宇智波
提取：
2MKCl震荡提取土样30分钟后，提取液中硝氮测定同水中硝氮测定。
水中硝态氮的测定（紫外分光光度法）
? 主要试剂：
(1)0.100mg/ml硝酸盐氮标准储备液(购置或自配)：称取0．7218g硝酸钾(经105—110℃烘4小时)溶于水中，移至1000毫升容量瓶中用水稀释至标线。
(2)盐酸溶液：C (HCI) =lmol／L(盐酸系优级纯)
? 标准曲线的绘制
向6支100ml容量瓶中依次加0．100mg／ml硝酸钾标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml，用新鲜去离子水稀释到100ml(其相应浓度为0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mg／L)。按水样测定相同步骤测量吸光度。根据220nm与二倍275nm波长吸光度值之差对浓度作图，绘制标准曲线。
? 水样的测定
在盛有水样的比色管中加1.0mol/L的盐酸溶液，用1cm石英比色皿在紫外分光光度计上，用新鲜去离子水50ml加l.0mol／L盐酸溶液作参比，测定水样在220nm及275nm波长处的吸光度。 ? 结果计算
校正吸光度计算：Ar=A220nm-2A275nm
式中：Ar——校正吸光度；A220nm——220nm波长处测得的吸光度；
A275nm——275nm波长处测得的吸光度
由标准曲线算出相应水样硝态氮含量。
氨态氮
2 mol·L-1KCl浸提—蒸馏法
方法原理 用2mol·L-1KCl浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。取一份浸出液在半微量定氮蒸馏器中加MgO（MgO是弱碱，有防止浸出液中酰铵有机氮水解的可能）蒸馏。蒸出的氨以H3BO3吸收，用标准酸溶液滴定，计算土壤中的NH4+—N含量。
主要仪器 振荡器、半微量定氮蒸馏器、半微量滴定管（5mL）。
试剂
（1）20g·L -1硼酸—指示剂。20gH3BO3（化学纯）溶于1L水中，每升H3BO3溶液中加入甲基红—溴甲酚绿混合指示剂5mL并用稀酸或稀碱调节至微紫红色，此时该溶液的pH为4.8。指示剂用前与硼酸混合，此试剂宜现配，不宜久放。
（2）0.005 mol·L-11/2H2SO4标准液。量取H2SO4（化学纯）2.83mL，加蒸馏水稀释至5000mL，然后用标准碱或硼酸标定之，此为0.0200 mol·L-1 (1/2H2SO4)标准溶液，再将此标准液准确地稀释4倍，即得0.005mol·L-11/2H2SO4标准液（注1）。
（3）2 mol·L-1KCl溶液 称KCl（化学纯）14901g溶解于1L水中。
（4）120g·L–1MgO悬浊液 MgO12g经500～600℃灼烧2h，冷却，放入100mL水中摇匀。
操作步骤
（注2）取新鲜土样10.0g，放入100mL三角瓶中，加入2mol·L-1KCl 溶液50.0mL。
用橡皮塞塞紧，振荡30min，立即过滤于50mL三角瓶中（如果土壤NH4+—N含
量低，可将液土比改为2.5:1）。
吸取滤液25.0mL（含NH4+—N25μg以上）放入半微量定氮蒸馏器中，用少量水冲洗，先把盛有20g·L –1硼酸溶液5mL的三角瓶放在冷凝管下，然后再加120g·L –1 MgO悬浊液10mL于蒸馏室蒸馏，待蒸出液达30～40mL时（约10min）停止蒸馏，用少量水冲洗冷凝管，取下三角瓶，用0.005mol·L-11/2H2SO4标准液滴至紫红色为终点，同时做空白试验。
结果计算
土壤中铵态氮NH4+—（N）含量（mg·kg-1）= c?(V-V0)?14.0?ts
m?103
式中：c——0.005mol·L-11/2H2SO4标准溶液浓度；
V——样品滴定硫酸标准溶液体积(mL)；
V0——空白滴定硫酸标准溶液体积(mL)；
14.0——氮的原子摩尔质量（g·mol-1）；
ts——分取倍数；
103——“换算系数”（包括mL换算为L，10-3；g换算为mg，103；
换算为kg，103）；
m——烘干样品质量（g）。
土壤中氨氮、硝氮、速磷测定
硝态氮
30分钟后，提取液中硝氮测定水中硝态氮的测定（紫外分光光度法）
? 主要试剂：
(1)0.100mg/ml硝酸盐氮标准储备液(购置或自配)：称取0．7218g硝酸钾(经105—110℃烘4小时)溶于水中，移至1000毫升容量瓶中用水稀释至标线。
(2)盐酸溶液：C (HCl) =lmol／L(盐酸系优级纯)
? 标准曲线的绘制
向6支100ml
0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml，其相应浓度为0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mg／L)。按水样测定相同步骤测量吸光度。根据220nm与二倍275nm
?
