真_小小猪
范文一：细胞融合实验
动物细胞融合
**班 姓名：*** 实验时间：2013.09.16 同组者：*** 一、实验目的
1、了解动物细胞融合的常用方法
2、学习化学融合和电融合的基本操作过程
3、观察动物细胞融和过程中细胞的行为和变化 二、实验原理
细胞融合是指在自发或诱导的条件下两个或两个以上细胞合并为双核或多核细胞的过程。融合得到的细胞可以是同核体（成活率高），也可以是异核体（成活率低）。融合方法有以下几种：
1、病毒诱导融合 （1958）
原理：改变细胞膜的结构。
2、化学诱导融合（1975） 以聚乙二醇（PEG)为例。
原理：结构相对稳定；相似相溶，亲脂剂扰乱破坏酯双分子层的 分子结构；与氢键结合导致细胞脱水。
分子量越大，融合率越高，PEG分子量一般400~6000，科研中 多使用800~1000，本实验使用4000。PEG浓度一般40%~60%。作用时间1~5min。控制PH值8.0~8.2。温度38~40℃。
3、电激诱导融合（1978）
原理：电诱导是先使细胞在电场中极化为偶极子（细胞通常带负电），沿电场线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜由于张力作用，两细胞融合。
优点：易控制；高效；无毒。 二、细胞融合的应用
1、动物细胞融合：杂合抗生素生产；动物疾病防治；生产单克隆抗体（骨髓瘤与淋巴细胞杂交瘤，发现致病细胞，制作靶向药物，作为免疫试剂）；改良创造新菌种；基因定位和绘制人类基因图谱（杂种细胞中某一染色体或其片段的存在与否细胞的某一性状表达与否相联系，从而可以实现把基因定位于某一染色体或某一区段上）；生产树突状细胞抗肿瘤疫苗；用于动物育种；用于细胞疗法（将患者的任何体细胞与去核卵细胞融合，融合子进行有丝分裂形成囊胚，囊胚的内细胞团是多能干细胞，对多能干细胞进行诱导使其定向分化可形成所需的组织和器官用于器官移植，不仅解决了器官和组织来源问题，并且也避免了宿主对外来物的免疫排斥。）
2、植物细胞融合：植物病害防治；新品种开发。 三、实验用品
1、材料
鸡血红细胞
2、试剂
50%PEG、Hank’s溶液（pH7.4）、Alsever’s细胞保存液（氯化钠、柠檬酸钠、葡萄糖，抗凝血）、0.6mol/L 甘露醇溶液、0.85%氯化钠溶液
3、器材
倒置显微镜、离心机、恒温水浴锅、电融合仪、血细胞计数器、量筒、注射器、烧杯、载玻片、盖玻片、200μL及1mL微量移液器、枪头、离心管、废液缸等。 四、实验步骤
1、取鸡血1ml+4ml 0.85%的NaCl溶液，在1200r/min的离心机内离心5分钟。
2、将上一步的沉降血球（去上清液后，约0.1-0.2ml），加入GKN液至1-2ml，使之成10%的细胞悬液。
3、取上述10%的血球悬液1ml，加入3ml GKN液，使每毫升含血球1500万个。
4. 分别取上述1ml+0.5ml 50%的PEG液、0.5ml+0.5ml 50%的PEG液、0.5ml+1ml 50%的PEG液混匀滴定，待液体分层后停留1-2min，再摇匀，停留1-2分钟，即可镜下观察。 五、实验结果
显微镜下（10*40）
（刚刚相接触的两个细胞）
（形成纺锤状的两细胞）
七、讨论与结论 （细胞融为一体） 1、制备的鸡血红细胞悬液的浓度不宜过高，否则细胞容易聚集，融合效果受影响。
2、PEG的分子量应为400-6000之间，PEG溶液浓度为40%-60% 融合时间1-5分钟。若超过以上三个条件，可能超过了细胞膜的自我修复限度，导致细胞膜破损，无法修复；若低于以上三个条件，可能细胞的破损程度较低，不能进行融合。
3、温度为：38-40℃。适当地提高温度可以使细胞融合得更充分 但温度不能过高，以免细胞蛋白质变性。
4、加入PEG形成液面后，应该先反应（1min）后混合，否则会导致细胞融合不充分，可用注射器向内注射气泡的方式混匀。
范文二：细胞融合实验
细胞生物学实验
题目:利用聚乙二醇(polyethyleneglycol，简称PEG)为媒介物进行细胞融合 姓名: 学号: 班级: 时间: 一、实验目的:
掌握利用聚乙二醇为介导物对各类细胞的融合方法。
二、实验原理:
当前普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点
处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互
亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
三、实验用品:
1. 显微镜，2.离心机，3.聚乙二醇(PEG)，4.鸡血，5.Alsver液。6. 0.85%
生理盐水液
7. GKN液
