孤独是久治不愈的绝症丶
米 力
第四军医大学细胞工程中心，国家863西安细胞工程基地
陕西西安，710032
动物细胞培养工艺的选择首先考虑的重要一点是该产品所涉及的生物反应器系统。选择反应器系统也就是选择产品的操作模式，操作模式选择将决定该产品工艺的产物浓度、杂质量和形式、底物转换度、添加形式、产量和成本，工艺可靠性等。与许多传统的化学工艺不同，动物细胞反应器设备占整个工艺资金总投入的主要部分（＞50%），也就是说动物细胞培养工艺的选择主要部分是生物反应器系统的选择。选择反应器系统及培养工艺时，必须对工艺的整体性进行全面考虑，主要包括以下几个方面：细胞株及生长形式、产物表达量和稳定性，培养基质及代谢物，产物分离和纯化难度等。
动物细胞大规模培养的生物反应器操作模式，一般分为分批式操作（batch）、流加式操作（Fed-batch）、半连续式操作（semi-continuous）、连续式操作（continuous）和灌流式操作（perfusion）五种操作模式。
1. 批式操作（batch culture）
批式操作是动物细胞规模培养发展进程中较早期采用的方式，也是其它操作方式的基础。该方式采用机械搅拌式生物反应器，将细胞扩大培养后，一次性转入生物反应器内进行培养，在培养过程中其体积不变，不添加其它成分，待细胞增长和产物形成积累到适当的时间，一次性收获细胞、产物、培养基的操作方式。
该方式的特点:(1) 操作简单。培养周期短，染菌和细胞突变的风险小。反应器系统属于封闭式，培养过程中与外部环境没有物料交换，除了控制温度、pH值和通气外，不进行其他任何控制，因此操作简单，
容易掌握；(2)直观的反应细胞生长代谢的过程。 由于培养期间细胞的生长代谢是在一个相对固定的营养环境，不添加任何营养成分,因此可直观的反应细胞生长代谢的过程,是动物细胞工艺基础条件或"小试"研究常用的手段；(3)可直接放大。由于培养过程工艺简单，对设备和控制的要求较低，设备的通用性强，反应器参数的放大原理和过程控制，比较其它培养系统较易理解和掌握，在工业化生产中分批式操作是传统的、常用的方法，其工业反应器(Genetech)规模可达12000L。
分批培养过程中，细胞的生长分为五个阶段：延滞期、对数生长期、减速期、平稳期和衰退期，见图1。分批培养的周期时间多在3~5天，细胞生长动力学表现为细胞先经历对数生长期（48~72h）细胞密度达到最高值后，由于营养物质耗劫或代谢毒副产物的累积细胞生长进入衰退期进而死亡，表现出典型的生长周期。收获产物通常是在细胞快要死亡前或已经死亡后进行。
图1 分批式培养动物细胞生长曲线
经过改进的搅拌式生物反应器，目前仍是大规模培养动物细胞用以生产各种药物的主要设备，也是早期用以生产单抗的主要途径。在用搅拌式生物反应器分批式培养单抗中，最多采用的是微囊或巨载体培养。与一般的悬浮培养比较，杂交瘤细胞依托微囊化或巨载体后，相对固定化，降低了搅拌培养时对细胞的剪切
力，提高了细胞的密度和稳定性及生产率。在1986年以前，采用此种方式培养的杂交瘤细胞就有100多种。
2. 流加式操作（fed-batch culture）
流加式操作是在批式操作的基础上，采用机械搅拌式生物反应器系统，悬浮培养细胞或以悬浮微载体培养贴壁细胞，细胞初始接种的培养基体积一般为终体积的1/2 ～1/3，在培养过程中根据细胞对营养物质的不断消耗和需求，流加浓缩的营养物或培养基，从而使细胞持续生长至较高的密度，目标产品达到较高的水平，整个培养过程没有流出或回收，通常在细胞进入衰亡期或衰亡期后进行终止回收整个反应体系，分离细胞和细胞碎片，浓缩、纯化目标蛋白。
流加培养主要有以下特点：
1） 流加培养根据细胞生长速率、营养物消耗和代谢产物抑制情况，流加浓缩的营养培养基，流加的速率通常与消耗的速率相同，根据测得的底物浓度控制相应的流加过程，以保证合理的培养环境与较低的代谢产物抑制水平。
2） 培养过程以低稀释率流加，细胞在培养系统中停留时间较长，总细胞密度较高，产物浓度较高。
3） 流加培养过程须掌握细胞生长动力学，能量代谢动力学，研究细胞环境变化时的瞬间行为。流加培养细胞培养基的设计和培养条件与环境优化，是整个培养工艺中的主要内容。
4） 在工业化生产，悬浮流加培养工艺参数的放大原理和过程控制，比较其它培养系统较易理解和掌握，可采用工艺参数的直接放大。
流加培养工艺是当前动物细胞培养工艺中占有主流优势的培养工艺，也是近年来动物细胞大规模培养研究的热点。流加培养工艺中的关键技术是基础培养基和流加浓缩的营养培养基。通常进行流加的时间多在指数生长后期，细胞在进入衰退期之前，添加高浓度的营养物质。可以添加一次，也可添加多次，为
了追求更高的细胞密度往往需要添加一次以上，直至细胞密度不再提高；可进行脉冲式添加，也可以降低的速率缓慢进行添加，但为了尽可能的维持相对稳定的营养物质环境，后者采用较多；添加的成分比较多，凡是促细胞生长的物质均可以进行添加。流加的总体原则是维持细胞生长相对稳定的培养环境，营养成分即不过剩而产生大量的代谢副产物造成营养利用效率下降而成为无效的利用；也不缺乏导致细胞生长抑制或死亡。
流加工艺中的营养成分主要分为三大类：
1） 葡萄糖。葡萄糖是细胞的供能物质和主要的碳源物质，然而当其浓度较高是会产生大量的代谢产物乳酸，因而需要进行其浓度控制，以足够维持细胞生长而不至于产生大量的副产物的浓度为佳；
2） 谷氨酰胺。谷氨酰胺是细胞的供能物质和主要的氮源物质，然而当其浓度较高是会产生大量的代谢产物氨，因而也需要进行其浓度控制，以足够维持细胞生长而不至于产生大量的副产物的浓度为佳；
3） 氨基酸、维生素及其他。主要包括营养必需氨基酸、营养非必需氨基酸、一些特殊的氨基酸如羟脯氨酸、羧基谷氨酸和磷酸丝氨酸；此外还包括其他营养成分如胆碱、生长刺激因子。添加的氨基酸形式多为左旋氨基酸，因而多以盐或前体的形式替代单分子氨基酸，或者添加四肽或短肽的形式。在进行添加时，不溶性氨基酸如胱氨酸、酪氨酸和色氨酸只在中性pH值部分溶解，可采用泥浆的形式进行脉冲式添加；其他的可溶性氨基酸以溶液的形式用蠕动泵进行缓慢连续流加。
流加式操作分为两种类型：单一补料分批式操作和反复补料分批式操作。
1） 单一补料分批式操作是在培养开始时投入一定量的基础培养液，培养到一定时期，开始连续补加浓缩营养物质，直到培养液体积达到生物反应器的最大操作容积，停止补加，最后将细胞培养液一次全部放出。该操作方式受到反应器操作容积的限制，培养周期只能控制在较短的时间内。
2） 反复补料分批式操作是在单一补料分批式操作的基础上，每个一定时间按一定比例放出一部分培养液，
是培养液体积始终不超过反应器的最大操作容积，从而在理论上可以延长培养周期，直至培养效率下降，才将培养液全部放出。
3.半连续式操作（semi-continuous culture）、重复批式操作（repeated batch culture）、换液操作（medium change culture） 半连续式操作又称为重复分批式操作或换液操作。采用机械搅拌式生物反应器系统，悬浮培养形式。在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，从中取出部分培养物，再用新的培养液补足到原有体积，使反应器内的总体积不变。
这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基，让其生长至一定的密度，在细胞生长至最大密度之前，用新鲜的培养基稀释培养物，每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4，以维持细胞的指数生长状态，随着稀释率的增加培养体积逐步增加。或者在细胞增长和产物形成过程中，每隔一定时间，定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连同细胞、载体一起取出，然后补加细胞或载体，或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。剩余的培养物可作为种子，继续培养，从而可维持反复培养，而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量，经过几次的稀释、换液培养过程，细胞密度常常会提高。
半连续式操作的特点为：1）培养物的体积逐步增加；2）可进行多次收获；3）细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平，培养过程可延续到很长时间。
该操作方式的优点是操作简便，生产效率高，可长时期进行生产，反复收获产品，可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平，见图3-3-3。在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。
4. 连续式操作（continuous culture）
连续式操作是一种常见的悬浮培养模式，采用机械搅拌式生物反应器系统。该模式是将细胞接种与一定体积的培养基后，为了防止衰退期的出现，在细胞达最大密度之前，以一定速度向生物反应器连续添
