步骤/方法
1. 肌营养不良:肌营养不良病人血液中LDH4、LDH5显著升高。 2. 肝脏病:肝脏病
LDH5/LDH4<>
则表现为LDH5持续升高或
3. 肺部疾病:肺部疾患血清LDH3常可升。肺脓
与LDH5同
4. 心脏疾病:病毒性和湿性心肌炎、克山心肌损
和LDH2显
5. 肾脏疾病:急性肾小坏死、慢性肾小球炎以
增高。
注意事项
, 引起乳酸脱氢酶偏高原因是很多的,因此想要
高,还需要结合检查结果来合判断。此外需要意在
一种很常见的现象,出现乳脱氢酶偏高一般是明病
查明病因,以便对症治疗,谨防病情恶化。
乳酸脱氢酶制备
乳酸脱氢酶制备
原理:
乳酸脱氢酶(LDH)(EC1.1.1.27)存在于具糖氧代谢
+ + L(+)—乳酸+NAD? 丙
乳酸脱氢酶最早从牛心中分离并获结晶。制备方法为捣碎心肌组织用水抽提,磷钙胶吸附,
?乳酸脱氢酶活力检测原理是在pH10.0的条件下,LDH催化NAD还原生成NADH。NADH在340nm有最,摩尔消光系数为6.2×310,NADH的分子量
LDH活力单位定义为:25?、每分钟催化生成1微尔NADH的酶量为1个活力单位。用紫分光光度计反应进程的OD的增340量,可求出制备样品中
试剂:
(1)CaCl ?6HO 22
(2)NaPO 34
(3)冰乙酸
(4)0.2mol/L磷酸盐缓
(5)0.1mol/L磷酸盐缓
(6)0.3饱和度
(7)丙酮
(8)硫酸铵粉末
(9)0.5mol/L DL-乳酸钠。
++(10)2mmol/L NAD溶:称取133mg NAD,溶于5ml蒸馏水中,加约0.15ml 1mol/L NaOH 调pH为6.0,定10ml,冰箱贮存。 (11) 0.1mol/L pH10.0甘
A液0.2mol/L甘氨溶液:称取15.01g
B液0.2mol/L NaOH溶液:称取8gNaOH用蒸馏水溶解,定容1L。 100mlA液
一、 磷酸钙
(1) 称取19.8g CaCl ?6HO,
成1600ml。
(2) 称取22.8g NaPO?12HO溶于150ml蒸馏水中。 342
(3) 将两溶液混合,用冰乙酸调pH至7.4,室温下放置,使磷酸钙
胶沉淀。
(4) 吸去上清液,4000r/min离心3min,
1、 LDH
(1) 取100g新或短期冰冻保存的牛
切成小块,低温
(2) 加入400ml冰冷的蒸馏水,冰
(3) 4000r/min离心3min。吸出上清液,量体积
2、 磷酸钙胶吸
(5) 上清液中加入磷酸钙胶80g左右,置浴中搅拌15min。 (6) 胶悬浮液转
保留磷酸钙胶。
(7) 向磷酸钙胶沉中加入约0.8倍体积
液,于冰浴中充分搅
(8) 3000r/min离心3min,保留上
定LDH活力。
3、 盐析
(9) 将上清液置浴中冷却,搅拌下缓
0.6饱和度(按39g/100ml比
(11)向沉淀中加入20ml0.1mol/L pH7.2磷酸盐冲液,使
4丙酮沉淀
(12)将溶液置冰浴中,缓慢加入0.6倍体积(要准确)-20?预
(13)于4?4000r/min离心5min,弃去上清液。
(14)沉淀溶于适量蒸
操作:
(1) 按下表在只石英比色杯中
甘AA缓冲液 乳酸钠 NAD+ 蒸馏水 LDH制备液 空 2.7ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml -
(2) 从样品杯中入LDH制备液混匀
应30秒时的A值。
结果:
将各步骤测定的数据及计算结果填入下表并对制备工进行评价。 样品 A吸收
2. 吸附
3. 盐析
4. 丙酮沉淀
3-36总活力(μmol/min)=A/6.2×10×3×10×60/30×10×V/0.01
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶
广泛存在的催化酸和丙酮酸相互转换的酶。L-乳脱氢酶(编号:EC 1.1.1.27)作用于L-乳;D-乳酸脱氢酶(编号:EC 1.1.1.28)作用于D-酸,两者均以NAD+为受体。厌氧酵解时,化丙接受由3-磷酸甘油醛脱酶形成的NADH的氢,形成乳酸。 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶,几乎存在于所有织中。同功酶有五种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)及LDH-5(M4),可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织异性,所以以根据其组织特性来协用诊断疾病。正常人血清LDH2,〉LDH1。如有心肌酶释入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以察诊断心
正常范围:血清 135.0~215.0U/L;
尿 560~2050U/L;
脑脊液含量为血清的1/10。
临床意义
(1)急性心肌梗塞发作后,早期血清中LDH1和LDH2活性均升高,但LDH1增高更早,更明显,导致LDH1/LDH2的值升
(2)肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时LDH5都会升
