丹参的主要化学成分

(1)主要化学成分丹参的化学成分主要有两大类:脂溶性的丹参酮类化合物和水溶性的酚酸类化合物。脂溶性成分属醌、酮型结构的有:丹参酮，隐丹参酮，异丹参酮，异隐丹参酮，羟基丹参酮，丹参酸甲酯，亚甲基丹参醌，二氢丹参酮，丹参新醌A、B、C、D，二氢异丹参酮，新隐丹参酮，去羟新隐丹参酮，代号为Ro-090680的2-异丙基-8-甲基菲-3，4-二酮，去甲丹参酮，丹参二醇A、B、C，丹参新酮，1-氢丹参新酮，1-氢丹参酮，1-氧代异隐丹参酮，3α-羟基丹参酮?A，1，2-二氢丹参醌，醛基丹参酮，亚甲二氢丹参酮，7β-羟基-8，13-松香二烯-11，12-二酮，1，2，5，6-四氢丹参酮，4-亚甲丹参新酮，丹参酚醌，鼠尾草呋萘嵌苯酮，丹参内酯，二氢丹参内酯，丹参螺缩酮内酯，表丹参螺缩酮内酯，丹参螺缩酮内酯?，就是丹参隐螺内酯，表丹参螺缩酮内酯?，就是丹参隐螺内酯，鼠尾草酮,鼠尾草酚酮，丹参酮二酚。丹参环庚三烯酚酮等;属其他类型结构的有:降鼠尾草氧化物，弥罗松酚，鼠尾草酚，柳杉酚等。

水溶性成分酚性酸化合物有:丹参酸A、B、C，丹参酸A又称丹参素，其结构为D(+)-β-(3，4-二羟基苯基)乳酸，丹参酸B是由3分子的丹参素和1分子的咖啡酸缩合形成的，就是丹参酚酸B;丹参酸C是2分子丹参素的缩合物;丹参酚酸 A、B、C、D、E、G;迷迭香酸，迷迭香酸甲酯，紫草酸草酸单甲脂，紫草酸二甲酯，紫草酸乙酯，紫草酸 B，原儿茶醛，咖啡酸，异阿魏酸等。还含黄芩甙，异欧前胡内酯，熊果酸，β-谷甾醇，胡萝卜甙，5-(3-羟丙基)-7-甲氧基-2-(3′-甲氧基-4′-羟苯基)-3-苯并,b,呋喃甲醛，替告皂甙元，豆甾醇等。

(2)药理作用和功效丹参有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效。现代药理学的研究表明，它具有多方面的药理作用。

对心血管系统可增加冠脉流量、降低心肌兴奋性和传导性，对急性心肌缺血缺氧所致的心肌损伤具有明显保护作用。它的抗心肌缺血机制可能是通过保护心肌细胞间盘受损、维持细胞膜的完整性，对缺血区边缘的毛细血管损害较轻，有利于侧支循环的建立，增加血液供应，因而加快损伤组织的修复和心肌细胞的再生。

丹参还具有改善微循环、抗血小板的聚集和血栓形成，并能使血液粘度下降，这些作用有利于改善血液循环，对心肌缺血性损伤的保护有益。其改善微循环和改变血液流变学的作用，也可促进骨折和皮肤伤口的愈合和保护肝细胞损伤的修复和再生。丹参对中枢的作用主要是大脑皮层的抑制，产生镇静作用;对中枢的抑制作用可能与脑组织cAMP磷酸二酯酶的抑制和cAMP水平的提高有关。丹参制剂体内外试验有一定抗肿瘤作用。也有报道，在一定的给药时间和剂量时，对静脉接种的肝癌细胞有促进转移的作用。临床上用丹参和放射治疗合并应用于肿瘤患者，未见有促转移作用发生，但可减轻局部照射处的纤维化和瘢痕形成。丹参的抗肿瘤和促转移作用有待进一步研究。抗菌消炎丹参的各提取物有明显的抗菌消炎作用，如总丹参酮对耐青霉素、金霉素和红霉素的金黄色葡萄球菌敏感;对毛发癣菌也有抑制作用;丹参酮?、丹参酮?-A及隐丹参酮对人型结核杆菌有抑制作用;对感染性肿胀及炎性肿胀有一定抗炎作用，其抗炎机制可能与影响PGE水平和抑制白细胞趋化性有关。其它:如通过卵巢呈现雌激素样作用，有抗雄激素样活性。抑制cAMP磷酸二酯酶活性。对体液及细胞免疫功能有较强的抑制作用等。

抗氧化作用体外，从丹参中提取的三种水溶性成分丹酚酸A、丹酚酸B和迷迭香酸，对由维生素C-NADPH或由Fe2+-半胱氨酸诱发的大鼠脑、肝、肾微粒体的脂质过氧化都有很强的抑制效应，其作用强弱依次为丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸，比抗氧化剂维生素E的作用强百倍至千倍。机制之一是这些成分能有效地清除超氧阴离子。体内，对急性乙醇中毒动物肝脏过氧化脂质生成的抑制作用:给小鼠灌服50%乙醇造成急性乙醇中毒，肝脏脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)急剧上升，约相当正常小鼠肝脏丙二醛水平3.5-4倍。在小鼠乙醇中毒后以迷迭香酸(100毫克/公斤)灌服，共3次，则可使肝脏MDA生成明显降低，为乙醇中毒对照组MDA量的54%(P,0.01,。维生素E(100毫克/公斤×3，P.O)组小鼠肝脏MDA生成也显著降低，为乙醇中毒组肝

脏MDA量的 61%。可见，迷迭香酸体内抗肝脏脂质过氧化作用可能不亚于维生素E。

对脑组织缺血/再灌注损伤的保护作用:丹酚酸A对脑缺血再灌注损伤有保护作用，清醒和麻醉小鼠脑内MDA含量基本相同，脑缺血5分钟后MDA含量亦无明显增加。缺血5分钟后再灌注，则脑内MDA含量明显增加。再灌10、30分钟时，大脑皮层MDA含量分别增加29.8%和15.5%。于缺血前5分钟给予丹酚酸A 3-10毫克/公斤静注可使皮层MDA含量降低。海马-纹状体内MDA含量在再灌注10、30分钟后分别增加43.0%和25.5%。丹酚酸A对MDA的生成有抑制作用。

增强耐缺氧能力丹参酮?A磺酸钠腹腔注射200毫克/公斤，可显著延长小鼠在缺氧情况下的存活时间，氧耗速度较对照组稍减慢，小鼠死亡时存余氧含量较对照组低，小鼠缺氧达到氧含量为6%，心脏和脑组织中乳酸含量较正常组显著增加，而给丹参酮?A磺酸钠后0.5小时再进行缺氧试验，组织中乳酸含量不增加，与正常相比，差异不显著，表明丹参酮?A磺酸钠与提高小鼠缺氧耐受力，改善缺氧后引起的心肌代谢紊乱有关。丹参素300毫克/公斤和450毫克/公斤腹腔注射，均能显著延长小鼠耐缺氧的生存时间，丹参酮?A磺酸钠450毫克/公斤腹腔注射，也有延长作用，但较丹参素为短。丹参酮?A磺酸钠可使离体兔左心室乳头肌在缺氧条件下，电刺激收缩幅度下降一半所需时间明显延长，表明其可减少心肌对氧的需求。丹参能防止或减轻缺氧心肌超微结构的变化，对缺氧心肌有保护作用，按照Trumb分类法，缺氧31-36分钟时，丹参组心肌线粒体变化为1-2期，对照组为4-6期。缺氧心脏标本外观对比，丹参组呈鲜红色，对照组略呈紫色，示丹参组冠状动脉血氧较高。采用3H-TdR、3H-脯氨酸、DNA定量检测及MTT比色等方法研究结果表明，猪肺动脉缺氧性内皮细胞条件培养液(HECCM)能引起猪肺动脉平滑肌细胞的线粒体酶活性升高，核内DNA含量增加及3H-TdR、3H-脯氨酸掺入量增多。丹参注射液能阻抑猪肺动脉缺氧性内皮细胞条件下培养液引起的猪肺动脉平滑肌细胞增生和降低HECCM组和常氧性内皮细胞条件培养液(NECCM)组猪肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的3H-脯氨酸掺入量。但不影响NECCM组PASMC核DNA含量及3H-TdR掺入量，提示缺氧可能会刺激肺动脉内皮细胞(PAEC)合成，分泌某些能促进PASMC增生及胶原蛋白合成的细胞因子，丹参有抑制此过程的效应。