加新鲜培养基；与此同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积的恒定。理论上讲，该过程可无限延续下去。连续培养的最大优点是反应器的培养状态可以达到恒定，细胞在稳定状态下生长。稳定状态可有效的延长分批培养中的对数生长期。在稳定状态下细胞所处的环境条件如营养物质浓度、产物浓度、pH值可保持恒定，细胞浓度以及细胞比生长速率可维持不变。细胞很少受到培养环境变化带来的生理影响，特别是生物反应器的主要营养物质葡萄糖和谷氨酰胺，维持在一个较低的水平，从而使他们的利用效率提高，有害产物积累有所减少。然而在高的稀释率下，虽然死细胞和细胞碎片及时清除，细胞活性高最终细胞密度得到提高；可是产物却不断在稀释，因而产物浓度并为提高；尤其是细胞和产物不断的稀释，营养物质利用率、细胞增长速率和产物生产速率低下。此外，连续式操作还有一些不足，如：1）由于是开放式操作，加上培养周期较长，容易造成污染；2）在长周期的连续培养中，细胞的生长特性以及分泌产物容易变异；3）对设备、仪器的控制技术要求较高。
连续式操作使用的反应器多数是搅拌式生物反应器，也可以是管式反应器。
连续式操作的特点为：1）细胞维持持续指数增长；2）产物体积不断增长；3）可控制衰退期与下降期。
5. 灌流式操作（perfusion culture）
灌流式操作是把细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，不断地将部分条件培养基取出，同时又连续不断地灌注新的培养基。它与半连续式操作的不同之处在于取出部分条件培养基时，绝大部分细胞均保留在反应器内，而半连续培养在取培养物时同时也取出了部分细胞。
灌流式操作常使用的生物反应器主要有两种形式。一种是用搅拌式生物反应器悬浮培养细胞，这种反应器必须具有细胞截流装置，细胞截留系统开始多采用微孔膜过滤或旋转膜系统，最近开发的有各种形式的沉降系统或透析系统。
中空纤维生物反应器是连续灌流操作常用的一种。它采用的中空纤维半透膜，透过小分子量的产物和底物，截流细胞和分子量较大的产物，在连续灌流过程中将绝大部分细胞截留在反应器内；近年来中空纤维生物反应器被广泛应用于产物分泌性动物细胞的生产，主要用于培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体。
另外一种形式是固定床或流化床生物反应器，固定床是在反应器中装配固定的篮筐，中间装填聚脂纤维载体，细胞可附着在载体上生长，也可固定在载体纤维之间，靠上搅拌中产生的负压，迫使培养基不断流经填料，有利于营养成分和氧的传递，这种形式的灌流速度较大，细胞在载体中高密度生长。流化床生物反应器是通过流体的上升运动使固体颗粒维持在悬浮状态进行反应，适合于固定化细胞的培养。
灌流式操作的共同优点是：①细胞截流系统可使细胞或酶保留在反应器内，维持较高的细胞密度，一般可达107-109/ml，从而较大的提高了产品的产量；②连续灌流系统，使细胞稳定的处在较好的的营养环境中，有害代谢废物浓度积累较低；③反应速率容易控制，培养周期较长，可提高生产率，目标产品回收率高；④产品在罐内停留时间短，可及时回收到低温下保存，有利于保持产品的活性。连续灌注培养法是近年来用于哺乳动物细胞培养生产分泌型重组治疗性药物和嵌合抗体，以及人源化抗体等基因工程抗体较为推崇的一种操作方式。应用连续灌流工艺的公司有Genzyme, Genetic Institute, Bayer公司等。 灌流连续操作的最大的困难是污染机率较高，长期培养中细胞分泌产品的稳定性，以及规模放大过程中的工程问题。
动物细胞培养用生物反应器
动物细胞培养用生物反应器
CLAVORUS
TM
A/B型
北京天和瑞生物科技有限公司
目 录
1. 概述...........................................................................................................2 2. 反应器型号.................................................................................................3 3. 标准配置....................................................................................................4 4. 功能描述....................................................................................................4 5. 反应器硬件.................................................................................................6 6. 控制系统....................................................................................................8 7. 远程控制..................................................................................................10 8. 使用案例..................................................................................................10 9. 联系方式..................................................................................................19
1. 概述
CLAVORUS
TM
A/B型动物细胞培
养用生物反应器，是符合医药卫生要求的、用于制药行业细胞培养的、工业化规模生物反应器，适用于动物细胞微载体悬浮培养，以及动物细胞悬浮培养，是进行各种细胞培养的理想工具。
CLAVORUS
TM
A/B型动物细胞培
养用生物反应器，设计充分体现了动物细胞大规模培养技术的特点，管道布局
CLAVORUSTM 100反应器用于疫苗新工艺开发
简洁、选材优质、制造精良。反应器系统具有良好的功能性、可靠性、方便性，有效保证了细胞培养的效果，体现了良好的经济性和功能性。
CLAVORUS
TM
A/B型动物细胞培养用生物反应器，具有以下优势和特点：
? 国内自行设计、开发、并工业化使用的动物细胞反应器，具有优越的性
能和经济性。
? 管路布局合理、简洁，有效消除管路灭菌死角，并实现了管路在线灭菌
功能。反应器使用简单方便，灭菌效果可靠，为反应器无菌控制提供了有效保障。
? 搅拌系统采用先进的磁力搅拌器装置，代替传统的机械搅拌装置，由于
去除了机械密封，使反应器系统完全与外界隔绝，具有更优良的系统密封性，保证了反应器长时间无菌运行安全性。同时由于去除机械密封，易清洁，更符合医药行业要求。
? 深层通气系统采用微泡发生器提供溶氧，气泡更小、更均匀，溶氧传递
效果良好，并且通过设计优化，减少气体使用的种类，使用方便。 ? 采用称重系统控制反应器料液体积，可实现灌流培养要求，操作简单可
靠。
? 反应器灭菌使用蒸汽在线灭菌，自动化程度高，并可进行手动操作灭菌，
使用方便。
方便。
? 反应器采用蒸汽和电加热两种控温方式，反应器运行温度控制更加灵敏、
? 电极、仪表、控制器、阀门等重要设备和原器件，均选用品质优良的进
口设备，充分保证了反应器使用可靠性和运行稳定性。
? 触摸屏控制设计，外加计算机终端远程控制，可实现反应器的运行参数
显示、控制、校正、存储、查询等功能，功能强大、使用方便。 ? 可配备细胞截留系统，实现细胞的微载体培养，以及细胞悬浮培养的高
密度培养，培养效果良好。
2. 反应器型号
我们可提供以下型号的标准设计反应器，也可定制其它非标规格反应器。
反应器型号
CLAVORUSTM A 100 CLAVORUSTM A 500 CLAVORUSTM A 600 CLAVORUSTM A 1200 CLAVORUSTM B 100 CLAVORUSTM B 500 CLAVORUSTM B 600 CLAVORUSTM B 1200
工作体积（L）
80 420 500 1000 80 420 500 1000
灭菌方式
手动灭菌 手动灭菌 手动灭菌 手动灭菌
自动灭菌/手动灭菌 自动灭菌/手动灭菌 自动灭菌/手动灭菌 自动灭菌/手动灭菌
3. 标准配置
项目
型号VORUS
系统参数
TM
A型VORUS
TM
B 型
罐体材质不锈钢不锈钢 设计压力灭菌方式 搅拌控制 温度控制
制
pH控制 溶氧控制 称重控制
进口pH电极，控制器，PID控制 进口溶氧电极，控制器，PID控制 进口称重模块，PID控制
控制
