范文一:蛋白质性质实验
实验六 蛋白质的性质(二)蛋白质的等电点测定和沉淀反应 一、蛋白质等电点的测定 (一) 目的
1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。 (二)原理
蛋白质是两性电解质,在溶液中存在下列平衡:
蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶掖的pH达到一定数值时,蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等,在电场中,蛋白质既不向阴极移动,也不向阳极移动,此时溶液的PH值称为此蛋白质的等电点(p1)。不同的蛋白质有其各自的等电点。在等电点时,蛋白质的理化性质都有变化,可利用此种性质来测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是利用物质在达到等电点时溶解度最小的性质,测定蛋白质溶液的溶解度呈现最低时的溶液pH值,此时的pH倍即为该蛋白质的等电点。
本实验通过观察酪蛋白在不同pH溶液中的溶解度,来测定酪蛋白的等电点。用醋酸与醋酸钠配制成各种不同PH值的缓冲液.然后向各缓冲溶液中加入酪蛋白,观察沉淀出现并测定酪蛋白的等电点。 (三)实验器材 1、水浴锅。 2、温度计。
3、200mL锥形瓶。 4、100mL容量瓶。 5、移液管。 6、试管。 7、试管架。 8、研钵。
(四) 材料与试剂
1、0.5%酪蛋白醋酸钠溶液:取0.5g酪蛋白.加少量水在研钵中仔细地研磨,将所得的蛋白质液移入200 mL锥形瓶内,并用少量40~50℃的温水洗涤研钵,将洗涤液也移入锥形瓶内。加入10 mLlmol/L醋酸钠溶液。把锥形瓶放入50℃水浴中,并小心地旋转锥形瓶,直到酪蛋白完全溶解为止。将锥形瓶内的溶液全部移至100 mL
容量瓶内,加水至到度,塞
紧玻璃塞,混匀。
2、1mo1/L醋酸溶液。 3、0.1mo1/L醋酸溶液。 4、0.01mo1/L醋酸镕液. (五) 操作方法
2、。静置20min后,再观察每支试管内溶液的混浊度,以—、+、++,+++符号表示沉淀的多少,根据观察结果,指出那一个pH是酪蛋白的等电点。 二、蛋白质的沉淀及变性 (一)目的
1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 3、了解蛋白质变性与沉淀的关系。 (二)原理
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒,在一定的理化因素影响下,蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。 蛋白质的沉淀反应可分为两类。
1、可逆的沉淀反应:此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化,除去引起沉淀的因素后,沉淀的蛋白质仍能溶解于原来的溶剂中,并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇(或丙醇)短时间作用蛋白质等。一般在纯化蛋白质时,常利用此类反应。 2、不可逆沉淀反应:此时蛋白质分子内部结构发生重大改变,蛋白质因变性而沉淀,除去引起沉淀的因素后,蛋白质不再溶于原来溶剂中。如加热引起的蛋白质沉淀与凝固、蛋白质与重金属离子或某些有机园的反应等都属于此类。
但蛋白质变性后,有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在(如电荷),并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都已变性。 (三)材料与试剂
1、蛋白质样液;与双缩脲反应相同。 2、饱和硫酸铵溶液 3、固体硫酸铵。
4、5%Cu2SO4溶液。 5、3%AgNO3溶液。
6、0.1%Na0H溶液。 7、10%醋酸溶液。 8、95%酒精; 9、固体氯化钠。 10、1%醋酸溶液。 11、10%醋酸溶液。