改善肾功能丹参浸膏100毫克/公斤及丹参提取物腹腔内给药，对腺嘌呤诱发的肾功能不全大鼠，均能降低血尿素氮、肌酐，使肾小球滤过率(GFR)、肾血浆流量(RPE)、肾血流量(RBF)显著增加，肾脏功能明显改善，能显著增加尿中尿素、肌酐、钠和无机磷的排出。改善学习记忆作用丹酚酸A和B对樟柳碱或东莨菪碱引起的小鼠记忆获得障碍有明显的改善作用，可以提高动物的训练成绩，对小鼠脑缺血再灌注引起的脑记忆功能障碍也有明显的改善作用。常用验方及临床应用 (1)月经不调:丹参15克，当归9克，水煎服。

(2)痛经:丹参15克，郁金6克，水煎，每日一剂，分2次服。

(3)冠状动脉粥样硬化性心脏病、心绞痛:?丹参18克，赤芍、川芎、红花各9克，降香6克。煎服或制成冲剂或浸膏分两次服。阴虚阳亢者可加玄参12克，苦丁茶9克。气阴两虚者加党参9克，玉竹15克。?(复方参香片)丹参60克，当归30克，菖蒲15克，降香4.5克，细辛1克。前三者水煎浓缩为浸膏，后二者研粉与浸膏混匀，低温干燥，压成片剂。上述处方为1日量，分3次服用，4周为1个疗程。?复方丹参注射液(1毫升相当于丹参、降香各1克)，肌肉注射，每次2毫升，每日1-2次，2-4周为1疗程。静脉滴注，复方丹参注射液4毫升加葡萄糖(或低分子右旋糖酐)500毫升，2-3周为1疗程。?丹参舒心片(每片含丹参提取物0.2克)，每次1-2片，每日3次，连服1-2月。

(4)早期肝硬化:丹参12克，桃仁、生地黄、制大黄各9克，地鳖虫6-9克，党参、黄芪各9克，鳖甲12-24克，水煎服。以此加减常可改善肝功能。妇女月经期暂停用药。

(5) 栓闭塞性脉管炎:丹参、金银花、赤芍、土茯苓各30克，当归、川芎各15克，水煎服。

(6)神经衰弱失眠:丹参800克，五味子600克，用白酒适量浸泡14日。每服5毫升，每日3次。

(7)宫外孕(包块型):丹参9-15克，赤芍、乳香、没药、桃仁各6-9克，三棱、莪术各3-6克，水煎服。

(8)中风病:丹参注射液30毫升(含生药45克)加10%葡萄糖10毫升静脉注射，每日1次，20日为一疗程。

(9)视网膜中央静脉阻塞病:静脉滴注复方丹参注射液18毫升，每日1次，10日为一疗程。

(10)血脂症:通脉宁心冲剂(由丹参、川芎、葛根组成)10克，每日3次，口服，5周为一疗程。

11)儿病毒性心肌炎:复方丹参注射液(每毫升含生药1.5克)，婴儿用4毫升，学龄前6毫 (

升，8-10岁8毫升，大于11岁10毫升，加10%葡萄糖内静滴，每日1次，10日为一疗程，疗程间隔3-5日。

(12)肺心病:在常规治疗的基础上将丹参注射液10毫升加入5%或10%葡萄糖250-500毫升中静脉滴注，每日1次，7日为一疗程，一般2个疗程。

(13)支气管哮喘:用上海中药三厂生产的丹参片(每片含生药1克)，每日3次，每次3-4片，小儿每次2-3片，口服，6个月为一疗程。哮喘发作时加用氨茶碱。

(14)急性肾炎:复方丹参注射液(每毫升含丹参、降香各1克)，轻症每日2次，每次2毫升，肌注;较重症每次2-3毫升，加入10%葡萄糖200-300毫升中静滴。

(15)乙型肝炎:复方丹参注射液20毫升，加入10%葡萄糖500毫升中静滴，每日1次;胸腺因子D针10毫升，每日1次，肌注。2个月为一疗程。

(16)慢性活动性乙型肝炎:丹参注射液20毫升，654-2针剂20毫升，加入10%葡萄糖500毫升中静滴，每日1次，3个月为一疗程。

)10-14毫升加入50%葡萄糖20毫升中静推，每 (17)糖尿病:丹参注射液(每毫升含生药1.5克

日1次，20日为一疗程，疗程间隔10日，其间用复方丹参片1日3次口服。

(18)失眠症:取双侧耳穴注50%丹参注射液2毫升，2%普鲁卡因1毫升，每穴注入药液0.2毫升，隔日1次，3次为一疗程，不愈休息3天再行下一疗程。

(19)小儿秋冬季腹泻:复方丹参注射液2毫升，肌注，每日2次，连用2-3日;复方丹参注射液6-10毫升加入5%葡萄糖100-200毫升中静滴，每日1次，直至腹泻停止。液体疗法:轻度脱水，口服ORS或米汤电解质溶液;重度脱水，纠正水电解质及酸碱平衡紊乱后、改用口服补液法，另配合对症处理:可选用乳酶生、胃酶片等。丹参产品的加工与利用 (1) 丹参注射液和复方丹参注射液的制备与用途

丹参注射液丹参1500克，亚硫酸氢钠2克，氯化钠5克，注射用水适量。取丹参水煎，滤过，浓缩，加乙醇使含醇量浓度达75%，冷藏，滤过，滤液加明胶水溶液至上清液不再浑浊，冷藏，滤过，回收乙醇，浓缩液加乙醇使含醇量达85%，冷藏，滤过，回收乙醇，加入亚硫酸氢钠，混匀，冷藏、滤过，滤液加入氯化钠，用氢氧化钠液调节pH6.5-7.0，煮沸，滤过，加注射用水至1000毫升，灌封，灭菌;每支2毫升，每1毫升相当于丹参1.5克，用薄层扫描法可同时测定丹参注射液中3种水溶性有效成分的含量，展开剂为氯仿-乙酸乙酯-苯-甲酸(5?6?3?1)，其含量范围(毫克/毫升)丹参素4.78-10.2，原儿茶醛0.638-1.32，原儿茶酸0.144-0.261。本品为棕色澄明液体，pH应为5.0-7.0。功能活血化瘀，通脉养心。用于冠心病，胸闷，心绞痛。肌内注射，每次2-4毫升，每日1-2次;静脉注射，每次10毫升，用50%葡萄糖注射液20毫升稀释后应用，每日1-2次;静脉滴注，每次20-30毫升，用5%葡萄糖注射液100-500毫升稀释后应用，每日1次。丹参注射液有关问题的研究原料选择:丹参原料必须选择优质品，外形只是作为选择的参考，测量光密度选择原料比较可靠。

提取方法的选择:原形生药煎煮比粗粉煎煮更有利于提出有效成分，有利于过滤。煎煮方法

以夹层锅水蒸气煎煮比直火煎煮有效成分浸出多。

工艺改进的研究:丹参注射液主要采用水提醇沉法制备，以每毫升药液相当含生药量计，药液以浓缩至相当生药1.5克/毫升为佳。该注射液的有效成分含量、澄明度、色泽都不够稳定。因此目前在制备工艺上有多处改进。有报道经过对各工艺环节中药液所含有效成分丹参甲素及原儿茶醛作定量比较，认为二次醇沉法比一次醇沉法pH值好，二次醇沉法中又以使含醇达75%为佳。比如有实验证明，在丹参注射液生产过程中第1次、第2次醇沉淀物中，含有丹参有效成分-丹参素;从纸层析,比色法测定丹参素的含量说明，沉淀物中提出的丹参素约为原药液的40%，为提高注射液中丹参素的含量，从而改变生产工艺。从紫外分光仪测得的消光值说明，沉淀物中提出的原儿茶醛约为原液的二分之一。又有文献报道，采用水醇法，第1次加醇浓度高时，往往出现凝结成团，造成水溶性酸性成分提取不完全。乃对水醇法加以改进，降低提取液浓度，第1次加醇时，不用95%乙醇，改用制剂回收之90%乙醇，趁热加入。通过改进，使产品质量一直保持稳定，并以提取的丹参残渣中，采用75%乙醇洗脱残渣。还应注意到，加醇方法以将醇慢慢加入浓缩药液中的顺序为好，同时不断搅拌。

