清心42538181
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？ 首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。 发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）； PE（藻红蛋白） PI（碘化丙啶） CY5（化青素） preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。 激发光和发射光波长，如下：
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
流式?细胞仪交流论坛：http://bbs.bbioo.com/forum-181-1.ht
荧光染料谱
常用荧光染料探针列表
这是来自于Salk的一个比较全的荧光染料列表，这些荧光染料可广泛用于流式细胞术以及荧光显微镜技术，汇集了各种荧光染料的特性，方便大家查找。可根据实际所用的检测平台、染料的最大激发光波长和最大发射光波长来选择合适的荧光染料用于实验。请注意这上面所显示的颜色可能会由于所用浏览器不同而有所不同，他们只是一个与实际颜色的近似值。
Ex: Peak excitation wavelength (nm) Em: Peak emission wavelength (nm) QY: Quantum yield
BR: Brightness; Extinction coefficient * Quantum yield / 1000 PS: Photostability; time to 50% brightness (sec)
光色波长λ(nm)代表波长 红（Red）780～630700 橙（Orange）630～600620 黄（Yellow）600～570580 绿（Green）570～500550 青（Cyan）500～470500 蓝（Blue）470～420470 紫（Violet）420～380420
流式常用荧光染料[指南]
如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢,
首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细
胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。
它的发射光波488nm; 发射光波长，如:氩离子气体激光管,
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm;
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC(异硫氰酸荧光素);
PE(藻红蛋白)
PI(碘化丙啶)
CY5(化青素)
preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。
激发光和发射光波长，如下:
激发光波长(nm) 发射光峰值(nm) FITC 488 525(绿) PE 488 575(橙红) PI 488 630(橙红) ECD 488 610(红) CY5 488 675(深红) PreCP 488 675(深红)
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
名 称 Ex波长(nm) Em波长(nm) 备 注 激光器 Hoechst 33342 355 465 DNA染色
Hoechst 33258 365 465 核酸标记 351nm DAPI 372 456 紫外激光器
细胞内钙离子 Indo-1 350 405
标记 FITC 490 520
R_PE 480 578
PE_CY5 480 670
标记抗体 PE_CY5.5 480 695 488nm PerCP 490 675 氩 Alexa Fluor 488 494 517 离 PE_Texas Red 480 613 子 Rhodamine 123 500 540 线粒体标记 激
细胞内钙离子 光 Fluo-3 506 526
标记 器
DiOC6(3) 480 501 内质网标记
YOYO-1 490 510 DNA染色
Propidium Iodide 530 615 核酸标记
Acridine Orange 490 640
APC 650 660
633nm 标记抗体 Alexa Fluor 647 650 668 氦氖激光器 CY5 650 667
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ml
荧光染料谱
染料名称 分子量 备注信息 Excitation(nm) Emission(nm)
Reactive and conjugated probes
3Hydroxycoumarin Succinimidyl ester 31
3Aminocoumarin Succinimidyl ester 30
3Methoxycoumarin Succinimidyl ester 17
5Cascade Blue Hydrazide 96
4455 Pacific Blue Maleimide 06
551 Pacific Orange
528 Lucifer yellow
2466 539 NBD NBD-X 94
2R-Phycoerythrin 480;565 578 40 k (PE)
480;565;aka Cychrome, R670, Tri-Color, Quantum 670 PE-Cy5 conjugates 650 Red
480;565;767 PE-Cy7 conjugates 743
480;565 613 Red 613 PE-Texas Red
490 675 PerCP Peridinin chlorphyll protein
490,675 695 TruRed PerCP-Cy5.5 conjugate
5494 520 FluorX GE Healthcare 87
3495 519 Fluorescein FITC; pH sensitive 89
503 512 BODIPY-FL
4547 572 TRITC TRITC 44
5570 576 X-Rhodamine XRITC 48
Lissamine 570 590 Rhodamine B
6589 615 Texas Red Sulfonyl chloride 25
1Allophycocyanin 650 660 04 k (APC)
APC-Cy7 650;755 767 PharRed conjugates
Alexa Fluor系列荧光染料
4Alexa Fluor 350 10
Alexa Fluor 405 1
028
7540 Alexa Fluor 430 02
6499 519 Alexa Fluor 488 QY 0.92 43