(3)患活动性风湿性心脏病、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血、肾坏死等病LDH1也升
人组织中的乳酸脱氢酶(LDH)用泳法可以分离5同工酶区带,根据其电泳移的快慢,依次命名为LDH1,LDH2,LDH3,LDH4,LDH5。不同组织乳酸氢酶同工酶分布不同,存在明显组织特异性,人心肌、肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多,骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多,而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和巴结等组织中以LDH3最多。后来从睾丸和精子现了LDHx,其电泳迁移率介于LDH4和LDH5之间。LDH是由H(心肌型)和M(骨骼肌型)两亚基组
总之,健康成人血清LDH同工酶有如下的规律:LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5。
临床意义
心肌细胞LD活性远高于血清数百倍,以LDH1和LDH2含量最高。急性心肌梗塞时,血LDH1和LDH2显著高,约95%的病例的血清LDH1和LDH2比值大于1,且LDH1升高早于LDH总性升高。病毒性和风湿性心肌炎克山病心肌损害等,病人的血清LDH同工酶的改变与心肌梗塞相似。LDH1/LDH2比值>1还见于溶血贫血、恶性贫、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、肌损伤性疾病、瓣膜
脑干含LDH1较高。颇脑损伤累及大脑半球时,只有血清同工酶谱的绝对增高,而不影响工酶互比值,如果累及脑干时,病人血清LDH1的含量也增高。 急心肌梗塞发病后12~24小时,血清LDH1业已升。若同时测定LD总活性,发现LDH1/总LDH的比值对急心肌梗
胚胎细胞瘤病人的血清LDH1活性升
肝细胞损伤或坏死后,向血流释入大的LDH4和LDH5,致使血中LDH5/LDH4比值升高,故LDH5/LDH4>1可做为肝细胞损伤的指标。急性肝炎以LDH5明显升高,LDH4不,LDH5/LDH4>1为征;若血清LDH5持续升高或后再度升高,则可认为是慢性炎;肝昏迷病人的血清LDH5.LDH4活性极时,常示预后不良;原发性肝癌以血清LDH4>LDH5较为
肾皮质以LDH1和LDH2含量较高,肾髓质以LDH4和LDH5活性较强。患急性肾小管坏死、慢性肾盂肾炎、慢性肾小球肾炎以及肾移排时,血清LDH5均可增
肺含LDH3较多,部疾患时血清LDH3常可升高。肺梗塞时LDH3和LDH4相等,LDH1明显下降;肺脓肿病人的血清LDH3.LDH4常LDH5同时升。 血清LD总性
肌营养不良病人肌肉中LDH1.LDH2明显增高,LDH5显著降;而清则相反,LDH1.LDH2明显减少,LDH4.LDH5显著,表明血清LDH同工酶要来自肌肉组织。矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1.LDH2下降,LDH4.LDH5升
(4)恶性病变时LDH3常增
乳酸脱氢酶高的原因
至于乳酸脱氢酶高的原因,有以下方
1.当乙肝病毒携带者病情恶化成乙肝患者时,部分肝细胞受损,血清中LDH4和LDH5含量有不同程度增
2.乙肝治疗方法特别是是用药不当,期服用同一种药物时造成肾毒现象的产生。当肾毒现象出现时,血清中酸氢酶含量会速升
3.乙肝不进行合适积极的治疗,发展一定程度时会造成肝脏代谢严重异常,导致肾脏功能衰竭,从而也会乳酸脱氢酶量升
4.肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时,会引起乳酸脱
乳酸脱氢酶偏低的
乳酸脱氢酶存于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。血清乳酸脱氢酶正常范围是100~300U/L,当出现乳脱酶偏低时,常见因如
乳酸脱氢酶偏低的原因1:检查过程中出现误
乳酸脱氢酶偏低的原因2:内分泌失
乳酸脱氢酶偏低的原因3:过于劳累、睡眠不好、心情不好等。 ,乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重,经过调理即可恢复。但如果出现乳酸脱氢酶偏高就要引起重了。因为肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移致胸腹水时,会引起乳酸脱氢
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase ,LDH)是存在于细胞浆内的一种酶,乳酸脱氢酶在生体糖代谢中扮演要角
在我们培养的细胞中乳酸脱氢酶分别存在于以下三个地
1、存在于活细胞内。你培养的是贴壁细胞(viable adherent cells),那么贴在壁上的就是活细胞,此时的乳酸脱氢酶就存在于细胞内,所以得贴壁细胞中的乳脱氢酶(LDH)活力就表培细胞中活细胞的量,我们
2、存在于漂浮于培养液的凋亡小体(Apoptotic bodies)。由凋亡小体有细胞膜,因此凋亡小体中的乳酸脱氢酶也没释放到胞外。此时测得凋亡小体中的乳酸脱氢(LDH)活力就代培养细胞中凋亡细胞(apoptotic cell)的量,我