去除鞣质方法的研究:鞣质是影响丹参注射液澄明度的主要因素。通过比较改良明胶法、明胶,NaCl法、明胶,NaCl高岭土法，三次醇沉法、盐酸法、饱和氯化钠法、聚酰胺法和浓醇调pH值法等除鞣方法，其中聚酰胺法除鞣虽高，能有效地改善澄明度，但有效成分损失严重，且操作麻烦，生产成本高，不宜采用;改良明胶法对有效成分影响较小，除鞣效果亦较好，方法可行，以醇溶液调pH法简便易行，较常用。其去鞣效率与乙醇浓度有密切关系，以80%浓度为佳，醇浓度越低，去鞣效率越差。pH以8-9为好。在80%乙醇液中，调pH 9可基本除尽鞣质，此法除鞣对原儿茶醛含量无影响。点样液pH值对原儿茶醛紫外吸收波长有影响，随着pH值增大向长波移动，薄层扫描法测定时必须选择扫描波长;三次醇沉法最后一次的醇沉浓度为90%，有可能影响有效成分的含量;胶醇法制备的丹参注射液，鞣质除去较完全，原儿茶醛含量高，在制备时，加入明胶和乙醇的速度应慢，加快搅，这样可生成细小的絮状沉淀，有效成分损失小，若加液速度太快，或不规则搅拌，则极易生成粘稠的块状沉淀，包埋有效成分，甚至使有效成分损失殆尽。明胶沉淀法制得的丹参注射液薄层层析检查无原儿茶醛斑点，紫外无最大吸收，原因是否为操作不当，尚需进一步研究探讨。

提高注射剂澄明度的探讨:活性炭处理可以提高丹参注射液的澄明度，但活性炭用量增加，丹参水溶性成分也随之降低。一般以0.5%为宜。药液可先煮沸20分钟，再加入活性炭搅拌10分钟，较先加活性炭，再煮沸有效成分损失小。也有分两次加入(每次0.25%)，中间调pH值，所得成品较佳的报道。

此外，为综合利用丹参的脂溶性成分，可先用乙醇提取丹参酮(供制片剂)，再用水提醇沉法处理药渣，制成丹参注射液。

复方丹参注射液丹参1000克，降香1000克，吐温-80u 5，注射用水适量。取丹参加水煎煮3次，合并滤液，滤过，滤液减压浓缩至约500毫升，用乙醇沉淀处理2次，第1次溶液中含乙醇量75%，第2次为85%。每次均冷藏放置40小时，滤过，滤液浓缩至约170毫升。加入7-10倍量水，放置16小时，滤过，用10%氢氧化钠溶液调节pH 6.8，煮沸0.5小时，加入2%活性炭，稍冷后滤过，滤液再调节pH至6.8，滤过，加注射用水使成500毫升;另取降香，水蒸气蒸馏，收集蒸馏液500毫升，冷藏24小时，分去上层油层，合并上述两液，滤过，加注射用水使成1000毫升，灌封，灭菌，即得;每支2毫升。本品为棕色的澄明液体。稀释液照分光光度法测定在287?3nm的波长处有最大吸收;加三氯化铁试液显污绿色;pH为5.0-7.0。有扩张血管与增进冠状动脉血流量的作用。用于心绞痛，亦可用于心肌梗塞等。肌内注射，每次1-2毫升，每日2次。静脉滴注，每次4毫升，用5%葡萄糖250-500毫升稀释后应用，每日1次。

(2) 丹参酮?,A磺酸钠注射液的制备

丹参酮?,A粗品的提取:将水煮过的丹参渣干燥(未经水煮的原药材亦同)50千克，加5倍

量95%酒精，回流3小时，过滤，再重复操作一次，将第一次乙醇溶液减压浓缩至20-25立升左右，第二、三次回流液合并减压浓缩至相同体积，分别放置15小时左右，待析(析出粗品的量，因不同品种不同含量而有差异)滤出粗品。母液继续放置15小时左右待析。滤出析出物，母液再减压浓缩至1/3的体积，放置10多小时，仍有粗品析出，如此反复操作至无析出物为止，母液放置供提取丹参其它成分用。

丹参酮?,A的鉴别及纯化:利用薄层层析方法鉴别各批丹参酮?,A粗品的纯度(硅胶G硬板，展开剂为苯、氯仿1?1)，将粗丹参酮?,A纯度相当的合并一般析出物含丹参酮?,A第一次约为30%，二、三、四次析出物纯度约为40%-50%，分别进行重结晶纯化，以达到做丹参酮?,A磺酸钠的药检要求，即经薄层检查，原点杂质很少，而含丹参酮?,A达70%以上的纯度，Rf值为0.7左右。

丹参酮?,A纯度检查:除用TLC肉眼观察粗略估计外可以进一步用柱层析实验检查。称取丹参酮?,A粗品(约含丹参酮?,A 40%-50%左右的混合结晶)100克，加25%左右的化学纯活性碳，加入15倍量的酒精，加热回流2-3小时，趁热过滤，滤液放冷，待析，滤出丹参酮?,A，母液再行减压浓缩至原体积的2/3，放置待析。活性碳反复再用酒精加热回流洗脱吸附物，

,A，一操作同上，每次回流2小时。最后活性碳再用氯仿洗脱，尽可能回收被吸附的丹参酮?般在第二、三、四次酒精回流中析出的丹参酮?,A纯度较高，其它纯度不够者可合并再行重结晶。如果析出的丹参酮?,A纯度在30%左右者，则可将该批样品经过中性氧化铝吸附杂质后再用活性碳处理。800克含丹参酮?,A30%左右的粗品，加入20立升酒精，加热使全部溶解，然后置于布氏漏斗中2千克左右的中性氧化铝(IV-V级)层，微微抽滤，使酒精徐徐流下，流出液再加活性碳回流2-3小时，操作同上。

磺化:取丹参酮?,A(纯度在70%以上)50克，加120毫升冰醋酸，再加200毫升醋酐，置于三颈烧瓶中，在搅拌下于10-15?滴加100毫升浓硫酸,冰醋酸(1?1V/V)的混合液，滴加完毕后，在室温下搅拌一小时，然后将反应液徐徐倾入等体积的蒸馏水，立刻加入1立升饱和氯化钠(化学纯)水溶液，即有粗丹参酮?,A磺酸钠析出，离心，沉淀物用饱和氯化钠溶液洗二次，再用

6，将滤取固体物在水浴上蒸至干涸，固体物先用氯仿回流8适量水洗一次，使固体物pH=5?

小时，除去未磺化的脂溶性杂质，再用无水乙醇回流除去残存的氯化钠，乙醇液浓缩，即有红色丹参酮?,A磺酸钠粗结晶析出，用甲醇重结晶二次，即得橙红色针状结晶，经充分干燥后，熔点194-196?，得到纯品约40克。

(3) 复方丹参片的制备与用途

复方丹参片丹参浸膏215克，三七141克，冰片8克。取丹参提取3次，第1次加乙醇回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30(55-60?);第2次加50%乙醇回流1.5小时，滤过;第3次加水回流2小时，滤过，合并第2、3次滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.40(55-60?)，再与上述第1次的浓缩液合并，混匀，制成丹参浸膏(55-60?)相对密度为1.35-1.39，取处方量浸膏加三七细粉，拌匀，干燥，制粒，另将冰片研细，与上述颗粒混匀，压制成1000片或包糖衣。除去糖衣后呈褐色，气芳香，味微苦。取本品研细，分次加水滤过后稀释，照分光光度法测定，在283nm的波长处有最大吸收;取本品研细，进行微量升华，所得白色升华物，加新制的1%香草醛的硫酸溶液1滴，液滴边缘渐显玫瑰红色;取本品研细，加水洗涤2次，倾去上清液，残留物加无水乙醇10毫升，振摇，滤过，取滤液置蒸发皿中，于水浴上蒸干，滴加三氯化锑饱和的氯仿溶液数滴，显紫色;本品以薄层扫描法测定其中丹参酮含量，不少于1毫克/片，亦可用751型分光光度计于420nm处测定丹参酮的菲醌碳基与2，4,二硝基苯肼试液反应显橙色的吸收度换算成复方丹参片中总丹参酮含量;本品采用大孔树脂富集、纯化三七总甙后，以比色法测定其中三七总皂甙含量，不少于8.0毫克/片，亦可应用高压液相色谱法测定复方丹参片中三七皂R1和人参皂甙Rg1的含量;本品以薄荷醇为内标用气相色谱测定其中冰片的含量，不少于6.4毫克/片，亦可应用薄层扫描法测定复方丹参片中冰片的含量。功能活血化瘀，理气止