NaCl 8g，KCl 0.4g，NaHPO?2HO 1.77g，NaHPO?HO 0.69g，葡242242
萄糖2g，酚红(phenolred)0.01g，溶于1000mL蒸馏水中。
8. 50%PEG液
实验前临时配制，根据需要称取定量PEG(Mw=4000)，放入刻度试管
或刻度离心管内，在水浴中加热，使其溶化，如做细胞培养融合实验，
可用高压蒸汽灭菌30min，待冷却至50?时，加入预热至50?等体积的
GKN溶液，混匀。
四、实验步骤:
1. 取制备的鸡红细胞悬液1mL,加入4mL0.85%生理盐水，混匀后以
1000~1200r/min离心5min。
2. 去上清夜后，将沉降血球(约0.1~0.2mL)加入GKN液至1~2mL，使之成
为10%的细胞悬液。
3. 取上述10%血球悬液1mL加入3mLGKN液是每毫升含血球15000万个，即
715×10个/mL。
4. 取上述浓度悬液0.5mL加入0.5mL 50%的PEG液混匀，置于30?水浴中
加热5min。
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5. 用吸管吸取以上细胞悬液，滴在载玻片上，盖上盖玻片，置于显微镜下
观察。
五、实验结果:
1. 细胞发生融合反应，观察到融合反应各个阶段细胞形态。
2. 实验图片:
图1两细胞开始接触(10×40) 图2两细胞开始融合(10×40)
图3融合过程中的两细胞(10×40) 图4完成融合后形成的新细胞(10×40) 六、实验分析:
1. 通过细胞融合技术有很多应用，例如可以进行单克隆抗体的制备以及植
物新品种的培育。
2. 在高倍镜下观察时要注意调节好光线亮度，以达到最好的观察效果。
3. 加入PEG后要注意保温时间，如果时间过短，可能导致实验结果不理想。
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范文三：实验4 细胞融合
实验4 细胞融合
〔实验目的〕
1、 了解细胞融合的原理
2、 掌握PEG 介导细胞融合过程的操作
〔实验原理〕
聚乙二醇（PEG ）分子能使细胞凝集，改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处的细胞膜脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞间接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
〔试剂材料〕
1、仪器：倒置显微镜、水浴锅
2、试剂
（1） 0.85%生理盐水
（2） GKN 液
NaCl 8g, KCl 0.4g, Na2HPO 4.2H 2O 1.77g, NaH2PO 4. H2O 0.69g, 葡萄糖2g ，酚红0.01g ，溶于1000ml 重蒸水中。
（3） 50%PEG液
临用前配制，50g PEG4000，在沸水浴中加热，冷却至50℃时加入预热至50℃的50ml GXN液，混匀，37℃备用。
3、材料：鸡红细胞悬液
〔内容方法〕
1、 抗凝的鸡血，加入4倍体积的0.85%生理盐水，为血细胞储备液，4℃冰箱可保存一周
2、 鸡血储备液1ml ，加入4ml 生理盐水，混匀后1200r/min离心5min ，去上清，再加入生理盐水同样条件下离心一次。血细胞沉淀加入10mlGKN 液制成鸡血细胞悬液
3、 取悬液进行计数，用GXN 将红细胞稀释至3-4×107个/毫升浓度。
4、 取稀释好的红细胞悬液1ml ，加入0.5ml 50%PEG混匀， 37℃/39℃温浴20-30min 。
5、 加入GKN 溶液至8ml ，37℃温浴20min 。
6、 1200r/min离心5min ，沉淀用GKN 溶液再洗一次。
7、 收集沉淀，涂片，镜检。
也可采用下面方法：
1、 细胞生理盐水洗涤后用GKN 溶液制成5%悬液
2、 红细胞悬液1ml ，1200r/min离心5min ，去上清。
3、 细胞沉淀用手指轻弹使细胞疏松，再逐滴滴加50%PEG溶液0.5ml ，1分钟之内加完，边滴加边轻晃细胞，使PEG 与血细胞混合
4、 混合物在37℃温浴2min 。
5、 加入GKN 2ml，37℃温浴5min 。
6、 1200r/min离心5min ，去大部分上清，沉淀涂片，晾干后观察。
细胞融合过程：
①两细胞膜接触，粘连；②细胞膜形成穿孔；③两细胞的细胞质连通；④通道扩大，两细胞
连成一体；⑤细胞完全合并，形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。
〔注意事项〕
1、 高Ca2+浓度（1.27-1.80mmol/L）和高pH8.0-8.2能够提高细胞融合率。溶液中尽量减少
