范文一:dns法测还原糖
DNS-二硝基水杨酸
DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下,二硝基水杨酸(DNS)与还原糖发生氧化还原反应,生成3-氨基-5-硝基水杨酸,该产物在煮沸条件下显棕红色,且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理,用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关,而对还原糖的种类没有选择性,故DNS方法适合用在多糖(如纤维素、半纤维素和淀粉等)水解产生的多种还原糖体系中。 编辑本段DNS试剂的制备
将6.3克DNS和262ml 2mol/L氢氧化钠,加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中,再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加水定容到1000ml,即制成3,5-二硝基水杨酸试剂,贮于棕色瓶中备用。
编辑本段葡萄糖标准曲线的绘制
分别取葡萄糖标准液(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于25 ml试管中,分别准确加入DNS试剂2ml,沸水浴加热2min,流水冷却,用水补足到15ml刻度。在540nm波长下测定吸光度。
编辑本段样品的测定
样品液适当稀释,使糖浓度为0.1-1.0mg/ml,取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中,加DNS试剂2.0ml,沸水煮沸2min,冷却后用水补足到15ml刻度,在540nm波长下测定光密度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。
范文二:DNS法测还原糖
DNS法测还原糖
3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范实验围内反应的还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系,可测定生成化合物的吸光度,由标准曲线反推出还原糖的浓度。操作简便,快速,杂质干扰较少,适于生物制氢中还原糖含量的测定。
显色条件包括:
波长选择,显色剂用量,显色时间,溶液酸度,显色温度,有机络合物的稳定性及共存离子的干扰等。此次实验选择波长选择,显色剂用量,显色时间,溶液酸度进行实验。
一(试剂的配置
DNS试剂:称量18.1992g酒石酸钾钠溶于50ml蒸馏水中, 加热, 趁热加入0.6313g 3,5-二硝基水杨酸(DNS),另配制2mol/lNaOH溶液,取26.2ml加入上述溶液中,称量0.5128g苯酚和0.5064g无水亚硫酸钠移入配置好的溶液中,蒸馏水定容至100ml,该试剂避光保存7,10天。
葡萄糖标准溶液(1.0*10-2mol/l):准确称量0.1990g无水葡萄糖,待溶解后定容至100ml容量瓶中。
葡萄糖标准溶液(1.0*10-3mol/l):取10ml上述10-2mol/l溶液,稀释至100ml容量瓶中。 葡萄糖标准溶液(1.0*10-4mol/l):取10ml上述10-3mol/l溶液,稀释至100ml容量瓶中。
二.显色条件的选择
1. 波长选择 取5支试管按下表加相应溶液,沸水浴15min, 均加入7ml水定容为10ml,流水冷却,在不同波长处分别进行扫描。
图1为不同条件下溶液的波长——吸光度图(水调零)。
由图1可以看出白色与绿色曲线几乎重合,说明0.0001mol/l葡萄糖溶液与DNS反应生成的氨基化合物极少,用比色法很难区分,故此法所能够测量的葡萄糖浓度应大于0.0001mol/l。
由DNS,H2O曲线可以看出当波长大于530nm时,DNS的吸光度已经很小,这时DNS对
45?水浴加热,同时补加水300ml,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解.停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000ml.用烧结玻璃过滤器过滤.取滤液,储存在棕色瓶中,避光保存.室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月.