痛。用于胸中憋闷，心绞痛，慢性气管炎，痛经等。口服，每次3片，每日3次。

(4) 丹参地上部分的利用

丹参以根入药，其茎叶多弃而不用。为了充分利用丹参药物资源，上海第七制药厂对丹参茎叶进行了全面研究，通过对丹参根、茎、叶三个部位作酚性物的径向圆形纸层检查的对比试验发现，丹参茎和叶都含有与根部相同的酚性物，前两者含量比根部略少，但却含有根部所没有的酚性物;通过药理试验表明，丹参茎叶能提高小鼠在窒息性缺氧情况下的耐缺氧能力，其耐缺氧能力与丹参根相似，丹参茎叶能延长小鼠在减压缺氧状态下的平均存活时间及存活率，丹参茎叶对离体豚鼠心脏有明显的增加冠脉血流量作用;临床观察表明，丹参茎叶对冠心病心绞痛具有明显的疗效，临床使用过程中未发现有任何毒副作用。所以通过更深入的研究，或许能证实丹参茎叶可以代替丹参治疗冠心病的假说。

丹参及其主要成分保肝作用的研究进展

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丹参及其主要成分保肝作用的研究进展作者:袁媛吴芹石京山陈修平

来源:《中国中药杂志》 2015年第 04期

[摘要 ]丹参是临床最常用的中药之一,丹参的药效物质基础主要包括脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类。丹参具有 “ 祛瘀止痛,活血通经,清心除烦 ” 等传统功效。现代药理学研究表明,丹参及其主要成分具有保护心脑血管的作用。近来研究显示,丹参及其主要成分对四氯化碳、 D-氨基半乳糖、醋氨酚、酒精等制备的肝损伤模型也具有明显的保护作用。该文对丹参的保肝作用及其机制进行系统总结与展望。

[关键词 ]丹参 ; 肝脏保护作用 ; 丹参提取物 ; 丹参酮Ⅱ A; 隐丹参酮 ; 丹参素 ; 丹酚酸 A; 丹酚酸 B Advance in studies on hepatoprotective effect of Salvia miltiorrhiza

and its main components

YUAN Yuan1, WU Qin1, SHI Jing-shan1, CHEN Xiu-ping2*

(1. Department of Pharmacology, Zunyi Medical College, Key Laboratory of Basic Pharmacology of

Guizhou Province, Zunyi 563003, China;

2. State Key Laboratory of Quality Research for Traditional Chinese Medicines, Institute of Chinese

Medical Sciences, University of Macau, Macao, China)

[Abstract]Dried roots and rhizomes of Salvia miltiorrhiza(Danshen ) are among the most commonly used traditional Chinese medicines in clinic. The material basis for its efficacy mainly includes hydrophobic tanshinones and hydrophilic salvianolic acids. The traditional effects of Danshen are ″removing stasis and relieving pain, activating blood to promote menstruation, clearing heart fire and tranquilization″. According to modern pharmacological studies, Danshen and its main components have cardiovascular and cerebrovascular protective effect. Recent studies showed that Danshen and its main components also demonstrated protective effects on liver injury models induced by carbon tetrachloride, D-galactosamine, acetaminophen and alcohol. In this paper , the hepatoprotective effect and mechanism of Danshen were summarized and studied.

[Key words]Salvia miltiorrhiza; hepatoprotective effect; extracts from S. miltiorrhiza; tanshinone Ⅱ A; cryptotanshinone; salvianolic acid A; salvianolic acid B

丹参主要成分及药理作用

-(3-羟丙基)-7-还含黄芩甙，异欧前胡内酯，熊果酸，β-谷甾醇，胡萝卜甙，5甲氧基-2-(3′-甲氧基-4′-羟苯基)-3-苯并,b,呋喃甲醛，替告皂甙元，豆甾醇等。 (2)药理作用和功效丹参有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效。现代药理学的研究表明，它具有多方面的药理作用。

对心血管系统可增加冠脉流量、降低心肌兴奋性和传导性，对急性心肌缺血缺氧所致的心肌损伤具有明显保护作用。它的抗心肌缺血机制可能是通过保护心肌细胞间盘受损、维持细胞膜的完整性，对缺血区边缘的毛细血管损害较轻，有利于侧支循环的建立，增加血液供应，因而加快损伤组织的修复和心肌细胞的再生。丹参还具有改善微循环、抗血小板的聚集和血栓形成，并能使血液粘度下降，这些作用有利于改善血液循环，对心肌缺血性损伤的保护有益。其改善微循环和改变血液流变学的作用，也可促进骨折和皮肤伤口的愈合和保护肝细胞损伤的修复和再生。丹参对中枢的作用主要是大脑皮层的抑制，产生镇静作用;对中枢的抑制作用可能与脑组织cAMP磷酸二酯酶的抑制和cAMP水平的提高有关。丹参制剂体内外试验有一定抗肿瘤作用。也有报道，在一定的给药时间和剂量时，对静脉接种的肝癌细胞有促进转移的作用。临床上用丹参和放射治疗合并应用于肿瘤患者，未见有促转移作用发生，但可减轻局部照射处的纤维化和瘢痕形成。丹参的抗肿瘤和促转移作用有待进一步研究。抗菌消炎丹参的各提取物有明显的抗菌消炎作用，如总丹参酮对耐青霉素、金霉素和红霉素的金黄色葡萄球菌敏感;对毛发癣菌也有抑制作用;丹参酮?、丹参酮?-A及隐丹参酮对人型结核杆菌有抑制作用;对感染性肿胀及炎性肿胀有一定抗炎作用，其抗炎机制可能与影响PGE水平和抑制白细胞趋化性有关。其它:如通过卵巢呈现雌激素样作用，有抗雄激素样活性。抑制cAMP磷酸二酯酶活性。对体液及细胞免疫功能有较强的抑制作用等。

抗氧化作用体外，从丹参中提取的三种水溶性成分丹酚酸A、丹酚酸B和迷迭香酸，对由维生素C-NADPH或由Fe2+-半胱氨酸诱发的大鼠脑、肝、肾微粒体的脂质过氧化都有很强的抑制效应，其作用强弱依次为丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸，比抗氧化剂维生素E的作用强百倍至千倍。机制之一是这些成分能

有效地清除超氧阴离子。体内，对急性乙醇中毒动物肝脏过氧化脂质生成的抑制作用:给小鼠灌服50%乙醇造成急性乙醇中毒，肝脏脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)急剧上升，约相当正常小鼠肝脏丙二醛水平3.5-4倍。在小鼠乙醇中毒后以迷迭香酸(100毫克/公斤)灌服，共3次，则可使肝脏MDA生成明显降低，为乙醇中毒对照组MDA量的54%(P,0.01,。维生素E(100毫克/公斤×3，P.O)组小鼠肝脏MDA生成也显著降低，为乙醇中毒组肝脏MDA量的 61%。可见，迷迭香酸体内抗肝脏脂质过氧化作用可能不亚于维生素E。

注射用丹参多酚酸中主要成分的降解动力学分析_张慧杰

[收稿日期 ]20121129(009)

[基金项目 ]国家自然科学基金青年基金项目 (81102732) ; 高

等学校博士学科点专项科研基金项目 (20111210110010)

[第一作者 ]张慧杰 , 硕士 , 从事药物分析研究 , Tel :

13820559197, E-mail :jyhuijie@163. com

[通讯作者 ]

任晓亮 , 博士 , 讲师 , 从事药物分析研究 ,

Tel :022-59596221, E-mail :xiaoliang-ren@sina．com

·工艺与制剂 ·

注射用丹参多酚酸中主要成分的降解动力学分析

张慧杰 , 任晓亮 *

, 崔明磊 , 蒲位凌 , 马思萌 , 戚爱棣

(天津中医药大学中药学院 , 天津 300193)

[摘要 ]目的 :探索注射用丹参多酚酸中主要活性成分 (丹酚酸 B 和迷迭香酸 ) 在不同 pH 和温度下的降解规律。方法 :采用 HPLC 测定迷迭香酸、丹酚酸 B 含量 , 研究二者在不同 pH (1 13) 和温度 (60, 70, 80, 90? ) 下含量变化 , 通过化学动力学法计算降解动力学参数。结果 :丹酚酸 B 与迷迭香酸在不同 pH 和温度下降解反应均属于一级动力学反应 ,