用光度计上，测定水样在220nm及275nm波长处的吸光度。
? 结果计算
校正吸光度计算：Ar=A220nm-2A275nm
式中：Ar——校正吸光度；A220nm——220nm波长处测得的吸光度；
A275nm——275nm波长处测得的吸光度
由标准曲线算出相应水样硝态氮含量。
氨态氮
2 mol·L-1KCl浸提—蒸馏法
方法原理 用2mol·L-1KCl浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。取一份浸出液在半微量定氮蒸馏器中加MgO（MgO是弱碱，有防止浸出液中酰铵有机氮水解的可能）蒸馏。蒸出的氨以H3BO3吸收，用标准酸溶液滴定，计算土壤中的NH4+—N含量。
主要仪器 振荡器、半微量定氮蒸馏器、半微量滴定管（5mL）。
试剂
（1）20g·L -1硼酸—指示剂。20gH3BO3（化学纯）溶于1L水中，每升H3BO3溶液中加入甲基红—溴甲酚绿混合指示剂5mL并用稀酸或稀碱调节至微紫红色，此时该溶液的pH为4.8。指示剂用前与硼酸混合，此试剂宜现配，不宜久放。
（2）0.005 mol·L-11/2H2SO4标准液。量取H2SO4（化学纯）2.83mL，加蒸馏水稀释至5000mL，然后用标准碱或硼酸标定之，此为0.0200 mol·L-1 (1/2H2SO4)
（注标准溶液，再将此标准液准确地稀释4倍，即得0.005mol·L-11/2H2SO4标准液
1）。
（4）120g·LMgO悬浊液 MgO12g经500～600℃灼烧2h，冷却，放入100mL水中摇匀。
操作步骤
NH4+—N25μg以上）放入半微量定氮蒸馏器中，用少量水冲洗，先把盛有20g·L –1硼酸溶液5mL的三角瓶放在冷凝管下，然后再加120g·L –1 MgO悬浊液10mL于蒸馏室蒸馏，待蒸出液达30～40mL时（约10min）停止蒸馏，用少量水冲洗冷凝管，取下三角瓶，用0.005mol·L-11/2H2SO4标准液滴至紫红色为终点，同时做空白试验。
结果计算
土壤中铵态氮NH4+—（N）含量（mg·kg-1）= c?(V-V0)?14.0?ts
m?103
式中：c——0.005mol·L-11/2H2SO4标准溶液浓度；
V——样品滴定硫酸标准溶液体积(mL)；
V0——空白滴定硫酸标准溶液体积(mL)；
14.0——氮的原子摩尔质量（g·mol-1）；
ts——分取倍数；
103——“换算系数”（包括mL换算为L，10-3；g换算为mg，103；
换算为kg，103）；
m——烘干样品质量（g）。
速效磷的测定
5.3.3.2主要仪器 往复振荡机、分光光度计或比色计。
5.3.3.3（1 溶解NaHCO342.0g于800mL水中，以0.5 mol·L8.5。此溶液曝于空气中可因失去CO2而使pH增高，可于液面加一层矿物油保存之。此溶液贮存于塑料瓶中比在玻璃中容易保存，若贮存超过1个月，应检查pH是否改变。
（2）无磷活性炭。活性炭常含有磷，应做空白试验，检验有无磷存在。如含磷较多，须先用2mol·L-1HCl浸泡过夜，用蒸馏水冲冼多次后，再用0.05 mol·L-1NaHCO3浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，并检查到无磷为止。如含磷较少，则直接用NaHCO3处理即可。
（3
钼锑抗试剂。酸氧锑钾
[K(SbO)C4H4O6]0.5g
[(NH4)6Mo7O24·4H2H2SO4，边加边搅。再将上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。充分摇匀，贮于棕色瓶中，此为钼锑混合液。
临用前（当天）
100mL较长。此试剂中H2SO4为5.5mol·L-1（H+），钼酸铵为10 g·L-1，酒石酸氧锑钾为0.5 g·L-11.5 g·L-1。
（7准确称取在105℃烘箱中烘干的KH2PO（分析纯）0.2195g，4