7503 525 Alexa Fluor 500 00
7517 542 Alexa Fluor 514 14
7530 555 Alexa Fluor 532 QY 0.61 24
1561 572 Alexa Fluor 546 QY 0.79 079
1553 568 Alexa Fluor 555 QY 0.1 250
7579 603 Alexa Fluor 568 QY 0.69 92
8591 618 Alexa Fluor 594 QY 0.66 20
1610 629 Alexa Fluor 610 285
1632 648 Alexa Fluor 633 200
1652 668 Alexa Fluor 647 QY 0.33 300
1663 691 Alexa Fluor 660 100
1680 702 Alexa Fluor 680 150
1696 719 Alexa Fluor 700 400
1752 776 Alexa Fluor 750 300
1782 804 Alexa Fluor 790 750
Cy系列荧光染料
7489 506 Cy2 QY 0.12 14
(512);55570;(6157
Cy3 QY 0.15 0 ) 67
572;(6206558 Cy3B QY 0.67 ) 58
594;(6401581 Cy3.5 QY 0.15 ) 102
(625);657670 Cy5 QY 0.28 0 92
1675 694 Cy5.5 QY 0.23 128
8743 767 Cy7 QY 0.28 18
核酸相关探针染料
6483 Hoechst 33342 AT-selective 16
455 DAPI AT-selective
6478 Hoechst 33258 AT-selective 24
480 SYTOX Blue ~DNA
400
575 Chromomycin A3 CG-selective
575 Mithramycin
1491 509 YOYO-1 271
3493 620 Ethidium Bromide 94
503 530/640 Acridine Orange DNA/RNA
~504 523 SYTOX Green DNA 600
Vital stain, TOTO: Cyanine Dimer 509 533 TOTO-1, TO-PRO-1 TO-PRO: Cyanine Monomer
510 530 Thiazole Orange
6Propidium Iodide 536 617 68.4 (PI)
4543;590 712;607 LDS 751 DNA (543ex/712em), RNA (590ex/607em) 72
546 647 7-AAD 7-aminoactinomycin D, CG-selective
~547 570 SYTOX Orange DNA 500
642 661 TOTO-3, TO-PRO-3
4647 681,697 DRAQ5 usable excitation down to 488 13
细胞功能探针
1490/405 Indo-1 AM ester. Low/High Ca++, 010
8506 526 Fluo-3 AM ester. pH > 6 55
5505 535 DCFH 2'7'Dichorodihydrofluorescein, oxidized form 29
3Dihydrorhodamine 123, oxidized form, 505 534 DHR 46 light catalyzes oxidation
548/579 587/635 SNARF pH 6/9
荧光蛋白
QY BR PS
Y66H
508 Y66F
00 EBFP monomer .18 .27
2 EBFP2 monomer 0
1 Azurite monomer 5
508 GFPuv
022511 T-Sapphire weak dimer .60 6 5
023475 Cerulean weak dimer .62 7 6
016475 mCFP monomer .40 3 4
0477 3 ECFP .15
015477 CyPet weak dimer .51 8 9
485 Y66W
0620 3 mKeima-Red monomer .24
2458 480 TagCFP dimer 9
02458 489 AmCyan1 tetramer .75 9
5462 492 mTFP1 dimer 4
471 504 S65A
02472 495 Midoriishi Cyan dimer .9 5
20396,475 508 Wild Type GFP 6k .77
479 507 S65C
203482 502 TurboGFP dimer 6 k .53 7
3482 505 TagGFP monomer 4
484 510 S65L
030weak dimer; 487 509 Emerald .68 9 .69 (Invitrogen) 488 511 S65T
2031488 507 EGFP weak dimer 6k .60 4 74
04492 505 Azami Green monomer .74 1
104493 505 ZsGreen1 tetramer 05k .91 0
4508 524 TagYFP monomer 7
2056514 527 EYFP weak dimer 6k .61 1 0
5514 527 Topaz monomer 7
051515 528 Venus weak dimer .57 3 5
054516 529 mCitrine monomer .76 9 9
084517 530 YPet weak dimer .77 0 9 201525 538 TurboYFP dimer 6 k .53 .65
01529 539 ZsYellow1 tetramer .65 3
03548 559 Kusabira Orange monomer .60 1
04548 562 9 mOrange monomer .69 9
031548 559 mKO monomer .60 1 22 206553 574 TurboRFP dimer 6 k .67 2
099554 581 tdTomato tandem dimer .69 5 8
555 584 TagRFP 5monomer
0
~031556 586 DsRed monomer monomer 28k .1 .5 6 ~02563 582 DsRed2 ("RFP") 110k .55 4
021574 596 mStrawberry monomer .29 6 5 202574 602 TurboFP602 dimer 6 k .35 6
~01576 592 AsRed2 tetramer 110k .21 3
~0584 607 mRFP1 monomer 30k .25
