范文一:dna提取实验报告
dna提取实验报告
dna提取实验报告
篇一:
DNA提取实验报告 生物学大实验
(二) 实验名称:
质粒扩增、提取和鉴定实验 实验目的 通过对智力扩增、提取和鉴定试验的实验原理介绍和实际
操作,加深对分子生物学基本技术的理解和掌握。 实验仪器设备:
电子天平、高压蒸汽灭菌锅、摇床、离心机、不同型号移液枪若
干支、磁力搅拌器、恒温水浴锅、电炉、制冰机、琼脂糖凝胶电泳仪、
超净工作台等。 实验原理:
质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中,通过对细菌、放线
菌和真菌的培养来实现对质粒的扩增。经过处理的线状DNA在外界环
境恢复正常的时候不能够复性 而质粒DNA可以复性,从而可以实现
质粒DNA和染色体DNA的分离。限制性内切酶能特意地结合于一端被
称为限制性酶识别系列的DNA系列之内或其附近的特异位点上,并切
割DNA。当对提取的质粒DNA进行电泳时,同一质粒DNA其超螺旋形
式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。 实验步骤:一 质粒扩增
(1) 普通LB固体培养基制备: 制备LB培养基,倒入灭菌瓶中高压灭菌,待完全冷却后,保存备用。
(2)将大肠杆菌接种于LB培养基中,37?振荡培养过夜 二 质粒DNA的提取 1将菌液倒入
1.5ml的微量离心管中, 1201Xrpm离心一分30秒,弃去上清液,
以得到较多的细菌沉淀;
2、 将微量离心管开口倒置在卫生纸上,使离心管底部的液体流尽。
3、 加入100μl用冰预冷的溶液I,剧烈振荡,将沉淀彻底悬浮,
然后室温放置5分钟。
4、 加入200μl现配的溶液II,盖紧管口,轻轻快速颠倒离心管
(不要振荡,以避免DNA断裂),使混合物混匀,冰浴5,10分钟。
5、 加入150μl预冷的溶液III,盖紧管口,温和颠倒混匀,使
粘稠地细菌裂解物均匀地分布于溶液III中,冰浴5分钟。
6、 取上部水相,移入新的离心管,加入2倍体积预冷的无水乙
醇(也可同时加入110倍体积的醋酸钠),震荡混匀,室温放置10分
钟沉淀双链DNA,然后4?,1201Xrpm离心10min。
7、 弃去上清液,将离心管倒置于卫生纸上,使离心管底部的液
体流尽后,加 入预冷的1ml 70,乙醇。
8、弃去上清液,将离心管倒置于卫生纸上,使液体流尽,置DNA
干燥5,10分钟。
9、吸除上清液,将管口倒置于卫生纸上使液体流尽,真空干燥
10分钟或室温干燥。 10 、 将沉淀溶于34υlTE缓冲液或灭菌水(pH
8.0)中,储于-20?冰箱中 三DNA酶切反应
1、 将洁净干燥并经灭菌的eppendorf 管(最好0.5ml)编号,
用微量移液枪分别加入DNA(υl)和相应的限制性内切酶反应10×
缓冲液2υl,将管内溶液混匀后加入0.5υl酶液,用手指轻弹管壁
使溶液混匀,也可以用微量离心机甩一下,使溶液集中在管底。此步
操作是整个实验成败的关键,要防止错加,漏加。使用限制性内切酶
时应尽量减少其离开冰箱的时间,以免活性降低。
2、 混匀反应体系后,将eppendorf管置于适当的支持物上(如
插在泡沫塑料板上),37?水浴锅保温2-3小时,使酶切反应完全。
3、 每管加入2υl0.1molL EDTA(pH
8.0),混匀,以停止反应,置于冰箱之保存备用。 四 DNA的琼脂糖凝胶电泳
1、 取5×TBE缓冲液100ml加蒸馏水至1000ml,配成0.5×TBE
稀释缓冲液,待用。
2、 胶液的制备:
称取3g琼脂糖置于1000ml锥形瓶中,加入300ml 0.5×TBE稀释
缓冲液,加入微波炉里加热至琼脂糖全部融化,取出摇匀,此为1%
琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动,使其附于瓶盖上的琼脂糖颗
粒进入溶液。加热时应盖上封口膜,以减少水分蒸发。
3、 胶版的制备:
想冷却至50-60?的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭(EB)溶液使其
终浓度为0.5υlgml。倒胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀,速
度也不可太快,否则溶液出现气泡,待胶完全凝固后,拔出梳子注意
不要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入0.5υ×TBE稀释缓冲液至
页面恰好没过胶板上表面
4、 加样:
取20υl的酶解液与2υl10×载样液混匀,用微量移液枪小心加
入样品槽中,每加完一个样品要更换tip头以防止互相污染,注意上
样时要小心操做,避免损坏凝胶或将样品槽底部的凝胶刺穿
5、 电泳:
加完样后合上电泳槽盖,立即接通电源,控制电压保持在60-80V,
电流在40mA以上,当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿2m时停止电泳
6、 观察和拍照 五 实验结果
六 实验结论 通过本次试验加深了对分子生物学以及基因工程的深入了解,右上第
三第四根亮柱是我的结果。结果显示,第三条中酶切效果良好,RNA
被降解的很完全,第四根没有被酶切,质粒DNA跟RNA同时存在,出
现了两条亮带,质粒DNA跟RNA分离效果较好。 本实验需要细致认真的完成,所以特别在凝胶电泳中要十分注意以下
事项:
(1) 取出梳子之前,一定要耐心等待琼脂糖凝胶的凝固,拔
梳子是一定要手稳,而且要 垂直拔出;
(2) 点样要细心,枪头不要碰到凝胶,以免点样枪刺破凝胶;
(3) 电泳时,电极一定要连接正确
(4) 染色剂溴化乙锭是强诱变剂,有致癌性和强毒性,使用时
一定要带一次性手套,使 用后废液不可不可随意丢弃。 生物科学 071班 姓名:
刘欢 学号:
201X3305
篇二:
DNA的提取和电泳实验报告 基因组DNA的提取和电泳(实验五)实验报告
一、实验目的 了解DNA提取的方法,以及琼脂糖凝胶电泳分析DNA技术。
二、器材和试剂
1. 器材 水平琼脂糖电泳仪,离心机,水浴锅,研钵,离心管、移液枪、水稻
幼苗等
试剂
1. 1molL Tris.Cl的配制:
称取1
11g 的Tris,置于80 mL的ddH20,加入浓盐酸 (约
4.2 mL),调节pH值至
8.0,定容至100 mL。
0.5 molL EDTA =4(3+7)+2(6+
4)- =60?- =50~55? 5‘-AACCGTGGCGACACCGCTAA’ Tm值=4(G+C)+2- =4- =64?-=54~59? 因此退火温度可以选择在55? 可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。开始低于
估算的Tm5?,以2?为增量,逐步提高退火温度。较高的退火温度
会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。为获得最佳结果,两个引
物应具有近似的Tm值。引物对的Tm差异如果超过5?,就会令引物
在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。如果两个引
物Tm不同,将退火温度设定为比最低的Tm低5? 或者为了提高特
异性,可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环,然后在
根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。这使得在较为严紧的
条件下可以获得目的模板的部分拷贝。
范文二:dna提取实验报告
dna提取实验报告2016
dna提取实验报告
生物学大实验
实验名称:质粒扩增、提取和鉴定实验
实验目的通过对智力扩增、提取和鉴定试验的实验原理介绍和实际操作,加深对分子生物学基本技术的理解和掌握。
实验仪器设备:电子天平、高压蒸汽灭菌锅、摇床、离心机、不同型号移液枪若干支、磁力搅拌器、恒温水浴锅、电炉、制冰机、琼脂糖凝胶电泳仪、超净工作台等。
实验原理:质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中,通过对细菌、放线菌和真菌的培养来实现对质粒的扩增。经过处理的线状DNA在外界环境恢复正常的时候不能够复性而质粒DNA可以复性,从而可以实现质粒DNA和染色体DNA的分离。限制性内切酶能特意地结合于一端被称为限制性酶识别系列的DNA系列之内或其附近的特异位点上,并切割DNA。当对提取的质粒DNA进行电泳时,同一质粒DNA其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。
实验步骤:
一质粒扩增
1 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
普通LB固体培养基制备:
制备LB培养基,倒入灭菌瓶中高压灭菌,待完全冷却后,保存备用。
将大肠杆菌接种于LB培养基中,37?振荡培养过夜(200转/分)
二质粒DNA的提取(碱法)
1将菌液倒入1.5ml的微量离心管中,12000rpm离心一分30秒,弃去上清液,以得到较多的细菌沉淀;
2、将微量离心管开口倒置在卫生纸上,使离心管底部的液体流尽。
3、加入100μl用冰预冷的溶液I,剧烈振荡,将沉淀彻底悬浮,然后室温放置5分钟。
4、加入200μl现配的溶液II,盖紧管口,轻轻快速颠倒离心管,使混合物混匀,冰浴5,10分钟。
5、加入150μl预冷的溶液III,盖紧管口,温和颠倒混匀,使粘稠地细菌裂解物均匀地分布于溶液III中,冰浴5分钟。
、取上部水相,移入新的离心管,加入2倍体积预冷的无水乙醇,震荡混匀,室温放置10分钟沉淀双链DNA,然后4?,12000rpm离心10min。
7、弃去上清液,将离心管倒置于卫生纸上,使离心管底部的液体流尽后,加入预冷的1ml70,乙醇。
2 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
8、弃去上清液,将离心管倒置于卫生纸上,使液体流尽,置DNA干燥5,10分钟。
9、吸除上清液,将管口倒置于卫生纸上使液体流尽,真空干燥10分钟或室温干燥。
10、将沉淀溶于34υlTE缓冲液或灭菌水中,储于-20?冰箱中
三DNA酶切反应
1、将洁净干燥并经灭菌的eppendorf管编号,用微量移液枪分别加入DNA和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2υl,将管内溶液混匀后加入0.5υl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可以用微量离心机甩一下,使溶液集中在管底。此步操作是整个实验成败的关键,要防止错加,漏加。使用限制性内切酶时应尽量减少其离开冰箱的时间,以免活性降低。
2、混匀反应体系后,将eppendorf管置于适当的支持物上,37?水浴锅保温2-3小时,使酶切反应完全。
3、每管加入2υl0.1mol/LEDTA,混匀,以停止反应,置于冰箱之保存备用。
四DNA的琼脂糖凝胶电泳
1、取5×TBE缓冲液100ml加蒸馏水至1000ml,配成0.5×TBE稀释缓冲液,待用。
2、胶液的制备:称取3g琼脂糖置于1000ml锥形瓶
3 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
中,加入300ml0.5×TBE稀释缓冲液,加入微波炉里加热至琼脂糖全部融化,取出摇匀,此为1%琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动,使其附于瓶盖上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜,以减少水分蒸发。
3、胶版的制备:想冷却至50-60?的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭溶液使其终浓度为0.5υlg/ml。倒胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀,速度也不可太快,否则溶液出现气泡,待胶完全凝固后,拔出梳子注意不要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入0.5υ×TBE稀释缓冲液至页面恰好没过胶板上表面
4、加样:取20υl的酶解液与2υl10×载样液混匀,用微量移液枪小心加入样品槽中,每加完一个样品要更换tip头以防止互相污染,注意上样时要小心操做,避免损坏凝胶或将样品槽底部的凝胶刺穿
5、电泳:加完样后合上电泳槽盖,立即接通电源,控制电压保持在60-80V,电流在40mA以上,当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿2cm时停止电泳
、观察和拍照
五实验结果
六实验结论
通过本次试验加深了对分子生物学以及基因工程的
4 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
深入了解,右上第三第四根亮柱是我的结果。结果显示,第三条中酶切效果良好,RNA被降解的很完全,第四根没有被酶切,质粒DNA跟RNA同时存在,出现了两条亮带,质粒DNA跟RNA分离效果较好。
本实验需要细致认真的完成,所以特别在凝胶电泳中要十分注意以下事项:
取出梳子之前,一定要耐心等待琼脂糖凝胶的凝固,拔梳子是一定要手稳,而且要
垂直拔出;
点样要细心,枪头不要碰到凝胶,以免点样枪刺破凝胶;
电泳时,电极一定要连接正确
染色剂溴化乙锭是强诱变剂,有致癌性和强毒性,使用时一定要带一次性手套,使
用后废液不可不可随意丢弃。
生物科学071班姓名:刘欢学号:20073305
基因组DNA的提取和电泳实验报告
一、实验目的
了解DNA提取的方法,以及琼脂糖凝胶电泳分析DNA技术。
二、器材和试剂
1.器材
5 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
水平琼脂糖电泳仪,离心机,水浴锅,研钵,离心管、移液枪、水稻幼苗等
2.试剂
1.1mol/LTris.Cl(pH8.0)的配制:称取12.11g的Tris,置于80mL的ddH20,加入浓盐酸
,调节pH值至8.0,定容至100mL。
2.0.5mol/LEDTA(pH8.0)的配制:
18.61gNa2EDTA?2H2O,加入80mL的ddH2O,用NaOH颗粒调pH值至8.0,定容至100mL。
3.提取缓冲液的配制:
100mmol/LTris.Cl(pH8.0),20mmol/LEDTA,500mmol/L
NaCl,
1.5%SDS
4.80/4/16氯仿:异戊醇:乙醇
5.?Loadingbuffer:0.15,溴酚蓝,0.15,二甲苯青FF,5mmol/LEDTA,50,甘油
三、实验步骤
1.在15mL的离心管中加入5mL的提取缓冲液,60?水浴预热。
2.植物叶1-2g,剪碎,在钵体中加入石英砂,加入预热的提取缓冲液,磨成粉末状,
0?水浴保温20min,其间不
6 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
时缓慢摇动。
3.5000rpm离心5分钟,仔细吸取上清液至另一离心管中,
4.加入5mL氯仿/戊醇/乙醇溶液,颠倒混匀,室温下静置
5-10分钟,使水相和有机相混匀。
5.室温下离心5000rpm离心5分钟。
.仔细吸取上清液至另一离心管中,加入一倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出
现絮状沉淀。
7.离心5000rpm,离心5min,弃去异丙醇,室温晾干。
8.视沉淀多少,加入1mL左右ddH2O溶解,可在60?水浴中放置15分钟以上助溶。
9.取DNA样品5μL,加入1μL6?Loadingbuffer,混匀,加入0.7%的琼脂糖凝胶加样孔
中,电泳,检测DNA的分子大小。
4、实验结果和讨论
实验分析:本次实验由于种种原因我是和植保102班的同学一起做的,我们组3人,实验过程比较严谨,受到了老师的表扬,实验结果也很令人满意。
下面是实验过程中的注意点:1、研磨不能太久太用
7 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
力,会导致DNA片段断掉。2、实验室的某些试剂,如氯仿,有毒性,应带手套进行。
电泳的时候不知是时间的原因还是都做得不错,结果相差不是很远,第五组和第六组是我们的,第六组是我自己加的。实验过程中要耐心细心,这样才能得到满意的结果。
园艺101
石颖
20100107011
实验报告
课程名称:生化实验甲指导老师:成绩:__________________实验名称:植物基因组DNA的提取实验类型:生化定性实验同组学生姓名:及纯度与含量的测定一、实验目的和要求二、实验内容和原理三、实验材料与试剂四、实验器材与仪器五、操作方法和实验步骤六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习并掌握植物基因组DNA的提取原理和方法;2、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作;3、学习并掌握对电泳检测基因组DNA结果的初步分析;4、学习紫外吸收法测定核酸基本原理和方法;5、学习并掌握紫外吸收法测定基因组DNA纯度与含量的方法。
8 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
二、实验基本原理植物基因组DNA的提取方法就其提取原理主要有二种:十六烷基三乙基溴化铵染色后,在紫外光下可见橙红色带,并可确定DNA片断在凝胶中的位置。
紫外吸收法测定基因组DNA纯度与含量
核酸——DNA和RNA所含碱基的苯环结构的共轭双键具有紫外吸收的性质,它们在260nm处有最大的吸收峰。因此,可以用260nm波长进行核酸含量的测定。
波长为260nm时,DNA或RNA的光密度的大小不仅与总含量有关,也与它们的不同构型而有差异。
对标准样品来说,浓度为1μg/ml时,DNA钠盐的OD260,0.02。
当OD260,1时,双链DNA含量约为50μg/ml
单链DNA含量约为37μg/ml
RNA含量约为40μg/ml
寡核苷酸含量约为30μg/ml
1、核酸样品DNA、RNA含量的测定:
如用1cm光径石英比色皿,用H2O稀释DNA或RNA样品n倍并以H2O为空白对照,根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前DNA的含量:
DNA=50×OD260读数×DNA样品稀释倍数/1000
9 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
RNA=40×OD260读数×RNA样品稀释倍数/1000
若样品不纯,则比值发生变化,此时无法用分光光度法对核酸进行定量,可使用溴化乙锭法或其他方法进行估算。
当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时,会影响DNA吸光度的准确测定。由于DNA在260nm处有最大的吸收峰,蛋白质在280nm处有最大的吸收峰,盐和小分子则集中在230nm处。所以,一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230,计算它们的比值来判断核酸样品的纯度。
2、核酸样品纯度判断的一般标准:
?DNA纯度:OD260/OD280?1.8,表示为纯的DNA;
OD260/OD280,1.9,表示有RNA污染;
OD260/OD280,1.6,表示有蛋白质、酚等污染。
?RNA纯度:1.7,OD260/OD280,2.0,表示为纯的RNA;
OD260/OD280,1.7时,表示有蛋白质或酚污染;
OD260/OD280,2.0时,表示可能有异硫氰酸残存。
?OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间,若比值较高说明有残余的盐和小分子如核苷酸、氨基酸、酚等的存在。
若样品不纯,则比值发生变化,此时无法用分光光
10 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
度法对核酸进行定量;同时也会影响酶切和PCR的效果。
三、实验材料与试剂
1、实验材料:植物幼嫩叶子
2、实验试剂
基因组DNA提取缓冲液
氯仿:异戊醇:乙醇抽提液
TE缓冲液
平衡酚:
RNA酶A
酚/氯仿
氯仿/异戊醇
异丙醇、无水乙醇、70%乙醇。
3mol/LNaAc
5×TBE缓冲液
×电泳上样缓冲液
1.0%琼脂糖凝胶
EB
DNA分子量Markers:125,564,2027,2322,4361,6557,9416,23130bp.
ddH2O;
四、实验器材与仪器
11 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
1、研体
2、离心机、离心管及离心管架;
3、微量移液器10ul、200ul、1000ul及枪头;
4、恒温水浴箱65?