DNS试剂(二)
只有3,5-二硝基水杨酸,氢氧化钠,酒石酸钠钾三种物质。
PS:网上找的,有抄袭嫌疑,不用给币了:D
其中酚为蛋白质变性剂,具有强腐蚀性,不同配方用量也不一样,若用,当小心,,, hitzbz (站内联系TA)
1. 6.5gDNS溶于200-300ml去离子水
2. 配制2mol/l NaOH 溶液 325ml
3. 45g 甘油(丙三醇)
三者混合定容至1000ml即可。
标线做法:
标液浓度:1.0mg/ml
依次取0.0,0.1,02,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0 ml标液
与一定量的去离子水,混合至1.0ml
加入1.0mlDNS溶液,沸水10min
冷却后,加入3.0ml水
以0.0ml标液那组为空白对照,测定即可得标准曲线
DNS溶液测糖含量
分类:实验基础知识
2007.2.3 10:20 作者:sunsaley | 评论:0 | 阅读:2451
仪器和设备
分析天平:感量。.lmg;
恒温水浴锅可控温40士1C;
721分光光度计;
容量瓶:100mL ;
移液管:ImL,2mL,lOMI。
C5 试剂和溶液
C5.1 to%(v/v)磷酸盐缓冲液(pH= 6.8):配制与B3.1 相同
C5.2 DNS溶液
溶解 1 g3 ,5一二硝基水杨酸、。2g苯P,O.03 g亚硫酸钠、lg氢氧化钠、20g酒石酸钾钠于蒸馏水中
并加热,冷却定容到100m1_,贮于棕色瓶内,一周后用于作标准曲线(每次配制后要重新作标准曲线)。
C5.3 1%(m/m)淀粉缓冲液
溶解 1g 可溶性淀粉于煮沸的蒸馏水中,再煮沸Imin,冷却,加lOmL1 0%磷酸盐缓冲液再用蒸馏
水定容到99mL(用量筒定容)。
C6 标准曲线的绘制(采用DNS半量法)
准确 称 取 在105^-110C ’干燥后的葡萄糖50mg,用蒸馏水溶解定容到50mL,即为lmg/mL葡萄糖
液,按下表比例在试管中操作后,开小火煮沸15min,冷却,加入10.5m I蒸馏水,在721分光光度计
550nm波长处比色,读光密度值0.D值填入下表。
第一列 编号
mg
第二列 lmg/mL糖液量
m L
第三列 蒸馏水量
m L
第四列 DNS量
m L
第五。列 0.D值
0 0 0 0.5 1.5
1 0.1 0.1 0.4 1. 5
2 0. 2 0. 2 0. 3 1. 5
3 0. 3 0. 3 0. 2 1. 5
4 0.4 0. 4 0. 1 1.5
5 0. 5 0.5 0.0 1. 5
以读 出 的 光密度值(0.D值)为横坐标,含糖量为纵坐标,作出标准曲线
范文三:蒽酮法测还原糖
总糖的含量?的测定(蒽酮法)
一、 实验目的
掌握蒽酮比?色法测定糖?的原理与方?法。
二、 实验原理
蒽酮比色法?是一个快速?而简便的测?定糖方法。蒽酮可以和?游离的己糖?或多糖中的?己糖基、戊醛糖及己?糖醛酸起反?应,反应后溶液?呈蓝绿色,在620 nm处有最?大吸收。蒽酮可与其?他一些糖类?发生反应,但显现的颜?色不同。当样品中存?有含有较多?色氨酸的蛋?白质时,反应不稳定?,呈红色。对于以上特?定的糖类反?应较稳定。
三、 实验器材
1. 吸管
2. 试管
3. 分光光度计?
4. 水浴锅
5. 电炉
6. 电子分析天?平
四、 实验试剂
1( 蒽酮试剂:取2 g蒽酮溶于?1000 ml体积分?数为80 %的硫酸中,当时
配制使?用。
2( 标准葡萄糖?溶液(0.1 mg/ml):100 mg葡萄糖?溶于蒸馏水?并稀释至
1?000 ml(可滴加几滴?甲苯作防腐?剂)。
3( 6 mol/l HCl溶液?。
4( 10 % NaOH溶?液:称取10 g NaOH固?体,溶于蒸馏水?并稀释至1?00 ml。 五、 实验操作
1. 制作标准曲?线
取干净试管?7支,按下表进行?操作。
表 蒽酮比色法?测定糖含量?的标准曲线?制作
管号
0 1 2 3 4 5 6 步骤
标准葡萄糖溶?
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 液/ml
蒸馏水/ml 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
置冷水中5 ?min
蒽酮试剂/ml 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
沸水浴中准确煮沸?10 ?min,取出,用自来水冷却,室温放?