12、10%氢氧化钠溶液。 13、饱和氯化钠溶液。 14、饱和鞣酸溶液。
15、5%三氯醋酸溶液。 (四)操作方法
1、蛋白质的盐析作用 (1)实验原理
一般蛋白质在高浓度盐溶液中溶解度下降,故向其溶液中加入中性盐至一定浓度时,蛋白质即自溶液中沉淀析出,此现象称为盐析。盐析作用与两种因素有关;①蛋白质分子被浓盐脱水;②分子所带电荷被中和。
用盐析方法沉淀蛋白质时,较少引起蛋白质变性,经透析或用水稀释时又可溶解,故 蛋白质的盐析作用是可逆过程。
盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及pH有关。分子量大的蛋白质(如 球蛋白)比分子量小的(如清蛋白)易于析出。球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中即可析出, 而清蛋白需在饱和硫酸铵溶液中才能析出。 (2)实验方法
①取鸡蛋清约2mI于试管中,加等体积的饱和硫酸铵溶液,搅拌均匀,即有蛋白质 析出.静置数分钟,用滤纸过滤,沉淀即为卵球蛋白。滤液若不澄清可重复过滤至澄清。 ②将上述卵球蛋白沉淀用2m1半饱和硫酸铵溶液洗涤一次,然后取少量沉淀(约火 柴头大小)放入1ml蒸馏水中,观察是否溶解,并用黄色反应鉴定之。
③将析出卵球蛋白后的滤液放于试管中.再加入固体硫酸铵使达到饱和,观察有无 沉淀析出,若有沉淀,则过滤之。滤液加热,并观察有无沉淀产生,记录结果,解释现 象。滤出的沉淀即为卵清蛋白,可取少量(火柴头大小)溶于lml蒸馏水,观察是否复溶,并用黄色反应鉴定之。
2、重金属盐类沉淀蛋白质 (1)实验原理
溶液pH在蛋白质等电点以上时,重金属盐类(如铅、铜、汞、银离子等)易与蛋白质结合成不溶性盐而沉淀。
重金属盐类沉淀蛋白质通常比较完全,故常用重金属盐除去液体中的蛋白质。但应注 意,在使用某些重金属盐(如硫酸铜或醋酸铅)沉淀蛋白质时,不可过量,否则将引起沉淀再溶解。
(2)实验方法
取试管4支,按下表所示滴加试剂。 加毕揺匀,观察各管中变化,记录结果并解释原因。若在1、2两管中加入过量Cu2SO4 和AgNO3试剂,又有何结果,观察并记录之。
3、酒精沉淀蛋白质 (1)实验原理
蛋白质不溶于某些有机溶剂(如乙醇、丙酮等),若向蛋白质水溶液中加入酒精使达 到一定浓度时,则蛋白质沉淀析出。酒精能使蛋白质胶体颗粒脱水,降低其在水溶液中的 稳定性,且沉淀不同蛋白质所需酒精浓度也不同。溶液中若加少量中性盐(如NaCl),沉 淀将更加迅速和完全。 (2)实验方法
①取试管1支加4滴蛋白质样液及一小撮(火柴头大小) NaCl晶体,摇匀使溶解。 ②向试管中徐徐加酒精数滴,强力振摇,观察结果并阐明其原理。 4、加热沉淀蛋白质 (1)实验原理
大多数蛋白质在加热时,由于空间结构被破坏而丧失其稳定性,因此变性凝固。 蛋白质的热变性作用与加热时间平行,并随温度的升高而加快。短时间加热可能不引起凝固。
加热时,盐类的存在及溶液酸碱度对蛋白质的凝固有很大影响。处于等电点状态的蛋 白质加热时凝固最完全、最迅速。在强酸强碱溶液中,蛋白质分子带有正电荷或负电荷, 虽加热也不凝固。但溶液中若有中性盐存在,则蛋白质可因加热而凝固。 (2)实验方法
取试管5支依下表所示添加试剂。
加毕混匀,将5支试管同时置于沸水浴中加热并观察现象,解释原因。 5、生物碱试剂沉淀蛋白质 (1)实验原理
生物碱是植物中具有显著生理作用的一类含氮的碱性物质。凡能便生物碱沉淀,或能与生物碱作用产生颜色反应的物质,称为生物碱试剂,如鞣酸、苦味酸和磷钨酸等。当蛋白质溶液PH值低于其等电点时,蛋白质为阳离子,能与生物碱试剂的阴离子结合成不溶性盐而沉淀。
(2)实验方法
取试管2支,按下表所示滴加试剂。
加毕混匀,观察并记录结果,解释原因。 三、思考题
1、在蛋白质等电点测定过程中,如何根据实验现象判断酪蛋白的等电点?为什么? 2、蛋白质盐析实验中,被硫酸铵析出的卵清蛋白,在加入蒸馏水后沉淀是否溶解? 3、为什么鸡蛋清可用作铅中毒和汞中毒的解毒剂?
4、被硝酸银沉淀的蛋白质,在加入少量水后,沉淀是否溶解?为什么? 5、被三氯乙酸沉淀的蛋白质,在加入少量水后,沉淀是否溶解?为什么?