可与Ca2+结合的溶质分子。
2、 必须严格控制PEG 作用时间，通常处理1-2分钟。PEG 和DMSO 共同作用可提高细胞
融合率
3、 相对分子量在400-6000的PEG 在40%-60%浓度范围内都能使细胞融合。一般来说，PEG
浓度和分子量越大，细胞 融合率越高，但其黏度和细胞毒性也增大。所以PEG 浓度在40%、45%、50%时以PEG1000的融合效率最佳。浓度为55%-60%时以PEG400为佳。 〔实验作业〕
1、绘制观察到的融合细胞
2、计算融合率
范文四：植物细胞融合实验
植物细胞融合
一、细胞融合（cell fusion)概念
在外力（诱导剂或促融合剂）作用下，两个或两个以上的异源细胞或原生质体相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象。
通过细胞培养技术，这个细胞有可能发育成完整的生物个体，这个杂种后代有可能兼有两个上代的一些优良性状。
二、细胞融合的目的和意义
细胞融合能实现远缘杂交。其意义在于打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限，有可能形成有性杂交方法无法获得的新型杂种植物，广泛组合各种基因型，扩大了遗传物质的重组范围。
三、PEG诱导原生质体融合的机理：
带有大量负电荷的PEG与水之间的氢键结合，使溶液中自由水消失，由于高度脱水引起原生质体凝集，形成大小程度不同的凝集物。原生质体发生皱缩并大大扭曲变形，邻近原生质体之间紧密接触。在原生质体细胞膜与膜紧密接触的部位，膜内蛋白质颗粒易位并凝聚。接着可能是相邻的剥去蛋白质的细胞膜间的类脂质与类脂质反应。继之，类脂质分子的扰动和重排导致接触的细胞膜局部发生融合，形成很小的细胞质桥，之后它逐渐扩大，两个原生质体最终融合。使用化学促融剂时，Ca2+是必需的。关于Ca2+的作用机理，有的认为是Ca2+和PO43-形成不溶于水的配合物，成为细胞间的钙桥，由此引起融合。也有解释为Ca2+结合到带负电磷脂的电离基上，使磷脂分子在膜上相互分离，由此引起融合。
四、实验材料、试剂和仪器
1、材料：菜薹、胡萝卜、韭菜、红花酢浆草、红辣椒、洋葱。
2、试剂：13%CPW洗液、酶液（1.0％的纤维素酶和0.8％的果胶酶，用13％的CPW配制）、20%蔗糖溶液、40%PEG液。
3、器材：显微镜（三台）、离心机（一台）、大小培养皿（六小，两大）、小烧杯（若干）、小滴管（六个）、刻度离心管（六个）、小漏斗（六个）、不锈钢网300目（六个）、培养箱。
五.实验步骤
1、酶解：将表面灭菌的叶片撕去下表皮，放入盛有5毫升酶液的培养皿中，让去除下表皮的一面接触酶液，铺满一层，放入25℃培养箱酶解3- 4小时。
2、用350目网过滤除去未完全消化的叶片等残渣。
3、，加入3～4ml13%CPW洗液，相同条件下离心 ，弃上清液。加1ml13%CPW洗液悬浮。
4、蔗糖漂浮方法：
（1）用细口吸管吸20%蔗糖溶液4ml加入另外一支离心管底部，然后将原生质体的悬液小心加在蔗糖界面上。由于比重不同，蔗糖溶液与原生质体悬液中间有一明显界面(注意要有明显界面)。
（2）1000转/分离心5分钟，此时死细胞及碎片降至蔗糖溶液内，聚集在离心管底部，而活细胞由于有大量泡沫，故漂浮在上下界面处。
（3）用细管吸取漂浮在上下界面处的健康原生质体，转入干净的离心管中，加入3～4ml 13%CPW洗液离心收集沉淀，用13%CPW的CPW重新悬浮。
5、细胞融合：
（1）加原生质体0.3ml与带盖离心管中，另加入0.15ml 40% PEG液，30℃水浴中温浴15min；
（2）融合液一滴于载玻片上(注意保持一定湿度，不能太干)，轻轻盖上盖玻片，显微镜观察。
（3）用光学显微镜或倒置显微镜(高倍) 观察2-3个细胞靠近或融合的过程。（ 观察时注意不
同程度的融合现象。通常分为五个阶段。①两细胞膜接触，粘连；②细胞膜形成穿孔；③两细胞的细胞质连通；④通道扩大，两细胞连成一体；⑤细胞完全合并，形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。）
范文五：实验三 细胞融合
实验三 细胞融合
动物细胞融合是细胞工程技术的重要手段之一，是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。
一、实验目的：
1．掌握PEG 体外诱导细胞融合的原理和基本方法。
2．掌握在光学显微镜下融合细胞的形态特征。
二、实验原理
依据融合过程采用的助融剂不同，细胞融合可分为：病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒（HVJ ）；化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（PEG ）；电场诱导的细胞融合。