5、制冰机;
、冰箱;
7、恒温水浴箱37?;
8、微波炉;
9、电泳仪及电泳槽;
10、紫外检测仪。
11、紫外分光光度计;
12、石英比色皿或1cm光径的微量石英比色皿。
琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA
1、制胶
在胶模上架好梳子。称取01g琼脂糖,置于250ml锥形瓶中,加100ml0.5×TBE电泳缓冲液,加热熔化至无颗粒状琼脂糖,待其冷却至50,60?后,加入EB,使其终浓度为0.5mg/L,摇匀后立即倒入准备好的胶模中,待胶凝固后,放入电泳槽中,倒入适量0.5×TBE,拔去梳子备用。
2、加样
取5ul纯化的DNA原溶液样品,与1ul×电泳加样缓
12 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
冲液混匀,用微量移液枪小心加入样品槽中。若DNA含量偏低,则可依上述比例增加上样量,但总体积不可超过样品槽容量。每加完一个样品要换枪头以防互相污染。注意上样时要小心操作,避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。
3、电泳
加完样后,盖上电泳槽盖,立即接通电源,使电压调到100V,恒压电泳。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前缘约2cm时,停止电泳。
4、观察和拍照
取出胶块置于紫外灯下观察,DNA存在处可显示出肉眼可辨的橘红色荧光带,再用成像仪进行拍照,以便于分析。。紫外吸收法测定基因组DNA纯度与含量
将提取的植物基因组DNA样品吸取20ul,加到新的5ml离心管中,再加一定量的ddH2O或TE缓冲液稀释100倍,用0.5cm光径石英比色皿或微量石英比色皿在紫外分光光度计上测定230nm、260nm、280nm处的吸光度。计算植物基因组DNA样品溶液的DNA的含量以及DNA样品的纯度。
六、结果与分析
这是电泳后得到的照片,其中从右往左数第七条带
13 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
为我所做样品的基因组。
紫外吸收法测定基因组DNA纯度与含量
1、植物基因组DNA样品溶液的DNA的含量:
DNA=959.328ng/ul
2、植物基因组DNA样品溶液的DNA的纯度:
OD260/OD280,1.97
OD230/OD260,2.07
3、样品纯度判断:
?OD260/OD280?1.8,表示为纯的DNA;
?OD260/OD280,1.9,表示有RNA污染;
?OD260/OD280,1.6,表示有蛋白质、酚等污染。
由OD260/OD280,1.97可知,样品含有RNA杂质。
七、讨论、心得
注意事项:影响DNA泳动速率的因素有:
?DNA分子质量的影响:双链DNA分子迁移的速率与DNA分子量对数成反比。分子量越大,迁移率越小。
?DNA构型的影响:超螺旋DNA,线状DNA,开环DNA
?胶浓度的影响:浓度越低,相同核酸分子迁移越快,一般常用的凝胶浓度为1,,2,;
?电场强度的影响:电场强度愈大,带点颗粒的泳
14 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
动越快。但凝胶的有效分离范围随着电压增大而减小,所以电泳时一般采用低电压,。而对于大片段电泳,甚至用0.5,1.0V/cm电泳过夜。进行高压电泳时,只能使用聚丙烯酰胺凝胶。
?EB的影响:溴化乙锭插入双链DNA造成其负电荷减少、刚性和长度增加。
?电泳缓冲液的影响:核酸电泳常采用TAE、TBE、TPE三种缓冲系统,但它们各有利弊。TAE价格低廉,但缓冲能力低,必须进行两极缓冲液的循环。TPE在进行DNA回收时,会使DNA污染磷酸盐,影响后续反应。所以多采用TBE缓冲液。在缓冲液中加入EDTA,可以鳌合二价离子,抑制DNase,保护DNA。缓冲液pH常偏碱性或中性,此时核酸分子带负电,向正极移动。
?碱基组成与电泳温度的影响:一般影响不大
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题:
DNA的二级结构和双链易受多种因素的影响引起双链解开,即“变性”,因此抽提时避免使用变性的条件。
抑制内外源DNase的活力。DNase就象一把刀,它能把大分子的DNA切成碎片,所以要加以杜绝,现可以通过多种途径来做到这一点:a、低温操作;b、
15 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
调节pH,使偏碱;c、抽提液中加表面活性剂;d、加螯合剂除去酶的铺助因子,使酶活性丧失。
防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素,会使DNA降解,一般综合考虑,取pH8.0左右为宜。
防止物理因素降解。如温度太高或机械张力剪切等,DNA分子特别大,极易被机械张力拉断,甚至在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂,所以在抽提过程中要特别注意这一点,操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数,也不要剧烈摇动。
植物的次生代谢物对核酸提取有干扰作用。因此,一般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取DNA的材料,这是因幼嫩的新生组织次生代谢物较少,DNA含量高,且易于破碎,植物材料最好是新鲜的。
由结果可知,在加入RNA酶的时候可适当多加一点,以免造成得到的DNA样品含较多RNA杂质。
注:1、报告内的项目或内容设置,可根据实际情况加以调整和补充。
2、学生提交实验报告时间为实验后10日内。
PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳
刘琳1131428环境科学
一、实验目的
16 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
1(学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
2(对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验,并分析相应结果。
二、实验原理
1.PCR扩增
多聚酶链反应技术的原理类似于DNA的天然复制过程。在微量离心管中加入适量缓冲液,加入微量模板DNA、四种脱氧核苷酸、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA的引物,而后加热使模板DNA在高温下变性,双链解链,这是所谓变性阶段。降低溶液温度,使合成引物在低温与模板DNA互补退火形成部分双链,这是所谓退火阶段。溶液反应温度升至中温,在Tap酶作用下,用四种dNTP为原料,引物为复制起点,模板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链,这是延伸阶段。如此反复,在同一反应体系中可重复高温变性、低温退火和DNA合成这一循环,使产物DNA重复合成,并在重复过程中,前一循环的产物DNA可作为后一循环的模板DNA而参与DNA的合成,使产物DNA的量按指数方式扩增。经过30,40个循环,DNA扩增即可完成。
2.DNA琼脂糖凝胶电泳实验
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场
17 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
中向阳极移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。不同构型的DNA分子的迁移速度不同。该电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。
三、实验材料
仪器:PCR扩增仪、0.2ul薄壁管、1.5ml离心管、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、水平电泳槽、制胶版、紫外透射仪。
试剂:TapDNA聚合酶、dNTP、buffer、两种引物、16S全长DNA样本、无菌ddH2O、模板DNA、TBE、琼脂糖、EB、显色剂。
四、实验步骤
1.PCR扩增
本次试验选择细菌16SrDNAV3区片段进行扩增。
1.1根据计算,首先取1.5ml离心管按照2.5ul10×Buffer、1uldNTP、0.5ul341GC、0.5ul534、0.125ulTaq、19.375uddH2O的比例配置足量的PCR反应体系。
1.2分别向9个薄壁管中分别加入24ul的反应体系,
18 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
并分别添加8种不同的模版,并于第9个薄壁管中加入无菌ddH2O作为阴性对照。
1.3将薄壁管放入PCR扩增仪中,按照预定程序进行PCR扩增。其中循环过程需要达到30~40次。程序如下:
预变性:94?3min
循环:94?变性30s
55?退火30s
72?延伸30s
末次延伸:72?5min
1.4PCR扩增完成后,将样品取出并保存于15?环境中。
2.DNA琼脂糖凝胶电泳实验
2.1称取0.2g琼脂糖粉末,放到一锥形瓶中,加入适量的0.5×TBE电泳缓冲液。然后置微波炉加热至完全溶化,溶液透明。摇匀,待冷却至60?左右,在胶液内加入适量的EB。
2.2取有机玻璃制胶板槽,在一端插好梳子,在槽内缓慢倒入已冷至60?左右的胶液,使之形成均匀水平的胶面。
2.3待胶凝固后,小心拔起梳子,使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。
19 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
2.4在槽内加入0.5×TBE电泳缓冲液,至液面覆盖过胶面。取1μl缓冲液和5μl待测DNA样品混合后,用移液枪滴加至凝胶的加样孔中。
2.5接通电泳仪和电泳槽,并接通电源,调节稳压输出,电压最高不超过5V/cm,开始电泳。点样端放阴极端。根据经验调节电压使分带清晰。
2.观察溴酚兰的带的移动。当其移动至距胶板前沿约1cm处,可停止电泳。
2.7在紫外透视仪的样品台上重新铺上一张保鲜膜,赶去气泡平铺,然后把凝胶放在上面。关上样品室外门,打开紫外灯,通过观察孔进行观察。
五、实验结果与讨论
如图所示:从左至右,分别是模版
1-8号,第9列为阴性对照。
前8列均有明显的条带出现,而阴
性对照无显示,说明扩增整体效果很
好。图中有上下两条线,上面一条线所
覆盖的条带基本可以代表扩增的产生
的片段位置,参照图可以看出扩增片段
在200bp左右。在第9个阴性对照的第
二条线处可以看到较为模糊的条带,并
非是出现假阴性,而是由于二聚物而产
20 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
生的条带。通过该条带与最右侧的
marker对比可知该片段出现在100bp左
右,并非由于实验操作等问题而产生的
污染。
实验的照片显示实验结果有拖尾
现象,但是并不影响后续实验。在实验
过程中由于有些试剂加到了管壁上面,
并没有完全加入,可能会出现一些误
差。另外在第1列条带中出现了其他的亮带,可能是由于在前期的扩增实验中滴加试剂时由于量过少而进行的摇匀和融合等操作产生了非特异性扩增,也有可能是因为胶板制作过程中梳子的位置不合适或者胶板制作时边缘处不够均匀导致产生污染。但总体而言,实验结果较为满意。
六、实验注意事项
1.由于PCR技术非常敏感,可使一个DNA分子得以扩增,装有PCR试剂的离心管打开之前,应先在微量离心机上作瞬间离心使液体沉积于管底。PCR扩增反应的条件,要控制好温度、时间和循环次数。
2.最好在加完所有其它反应成分后才加模板DNA。
3.配琼脂糖时应使其完全溶化后方可制胶。
4.EB具有致癌作用,配制及使用时应带一次性手套。
21 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
并在专门的实验室内使用。
七、实验收获
1.通过本次实验学习并掌握了PCR反应的基本原理、实验过程及技术。
2.通过本次实验掌握了电泳实验分离DNA的原理和方法。
八、思考题
1、如果你的研究中要扩增大肠杆菌某个酶的基因,你如何进行相关实验,
通过PCR扩增出想要的片段,然后通过凝胶电泳实验进行回收,并与合适的载体连接,转化进感受态细胞。经过培养提取质粒,进行酶切或PCR验证,测序最终验证,保存菌种
2.一对引物序列为5‘-GACTCCAGTCGAATCTACCA-3’和
5‘-AACCGTGGCGACACCGCTAA请计算它们的Tm值及选择合适的退火温度,如果按你算的退火温度做PCR时没有得到相应的产物,你怎么解决,
5‘-GACTCCAGTCGAATCTACCA-3’
Tm值=4+2(A+T)-(5,10?)
=4+2-(5,10?)
=60?-(5,10?)
22 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
dna提取实验报告2016
=50~55?
5‘-AACCGTGGCGACACCGCTAA’
Tm值=4+2(A+T)-(5,10?)
=4(5+7)+2(6+2)-(5,10?)
=64?-(5,10?)=54~59?
因此退火温度可以选择在55?