范文二:蛋白质性质实验
生化试验指导
实验一:蛋白质及氨基酸的呈色反应
目的:
1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。
2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
(一) 双缩脲反应
实验原理
尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物,此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键,其结构与双缩脲相似,也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。
? 一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应,但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
实验器材及试剂
器材:
试管、酒精灯、试管夹、试管架
试剂:
(1)尿素
(2)10%氢氧化钠溶液
(3)1%硫酸铜溶液
(4)2%卵清蛋白溶液
实验步骤
1.取少量尿素结晶,放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时,停止加热,尿素放出氨,形成双缩脲。冷后,加10%氢氧化钠溶液约1毫升,振荡混匀,再加1%硫酸铜溶液1滴,再振荡。观察出现的粉红颜色。避免添加过量硫酸铜,否则,生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
2.向另一试管加卵清蛋白溶液约l毫升和10%氢氧化钠溶液约2毫升,摇匀,再加1%硫酸铜溶液2滴,随加随摇,观察紫玫色的出现。
(二)茚三酮反应
实验原理
? 除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外,所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
? 该反应十分灵敏,1:1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应,是一种常用的氨基酸定量测定方法。
? 茚三酮反应分为两步,第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛,水合茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分于和氨缩合生成有色物质。
实验器材及试剂
器材:
试管、酒精灯、试管夹、试管架
试剂:
(1)蛋白质溶液:2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清:水=1:9)
(2)0.5%甘氨酸溶液
(3)0.1%茚三酮水溶液
(4)0.1%茚三酮—乙醇溶液
实验步骤
(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升,再各加0.5毫升0.1%茚三酮水溶液,混匀,在沸水浴中加热1—2分钟,观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
(2)在一小块滤纸上滴一滴0.5%的甘氨酸溶液,风干后,再在原处滴上一滴0.1%的茚三酮乙醇溶液在微火旁烘干显色,观察紫红色斑点的出现。
(三)黄色反应
实验原理
含有苯环结构的氨基酸,如酪氨酸和色氨酸遇硝酸后,可被硝化成黄
色物质,该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。反应
式如下:
? 实验器材及试剂
器材:
试管、酒精灯、试管夹、试管架
试剂:
(1)鸡蛋清溶液 将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1:20混匀,然后用六层
纱布过滤。
(2)大豆提取液 将大豆浸泡充分吸胀后研磨成浆状用纱布过滤。
(3)头发 (4)指甲 (5)0.5%苯酚溶液
(6)浓硝酸 (7)0.3%色氨酸溶液
(8)0.3%酪氨酸溶液 (9)10%氢氧化钠溶液
实验步骤
向7个试管中分别按下表加入试剂,观察各管出现的现象,有的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后,于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性,观察颜色变化。
(四)考马斯亮蓝反应
实验原理
考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中,其以游
离态存在,呈棕红色;在偏中性溶液中呈蓝黑色;当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。
在0.01~1.0mg蛋白质范围内,蛋白质浓度与A595nm值成正
比。常用来测定蛋白质含量。
实验器材及试剂
器材:
试管、移液管、试管架
试剂:
(1)考马斯亮蓝染液
(2)蛋白质样品
思考题
1.通过本次试验,你掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法?它们的
原理?
2.从本次实验的每个实验中,应该注意的事项都有哪些?
实验二 蛋白质的等电点测定和沉淀反应
一、蛋白质等电点的测定
实验目的
(1)了解蛋白质的两性解离性质。
(2)学习测定蛋白质等电点的一种方法。
实验原理
蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡
蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的pH达到一定数值时,蛋白质颗粒上正负电荷的数日相等,在电场中,蛋白质既不向阴极移动,也不向阳极移动,此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时,蛋白质的理化性质都有变化,可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验借观察在不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋酸与酷酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH值的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后,沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
实验器材及试剂
器材:
水浴锅、温度计、200毫升锥形瓶、100毫升容量瓶、吸管、试管、试管架、乳钵
试剂:
(1)0.4%酪蛋白醋酸钠溶液
(2)1.00摩尔/升醋酸溶液
(3)0.10摩尔/升醋酸溶液
(4)0.01摩尔/升醋酸溶液
实验步骤
(1) 取同样规格的试营4支,按下表颠序分别精确地加入各试剂,然后混匀。
(2) 向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1毫升,加一管,摇句一管。此时1、2、3、4管的pH值依次为5.9、5.3、4.7、3.5。观察其混浊度。静置10分钟后,再观察其混浊度。最混浊的一管的pH即为酪蛋白的等电点。
二、蛋白质的沉淀及变性
实验目的
(1)加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
(2)了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
(3)了解蛋白质变性与沉淀的关系
实验原理
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒,在一定的理化因素影响下,蛋白质颖拉可因失去电荷和脱水而沉淀。
? 蛋白质的沉淀反应可分为两类。
? (1)可逆的沉淀反应;
? (2)不可逆沉淀反应;
实验器材及试剂
试剂:
(1)蛋白质溶液
(2)pH4.7醋酸—醋酸钠的缓冲溶液
(3)3%硝酸银溶液
(4)5%三氯乙酸溶液
(5)95%乙醇
(6)饱和硫酸铵溶液
7)硫酸铵结晶粉末
(8)0.1mol/L盐酸溶液
(9)0.1mol/L氢氧化钠溶液
(10)0.05碳酸钠溶液
(11)0.1mol/L醋酸溶液
(12)甲基红溶液
实验步骤
(1)蛋白质的盐析。
无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)浓溶液能析出蛋白质。盐的
浓度不同,析出的蛋白质也不同。
如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出,而清蛋白则在饱和硫酸
铵溶液中才能析出。
加5%卵靖蛋白溶液5毫升于试管中,再加等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混蚀沉淀,加少量水,是否溶解,为什么?