置10 min?,在620 min比色。? A620n? m
2. 样品的处理?(见实验四)
取上述实验?四的水解液?,冷却后用1?0 % NaOH溶?液中和至p?H呈中性,然后用蒸馏?水定容至1?00 ml,过滤,取滤液10? ml,用蒸馏水定?容于100? ml成稀释?1000倍?的总糖水解?液,用于糖含量?的测定。
测定时取1? ml总糖水?解液测定还?原糖的含量?(同标准曲线?)。
样品中糖含?量的计算:
CV ,, ×100%
,
w—糖的质量分?数(%);
C—从标准曲线?上查出的糖?质量浓度(mg/ml);
V—样品稀释后?的体积(ml);
m—样品的质量?(mg)。
范文四:[整理]DNS法测还原糖
3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范实验围内反应的还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系,可测定生成化合物的吸光度,由标准曲线反推出还原糖的浓度。操作简便,快速,杂质干扰较少,适于生物制氢中还原糖含量的测定。
显色条件包括:
波长选择,显色剂用量,显色时间,溶液酸度,显色温度,有机络合物的稳定性及共存离子的干扰等。此次实验选择波长选择,显色剂用量,显色时间,溶液酸度进行实验。
一(试剂的配置
DNS试剂:称量18.1992g酒石酸钾钠溶于50ml蒸馏水中, 加热, 趁热加入0.6313g
3,5-二硝基水杨酸(DNS),另配制2mol/lNaOH溶液,取26.2ml加入上述溶液中,称量0.5128g苯酚和0.5064g无水亚硫酸钠移入配置好的溶液中,蒸馏水定容至100ml,该试剂避光保存7,10天。
葡萄糖标准溶液(1.0*10-2mol/l):准确称量0.1990g无水葡萄糖,待溶解后定容至100ml容量瓶中。
葡萄糖标准溶液(1.0*10-3mol/l):取10ml上述10-2mol/l溶液,稀释至100ml容量瓶中。
葡萄糖标准溶液(1.0*10-4mol/l):取10ml上述10-3mol/l溶液,稀释至100ml容量瓶中。
二.显色条件的选择
1. 波长选择 取5支试管按下表加相应溶液,沸水浴15min, 均加入7ml水定容为10ml,流水冷却,在不同波长处分别进行扫描。
图1为不同条件下溶液的波长——吸光度图(水调零)。 由图1可以看出白色与绿色曲线几乎重合,说明0.0001mol/l葡萄糖溶液与DNS反应生成的氨基化合物极少,用
比色法很难区分,故此法所能够测量的葡萄糖浓度应大于0.0001mol/l。
3.5
由DNS,H2O曲线可以看出当波长大于530nm时,DNS的吸光度已经很小,这时DNS对ODNS+H32反应生成的氨基化合物吸光度的影响可以忽略。 -3DNS+10mol/l glucose2.5 -4DNS+10mol/l glucose2A amide
1.5
1
0.5
0 440460480500520540560580
Fig.1wavelengh/nm
图2为4号试管稀释10倍后波长扫描图
4号试管用高浓度的葡萄糖溶液和少量的DNS试剂反应,使生成大量的氨基化合物,但其吸光度太大,仪器无法测定,故将其稀释10倍。以水调零未出现最高峰,以DNS调零时(图2)在540nm处有最高峰,这说明在该浓度下,DNS可能会对氨基化合物吸光度的测0.2
量有较大影响,故测量时以DNS调零较准确。选择540nm作为最佳吸收波长。
0.18
0.16
0.14
0.12
0.1 wavelengh
0.08
510520530540550560570
试0 1 2 3 4 5 6 7
管
2.DNS用量选择 取试管按下表加相应溶液,沸水浴30min, 加入适量水使定容为10ml,流号
水冷却,以1号试管中DNS溶液为参比,在540nm处测吸光度。 DN0 2 1 1.5 2 2.5 3 3.5
S/m
l
水3 1 /ml
11* 0 0 1 1 1 1 1 1 10-
4mo
l/l
葡 萄
糖
DNS试剂(—)
称取3,5-二硝基水杨酸3.15g(化学纯),加水500ml,搅拌5s,水浴至45?.然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液(3.4),同时不断搅拌,直到溶液清澈透明(注意:在加入氢氧化钠过程中,溶液温度不要超过48?.).再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g,苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g.继续45?水浴加热,同时补加水300ml,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解.停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000ml.用烧结玻璃过滤器过滤.取滤液,储存在棕色瓶中,避光保存.室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月.