可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。开始低于估算的Tm5?,以2?为增量,逐步提高退火温度。较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。为获得最佳结果,两个引物应具有近似的Tm值。引物对的Tm差异如果超过5?,就会令引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。如果两个引物Tm不同,将退火温度设定为比最低的Tm低5?或者为了提高特异性,可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环,然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。
23 / 23 ---------------------------------------------感谢观看本文-------谢谢-----------------------------------------------------------
范文三:质粒dna的提取实验报告
质粒dna的提取实验报告
实验一、质粒DNA的提取及检测实验报告
实验一、质粒DNA的提取及检测
【实验目的】
1、掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤
2、掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术
3、学会PCR操作的基本技术
第一部分 质粒DNA的提取
一、实验原理:
碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0,12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时,共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确,而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开,复性就不会那么迅速而准确,它们缠绕形成网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA,蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
二、仪器与试剂
1、仪器恒温摇床、台式离心机
2、试剂溶液I、溶液?、溶液?、无水乙醇、TE缓冲液、胰RNA
酶、酚、氯仿
三、实验步骤
1、 将2mL含相应抗生素(Amp:50μg/mL)的LB液体培养基加入到试管中,接入含pUC19
质粒的大肠杆菌,37?振荡培养过夜。
2、 取1.5mL培养物倒入微量离心管中,4000r/min离心2min。
3、 吸去培养液,使细胞沉淀尽可能干燥。
4、 将细菌沉淀悬浮于100μL溶液I中,充分混匀,室温放置10 min。
5、 加200μL溶液?(新鲜配制),盖紧管皿,混匀内容物,将离心管放冰上5min。
6、 加入150μL溶液?(冰上预冷),盖紧管口,颠倒数次使混匀。冰上放置15min。
7、 12000r/min,离心15min,将上清转至另一离心管中。
8、 向上清中加入等体积酚:氯仿(1:1)(去蛋白),反复混匀,12000r/min,离心5min,
将上清转移到另一离心管中。
9、 向上清加入2倍体积无水乙醇,混匀后,室温放置5,10min。12000r/min,离心5min。
倒去上清液,把离心管倒扣在吸水纸上,吸干液体。
10、用1mL70?乙醇洗涤质粒DNA沉淀,振荡并离心,倒去上清液,真空抽干或空气中干
燥。
11、加20μLTE缓冲液,其中含有20μg/mL的胰RNA酶,使DNA完全溶解,-20?保存。
第二部分 琼脂糖凝胶电泳检测DNA
一、实验原理:
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样,可进行分离。DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA,也可以分离相对分子质量相同,但构型不同的DNA分子。如实验提取的pUC19质粒,有3种构型:超螺旋的共价闭合环状质粒DNA,开环质粒DNA,即共价闭合环状质粒DNA1条链断裂,线状质粒DNA,即共价闭合环状质粒DNA2条链发生断裂。这3种构型的质粒DNA分子在凝胶电泳中的迁移率不同。因此电泳后呈3条带,超螺旋质粒DNA泳动最快,其次为线状DNA,最慢的为开环质粒DNA。
二、仪器与试剂
1、仪器琼脂糖凝胶电泳系统、紫外线透射仪、电炉子
2、试剂5×TBE、凝胶加样缓冲液(6×)、琼脂糖、溴化乙锭溶液(EB)
三、实验步骤
(一) 制备琼脂糖凝胶
称取0.1g琼脂糖,放入锥形瓶中,加入10mL 0.5×TBE 缓冲液,加热至完全溶化(加EB),摇匀,则为1?琼脂糖凝胶液。
(二) 胶板的制备
1、 取有机玻璃内槽,洗净,晾干。
2、 将有机玻璃内槽放置于一水平位置,并放好样品梳子。
3、 将冷到60?左右的琼脂糖凝胶液,缓缓倒入有机玻璃内槽,直至有机玻璃板上形成一层
均匀的胶面(注意不要形成气泡)。
4、 待胶凝固后,取出梳子,放在电泳槽内。
5、 加入电泳缓冲液至电泳槽中。
(三) 加样
用移液枪将已加入上样缓冲液的DNA样品加入加样孔(记录点样顺序及点样量)。
(四) 电泳
1、 接通电泳槽与电泳仪的电源(注意正负极,DNA片段从负极向正极移动)。
2、 当溴酚蓝染料移动到距凝胶前沿1,2cm处,停止电泳。
四、实验结果
在紫外灯(254nm)下观察染色后的电泳凝胶。DNA存在处应显出桔红色荧光条带。
第三部分 PCR扩增制备目的基因
一、实验原理:
是将待扩增的DNA模板加热变性,与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性,然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。经过变性—复性—延伸的n次循环后,DNA可被扩增2n倍。
二、仪器与试剂
1、仪器PCR仪
2、试剂模板DNA、Taq DNA聚合酶、引物、10×Buffer、DNA Marker
三、实验步骤
(1)加样:在0.2ml PCR 微量离心管中配制25μl反应体系。
ddH2O 15.25μl
10×PCR buffer2.5μl
dNTP(2.5mM) 3.0μl
10μmol/L Primer1(2μM)1.0μl
10μmol/L primer2(2μM)1.0μl
模板DNA(含质粒) 2.0μl
Taq酶(5U/μl ) 0.25μl
总体积 25μl
(2)将PCR反应体系混匀,按以下循环条件在基因扩增仪上进行PCR循环: 预变性 94? 5min
变性 94? 45s
退火 56? 45s
延伸 72? 45s
完全延伸 72? 3min
(3)PCR结束后,取10μl产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。
四、实验结果:
篇二:质粒DNA的提取实验报告
质粒DNA的提取
一、实验方法
碱裂解法抽提质粒DNA
二、实验原理
基于质粒DNA与染色体DNA变性与复性的差异。
三、实验步骤
1)质粒提取
1. 10,000g,1min离心收集1.5,5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中。
2. 加入100?l溶液1,振荡至彻底悬浮。
3. 加入200?l溶液2,立即轻柔颠倒离心管6次,使菌体充分裂解,随后将离心管冰上放置3分钟
4. 加入150?l溶液3,立即温和颠倒离心管数次,冰上放置3分钟,10,000g离心10min。
5. 将步骤4的上清转移至新的离心管(尽量去除杂质),加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇混合均匀10,000g离心5min。
6. 将步骤5的上清转移至新的离心管,加入2倍体积的无水乙醇,室温放置5,10min,沉降DNA
7. 10,000g离心10分钟,弃乙醇,保留沉淀,加入1ml 70,的乙醇洗涤沉淀, 10,000g离心5分钟
8. 倒掉乙醇溶液,用吸水纸吸净管壁上的水珠,室温蒸发痕量乙醇
9. 加入适量含RNase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA
2)质粒鉴定?琼脂糖凝胶电泳
灌胶:胶中加入荧光染料(SYBR Green I)
加样:质粒+上样缓冲液?混匀
电泳
结果观察:UV灯下
四、实验结果
五、实验分析
裂解细胞中除含有质粒DNA外,还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质,因此用碱裂解法除去杂质
1、防止DNA裂解:Solution 1
1)、所含糖增加溶液黏度,维持渗透压,防止DNA受机械剪切作用降解
2)、所含EDTA抑制酶活性
2、溶解与变性:Solution2
1)强碱使质粒DNA和染色体DNA变性
2)离子型表面活性剂SDS可溶解膜蛋白
3、沉降与复性:Solution3
1)质粒DNA复性
2)在钾盐中,染色体DNA形成缠连的不溶性网状结构,和不稳定的大分子RNA以及变性的蛋白质和细菌碎片等一起沉淀
预期结果为剩余质粒DNA
4、琼脂糖凝胶电泳
1)荧光染色
染料分子可嵌入双链DNA分子配对碱基之间
2)琼脂糖可起到电泳和分子筛的作用,因所带电荷、分子量大小和构型不同,泳动速度不同
六、误差分析
实验失败,本组实验出现4条带,3明1暗,明亮处应为DNA分子数最多的,为质粒DNA,质粒DNA前有较暗的两条带,推测其中一条为未复性质粒DNA,可能Solution2处变性过长,不易复性,或Solution3处时间过短,复性不充分。另一条,RNA-DNA杂交链,因染料分子可嵌入双链DNA分子配对碱基之间。因还有一条在亮带后,推测为染色体DNA,推测很大可能性是Solution3处时间过短,沉降不完全。
篇三:质粒DNA的提取及其琼脂糖凝胶电泳实验报告及思考题
1(实验目的:
(1)通过本次实验学习和掌握碱裂解法提取质粒;
(2)通过本次实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术;
2(实验材料及用品
(1)实验仪器(apparatus):
恒温培养箱(Constant temperature incubator)、恒温摇床(Constant temperature shaking table)、高速离心机(High speed centrifuge)、漩涡振荡器(Vortex mixer)、超净工作台(Bechtop)、高压灭菌锅(Autoclave)、微量加样器(Pipettes)、烧杯( beaker)、量筒 (graduated cylinder)、 玻璃棒(stir bar)、 微波炉(microwave)、 天平(Pan balance)、电泳梳子( comb)、电泳槽 (electrophoresis tank)、 电泳器 (Electro-phoresis System)、 紫外灯(Ultraviolet transilluminator )
3)、材料与试剂(Reagents):
?溶液I(Solution ?):
50mmol/L 葡萄糖;25mmol/L 三羟基甲基氨基甲烷(Tris)Tris-HCl(pH8.0);10mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA) pH8.0
溶液I可成批配制,每瓶约100ml,10磅高压蒸气灭菌15分钟,贮存于4?。
?溶液?(Solution ?):新鲜配制,等体积混合
0.2mol/L NaOH(临用前用10mol/L贮存液现用现稀释);1% SDS (可用10,贮存液稀释配制)注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。
?溶液III (Solution ?,100mL):加上后混匀会形成絮状沉淀
60mL5mol/L KAc,
11.5mL 冰醋酸,
28.5mL H2O (该溶液钾离子浓度为3mol/L,醋酸根离子浓度为5mol/L)
?TE液缓冲液:10 mmol/L Tris-HCl(pH8.0);1 mmol/L EDTA
(pH8.0)
?70% 乙醇;
?平衡酚:氯仿 1:1:
将量取25 ml Tris-HCl(pH8.0)平衡苯酚,加入24 ml 氯仿和 1 ml 异戊醇,充分混合后,移入棕色玻璃瓶中,4?保存。
?LB培养基:
胰化蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
NaCl 15g
pH 7.0
?琼脂糖(Agarose);
?1 liter(升)5×TBE备用溶液(stock solution):
54g tris base,27.5g 硼酸(boric acid),20ml 0.5 mol/L EDTA , pH
8.0;
?6×凝胶加样缓冲液:
0.25% 溴酚蓝(bromophenol blue),40% 蔗糖(sucrose in water);
另外还有的试剂是:胰RNA酶、DNA Marker、硼酸、Gelview试剂
(2)实验材料:含有pUC19质粒的大肠杆菌等。
3(实验原理:
1)质粒DNA的提取:
(1)关于质粒:
质粒是一类存在于几乎所有细菌中染色体之外(细胞质中)呈游离状态的双链、闭环的DNA分子。质粒通常携带有染色体上所不存在的能够表达产生抗生素、耐受重金属等重要性状的基因。细菌质粒的大小范围从1kb至200kb以上不等,且拥有自己的复制起始位点,可不依赖于染色体而进行独立自主复制。一些小的质粒利用宿主细胞的酶进行复制,而较大的质粒则自身携有复制与编码的有关酶。
(2)一般分离质粒DNA的方法都包括3个步骤:
?培养细菌,使质粒DNA大量扩增;
?收集和裂解细菌;
?分离和纯化质粒DNA。
分离制备质粒DNA的方法很多,其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、SDS法、羟基磷灰石层析法等。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。
(3)碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理:
碱裂解法提取质粒DNA是根据共价闭合环状质粒DNA和线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离质粒DNA。
在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入pH4.8乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时,共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确;而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开,因复性较缓慢且不准确而相互缠绕形成不溶性网状结构。而复性的质粒DNA恢复原来构型,保持可溶性状态。通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA,蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去,最后用酚氯仿可以抽提纯化上清液中的质粒DNA。
2)质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳:
(1)关于电泳技术:
电泳常用于分离和纯化那些分子大小、电荷性状或分个构象有所不同的生物大分子——尤其是蛋白质和核酸。正因为如此,电泳已成为生物化学和分子生物学中应用最为广泛的技术之一,其中在分子生物学实验中最为常用的是琼脂糖凝胶电泳。
琼脂糖是一种海藻多糖,琼脂糖胶分离范围很大,但其分辨率却相对较低。通过改变琼脂糖凝胶的浓度,应用标准的电泳技术可以分离200到50,000 bp 大小的 DNA 片断。一般琼脂糖胶浓度
在0.5,到4,之间,且琼脂糖凝胶浓度越大,凝胶就越硬。较高浓度的琼脂糖胶有利于较小的DNA片断分离,而较低浓度的琼脂糖胶则可以分离较大的DNA片断。
(2)琼脂糖凝胶电泳条带的观察:
通过观察示踪染料的迁移距离可以判断DNA的迁移距离。溴酚蓝染料在琼脂糖凝胶的迁移速率大小与300和4000bp大小的双链DNA片断相同。当迁移足够距离后,就可以通过Gelview染色来观察DNA片断。Gelview是一种荧光染料。它可以在做胶时混入其中在电泳
时进行染色,也可以待电泳完成后将凝胶浸泡在稀释的Gelview 溶液中进行染色 。但必须将凝胶置于紫外透射仪中才可以对凝胶中的DNA或RNA进行观察。
(3)质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳分离:
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应,DNA分子在高于等电点的pH溶液环境中带负电荷,在电场中向正极移动,由于磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以相同的速度向正极移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本身的构型和大小。具有不同分子质量或者不同构型的DNA分子泳动速率不一样,可以进行分离。
未切割的质粒DNA在其泳道上也许会出现几个条带,之所以这样是由于质粒DNA在琼脂糖凝胶中的迁移距离是由其分子构象及
其碱基对大小所决定的。质粒DNA以下列三种主要构象中的任何一种形式存在:
? 超螺旋DNA:
尽管质粒通常以开环的形式进行描述,然而在细菌细胞内DNA链即是盘绕在组蛋白周围形成一种致密的结构。这就是所谓超螺旋结构,由于其结构致密,它在凝胶中的泳动速度最快。 ? 线性DNA:
当DNA损伤在DNA双链相对应的两条链上同时产生切口时,就会出现线性质粒DNA,这种DNA的泳动速率介于超螺旋与切口质粒DNA之间。
?开环DNA:
在质粒DNA复制过程中,拓扑异构酶I会在DNA双螺旋中的一条链中引入一个切口,解开质粒的超螺旋。在质粒分离过程中由于物理剪切和酶的切割作用同样也会在超螺旋质粒中引入切口从而产生松散的开环结构。这种形式的质粒迁移速率最慢,其“松散”的分子形式阻碍了它在琼脂糖凝胶中的运动。
4(实验方法步骤及注意事项
1)实验方法步骤
第一部分:质粒DNA的提取及酶切
(1)取1.4 ml含pUC19这里的大肠杆菌培养物于1.5 ml微量离心管中,4 000 r/min 离心2分钟,吸去上清液,并使细胞沉淀尽可能干燥;
(2)加100 ml 溶液?悬浮细菌沉淀,充分混和均匀,室温放置10 min;
(3)加200 ml溶液 ?(新鲜配制),盖紧管口,轻缓上下4-6次颠倒离心管以混合内容物。将离心管静置冰上5 min(使溶液变透明,粘稠);
(4)加200 ml溶液 ?(事先冰上预冷),盖紧离心管口后上下轻缓颠倒4-6次,置冰上15 min (溶液出现白色沉淀);
(5)12 000 rpm离心15 min,转移上清液至另一离心管(弃沉淀);
(6)向上清液中加入等体积的酚:氯仿(1:1),反复混匀,12 000 rpm离心5min,取上清液移至另一离心管中;
(7)加2倍体积无水乙醇,振荡混匀,静置10 min,12000 rpm离心5,10 min。弃上清液,将离心管倒置于吸水纸,将附于管壁的残余液滴除净。
(8)加200 ml 70,乙醇洗涤沉淀物,12000 rpm离心2 min,弃上清液,将沉淀在室温下晾干(或在50?,60?的烘箱中也可)。
(9)沉淀加20μl TE, 反复吹打使质粒DNA充分溶解,,20?保存。
第二部分:质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳
?. 凝胶的制备(Preparation of the gel)
(1) 制备1,琼脂糖凝胶:
称取0.5g琼脂糖,放人锥形瓶中,加入50mL的 0.5×TBE 缓冲
液,放入微波炉加热至完全溶化,则为0.5,琼脂糖凝胶液(由于蒸发作用,溶解前在容量瓶上作一个记号,溶解后用三蒸水补足);
(2)制胶器的安装:
?取多功能制胶器,洗净,晾干;
?将多功能制胶器放置于一水平位置,选择12×6cm制胶架,然后选择1.5mm 18teeth的梳子(最大加样量25μl);
?将所选择规格的梳子插入制胶架的定位槽中;
(3)将熔化的琼脂糖凝胶液转入Gelview专用的三角瓶中,然后加入Gelview 5μl;
(4)将冷到60?左右的琼脂糖凝胶液,缓缓倒入所选择的制胶槽内,直至有机玻璃板上形成一层均匀的胶面(注意不要形成气泡);
(5)待胶凝固后(30-60min),轻轻拔掉梳子,将凝胶盘从制胶槽中取出,放入电泳槽内;
(6)加入电泳缓冲液(0.5×)至电泳槽中;
?. 加样(Loading DNA samples):
用移液枪缓慢将DNA样品及其经过酶切的质粒DNA样品垂直加入加样孔直至开口下方(记录点样顺序,以便作为对照和分析),各加样量如下:
DNA samples :15μl酶切的DNA样品:3μl
Loading buffer: 2μl DNA markers :6μl
(DNA samples与Loading buffer总共加入20μl)
?. 电泳(Gel):
(1)接通电泳槽与电泳仪的电源(注意正负极,DNA片段从负极向正极移动)。保持电压 120V;
(2)当溴酚蓝染料移动到凝胶总长度一半处时,停止电泳;
?. Gel Interpretation (凝胶图像解释):
将电泳后的凝胶放在紫外灯的照射下进行DNA电泳条带的观察,并用凝胶电泳成像系统进行拍照、分析。
2)注意事项
(1) 加溶液I后,必须要将菌体悬浮彻底,不得有块状或大颗粒状呈现,是质粒DNA提取的首要关键;
(2)
(3) TAE和TBE均为常用的缓冲液。TBE比TAE有相对高的缓冲能力。 加样染料溴酚蓝可与长度约为0.5 kb的DNA一起迁移,可用于指示迁移率最高的片段。
(4) DNA的迁移速率取决于以下因素:
?DNA的分子大小—分子量越小,迁移越快。
?琼脂糖浓度—浓度越低,迁移越快。
?DNA的构象—环状的或带切口环状的DNA通常比线状的DNA迁移要快。
?两个电极之间单位厘米的电压——电压越高,迁移越快。
(5) 如果DNA条带不够窄且不够均匀,可能是内以下原因所引起:
?DNA过载?电压过高?加样孔破损 ?凝胶中有气泡
(6) 在紫外灯下观察凝胶电泳所得结果应该戴上防护眼镜,因为紫外线对眼睛有伤害作用;
二(实验内容
1( 实验现象与结果:
将电泳后的凝胶放在紫外灯的照射下观察到的和用凝胶电泳成像系统进行拍照得到的DNA电泳条带图如下所示意:
图注:x’:代表经过酶切的质粒DNA样品的电泳条带;
x :代表未经过酶切的质粒DNA样品的电泳条带(x相同的互为对照组);
marker:DNA相对分子质量标准物。
pUC19质粒DNA标准参照条带图像:
2( 对实验现象、实验结果的分析及其结论:
对实验现象的分析及其结论:从上述所示的DNA电泳条带图可以看出
:
不管在DNA Sample中还是在经过酶切处理后的DNA样品中均具有电泳迁移速率处于中间的线性质粒DNA。而在此次试验中出现线性质粒DNA是因为pUc质粒DNA在提取的过程中DNA双链在相对应的两条链上同时产生切口。
这说明质粒制备过程个出现线性DNA说明存在核酸酶污染或实验操作有问题。可能在其中混有少量的蛋白质(图中,位置在
marker组最后一电泳条带后方的很可能就是蛋白质组分),或者在实验的提取过程中加入溶液?所经历的时间过长,在碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂,从而使提取的质粒DNA样品混入了基因组 DNA。
但是其中各组也存在超螺旋DNA(与marker组对照,电泳速率最快,跑在最前面的)。标号为1、2和3组的电泳条带存在开环质粒DNA(与marker组的最后一条带相比较,同在一条水平线上且较亮的一条条纹即为开环质粒DNA),而且只出现在未经过酶切的质粒DNA Sample中, 这说明在此次实验过程中酶切是彻底的。
从总体上观察,所有电泳条带的亮度并不高,可能是提取的质粒DNA量较少(浓度过低)或电泳前加样量过少所致。
5(作业
1.简要叙述溶液?、溶液?和溶液?的作用,以及实验中分别加入上述溶液后,反应体系出现的现象及其成因?