(2)重金属离子沉淀蛋白质
重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。取一支试管,加入蛋白质溶液2毫升,再加3%硝酸银溶液1~2滴,振荡试管,有沉淀产生。放置片刻,倾出上消液,向沉淀中加入少量的水,沉淀是否溶解?为什么?
(3)某些有机酸沉淀蛋白质
取一支试管,加入蛋白质溶液2毫升,再加入1毫升5%三氯乙酸溶液,振荡
试管,观察沉淀的生成。放置片刻,倾出上清液,向沉淀中加入少量水,观察沉淀是否溶解。
(4)有机溶剂沉淀蛋白质
取一支试管,加入2毫升蛋白质溶液,再加入2毫升95%乙醇。混匀,观察沉淀的生成。
思考题
1.通过本实验你掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法?它们的原理?
2.测定pI有什么意义?pI是固定常数的吗?
3.解释下列名词:水化层;双电层;蛋白质变性;盐溶与盐析;蛋白
质等电点沉淀。
4.根据实验现象,讨论下列问题:
1) 蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的本质区别是什么?
2)简述蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的相互关系。
实验四 氨基酸的分离鉴定―纸层析法
实验目的
1.通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及操作方法
2.掌握氨基酸纸上层层析法的操作技术(点样、平衡、展层、显色、鉴定)
实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
层析溶剂由有机溶剂和水组成。
物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的:
Rf = 原点到层析中心的距离 / 原点到溶剂前沿的距离
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的
结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本
实验利用纸层析法分离氨基酸。
实验器材及试剂
器材:
层析缸、毛细管、喷雾器、培养皿、层析滤纸
试剂:
1.扩展剂 是4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物。将20mL正丁醇和5mL冰醋酸放人分液漏斗中,与15mL水混合,充分振荡,静置后分层,放出下层水层。取漏斗内的扩展剂约5mL置于小烧杯中做平衡溶剂,其余的倒人培养皿中备用。
2.氨基酸溶液 0.5%的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0.5%)。
3.显色剂:50~lOOmL0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。
实验步骤
1.将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。
2.取层析滤纸(长22 cm、宽14 cm)一张。在纸的一端距边缘2~3 cm处用铅笔划一直线,在此直线上每间隔2cm作一记号。
3.点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这6个位置上,干后再点一次。每点在纸上扩散的直径,最大不超过3mm。
4.扩展 将滤纸折成W状,纸的两边不能接触。将盛有约20 mL扩展剂的培养皿,迅速置于密闭的层析缸中,并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下,扩展剂的液面需低于点样线1cm)。待溶剂上升15―20 cm时即取出滤纸,铅笔描出溶剂前沿界线,自然干燥或用吹风机热风吹干。
5.显色 用喷雾器均匀喷上0。1%茚三酮正丁醇溶液,然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
6.计算各种氨基酸的Rf值。
思考题
1. 何谓纸层析法?
2. 2.何谓及f值?影响只f值的主要因素是什么?
3. 3.怎样制备扩展剂?
实验五 酪蛋白的制备
实验目的
1.学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
2.掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
实验原理
牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物,等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理,将牛乳的pH调至4.7时,酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物,除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
? 实验器材及试剂
器材:
? 离心机、抽滤装置、精密pH试纸或酸度计、电炉、温度计
试剂:
1.新鲜牛奶
2.95%乙醇
3.无水乙醚
4.0.2mol/L pH4.7醋酸——醋酸钠缓冲液
5.乙醇——乙醚混合液:乙醇∶乙醚=1 ∶ 1(V/V)
实验步骤
一)酪蛋白的粗提
100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL,用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟(3000 r /min)。弃去清液,得酪蛋白粗制品。
(二)酪蛋白的纯化
1.用水洗涤沉淀 3次,离心10分钟(3 000r/min),弃去上清液。
2.在沉淀中加入30mL乙醇,搅拌片刻,将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次,抽干。
3.将沉淀摊开在表面上,风干;得酪蛋白纯品
(三)准确称重,计算含量和得率。
含量:酪蛋白g/100 mL牛乳(g%)
式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
测得含量/理论含量 x100%
式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
思考题
1.制备高产率纯酪蛋白的关键是什么?
