为他们在第一次 PCR 扩增片段的内部)结合在第一次 PCR 产物内部,使得第二次 PCR 扩增片断短于第一次扩增。巢式 PCR 的好处在于,如果第一次扩增产生了错误片断,则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。因此,巢式 PCR 的扩增非常特异。

编辑本段

巢式 PCR 反应:

巢式 PCR 通过两轮 PCR 反应,使用两套引物扩增特异性的 DNA 片断。第二对引物的功能是特异性的扩增位于首轮 PCR 产物内的一段 DNA 片断。巢式 PCR 反应模式图:

编辑本段

巢式 PCR 的实验步骤:

第一步:目标的 DNA 模板蓝色的第一对引物结合。第一对引物也可能结合到其他具有相似结合位点的片段上并扩增多种产物。但只有一种产物是目的片断(图中未显示可能的多种产物)。

第二步:使用图中红色标记的第二套引物对第一轮 PCR 扩增的产物进行第二轮 PCR 扩增。

由于第二套引物位于第一轮 PCR 产物内部,而非目的片断包含两套引物结合位点的可能性极小,因此第二套引物不可能扩增非目的片断。这种

巢式 PCR 扩增确保第二轮 PCR 产物几乎或者完全没有引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染。

编辑本段

巢式 PCR 的应用

一般应用于动物方面。如:病毒,梅毒螺旋体, HIV ,肿瘤基因等巢式 PCR ,可以在 10的六次方基因组背景下检测到一个拷贝的病毒基因,也不像二次 PCR 容易产生成片的产物,是效果最好的 PCR ,但也因此是最容易污染的 PCR 。

范文四：巢式PCR

巢式PCR

Definition of Nested PCR :巢式PCR的定义:

Nested PCR is a variation of the polymerase chain reaction (PCR), in that two pairs (instead of one pair) of PCR primers are used to amplify a fragment. The first pair of PCR primers amplify a fragment similar to a standard PCR. However, a second pair of primers called nested primers (as they lie / are nested within the first fragment) bind inside the first PCR product fragment to allow amplification

of a second PCR product which is shorter than the first one.

The advantage of nested PCR is that if the wrong PCR fragment was amplified, the probability is quite low that the region would be amplified a second time by the second set of primers. Thus, Nested PCR is a very specific PCR amplification. The Nested PCR Reaction

Nested PCR requires two sets of primers which are used to amplify a specific DNA fragment using two

separate runs of PCR.,. The second pair of primers function to amplify a smaller specific DNA fragment located within the first PCR product.

Nested PCR Reaction Diagram巢式聚合酶链反应图

Steps of the Nested PCR巢式PCR的步骤

Step One: The DNA target template is bound by the first set of primers shown in blue .. The primers may bind to alternative, similar primer binding sites which give multiple products however only one of these PCR products give the intended sequence (multiple products not shown).

Step Two: PCR products from the first PCR reaction are subjected to a second PCR run however with a second new set of primers shown in red

As these primers are NESTED within the first PCR product, they make it very unlikely that non-specifically amplified PCR product would contain binding sites for both sets of primers.. This nested PCR amplification ensures that the PCR product from the second PCR amplification has little or no contamination from non-specifically amplified PCR products from alternative primer target sequences.

巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR),这两组(而非一对)PCR引物可用来扩增片段.第一对PCR引物扩增的片段与片段准相近. 第二对引称为巢式引物(因为他们巢嵌在第一片段内部). 与第一段PCR产物结合，来指导第二段PCR产物的合成，这段产物比第一段产物要短。巢式PCR的好处是,如果错误的PCR产物被扩增，那么由第二段引物指导的第二次扩增的产物错误的可能性将是非常低的.巢式聚合酶链反应巢式PCR需要两套引物用于放大特定的DNA片，应用两次单独的PCR来进行。第二对引功能扩增较小的特定DNA片段，该片段位于一次PCR产物内部因此,巢式PCR扩增是非常特异的.第一步:目标DNA片段与第一段引物(兰色)结合。引物可能回选择性的结合于模板，相似的引物结合位点会产生多重的产物，然而，只有一段产物是我们预期的。第二步:应用一次PCR产物区段，通过二次新的引物结合位点进行二次PCR(红色)。这些引物嵌套在一次PCR产物的内部，因此，非特异性片段的产生是不太可能的，一次PCR产物包含着二次PCR引物的结合位点。这种巢式PCR产物保证了通过二次PCR得到的产物很少有或者没有污染(杂带，也就是产物是符合我们需要的)也就是没有非特异性的条带