溶解在H2SO45mL（加H2SO4防长霉菌，可使溶液长期保存），
转入1L容量瓶中，加水至刻度。此溶液为50μg·m L-1P标准溶液。 吸取上述磷标准溶液25mL，即为5 g·m L-1P标准溶液（此溶液不宜久存）。
5.3.3.4操作步骤 称取通过20
0.001g）于150mL三角瓶（或大试管）中，加入
于100mL2.5～5.0mL，同时应补加0.05 mol·L-1NaHCO3150mL三角瓶中，再用滴定管准确加入蒸馏水35mL，然后移液管加入钼锑抗试剂5mL，摇匀，放置30min后，用880nm或700nm波长进行比色。以空白液的吸收值为0，读出待测液的吸收值（A）。
标准曲线绘制：分别准确吸取5μg·mL-1磷标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、
5.0mL于
-1310mL，准确加水使各瓶的总体积达到混匀显色。同待测液一样0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μg·mL-1P。
5.3.3.5结果计算
土壤中有效磷（P）含量（mg·kg-1）=ρ?V?ts
m?10?k3?1000
式中：：ρ——从工作曲线上查得磷的质量浓度（μg·mL-1）；
m——风干土质量（g）；
V——显色时溶液定容的体积（mL）；
103——将μg 换算成的mg；
ts——为分取倍数；（即浸提液总体积与显色对吸取浸提液体积之比）；
k——将风干土换算成烘干土质量的系数；
1000——换算成每kg含磷量。
土壤中氨氮、硝氮、速磷测定
硝态氮
提取:
称取土样10.0g,用100ml的2MKCl震荡提取土样30分钟后，提取液中硝氮测定同水中硝氮测定。
水中硝态氮的测定(紫外分光光度法)
, 主要试剂:
.100mg/ml硝酸盐氮标准储备液(购置或自配):称取0(7218g硝酸钾(经(1)0
105—110?烘4小时)溶于水中，移至1000毫升容量瓶中用水稀释至标线。
(2)盐酸溶液:C (HCl) =lmol,L(盐酸系优级纯)
, 标准曲线的绘制
向6支100ml容量瓶中依次加0(100mg,ml硝酸钾标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml，用新鲜去离子水稀释到100ml(其相应浓度为0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mg,L)。按水样测定相同步骤测量吸光度。根据220nm与二倍275nm波长吸光度值之差对浓度作图，绘制标准曲线。
, 水样的测定(水样取5ml提取液上清液)
在盛有水样的比色管中加1ml1.0mol/L的盐酸溶液，用1cm石英比色皿在紫外分光光度计上，用新鲜去离子水50ml加l.0mol,L盐酸溶液作参比，测定水样在220nm及275nm波长处的吸光度。
, 结果计算
-2A 校正吸光度计算:Ar=A220nm275nm
式中:Ar——校正吸光度;A——220nm波长处测得的吸光度; 220nm
A——275nm波长处测得的吸光度 275nm
由标准曲线算出相应水样硝态氮含量。
氨态氮
-12 mol?LKCl浸提—蒸馏法
-1++方法原理 用2mol?LKCl浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH及水溶性NH44浸提出来。取一份浸出液在半微量定氮蒸馏器中加MgO(MgO是弱碱，有防止浸出液中酰铵有机氮水解的可能)蒸馏。蒸出的氨以HBO吸收，用标准酸溶33+液滴定，计算土壤中的NH—N含量。 4
主要仪器 振荡器、半微量定氮蒸馏器、半微量滴定管(5mL)。 试剂
-1(1)20g?L硼酸—指示剂。20gHBO(化学纯)溶于1L水中，每升HBO3333溶液中加入甲基红—溴甲酚绿混合指示剂5mL并用稀酸或稀碱调节至微紫红色，此时该溶液的pH为4.8。指示剂用前与硼酸混合，此试剂宜现配，不宜久放。