?溶液?的作用:悬浮大肠杆菌菌体,而且加溶液I后,必须要将菌体悬浮彻底,不得有块状或大颗粒状呈现,是质粒DNA提取的首要关键。且其中含有的溶霉菌可以水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌作用。另外葡萄糖的作用是使悬浮后的大肠杆菌不会很快沉积到管子的底部,增加溶液的粘度,维持渗透压及防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+ 和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,在溶液 I中加入EDTA,是要把大肠杆菌细胞中的二价金属离子都螯合掉,
从而起到抑制 DNase对DNA的降解和抑制微生物生长的作用。另外也可保证溶菌酶活性。
溶液?的作用:
提供碱性条件,在NaOH与SDS的共同作用下使大肠杆菌瞬间裂解,并变性核DNA。当细胞悬浮于NaOH和十二烷基酸钠(SDS)溶液中使,在高pH(碱性环境)的作用下细胞发生裂解,此外蛋白质和染色体DNA发生变性与细胞碎片一起沉淀下来。这是由于细胞膜发生了从bilayer(双层膜)结构向micelle(微囊)结构的相变化。新配制的溶液?避免作为最佳溶解细胞的试剂—NaOH接触空气中的CO2过久而减弱了碱性。用不新鲜的0.4 M NaOH,即便有SDS也无法有效溶解大肠杆菌。因此必须使用新鲜的0.4 M NaOH试剂进行配制。
溶液?的作用:
该溶液所含有的高浓度钾离子与溶液体系中的十二烷基硫酸钠(即SDS与NaOH所形成的可溶性物质)发生反应形成十二烷基硫酸钾(potassium dodecylsulfate,PDS),从而将与之结
范文四:质粒dna的提取实验报告思考题
质粒dna的提取实验报告思考题
质粒DNA的提取及其琼脂糖凝胶电泳实验报告及思考题
1(实验目的:
(1)通过本次实验学习和掌握碱裂解法提取质粒;
(2)通过本次实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术;
2(实验材料及用品
(1)实验仪器(apparatus):
恒温培养箱(Constant temperature incubator)、恒温摇床(Constant temperature shaking table)、高速离心机(High speed centrifuge)、漩涡振荡器(Vortex mixer)、超净工作台(Bechtop)、高压灭菌锅(Autoclave)、微量加样器(Pipettes)、烧杯( beaker)、量筒 (graduated cylinder)、 玻璃棒(stir bar)、 微波炉(microwave)、 天平(Pan balance)、电泳梳子( comb)、电泳槽 (electrophoresis tank)、 电泳器 (Electro-phoresis System)、 紫外灯(Ultraviolet transilluminator )
3)、材料与试剂(Reagents):
?溶液I(Solution ?):
50mmol/L 葡萄糖;25mmol/L 三羟基甲基氨基甲烷(Tris)Tris-HCl(pH8.0);10mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA) pH8.0
溶液I可成批配制,每瓶约100ml,10磅高压蒸气灭菌15分钟,贮存于4?。
?溶液?(Solution ?):新鲜配制,等体积混合
0.2mol/L NaOH(临用前用10mol/L贮存液现用现稀释);1% SDS (可用10,贮存液稀释配制)注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。
?溶液III (Solution ?,100mL):加上后混匀会形成絮状沉淀
60mL5mol/L KAc,
11.5mL 冰醋酸,
28.5mL H2O (该溶液钾离子浓度为3mol/L,醋酸根离子浓度为5mol/L)
?TE液缓冲液:10 mmol/L Tris-HCl(pH8.0);1 mmol/L EDTA
(pH8.0)
?70% 乙醇;
?平衡酚:氯仿 1:1:
将量取25 ml Tris-HCl(pH8.0)平衡苯酚,加入24 ml 氯仿和 1 ml 异戊醇,充分混合后,移入棕色玻璃瓶中,4?保存。
?LB培养基:
胰化蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
NaCl 15g
pH 7.0
?琼脂糖(Agarose);
?1 liter(升)5×TBE备用溶液(stock solution):
54g tris base,27.5g 硼酸(boric acid),20ml 0.5 mol/L EDTA , pH
8.0;
?6×凝胶加样缓冲液:
0.25% 溴酚蓝(bromophenol blue),40% 蔗糖(sucrose in water);
另外还有的试剂是:胰RNA酶、DNA Marker、硼酸、Gelview试剂
(2)实验材料:含有pUC19质粒的大肠杆菌等。
3(实验原理:
1)质粒DNA的提取:
(1)关于质粒:
质粒是一类存在于几乎所有细菌中染色体之外(细胞质中)呈游离状态的双链、闭环的DNA分子。质粒通常携带有染色体上所不存在的能够表达产生抗生素、耐受重金属等重要性状的基因。细菌质粒的大小范围从1kb至200kb以上不等,且拥有自己的复制起始位点,可不依赖于染色体而进行独立自主复制。一些小的质粒利用宿主细胞的酶进行复制,而较大的质粒则自身携有复制与编码的有关酶。
(2)一般分离质粒DNA的方法都包括3个步骤:
?培养细菌,使质粒DNA大量扩增;
?收集和裂解细菌;
?分离和纯化质粒DNA。
分离制备质粒DNA的方法很多,其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、SDS法、羟基磷灰石层析法等。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。
(3)碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理:
碱裂解法提取质粒DNA是根据共价闭合环状质粒DNA和线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离质粒DNA。
在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入pH4.8乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时,共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确;而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开,因复性较缓慢且不准确而相互缠绕形成不溶性网状结构。而复性的质粒DNA恢复原来构型,保持可溶性状态。通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA,蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去,最后用酚氯仿可以抽提纯化上清液中的质粒DNA。
2)质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳:
(1)关于电泳技术:
电泳常用于分离和纯化那些分子大小、电荷性状或分个构象有所不同的生物大分子——尤其是蛋白质和核酸。正因为如此,电泳已成为生物化学和分子生物学中应用最为广泛的技术之一,其
中在分子生物学实验中最为常用的是琼脂糖凝胶电泳。
琼脂糖是一种海藻多糖,琼脂糖胶分离范围很大,但其分辨率却相对较低。通过改变琼脂糖凝胶的浓度,应用标准的电泳技术可以分离200到50,000 bp 大小的 DNA 片断。一般琼脂糖胶浓度在0.5,到4,之间,且琼脂糖凝胶浓度越大,凝胶就越硬。较高浓度的琼脂糖胶有利于较小的DNA片断分离,而较低浓度的琼脂糖胶则可以分离较大的DNA片断。
(2)琼脂糖凝胶电泳条带的观察:
通过观察示踪染料的迁移距离可以判断DNA的迁移距离。溴酚蓝染料在琼脂糖凝胶的迁移速率大小与300和4000bp大小的双链DNA片断相同。当迁移足够距离后,就可以通过Gelview染色来观察DNA片断。Gelview是一种荧光染料。它可以在做胶时混入其中在电泳
时进行染色,也可以待电泳完成后将凝胶浸泡在稀释的Gelview 溶液中进行染色 。但必须将凝胶置于紫外透射仪中才可以对凝胶中的DNA或RNA进行观察。
(3)质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳分离:
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应,DNA分子在高于等电点的pH溶液环境中带负电荷,在电场中向正极移动,由于磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以相同的速度向正极移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即
DNA分子本身的构型和大小。具有不同分子质量或者不同构型的DNA分子泳动速率不一样,可以进行分离。
未切割的质粒DNA在其泳道上也许会出现几个条带,之所以这样是由于质粒DNA在琼脂糖凝胶中的迁移距离是由其分子构象及其碱基对大小所决定的。质粒DNA以下列三种主要构象中的任何一种形式存在:
? 超螺旋DNA:
尽管质粒通常以开环的形式进行描述,然而在细菌细胞内DNA链即是盘绕在组蛋白周围形成一种致密的结构。这就是所谓超螺旋结构,由于其结构致密,它在凝胶中的泳动速度最快。 ? 线性DNA:
当DNA损伤在DNA双链相对应的两条链上同时产生切口时,就会出现线性质粒DNA,这种DNA的泳动速率介于超螺旋与切口质粒DNA之间。
?开环DNA:
在质粒DNA复制过程中,拓扑异构酶I会在DNA双螺旋中的一条链中引入一个切口,解开质粒的超螺旋。在质粒分离过程中由于物理剪切和酶的切割作用同样也会在超螺旋质粒中引入切口从而产生松散的开环结构。这种形式的质粒迁移速率最慢,其“松散”的分子形式阻碍了它在琼脂糖凝胶中的运动。
4(实验方法步骤及注意事项
1)实验方法步骤
第一部分:质粒DNA的提取及酶切
(1)取1.4 ml含pUC19这里的大肠杆菌培养物于1.5 ml微量离心管中,4 000 r/min 离心2分钟,吸去上清液,并使细胞沉淀尽可能干燥;
(2)加100 ml 溶液?悬浮细菌沉淀,充分混和均匀,室温放置10 min;
(3)加200 ml溶液 ?(新鲜配制),盖紧管口,轻缓上下4-6次颠倒离心管以混合内容物。将离心管静置冰上5 min(使溶液变透明,粘稠);
(4)加200 ml溶液 ?(事先冰上预冷),盖紧离心管口后上下轻缓颠倒4-6次,置冰上15 min (溶液出现白色沉淀);
(5)12 000 rpm离心15 min,转移上清液至另一离心管(弃沉淀);
(6)向上清液中加入等体积的酚:氯仿(1:1),反复混匀,12 000 rpm离心5min,取上清液移至另一离心管中;
(7)加2倍体积无水乙醇,振荡混匀,静置10 min,12000 rpm离心5,10 min。弃上清液,将离心管倒置于吸水纸,将附于管壁的残余液滴除净。
(8)加200 ml 70,乙醇洗涤沉淀物,12000 rpm离心2 min,弃上清液,将沉淀在室温下晾干(或在50?,60?的烘箱中也可)。
(9)沉淀加20μl TE, 反复吹打使质粒DNA充分溶解,,20?保存。
第二部分:质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳
?. 凝胶的制备(Preparation of the gel)
(1) 制备1,琼脂糖凝胶:
称取0.5g琼脂糖,放人锥形瓶中,加入50mL的 0.5×TBE 缓冲液,放入微波炉加热至完全溶化,则为0.5,琼脂糖凝胶液(由于蒸发作用,溶解前在容量瓶上作一个记号,溶解后用三蒸水补足);
(2)制胶器的安装:
?取多功能制胶器,洗净,晾干;
?将多功能制胶器放置于一水平位置,选择12×6cm制胶架,然后选择1.5mm 18teeth的梳子(最大加样量25μl);
?将所选择规格的梳子插入制胶架的定位槽中;
(3)将熔化的琼脂糖凝胶液转入Gelview专用的三角瓶中,然后加入Gelview 5μl;
(4)将冷到60?左右的琼脂糖凝胶液,缓缓倒入所选择的制胶槽内,直至有机玻璃板上形成一层均匀的胶面(注意不要形成气泡);
(5)待胶凝固后(30-60min),轻轻拔掉梳子,将凝胶盘从制胶槽中取出,放入电泳槽内;
(6)加入电泳缓冲液(0.5×)至电泳槽中;
?. 加样(Loading DNA samples):
用移液枪缓慢将DNA样品及其经过酶切的质粒DNA样品垂直加入加样孔直至开口下方(记录点样顺序,以便作为对照和分析),
各加样量如下:
DNA samples :15μl酶切的DNA样品:3μl
Loading buffer: 2μl DNA markers :6μl
(DNA samples与Loading buffer总共加入20μl)
?. 电泳(Gel):
(1)接通电泳槽与电泳仪的电源(注意正负极,DNA片段从负极向正极移动)。保持电压 120V;
(2)当溴酚蓝染料移动到凝胶总长度一半处时,停止电泳;
?. Gel Interpretation (凝胶图像解释):
将电泳后的凝胶放在紫外灯的照射下进行DNA电泳条带的观察,并用凝胶电泳成像系统进行拍照、分析。
2)注意事项
(1) 加溶液I后,必须要将菌体悬浮彻底,不得有块状或大颗粒状呈现,是质粒DNA提取的首要关键;
(2)
(3) TAE和TBE均为常用的缓冲液。TBE比TAE有相对高的缓冲能力。 加样染料溴酚蓝可与长度约为0.5 kb的DNA一起迁移,可用于指示迁移率最高的片段。
(4) DNA的迁移速率取决于以下因素:
?DNA的分子大小—分子量越小,迁移越快。
?琼脂糖浓度—浓度越低,迁移越快。
?DNA的构象—环状的或带切口环状的DNA通常比线状的DNA
迁移要快。
?两个电极之间单位厘米的电压——电压越高,迁移越快。
(5) 如果DNA条带不够窄且不够均匀,可能是内以下原因所引起:
?DNA过载?电压过高?加样孔破损 ?凝胶中有气泡
(6) 在紫外灯下观察凝胶电泳所得结果应该戴上防护眼镜,因为紫外线对眼睛有伤害作用;
二(实验内容
1( 实验现象与结果:
将电泳后的凝胶放在紫外灯的照射下观察到的和用凝胶电泳成像系统进行拍照得到的DNA电泳条带图如下所示意:
图注:x’:代表经过酶切的质粒DNA样品的电泳条带;
x :代表未经过酶切的质粒DNA样品的电泳条带(x相同的互为对照组);
marker:DNA相对分子质量标准物。
pUC19质粒DNA标准参照条带图像:
2( 对实验现象、实验结果的分析及其结论:
对实验现象的分析及其结论:从上述所示的DNA电泳条带图可以看出:
不管在DNA Sample中还是在经过酶切处理后的DNA样品中均具有电泳迁移速率处于中间的线性质粒DNA。而在此次试验中出
现线性质粒DNA是因为pUc质粒DNA在提取的过程中DNA双链在相对应的两条链上同时产生切口。
这说明质粒制备过程个出现线性DNA说明存在核酸酶污染或实验操作有问题。可能在其中混有少量的蛋白质(图中,位置在marker组最后一电泳条带后方的很可能就是蛋白质组分),或者在实验的提取过程中加入溶液?所经历的时间过长,在碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂,从而使提取的质粒DNA样品混入了基因组 DNA。
但是其中各组也存在超螺旋DNA(与marker组对照,电泳速率最快,跑在最前面的)。标号为1、2和3组的电泳条带存在开环质粒DNA(与marker组的最后一条带相比较,同在一条水平线上且较亮的一条条纹即为开环质粒DNA),而且只出现在未经过酶切的质粒DNA Sample中, 这说明在此次实验过程中酶切是彻底的。
从总体上观察,所有电泳条带的亮度并不高,可能是提取的质粒DNA量较少(浓度过低)或电泳前加样量过少所致。
5(作业
1.简要叙述溶液?、溶液?和溶液?的作用,以及实验中分别加入上述溶液后,反应体系出现的现象及其成因?
?溶液?的作用:悬浮大肠杆菌菌体,而且加溶液I后,必须要将菌体悬浮彻底,不得有块状或大颗粒状呈现,是质粒DNA提取的首要关键。且其中含有的溶霉菌可以水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌作用。另外葡
萄糖的作用是使悬浮后的大肠杆菌不会很快沉积到管子的底部,增加溶液的粘度,维持渗透压及防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+ 和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,在溶液 I中加入EDTA,是要把大肠杆菌细胞中的二价金属离子都螯合掉,从而起到抑制 DNase对DNA的降解和抑制微生物生长的作用。另外也可保证溶菌酶活性。
溶液?的作用:
提供碱性条件,在NaOH与SDS的共同作用下使大肠杆菌瞬间裂解,并变性核DNA。当细胞悬浮于NaOH和十二烷基酸钠(SDS)溶液中使,在高pH(碱性环境)的作用下细胞发生裂解,此外蛋白质和染色体DNA发生变性与细胞碎片一起沉淀下来。这是由于细胞膜发生了从bilayer(双层膜)结构向micelle(微囊)结构的相变化。新配制的溶液?避免作为最佳溶解细胞的试剂—NaOH接触空气中的CO2过久而减弱了碱性。用不新鲜的0.4 M NaOH,即便有SDS也无法有效溶解大肠杆菌。因此必须使用新鲜的0.4 M NaOH试剂进行配制。
溶液?的作用:
该溶液所含有的高浓度钾离子与溶液体系中的十二烷基硫酸钠(即SDS与NaOH所形成的可溶性物质)发生反应形成十二烷基硫酸钾(potassium dodecylsulfate,PDS),从而将与之结
篇二:质粒DNA的提取、定量、酶切与PCR鉴定实验报告
质粒DNA的提取、定量、酶切与PCR鉴定
一、实验目的
1.学习并掌握用碱裂解法提取质粒DNA的方法;
2.学习并掌握了解质粒酶切鉴定的方法;
3.学习并掌握紫外吸收检测DNA浓度和纯度的原理和方法;
4.学习并掌握PCR基因扩增的实验原理和操作方法;
5.学习并掌握水平式琼脂糖凝胶电泳的原理和使用方法。
二、实验原理
1.PCR(多聚酶链式反应)
在DNA聚合酶催化下,可以DNA为模板,以特定引物为延伸起点,以dNTP为原料,通过变性、退火、延伸等步骤, 在体外(缓冲液中)复制DNA,使目的DNA按2n方
式呈指数形式扩增。
PCR一次循环的具体反应步骤为:
A.变性:加热反应系统至95?,使模板DNA在高温下完全变性,双链解链 。
B.退火:逐渐降低溶液温度,使合成引物在低温(35,70?,一般低于模板Tm值的5?