进口pH电极，控制器，PID控制 进口溶氧电极，控制器，PID控制 进口称重模块，PID控制
压缩空气、氧气、二氧化碳气体，气
压缩空气、氧气、二氧化碳气体，电
气体系统
磁阀自动控制，布器。
压力控制
无
气体比例调节阀、PID控制 动隔膜阀自动控制，内置微孔气体分
手动灭菌 底部磁力搅拌
0.27Mpa 自动灭菌/手动灭菌 底部磁力搅拌
夹套电加热/蒸汽加热，双温度PID控夹套电加热/蒸汽加热，双温度PID
液晶触摸屏显示、配置独立溶氧、PH液晶触摸屏显示、配置独立溶氧、PH控制系统
称重控制器。
远程控制
称重控制器。
无VORUSTM远程控制软件
4. 功能描述
CLAVORUS
TM
A/B型动物细胞培养用生物反应器系统，包括罐体、支架管
路、控制柜三部分，采用触摸屏软件控制，并可配备计算机终端远程控制功能，可实现反应器搅拌、温度、PH、溶氧、称重、罐体压力、蒸汽灭菌等控制，并具备数据记录和查询功能。
4.1 搅拌控制
搅拌组件采用底部磁力搅拌，磁力搅拌器与反应器形成一定夹角，带动料液转动产生涡流，实现料液充分混合。磁力搅拌器采用无极变速，运行平稳。
4.2 温度控制
采用夹套对反应器进行温度控制。夹套系统配备蒸汽混合器和电加热器，蒸汽混合器提高了反应器温度上升的速度，电加热器提高了反应器温度控制的灵敏性和稳定性。反应器温度控制系统采用基于罐体温度、夹套温度的双温度PID控制方式，温度补偿功能使控温更加稳定。
4.3 pH控制
采用独立模块控制方式，PH控制器单独设置。使用PID控制模式实现自动控制，具有自适应PID控制调整功能，可自动设定最佳的PID参数。pH控制与二氧化碳通气控制阀，以及酸、碱蠕动泵相关联，通过控制二氧化碳、酸液、碱液的开关，实现pH的自动控制。当pH 低于设定值时，控制器启动碱液蠕动泵，补碱提高pH至设定值；当pH高于设定值时，控制器启动二氧化碳气体电磁阀，以及酸液蠕动泵，降低pH至设定值。二氧化碳流量可通过转子流量计调节，酸液、碱液蠕动泵流量可通过泵调速阀进行调节，进一步提高了pH控制的灵敏度。
4.4 溶氧控制
采用独立模块控制方式，溶氧控制器单独设置。使用PID控制模式实现自动控制，具有自适应PID控制调整功能，可自动设定最佳的PID参数。溶氧控制与氧气通气控制阀关联，通过控制阀开关，实现溶氧的自动控制。当溶氧低于设定值时，控制器启动控制阀，向反应器中通氧气提高溶氧至设定值。氧气流量可通过转子流量计调节，进一步提高了溶氧控制的灵敏度。
4.5 称重控制
采用独立模块控制方式，称重控制器单独设置。使用PID控制模式实现自动控制，具有自适应PID控制调整功能，可自动设定最佳的PID参数。称重控制与料液蠕动泵关联，通过控制蠕动泵开关，实现液位的自动控制和灌流培养功
能。当料液重量高于设定值时，控制器启动蠕动泵，将反应器中料液通过管路排出，降低料液重量至设定值。料液泵流速可通过泵流量调节阀控制，进一步提高了液位控制的灵敏度。
4.6 压力控制
采用自动比例调节阀控制反应器罐体压力，PID控制模式，具有自适应PID控制调整功能，可自动设定最佳的PID参数。压力控制器与罐体比例调节阀关联，通过控制调节阀开关比例，实现罐体压力的自动控制。当罐体压力高于设定值时，控制器启动调节阀的开关比例，将反应器中气体通过排气呼吸器排出，降低罐体压力至设定值；当罐体压力低于设定值时，控制器启动压缩空气通气控制阀，通过表面通气方式向反应器中通入压缩空气，提高罐体压力至设定值。
4.7 校正功能
PH电极、溶氧电极、蠕动泵具有校正功能，可实现在位校正。 4.8 蒸汽灭菌功能
在线蒸汽灭菌，可实现自动灭菌，并具有手动灭菌功能。 4.9 软件控制
提供反应器触摸屏控制和计算机终端远程控制两种模式，具有数据显示、工艺状态显示、工艺参数控制、校正、数据记录存储、历史数据查询等功能。
5. 反应器硬件
5.1 罐体
不锈钢罐体，带不锈钢顶盖和不锈钢三角支架。夹套控温，带保温层。
罐体选用316L不锈钢材质，夹套选用304不锈钢材质。内表面经电抛光：Ra
罐体、夹套按压力容器设计，设计压力0.27Mpa，工作压力0.25Mpa。 顶盖使用法兰连接密封。可安装CIP清洗球，用于反应器在线清洗。 罐体顶部TC连接方式端口，用于减压阀、压力表、呼吸器、压力传感器、以及各种管道安装。
罐体顶部配备灯镜和视镜，用于反应器内部观察。
罐体侧面TC连接方式端口，用于安装PH、溶氧、温度电极，以及取样阀。 罐体底部安装罐底隔膜阀，用于料液排放。 5.2 搅拌系统
磁力底搅拌，进口原装磁力搅拌器，无极变速，搅拌转速0－300rpm。 5.3 温度控制系统
夹套控温，蒸汽加热和电加热双加热方式，或任意单独选择；配备夹套和罐体双温度探头，双温度PID控制，温度控制精度±0.3℃。
5.4 PH控制系统
进口原装PH电极、PH控制器，PID控制模式，PH控制响应偏差±0.01。 5.5 溶解氧控制系统
进口原装溶氧电极、溶氧控制器，PID控制模式，溶氧响应偏差0.5％。 5.6 称重控制系统
进口原装称重模块、称重控制器，控制精度。
5.7 压力控制系统
进口原装压力传感器、气体比例调节阀，PID控制模式。
5.8 蒸汽灭菌系统
夹套灭菌、气体管路灭菌、罐底阀灭菌、工
艺管路灭菌，自动控制或手动控制，气动隔膜阀
自动控制。
5.9 气体系统
压缩空气气体管路、氧气气体管路、二氧化碳气体管路，气体减压阀，气动隔膜阀自动控制。
配备微泡分布器，用于深层通气，提供溶氧。 5.10 细胞截留系统
机械顶搅拌，配备旋转过滤器，过滤精度15u/20u/40u/75u。
5.11 工艺管路系统
配备罐体进液管、罐体排液管，用于料液补加和排液。 5.12 蠕动泵
配备四个蠕动泵，用于补加料液、排出料液、补加碱液、补加消泡剂。
6. 控制系统
反应器控制功能由控制柜实现，包括显示屏、溶氧控制器、PH控制器、称重控制器、数据记录仪。
6.1 显示屏
触摸屏液晶显示器，系统参数基本显示和控制。 6.2 用户权限设置
三级用户权限，密码保护，一级用户查询状态数据，二级用户控制更改工艺参数，三级用户控制更改系统参数。
6.3 流程图显示
反应器运行流程图，显示运行参数，反应器阀门、控制器运行状态，可手动更改参数设置和运行状态。
6.4 控制显示
显示运行参数、并可更改参数设置。 6.5 操作程序显示
气动夹套排水程序、夹套补水程序、夹套降温程序、空罐灭菌程序、满罐灭菌程序，自动控制。
6.6 系统状态显示
显示阀门、控制器运行状态，并可手动更改。 6.7 校正控制显示
PH电极校正程序、溶氧电极校正程序、泵速校正程序。 6.8 PH控制器
独立PH控制器，温度补偿，可显示PH值、显示更改PH设定值、PH电极校正。
6.9 溶氧控制器
独立溶氧控制器，温度补偿，可显示溶氧值，显示更改溶氧设定值、溶氧电极校正。
6.10 称重控制器
独立称重控制器，可显示料液重量，显示料液重量控制设定值。 6.11 数据在线打印 独立在线数据打印。
CLAVORUS
7. 远程控制
TM
可选配远程控制程序，实现反应器远程控制功能。独立终端计算机，WIN系统，安装CLAVORUSTM反应器远程控制软件。
7.1 状态显示功能
可显示反应器运行参数和运行状态。 7.2 控制功能
可更改控制参数，完成手动和自动控制程序。 7.3 校正功能
PH电极校正、溶氧电极校正、泵速校正。 7.4 数据存储功能 分批次存储历史数据。 7.5 数据查询功能 可对历史数据进行查询。
8. 使用案例
CLAVORUSTM A/B型动物细胞培养用生物反应器，适用于动物细胞微载体培养、以及动物细胞悬浮培养，已成功用于国内生物医药企业工业化规模动物细胞培养，包括微载体培养Vero细胞、微载体培养Marc145细胞、悬浮培养BHK21细胞等，采用灌流培养工艺，细胞生长状态良好，实现了细胞高密度培养。
8.1 CLAVORUS TM 动物细胞培养用生物反应器微载体培养Marc145细胞 8.1.1 试验材料
9 生物反应器：CLAVORUS9 细胞：Marc145细胞
资料附图均为参考图，配置以实物为准
10
TM
A 100
9 微载体：Cytodex 1（10g/L）
9 培养基：Marc145细胞生物反应器专用培养基（MD900） 9 血清：小牛血清（8％） 8.1.2 试验方法
称取800g Cytodex微载体，用常规方法洗涤，放入生物反应器中，原位高压灭菌，降温后，用MD900培养基洗涤微载体，备用。
取生长良好的Marc145细胞，制备为细胞悬液，按合适比例接种反应器中。开启反应器，设定适合的温度、PH、搅拌速度、氧含量等培养参数，进行反应器培养条件自动控制。
反应器培养1－2天后，开启补液泵，向反应器中补加新鲜的培养基，并开启称重自动控制，进行灌流培养。
每天取反应器中微载体，用显微镜进行观察，并用结晶紫染液进行细胞计数。 8.1.3 试验结果
Marc145细胞接种反应器中，细胞很快帖壁伸展；培养1天后细胞形态饱满、生长良好，每个微载体上平均生长10－15个细胞；培养第2天后细胞形态更加立体，轮廓清晰，细胞数量明显增加，少量微载体上细胞几乎长满；培养第3天后，微载体上细胞基本长满，细胞形态健康；培养第4天后，微载体上细胞更加致密，细胞密度达到5×106个/ml以上；继续培养至第10天，微载体上细胞依然良好，没有明显细胞脱落现象。