3、存在于培养液中。坏死的细胞(Necrosis)胞膜破酸脱氢酶释放,分布于培养液中, 此时测得培养液乳酸脱氢酶(LDH)活力就表培养细胞中坏细胞(necrotic cell)的量,我们称
那么我们就可以计算细胞中凋亡或坏死的比率来衡量细损伤的程
凋亡% = LDHa/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100
坏死% = LDHn/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100
死亡% = (LDHa +LDHn)/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100
其中(LDHa+LDHn+LDHv)代表细胞总LHD。
因为即使我们每次埋板的细数相同,但是由于细胞生长受多方面影响,所得细胞也不一样,所以每次测得胞内和胞外乳酸脱氢酶的量都会不样,所以不能单纯通过测上清中LDH的量或细胞总LHD来评估细受损的程度,而通过上清LDH/总LDH的比率来评估细胞受损程是比较符合
另附简要操作:吸细胞培养瓶中液体置离心管中离心,心后沉淀于管底的是凋亡小体,上清液中的就是坏死细胞的LDH,将凋小体和贴附于养瓶壁上的细胞破即测定凋亡小体和活细
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶
1概述
乳酸脱氢酶(LDH或LD)是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,催酮酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应,也可催化相关的α-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中,以心、肾、骨骼肌量最高,肝、脾、胰和肺组次之。LDH测定方法主要有比色和连续监测
2标本的收集
新鲜无溶血标本,血清或血浆本均不溶血。血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。样在4度可稳定7天。采血前病人应禁食12小时,采集静脉3ml,待凝后(最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟)通常为抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。3000r/min离5-10分钟,分离出血清备用。建议采用血浆
3:方法原理
样本中的碱性磷酶催化水解磷酸对硝基苯酚,生成游的对硝基苯酚和磷酸,引起405nm处的光吸收值升高,,通检测405nm处光吸收值上升速,可以测定碱性磷酶的活
4剂来源,配置及
试剂来源:
试剂配置:试剂和试剂二均为液体试剂,可直接用。启用后在2-8度可稳定30天。若试剂混浊,或以蒸馏水为空白在405nm处的吸值低于0.8A,应予丢
试剂储存:试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效
5分析仪器
CS-600B全自动生化分
6计算方法
ALP(U/L)=( A/min*Tv*1000)(18.8*Sv*P)
式中
Tv=总反应体积
Sv=样本体积
18.8=NADH在405nm处的毫摩尔消光
P=比色杯光径(cm) 7 线性范围:本实验的线性范围:0----2000U/L
8 参考范围:(1)比色法:150~450U/L。
(2)连续监测法:男80~280U/L
女100~230U/L
9 失控控理
1:立即重测同一质品,如重测后结果仍不再允许范围,请进一步。 2:新开一瓶质控品,重测失控项目,如新开的质控血清结果正常,那原来质控血清可过期或在室温防止时过长变质,如结果仍不再允范围,则
下一步。
3:进行仪器维护,测失控项目。检查仪器状态,查明光源否更换,比色杯是否需要清洗或更换?对仪器进行清洗等维护。另外还要检查剂,此时可更试剂已查明原因。如结仍不再允许范围内,进行下一
4:重新校准。重失控项目。用新的校准液校准仪器,排除准液的原因。 5:请专家帮助。如果前五步都为能得到在控结果,那能是仪器或试已查明原因,只有和器试剂厂家联系请求他的技术支
10 注意事项
1:试剂和样本用量可根据不同仪器要求按比例改
2:如测试结果超出线性范围,样本应稀释后测试,调整因子数或将结乘以稀释倍
3:结果的准确性仪器校正和测定温度,时间的控
4:由医生根据临床症状和其他实验结果做出临床诊断。 11;临床
LDH测定常用诊断心肌梗死、肝病和某些恶性肿
(1)心肌梗死:发病10~12h升高,24~48h达高峰,8~9天后恢正。CK相比,虽然酶活性出现较迟,阳性率较低,但持续时间,且活性增高的程度与心肌梗死的病情密切相关,梗死范围越大,其酶性越高。若LDH增高后恢复缓,在病程中再次增高,提示梗死范扩大,预后
(2)肝脏疾病:急性肝炎或慢性活动性肝炎LDH常显着或中度升高。其敏感度略低于ALT。肝癌时LDH活明显升高,尤其是转移性肝癌高
(3)血液病:白血病、巨幼红细胞贫血、恶性淋巴瘤等LDH活性升
(4)其他:营养不良、横纹肌损伤、胰腺炎、肺梗塞等LDH活性也升