PEG 是乙二醇的多聚化合物，可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，诱导产生细胞融合。
商品PEG 存在一系列不同分子质量的多聚体，一般应用PEG4000~6000的溶液，能够产生高频率的细胞融合。
三、实验材料、仪器和试剂
1．材料：成年家鸡。
2．主要仪器：
注射器、刻度离心管、离心机、血细胞计数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。
3．主要试剂：
1）0.85% NaCl溶液。
2）GKN 液：8.0gNaCl ，0.4g KCl，1.77g Na2HPO 4﹒2H 2O ，0.69g NaH2PO 4﹒H 2O ，2.0g 葡萄糖，0.01g 酚红，溶于1000ml 重蒸水中。
3）50%（W/V）PEG4000溶液：
a 取50g PEG4000放入100mL 瓶中，高压灭菌20min ；
b 让PEG 冷却到50~60℃，勿让其凝固；
c 加入50mL 预热至50 ℃的GKN 液，混匀，放入37℃水浴中待用。
4）Hanks 原液（10X ）：
NaCl 80.0g
Na 2HPO 4·12H 2O 1.2g
KCl 4.0g
KH 2PO 4 0.6g
MgSO 4·7H 2O 2.0g
葡萄糖 10.0g
CaCl 2 1.4g
称取1.4gCaCl 2，溶于30~50ml蒸馏水中，取1000mL 的烧杯及容量瓶各1个，先放重蒸水800mL 于烧杯中，然后按上页表顺序逐一溶解药品。直到葡萄糖完全溶解后，再将已溶解的CaCl 2溶液加入，最后加水定容至1000mL 。
5）Hanks 液
Hanks 原液 100mL
重蒸水 896mL
0.5%酚红 4mL
配好的Hanks 液，分装包扎好贴上标签，经过灭菌后，4℃保存。
6）Janus green 染液。
四、实验方法与步骤
1．鸡血细胞储备液的制备
从家鸡的翼根静脉采血制备抗凝全血（100 IU 肝素/5 ml 全血）。在抗凝全血的试管中，加入4倍体积的0.85 %NaCl溶液，制成红细胞储备液，保存于4℃冰箱，可供一周内使用。
2．鸡血细胞悬液的制备
取鸡血细胞储备液1ml ，加入4ml 0.85 %NaCl溶液，混匀后，1200rpm 离心5min ，弃去上清液，再加入5ml 0.85 %NaCl溶液按上述条件离心一次。最后，弃去上清液，加入10ml 的GKN 溶液制成鸡血细胞悬液。取0.5ml 鸡血细胞悬液，用GKN 溶液稀释
至1*107个/ml，备用（约相当于取50μl鸡血细胞悬液，加50μlGKN溶液进行稀释）。
3．鸡血细胞的收集
吸取1ml 鸡血细胞悬液放入离心管中，加入4ml Hanks液混匀，1000rpm 离心5min 。弃去上清液，用手指轻弹离心管底部，使沉淀的血细胞团块松散。
3．PEG 诱导细胞融合
吸取0.5ml 37℃的50%PEG溶液，慢慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边轻摇离心管，使PEG 与细胞混匀，然后在37℃水浴中静置2min 。
5．终止PEG 作用
缓慢加入5ml Hanks液，轻轻吹打混匀，于37℃水浴中静置5min 。
6．细胞悬液的制备
用吸管轻轻吹打细胞团数次使细胞团分散，1000rpm 离心5min ，使细胞完全沉降。弃去上清液，加Hanks 液，再离心一次，弃多数上清，留少许溶液，混匀。
7．计算细胞融合率
细胞融合率是指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞的细胞核总数之百分比。
融合率 =视野内融合细胞的核数/视野内细胞的总核数×100％
8．染色和镜检
吸取细胞悬液，在凹面载玻片上滴一滴，加入Janus green染液混匀，染色3min 后盖上盖玻片，在显微镜下观察细胞融合情况（注意区分细胞融合与细胞重叠）。
五、注意事项
1. 高Ca 2+浓度能够提高细胞融合率。有些抗凝剂中含有和Ca 2+结合的化合物，与血液中的Ca 2+形成难解离的可溶性络合物，导致血液中的Ca 2+ 浓度降低，故起抗凝血作用，但同时会造成细胞的融合率较低。
2. 必须严格控制PEG 的作用时间，通常处理细胞1～2min 。PEG 和二甲基亚砜（DMSO ）并用，可以提高细胞的融合率。
3. 融合细胞继续培养就变成一个杂种细胞，它的染色体数不是两核的倍数，因为一些染色体会逐渐消失。
六、作业
1．画出观察到的融合细胞，并计算融合率。
2．说明细胞融合的关键。