081584 610 J-Red dimer .20 .8 3
019587 610 mCherry monomer .22 6 6 ~00588 618 HcRed1 dimer 52k .03 .6
2588 635 Katusha dimer 3
1588 635 mKate (TagFP635) monomer 5
202588 635 TurboFP635 dimer 6 k .34 2
045590 649 mPlum .10 .1 3
01monomer; 598 625 mRaspberry .15 3 faster
photobleach
than mPlum
其他探针
2461 Monochlorobimane Glutathione probe 26
6496 517 Calcein pH > 5 23
常用荧光染料的激发及发射波长
Cy2 TM 489 506 GFP(Red Shifted) 488 507 YO-PRO TM -1 491 509 YOYO TM -1 491 509 Calcein 494 517 FITC 494 518 FluorX TM 494 519 Alexa TM 488 490 520 Rhodamine 110 496 520 ABI,5-FAM 494 522 Oregon Green TM 500 503 522 Oregon Green TM 488 496 524 RlboGreen TM 500 525 Rhodamine Green TM 502 527 Rhodamine123 507 529 Magnesium Green TM 506 531 Calcium Green TM 506 533 TO-PRO TM -1 514 533 TOTO?-1 514 533 ABI,JOE 520 548 BODIPY?530/550 530 550 Dil 549 565 BODIPY?TMR 542 568 BODIPY?558/568 558 568 BODIPY?564/570 564 570 Cy3 TM 550 570 Alexa TM 546 555 570 TRITC 547 572 Magnesium Orange TM 550 575 Phycoerythrin,R & B 565 575 Rhodamine Phalloidin 550 575 Calcium Orange TM 549 576 Pyronin Y 555 580
Rhodamine B 555 580
ABI,TAMRA 560 582
Rhodamine Red TM 570 590
Cy3.5 TM 581 596
ABI,ROX 588 608
Calcium Crimson TM 590 615
Alexa TM 594 590 615
Texas Red? 595 615
Nile Red 549 628
YO-PRO TM -3 612 631
YOYO TM -3 612 631
R-Phycocyanin 618 642
C-Phycocyanin 620 648
TO-PRO TM -3 642 660
TOTO?-3 642 660
DiD DilC’(5) 644 665
Cy5 TM 649 670
Thiadicarbocyanine 651 671
Cy5.5 675 694
FLUOROCHROME EXCITATION EMISSION
3-Hydroxypyrene 5,8,10-Tri Sulfonic acid 403 513
5-Hydroxy Tryptamine 380-415 520-530
5-Hydroxy Tryptamine (5-HT) 400 530
Acid Fuchsin 540 630
Acridine Orange (bound to DNA) 502 526
Acridine Red 455-600 560-680
Acridine Yellow 470 550
Acriflavin 436 520
AFA (Acriflavin Feulgen SITSA) 355-425 460
Alizarin Complexon 530-560 580
Alizarin Red 530-560 580
Allophycocyanin 650 661
ACMA 430 474
Aminoactinomycin D 555 655 Aminocoumarin 350 445
Anthroyl Stearate 361-381 446 Astrazon Brilliant Red 4G 500 585 Astrazon Orange R 470 540 Astrazon Red 6B 520 595
Astrazon Yellow 7 GLL 450 480 Atabrine 436 490
Auramine 460 550
Aurophosphine 450-490 515 Aurophosphine G 450 580
BAO 9 (Bisaminophenyloxadiazole) 365 395
BCECF 505 530
Berberine Sulphate 430 550 Bisbenzamide 360 600-610
BOBO 1 462 481
Blancophor FFG Solution 390 470 Blancophor SV 370 435
Bodipy Fl 503 512
BOPRO 1 462 481
Brilliant Sulphoflavin FF 430 520 Calcien Blue 370 435
Calcium Green 505 532
Calcofluor RW Solution 370 440 Calcofluor White 440 500-520 Calcophor White ABT Solution 380 475 Calcophor White Standard Solution 365 435
Cascade Blue 400 425
Catecholamine 410 470
Chinacrine 450-490 515
Coriphosphine O 460 575
Coumarin-Phalloidin 387 470 CY3.1 8 554 568
CY5.1 8 649 666
CY7 710 805
Dans (1-Dimethyl Amino Naphaline 5 Sulphonic Acid) 340 525
Dansa (Diamino Naphtyl Sulphonic Acid) 340-380 430
Dansyl NH-CH3 in water 340 578
DAPI 350 470
Diamino Phenyl Oxydiazole (DAO) 280 460 Dimethylamino-5-Sulphonic acid 310-370 520 Diphenyl Brilliant Flavine 7GFF 430 520 Dopamine 340 490-520