左右),与模板DNA互补退火形成部分双链。
C.延伸:溶液反应温度升至中温72?,在 Taq酶作用下,以dNTP为原料,引物为复
制起点,模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。
2.质粒DNA的提取与制备
(1).碱裂解法:
染色体DNA与质粒DNA的变性与复性存在差异:
A.高碱性条件下,染色体DNA和质粒DNA均变性;
B.当以高盐缓冲液调节其pH值至中性时,变性的质粒DNA复性并保存在溶液中,染
色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,可通过离心形成沉沉淀去除。
(2).离心层析柱:
A.硅基质膜在高盐、低pH值状态下可选择性地结合溶液中的质粒DNA,而不吸附溶液
中的蛋白质和多糖等物质;
B.通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除;
C.低盐,高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
3.质粒DNA的定量分析(紫外分光光度法):
A.物质在光的照射下会产生对光的吸收效应,且其对光的吸收是具有选择性;
B.各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱:
DNA分对波长260nm的紫外光有特异的吸收峰
蛋白质对波长280nm的紫外光有特异的吸收峰
碳水化合物对230nm的紫外光有特异的吸收峰
C.A260/A280及A260/A230的比值可以反应DNA的纯度;
A260/A280=1.8 DNA纯净
A260/A2801.8 表示样品中含蛋白质(芳香族)或酚类物质
A260/A2801.8 含RNA杂质,用RNA酶去除。
4.质粒DNA的酶切鉴定:
限制性内切酶是DNA重组操作过程中所使用的基本工具。限制性内切酶能特异性地与
一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列结合,或是与其附近的特异位点结合,并
在结合位点切割双链DNA。
5.琼脂糖凝胶电泳:
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子,可以形成具有刚性的滤孔,凝胶孔径的大小决定于
琼脂糖的浓度。
DNA分子在碱性环境中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时,有电荷效应与分子筛效应:不同的DNA,分子量大小
及构型不同,电泳时的泳动率就不同,从而分出不同的区带(迁移速度与分子量的对数
值成反比关系).
三、材料与方法:
(一)实验材料:
1.PCR
仪器:PCR仪、台式离心机、微量加样枪、灭菌的薄壁离心管
材料:菌液【大肠杆菌DH5a菌株(pMD19-T质粒,含目的片段-绿色荧光蛋白GFP)】、无菌去离子水、2×Premix Taq、引物
2. 质粒DNA的提取与制备
仪器:恒温培养箱、台式离心机、离心层析柱、Eppendorf管、微量加样枪、离心管
材料:溶液 P1(S1)、溶液P2 (S2)、溶液P3(S3)、去蛋白液PE(W1)漂洗液
WB(W2)、洗脱液EB(Eluent)、含pMD19-T质粒的大肠杆菌DH5α
3. 质粒DNA的定量(紫外分光光度法)
仪器:比色杯、紫外分光光度计、微量加样枪
材料:蒸馏水、质粒,,,
4.质粒DNA的酶切鉴定
仪器:1.5ml的EP管、微量加样枪
材料:无菌水、10×M酶切缓冲液Buf R、质粒DNA、Hind III (15U/ul)、EcoR I(12U/ul)
5.琼脂糖凝胶电泳
仪器:凝胶电泳系统、凝胶成像系统
材料:电泳指示剂、Gelview、TBE、琼脂糖、DNA Marker 5000、
电泳缓冲液
(二)实验方法
1.PCR
2. 质粒DNA的提取与制备
3. 质粒DNA的定量(紫外分光光度法)
篇三:质粒DNA的提取纯化实验报告
实验二 质粒DNA的提取和纯化
1、实验结果:
Marker呈扭曲的条带状,条带数量多。
而样品跑胶在开始阶段条带不清晰,在中后段有严重的涂抹和拖拉。
2、结果分析
?Marker条带扭曲:刘阳等人在《影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素》的实验中表明,使用EB染色时,应控制载样量?50ng。在本次实验中,Marker第一次加入后有部分溢出,然后又进行了加量补充,两次加入后总量可能过多,凝胶可能不够均匀,这可能是凝胶条带扭曲的原因。
?Marker条带数量多:可能是质粒DNA三种构型有不同程度的缺失。
?样品条带不清晰:样品中可能所含有的质粒DNA比较少,或者是样品提取的DNA出现部分降解,又或者是DNA短链分子少。
?样品涂抹拖拉:可能是样品里面含有杂志。
范文五:哺乳动物组织基因组dna提取实验报告
哺乳动物组织基因组DNA提取
实验序号 五 实验名称 (Genomic DNA Extraction from
Mammal Tissue)
实验时间 2012-5-10 实验室 生物综合实验室I
一、实验目的(Experimental Purpose)
After the experiment done, students should be able to know how to extract genomic DNA from mammal tissue, and to run an agarose gel.
1.掌握动物基因组DNA提取的操作方法。
2.掌握琼脂糖凝胶电泳的操作的方法
二、实验原理(Experimental Principle)
In the procedure described here, the detergents SDS ( sodium dodecyl sulfate) are added to denature proteins and solubilize lipids in membranes leading to cell lysis . The cell lysate is often treated with enzymes that
hydrolyze RNA and proteins.
本实验利用去垢剂SDS(十二烷基磺酸钠)是为了使蛋白变性并溶解
细胞膜中的脂质从而导致细胞裂解,而细胞裂解物又常用蛋白酶K和蛋
白进行水解处理。
This is generally followed by phenol of phenol: chloroform extraction to remove the remaining proteins, which will either enter the organic phase
or, if denatured, appear at the interphase . Chloroform treatment is used to remove the phenol, and alcohol precipitation concentrates the DNA while removing nucleotides, amino acids, and low - molecular- weight
oligonucleotides and peptides. 1
随后用酚:氯仿进行抽提,以去除残留的蛋白质,这时蛋白质将进
入有机相,或者假如己变性的话将呈现在有机相与水相之间。氯仿处理
是为了去除苯酚,而乙醇沉淀处理则可以浓缩DNA,同时去除核苷酸、
氨基酸以及低分子量的寡核苷酸和肽。
As a further precaution, ethylene diamine tetraace-tic acid (EDTA) is
include-ed in the buffers to chelate Mg2+. This will reduce deoxyribonuclease (DNase) activity because of the Mg2+ requirement of these enzymes.
为了进一步保护DNA样品的完整性,通常需要在缓冲液中添加乙
二胺四乙酸(EDTA)以整合Mg2+,这样将会减少脱氧核糖核酸酶(DNase)
的活性,因为该酶必须在有Mg2+存在时才会起作用。
The protocol described here result in DNA that is easily cut with restriction enzymes and, therefore, is useful for Southern Hybridization studies. If the DNA is to be used to construct a clone bank, higher molecular
weight DNA is desirable, so the vortex step should be eliminated.
本实验方法分离得到的染色体DNA样品易被限制酶切割,因此,较适
用于Southern杂交的研究。如果所制备的基因组DNA是用于构建克隆
文库,要求得到较大分子量的DNA,则必须省略其中的振荡步骤。
2
三、试剂与器材(Reagents and apparatus)
?. Instruments
High speed refrigerated centrifuge(高速冷冻离心机)、 Glass homogenizer (玻璃匀浆器) 、 Electrophoresis System (电泳系统) 、 Ultraviolet transilluminator (紫外透射仪) 、 Ultra cold storage freezer
(超低温冰箱) 、Autoclave (高压灭菌锅) 、 Pipettes (微量加样器) 、Electronic balance (电子天平) 、 Acidometer (酸度计)
?. Material
Liver of mice
?. Reagents
Tris、SDS、EDTA、 HCl、 NaOH 、 Sodium acetate、 Acetic acid、 Phenol、Chloroform、Ethanol、Isoamylol、
TE buffer 、
Protease K、RNase A、
Agarose 、DNA molecular weight markers 、Boric acid、Sugar、 Bromophenol blue、 Fluorescent dye (Gelview)
3
四、实验步骤(Experimental Procedures) (一)储备液的制备
1. 5mol/L Nacl
2. 1 mol/L Tris HCl pH8.0
3. 0.5 mol/L EDTA pH8.0
4( ddd H0 2
5. 3 mol/L NaAc pH5.2
6. 生理盐水(0.85% NaCl)
7. 10%SDS
8. 5TBE ,
9( 10 mg/ mL 蛋白酶K -20?保存
10. 10 mg/mL无DNA酶的RNA酶 -20?保存
11. 6 凝胶加样缓冲液 ,
(二)破碎、酶解细胞(过夜)
1.配制工作液(即冰浴处理生理盐水、组织匀浆液、酶解液)
2.称取0.2g肝脏,并用冰冷的生理盐水清洗3次。
3.剪碎后加入2 ml匀浆液用玻璃匀浆器匀浆。
4.将组织细胞液移至1.5 ml离心管内以5000 r/min离心30~60s。
5.弃上清液加400ul无菌水吹散后加入400ul酶解液,水浴处理
(55?)。
(三)抽取DNA、乙醇沉淀纯化DNA
4
(四)琼脂糖凝胶电泳的检测DNA
Agarose Gel Electrophoresis :
Preparation of the gel
?制备0.3,琼脂糖凝胶
Loading DNA samples
?DNA samples 16μl + Loading buffer4μl
Gel
?电压120v
Gel photography
Illuminate the gel with UV light and then take pictures. By comparing
product bands with bands from the known molecular-weight markers, you
should be able to identify any product fragments which are of the appropriate
molecular weight.
通过紫外透射仪检测凝胶,然后获取图片。并将产物条带与已知分子量的标淮条带进行比较,便可以对合适分子量大小的产物进行鉴定。 操作过程中注意:
?、 移液枪的正确使用,取量时才能取得准确;
?、 各个步骤中的振荡,需根据其原理不同程度进行振荡;
?、 在移出水相的过程中,需特别注意移液枪的正确使用,准确记
录移出水相的体积;
?、 离心时两个相对的离心管的体积应基本一致;
?、 在电泳等操作中应注意带手套,保证安全。
5
二(实验报告
1、实验现象与结果
(1)、冰冷的生理盐水清洗肝脏后肝脏会泛白,洗涤液不再呈现血红色; (2)、玻璃匀浆器匀浆后肝脏被磨碎,呈现血红色;
(3)、离心后离心管底部出现沉淀,上层为淡黄色液体; (4)、加入?和?提取液离心后都会分成有机相和水相,二者明显分层; (5)、放入超低温冰箱 1到2小时后取出来时看到液体凝结; (6)、加入75%冷乙醇离心后看到离心管底部有沉淀;
(7)、电泳后在紫外光下观察时看到明亮的条带,同时还有一些条带不太鲜亮,有拖尾现象。
2
2(对实验现象、实验结果的分析及其结论
(1)、玻璃匀浆器匀浆后,溶液呈现血红色,因为细胞破裂释放出了血红蛋白;
(2)、离心后的上清液含一些细胞碎片等废弃物;
(3)、加入提取液离心后,溶液分层,上层为水相,下层为有机相:水相含有我们所需要的DNA等物质,有机相为提取液酚类等物质; (4)、多次离心,移出水相,目的在于提取出DMA;
(5)、之后的分别加入NaAc、无水乙醇、冰乙醇目的在于沉淀DNA,并纯化,因为核酸与钠、钾、镁形成的盐在许多有机溶剂中不溶,也不会变性。因此,离心后,溶液中出现沉淀,弃上清液,取沉淀; (6)、条带亮说明DNA浓度很高;一个泳道出现几个不同的条带说明DNA在过程中被降解了,降解成不同片段大小的片段,而在电泳过程中跑的速度不一样,所以呈现不同条带。
3
3(实验总结
(1)、成功之处:
?、学会了一些溶液的计算及配置方法;
?、学会了动物基因组DNA提取的操作方法;
?、学会了琼脂糖凝胶电泳的操作方法;
?、掌握了分子实验的一些基本仪器的使用要领,如移液枪、离心机;
?、我们组做了四管点了六个孔,其中有一个孔的条带清晰明亮,另外几个条带可能由于操作过程不怎么严谨,导致条带有拖尾现象,也有可能是点样时候没有点好;
?、小组成员团结合作,不仅掌握好了知识,还增进了大家的友谊和合作意识;
?、上课认真听老师讲,做实验时候认真按照要求操作,培养了我们以严谨的科学态度对待生物学实验。
(2)、不足之处:
?、实验原理有点深奥,实验步骤繁杂,所以我们做实验基本按照课件来进行,对整个实验掌握的不够透彻;
?、好多实验溶液都是老师配置好,我们现用,只有一些需要即配即用的才我们自己配置;
?、有时候实验操作步骤会不到位,等犯错了才想起自己操作好像不当;
?、小组做实验过程中有些同学直接就没参与,而我们分工合作也会导致我们有些步骤没有自己亲自参与;
?、实验结果不是很理想,按照理论来说,我们的四个管都是一起同
时操作,那么六个的、条带应该相差不多,可是由于操作的一些失误导致不是很理想的实验结果;
操作的,但是得到的结果却不一致,说明在某些操作中有些动作不规范,或者试剂加入量不够或过多,有时会有其他东西污染,造成跑带时有拖尾现象。
(3)收获:
1、手脚勤快,热心帮助他人。不管是不是自己的份内之事,都应该用心去完成,也许自己累点,但你会收获很多,无论是知识与经验还是别人的称赞与认可。
2、多学多问,学会他人技能。知识和经验的收获可以说与勤学好问是成正比的,要记住知识总是垂青那些善于提问的人。
3、善于思考,真正消化知识。有知到识,永远不是那么简单的事,当你真正学会去思考时,他人的知识才能变成你自己的东西。 4、独立而不孤立。学会独立思考,独立实验,但要记住与他人的交流也是非常重要的,实验和实验事永远不是你自己的。
5、实事求是做实验。不骗自己更不要骗他人。
6、认真仔细地做好实验纪录。不要当你真正用到它时才知它的重要所在。
教师评语及评分:
签名:
年 月 日 文案 编辑词条
B 添加义项 ?