降解速率随 pH 及温度的升高而增加。丹酚酸 B 和迷迭香酸在水溶液中的降解活化能 (Ea ) 分别为 48. 54, 49. 83kJ ·mol －1, 在注射用丹参多酚酸中则分别为 95. 19, 83. 56kJ ·mol －1。结论 :丹酚酸 B 与迷迭香酸在碱性条件及高温条件下易降解 , 与对照品相比较 , 二者在注射用丹参多酚酸中更为稳定。

[关键词 ]丹酚酸 B ; 迷迭香酸 ; 注射用丹参多酚酸 ; 降解动力学 [中图分类号 ]Ｒ283.6

[文献标识码 ]A

[文章编号 ]1005-

9903(2013) 14-0001-05[

doi ]10．11653/syfj2013140001Degradation Kinetics Analysis of Main Ingredients in Salvianolate Lyophilized Injection

ZHANG Hui-jie , ＲENXiao-liang *, CUI Ming-lei , PU Wei-ling , MA Si-meng , QI Ai-di

(School of Chinese Materia Medica , Tianjin University of Traditional Chinese Medicine , Tianjin 300193, China ) [

Abstract ]Objective :To investigate degradation kinetics of main ingredients (salvianolic acid B and

rosmarinic acid ) of salvianolate lyophilized injection under different pH and temperatures．Method :HPLC was adopted to determine the content of salvianolic acid B and rosmarinic acid at different pH values and temperatures , degradation kinetic parameters of these two ingredients were evaluated by chemical kinetics．Ｒesult:Ｒeactionof salvianolic acid B and rosmarinic acid at different pH values and temperatures were accord with the first-order kinetics , degradation rate accelerated by increasing of pH value and temperature．According to arrhenius equation , activation energy (Ea ) of salvianolic acid B in aqueous solution and salvianolate lyophilized injection were 48. 54, 95. 19kJ ·mol －1, respectively．Ea of rosmarinic acid in aqueous solution and salvianolate lyophilized injection were 49. 83, 83. 56kJ ·mol －1, respectively．Conclusion :Salvianolic acid B and rosmarinic acid were sensitive to strong alkaline and high temperature conditions , but salvianolate lyophilized injection could obviously improve their stability．

[Key words ]

salvianolic acid B ; rosmarinic acid ; salvianolate lyophilized injection ; degradation kinetics

丹参为唇形科植物丹参 Salvia miltiorrhiza Bge．

的干燥根及根茎 [1]

, 具有活血祛瘀、通经止痛等功效

[2]

, 临床用于治疗因血瘀引起的冠心病、脑血栓等。研究表明 , 丹参的水溶性成分具有抗血栓、改善血液循环、保护心肌缺血缺氧、促进组织修复等药理

活性

[3-5]

。注射用丹参多酚酸是以丹参中水溶性酚 ·

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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol．19, No．14Jul．, 2013

酸类成分为活性物质基础的一种临床常用制剂 , 主

要活性成分包括丹酚酸 B 、迷迭香酸等 [6-9]

。本实验利用恒温加速法 , 以化学动力学为理论基础

[10-12]

通过测定注射用丹参多酚酸中主要活性成分丹酚酸

B 及迷迭香酸在不同 pH 及温度下含量的变化 , 研究 pH 和温度对稳定性的影响 ,

为丹酚酸 B 、迷迭香酸及注射用丹参多酚酸的贮藏及使用提供实验依据。 1

材料

Waters 600E-2487型高效液相色谱系统 (美国

Waters 公司 ) , AX205型分析天平和 DELTA 320型 pH 计 (瑞士梅特勒 -托利多公司 ) , XW-80A 型微型旋涡混合仪 (上海沪西分析仪器厂 ) 。

丹酚酸 B 对照品 (中国食品药品检定研究院 ,

批号 111562-200908) , 迷迭香酸对照品 (天津中新药业研究中心 , 纯度 ≥ 98%) , 不同批次的注射用丹

参多酚酸 (冻干 , 天津天士力天之骄药业有限公司 , 批号 20100302) , 乙腈、甲酸为色谱纯 , 水为超纯水 , 其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2. 1含量测定

2. 1. 1

色谱条件 Waters Symmetry Shield TM

ＲP18

色谱柱 (4. 6mm ? 150mm , 5μm ) , 流动相乙腈 -

0. 5%甲酸溶液 (30? 70) , 流速 1mL ·min －1

, 柱温室温 , 检测波长 286nm , 进样量 10μL , 见图 1

。

A , B．对照品 ; C．供试品 ; 1. 丹酚酸 B ; 2. 迷迭香酸

图 1

注射用丹参多酚酸 HPLC

2. 1. 2

线性关系的考察精密称取丹酚酸 B 、迷迭

香酸对照品 1. 51, 1. 22mg , 分别置于 10mL 量瓶

中 , 加甲醇稀释 , 得 151,

100. 67, 50. 33, 25. 17, 10. 07, 5. 03mg ·L －1的丹酚酸 B 对照品溶液和 122,

81. 33, 40. 67, 20. 33, 8. 13, 4. 07mg ·L －1的迷迭香酸

对照品溶液。分别吸取 10μL 进样 , 记录色谱峰面积 , 以质量浓度为横坐标 , 峰面积为纵坐标 , 得回归

方程 Y 丹酚酸 B =22355X +7601. 5(r =0. 9999) , Y 迷迭香酸 =18038X +1528(r =0. 9999) , 表明丹酚酸 B 、迷迭香酸分别在 5. 03 151, 4. 07 122mg ·L －1线性关系良好。 2. 1. 3精密度考察

取 2. 1. 2项下 25. 17mg ·L

－1

丹酚酸 B 溶液及 20. 33mg ·L －1迷迭香酸溶液 , 分别

重复进样 6次 ,

结果丹酚酸 B 和迷迭香酸峰面积的ＲSD分别为 0. 74%, 0. 96%, 表明仪器精密度良好。 2. 2溶液的配制

2. 2. 1缓冲溶液取适量磷酸二氢钠、氢氧化钠配制 pH 1 13的系列缓冲溶液。

2. 2. 2

对照品储备液将 10mL 棕色量瓶灭菌 , 分

别精密称取丹酚酸 B 、迷迭香酸适量置于量瓶中 , 配

制丹酚酸 B (0. 301g ·L －1

) 和迷迭香酸 (0. 241g ·L －1) 的对照品储备液。

2. 2. 3

注射用丹参多酚酸储备液精密称取注射

用丹参多酚酸冻干粉适量 , 置于灭菌的 10mL 棕色

量瓶中 , 混匀 , 配制成 0. 501g ·L －1的注射用丹参多酚酸储备液。

2. 3丹酚酸 B 对照品水溶液不同条件下降解动力

学研究

2. 3. 1pH

精密量取丹酚酸 B 对照品储备液

500μL , 分别置于 5mL 灭菌量瓶中 , 分别加入不同 pH 的缓冲溶剂稀释至刻度 , 涡旋混匀 , 得样品溶液 , 采用 HPLC 测定丹酚酸 B 初始浓度 (c 0) 。将各样品溶液于室温条件下放置 , 间隔一定时间取样 , 测定溶液中丹酚酸 B 的残余浓度 (c t ) , 以 ln (c t /c 0) 为纵坐

标 , t 为横坐标 , 降解曲线见图 2A 。将测定结果进行拟合 , 显示丹酚酸 B 的降解过程符合一级动力学 , 相关动力学方程、线性相关系数 (r ) 及降解速率常数 (k ) 见表 1。 pH 与 k 值的关系见图 3A (丹酚酸 B

在 pH 9. 87,

11. 06, 12. 02, 12. 88的缓冲溶液中迅速降解 ,

因此未在图表中列出 ) , 表明丹酚酸 B 降解的整体趋势是随溶液碱性的增加 , 降解速率加快。 2. 3. 2

温度精密量取丹酚酸 B 对照品储备液 500μL , 置于 5mL 灭菌量瓶中 , 加 pH 7. 27的超纯水定容至刻度 , 涡旋混匀 , 得样品溶液 , 测定 c 0。将样品溶液密封 , 分别置于 60, 70, 80, 90? 的恒温水浴锅中 , 间隔一定时间取样 , 测定 c t 。以 ln (c t /c 0) 对 t 作图 , 见图 4A 。拟合测定结果发现 , 丹酚酸 B 在 60, 70, 80, 90? 下的降解过程均符合一级动力学 , 其动力学方程、线性相关系数、降解速率常数及温度