DNS试剂(二)
只有3,5-二硝基水杨酸,氢氧化钠,酒石酸钠钾三种物质。
PS:网上找的,有抄袭嫌疑,不用给币了:D
其中酚为蛋白质变性剂,具有强腐蚀性,不同配方用量也不一样,若用,当小心,,,
hitzbz (站内联系TA)
1. 6.5gDNS溶于200-300ml去离子水
2. 配制2mol/l NaOH 溶液 325ml
3. 45g 甘油(丙三醇)
三者混合定容至1000ml即可。
标线做法:
标液浓度:1.0mg/ml
依次取0.0,0.1,02,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0 ml标液
与一定量的去离子水,混合至1.0ml
加入1.0mlDNS溶液,沸水10min
冷却后,加入3.0ml水
以0.0ml标液那组为空白对照,测定即可得标准曲线
DNS溶液测糖含量
分类:实验基础知识
2007.2.3 10:20 作者:sunsaley | 评论:0 | 阅读:2451 仪器和设备
分析天平:感量。.lmg;
恒温水浴锅可控温40士1C;
721分光光度计;
容量瓶:100mL ;
移液管:ImL,2mL,lOMI。
C5 试剂和溶液
C5.1 to%(v/v)磷酸盐缓冲液(pH= 6.8):配制与B3.1 相同 C5.2 DNS溶液
溶解 1 g3 ,5一二硝基水杨酸、。2g苯P,O.03 g亚硫酸钠、lg氢氧化钠、20g酒石酸钾钠
于蒸馏水中
并加热,冷却定容到100m1_,贮于棕色瓶内,一周后用于作标准曲线(每次配制后要重新作标
准曲线)。
C5.3 1%(m/m)淀粉缓冲液
溶解 1g 可溶性淀粉于煮沸的蒸馏水中,再煮沸Imin,冷却,加lOmL1 0%磷酸盐缓冲液再
用蒸馏
水定容到99mL(用量筒定容)。
C6 标准曲线的绘制(采用DNS半量法)
准确 称 取 在105^-110C ’干燥后的葡萄糖50mg,用蒸馏水溶解定容到50mL,即为lmg/mL
葡萄糖
液,按下表比例在试管中操作后,开小火煮沸15min,冷却,加入10.5m I蒸馏水,在721分
光光度计
550nm波长处比色,读光密度值0.D值填入下表。
第一列 编号
mg
第二列 lmg/mL糖液量
m L
第三列 蒸馏水量
m L
第四列 DNS量
m L
第五。列 0.D值
0 0 0 0.5 1.5 1 0.1 0.1 0.4 1. 5
2 0. 2 0. 2 0. 3 1. 5 3 0. 3 0. 3 0. 2 1. 5 4 0.4 0. 4 0. 1 1.5 5 0. 5 0.5 0.0 1. 5 以读 出 的 光密度值(0.D值)为横坐标,含糖量为纵坐标,作出标准曲线
范文五:DNS法测还原糖
1、分析试剂
DNS 显色剂 每 1000mlDNS 溶液含有酒石酸钾钠 182g ,无水亚硫酸钠 3g ,氢氧化钠 20g , 3, 5-二硝基水杨酸 6.3g ,重蒸馏酚 4g 。配后过滤放置半月后使用。
1%葡萄糖标准溶液:准确称取 100mg 葡萄糖,用少量蒸馏水溶解后定容至 100ml ,冰 箱保存备用 .
10%ZnSO4溶液 .
2、器材
分光光度计,定糖管,移液管,容量瓶,烧杯,电炉等。
[方法步骤 ]
(一)葡萄糖标准曲线的绘制
取 9只定糖管(有盖子,且用绳子系住) ,分别按照下表 1的顺序加入各种试剂,沸水 浴中加热 5min ,后立即流动水冷却。
管内溶液混匀, 用空白管溶液调零点, 520nm 测定光密度值 (O.D.),以葡萄糖含量为 横坐标,光密度值为纵坐标绘制葡萄糖溶液标准曲线。
表 1 制作葡萄糖标准曲线时各试剂用量
样品液适当稀释,使糖浓度为 0.1-1.0mg/ml,取稀释后的糖液 1.0ml 于 15ml 刻度试管 中,加 DNS 试剂 2.0ml ,沸水煮沸 2min ,冷却后用水补足到 15ml 刻度,在 540nm 波长下 测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖 mg/ml数。求出样品中糖含量。