1
文案,原指放书的桌子,后来指在桌子上写字的人。现在指的是公司或企业中从事文字工作的职位,就是以文字来表现已经制定的创意策略。文案它不同于设计师用画面或其他手段的表现手法,它是一个与广告创意先后相继的表现的过程、发展的过程、深化的过程, 多存在于广告公司,企业宣传,新闻策划等。
基本信息
中文名称
文案
外文名称
Copy
目录
1发展历程
2主要工作
3分类构成
4基本要求
5工作范围
6文案写法
7实际应用
折叠编辑本段发展历程
汉字"文案"(wén àn)是指古代官衙中掌管档案、负责起草文书的幕友,亦指官署中的公文、书信等;在现代,文案的称呼主要用在商业领域,其意义与中国古代所说的文案是有区别的。
在中国古代,文案亦作" 文按 "。公文案卷。《北堂书钞》卷六八引《汉杂事》:"先是公府掾多不视事,但以文案为务。"《晋书?桓温传》:"机务不可停废,常行文按宜为限日。" 唐戴叔伦《答崔载华》诗:"文案日成堆,愁眉拽不开。"《资治通鉴?晋孝武帝太元十四年》:"诸曹皆得良吏以掌文按。"《花月痕》第五一回:" 荷生 觉得自己是替他掌文案。"
旧时衙门里草拟文牍、掌管档案的幕僚,其地位比一般属吏高。《老残游记》第四回:"像你老这样抚台央出文案老爷来请进去谈谈,这面子有多大!"夏衍《秋瑾传》序幕:"将这 阮财富 带回衙门去,要文案给他补一份状子。"
文案音译
文案英文:copywriter、copy、copywriting
文案拼音:wén àn
现代文案的概念:
文案来源于广告行业,是"广告文案"的简称,由copy writer翻译而来。多指以语辞进行广告信息内容表现的形式,有广义和狭义之分,广义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写和对广告形象的选择搭配;狭义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写。
在中国,由于各个行业发展都相对不够成熟,人员素质也参差不齐,这使得"文案"的概念常常被
2
错误引用和理解。最典型的就是把文案等同于"策划",其实这是两种差别很大,有着本质区别的工作。只是由于文案人员常常需要和策划人员、设计人员配合工作,且策划人员也需要撰写一些方案,这使得很多人误认为文案和策划就是一回事,甚至常常把策划与文案的工作会混淆在一起(这也和发源于中国的"策划学"发展不够成熟有关)。
广告文案
广告文案
很多企业中,都有了的专职的文案人员,只有当需要搞一些大型推广活动、做商业策划案、写可行性分析报告等需求量大的项目时,才需要对外寻求合作。以往一般企业都会找广告、文化传媒等公司合作。这些公司一般都有专业的文案、设计团队,经验也相对丰富,但因为业务量大,范围广泛,在针对性方面会较为薄 弱。随着社会经济不断发展,对专业文案的要求更加严格,逐渐衍生了一些专注于文字服务的文案策划公司。这类企业发展速度很快,大多数都是从工作室形式转型而来,也有从文化传播机构独立出来的。
随着中国广告业二十余年的迅猛发展,广告公司的经营范围,操作流程,工作方式都在变化,文案的角色由无闻转为配角,现正昂首阔步走向台面,成为主角,从前一则广告多是由设计出计划,再配图之后,文案轮为完稿,一则广告的计划多是由文案与美工共同完成,然后各自分工。说起文案的地位,日本是从1992年意识到文案的重要性,台湾是1998年。2002年,大陆的一些中大型广告公司的老总几乎都在垂叹,好的文案太少了。好的文案往往愿意扎堆,从全国形式来看,这股潜规则正逐渐由华南广告重镇广州向华东中心上海转移。
折叠编辑本段主要工作
撰写报纸广告、杂志广告、海报; 撰写企业样本、品牌样本、产品目录; 撰写日常宣传文案白领一族
文案白领一族
单页、各类宣传小册子; 撰写DM直邮广告,包括信封、邮件正文; 撰写电视广告脚本,包括分镜头、旁白、字幕; 撰写电视专题片脚本; 撰写电视广告的拍摄清单; 撰写广播广告; 将海外版广告文案作 汉化(翻译); 撰写广告歌词,或汉化(翻译)外文歌词; 撰写各种形式的网络广告; 为网站栏目命名; 撰写网站内部文案; 撰写手机短信广告; 撰写各类广告作品的创意阐述; 撰写广告口号; 撰写产品包装文案,包括:品牌名、使用说明、产品成分等; 为产品或品牌命名,并作创意阐述; 为路演或活动命名,并作创意阐述; 撰写活动请柬及活动现场宣传品上的文字; 为各种礼品命名,并作创意阐述; 为专卖店命名,并作创意阐述; 撰写商店的橱窗或店内POP物料文案; 撰写软文、新闻式、故事式、评论式; 撰写策划书,或协助策划人员优化、润色方案文字; 协助客户企业内刊的编辑,提供主题方向,审核文字。 不同的环境对文案撰稿人有着不同的锤炼和要求。
折叠编辑本段分类构成
从现有的文案分类有很多种,按照4A标准,一般有四类:助理文案(ACW), 文案(CW策划文案 策划文案
),高级文案(ACW),资深文案(SCW),其中稍微要区别的是高级文案与资深文案,前者要求的是文案的撰写能力,而后者不仅仅是文案的撰写能力还包括做文案的年资。有些4A公司设有文案主任(CE)一职,大体上与文案职责类似,有时候负责专项。另外有些个别公司还配有首席文案的职位(CCW),文案功力凤毛麟角,虽不具领导才能,但有的首席文案拿的工资却比创意总监还要高。大部分国内广告公司文案的种类繁杂,有房地产文案、创意文案、企划文案、品牌文案等。
3
文案是由标题、副标题、广告正文、广告口号组成的。它是广告内容的文字化表现。在广告设计中,文案与图案图形同等重要,图形具有前期的冲击力,广告文案具有较深的影响力。
广告标题:它是广告文案的主题,往往也是广告内容的诉求重点。它的作用在于吸引人们对广告的注目,留下印象,引起人们对广告的兴趣。只有当受众对标语产生兴趣时, 才会阅读正文。广告标语的设计形式有:情报式,问答式、祈使式、新闻式、口号式、暗示式、提醒式等。广告标语撰写时要语言简明扼要,易懂易记,传递清楚,新颖个性,句 子中的文字数量一般掌握在12个字以内为宜。
广告副标题:它是广告方案的补充部分,有一个点睛的作用。主要表现在对标题的补充及让人感觉,前面的不懂,在这里全部让人了解。
广告正文:广告正文是对产品及服务,以客观的事实、具体的说明,来增加消费者的了解与认识,以理服人。广告正文撰写使内容要实事求是,通俗易懂。不论采用何种 题材式样,都要抓住主要的信息来叙述,言简易明。
广告口号:口号是战略性的语言,目的是经过反复和相同的表现,以便名域其他企业精神的不同,使消费者掌握商品或服务的个性。这以成为推广商品不可或缺的要素。广告 口号常有的形式:联想式、比喻式、许诺式、推理式、赞扬式、命令式。广告口号的撰写要注意简洁明了、语言明确、独创有趣、便于记忆、易读上口。
所谓广告文案是以语辞进行广告信息内容表现的形式。广告文案有广义和狭义之分,广义的广告文案就是指通过广告语言、形象和其他因素,对既定的广告主题、广告创意所 进行的具体表现。狭义的广告文案则指表现广告信息的言语与文字构成。广义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写和对广告形象的选择搭配;狭义的广告文案包括标题、正文 、口号的撰写。
折叠编辑本段基本要求
1)准确规范、点明主题
准确规范是文案中最基本的要求。要实现对广告主题和广告创意的有效表现和对广告信息的广告文案
广告文案
有效传播,首先要求广告文案中语言表达规范完整,避免语法错误或表达残缺。其次,广告文案中所使用的语言要准确无误,避免产生歧义或误解。第三,广告文案中的语言要符合语 言表达习惯,不可生搬硬套,自己创造众所不知的词汇。第四,广告文案中的语言要尽量通俗化、大众化,避免使用冷僻以及过于专业化的词语。
2)简明精炼、言简意赅
文案在文字语言的使用上,要简明扼要、精练概括。首先,要以尽可能少的语言和文字表达出广告产品的精髓,实现有效的广告信息传播。其次,简明精练的广告文案有助于吸引广告受众的注意力和迅速记忆下广告内容。第三, 要尽量使用简短的句子,以防止受众因繁长语句所带来的反感。
4
3)生动形象、表明创意
文案中的生动形象能够吸引受众的注意,激发他们的兴趣。国外研究资料表明:文字、图像能引起人们注意的百分比分别文字是35%, 图像是65%,文案创作时采用生动活泼、新颖独特的语言的同时,附助以一定的图像来配合。
4)优美流畅、上口易记
文案是广告的整体构思,对于由其中诉之于听觉的广告语言,要注意优美、流畅和动听,使其易识别、易记忆和易传播,从而突出广告定位,很好地表现广告主题和广告创意,产生良好的广告效果。同时,也要避免过分追求语言和音韵美,而忽视广告主题,生搬硬套,牵强附会,因文害意。
折叠编辑本段工作范围
策划文案和创意文案
一)策划文案:工作主要是将策划工作人员的策划思路形成文字。毋庸置疑,公司很多策划人员均有很强的策划水平和丰富的策划经验,但有时候手上同时进行几个案子,同时时间又比较紧的情况下,文案可以在充分理解策划意图的情况下帮助策划人员完成策划方案的写作。这其中有几个内容:
1.必须充分了解本案的运作背景,包括宏观市场信息和微观市场动态。
2.掌握整个策划的战略指导思想。
3.以通俗易懂、言简意赅的论述方式将策划思想反映在字里行间。
4.到比较专业的问题或障碍的时候,应及时与策划人员沟通,保证策划方向的一致性。
5.贯彻战略方针的同时,也可就战略思想的表达方式和文字提述上提出一些合理化建议,从而更好地展现策划的战略核心点。
二)创意文案:主要是将广告作品的表现及形式用完整的文字表达出来,其中,除了产生画面的构想之外,还包括广告语言的表现内容(如平面的标题、引文、正文、随文,广告语等,影视的音效、旁白、字幕、广告语等)。其中至关重要的就是新颖的创意和传神的文字表现。而这些智慧的闪光绝对不是拍一下脑门子就能出来的。这其中包括了以下内容:
1.通过各个层面,特别是swot方面深入理解,从而找出项目的核心优势。
2.把握目标消费群的心态。
3.掌握宏观政策及大市场对项目本身的影响。
4.场策划人员和设计人员保持密切联系,随时沟通。
5
5.市场上类似房产项目的文案及创意,力求全面加以突破。
6.获悉开发商对文案创作的要求,调整文字内容和形式。
折叠编辑本段文案写法
商家要吸引、留住消费者必须注重细节的提高和改善,而其中,文案就是不可忽视的一大细节。下面是一些能吸引买家的写文案方法:
折叠九宫格思考法
拿一张白纸,用笔先分割成9宫格。中间那格填上你的商品名,接下来开始在其它8格填上可以帮助此商品销售的众多可能优点。这是强迫创意产生的简单练习法,我也常用这种方式构思出企划案或演讲PPT的结构。
折叠要点衍伸法
把该商品型录上的商品特点照抄下来,然后每个要点后面加以延伸。如果你真的很懒,照抄型录商品卖点也可,但文字会比较没有人味,说服力道会稍差。
折叠三段式写作法
这是仿新闻学中"倒三角写作法"。第一段,请精要地浓缩全文的销售话术,因为多数人都没耐心看全文。第二段,请依照型录要点衍伸法,逐一说明该商品的众多特色。到底是点列还是一段长文章较好,要看你的文字功力。文字功力欠佳就点列式写出卖点即可。最后一段是「钩子」,主要任务是要叫人【Buy Now】,所以一般是强化商品USP(Unique Selling Point,独特销售卖点)、价格优势或赠品。
折叠编辑本段实际应用
市场研究
没有正确的市场导向,任何文案或创意都是天马行空的奇思怪想。的确,再优美的文字用在不适宜的场合中都可能导致整个策划执行的失败。一篇优秀的文案,一定是在对市场有深入的了解后方能下笔的。 例如不同地区的经济发展水平、文化构成、风土人情、产业结构比重等等皆有很大差异,同一地区不同年龄、阶层人士的世界观、思维观、道德观和价值观也参差不齐,加上特定环境、特定历史背景或政策规文赋予某些项目的特殊意义,都会对文案产生深远的影响。 所以无市场,文案便如枯井之蛙,其作品不仅缺乏远见,生命力也极为低下。
沟通与互助
在创作一幅作品时,常常发生这种情况:设计人员与文案人员一开始没有很好的沟通;结果是设计人员设计出来的作品文案看来好像是曲解了原意,而将文案配上去时候,设计人员又认为文案的风格与画面差入甚大。矛盾自然就出现了。 其实文案和设计,乃至市场、企划、媒体等各部门工作人员都应随时保持高效的沟通。通篇来看,文案的工作是将市场的调查分析结果作为其创作的翔实论据、企划的核心思想作为其创作的指引方向,媒体投放的渠道作为其创作的特定模式,
6
设计排版作为其创作的具体表现。因此,每一个环节都是动态维系着的。在做一个文稿之前,与各个部门广泛沟通,并做到互爱互助,才能在一个凝聚力超强的团队中展现出自己独特的个性和才华文案 编辑词条
B 添加义项 ?
文案,原指放书的桌子,后来指在桌子上写字的人。现在指的是公司或企业中从事文字工作的职位,就是以文字来表现已经制定的创意策略。文案它不同于设计师用画面或其他手段的表现手法,它是一个与广告创意先后相继的表现的过程、发展的过程、深化的过程, 多存在于广告公司,企业宣传,新闻策划等。
基本信息
中文名称
文案
外文名称
Copy
目录
1发展历程
2主要工作
3分类构成
4基本要求
5工作范围
6文案写法
7实际应用
折叠编辑本段发展历程
汉字"文案"(wén àn)是指古代官衙中掌管档案、负责起草文书的幕友,亦指官署中的公文、书信等;在现代,文案的称呼主要用在商业领域,其意义与中国古代所说的文案是有区别的。
在中国古代,文案亦作" 文按 "。公文案卷。《北堂书钞》卷六八引《汉杂事》:"先是公府掾多不视事,但以文案为务。"《晋书?桓温传》:"机务不可停废,常行文按宜为限日。" 唐戴叔伦《答崔载华》诗:"文案日成堆,愁眉拽不开。"《资治通鉴?晋孝武帝太元十四年》:"诸曹皆得良吏以掌文按。"《花月痕》第五一回:" 荷生 觉得自己是替他掌文案。"
旧时衙门里草拟文牍、掌管档案的幕僚,其地位比一般属吏高。《老残游记》第四回:"像你老这样抚台央出文案老爷来请进去谈谈,这面子有多大!"夏衍《秋瑾传》序幕:"将这 阮财富 带回衙门去,要文案给他补一份状子。"
文案音译
文案英文:copywriter、copy、copywriting
文案拼音:wén àn
现代文案的概念:
文案来源于广告行业,是"广告文案"的简称,由copy writer翻译而来。多指以语辞进行广告信息
7
内容表现的形式,有广义和狭义之分,广义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写和对广告形象的选择搭配;狭义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写。
在中国,由于各个行业发展都相对不够成熟,人员素质也参差不齐,这使得"文案"的概念常常被错误引用和理解。最典型的就是把文案等同于"策划",其实这是两种差别很大,有着本质区别的工作。只是由于文案人员常常需要和策划人员、设计人员配合工作,且策划人员也需要撰写一些方案,这使得很多人误认为文案和策划就是一回事,甚至常常把策划与文案的工作会混淆在一起(这也和发源于中国的"策划学"发展不够成熟有关)。
广告文案
广告文案
很多企业中,都有了的专职的文案人员,只有当需要搞一些大型推广活动、做商业策划案、写可行性分析报告等需求量大的项目时,才需要对外寻求合作。以往一般企业都会找广告、文化传媒等公司合作。这些公司一般都有专业的文案、设计团队,经验也相对丰富,但因为业务量大,范围广泛,在针对性方面会较为薄 弱。随着社会经济不断发展,对专业文案的要求更加严格,逐渐衍生了一些专注于文字服务的文案策划公司。这类企业发展速度很快,大多数都是从工作室形式转型而来,也有从文化传播机构独立出来的。
随着中国广告业二十余年的迅猛发展,广告公司的经营范围,操作流程,工作方式都在变化,文案的角色由无闻转为配角,现正昂首阔步走向台面,成为主角,从前一则广告多是由设计出计划,再配图之后,文案轮为完稿,一则广告的计划多是由文案与美工共同完成,然后各自分工。说起文案的地位,日本是从1992年意识到文案的重要性,台湾是1998年。2002年,大陆的一些中大型广告公司的老总几乎都在垂叹,好的文案太少了。好的文案往往愿意扎堆,从全国形式来看,这股潜规则正逐渐由华南广告重镇广州向华东中心上海转移。
折叠编辑本段主要工作
撰写报纸广告、杂志广告、海报; 撰写企业样本、品牌样本、产品目录; 撰写日常宣传文案白领一族
文案白领一族
单页、各类宣传小册子; 撰写DM直邮广告,包括信封、邮件正文; 撰写电视广告脚本,包括分镜头、旁白、字幕; 撰写电视专题片脚本; 撰写电视广告的拍摄清单; 撰写广播广告; 将海外版广告文案作 汉化(翻译); 撰写广告歌词,或汉化(翻译)外文歌词; 撰写各种形式的网络广告; 为网站栏目命名; 撰写网站内部文案; 撰写手机短信广告; 撰写各类广告作品的创意阐述; 撰写广告口号; 撰写产品包装文案,包括:品牌名、使用说明、产品成分等; 为产品或品牌命名,并作创意阐述; 为路演或活动命名,并作创意阐述; 撰写活动请柬及活动现场宣传品上的文字; 为各种礼品命名,并作创意阐述; 为专卖店命名,并作创意阐述; 撰写商店的橱窗或店内POP物料文案; 撰写软文、新闻式、故事式、评论式; 撰写策划书,或协助策划人员优化、润色方案文字; 协助客户企业内刊的编辑,提供主题方向,审核文字。 不同的环境对文案撰稿人有着不同的锤炼和要求。
折叠编辑本段分类构成
从现有的文案分类有很多种,按照4A标准,一般有四类:助理文案(ACW), 文案(CW策划文案 策划文案
),高级文案(ACW),资深文案(SCW),其中稍微要区别的是高级文案与资深文案,前者要求的是
8
文案的撰写能力,而后者不仅仅是文案的撰写能力还包括做文案的年资。有些4A公司设有文案主任(CE)一职,大体上与文案职责类似,有时候负责专项。另外有些个别公司还配有首席文案的职位(CCW),文案功力凤毛麟角,虽不具领导才能,但有的首席文案拿的工资却比创意总监还要高。大部分国内广告公司文案的种类繁杂,有房地产文案、创意文案、企划文案、品牌文案等。
文案是由标题、副标题、广告正文、广告口号组成的。它是广告内容的文字化表现。在广告设计中,文案与图案图形同等重要,图形具有前期的冲击力,广告文案具有较深的影响力。
广告标题:它是广告文案的主题,往往也是广告内容的诉求重点。它的作用在于吸引人们对广告的注目,留下印象,引起人们对广告的兴趣。只有当受众对标语产生兴趣时, 才会阅读正文。广告标语的设计形式有:情报式,问答式、祈使式、新闻式、口号式、暗示式、提醒式等。广告标语撰写时要语言简明扼要,易懂易记,传递清楚,新颖个性,句 子中的文字数量一般掌握在12个字以内为宜。
广告副标题:它是广告方案的补充部分,有一个点睛的作用。主要表现在对标题的补充及让人感觉,前面的不懂,在这里全部让人了解。
广告正文:广告正文是对产品及服务,以客观的事实、具体的说明,来增加消费者的了解与认识,以理服人。广告正文撰写使内容要实事求是,通俗易懂。不论采用何种 题材式样,都要抓住主要的信息来叙述,言简易明。