系数 (Q 10) 见表 2。根据阿仑尼乌斯方程 [

k =A exp ·

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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol．19, No．14Jul．, 2013

A．对照品水溶液 ; B．注射用丹参总酚酸

图 2丹酚酸 B 在不同 pH 缓冲溶液中降解曲线表 1丹酚酸 B 和迷迭香酸在不同 pH 缓冲溶液中降解参数

成分 pH

对照品水溶液注射用丹参多酚酸 r k t 1/2/dr k t 1/2/d

丹酚酸 B 0. 990. 99400. 00193650. 99450. 0054128 2. 050. 99400. 000417330. 98740. 0025277 2. 960. 99700. 000417330. 98590. 0023301

4. 060. 98030. 000234650. 94070. 0018385

5. 090. 99200. 000323100. 99100. 00061155

6. 010. 98590. 00097700. 97520. 0009770 6. 940. 99150. 0121570. 99650. 008681

8. 010. 99600. 093370. 99550. 030423

9. 060. 99640. 769910. 99650. 033621 9. 87－－－0. 99750. 036819

迷迭香酸 0. 990. 99530. 000611550. 99320. 00041733 2. 050. 98880. 00079900. 99480. 00041733 2. 960. 99530. 00088660. 99730. 0007990

4. 060. 99840. 00079900. 99290. 00061155

5. 090. 99280. 00125780. 99300. 0037187

6. 010. 99530. 000513860. 99240. 00051386 6. 940. 99900. 00401730. 99050. 0014495

8. 010. 99790. 00461510. 99180. 0019365

9. 060. 98570. 00571220. 99700. 0060116 9. 870. 99520. 0078890. 99850. 011759

(－Ea /ＲT) ], 由各温度下的 ln k 对 1/T作图 ,

得图

A．丹酚酸 B ; B．迷迭香酸

图 3丹酚酸 B 和迷迭香酸在不同 pH 缓冲液中降解规律 5A , 拟合曲线的斜率为 (－Ea /Ｒ) , 经计算 , pH 7. 27, 温度 60 90? 的条件下 , 丹酚酸 B 降解活化能 (Ea ) =48. 54kJ ·mol －1

。

A．对照品水溶液 ; B．注射用丹参总酚酸

图 4丹酚酸 B 在不同温度中降解曲线

2. 4迷迭香酸对照品水溶液在不同条件下降解动力学研究

2. 4. 1pH 精密量取迷迭香酸对照品储备液 500μL , 置于灭菌的 5mL 量瓶中 , 分别用不同 pH 值的缓冲溶液稀释至刻度 , 涡旋混匀 , 得样品溶液 , 测定 c 0。按 2. 3. 1项下方法对样品进行测定 , 得图 ·3·

张慧杰 , 等 :注射用丹参多酚酸中主要成分的降解动力学分析

表 2

丹酚酸 B 和迷迭香酸于不同温度下降解参数

成分温度 /?对照品水溶液

注射用丹参多酚酸

r k t 1/2/dQ 10Ea /kJ·mol －1

丹酚酸 B

600．97830．0238292．6648．54

0．99200．0164432．5695．19

700．99200．0634111．200．96540．0420161．60800．98280．076091．46

0．99750．0670104．92

0．97830．110760．9920

0．32972迷迭香酸

600．99460．00611141．3149．83

0．98890．00213302．6283．56

700．99180．0080871．490．99430．00551261．90800．99190．0119582．37

0．99200．0104672．60

0．9913

0．0282

0．9988

0．0270

A. 丹酚酸 B ; B. 迷迭香酸

图 5

丹酚酸 B 和迷迭香酸降解速率与温度间关系

6A 。拟合测定结果发现 , 迷迭香酸的降解过程符合一级动力学 , 相关参数见表 1。 pH 与 k 值的关系见

图 3B (迷迭香酸在 pH 11. 06,

12. 02, 12. 88的缓冲溶液中迅速降解 ,

因此未在图表中列出 ) , 说明迷迭香酸降解的整体趋势是随溶液碱性的增加 , 降解速率加快。 2. 4. 2温度

精密量取迷迭香酸对照品储备液

500μL , 分别置于灭菌的 5mL 量瓶中 , 以 pH 7. 27的超纯水定容 , 涡旋混匀 , 得样品溶液 , 测定 c 0。按 2. 3. 2项下方法对样品进行测定 , 见图 7A 。拟合测

定结果发现 , 迷迭香酸在 60, 70, 80, 90? 下降解过程均符合一级动力学 ,

相关参数见表 2。根据阿仑尼乌斯方程计算 , 在 pH 7. 27, 温度 60 90? 的条

件下 , 迷迭香酸 Ea =49. 83kJ

·mol －1。 2. 5注射用丹参多酚酸中丹酚酸 B 、

迷迭香酸在不 A. 对照品水溶液 ; B. 注射用丹参总酚酸

图 6

迷迭香酸在不同 pH 缓冲溶液中降解曲线

同条件下降解动力学研究

2. 5. 1pH 精密量取注射用丹参多酚酸储备液 500μL , 分别置于灭菌的 5mL 棕色量瓶中 , 加不同 pH 的缓冲液稀释至刻度 , 涡旋混匀 , 得样品溶液 , 采用 HPLC 测定溶液中丹酚酸 B 、迷迭香酸的 c 0。按 2. 3. 1项下方法对样品进行测定 , 得图 2B 和图 6B 。将测定结果进行拟合 , 显示该制剂中丹酚酸 B 与迷迭香酸的降解过程符合一级动力学 , 相关降解动力学参数见表 1。 pH 与 k 值的关系见图 3(丹酚酸 B 、

迷迭香酸在 pH 11. 06,

12. 02, 12. 88的缓冲液中迅速降解 , 因此未在图表中列出 ) , 表明在不同 pH 下 ,

注射用丹参多酚酸中丹酚酸 B 、迷迭香酸分别与其对照品水溶液的降解趋势一致。

2. 5. 2温度精密量取注射液样品储备液 500μL , 置于灭菌的 5mL 棕色量瓶中 , 用系列缓冲溶剂定

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A. 对照品水溶液 ; B. 注射用丹参总酚酸

图 7迷迭香酸在不同温度中降解曲线

容 , 涡旋混匀 , 得样品溶液 , 测定 c 0。按 2. 3. 2项下方法对样品进行测定 , 得图 4B 和图 7B 。拟合测定结果发现 , 二者在 60, 70, 80, 90? 下降解过程均符合一级动力学 , 其降解动力学参数见表 2。按 2. 3. 2项下方法 , 由 ln k 对 1/T作图 (图 5B ) 并计算活化能。结果在 pH 7. 27, 温度 60 90? 的条件下 , 注射用丹参多酚酸中丹酚酸 B 、迷迭香酸降解活化能分别为 95. 19, 84. 56kJ ·mol －1。

3讨论

利用经典恒温加速试验研究丹酚酸 B 、迷迭香酸对照品及丹参总酚酸注射液中各自的降解动力学 , 发现二者降解反应特点有所不同 , 丹酚酸 B 受 pH 影响较为明显 , 在强酸性和碱性条件下均不稳定 , 最稳定 pH 4 5; 迷迭香酸受 pH 影响较丹酚酸 B 小 , 在酸性条件下较为稳定 , 随 pH 的逐渐增大 , 其降解速率逐渐加快 , 与文献报道一致 [13-14], 说明该 2种成分在制备、使用及制剂过程中应避免强酸、碱性及高温环境 , 以降低其发生降解的可能性 , 提高含量 , 并且保证用药的安全性。

丹酚酸 B 和迷迭香酸对照品在中性水溶液中降解活化能均 85kJ ·mol －1, 表明丹酚酸 B 和迷迭香酸在注射用丹参多酚酸中降解反应于常温下较难发生。说明 2种成分在注射用多酚酸中较为稳定 , 制剂水平使丹酚酸 B 的稳定性有所提高 ; 报道显示丹酚酸 B [15]在丹参水提液中活化能 84. 90kJ ·mol －1, 对比丹酚酸 B 对照品的活化性亦有所提高 , 提示可能制剂中其他酸性成分的存在会有助于提高丹酚酸 B 的稳定性。本实验为注射用丹参多酚酸中活性成分的稳定性研究提供了一定实验依据 , 但制剂工艺对丹酚酸 B 、迷迭香酸降解反应的影响机制 , 2种活性成分的降解对丹参总酚酸注射液药效及安全性的影响还有待进一步研究。