资料附图均为参考图，配置以实物为准 11
Marc145细胞微载体培养第1天
Marc145细胞微载体培养第2天
资料附图均为参考图，配置以实物为准
12
Marc145细胞微载体培养第3天
Marc145细胞微载体培养第4
天
资料附图均为参考图，配置以实物为准 13
Marc145细胞微载体培养第10天
8.2 CLAVORUS8.2.1 试验材料
9 生物反应器：CLAVORUS9 细胞：Vero细胞
9 微载体：Cytodex 1（10g/L）
9 培养基：Vero细胞生物反应器专用培养基（MD505） 9 血清：小牛血清（5％） 8.2.2 试验方法
称取800g Cytodex微载体，用常规方法洗涤，放入生物反应器中，原位高压灭菌，降温后，用MD505培养基洗涤微载体，备用。
TM
TM
动物细胞培养用生物反应器微载体培养Vero细胞
A 100
资料附图均为参考图，配置以实物为准 14
取生长良好的Vero细胞，制备为细胞悬液，按合适比例接种反应器中。开启反应器，设定适合的温度、PH、搅拌速度、氧含量等培养参数，进行反应器培养条件自动控制。
反应器培养1－2天后，开启补液泵，向反应器中补加新鲜的培养基，并开启称重自动控制，进行灌流培养。
每天取反应器中微载体，用显微镜进行观察，并用结晶紫染液进行细胞计数。 8.2.3 试验结果
接种Vero细胞后，细胞帖壁生长良好；培养第2天后，少量微载体上细胞长满；培养第4天后，微载体上细胞致密，轮廓清晰，用结晶紫染色，细胞密度达到8×106个/ml以上。
Vero细胞微载体培养第2天
资料附图均为参考图，配置以实物为准 15
Vero细胞微载体培养第4天
Vero细胞微载体培养第4天
资料附图均为参考图，配置以实物为准 16
8.3 CLAVORUS TM 动物细胞培养用生物反应器悬浮培养BHK21细胞 8.3.1 试验材料
9 生物反应器：CLAVORUS
TM
A 100
9 细胞：BHK21悬浮培养细胞
9 培养基：BHK21细胞生物反应器悬浮用培养基（MD910） 9 血清：小牛血清（5％） 8.3.2 试验方法
取生长良好的BHK21细胞，按合适比例接种反应器中。开启反应器，设定适合的温度、PH、搅拌速度、氧含量等培养参数，进行反应器培养条件自动控制。
反应器培养1－2天后，开启补液泵，向反应器中补加新鲜的培养基，并开启称重自动控制，进行灌流培养。
每天取反应器中细胞培养液，用显微镜进行观察，并计数。 8.3.3 试验结果
接种BHK21细胞后，细胞形态饱满、生长良好，培养4天后，细胞密度达到3×106个/ml以上。
BHK21细胞悬浮培养第4天
资料附图均为参考图，配置以实物为准
17
资料附图均为参考图，配置以实物为准 18
CLAVORUS
TM
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公司名称： 北京天和瑞生物科技有限公司 公司地址： 北京昌平科技园白浮泉路11号 邮政编码： 102200
联系电话：（传 真：（资料附图均为参考图，配置以实物为准010）80110922转8109 010）80110230
19
植物细胞培养生物反应器研究进展
植物细胞培养生物反应器研究进展
12*22
胡涛，吕春茂，王新现，王博
（1.沈阳农业大学校产总公司，辽宁沈阳110161；2.沈阳农业大学食品学院，辽宁沈阳110161）
摘要介绍了当前植物细胞培养生物反应器的新类型及各自特点，工业化成功的实例及今后的发展趋势，并对植物细胞培养反应器的选择和设计提出了相应的建议。关键词植物细胞；培养；生物反应器中图分类号Q943.1文献标识码A文章编号0517－6611（2010）04－01702－02ResearchProgressinBioreactorforPlantCellCulture
HUTaoetal（HeadquartersofProperty，ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang，Liaoning110161）AbstractThenewtypesandcharacters，successfulindustrializationexamplesandthefuturedevelopmentaltrendofthecurrentbioreactorforplantcellculturewereintroduced.Andsomeadviceswereproposedforselectinganddesigningbioreactorsforplantcellculture.KeywordsPlantcell；Culture；Bioreactor
利用植物细胞培养技术生产天然植物源功能性成分较但目前由摇瓶实验转化到大规模之栽培法具有很多的优点，
代谢产物工厂化生产的实例却较少。除植物细胞生长缓慢、分泌量低及细胞体系遗传性状不稳定等植物细胞自身的原因以外，针对某种植物细胞设计、选择合适的生物反应器更是能否成功提取功能性代谢产物的关键。最初采用的植物但由于植物细胞与细胞培养反应器大多借鉴微生物反应器，
微生物细胞在结构及生理学特性上的差异，研究者结合植物研究出了许多新的反应器细胞的特点，1
植物细胞培养生物反应器类型
目前用于植物细胞培养的反应器主要有搅拌式（STR）、lift）、气升式（air-鼓泡式（bubblecalum）、转鼓式（RDR）及其此外还有植物细胞固定化反应器和膜反应他改进型反应器，
器等。表1列出了用于不同植物细胞培养的各种反应器类型。
表1
Table1类型
Type搅拌式STR搅拌式STR搅拌式STR搅拌式STR
螺旋搅拌式STRwithspiralimpeller提升搅拌式STRwithcell-liftimpeller
鼓泡式Bubblecolumn鼓泡式Bubblecolumn倾斜鼓泡式Stantedbottombubblecolumn
外环气升式Externalloopairlift
tubeairlift导筒气升式Draught-转鼓式Rotatingdrum
entrappedcell胶粒固定反应器Gel-reactor
D.carota；P.hybrida膜反应器Membranereactor
注：类型中的重复指适应不同植物类型的反应器。
Note：Therepeatedtypesarethebioreactorfordifferentplanttypes.胡涛（1973－），男，河北石家庄人，农艺师，从事农业技术研究。2009-10-16收稿日期作者简介
20，30，13065，15001，1010，30，8520，2101～430，200
Ginkgo，loliumN.tabacumE.californicaC.rosellsD.lanataV.rosea
植物细胞培养生物反应器类型
Thetypesofthebioreactorforplantcellculture
体积∥L
Volume7，1520500015500202.5
适用植物种类
SpeciesofapplicableplantsD.carataN.tabacumC.roseusN.tabacumC.blumeiP.elliottii
［4］
［1－3］
1.1机械搅拌式生物反应器此类反应器操作简单，能提
供良好的搅拌，容器内培养体系混合程度高，容氧量好，适用性广，在大规模生产中被广泛采用。其缺点在于搅拌带来的剪切力容易损伤细胞，尽而影响细胞的生长与代谢，尤其对次级产物生成影响极大。Tanaka对比了不同搅拌器的类型，发现桨形板搅拌器适合植物细胞生长，这是因为较大的搅拌桨通常能在相对低的旋转速度下提供良好的搅拌，它是通过降低搅拌速度和改进搅拌子构型来实现的
［5］
。烟草
。
（N.tabacum）、葡萄（vitisspecie）、长春花（C.roseus）、三角叶薯蓣（D.deltoidea）都已在改进的搅拌式反应器中进行了培养
［6］
，说明其能很好地适应植物细胞生长，有很大的研究应鼓泡式和气升式反应器
此类反应器能提供低剪切力
用潜力。1.2
环境且构造简单，非常适合植物细胞培养。鼓泡式反应器结气体从底部通过喷嘴或孔盘穿过液池实现气体构最为简单，
交换和物质传递，整个系统密闭，易于无菌操作，培养过程中无需机械能损耗，适合培养对剪切力敏感的植物细胞。对于此类反应器的混合效率较低。黏度大及高密度的培养体系，
气升式反应器通过上升液体和下降液体的静压差实现气体的循环，比鼓泡式反应器有更均衡的流动形式。气升式反应如通器搅拌速度和混合程度由下列因素决定：①通气速率，入反应器的气体体积。②容器的高度与直径比。在低气速，尤其H/D大的高密度培养时，混合性能欠佳。③升降速度比。④培养液的黏度和流变性
［7］
。目前紫草（L.erythorhi-
zon）、三角叶薯蓣（D.deltoidea）、长春花（C.roseus）等细胞已用气升式反应器进行了培养。此类反应器在工业化生产方面应用较广。1.3
转鼓式反应器
一种新型生物反应器，已用于烟草（N.