广告口号:口号是战略性的语言,目的是经过反复和相同的表现,以便名域其他企业精神的不同,使消费者掌握商品或服务的个性。这以成为推广商品不可或缺的要素。广告 口号常有的形式:联想式、比喻式、许诺式、推理式、赞扬式、命令式。广告口号的撰写要注意简洁明了、语言明确、独创有趣、便于记忆、易读上口。
所谓广告文案是以语辞进行广告信息内容表现的形式。广告文案有广义和狭义之分,广义的广告文案就是指通过广告语言、形象和其他因素,对既定的广告主题、广告创意所 进行的具体表现。狭义的广告文案则指表现广告信息的言语与文字构成。广义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写和对广告形象的选择搭配;狭义的广告文案包括标题、正文 、口号的撰写。
折叠编辑本段基本要求
1)准确规范、点明主题
准确规范是文案中最基本的要求。要实现对广告主题和广告创意的有效表现和对广告信息的广告文案
广告文案
有效传播,首先要求广告文案中语言表达规范完整,避免语法错误或表达残缺。其次,广告文案中所使用的语言要准确无误,避免产生歧义或误解。第三,广告文案中的语言要符合语 言表达习惯,不可生搬硬套,自己创造众所不知的词汇。第四,广告文案中的语言要尽量通俗化、大众化,避免使用冷僻以及过于专业化的词语。
2)简明精炼、言简意赅
文案在文字语言的使用上,要简明扼要、精练概括。首先,要以尽可能少的语言和文字表达出广
9
告产品的精髓,实现有效的广告信息传播。其次,简明精练的广告文案有助于吸引广告受众的注意力和迅速记忆下广告内容。第三, 要尽量使用简短的句子,以防止受众因繁长语句所带来的反感。
3)生动形象、表明创意
文案中的生动形象能够吸引受众的注意,激发他们的兴趣。国外研究资料表明:文字、图像能引起人们注意的百分比分别文字是35%, 图像是65%,文案创作时采用生动活泼、新颖独特的语言的同时,附助以一定的图像来配合。
4)优美流畅、上口易记
文案是广告的整体构思,对于由其中诉之于听觉的广告语言,要注意优美、流畅和动听,使其易识别、易记忆和易传播,从而突出广告定位,很好地表现广告主题和广告创意,产生良好的广告效果。同时,也要避免过分追求语言和音韵美,而忽视广告主题,生搬硬套,牵强附会,因文害意。
折叠编辑本段工作范围
策划文案和创意文案
一)策划文案:工作主要是将策划工作人员的策划思路形成文字。毋庸置疑,公司很多策划人员均有很强的策划水平和丰富的策划经验,但有时候手上同时进行几个案子,同时时间又比较紧的情况下,文案可以在充分理解策划意图的情况下帮助策划人员完成策划方案的写作。这其中有几个内容:
1.必须充分了解本案的运作背景,包括宏观市场信息和微观市场动态。
2.掌握整个策划的战略指导思想。
3.以通俗易懂、言简意赅的论述方式将策划思想反映在字里行间。
4.到比较专业的问题或障碍的时候,应及时与策划人员沟通,保证策划方向的一致性。
5.贯彻战略方针的同时,也可就战略思想的表达方式和文字提述上提出一些合理化建议,从而更好地展现策划的战略核心点。
二)创意文案:主要是将广告作品的表现及形式用完整的文字表达出来,其中,除了产生画面的构想之外,还包括广告语言的表现内容(如平面的标题、引文、正文、随文,广告语等,影视的音效、旁白、字幕、广告语等)。其中至关重要的就是新颖的创意和传神的文字表现。而这些智慧的闪光绝对不是拍一下脑门子就能出来的。这其中包括了以下内容:
1.通过各个层面,特别是swot方面深入理解,从而找出项目的核心优势。
2.把握目标消费群的心态。
10
3.掌握宏观政策及大市场对项目本身的影响。
4.场策划人员和设计人员保持密切联系,随时沟通。
5.市场上类似房产项目的文案及创意,力求全面加以突破。
6.获悉开发商对文案创作的要求,调整文字内容和形式。
折叠编辑本段文案写法
商家要吸引、留住消费者必须注重细节的提高和改善,而其中,文案就是不可忽视的一大细节。下面是一些能吸引买家的写文案方法:
折叠九宫格思考法
拿一张白纸,用笔先分割成9宫格。中间那格填上你的商品名,接下来开始在其它8格填上可以帮助此商品销售的众多可能优点。这是强迫创意产生的简单练习法,我也常用这种方式构思出企划案或演讲PPT的结构。
折叠要点衍伸法
把该商品型录上的商品特点照抄下来,然后每个要点后面加以延伸。如果你真的很懒,照抄型录商品卖点也可,但文字会比较没有人味,说服力道会稍差。
折叠三段式写作法
这是仿新闻学中"倒三角写作法"。第一段,请精要地浓缩全文的销售话术,因为多数人都没耐心看全文。第二段,请依照型录要点衍伸法,逐一说明该商品的众多特色。到底是点列还是一段长文章较好,要看你的文字功力。文字功力欠佳就点列式写出卖点即可。最后一段是「钩子」,主要任务是要叫人【Buy Now】,所以一般是强化商品USP(Unique Selling Point,独特销售卖点)、价格优势或赠品。
折叠编辑本段实际应用
市场研究
没有正确的市场导向,任何文案或创意都是天马行空的奇思怪想。的确,再优美的文字用在不适宜的场合中都可能导致整个策划执行的失败。一篇优秀的文案,一定是在对市场有深入的了解后方能下笔的。 例如不同地区的经济发展水平、文化构成、风土人情、产业结构比重等等皆有很大差异,同一地区不同年龄、阶层人士的世界观、思维观、道德观和价值观也参差不齐,加上特定环境、特定历史背景或政策规文赋予某些项目的特殊意义,都会对文案产生深远的影响。 所以无市场,文案便如枯井之蛙,其作品不仅缺乏远见,生命力也极为低下。
沟通与互助
在创作一幅作品时,常常发生这种情况:设计人员与文案人员一开始没有很好的沟通;结果是设计
11
人员设计出来的作品文案看来好像是曲解了原意,而将文案配上去时候,设计人员又认为文案的风格与画面差入甚大。矛盾自然就出现了。 其实文案和设计,乃至市场、企划、媒体等各部门工作人员都应随时保持高效的沟通。通篇来看,文案的工作是将市场的调查分析结果作为其创作的翔实论据、企划的核心思想作为其创作的指引方向,媒体投放的渠道作为其创作的特定模式,设计排版作为其创作的具体表现。因此,每一个环节都是动态维系着的。在做一个文稿之前,与各个部门广泛沟通,并做到互爱互助,才能在一个凝聚力超强的团队中展现出自己独特的个性和才华
文案 编辑词条
B 添加义项 ?
文案,原指放书的桌子,后来指在桌子上写字的人。现在指的是公司或企业中从事文字工作的职位,就是以文字来表现已经制定的创意策略。文案它不同于设计师用画面或其他手段的表现手法,它是一个与广告创意先后相继的表现的过程、发展的过程、深化的过程, 多存在于广告公司,企业宣传,新闻策划等。
基本信息
中文名称
文案
外文名称
Copy
目录
1发展历程
2主要工作
3分类构成
4基本要求
5工作范围
6文案写法
7实际应用
折叠编辑本段发展历程
汉字"文案"(wén àn)是指古代官衙中掌管档案、负责起草文书的幕友,亦指官署中的公文、书信等;在现代,文案的称呼主要用在商业领域,其意义与中国古代所说的文案是有区别的。
在中国古代,文案亦作" 文按 "。公文案卷。《北堂书钞》卷六八引《汉杂事》:"先是公府掾多不视事,但以文案为务。"《晋书?桓温传》:"机务不可停废,常行文按宜为限日。" 唐戴叔伦《答崔载华》诗:"文案日成堆,愁眉拽不开。"《资治通鉴?晋孝武帝太元十四年》:"诸曹皆得良吏以掌文按。"《花月痕》第五一回:" 荷生 觉得自己是替他掌文案。"
旧时衙门里草拟文牍、掌管档案的幕僚,其地位比一般属吏高。《老残游记》第四回:"像你老这样抚台央出文案老爷来请进去谈谈,这面子有多大!"夏衍《秋瑾传》序幕:"将这 阮财富 带回衙门去,要文案给他补一份状子。"
文案音译
文案英文:copywriter、copy、copywriting
12
文案拼音:wén àn
现代文案的概念:
文案来源于广告行业,是"广告文案"的简称,由copy writer翻译而来。多指以语辞进行广告信息内容表现的形式,有广义和狭义之分,广义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写和对广告形象的选择搭配;狭义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写。
在中国,由于各个行业发展都相对不够成熟,人员素质也参差不齐,这使得"文案"的概念常常被错误引用和理解。最典型的就是把文案等同于"策划",其实这是两种差别很大,有着本质区别的工作。只是由于文案人员常常需要和策划人员、设计人员配合工作,且策划人员也需要撰写一些方案,这使得很多人误认为文案和策划就是一回事,甚至常常把策划与文案的工作会混淆在一起(这也和发源于中国的"策划学"发展不够成熟有关)。
广告文案
广告文案
很多企业中,都有了的专职的文案人员,只有当需要搞一些大型推广活动、做商业策划案、写可行性分析报告等需求量大的项目时,才需要对外寻求合作。以往一般企业都会找广告、文化传媒等公司合作。这些公司一般都有专业的文案、设计团队,经验也相对丰富,但因为业务量大,范围广泛,在针对性方面会较为薄 弱。随着社会经济不断发展,对专业文案的要求更加严格,逐渐衍生了一些专注于文字服务的文案策划公司。这类企业发展速度很快,大多数都是从工作室形式转型而来,也有从文化传播机构独立出来的。
随着中国广告业二十余年的迅猛发展,广告公司的经营范围,操作流程,工作方式都在变化,文案的角色由无闻转为配角,现正昂首阔步走向台面,成为主角,从前一则广告多是由设计出计划,再配图之后,文案轮为完稿,一则广告的计划多是由文案与美工共同完成,然后各自分工。说起文案的地位,日本是从1992年意识到文案的重要性,台湾是1998年。2002年,大陆的一些中大型广告公司的老总几乎都在垂叹,好的文案太少了。好的文案往往愿意扎堆,从全国形式来看,这股潜规则正逐渐由华南广告重镇广州向华东中心上海转移。
折叠编辑本段主要工作
撰写报纸广告、杂志广告、海报; 撰写企业样本、品牌样本、产品目录; 撰写日常宣传文案白领一族
文案白领一族
单页、各类宣传小册子; 撰写DM直邮广告,包括信封、邮件正文; 撰写电视广告脚本,包括分镜头、旁白、字幕; 撰写电视专题片脚本; 撰写电视广告的拍摄清单; 撰写广播广告; 将海外版广告文案作 汉化(翻译); 撰写广告歌词,或汉化(翻译)外文歌词; 撰写各种形式的网络广告; 为网站栏目命名; 撰写网站内部文案; 撰写手机短信广告; 撰写各类广告作品的创意阐述; 撰写广告口号; 撰写产品包装文案,包括:品牌名、使用说明、产品成分等; 为产品或品牌命名,并作创意阐述; 为路演或活动命名,并作创意阐述; 撰写活动请柬及活动现场宣传品上的文字; 为各种礼品命名,并作创意阐述; 为专卖店命名,并作创意阐述; 撰写商店的橱窗或店内POP物料文案; 撰写软文、新闻式、故事式、评论式; 撰写策划书,或协助策划人员优化、润色方案文字; 协助客户企业内刊的编辑,提供主题方向,审核文字。 不同的环境对文案撰稿人有着不同的锤炼和要求。
13
折叠编辑本段分类构成
从现有的文案分类有很多种,按照4A标准,一般有四类:助理文案(ACW), 文案(CW策划文案 策划文案
),高级文案(ACW),资深文案(SCW),其中稍微要区别的是高级文案与资深文案,前者要求的是文案的撰写能力,而后者不仅仅是文案的撰写能力还包括做文案的年资。有些4A公司设有文案主任(CE)一职,大体上与文案职责类似,有时候负责专项。另外有些个别公司还配有首席文案的职位(CCW),文案功力凤毛麟角,虽不具领导才能,但有的首席文案拿的工资却比创意总监还要高。大部分国内广告公司文案的种类繁杂,有房地产文案、创意文案、企划文案、品牌文案等。
文案是由标题、副标题、广告正文、广告口号组成的。它是广告内容的文字化表现。在广告设计中,文案与图案图形同等重要,图形具有前期的冲击力,广告文案具有较深的影响力。
广告标题:它是广告文案的主题,往往也是广告内容的诉求重点。它的作用在于吸引人们对广告的注目,留下印象,引起人们对广告的兴趣。只有当受众对标语产生兴趣时, 才会阅读正文。广告标语的设计形式有:情报式,问答式、祈使式、新闻式、口号式、暗示式、提醒式等。广告标语撰写时要语言简明扼要,易懂易记,传递清楚,新颖个性,句 子中的文字数量一般掌握在12个字以内为宜。
广告副标题:它是广告方案的补充部分,有一个点睛的作用。主要表现在对标题的补充及让人感觉,前面的不懂,在这里全部让人了解。
广告正文:广告正文是对产品及服务,以客观的事实、具体的说明,来增加消费者的了解与认识,以理服人。广告正文撰写使内容要实事求是,通俗易懂。不论采用何种 题材式样,都要抓住主要的信息来叙述,言简易明。
广告口号:口号是战略性的语言,目的是经过反复和相同的表现,以便名域其他企业精神的不同,使消费者掌握商品或服务的个性。这以成为推广商品不可或缺的要素。广告 口号常有的形式:联想式、比喻式、许诺式、推理式、赞扬式、命令式。广告口号的撰写要注意简洁明了、语言明确、独创有趣、便于记忆、易读上口。
所谓广告文案是以语辞进行广告信息内容表现的形式。广告文案有广义和狭义之分,广义的广告文案就是指通过广告语言、形象和其他因素,对既定的广告主题、广告创意所 进行的具体表现。狭义的广告文案则指表现广告信息的言语与文字构成。广义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写和对广告形象的选择搭配;狭义的广告文案包括标题、正文 、口号的撰写。
折叠编辑本段基本要求
1)准确规范、点明主题
准确规范是文案中最基本的要求。要实现对广告主题和广告创意的有效表现和对广告信息的广告文案
广告文案
有效传播,首先要求广告文案中语言表达规范完整,避免语法错误或表达残缺。其次,广告文案中所使用的语言要准确无误,避免产生歧义或误解。第三,广告文案中的语言要符合语 言表达习惯,不可生搬硬套,自己创造众所不知的词汇。第四,广告文案中的语言要尽量通俗化、大众
14
化,避免使用冷僻以及过于专业化的词语。
2)简明精炼、言简意赅
文案在文字语言的使用上,要简明扼要、精练概括。首先,要以尽可能少的语言和文字表达出广告产品的精髓,实现有效的广告信息传播。其次,简明精练的广告文案有助于吸引广告受众的注意力和迅速记忆下广告内容。第三, 要尽量使用简短的句子,以防止受众因繁长语句所带来的反感。
3)生动形象、表明创意
文案中的生动形象能够吸引受众的注意,激发他们的兴趣。国外研究资料表明:文字、图像能引起人们注意的百分比分别文字是35%, 图像是65%,文案创作时采用生动活泼、新颖独特的语言的同时,附助以一定的图像来配合。
4)优美流畅、上口易记
文案是广告的整体构思,对于由其中诉之于听觉的广告语言,要注意优美、流畅和动听,使其易识别、易记忆和易传播,从而突出广告定位,很好地表现广告主题和广告创意,产生良好的广告效果。同时,也要避免过分追求语言和音韵美,而忽视广告主题,生搬硬套,牵强附会,因文害意。
折叠编辑本段工作范围
策划文案和创意文案
一)策划文案:工作主要是将策划工作人员的策划思路形成文字。毋庸置疑,公司很多策划人员均有很强的策划水平和丰富的策划经验,但有时候手上同时进行几个案子,同时时间又比较紧的情况下,文案可以在充分理解策划意图的情况下帮助策划人员完成策划方案的写作。这其中有几个内容:
1.必须充分了解本案的运作背景,包括宏观市场信息和微观市场动态。
2.掌握整个策划的战略指导思想。
3.以通俗易懂、言简意赅的论述方式将策划思想反映在字里行间。
4.到比较专业的问题或障碍的时候,应及时与策划人员沟通,保证策划方向的一致性。
5.贯彻战略方针的同时,也可就战略思想的表达方式和文字提述上提出一些合理化建议,从而更好地展现策划的战略核心点。
二)创意文案:主要是将广告作品的表现及形式用完整的文字表达出来,其中,除了产生画面的构想之外,还包括广告语言的表现内容(如平面的标题、引文、正文、随文,广告语等,影视的音效、旁白、字幕、广告语等)。其中至关重要的就是新颖的创意和传神的文字表现。而这些智慧的闪光绝对不是拍一下脑门子就能出来的。这其中包括了以下内容:
15
1.通过各个层面,特别是swot方面深入理解,从而找出项目的核心优势。
2.把握目标消费群的心态。
3.掌握宏观政策及大市场对项目本身的影响。
4.场策划人员和设计人员保持密切联系,随时沟通。
5.市场上类似房产项目的文案及创意,力求全面加以突破。
6.获悉开发商对文案创作的要求,调整文字内容和形式。
折叠编辑本段文案写法
商家要吸引、留住消费者必须注重细节的提高和改善,而其中,文案就是不可忽视的一大细节。下面是一些能吸引买家的写文案方法:
折叠九宫格思考法
拿一张白纸,用笔先分割成9宫格。中间那格填上你的商品名,接下来开始在其它8格填上可以帮助此商品销售的众多可能优点。这是强迫创意产生的简单练习法,我也常用这种方式构思出企划案或演讲PPT的结构。
折叠要点衍伸法
把该商品型录上的商品特点照抄下来,然后每个要点后面加以延伸。如果你真的很懒,照抄型录商品卖点也可,但文字会比较没有人味,说服力道会稍差。
折叠三段式写作法
这是仿新闻学中"倒三角写作法"。第一段,请精要地浓缩全文的销售话术,因为多数人都没耐心看全文。第二段,请依照型录要点衍伸法,逐一说明该商品的众多特色。到底是点列还是一段长文章较好,要看你的文字功力。文字功力欠佳就点列式写出卖点即可。最后一段是「钩子」,主要任务是要叫人【Buy Now】,所以一般是强化商品USP(Unique Selling Point,独特销售卖点)、价格优势或赠品。
折叠编辑本段实际应用
市场研究
没有正确的市场导向,任何文案或创意都是天马行空的奇思怪想。的确,再优美的文字用在不适宜的场合中都可能导致整个策划执行的失败。一篇优秀的文案,一定是在对市场有深入的了解后方能下笔的。 例如不同地区的经济发展水平、文化构成、风土人情、产业结构比重等等皆有很大差异,同一地区不同年龄、阶层人士的世界观、思维观、道德观和价值观也参差不齐,加上特定环境、特定历史背景或政策规文赋予某些项目的特殊意义,都会对文案产生深远的影响。 所
16
以无市场,文案便如枯井之蛙,其作品不仅缺乏远见,生命力也极为低下。
沟通与互助
在创作一幅作品时,常常发生这种情况:设计人员与文案人员一开始没有很好的沟通;结果是设计人员设计出来的作品文案看来好像是曲解了原意,而将文案配上去时候,设计人员又认为文案的风格与画面差入甚大。矛盾自然就出现了。 其实文案和设计,乃至市场、企划、媒体等各部门工作人员都应随时保持高效的沟通。通篇来看,文案的工作是将市场的调查分析结果作为其创作的翔实论据、企划的核心思想作为其创作的指引方向,媒体投放的渠道作为其创作的特定模式,设计排版作为其创作的具体表现。因此,每一个环节都是动态维系着的。在做一个文稿之前,与各个部门广泛沟通,并做到互爱互助,才能在一个凝聚力超强的团队中展现出自己独特的个性和才华
文案 编辑词条
B 添加义项 ?