2试设计另一种提取酪蛋白的方法
实验六 酶的特性
实验目的
1. 加深对酶的性质的认识。
(一)温度对酶活力的影响
实验原理
酶的催化作用受温度的影响,在最适温度下,酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为37~40℃,植物酶的最适温度为50~60℃。
酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂,虽加热到100℃,其活性并无明显改变,但在I100℃的溶液中却很快地完全失去活性。 低温能降低或抑制酶的活性,但不能使酶失活。
实验器材及试剂
器材:
? 试管及试管架、恒温水浴、冰浴、沸水浴
试剂:
(1)0.2%淀粉的0.3%氮化钠溶液。需新鲜配制。
(2)稀择50倍的唾液。用蒸馏水漱口,以清除食物残渣、再含一口蒸馏水,半分钟后使其流入量简并稀碌50倍,(稀释倍数可根据各人唾液淀粉酶活性调整)混匀备用。
(3)碘比钾—碘溶液。将碘化钾20克及碘10克溶于100毫升水中。使用前稀释10倍。
淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小,退碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遏碘不呈颜色,麦芽糖遏碘也不呈色。在不同温度下,淀粉被唾液淀粉酶水解的程度,可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
实验步骤
淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小,退碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遏碘不呈颜色,麦芽糖遏碘也不呈色。在不同温度下,淀粉被唾液淀粉酶水解的程度,可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
取3支试管,编号后按下表加入试剂:
摇匀后,将1号、3号两试管放人37℃恒温水浴中,2号试管放人冰水中。10分钟后取出,(将2号管内液体分为两半)用碘化钾—碘溶液来检验1、2、3管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果,将二号管剩下的一半镕液放人37℃水浴中继续保温10分钟后,再用碘液实验,结果如何?
(二) pH 对酶活力的影响
实验原理
1. 原理
酶的活力受环境 pH 的影响极为显著;不同酶的最适pH值不同。本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响,唾液淀粉酶的最适 pH 约为6.8。
实验器材及试剂
器材:
? 试管及试管架、吸管、滴管、50毫升锥形瓶、恒温水浴。
试剂:
? (1)新配制的溶于0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液
? (2)稀释50倍的新鲜唾液
? (3)0.2摩尔/升磷酸氢二钠溶液
? (4)0.1摩尔柠檬酸溶液
? (5)碘化钾—碘溶液
? (6)pH试纸:pH=5、pH=5.8、pH=6.8、PH=8四种
实验步骤
? 1.取4个标有号码的50毫升锥形瓶。用吸管按下表添加0.2摩尔/升磷酸氢二钠溶液和0.1摩尔/升柠檬酸溶液以制备pH5.0一8.0的四种缓冲液。 ? 2.从四个锥形瓶中各取缓冲液3毫升,分别注入4支带有号码的试管中,随后于每个试管中添加0.5%淀粉溶液2毫升和稀释50倍的唾液2毫升。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔各为1分钟。将各试管内容物混匀,井依次置于37℃恒温水浴中保温。
? 3.第四管加入唾液2分钟后,每隔I分钟由第3管取出一滴混合液,置于白瓷板上,加1小滴碘化钾—碘溶液,检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时,向所有试管依次添加1—2滴碘化钾—碘溶液。添加碘化钾—碘溶液的时间间隔,从第一管起,亦均为1分钟。
? 4.观察各试管内容物呈现的颜色,分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。 ?
(三)唾液淀粉酶的活化和抑制
实验原理
酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂,铜离子为其抑制剂。
实验器材及试剂
器材:
? (1)恒温水浴
? (2)试管及试管架
试剂:
? (1) 0.1%淀扮溶液
? (2)稀释50倍的新鲜唾液
? (3)1%氯化钠溶液
? (4)1%硫酸铜镕液
? (5)1%硫酸钠溶液
? (6)碘化钾—碘溶液
实验步骤
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?
?