［8］
tabacum）、长春花（C.roseus）、紫草（L.ergthorhizon）的培养。
其转子的转动促进了液体中溶解的气体与营养物质的混合，所以RDR具有悬浮系统均一、低剪切环境、防止细胞黏附的尤其适合于高密度植物悬浮细胞培养。优点，1.4
光生物反应器
植物具有独特的光合作用功能，其体
细胞的多种酶只有在光的刺激下才能表现出较高的生理活性。在许多植物细胞的培养过程中需要光照，因此在普通反应器的基础上增加光照系统是需要考虑的问题，这些问题包
括光源的安装、保护，光的传递，光照系统对反应器供气、混合的影响等。
小规模实验往往采用外部光照，但大规模生产时透光窗内部培养物对光的均匀接受是较难解决的问题。目的设置，
前人们研究出的光合生物反应形式较多，其中以用于大规模培养光合细胞的新型内部光照搅拌式光生物反应器最具代表性。1.5
细胞固定化培养生物反应器
植物细胞固定化是将细
如多糖或多聚糖化合物，在不同类胞固定于适宜的载体上，
型的反应器中进行培养。它有利于细胞之间的接触、信息传因而有利于次生代谢产物的产生，还可以帮助细递及分化，
胞生长和产物形成过程相耦合。当目的产物为外泌型时，固定化使产物与细胞易于分离，此类反应器能简化下游提纯工非常适合脆弱细胞的培养作，1.5.1
［9－11］
1.5.2膜反应器。中空纤维膜是另一种可供细胞固定化的
细胞并不黏附于膜上，可更好地控制压降和流体压力，载体，
不受操作规模的限制。Jose等进一步用该反应培养胡萝卜（D.carota）和碧东茄（P.hybrida）生产代谢产物酚类物质［13］。1.6Rccs）
旋转式细胞培养系统（Therotarycellculturesystem，该培养系统是目前世界上培养贴壁和悬浮细胞的最
新装置。Rccs是水平旋转的、无气泡的膜扩散式气体交换培养系统。Rccs中的细胞通过膜式气体交换器来吸氧和排出CO2，任何气泡都被清除，以防其旋涡对细胞生长产生影响。培养液、细胞与细胞团在容器内旋转，它们不与任何容器壁空气升或任何其他易致伤的物体相碰。该系统中无推进器、液器、气泡或搅拌器，几乎无破坏性剪切力，使大细胞团得以存在。悬浮细胞在水平的旋转式细胞培养器内产生一个均低剪切力的液体悬浮轨道。随细胞的长大，可调节旋匀的、
转的速度来抵偿沉降速度。该装置已成功培养近100种不同类型的细胞，其中包括一些植物细胞。2
植物细胞培养反应器的比较与选择
在低流体压力下有效的氧传质是选择反应器的一个标准。此外环境条件的有效控制和易实现工业化等也很重要。植物细胞培养用反应器的选型与开发依据可归纳为：①供氧能力和气泡在液体中的分散程度；②反应器内流变液体的压力强度及其对植物细胞系统的影响；③高细胞浓度混合pH、营养物浓度的能力；⑤控制细胞的均匀性；④控制温度、
聚集体的能力；⑥放大的难易程度；⑦长时间维持无菌状态的能力
［14］
。
胶粒固定反应器。此类反应器多以海藻酸钙为载
体，采用包埋法固定细胞，在流化床循环式反应器或填充床反应器中进行细胞的固定化培养。
流化床循环式反应器中流体可在高速下操作，有较长的使反应混合均匀。高速流体降低传质阻力，使扩停留时间，
散限制达到最小，气泡扰动达到最小。Dubuis等用此方法进行coffeearabica培养，测定了生长和产物合成的动力学参认为该反应器操作方便，消除剪切力，易于测定放大所需数，
适合中试和工业化生产。Morris等在连续操作下用的参数，
此方法培养长春花细胞，在高生物量下维持了高传质的性能
［12］
。。不同反应器具有不同的特点，不同植物细胞的
填充床反应器（PackedBed）比气升式反应器与流化床反应器更容易实现高密度培养，该反应器在受压力时易导致进而产生缝隙。颗粒脆裂，
表2
Table2
形式Type搅拌式
改进搅拌器（低速）鼓泡式气升式转鼓式
氧传输Oxygentransfer
高中等中等高高
剪切力敏感性、培养液流体性能和细胞聚体大小是氧要求、
有差别的，要根据植物细胞特性选择其生长及代谢产物适合的不同反应器类型有不同的特点见表2反应器。按以上标准，
［15］
。
不同反应器性能比较
混合Mixing均一基本均一不均一均一均一
放大Scaleup困难困难容易容易困难
限制
Limitations
细胞死亡，易导致污染高密度混合不充分混合差导致细胞堆积高密度出现死区在大规模混合不均匀
Theperformancecomparisonofdifferentreactors
液变压力Hydrodynamicpressure
高度破坏性低低低低
一些最新的生物反应器开发实例有：日本的三井石油公司开发的两槽培养系统可用于较一般的植物细胞培养场合；
Jolicoeur等开发了工作容量为11L的双螺旋带形搅拌浆反ribbonimpellerbiloreabor）用于长春花细应器（dloublehalieal-［16］
胞的高密度培养获得成功；Kim等将双重中空纤维反应器（dualhollowfibrereactor）用于长春花细胞的固定化培养以维［17］
持高浓度和连续运转。
3植物细胞生物反应器研究方向
切力强度，包括改变气体交换器构型、搅拌器构型、挡板的位置与数目甚至反应器的构型等因素。利用二相（溶剂相和水避免相）培养的反应器系统可以使产物及时与反应物分离，了产物的抑制效应，能提高培养效率。通过自由振荡或采用DNA合成的选择性抑制剂处理细胞，如不同时期细胞继代培养和延迟生长素的添加，诱导细胞同步分裂，可以使营养物质的利用和产物的合成达到最大化，从而提高反应器的生产性能。Kitkby和Faraday采用反应器的进料振荡而使细胞生最终反应器内细胞处于同一生长阶段，命的循环趋于同步，
在设定的时间下从反应器内获得较高的目的产物浓度，生产效率提高50%，这是植物细胞大规模培养生产次生代谢产物的一个崭新的思路
［18－21］
培养系统中由于细胞生长和次生产物合成不相藕合，批
式培养系统逐步发展成为补料批式和多步批式培养系统。要实现培养过程的在线检测，包括对温度（T）、溶氧量（DO）、pH值、泡沫及细胞浓度（光密度法）、氧气和二氧化碳浓度比（O2/CO2）等的检测，另外要实现培养过程无故障及杂菌污染。反应器的设计与改进应综合考虑氧传输、混合性能和剪
。
（下转第1758页）
植物细胞培养这一领域的重大发展要求生物学和工程
1758安徽农业科学2010年
As含量，因此TF主要由地上部As的含量所决定。根系对As的吸收能力SAU主要由根部As的含量所决定，二者呈极显著正相关关系，相关系数达0.903，但与根部生物量相关性这主要是由于根部质量较小以及各品种间差异不并不显著，显著所造成的。4
结论
不同浓度的As对水稻根部干重无显著影响，对地上部干重有显著抑制作用。低浓度As可以促进某些水稻品种幼其苗的生长；As浓度越高水稻生长受到的抑制作用越明显，干物质积累越少。水稻根系对As具有较强的吸收积累能As被根系吸收后多数被固定于根部，只有少量被转运至力，
茎叶，二者呈极显著正相关关系。参考文献
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檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
（上接第1703页）
技术领域的紧密结合，利用该技术大规模培养生产次生代谢产物具有非常大的应用潜力。参考文献
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动物细胞培养生物反应器研究进展
化 工 进 展
2002年第21卷第8期 CHEMICALINDUSTRYANDENGINEERINGPROGRESS?560?
动物细胞培养生物反应器研究进展
张前程
1,3
张凤宝 姚康德 张国亮 张晓萍
1213
(1天津大学化工学院;2天津大学材料科学与工程学院,天津,300072;
3内蒙古工业大学化工学院,呼和浩特,010062)
摘 要 介绍了搅拌式生物反应器、非搅拌式生物反应器、粘性泵生物反应器、膜式旋转细胞培养器、旋转式细胞/组织三维培养器以及脉冲式生物反应器,其中有新型的,也有改进传统型的。关键词 动物细胞,动物细胞培养,生物反应器
中图分类号 R318.1 文献标识码 A -)--04
的研究领域。从1907,要的作用[1],得到了许多极有价值的生物物质,如疫苗、诊断试剂、干扰素和单克隆体等,为人类的健康提供了有利的保障。20世纪80年代后期“组织工程”概念的提出,动物细胞的三维培养又成为了一个重要的研究课题,它使科学家们梦寐以求的目标即体外重建人体组织逐步成为可能。
动物细胞的培养大致有贴壁培养、悬浮培养、微载体悬浮培养等方式。在动物细胞的培养过程中,细胞培养生物反应器是整个过程的关键设备,它要为细胞提供适宜的生长环境并决定着细胞培养的质量和产量。按照动物细胞的生长要求,具备低的剪切效应、较好的传递效果和流体力学性质是这类反应器设计或改进所必须遵循的原则。
。
笼式供氧(cageaeration)是搅拌式动物细胞反应器供氧方式的一种,即气泡用丝网隔开,不与细胞直接接触。反应器既能保证混合效果又有尽可能小的剪切力,以满足细胞生长的要求。北野昭一[1]报道了一个经过改进的搅拌式动物细胞反应器,整体呈梨形,搅拌置于反应器底部,在搅拌轴外装了一个锥形不锈钢丝网与搅拌轴一起转动。轴心处的鼓泡管在丝网内侧鼓泡,丝网外侧的细胞不与气泡直接接触。
Gelligen反应器[2～4]是美国NBS公司(NewBrunswickScientificCo.)生产的适合于微载体系统
的细胞反应器。反应器中有一个中空的导向搅拌桨,培养液和细胞通过中空导向桨形成上下循环。反应器采用笼式供氧,溶于液体中的氧依靠丝网外液体的对流作用均匀分布到反应器内。该反应器还带有一个气体调节系统,用来控制溶氧浓度和pH值。由于气泡不与细胞直接接触,所以通气量不受限制,而且泡沫少不需用消泡剂,细胞在循环过程受到的剪切力也很小。华东理工大学生化工程研究所开发的CellCul-20动物细胞培养反应器,主要工作原理与Gelligen反应器相似,但采用了双层笼式供氧,提高了氧的传递系数[5,6]。在20L的反应器中采用灌流工艺培养Vero细胞,连续培养5天细胞数增加37倍,密度超过1×107个/mL。
还有其他一些改进的供氧方式。Lavery等[7]
用一个带有双层搅拌的反应器测量了动物细胞培养介质中氧的传递。搅拌轴是中空的,气体从轴的底
收稿日期 2001-11-07;修改稿日期 2002-03-31。
),男,博士研究生,副教授。电第一作者简介 张前程(1956—
1 搅拌式生物反应器
搅拌式反应器靠搅拌桨提供液相搅拌的动力,它有较大的操作范围、良好的混合性和浓度均匀性,因此在生物反应中被广泛使用。但由于动物细胞没有细胞壁的保护,因此对剪切作用十分敏感,直接的机械搅拌很容易对其造成损害,传统的用于微生物的搅拌反应器用作动物细胞的培养显然是不合适的。所以,动物细胞培养中的搅拌式反应器都是经过改进的,包括改进供氧方式、搅拌桨的形式及在反应器内加装辅件等。1.1 供氧方式的改进
一般情况下,搅拌式反应器还常伴有鼓泡,为细胞生长提供所需氧分。由于动物细胞对鼓泡的剪
话022-27891176。
第8期 张前程等:动物细胞培养生物反应器研究进展 ?5 61?