范文五：巢式PCR

巢式PCR

1.增效PCR，booster PCR,

当增少于扩扩扩扩1000拷的模板扩扩扩扩DNA扩扩扩扩扩会遇到两个:一是形成引物二聚体,一是非特异增,消耗了引物扩扩扩扩扩扩扩扩和,而特异增片段量降低。于情况,可置二扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩步

PCR,先用低度的引物行初扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩PCR,此由于引物扩扩扩扩扩少,形成引物二聚体的可能减少,但它并不影响靶序列的扩增,只是由于引物少量不高。扩扩扩扩扩扩扩15,20个循后充引物扩扩扩扩扩扩量,以初扩PCR扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩物模板行增,靶序列的

量将相增加。扩扩扩扩

2.巢式PCR

此也是行二扩扩扩扩扩扩扩步PCR,与上面不同的是,第二扩PCR需另行扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩置反体系,并用另外的PCR引物,此引物的位扩扩扩扩扩置位于初扩PCR引物的内,用初扩扩扩扩扩PCR扩扩扩扩扩扩物做模板,行第二步PCR,只有初扩扩扩扩扩扩PCR中特异的增片段才能被二扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩引物增。

　　　除了达到增效PCR同的目的外,提高了扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩最物的特异性。扩扩扩扩扩扩扩扩

巢式PCR:利用两套PCR引物行两扩扩扩扩扩PCR扩扩扩扩扩增反成,在第一增中,外引物用以生增物,扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩

此物在在内引物的存在下行第二增扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩

,巢式RT- PCR,扩扩扩扩扩扩扩扩扩方法的特点是需要两引物,

一引物增稍片段,在一增范扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩

内再一引物,增的物是以第一扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩

引物的物模版扩扩扩扩扩

3.RT-PCR

RT-PCR是以mRNA扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩模板,逆作用合成cDNA。使微量的mRNA，pg水平,迅速增，达扩扩扩扩ng,ug水平,,大大提高mRNA的出灵敏度。用于基因表达与控的研究。扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩

4.基因芯片

，又称DNA芯片,生物芯片,DNA探微列,,它扩扩扩扩扩扩扩集成了大量的密集排列的基因探,通与被基因扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩的碱基序列行互配,核酸序列的分子扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩。能在同一内分析大量的基因,生

物基因信息的大模。扩扩扩扩扩

基因芯片是指将大量探分子固定于支持物上,然后与的品针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针行交,通交信号的弱判断靶分子的数量强

1.基因芯片的制:针针

1原位合成(in situ Synthesis):

,光引原位合成针针:

,通使用针针针4支分装有针针针A,T,G,C核苷的针针针

针在芯片上并行地合成出DNA探针

2合成后交(post-synthesis attachment)针:

,探制:针针针针

,点:化学射法针针针针针针针 ,针点法

2.针针针品的制:

提取DNA或RNA,PCR或RT-PCR针针针针针针针针针增,入光染料

3.针交

芯片的交属于固液反相交即探分子固定于芯片表面针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针针, 与液相的靶分子行反针针针针

4.针针针针针针针针针针针交的和料分析

5.cDNA文:扩扩

提取出胞的全部扩扩扩扩扩扩扩mRNA,在体外反成扩扩扩cDNA,与适当的体常用噬菌体或粒体接后化受体菌,扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩个菌含有一段每

cDNA,并能繁殖增,包含着胞全部扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩mRNA信息的cDNA克隆集合称胞的扩扩扩扩扩扩扩cDNA文。扩扩