? (四)酶的专一性
实验原理
? 酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例,来说明酶的专一性。
? 淀粉和蔗糖无还原性,唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖,但不能催化蔗糖的水解,蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性葡萄糖和果糖,但不能催化淀粉的水解,用Benedict 试剂检查糖的还原性。
? 实验器材及试剂
? 器材:
? 恒温水浴、沸水浴、试管及试管架
? 试剂:
? (1)2%蔗糖溶液
? (2)溶于0.3%的氯化钠的1%淀粉溶液 (需新鲜配制) ? (3)稀释50倍的新鲜唾液 ? (4)蔗糖酶溶液
? (5)Benedict氏试剂 ?
? 实验步骤
思考题
? 1.什么是酶的最适温度及其应用意义?
? 2.什么是酶反应的最适pH?对酶活性有什么影响? ? 3.什么是酶的活化剂?
? 4.什么是酶的抑制剂?与变性剂有何区别?
实验七 底物浓度对酶促反应速度的影响—米氏常数的测定
实验目的
1.了解底物浓度对酶促反应的影响。 2.掌握测定米氏常数Km的原理和方法。 实验原理
酶促反应速度与底物浓度的关系可用米氏方程来表示: 式中,v──反应初速度(微摩尔浓度变化/min);
V──最大反应速度(微摩尔浓度变化/min); [S]──底物浓度(mol/L); Km──米氏常数(mol/L)。 实验原理
这个方程表明当已知Km及V时,酶反应速度与底物浓度之间的定量关系。Km值等于酶促反应速度达到最大反应速度一半时所对应的底物浓度。不同的酶Km值不同,同一种酶与不同底物反应Km值也不同,
Km值可近似的反应酶与底物的亲和力大小:Km值大,表明亲和力小;Km值小,表明亲合力大。测Km值是酶学研究的一个重要方法。大多数纯酶的Km值在0.01~100mmol/L。Linewaeaver―Burk作图法(双倒数作图法)是用实验方法测Km值的最常用的简便方法: ? 本实验以胰蛋白酶消化
? 酪蛋白为例,采用Linewaeaver―Burk双倒数作图法测定Km值。
? 胰蛋白酶催化蛋白质中碱性氨基酸(L-精氨酸和L-赖氨酸)的羧基所形成的肽键水解。水解时有自由氨基生成,可用甲醛滴定法判断自由氨基增加的数量而跟踪反应,求得初速度。 实验器材及试剂 器材:
? 50mL三角瓶、150mL三角瓶、吸管5mL,10mL、量筒100mL、25mL碱式滴定管及滴定台、蝴蝶夹、恒温水浴、滴管 试剂:
10~40g/L酪蛋白溶液(pH8.5)、中性甲醛溶液、0.25%酚酞加50%乙醇溶液、标准0.1M NaOH溶液、胰蛋白酶溶液 实验步骤
.取50mL三角瓶4个,加入5mL甲醛与1滴酚酞,以0.1M标准NaOH滴定至微红色,4个瓶颜色应当一致,编号。
2.量取40g/L酪蛋白50mL,加入一150mL三角瓶,37℃保温10分钟,同时胰蛋白酶液也在37℃保温10分钟,然后吸取5mL酶液加到酪蛋白液中。(同时计时!)充分混合后立即取出10mL反应液(定为0时样品)加入一含甲醛的小三角瓶中(1号)加10滴酚酞;以0.1M NaOH滴定至微弱而持续的微红色。在接近终点时,按耗去的NaOHmL数,每mL加一滴酚酞,再继续滴至终点,记下耗去的0.1M标准NaOH mL数。
2分钟、4分钟、6分钟时,分别取出10mL反应液,加入2号、3号、4号小三角瓶,同上操作,记下耗去NaOH mL数。
以滴定度(即耗去的NaOH mL数)对时间作图,得一直线,其斜率即初速度为V40(相对于40g/L的酪蛋白浓度)。
4.然后分别量取30g/L、20g/L、10g/L的酪蛋白溶液,重复上述操作,分别测出V30、V20、V10。
利用上述结果,以1/v对1/[s]作图,即求出V与Km值。
3.在 (1)实验表明,反应速度只在最初一段时间内保持恒定,随着反应时间的延长,酶促反应速度逐渐下降。原因有多种,如底物浓度降低,产物浓度增加而对酶产生抑制作用并加速逆反应的进行,酶在一定pH及温度下部分失活等。因此,研究酶的活力以酶促反应的初速度为准。
(2)本实验是一个定量测定方法,为获得准确的实验结果,应尽量减少实验操作中带来的误差。因此配制各种底物溶液时应用同一母液进行稀释,保证底物浓度的准确性。各种试剂的加量也应准确,并严格控制准确的酶促反应时间。
思考题
1.试述底物浓度对酶促反应速度的影响。
2.在什么条件下,测定酶的Km值可以作为鉴定酶的一种手段,为什么? 3.米氏方程中的Km值有何实际应用?