部通入,经下层桨叶搅拌,均匀地分散于液体中;上层桨叶抑制了液面处气泡的迸溅,从而减小了对细胞的损害。
Sucker等[8]介绍了一种带搅拌的鼓泡反应器,能在动物细胞的培养中将气泡对细胞的损害降到最小。反应器中央液面下方有一个气液混合管,里面装有鼓泡器和搅拌器。液体与鼓泡器出来的气体在混合管内逆流混合,然后在搅拌桨的作用下流出混合管在反应器内形成循环。他们设计了3种不同形式的混合管,目的是为保证混合管内的气泡只能浮于管口而尽可能不进入培养液。实验中在2.4L反应器中的培养效果与100mL的spinner瓶相近1.2 搅拌桨的改进
,。
Kaman等[9,并
达到了5×108个/mL。
Chiou等人[12]在以聚氨酯和纤维素泡沫为填料的填充床反应器中培养昆虫细胞,证明这两种微孔材料适合昆虫细胞的生长且不易脱落。在两类填充床中高密度培养的细胞其最终平均密度达到了4.3×107和5.2×107个/mL,
John等[13]在以玻璃纤维作环形填料的气升式
填充床反应器中模仿鼠类骨髓细胞生长环境培养细胞,养[14],也细胞的大规模2×107个/mL。中空纤维反应器(hollowfiberbioreactor)由于剪切力小而广泛用于动物细胞的培养。这类反应器由中空纤维管组成,每根中空纤维管的内径约为200μm,壁厚为50～70μm。管壁是多孔膜,O2和CO2等小分子可以自由透过膜扩散,动物细胞贴附在中空纤维管外壁生长,可以很方便地获取氧分[15]。
John等[16]报道了一个用于大规模培养动物细胞的径向流中空纤维反应器。该反应器内有一个垂直的中央分配管,外面由中空纤维管与分配管呈平行组成一个环状床层。培养液由中央分配管径向流过中空纤维床,细胞在中空纤维外壁贴附并生长。空气和CO2的混合气体在中空纤维间与培养液成错流流过床层,向细胞提供氧分并维持一定的pH值环境,细胞的代射物随气流带出。在这个反应器中细胞生长的表面密度可达7.3×106个/cm2。
Guinn[17]发明了一个可用于动物细胞培养的生物反应装置,由中空纤维反应器和灌流系统组成。液体通过泵在反应系统内循环,灌流系统补充或置换培养介质及移出代谢物。细胞在中空纤维膜的一侧生长,培养介质在膜的另一侧通过扩散向细胞传递营养。该反应器能为细胞提供一个温和的生长环境。
Gebhard[18]的发明也是一个用于动物细胞培养
在反应器内加装了辅件,实验证明改进后的反应器适用于对剪切力敏感的细胞进行高密度培养。反应器采用了一个双螺旋带状搅拌桨(helicalribbonimpeller),顶部的法兰盖上安装了3块表面挡板。每块挡板相对于径向的夹角为30°,垂直插入液面。挡板的存在减小了液面上的旋涡。这个反应器维持了较小的剪切力,实验中用于昆虫细胞的培养,最终的培养密度达到6×106个/mL,成活率在98%以上。
2 非搅拌式生物反应器
搅拌式生物反应器用于动物细胞培养存在的最大缺点是剪切力大,容易损伤细胞,虽然经过各种改进,这个问题仍很难避免。相比之下,非搅拌式反应器产生的剪切力较小,在动物细胞培养中表现出了较强的优势。2.1 填充床反应器
填充床(packedbed)是在反应器中填充一定材质的填充物,供细胞贴壁生长。营养液通过循环灌流的方式提供,并可在循环过程中不断补充。细胞生长所需的氧分也可以在反应器外通过循环的营养液携带,因而不会有气泡伤及细胞。这类反应器剪切力小,适合细胞高密度生长。
Park等人[11]在由填充床反应器和外循环装置构成的连续流动的培养系统中培养动物细胞。反应器中的填料是带有微孔的陶瓷珠粒,细胞在微孔内生长,同时培养液也可以在孔内扩散。实验证明该反应器适于动物细胞的高密度培养,细胞终期密度
的生物反应器,用泵控制培养介质在反应器内循环。培养液在中空纤维腔内流动并通过中空纤维膜向另一侧供应细胞生长所需的养分。该反应器可控制溶氧、介质组成、温度和pH值,适合于细胞的高密度悬浮培养,尤其适合于动物细胞。
Gramer[19]介绍了小型的中空纤维动物细胞培养反应器,由氧渗透膜管和中空纤维束构成内外空
化 工 进 展 2002年第21卷 ?562?
间,供细胞生长和向细胞提供营养。细胞培养密度几乎能达到2×108个/mL。该反应器可用于为大规模中空纤维培养系统预测不同介质、培养条件及其他因素对细胞生长可能产生的影响。2.3 气升式生物反应器
气升式生物反应器(airliftbioreactor)也是实现动物细胞高密度培养的常用设备之一,其特点是结构简单,操作方便。
戴晓萍等人[20]在气升式反应器中利用微载体培养技术,研究了Vero细胞高密度培养的工艺条件。证明气升式反应器中悬浮微载体培养Vero细胞,在加入适量保护剂1.13×106个/mL装置,,用于高密度培养动物细胞。在灌流循环中,细胞经过两级沉降回到反应器,平均培养密度达到了1.31×107个/mL。
动物细胞的培养。
陶祖莱等人[26]发明了一个用于组织工程的双轴旋转式细胞/组织三维培养器,由内筒培养液流动室、细胞培养室和外筒气室的3个套筒组成,有利于细胞和组织三维生长及O2、CO2、营养物和代谢物的传递。他们还发明了一种可调控应力的旋转式细胞/组织三维培养器[27],也是三套筒结构。培养器内剪应力随着细胞聚集体的形成,可以从零调Saha器”,。通过培养室顶,培养液在培养室间作类似“拉锯”的运动。由于粘性的作用,液面下降时液体在器壁上拉伸成膜,增大了与空气的接触面积,有利于氧的传递。实验在3种切换时间下(20s、25s、30s),溶解氧的实测值均比理论浓度高。反应器中没有搅拌和鼓泡的作用,所以对细胞的损伤很少。
此外,脉冲式生物反应器(pulsatilebioreactor)也是用在组织培养中的一种新型反应器[29,30]。营养液通过脉冲灌流进入反应器,脉冲的频率和强度可调,借以模拟动物体内的生物应力。
3 其他类型的反应器
除上述类型的反应器外,一些其他类型的适于动物细胞培养的生物反应器也时有报道。
Kleis等人[22]设计了一个“粘性泵生物反应器”(viscouspumpbioreactor),它以“三维流动”代替搅拌混合,提供较高的传质速率。反应器的底部是提供动力的流线型转盘,培养液在反应器中以水平运动和螺旋的纵向运动形成“三维流动”。由于转盘和反应器顶部都为流线型而没有锋利的边缘,所以产生的剪切力很小。
一篇美国专利介绍了一种膜式旋转细胞培养器[23],由一个培养室和一个供应室组成,中间隔有一层半透膜。营养物可以从供应室透过膜进入培养室,细胞代谢物也可以通过膜进入供应室。培养器中的混合装置在培养器旋转时保证细胞在培养室中温和混合并稳定悬浮。培养室与氧源之间的气体渗透膜使氧分能透过膜扩散溶于液相。该装置产生的剪切力很小,适合于细胞高密度地培养。另一篇美国专利介绍了一个组合式细胞培养器[24],带有膜的培养室插在供应室中,通过定位装置可以调节培养室的位置。该培养器适合于细胞或组织的培养。
Tsao[25]发明了一个带有拱形培养室的细胞培养生物反应器,空气不与细胞直接接触,氧分通过气体渗透膜向培养介质中溶解。培养室可以绕轴旋转,拱形的结构减小了对细胞的剪切,尤其适合于
4 结 语
动物细胞培养的关键设备是细胞培养反应器,上面所介绍的几类都有各自的特点。但不论是改进的还是新型的,主要解决的共性问题都是要按照动物细胞的生长要求,使反应器具备低的剪切效应、良好的传递效果和流体力学性质。但在实际过程中,这些原则总有一些相互制约的因素,为了强化传递效果需要有一个充分的混合环境(包括气体鼓泡),但动物细胞的脆弱性制约了这个环境的形成;为提高培养介质中的溶氧度需要有较高的氧分压,不过,高的氧分压也影响了代谢物的移出。同时,过高的氧分压也影响细胞的正常生长。如何优化这些制约,是这类反应器开发中要解决的问题。在动物细胞培养中,反应器的改进大多针对搅拌式反应器。虽然这类反应器剪切力大,但由于它混合均匀、结构简单、操作方便以及良好的传递效果和操作弹性,在大规模细胞培养中仍占有重要的位置[4]。
目前,研究工作要致力于开发高密度细胞培养反应器,提高细胞生产率或生物产物的浓度。尤其
第8期 张前程等:动物细胞培养生物反应器研究进展 ?5 63?