扩扩扩扩扩扩扩不包含内含子的基因文。

cDNA 文中的外源扩扩扩扩扩 DNA 片段是互扩 DNA ，complementary DNA , cDNA,。 cDNA 是由生物的某一特定器官或特定育期胞内的扩扩扩扩扩扩扩扩 mRNA 扩扩扩扩扩体外反后形成的双扩 cDNA 。

cDNA文是指胞全部扩扩扩扩扩扩扩mRNA逆成扩扩扩cDNA并被克隆的和,代表生物的某一特定器官或特扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩

定育期胞内水平上的基因的群体,扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩

并不能包括生物的全部基因扩扩扩扩扩扩扩扩

cDNA 文的构建扩扩扩扩

cDNA 文的构建共分四扩扩:步

第一,胞扩扩扩 RNA 的提取和 mRNA 分离,

第二,第一扩 cDNA 合成,

第三,第二扩 cDNA 合成,

第四,双扩 cDNA 克隆粒或噬菌体体并入扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩扩宿主中繁殖。

,双针DNA合成后,利用核酸针S1切去回折针针针DNA,但会使

cDNA失去5‘端部分序列。在少用针针针针针

,RNaseH 部分水解交中的针针针针针RNA针,但留下一些小片段

RNA,作合成针针针cDNA第二的引物。需要加入针针针针针针针针针针DNA针接

针针接合成片段

,末端移在针针针针cDNA第一针3’端添加一寡聚寡聚核针针针针针针

苷酸尾巴,然后以配的寡聚物作引物合成第二针针针针针针针针针针针针针针6. DNA针序:

DNA 的序列分析的两基本方法:针针针针针针

,化学法Maxam-Gilbert

,针法Sanger,双脱氧止法针针针

针针针针针针针针在全自序仍然沿用Sanger 氏法,但是针针针针针在上作了改针针针针针针针

1.双脱氧止法:针针针针

双脱氧核苷酸(ddNTP) 的脱氧核糖的 3‘ 位置的 -OH 缺失。

当它与其他正常核苷酸混合在同一个增反体系中针针针针针针针针在 DNA 多聚的作用下,然它也能象正常针针针针针针针针针针针针针针针核苷酸一参与针针针 DNA 合成,以其 5' 位置的磷酸基,与上位脱氧核苷酸的 3' 位置的 -OH 针合,但是,由于它自身3' 位置 -OH 的缺失,至使下位核苷酸的 5' 磷酸基无法与之针针合

针程:

,针针4针针针针针反体系:

,都含有正常的4针dNTP，其中一用同位针针针针

素针针针,

,针针DNA模板，即待针DNA,

,引物和DNA聚合针I

,每针针针针针针针分各加入一ddNTP

,如果是 dNTP 针入其中,DNA 互将针针针针针针针针延伸

下去,

,如果是 ddNTP 针入其中,DNA 互的合成到针针针针针针针

此止。由于双脱氧核苷酸的入针针针针针针针针针针针针针针

是随机的,故各个新生 DNA 片段的度互不相同针针针针针针通聚针针针针针针针针针针针针针针针针针针丙胺凝胶泳，能分辨出小至一个碱基度针针针针差的DNA 片段,,将混合物中不同度针针针针针针针 DNA 片段分离,再通针针针针针针针针针针针针针针针放射自影,根据片段尾部的双脱氧核苷酸出针针针 DNA 的碱基排列序针针

2.DNA 自动动序,

,基于 Sanger 动动止法的原理～只不动用四动不同的动光染料双脱氧

分动动动 ddATP、ddTTP、ddCTP、ddGTP 。

,动四动动光染料在激光激动下动出不同波动的动光～因而每一动动光代表一

动基。碱

,延伸中的 DNA 互动动分动动止于不同动光动动的

ddATP、ddTTP、ddCTP、ddGTP

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