实验十三小麦萌发前后淀粉酶活力的比较
实验目的
1.学习分光光度计的原理和使用方法。 2.学习测定淀粉酶活力的方法。
3.了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化 实验原理
休眠种子的淀粉酶活力很弱,种子吸胀萌动后,酶活力逐渐增强,并随着发芽天数的增长而增加。 实验器材及试剂 器材:
离心机、离心管、研钵、电炉、容量瓶、恒温水浴、20mL 具塞刻度试管、试管架、刻度吸管、分光光度计 试剂:
小麦种子、标准麦芽糖溶液(1mg/mL)、pH 6.9,0.02mol/L磷酸缓冲液、1%淀粉溶液、1% 3,5-二硝基水杨酸试剂、1%氯化钠溶液、海砂 实验步骤
1.种子发芽 小麦种子浸泡2.5小时后,放入25℃恒 温箱内或在室温下发芽。 2.酶液提取 取发芽第3或第4天的幼苗15株,放入乳钵内,加海砂 200 mg,加1%氯化钠溶液10 mL,用力磨碎。在室温下放置20分钟,搅拌几次。然后将提取液离心(1500 r/min)6~7分钟。将上清液倒入量筒,测定酶提取液的总体积。进行酶活力测定时,用缓冲液将酶提取液稀释10倍。
取干燥种子或浸泡2.5小时后的种子15粒作为对照(提取步骤同上)。 3.酶活力测定
(1)取25mL刻度试管4支,编号。按下表要求加入各试剂(各试剂须在25℃预热10分钟
将各管混匀,放在25℃水浴中,保温3分钟后,立即向各管中加入10%3,5-二硝基水杨酸溶液2 mL。
(2)取出各试管,放入沸水浴中加热5分钟。冷至室温,加水稀释至25 mL。将各管充分混匀。
(3)用空白管作对照:在A500nm处①测定各管的光吸收值。 4.计算
根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系,即:
A标准/B未知=C标准/C未知
式中:c为浓度;A为光吸收值。
本实验规定:25℃时3分钟内水解淀粉释放1mg麦芽糖所需的酶量为1个酶活力单位。则15粒种子或15株幼苗的总活力单位=c酶×n酶×V酶 式中:c酶为酶液中麦芽糖的浓度; n酶为酶液稀释倍数;V酶为提取酶液的总体积。 思考题 ? 1.为什么此酶提纯整个过程在0~5℃条件下进行?而测酶活力时要在25℃预保温?反应后又放入沸水浴中? ? 2.实验结果说明什么?
范文三:蛋白质的性质实验
蛋白质的性质实验
【目的和要求】1. 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。2. 了解蛋白质的两性解离性质。初步学会测定蛋白质等电点的方法。3. 加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识,了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。【实验原理】(一) 蛋白质及氨基酸的呈色反应蛋白… 【目的和要求】
1. 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。
2. 了解蛋白质的两性解离性质。初步学会测定蛋白质等电点的方法。
3. 加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识,了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。
【实验原理】
(一) 蛋白质及氨基酸的呈色反应
蛋白质所含有的某些氨基酸具有特殊结构,可以与某些试剂反应,生成有色物质。 1. 双缩脲反应
尿素被加热至 180?左右时,两分子尿素缩合放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性
2+条件下可与Cu结合生成复杂的紫红色化合物。此反应称为双缩脲反应。
所有含有两个或两个以上肽键的化合物均有此反应。
蛋白质或二肽以上的多肽分子中,含有多个与双缩脲结构相似的肽键,因此也有双缩脲反应,可用此法鉴定蛋白质的存在或测定其含量。
2. 茚三酮反应
蛋白质、多肽和各种氨基酸具有茚三酮反应。除无α-氨基的脯氨酸和羟脯氨酸呈黄色外,其他氨基酸生成紫红色,最终为蓝色化合物。
除蛋白质、多肽和各种氨基酸能进行茚三酮反应外,氨、β-丙氨酸和许多一级胺化合物都有此反应。该反应灵敏度达1:1500 000(pH5-7)。现已广泛地用于氨基酸定量测定。 3. 黄色反应