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[责任编辑仝燕 ]·5·

张慧杰 , 等 :注射用丹参多酚酸中主要成分的降解动力学分析

丹参类注射剂中主要成分含量的比较分析_李耿

中国药房 2009年第 20卷第 3期

Ch ina Pharmac y 2009V ol. 20No. 3

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主管药师 , 硕士。研究方向 :中药成分分析。电话 :010-84205625。 E -mail:ligen g 001@yahoo com cn

#通讯作者 :主任医师 , 硕士。研究方向 :中西医结合心血管病研究及临床。电话 :010-84205107。 E-m ail:du 7135@sina com

丹参类注射剂中主要成分含量的比较分析

李

耿

, 史载祥 1, 杨洪军 2, 杜金行

(1 中日友好医院 /全国中西医结合心血管病中心 , 北京市 100029; 2

中国中医科学院中药研究所 , 北京市

100070)

中图分类号

R 283 611; R 927 2

文献标识码

文章编号

1001-0408(2009) 03-0207-03

摘要目的 :测定目前常见丹参类注射剂品种中主要化学成分的含量并比较其差异。方法 :采用超高效液相色谱 (U PLC) 法同时

测定 8个厂家生产的 6种丹参类注射剂 (丹参注射液、注射用丹参 (冻干 ) 、注射用丹参多酚酸盐、香丹注射液、丹红注射液、丹香冠心注射液 ) 中 6种主要化学成分 (丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸 B 和丹酚酸 A) 的含量 ; 比较其主要化学成分的差异。结果 :不同品种丹参类注射剂的成分种类及含量差异很大 ; 不同厂家生产的同一类丹参类注射剂化学成分含量差异很大。结论 :本方法准确、快速 , 可用于丹参类注射剂中上述 6种成分的含量测定 ; 各种丹参类注射剂化学成分含量差异显著 , 临床应用时各品种不能随意替换 ; 部分丹参类注射剂品种的生产工艺和质量标准亟待提高。

关键词丹参类注射剂 ; 丹参素 ; 原儿茶醛 ; 咖啡酸 ; 迷迭香酸 ; 丹酚酸 B; 丹酚酸 A; 超高效液相色谱法 ; 含量 ; 比较

Com p arative Anal y sis on the Ma j or Constituents in Radix Salviae Miltiorrhizae In j ectable Pre p arations LI Geng, SH I Zai-x iang, DU Jin-hang (National Integ rated M edicine Center fo r Cardiovascular Disease, China-Ja p an Fr iendshi p H os p ital, Bei j in g 100029, China)

YANG H ong -jun(Institute of Chinese M ater ia Medica, China Academ y o f Chinese M edical Sciences, Beijing 100700, China)

ABSTRACT OBJECTIVE:To det erm ine and compare the major const ituents in com mon Radix Salviae M iltiorrhizae in -jectable preparations METH ODS:UPLC m ethod w as applied f or sim ultaneously determination of six major constit uent s (tanshinol, protocat echuic aldehyde, caf feic acid, rosm arinci acid, salvianolic acid B and salvianolic acid A) in six Radix S alviae M iltiorrhizae in j ectable p re p arations(Radix Salviae Milt iorrhizae in j ect ion, Radix Salviae M ilt iorrhizae f or in j ection(f reeze dr y -in g ) , Radix Salviae M iltiorrhizae p ol yp henol h y drochloride for in j ection, Xian g dan in j ect ion, Danhon g in j ect ion, Dan g ui g uanxin in j ection) from 8manufact urers T heir differences in the m a j or chem ical com p osition w ere com p ared RESU LTS:There w ere g reat dif ference am on g t hese Radix Salviae Milt iorrhizae in j ectable p re p arations in const it uent s and the content s The cont ents of chemical const ituents w ere also g reat l y different amon g the same kind of p re p arations p roduced b y different m anufacturers CONCLUS ION:T his m ethod is accurat e and rapid and can be used f or t he content determination of the 6constituents in Radix S alviae M iltiorrhizae inject able preparations Because the cont ents of chem ical constit uent s are st rikingly different am ong these kinds of preparations, various preparations cannot be random ly replaced by each other in clinical use T he preparat ion tech -nology and qualit y standard for some Radix Salviae M iltiorrhizae inject able preparat ions remain to be improved

KEY WORDS Radix Salviae Milt iorrhizae inject able preparat ions; Tanshinol; Protocatechuic aldehyde; Caf feic acid; Rosmar -inci acid; S alvianolic acid B; S alvianolic acid A; U PLC; Content ; Comparison

目前 , 临床常用的来源于丹参或以丹参为主药的注射剂有丹参注射液、丹参滴注液、注射用丹参 (冻干 ) 、注射用丹参多酚酸盐、香丹注射液、丹香冠心注射液、丹红注射 (滴注 ) 液等品种 , 它们都具有活血化瘀、通脉养心的功效 , 临床大都用于治疗冠心病胸闷、心绞痛等症 , 功能主治基本一致。但是 , 这几种注射剂的国家标准中含量测定项差异很大 , 有的品种控制丹参素 , 有的控制原儿茶醛 , 有的则控制丹酚酸 B 的含量 [1~4]。各种丹参类注射剂的主要化学成分究竟是什么 ? 含量如何 ? 差异多大 ? 临床能否相互替代应用 ? 为了解决这些问题 , 笔者采用超高效液相色谱 (UPLC) 技术 , 建立了可同时测定丹参类注射剂中

6种主要化学成分的方法 , 并测定了 8个厂家生产的 6种常见丹参类注射剂中化学成分的含量 , 分析比较了其间的差异。

1仪器与试药

U PLC Accuricy 系统 , 包括二元超高压溶剂系统、自动进

样恒温样本管理器、二极管阵列检测器、 Empower 2色谱工作站 (美国 Waters 公司 ) 。乙腈 (色谱纯 , 美国 Fisher 公司 ) ; 甲酸 (分析纯 , 北京化工厂 ) ; 水 (纯净水 , 杭州娃哈哈集团有限公司 ; 丹参素钠 (批号 :110855-200507) 、原儿茶醛 (批号 :110810-200506) 、丹酚酸 B(批号 :111562-200504) 对照品均购自中国药品生物制品检定所 ; 迷迭香酸 (批号 :1189-060824) 、咖啡酸 (批号 :1089-050103) 、丹酚酸 A(批号 :1073-060113) 对照品均购自中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 ; 丹参饮片 (北京同仁堂药店 , 产地 :山东 ) ; 丹参类注射剂样品均为中日友好医院及市售药品 , 具体情况见表 1。

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China Ph arm ac y 2009Vol. 20No. 3

中国药房 2009年第 20卷第 3期

表 1样品具体情况

Tab 1

Specific condition of samples

样品编号品种

生产厂家

批号规格生药当量 (g/支 ) 1注射用丹参 (冻干 ) 哈药集团中药二厂 070123400mg 152注射用丹参多酚酸盐上海绿谷制药有限公司 061001A 200mg -3丹参注射液正大青春宝药业有限公司 061021510mL 154丹参注射液雅安三九药业有限公司 07020110mL 155丹参注射液江苏神龙药业有限公司 06011810mL 156香丹注射液雅安三九药业有限公司 06080110mL 17丹参冠心注射液上海通用药业股份有限公司 06060410mL 108

丹红注射液

济南步长制药有限公司

070217

10mL

7 5

表 2回归方程、相关系数和线性范围

Tab 2

Regression equation, correlation coefficient and

linearity range

成分线性范围 / g mL -1

回归方程

r 丹参素钠 12 24~612 00Y =87649X 56420 9999原儿茶醛 10 24~512 00Y =552934X 13400 9998咖啡酸 1 00~50 00Y =415832X +12110 9999迷迭香酸 11 76~588 00Y =215276X 265650 9999丹酚酸 B 8 96~448 00Y =137457X 55660 9999丹酚酸 A

16 48~824 00

Y =105097X +5646

0 9999

方法与结果

2 1

色谱条件

色谱柱 :Ac q uit y UPLC BEH C 18(50mm 2 1mm , 1 7

m) ; 流动相 :1%甲酸溶液 (A) -乙腈 (B) , 梯度洗脱 (0~2 2

m in, B 的体积百分数为 2%~4%; 2 2~2 3m in, B 为 4%~8%; 2 3~10m in, B 为 9%~18%; 10 2~15m in, B 为 42%~54%; 15~16m in, B 为 54%~80%; 16~17min, B 为 80%) ; 流速 :0 6mL m in -1