-1(2)0.005 mol?L1/2HSO标准液。量取HSO(化学纯)2.83mL，加蒸2424-1馏水稀释至5000mL，然后用标准碱或硼酸标定之，此为0.0200 mol?L (1/2HSO)24(注-1标准溶液，再将此标准液准确地稀释4倍，即得0.005mol?L1/2HSO标准液241)。
(3)2 mol?L-1KCl溶液 称KCl(化学纯)149.01g溶解于1L水中。
–1(4)120g?LMgO悬浊液 MgO12g经500,600?灼烧2h，冷却，放入100mL水中摇匀。
操作步骤
-1取土样10.0g，放入三角瓶中，加入2mol?LKCl 溶液100mL。用橡皮塞塞
+紧，振荡30min，立即过滤于50mL三角瓶中(如果土壤NH—N含量低，可将4
液土比改为2.5:1)。
+吸取提取液25.0mL(含NH—N25μg以上)放入半微量定氮蒸馏器中，用4 –1少量水冲洗，先把盛有20g?L硼酸溶液5mL的三角瓶放在冷凝管下，然后再加
–1120g?L MgO悬浊液10mL于蒸馏室蒸馏，待蒸出液达30,40mL时(约10min)
-1停止蒸馏，用少量水冲洗冷凝管，取下三角瓶，用0.005mol?L1/2HSO标准液24滴至紫红色为终点，同时做空白试验。
结果计算
c，(V,V)，14.0，ts-1+30土壤中铵态氮NH—(N)含量(mg?kg)= ，104m
-1式中:c——0.005mol?L1/2HSO标准溶液浓度; 24
V——样品滴定硫酸标准溶液体积(mL);
V——空白滴定硫酸标准溶液体积(mL); 0-1 14.0——氮的原子摩尔质量(g?mol);
ts——分取倍数;
3-33 10——“换算系数”(包括mL换算为L，10;g换算为mg，10;
3换算为kg，10);
m——烘干样品质量(g)。
速效磷的测定
5.3.3.2主要仪器 往复振荡机、分光光度计或比色计。
5.3.3.3试剂
(1)0.05 mol?L-1NaHCO3浸提液 溶解NaHCO42.0g于800mL水中，以3-10.5 mol?LNaOH溶液调节浸提液的pH至8.5。此溶液曝于空气中可因失去CO2而使pH增高，可于液面加一层矿物油保存之。此溶液贮存于塑料瓶中比在玻璃中容易保存，若贮存超过1个月，应检查pH是否改变。
(2)无磷活性炭。活性炭常含有磷，应做空白试验，检验有无磷存在。如
-1含磷较多，须先用2mol?LHCl浸泡过夜，用蒸馏水冲冼多次后，再用0.05
-1mol?LNaHCO浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，3
并检查到无磷为止。如含磷较少，则直接用NaHCO处理即可。 3
(3)其他钼锑抗试剂、磷标准溶液。
钼锑抗试剂。A.5 g?L-1酒石酸氧锑钾溶液:取酒石酸氧锑钾[K(SbO)CHO]0.5g，溶解于100mL水中。B.钼酸铵—硫酸溶液:称取钼酸铵446
[(NH)MoO?4HO]10g，溶于450mL水中，缓慢地加入153mL浓HSO，边46724224加边搅。再将上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。充分摇匀，贮于棕色瓶中，此为钼锑混合液。
临用前(当天)，称取左旋抗坏血酸(C6H8O5，化学纯)1.5g，溶于100mL钼锑混合液中，混匀，此即钼锑抗试剂。有效期24小时，如藏冰箱中则有效期
-1+-1较长。此试剂中HSO为5.5mol?L(H)，钼酸铵为10 g?L，酒石酸氧锑钾为24-1-10.5 g?L，抗坏血酸为1.5 g?L。
(7)磷标准溶液。准确称取在105?烘箱中烘干的KHPO(分析纯)0.2195g，24
溶解在400mL水中，加浓HSO5mL(加HSO防长霉菌，可使溶液长期保存)，2424
-1转入1L容量瓶中，加水至刻度。此溶液为50μg?m LP标准溶液。 吸取上述
-1磷标准溶液25mL，即为5 g?m LP标准溶液(此溶液不宜久存)。