组织工程的迅速发展,对动物细胞生物反应器有了不同要求。要保持细胞离体培养时能具有同体内一样的三维异性结构、维持分化细胞的功能并支持细胞的高密度生长[31],培养过程要考虑种植有细胞的三维基质支架和生物反应器所组成的培养系统。事实上,一种反应器的开发不可能满足动物细胞生长的所有要求,同时也不可能适合所有的细胞培养方式。所以,根据某种细胞的培养过程或细胞的某种培养方式,开发专用反应器也许会比通用反应器有更好的效果。
参考文献
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AdvanceinStudiesonBioreactorsforCulturingAnimalCells
ZhangQiancheng1,3,ZhangFengbao1,
YaoKangde2,ZhangGuoliang1,ZhangXiaoping3
(1ChemicalEngineeringCollegeofTianjinUniversity;2CollegeofMaterialScienceandEngineering,TianjinUniversity,
Tianjin,300072;3ChemicalEngineeringCollege,InnerMongoliaPolytechnicsUniversity,Huhhot,010062)
Abstract Somekindsofbioreactors,newandimprovedtypes,arepresented,includingagitatedandunagitatedbioreactors,viscouspumpbioreactor,rotatingmembranecellculturingvessel,rotatingbioreactorforculturingthree-dimensionalcell/tissue,pulsatilebioreactor,etc.Keywords animalcell,animalcellculture,bioreactor
(编辑 张永圻)
美国Wave摇袋式细胞培养生物反应器
GE Healthcare
波浪生物反应器技术平台
封二空白
创新
世界首创技术的列表
第一款可升级放大的一次性生物反应器
第一款用于大规模病毒生产的一次性生物反应器
第一款用于自体治疗的，符合cGMP 商业化生产的一次性大规模生物反应器
第一款用于大规模贴壁细胞培养的一次性生物反应器第一款内部带有灌注过滤器的一次性生物反应器第一款用于细胞和基因治疗的一次性生物反应器第一款用于大规模植物培养的一次性生物反应器第一款用于微生物培养的一次性生物反应器适用于不同细胞种类和应用的 (动物、植物、昆虫) 大批量培养方法和技术支持
第一款可重复使用的毛细管溶氧和pH探头第一款用于波浪细胞袋的氧气发生器第一款自动化灌注控制系统
第一款用户定制的一次性生物反应器
第一款用于疫苗生产的低成本一次性生物反应器第一款重复使用和校准的光纤溶氧探头第一款混合体积500升，袋状混合系统第一款袋状不需要水浴加热的冻融系统第一款认证过的全自动无菌接管机第一款自动化热塑管封口机
第一款可焊接大口径充满液体管道的无菌接管机第一款全封闭多用混合器，适用不同密度液体混合、粉末混合，FlexMixer 可放大到600 L首创的高通量一次性反应器
2
“WAVE 波浪生物反应器对厂房设备要求甚低且易于整合进现有的工艺流程”
Introgen Therapeutics公司，
生产和工艺部副总裁，P. CLARKE，2006
“我们很高兴同WAVE 公司合作，进行大流行流感疫苗和季节性流感疫苗生产工艺放大。细胞培养工艺稳定可靠且容易放大。”R. SINGHVI，总裁兼CEO
Novavax 公司，2005
“我很惊讶波浪生物反应器的使用是这么简单....”P. PIERGIOVANNI，化学工程教授
Lafayette 学院，2006
3
实现
“波浪反应器技术迅速成熟的一个原因是：在一次性塑料袋中培养出万亿个生产药物的细胞，从而取代了昂贵的不锈钢搅拌罐。”V. CICCARONE，副主管，基因表达
Macrogenics 公司，2005
“一次性波浪生物反应器优势：免除细胞反应器清洗、消毒及其
相关认证、简化细胞培养厂房，缩短反应器安装和生产产品转换之间的等待...
我们已经验证25 L、100 L和500 L培养体积的波浪生物反应器，在细胞增殖、目标蛋白生产、葡萄糖消耗和乳酸产生是相当的。”L. PIERCE & P. SHABRAM
PacificGMP/Ventana Biosciences公司，2004
4
特性
一次性使用
不需要清洗、无交叉污染省却验证过程。细胞只和一次性生物兼容塑料袋接触。所有接触材质符合USP Class VI和ISO 10993标准。全封闭系统
Cellbag 细胞培养袋，包括所有的接头和滤器，到货时为无菌包装即开即用。适合cGMP 商业化生产。接种和取样不需要生物安全柜。多用途
特殊设计的多样化的设备构造适合悬浮细胞、微载体、批次、流加或灌注培养。易放大
搅拌式培养瓶、滚瓶和其他类似系统因其固有受限的传质表面而无法放大。WAVE 波浪生物反应器没有这种限制。业已验证了580升培养体积的操作。
应用
单克隆抗体
WAVE 生物反应器广泛应用于单克隆抗体的生产。起始培养体积很小，随着细胞数增高随时添加新鲜的培养基。这确保了接种体无需转移就可以放大。
已经运行过从100 ml到580 L的培养，细胞密度超过1 × 107细胞/ml 而生产能力和目标产品质量与搅拌罐生物反应器相当。溶氧浓度不是限制因素，可保持超过50%的饱和度。贴壁依赖型细胞
在WAVE 波浪生物反应器中，波浪产生充分混合并使培养液富含气体，并且这种混合十分轻柔可以培养各种微载体上的贴壁依赖型细胞。波浪运动防止沉淀产生并在不产生泡沫下提供溶氧。
7
已验证的应用：
昆虫细胞/杆状病毒植物细胞培养CHO HELA NS0微生物
cGMP 生产微载体培养灌注培养
单克隆抗体生产酵母T 细胞自体治疗HEK293/腺病毒原代细胞
重组蛋白表达系统疫苗生产
病毒性疫苗生产
WAVE 波浪生物反应器提供的密闭系统对病毒产物十分理想。在基因治疗的应用中，人293细胞生长在悬液中，然后用重组的腺病毒感染。当细胞生长到4 × 106/ml时病毒产物为100,000病毒颗粒/细胞。
WAVE 波浪生物反应器在完全密闭系统中生产病毒，无需生物安全柜。
cGMP 生产
WAVE 波浪生物反应器在cGMP 生产中应用，产生的种子细胞应用于大规模的常规生物反应器，也应用于人自体治疗的临床应用和商业化生产。
对清洗和验证的简化使它成为cGMP 生产的理想系统。
用户定制
WAVE 波浪生物反应器有许多其他用途，例如接种前保持种子细胞持续混合和充气；微载体球转球放大；血液制品冷沉淀融化以及培养液混合。Cellbag 细胞袋可以为WAVE 波浪生物反应器提供100 ml-500 L之间的任何培养体积。
昆虫细胞/杆状病毒
WAVE 波浪生物反应器的高供氧能力使它对昆虫细胞的培养十分理想。一般能够获得的细胞密度超过9 × 106细胞/ml 。
杆状病毒的产量比用常规生物反应器的更高。WAVE 波浪生物反应器系统非常容易进行操作和细胞接种放大，杆状病毒感染能够在细胞袋内进行，减少了转移的需要。
8
特征
BASE 2/10EH
BASE 20/50EHTBASE 200EHBASE 500/1000EH培养体积范围0.1 L-5 L0.1 L-25 L5 L-100 L50 L-500 L标配功能
速度/角度控制速度/角度控制速度/角度控制速度/角度控制温度控制温度控制温度控制温度控制通气
通气
通气
通气Loadcell 选项
CO2MIX WAVEPOD CO2MIX CO2MIX O2MIX CO2MIX O2MIX O2MIX DO O2MIX DO DO PH
DO PH
PH
PERFUSION CTRL
PH
LOADCELL
LOADCELL
DUAL AIR/TEMP
DUAL AIR/TEMP
规格
BASE 2/10EH
BASE 20/50EHTa BASE 200EHb BASE 500/1000EHb, c重量
9 lbs (4.2 kg)
34 lbs (15.5 kg)
780 lbs (350 kg)
包括KIT500:2000 lbs (925 kg)包括KIT1000:2250 lbs (1020 kg)外形尺寸
19×13.1×8英寸22.6×18.3×7.1英寸73×43 ×44英寸79×49×63英寸(489×330×200 mm)(573×465×179 mm)
(185×110×112 cm)(201×124×160 cm)包括KIT20：设备可以倾斜包括KIT500：28×22.6×10英寸以便运输
89×49×63英寸(711×575×254 mm)(226×124 ×160 cm)包括KIT50：
包括KIT1000：30.5×27.6×10英寸89×91×63英寸(775×700×254 mm)(226×231×160 cm)环境要求
110/220 VAC
100/240 VAC200-240 VAC200-240 VAC6/3 A 50/60Hz
50/60Hz 15A50/60 Hz, 30A3-Phase
3-Phase
*气动系统Phase-Phase ±5%Phase-Phase ±5%BASE20/50P。需要NEMA L2130 PlugNEMA L2130 Plug
30-90 psig气压。
注释：
a - BASE 20/50需要选择KIT20或KIT50。KIT20使用2 L、10 L和20 L的Cellbag 细胞袋，KIT50容纳22 L和50 L的Cellbag 。b - 提供带有轮脚的设备单元。
c - BASE500/1000需要选择KIT500或KIT1000。KIT500使用500 L的Cellba 细胞袋，KIT1000容纳1000 L的Cellbag 。
10
细胞培养袋
细胞袋生物反应器设计为一次性使用，适合用于人用自体治疗产品的c G M P 的生产。Cellbag 细胞袋成分类似于生物质储存的袋子，并符合美国药典USP Class VI塑料制品规格。现有的验证数据和Cellbag DMF已经阐明了它的生物兼容性，然而建议用户针对特定的应用要检查适用性。