; 柱温 :60 ; 检测波长 :280nm; 进样量 :1 L 。理论塔板数以丹参素和丹酚酸 B 计算分别为 14298和 33705。色谱见图 1。

2 2供试品溶液的制备

2 2 1

注射用丹参 (冻干 ) :精密称取本品粉末约 40m g , 以甲

醇溶解并定容至 10m L, 过 0 2 m 微孔滤膜 , 取续滤液作为供试品溶液。 2 2 2

注射用丹参多酚酸盐 :精密称取本品粉末约 5mg, 以

甲醇溶解并定容至 10m L, 过 0 2 m 微孔滤膜 , 取续滤液作为供试品溶液。 2 2 3

丹参注射液、香丹注射液、丹香冠心注射液、丹红注射

液 :分别精密量取样品 1m L, 以甲醇稀释并定容至 10mL, 分别过 0 2 m 微孔滤膜 , 取续滤液作为供试品溶液。

2 3对照品溶液的制备

分别精密称取丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹

酚酸 B 、丹酚酸 A 对照品 1 53、 1 28、 1 25、 1 47、 1 12、 2 06m g, 分别用甲醇定容至 25mL(其中咖啡酸贮备液再稀释 10倍 ) , 即得浓度分别为 0 0612、 0 0512、 0 005、 0 588、 0 448、 0 824mg m L -1

的溶液 , 作为各自的对照品溶液。再精密量

取各对照品溶液 1m L, 用甲醇定容至 10mL, 即得混合对照溶

液。 2 4

线性关系考察

依次精密量取混合对照溶液 0 20、 0 50、 1 00、 2 00、 5 00、 10 00 L, 分别进样 , 测定峰面积。分别以峰面积积分值 (X ) 对其浓度 (Y ) 进行线性回归 , 得各成分的回归方程、相关系数 (r ) 和线性范围 , 结果见表 2。 2 5精密度试验

取 2 2 项下各供试品溶液连续进样 6次 , 每次 1 L, 测定

各成分的峰面积积分值。结果 , R SD 分别为 :丹参素钠 0 63%、原儿茶醛 0 25%、咖啡酸 0 89%、迷迭香酸 0 44%、丹酚酸 B 0 49%、丹酚酸 A 0 31%, 表明方法精密度良好。 2 6

稳定性试验

取 2 2 项下各供试品溶液 (保存于 4 冰箱内 ) , 按上述色谱条件分别在 1、 2、 4、 6、 8d 测定各成分的峰面积积分值。结果 , RS D 分别为 :丹参素钠 0 98%、原儿茶醛 0 55%、咖啡酸 0 81%、迷迭香酸 0 65%、丹酚酸 B 0 86%、丹酚酸 A 0 36%, 表明供试品溶液在 4 避光条件下 8d 内稳定。 2 7

重现性试验

取同一批样品 , 平行取样 6份 , 按 2 2 项下方法制备供试品溶液 , 测定并计算各成分的含量。结果 , RSD 分别为 :丹参素钠 0 42%、原儿茶醛 0 57%、咖啡酸 0 60%、迷迭香酸 0 70%、丹酚酸 B 0 21%、丹酚酸 A 0 33%, 表明方法重现性良好。 2 8

加样回收率试验

精密量取编号为 3的样品 0 5mL, 置于 10mL 量瓶中 , 分别加入各成分对照品溶液 1、 2、 3m L, 用甲醇稀释定容 , 过 0 2 m 微孔滤膜 , 取 10 L 续滤液注入液相色谱仪 , 测定 , 计算回收率 , 结果见表 3。 2 9

样品含量测定

取各丹参类注射剂样品 , 按 2 2 项下方法制备供试品溶液 , 平行操作 3份。以 1 L 进样 , 根据 UPLC 测定数据计算各样品中各成分的含量平均值 , 结果见表 4(表中表示该成分含量在所有检测品种中最高。由生药当量和临床用量可得出 1支 10m L 的丹参注射液约相当于 1支注射用丹参 (冻干 ) 或注

表 3加样回收率试验结果 (n =3) Tab 3Result of recover y test(n =3)

成分样品含量

/mg

加入量

/mg

测得量

/mg

回收率

/%/%

RSD /%

丹参素 1 2710 06121 3332101 60

100 101 167 2710 12241 3940100 50

1 2710 18361 451598 31

咖啡酸 0 0320 05000 0828101 60

99 981 042 0320 10000 131099 00

0 0320 15000 181099 33

丹酚酸 B 0 0980 44800 5490100 70

100 400 030 0980 89600 9950100 10

0 0981 34401 4490100 50

原儿茶醛 0 3750 05120 425899 22

99 640 044 3750 10240 477099 61

0 3750 15360 5287100 10

迷迭香酸 0 2540 58800 840099 66

100 100 042 2541 17601 4360100 50

0 2541 76402 0190100 10

丹酚酸 A 0 1450 82400 9699100 10

100 000 010 1451 64801 7940100 00

0 1452 47202 616099 90 射用丹参多酚酸盐 ) ; ND 表示未检测到 ) 。

3讨论

目前 , 虽然部分厂家进行了指纹图谱研究以提高制剂质控水平 [5, 6], 但其也仅能提供相对结果 , 而不同实验室、不同仪器的测定结果缺少可比性 , 因此也就缺少对不同品种进行质量比较的客观依据。本试验结果表明 , 本方法准确、灵敏、快捷 , 而且所得结果为各主要成分含量的绝对值 , 评价结果相比指纹图谱更加客观、准确 , 可以比较评价相关制剂的质量 , 从而可用于丹参类注射剂的质量控制。

本试验所测定的丹参类注射剂中 , 3种主要脂溶性成分 :丹参酮、隐丹参酮和丹参酮 A 均未能测到 , 而目前市场上来源于丹参的注射剂品种往往是采用水提取方式制备 , 可见该类制剂主要以丹参水溶性成分为主。现代研究发现 , 丹参素、丹酚酸 A 、丹酚酸 B 等酚酸类成分均有抗氧化作用 , 可影响血液中脂质代谢 , 对动脉粥样硬化的产生可能具有抑制作用 [7, 8], 基本代表了丹参传统的活血、化瘀、通脉的作用。但究竟每种成分各自

表 4样品含量测定结果 (n =3)

Tab 4Results of sample determination(n =3)

品种丹参素原儿茶醛咖啡酸迷迭香酸丹酚酸 B 丹酚酸 A 单位静滴用量注射用丹参 (冻干 ) 49 2104 6090 3673 295N D 24 24mg 支 -11~2支注射用丹参多酚酸盐 ND ND ND 7 057171 400 N D mg 支 -11~2支丹参注射液 (正大 ) 1 2710 3750 0320 2540 0980 145m g mL -110~20mL 丹参注射液 (三九 ) 2 1450 5370 063 0 905 2 5080 751m g mL -110~20mL 丹参注射液 (神龙 ) 2 9850 4580 0280 2190 1470 283m g mL -110~20mL 香丹注射液 2 4520 2150 0050 1590 1240 306mg mL -110~20mL 丹香冠心注射液 2 6260 8360 0390 3840 8401 587mg mL -110~16mL 丹红注射液 2 5740 2290 0410 1730 4980 232mg mL -120~40mL

的活性强度如何、其它成分有无不良作用、单一成分和多成分配比哪个活性更好等问题 , 还有待于临床和其它相关研究的进一步探讨。

试验结果表明 , 丹参类注射剂的主要原料相似 , 临床用途和适应证也基本一致 , 但不同品种之间的化学成分种类和含量却存在着很大差异。注射用丹参 (冻干 ) 中丹酚酸 A 、丹参素、原儿茶醛等成分含量较高 , 不含丹酚酸 B; 注射用丹参多酚酸盐只有 2种主要成分 :丹酚酸 B 和迷迭香酸 , 且含量较高 ; 其它 4种注射剂上述 6种成分均含有 , 但各成分含量参差不齐。由于不同丹参类注射剂采用不同的质量标准 , 制法工艺和质控指标不同 , 从而导致其化学成分种类和含量悬殊 ; 同一品种如丹参注射液 , 由于质量标准过于简单 , 只控制了个别成分的含量 , 因此不同厂家生产的同一品种各成分含量差异也较大。由此看来 , 不同厂家生产的丹参类注射剂 , 成分上的差异决定了它们之间临床应用效果的不同 ; 某些丹参类注射剂品种的质控水平及制法工艺亟待提高。

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(收稿日期 :2008-02-15修回日期 :2008-04-10)

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