5.3.3.4操作步骤 称取通过20目筛子的风干土样2.5g(精确到0.001g)于
-1150mL三角瓶(或大试管)中，加入0.05 mol?LNaHCO3溶液50mL，再加一勺无磷活性炭，塞紧瓶塞，在振荡机上振荡30min，立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于100mL三角瓶中，吸取滤液10mL(含磷量高时吸取2.5,5.0mL，同时应补加
-10.05 mol?LNaHCO溶液至10mL)于150mL三角瓶中，再用滴定管准确加入蒸3
馏水35mL，然后移液管加入钼锑抗试剂5mL，摇匀，放置30min后，用880nm或700nm波长进行比色。以空白液的吸收值为0，读出待测液的吸收值(A)。
-1标准曲线绘制:分别准确吸取5μg?mL磷标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、
-15.0mL于150mL三角瓶中，再加入0.05 mol?LNaHCO10mL，准确加水使各瓶3
的总体积达到45mL，摇匀;最后加入钼锑抗试剂2mL，混匀显色。同待测液一样进行比色，绘制标准曲线。最后溶液中磷的浓度分别为0、0.1、0.2、0.3、0.4、
-10.5μg?mLP。
5.3.3.5结果计算
,，V，ts-1，1000土壤中有效磷(P)含量(mg?kg)= 3m，10，k
-1式中::ρ——从工作曲线上查得磷的质量浓度(μg?mL);
m——风干土质量(g);
V——显色时溶液定容的体积(mL);
3 10——将μg 换算成的mg;
ts——为分取倍数;(即浸提液总体积与显色对吸取浸提液体积之比);
k——将风干土换算成烘干土质量的系数;
1000——换算成每kg含磷量。
表5-3 土壤速效磷分级
-1土壤速效磷mg?kgP 等级
<5 低="">
5,10 中
>10 高
分子荧光测定海水中氨氮含量
仪器分析实验 实验 荧光分析法测定海水中氨氮的含量
实验 荧光分析法测定海水中氨氮的含量
[1]一、 实验原理
1.1 方法原理
海水中的氨氮与邻苯二甲醛(o-Phthaldehyde, OPA)、亚硫酸钠在碱性介质中反应，生成具有荧光性的异吲哚衍生物，当其吸收了外界能量后，能发射出一定波长和强度的光称为荧光。外界提供能量的方式有多种，通过光照射激发产生的荧光称为光致荧光。
由于不同的物质其组成与结构不同，所吸收光的波长(λ)和发射光的波ex长(λ)也不同，利用这两个特性参数可以进行物质的定性鉴别。在λ和λemexem一定的条件下，如果物质的浓度不同，它所发射的荧光强度(I)就不同，两者F之间的定量关系可用下式表示:
I=KC F
式中:I——能发荧光物质的荧光强度; F
C——能发荧光物质的浓度;
K ——一定条件下的常数。
当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内 ，其发射荧光强度与溶液中该物质的浓度成正比，测量物质的荧光强度可对其进行定量分析。荧光分析法就是利用物质的荧光特征和强度，对物质进行定性和定量分析的方法。
1.2 仪器原理
利用荧光进行物质定性定量分析的仪器有荧光计和荧光分光光度计，本次实
[2]验所用的是荧光分光光度计，其基本原理是:采用氙灯作光源，通过狭缝经光栅分光后照射到被测物质上，发射的荧光用光电倍增管检测，经放大后由数据采
[2]集系统记录结果。该仪器由四个基本部分组成，即激光光源、样品池、用于选择激发波长和荧光波长的单色器或滤光片、检测器。图1为荧光分光光度计的结构示意图。
仪器分析实验 实验 荧光分析法测定海水中氨氮的含量
图1 荧光分光光度计结示意图
激发光源:选择激发光源主要应考虑它的稳定性和强度，光源稳定性直接影响测定的精密度和重复性，而强度则直接影响测定的灵敏度和检出限，目前大部分荧光分光光度计采用高压氙灯作为光源。
样品池:通常采用低荧光的石英材质制成的方形或长方形池体。