Eosin 525 545
Erythrosin ITC 530 558
Ethidium Bromide 510 595
Euchrysin 430 540
FIF (Formaldehyde Induced Fluorescence) 405 435 Flazo Orange 375-530 612
Fluorescein Isothiocyanate (FITC) 490 525 Fluo 3 485 503
Fura-2 340-380 512
Genacryl Brilliant Red B 520 590 Genacryl Brilliant Yellow 10GF 430 485 Genacryl Pink 3G 470 583
Genacryl Yellow 5GF 430 475
Gloxalic Acid 405 460
Granular Blue 355 425
Haematoporphyrin 530-560 580
Hoechst 33258 (bound to DNA) 346 460 Indo-1 350 405-482
Intrawhite Cf Liquid 360 430
Leucophor PAF 370 430
Leucophor SF 380 465
Leucophor WS 395 465
Lissamine Rhodamine B200 (RD200) 575 595 Lucifer Yellow CH 425 528
Lucifer Yellow VS 430 535
Magdala Red 524 600
Maxilon Brilliant Flavin 10 GFF 450 495 Maxilon Brilliant Flavin 8 GFF 460 495
MPS (Methyl Green Pyronine Stilbene) 364 395
Mithramycin 450 570
NBD Amine 450 530
Nile Red 515-530 525-605
Nitrobenzoxadidole 460-470 510-650 Noradrenaline 340 490-520
Nuclear Fast Red 289-530 580 Nuclear Yellow 365 495
Nylosan Brilliant Flavin E8G 460 510 Pararosaniline (Feulgen) 570 625 Phorwite AR Solution 360 430 Phorwite BKL 370 430
Phorwite Rev 380 430
Phorwite RPA 375 430
Phosphine 3R 465 565
Phycoerythrin R 480-565 578 Pontochrome Blue Black 535-553 605 Primuline 410 550
Procion Yellow 470 600
Propidium Iodide 536 617
Pyronine 410 540
Pyronine B 540-590 560-650 Pyrozal Brilliant Flavin 7GF 365 495 Quinacrine Mustard 423 503 Rhodamine 123 511 534
Rhodamine 5 GLD 470 565
Rhodamine 6G 526 555
Rhodamine B 540 625
Rhodamine B 200 523-557 595 Rhodamine B Extra 550 605
Rhodamine BB 540 580
Rhodamine BG 540 572
Rhodamine WT 530 555
Rose Bengal 540 550-600
Serotonin 365 520-540
Sevron Brilliant Red 2B 520 595
Sevron Brilliant Red 4G 500 583 Sevron Brilliant Red B 530 590 Sevron Orange 440 530
Sevron Yellow L 430 490
SITS (Primuline) 395-425 450 SITS (Stilbene Isothiosulphonic acid) 365 460
Stilbene 335 440
Snarf 1 563 639
sulphO Rhodamine B Can C 520 595 Sulpho Rhodamine G Extra 470 570 Tetracycline 390 560
TRITC (Tetramethyl Rhodamine Isothiocyanate) 557 576
Texas Red 596 615
Thiazine Red R 510 580
Thioflavin S 430 550
Thioflavin TCN 350 460
Thioflavin 5 430 550
Thiolyte 370-385 477-484
Thiozol Orange 453 480
Tinopol CBS 390 4.3
TOTO 1 514 533
TOTO 3 642 661
True Blue 365 420-430
Ultralite 656 678
Uranine B 420 520
Uvitex SFC 365 435
Xylene Orange 546 580
XRITC 582 601
YO PRO 1 491 509
、
红640—780nm，橙640—610，黄610—530，绿505—525，蓝505—470，紫470—380。
红640—780nm
橙640—610nm
黄610—530nm
绿505—525nm 紫470—380nm 蓝505—470nm
免疫分析中常用的荧光染料与标记染色
（一）免疫荧光标记最常用的荧光染料 最常用的染料有FITC 和藻红蛋白类（PE ）及罗丹明等。 FITC （异硫氰酸荧光素）：绿色530nm PE （藻红蛋白）：橙黄色575nm PerCP （多甲藻黄素叶绿素蛋白）：深红色675nm PI （碘化丙啶）：橙红色620nm 488nm 波长的氩离子激光激发 APC （别藻青蛋白）：红色660nm 630nm 波长的氦氖激光或红色二极管激光激发 （二）免疫荧光标记 常用的标记染色为直接免疫荧光染色和间接免疫荧光染色。在进行双参数或多参数分析时，常常需要进行荧光抗体的组合标记，目前已经有双色、三色以及四色标记。 （三）细胞自发荧光 自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中，对于结合水平不高的荧光抗体来说，如何提高信噪比是个关键。一般说来，细胞成分中能够产生自发荧光的分子（例如核黄素、细胞色素等）的含量越高，自发荧光越强；培养细胞中死细胞／活细胞比例越高，自发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的比例越高，自发荧光越强。