膜
Cellbag 细胞袋由多层薄的透明塑料膜制成，设计提供高机械强度同时对细胞接触材质的生物惰性。典型的流体接触层是医药级的低密度聚乙烯。外层提供机械强度和气体无法渗透的屏障。这个非接触层由低密度聚乙烯、EVA 或尼龙/EVOH 共聚物制成。也有提供其它特殊应用的膜。
无菌和内毒素
通过25-40 kGyγ射线灭菌。每个Cellbag 细胞袋标有放射指示标签。提供每批的放射信息参数。每批检测细菌内毒素。只有内毒素低于0.125 EU/ml的批次才能出厂。用户定制细胞袋
Cellbag 细胞袋能够根据用户需求定制特定的连接器、管道和特殊的部件。
机械强度
膜密封强度> 67 N/cm。每个培养袋在灭菌前通过耐压测试检测是否有泄漏。
入口空气过滤器Oxywell2
接种和收获管路
无针取样口
进出口 (典型的)空气入口0.2 μm 空气过滤器空气出口带反压阀的0.2 μm 空气过滤器取样口无针、自密封注射器取样口加液/收获口C-Flex TM 管道适合无菌封口，
带注射器接口或MPC 连接口
多用途接口带堵头的注射器端口Oxywell2TM DO 溶氧探针的鞘提供多种选择。如pH 探针、汲取管、38 mm螺口、温度探头端口、灌注过滤器和特殊的管路接口。
生物兼容性
在照射过 (50 kGy) 的膜上进行测试：USP XXII plastic class VI and ISO 10993：ISO 10993-5体内溶血研究，萃取法
ISO 10993-5细胞毒研究使用ISO 洗脱方法ISO 10993-6兔肉内灌输研究ISO 10993-10兔皮内过敏反应研究ISO 10993-11鼠全身系统过敏性研究温度和压力范围
Cellbags 细胞袋在0 ?C到50 ?C范围使用内。最大操作压力是1.5 psig (0.1 bar) 。
出口空气过滤器
Cellbag 棒
备用的输注口和可选择的pH 探针
11
构建你特有的Wave 波浪生物反应器
加个滤器，快接头或10尺长的管道-您说话！很容易定制适合您的特定的细胞培养生产所需要的一次性生物反应器，可用于研究、开发或商业化生产操作。我们的产品专家将和您一起工作以创建您的理想细胞培养袋用于WAVE 波浪生物反应器。
12
喷射混合原理
多年来，一直认为在一次性系统中混合物料是不可能的。唯一有用的想法是把袋作为罐的衬垫。这消除了清洗罐的需要，但由于需要侵入式搅拌器所以无菌操作是不可能的。其他不成功的想法还包括循环泵。一个简单的液体力学计算能够很快显示循环泵效率是非常低的，特别是对分散或悬浮的颗粒。FlexMixer 多用途混合器彻底改变了传统的储罐设计，消除了侵入式的叶轮。通过多孔隔板的上下运动在液体中产生大量有效的射流。
流体被迫来回通过隔板中的孔，消除了其它混合技术中普遍存在的死区。喷射混合提供一种独特的方法获得非入侵式混合。在FlexBags 已经进行了广泛的实验研究以建立过程数学模型并阐明关键参数间的相互关系，如波纹几何学、充满体积和冲程速度/加速度。成熟的计算模型也已经被用于表征不同规模和袋子形状的FlexMixer 系统的性能。FlexMixer 是这种优化的结果并被设计以提供有效、低成本和可重复的操作。
空FlexBag FlexBag 粉末输送
15
特征
FLEXMIXER 20E
FLEXMIXER 20EH工作体积范围1.5 L-12 L (FlexBag ) 1.5 L-12 L (FlexBag ) 1 L-8 L (FlexSac ) 1 L-8 L (FlexSac ) 整体的特征
非侵入式，密闭系统非侵入式，密闭系统触摸屏界面
温度控制触摸屏界面
耗材FlexBag (无菌或非无菌) FlexBag (无菌或非无菌) FlexSac (非无菌) FlexSac (非无菌) 选项
HOLDER (备用) HOLDER (备用) 电导电导pH
pH
规格
FLEXMIXER 20E
FLEXMIXER 20EH重量50 lbs (22.2 kg) 50 lbs (22.2 kg) 尺寸19 × 26 × 25英寸19 × 26 × 25英寸(500 × 670 × 650 mm) (500 × 670 × 650 mm) 效用
115/230 VAC，4/3A115/230 VAC，4/3A60/50 Hz
60/50 Hz
应用
● 粉末状和浓缩的培养基的重混● 生产过程收集● 缓冲液准备● 取样前的产物混合● 细胞裂解
● 补料前的产物匀化
●
生产过程的中间物的混合和匀化
●
能适应多种加工步骤，包括储存、 加热/冷却和过滤
16
特征
WAVE 混合原理
WAVE 混合器使用完全无菌的方式在袋中混合物料。这种特殊的摇动平台无需叶轮或其他侵入式混合器就能在液体中引起波浪运动。WAVE 混合器已经被优化用于非常有效的混合和分散。在七秒内能将十升的液体混合均匀。
M*BagTM 使用WAVE 混合器混合和溶解组分。独特的M*BagTM 是由多层薄的透明塑料制成，设计用于提供高的机械强度。一个大的螺帽口使粉末或其他固体物料能够很容易被注入袋中。pH 和电导的探针能够插入袋中。大的出口能使M*BagTM 完全排空。
S*BagTM 是一个附带一个预先灭菌的0.1 μm 滤器的预先灭菌的混合袋。混合后，M*BagTM 出口连接到这个过滤器的入口。可以使用蠕动泵从M*BagTM 泵入S*BagTM 。这可以快速、安全地生产无菌溶液。然后填充的S*BagTM 在需要时能被用于分装培养基/溶液。可放大技术
现有20升和50升袋的标准系统。这些能被用于混合体积从1升到35升的液体。也有液体体积达到500升的大型系统。WAVE 混合器原理也已经被用于在定制形状的刚性容器中
混合原料。
应用
MIXER20/50P或MIXER20/50E● 生产过程中混合● 生产过程中收集● 混合取样● 填充前混合● 重配和分散
● 生产过程中的反应
MIXER20/50EH● 冷冻原料的融化
● 血液制品融化和其他生物学液体● 在收集操作期间维持温度
17
M*Bag
安装一个新的M*BagTM
简单地添加组分通过大的螺帽口简单地灌注组分混合使WAVE 混合器摇动M*BagTM 以混合和溶解组分
S*Bag
无菌过滤进入S*Bag
过滤器泵
连接M*Bag到无菌过滤器并泵入预先灭菌的S*Bag
特征
MIXER 20/50EMIXER 500/1000EMIXER 20/50EH
MIXER 500/1000EH工作体积范围1 L-35 L50 L-500 L主机特征
速度/角度控制速度/角度控制温度控制 (EH ) 温度控制 (EH ) Loadcell 选项
pH
pH
LOADCELL
规格
MIXER 20/50Ea MIXER 500/1000Eb,c MIXER 20/50EHa
MIXER 500/1000EHb,c 重量
40 lbs (18 kg)
w/MIXKIT500:2000 lbs (925 kg) w/MIXKIT1000:2250 lbs (1020 kg) 尺寸
19.75 × 15 × 6.75英寸79 × 49 × 63英寸(502 × 381 × 172 mm) (201 × 124 × 160 cm) w/ MIXKIT20:
w/ MIXKIT500:19.75 × 25.75 × 10英寸89 × 49 × 63英寸(502 × 654 × 254 mm) (226 × 124 × 160 cm) w/ MIXKIT50:
w/ MIXKIT1000:29 × 25 × 12英寸89 × 91 × 63英寸(740 × 635 × 300 mm) (226 × 231 × 160 cm) 效用
110/220 VAC，10A
208-240 VAC，30A 3-Phase
*气动MIXER20/50P系统 需要30-90 psig气压。
注释：
a - MIXER 20/50需要选择MIXKIT 20或MIXKIT 50。MIXKIT 20容纳20 L的M*Bag。 MIXKIT 50容纳50 L的M*Bag。
b - MIXER 500/1000需要选择MIXKIT 500或MIXKIT 1000。MIXKIT 500容纳500 L的M*Bag。 MIXKIT 1000容纳1000 L的M*Bag。c - 提供带有轮脚的主机。
附件
LOADCELL 控制器
增加了能够在混合袋中连续称量物料的能力。这能够在摇动的同时分配准确的体积。包括一个60公斤容量的带有4杆型loadcells 和控制器的Loadcell 平台。在几分钟内完成安装。用MIXER 20/50模式使用。
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Hot Lips Tube SealerTM 热塑管封口机
安装和培训
安装
对于大型的WAVE 波浪生物反应器如System 200和System 500/1000，由经过工厂培训的工程师安装。安装包括安装前检查、依照“启动清单”文件组装仪器并进行全面的系统检查。也提供对更小的系统System 20/50的安装，适合复杂安装、多重单元购买、或需要高水平生物反应器控制策略的购买。WAVE 为WAVE 生物反应器提供FAT (工厂验收测试) 和SAT (现场验收测试) 以帮助客户安装、认证和法规依从。有关FAT 和SAT 的详细信息请联系我们的销售代表或我们的服务部门。
培训
WAVE 提供设备操作和维护培训课程以满足您单位的需要。设备操作和维护培训课程可在当地或我们在新泽西Somerset 的工厂。在San Diego，CA.PacificGMP 提供深入的、有实际操作的细胞培养课程。这种WAVE 培训是两天半的课程，专注于打造专家级的WAVE 波浪生物反应器用户。课程有关一次性生产、放大、灌注和液体传输。其他信息和当前的课程日期请登陆我们的网站。我们的培训程序的进一步的信息请联系您当地的销售专家或我们的服务部门。
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封三空白
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GE imagination at work
2008-03-19-BJ
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