单色器:荧光分析仪具有两个单色器，分光光度计采用光栅，荧光计采用滤光片。第一个单色器置于光源和试样池之间，用于选择所需的激发波长，是之照射与被测试样上。第二个单色器置于样品池与检测器之间，用于分离所需检测的荧光发射波长。
检测器:荧光强度通常较弱，需要较高灵敏度的检测器，一般采用光电倍增管，检测位置与激发光成直角。
二、 仪器与试剂
2.1 仪器
100-1000 μL(Finnpipette)移液枪，25 mL比色管，石英比色池(1 cm)，洗瓶2个 ，F96pro荧光分光光度计(上海棱光技术有限公司制造)
2.2 试剂
氨氮标准使用液(100 μmol/L)，亚硫酸钠溶液(10 mmol/L)，四硼酸钠
仪器分析实验 实验 荧光分析法测定海水中氨氮的含量
溶液(10 g/L),OPA溶液(25 mmol/L)，未知溶液B
三、 实验步骤
3.1 标准工作曲线溶液的配制及测定
3.1.1 取0.00、0.50、1.00、1.50、2.00 mL氨氮标准使用液标样于比色管中，用超纯水定容至25.00 mL。
3.1.2 分别加入四硼酸钠溶液、亚硫酸钠溶液和OPA溶液，各1.00 mL，混匀后静置30 min。
3.1.3 扫描发射波长，确定最佳发射波长。
3.1.4 在选定的激发波长和发射波长下测定标准样品的荧光值, 绘制标准工作曲线。
3.2 待测样品浓度的测定
3.2.1取25.00 mL的待测样品，衍生处理与上述步骤相同(样品做三个平行样)。
3.2.2根据标准工作曲线计算待测海水样品中氨氮的含量。 四、数据处理与结果
4.1 最佳发射波长的确定
在选定的激发波长下，用分子荧光分光光度计对一定浓度的标准样品所发射出的波长在300-500 nm内的荧光强度进行扫描，得到该溶液荧光强度和发射波长的数据，利用origin 8.5软件对数据进行处理，绘制得到如下光谱曲线，如图1所示，
由图可知，在一定激发波长下，氨氮溶液发出的423 nm的荧光强度值最高，选取此发射波长进行测定时灵敏度高误差最小。
仪器分析实验 实验 荧光分析法测定海水中氨氮的含量
图1荧光发射光谱图
4.2 绘制标准工作曲线
用F96pro荧光分光光度计测定所配标准溶液氨氮荧光强度，取三次测定结果的平均值，得数据如表1所示。
表1标准工作曲线的测定数据
序号 标准溶液中氨氮的浓度荧光强度(I) F
(μmol/L)
1 0.00 66.40
2 2.00 102.21
3 4.00 191.68
4 6.00 209.36
5 8.00 333.48
对测量结果进行简单分析计算可知，第四个数据与其他数据的相关性较差对做出的标准曲线图会产生影响从而影响测量结果，作图之前需要先舍弃。该数据产生的原因可能有二:1.由于仪器工作不稳定，在测量第四组数据时仪器的光源发射出的光的强度有所降低，从而使溶液所发出的荧光强度降低使数据产生偏
仪器分析实验 实验 荧光分析法测定海水中氨氮的含量
离;2.由于操作失误，在配制标准工作曲线溶液时，加入的氨氮标准溶液不足1.50 mL使测量的荧光强度偏低。
利用Excel软件对数据进行处理，绘制得图到如下:
图2 标准工作曲线
4.2 计算样品中氨氮的含量
用F96pro荧光分光光度计未知样品溶液B(三个平行样)进行测定，并对每个平行样进行三次测定，三次测定结果取平均值，得数据如表2所示。
表2未知样品溶液B的测定结果
未知样品溶液 荧光强度I F 平行样1 258.01 平行样2 251.77 平行样3 327.00
平行样1中氨氮浓度:将其荧光强度I=258.01带入线性回归方程F
y=34.593x+52.366计算可得浓度c=5.94 μmol/L。 1
同理可求得平行样2和平行样3中氨氮的浓度分别为5.76 μmol/L, 7.93 μmol/L。三次平行测定的平均值为6.54 μmol/L。故未知溶液B中氨氮的浓度为6.54 μmol/L。
五、问题与讨论
仪器分析实验 实验 荧光分析法测定海水中氨氮的含量
(1)实验中加入亚硫酸钠溶液和四硼酸钠溶液的作用分别是什么,