文案,原指放书的桌子,后来指在桌子上写字的人。现在指的是公司或企业中从事文字工作的职位,就是以文字来表现已经制定的创意策略。文案它不同于设计师用画面或其他手段的表现手法,它是一个与广告创意先后相继的表现的过程、发展的过程、深化的过程, 多存在于广告公司,企业宣传,新闻策划等。
基本信息
中文名称
文案
外文名称
Copy
目录
1发展历程
2主要工作
3分类构成
4基本要求
5工作范围
6文案写法
7实际应用
折叠编辑本段发展历程
汉字"文案"(wén àn)是指古代官衙中掌管档案、负责起草文书的幕友,亦指官署中的公文、书信等;在现代,文案的称呼主要用在商业领域,其意义与中国古代所说的文案是有区别的。
在中国古代,文案亦作" 文按 "。公文案卷。《北堂书钞》卷六八引《汉杂事》:"先是公府掾多不视事,但以文案为务。"《晋书?桓温传》:"机务不可停废,常行文按宜为限日。" 唐戴叔伦《答崔载华》诗:"文案日成堆,愁眉拽不开。"《资治通鉴?晋孝武帝太元十四年》:"诸曹皆得良吏以掌文按。"《花月痕》第五一回:" 荷生 觉得自己是替他掌文案。"
旧时衙门里草拟文牍、掌管档案的幕僚,其地位比一般属吏高。《老残游记》第四回:"像你老这样抚台央出文案老爷来请进去谈谈,这面子有多大!"夏衍《秋瑾传》序幕:"将这 阮财富 带回衙门去,要文案给他补一份状子。"
17
文案音译
文案英文:copywriter、copy、copywriting
文案拼音:wén àn
现代文案的概念:
文案来源于广告行业,是"广告文案"的简称,由copy writer翻译而来。多指以语辞进行广告信息内容表现的形式,有广义和狭义之分,广义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写和对广告形象的选择搭配;狭义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写。
在中国,由于各个行业发展都相对不够成熟,人员素质也参差不齐,这使得"文案"的概念常常被错误引用和理解。最典型的就是把文案等同于"策划",其实这是两种差别很大,有着本质区别的工作。只是由于文案人员常常需要和策划人员、设计人员配合工作,且策划人员也需要撰写一些方案,这使得很多人误认为文案和策划就是一回事,甚至常常把策划与文案的工作会混淆在一起(这也和发源于中国的"策划学"发展不够成熟有关)。
广告文案
广告文案
很多企业中,都有了的专职的文案人员,只有当需要搞一些大型推广活动、做商业策划案、写可行性分析报告等需求量大的项目时,才需要对外寻求合作。以往一般企业都会找广告、文化传媒等公司合作。这些公司一般都有专业的文案、设计团队,经验也相对丰富,但因为业务量大,范围广泛,在针对性方面会较为薄 弱。随着社会经济不断发展,对专业文案的要求更加严格,逐渐衍生了一些专注于文字服务的文案策划公司。这类企业发展速度很快,大多数都是从工作室形式转型而来,也有从文化传播机构独立出来的。
随着中国广告业二十余年的迅猛发展,广告公司的经营范围,操作流程,工作方式都在变化,文案的角色由无闻转为配角,现正昂首阔步走向台面,成为主角,从前一则广告多是由设计出计划,再配图之后,文案轮为完稿,一则广告的计划多是由文案与美工共同完成,然后各自分工。说起文案的地位,日本是从1992年意识到文案的重要性,台湾是1998年。2002年,大陆的一些中大型广告公司的老总几乎都在垂叹,好的文案太少了。好的文案往往愿意扎堆,从全国形式来看,这股潜规则正逐渐由华南广告重镇广州向华东中心上海转移。
折叠编辑本段主要工作
撰写报纸广告、杂志广告、海报; 撰写企业样本、品牌样本、产品目录; 撰写日常宣传文案白领一族
文案白领一族
单页、各类宣传小册子; 撰写DM直邮广告,包括信封、邮件正文; 撰写电视广告脚本,包括分镜头、旁白、字幕; 撰写电视专题片脚本; 撰写电视广告的拍摄清单; 撰写广播广告; 将海外版广告文案作 汉化(翻译); 撰写广告歌词,或汉化(翻译)外文歌词; 撰写各种形式的网络广告; 为网站栏目命名; 撰写网站内部文案; 撰写手机短信广告; 撰写各类广告作品的创意阐述; 撰写广告口号; 撰写产品包装文案,包括:品牌名、使用说明、产品成分等; 为产品或品牌命名,并作创意阐述; 为路演或活动命名,并作创意阐述; 撰写活动请柬及活动现场宣传品上的文字; 为各种礼品
18
命名,并作创意阐述; 为专卖店命名,并作创意阐述; 撰写商店的橱窗或店内POP物料文案; 撰写软文、新闻式、故事式、评论式; 撰写策划书,或协助策划人员优化、润色方案文字; 协助客户企业内刊的编辑,提供主题方向,审核文字。 不同的环境对文案撰稿人有着不同的锤炼和要求。
折叠编辑本段分类构成
从现有的文案分类有很多种,按照4A标准,一般有四类:助理文案(ACW), 文案(CW策划文案 策划文案
),高级文案(ACW),资深文案(SCW),其中稍微要区别的是高级文案与资深文案,前者要求的是文案的撰写能力,而后者不仅仅是文案的撰写能力还包括做文案的年资。有些4A公司设有文案主任(CE)一职,大体上与文案职责类似,有时候负责专项。另外有些个别公司还配有首席文案的职位(CCW),文案功力凤毛麟角,虽不具领导才能,但有的首席文案拿的工资却比创意总监还要高。大部分国内广告公司文案的种类繁杂,有房地产文案、创意文案、企划文案、品牌文案等。
文案是由标题、副标题、广告正文、广告口号组成的。它是广告内容的文字化表现。在广告设计中,文案与图案图形同等重要,图形具有前期的冲击力,广告文案具有较深的影响力。
广告标题:它是广告文案的主题,往往也是广告内容的诉求重点。它的作用在于吸引人们对广告的注目,留下印象,引起人们对广告的兴趣。只有当受众对标语产生兴趣时, 才会阅读正文。广告标语的设计形式有:情报式,问答式、祈使式、新闻式、口号式、暗示式、提醒式等。广告标语撰写时要语言简明扼要,易懂易记,传递清楚,新颖个性,句 子中的文字数量一般掌握在12个字以内为宜。
广告副标题:它是广告方案的补充部分,有一个点睛的作用。主要表现在对标题的补充及让人感觉,前面的不懂,在这里全部让人了解。
广告正文:广告正文是对产品及服务,以客观的事实、具体的说明,来增加消费者的了解与认识,以理服人。广告正文撰写使内容要实事求是,通俗易懂。不论采用何种 题材式样,都要抓住主要的信息来叙述,言简易明。
广告口号:口号是战略性的语言,目的是经过反复和相同的表现,以便名域其他企业精神的不同,使消费者掌握商品或服务的个性。这以成为推广商品不可或缺的要素。广告 口号常有的形式:联想式、比喻式、许诺式、推理式、赞扬式、命令式。广告口号的撰写要注意简洁明了、语言明确、独创有趣、便于记忆、易读上口。
所谓广告文案是以语辞进行广告信息内容表现的形式。广告文案有广义和狭义之分,广义的广告文案就是指通过广告语言、形象和其他因素,对既定的广告主题、广告创意所 进行的具体表现。狭义的广告文案则指表现广告信息的言语与文字构成。广义的广告文案包括标题、正文、口号的撰写和对广告形象的选择搭配;狭义的广告文案包括标题、正文 、口号的撰写。
折叠编辑本段基本要求
1)准确规范、点明主题
准确规范是文案中最基本的要求。要实现对广告主题和广告创意的有效表现和对广告信息的广告
19
文案
广告文案
有效传播,首先要求广告文案中语言表达规范完整,避免语法错误或表达残缺。其次,广告文案中所使用的语言要准确无误,避免产生歧义或误解。第三,广告文案中的语言要符合语 言表达习惯,不可生搬硬套,自己创造众所不知的词汇。第四,广告文案中的语言要尽量通俗化、大众化,避免使用冷僻以及过于专业化的词语。
2)简明精炼、言简意赅
文案在文字语言的使用上,要简明扼要、精练概括。首先,要以尽可能少的语言和文字表达出广告产品的精髓,实现有效的广告信息传播。其次,简明精练的广告文案有助于吸引广告受众的注意力和迅速记忆下广告内容。第三, 要尽量使用简短的句子,以防止受众因繁长语句所带来的反感。
3)生动形象、表明创意
文案中的生动形象能够吸引受众的注意,激发他们的兴趣。国外研究资料表明:文字、图像能引起人们注意的百分比分别文字是35%, 图像是65%,文案创作时采用生动活泼、新颖独特的语言的同时,附助以一定的图像来配合。
4)优美流畅、上口易记
文案是广告的整体构思,对于由其中诉之于听觉的广告语言,要注意优美、流畅和动听,使其易识别、易记忆和易传播,从而突出广告定位,很好地表现广告主题和广告创意,产生良好的广告效果。同时,也要避免过分追求语言和音韵美,而忽视广告主题,生搬硬套,牵强附会,因文害意。
折叠编辑本段工作范围
策划文案和创意文案
一)策划文案:工作主要是将策划工作人员的策划思路形成文字。毋庸置疑,公司很多策划人员均有很强的策划水平和丰富的策划经验,但有时候手上同时进行几个案子,同时时间又比较紧的情况下,文案可以在充分理解策划意图的情况下帮助策划人员完成策划方案的写作。这其中有几个内容:
1.必须充分了解本案的运作背景,包括宏观市场信息和微观市场动态。
2.掌握整个策划的战略指导思想。
3.以通俗易懂、言简意赅的论述方式将策划思想反映在字里行间。
4.到比较专业的问题或障碍的时候,应及时与策划人员沟通,保证策划方向的一致性。
5.贯彻战略方针的同时,也可就战略思想的表达方式和文字提述上提出一些合理化建议,从而更好地展现策划的战略核心点。
20
二)创意文案:主要是将广告作品的表现及形式用完整的文字表达出来,其中,除了产生画面的构想之外,还包括广告语言的表现内容(如平面的标题、引文、正文、随文,广告语等,影视的音效、旁白、字幕、广告语等)。其中至关重要的就是新颖的创意和传神的文字表现。而这些智慧的闪光绝对不是拍一下脑门子就能出来的。这其中包括了以下内容:
1.通过各个层面,特别是swot方面深入理解,从而找出项目的核心优势。
2.把握目标消费群的心态。
3.掌握宏观政策及大市场对项目本身的影响。
4.场策划人员和设计人员保持密切联系,随时沟通。
5.市场上类似房产项目的文案及创意,力求全面加以突破。
6.获悉开发商对文案创作的要求,调整文字内容和形式。
折叠编辑本段文案写法
商家要吸引、留住消费者必须注重细节的提高和改善,而其中,文案就是不可忽视的一大细节。下面是一些能吸引买家的写文案方法:
折叠九宫格思考法
拿一张白纸,用笔先分割成9宫格。中间那格填上你的商品名,接下来开始在其它8格填上可以帮助此商品销售的众多可能优点。这是强迫创意产生的简单练习法,我也常用这种方式构思出企划案或演讲PPT的结构。
折叠要点衍伸法
把该商品型录上的商品特点照抄下来,然后每个要点后面加以延伸。如果你真的很懒,照抄型录商品卖点也可,但文字会比较没有人味,说服力道会稍差。
折叠三段式写作法
这是仿新闻学中"倒三角写作法"。第一段,请精要地浓缩全文的销售话术,因为多数人都没耐心看全文。第二段,请依照型录要点衍伸法,逐一说明该商品的众多特色。到底是点列还是一段长文章较好,要看你的文字功力。文字功力欠佳就点列式写出卖点即可。最后一段是「钩子」,主要任务是要叫人【Buy Now】,所以一般是强化商品USP(Unique Selling Point,独特销售卖点)、价格优势或赠品。
折叠编辑本段实际应用
市场研究
21
没有正确的市场导向,任何文案或创意都是天马行空的奇思怪想。的确,再优美的文字用在不适宜的场合中都可能导致整个策划执行的失败。一篇优秀的文案,一定是在对市场有深入的了解后方能下笔的。 例如不同地区的经济发展水平、文化构成、风土人情、产业结构比重等等皆有很大差异,同一地区不同年龄、阶层人士的世界观、思维观、道德观和价值观也参差不齐,加上特定环境、特定历史背景或政策规文赋予某些项目的特殊意义,都会对文案产生深远的影响。 所以无市场,文案便如枯井之蛙,其作品不仅缺乏远见,生命力也极为低下。
沟通与互助
在创作一幅作品时,常常发生这种情况:设计人员与文案人员一开始没有很好的沟通;结果是设计人员设计出来的作品文案看来好像是曲解了原意,而将文案配上去时候,设计人员又认为文案的风格与画面差入甚大。矛盾自然就出现了。 其实文案和设计,乃至市场、企划、媒体等各部门工作人员都应随时保持高效的沟通。通篇来看,文案的工作是将市场的调查分析结果作为其创作的翔实论据、企划的核心思想作为其创作的指引方向,媒体投放的渠道作为其创作的特定模式,设计排版作为其创作的具体表现。因此,每一个环节都是动态维系着的。在做一个文稿之前,与各个部门广泛沟通,并做到互爱互助,才能在一个凝聚力超强的团队中展现出自己独特的个性和才华
22