荧光法测量氨氮是基于氨氮与邻苯二甲醛在碱性条件下，发生反应生成衍生物的基础上进行的，反应的主要试剂为邻苯二甲醛(OPA)，选择硼砂-氢氧化钠缓冲液提供反应需要的碱性环境，选择亚硫酸钠作为反应的增稳增敏剂，提高荧光体系的灵敏度和测量的稳定性。
(2)请另推荐一种测定海水中氨氮的方法，并与本实验方法比较，说明其优缺点。
在自然条件下，海水中的铵离子与氨共存，氨在海水中的离解度受海水中的pH及温度T的制约。原则上直接测量海水中的铵离子或氨均能测得总的氨氮含量。但实际上直接用铵离子电极测量海水中的铵离子含量困难极大。主要原因是
++2+3+2+海水为一个十分复杂的离子共存体，如K、Na、Mg、Al等。其中K+、Na含量巨大，构成对铵离子测量的严重干扰，而直接采用氨电极测量其含量则容易得多，且不受上述诸多离子的干扰。
根据铵离子和氨在水溶液中的质子平衡方程式可知，如果同时测得海水的温度丁，酸度pH和氨的浓度[NH3]，那么在此种情况下便可获得氨的离解度以及总氨含量。此法是利用氨氮测量仪对海水中的氨氮进行实时测量的方法。
其优点是简单快捷，可以对海水中的氨氮进行实时准确地测定便于野外测定时使用，缺点是灵敏度较低。
(3) 影响仪器稳定性的主要因素分析。
电源电压:电源电压的稳定性直接影响仪器光源强度的稳定性，而光源的稳定性则影响测量的重复性和精确度，当电源电压发生波动时，会使仪器的光强改变从而影响被测物质发射荧光的强度，使测量发生误差。
温度:由于大多数荧光物质随着温度的升高，其荧光效率和荧光强度降低，这是因为在较高温度下，分子内部能量有发生转换的倾向，且溶质分子与溶剂分子的碰撞几率增大，使发生振动弛豫和外转换的概率增加，所以温度不同会使测量结果发生改变。
电磁场:使物质产生荧光的能量不仅仅只有光，有些物质可以吸收除光以外的其他电磁波发生荧光，当外界电磁场改变时会对仪器测量的重复性产生影响。
仪器分析实验 实验 荧光分析法测定海水中氨氮的含量
六、 参考文献
[1] 李志富等编.仪器分析实验,第一版.武汉:华中科技大学社,2012:56 [2] 朱明华，胡坪等编.仪器分析.北京:高等教育出版社,2009:352
如何测定海水中氨氮的含量
如何测定海水中氨氮的含量
一．实验目的
1. 掌握FC-100型的多用分析测定仪的使用方法
2. 如何测定海水中氨氮的含量
二．实验仪器
多用分析测定仪 电解液 背景调节溶液 样品液1，2 三角瓶 量筒{5ml 50ml}
三．实验原理：
在PH大于11的环境下，铵根离子向氨转变，氨通过电极的疏水膜转移，造成电极电动势的变化，仪器根据电动势的变化测量出氨氮的浓度。
四.实验步骤
（一）FC-100型多用分析测定仪
1. 打开仪器预热30分钟
2. 调参数；PC1=-0.75 PC2=-2.45 PCA1=1 PCA2=-3
3. 清洗氨电极（相当于仪器的验漏）把氨电极放在清洗存放液中清洗时能把仪表上
的MV清洗上去，证明膜完好
4. 仪器的标定
（1） 量取45mL的浓度为5.6PPM的氨氮溶液和5mL的背景溶液于三
角瓶中，投入搅拌子，在中速情况下进行搅拌。等三到五分钟，
按住上键鸣笛三声同时黑屏后松开上键，完成样品1的标定
（2） 量取45mL的浓度为280PPM的氨氮溶液和5mL的背景溶液于三
角瓶中，投入搅拌子，在中速情况下进行搅拌。等三到五分钟，
按住上键鸣笛三声同时黑屏后松开上键，完成样品2的标定
5. 试样的测量；
量取45mL的海水溶液和5mL的背景溶液于三角瓶中，投入搅拌子，
在中速情况下进行搅拌。等2到3分钟，仪器相应基本稳定后可读出试样
中氨氮浓度值C
（二）离子搅拌器的使用
1. 插上电源，按下设备右侧电源开关，开启设备。此时设备会进行自检，蜂鸣器会发出响声。
2．按SELECT来切换功能键：
SETTEMP(设置温度) PRO.TEMP(实际温度)
SET RPM(设置转速) PRO.RPM(实际转速)
3. 按上下键设置温度和时间
4. 按START／STOP键设备启动／停止