凡是含有苯基的化合物都可与浓硝酸反应产生黄色化合物。芳香族氨基酸及含有酪氨酸和色氨酸的蛋白质分子具有此反应。苯丙氨酸很难反应,需加少量浓硫酸才有黄色反应。 (二) 蛋白质的两性反应及等电点的测定
蛋白质和氨基酸一样是两性电解质。调节溶液的酸碱度达到一定的离子浓度时,蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等,以兼性离子状态存在,在电场内该蛋白质分子既不向阴极移动,
也不向阳极移动,这时溶液的 pH 值称为该蛋白质的等电点(pI)。当溶液的pH值低于蛋白
+ 质等电点时,即在 H较多的条件下,蛋白质分子带正电荷成为阳离子,当溶液的pH值大
—于等电点时,即在OH较多的条件下,蛋白质分子带负电荷成为阴离子。
本实验采用蛋白质在不同 pH 溶液中形成的混浊度来确定其等电点,在等电点时蛋白质溶解度最小,最容易沉淀析出。
食品检验—氨基酸总量测定
蛋白质经水解或酶解可由大分子变成小的pro成分,如水解后的产物经胨,肽等最后成为氨基酸,氨基酸是构成pro最基本的物质。
水解后的pro和水解前的pro在物理特性,化学结构以及被吸收消化的程度上是很不相同的,其差别与水解的程度有密切关系,分析氨基酸的含量就可以知道水解的程度,也就可以评价食品的营养价值。
氨基酸不是单纯的一种物质,用氨基酸分析仪可直接测定出17种氨基酸(仪器价格昂贵,不能普遍使用),对于食品来说有时有很多种氨基酸可以同时存在于一种食品中,所以需要测定总的氨基酸量,它们不能以氨基酸百分率来表示,只能以氨基酸中所含的氮(氨基酸态氮)的百分率表示,当然,如果食品中只含有一种氨基酸,如味精中的谷氨酸,就可以从含氮量计算出氨基酸的含量。
食品在评价蛋白质的营养价值时,除了测定pro的含量,氨基酸氮含量,还需要对各种氨基酸进行分离,鉴定,尤其对8种人体必需氨基酸进行定量定性分析。
一(单指示剂甲醛滴定法:
1原理:氨基酸具有酸,碱两重性质,因为氨基酸含有-COOH基,而-COOH基显示酸性,又含有-NH,-NH则显示碱性,由于-COOH基和-NH2的相互作用,使氨基酸成为中性的内盐,22
当加入甲醛溶液时,-NH2与甲醛结合,其碱性消失,破坏内盐的存在,就可用碱来滴定-COOH基,以间接方法测定氨基酸的量,反应式以三种形式存在。
用碱完全中和-COOH基时的PH值为8.4~9.2。
2试剂:
(1)40%中性甲醛溶液:以百里酚酞作指示剂,将甲醛用1N NaOH溶液中和(淡兰色)。(2)0.1%百里酚酞乙醇溶液。
(3)0.100N NaOH标准溶液。
3操作步骤:
称约含20mg左右的氨基酸?于烧杯中(如为固体样加水50ml)?加两滴指示剂?用0.1N
NaOH溶液滴定到淡兰色?加中性甲醛20ml?摇匀?静置1分钟?此时兰色应消失?再用0.1N NaOH溶液滴定淡兰色,记录两次滴定所消耗的碱液毫升数。
计算:氨基酸态氮=(N×V×0.014×100)/W×100
二(双指示剂甲醛滴定法
1原理:
与单色法相同,只是在此法中使用了两种指示剂,从分析结果看,双指示剂甲醛滴定法与 亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂,但准确,不作介绍)相近,单色滴定法稍偏低,主要 因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点,PH值为7.0,从理论计
算看,双色滴定法比单色滴定法准确。
2试剂:同单指示剂一样,多一个0.1%中性红(50%乙醇溶液)
3操作步骤:
取相同两份样品?分别于100ml三角瓶?一份加中性红2滴?用0.1N NaOH滴定终点(由红 变琥珀色),记录用量,另一份加百里酚酞乙醇液3滴加中性甲醛20ml?摇匀?用0.1N NaOH 滴至淡兰色。
计算:
氨基酸态氮=(N×(V2-V1)×0.014×100)/W×100
V1——用中性红为指示剂时,碱液所消耗的体积
V2——用百里酚酞乙醇液为指示剂时标液消耗量
0.014——氮的毫克当量浓度
注意事项:
(1)单色指示剂甲醛滴定法,用碱完全中和—COOH基时的pH为8.5—9.5 (2)测定样品的颜色较深,应加活性炭脱色之后再滴定
三(茚三酮比色法:
1原理:氨基酸在一定pH范围内,能与茚三酮生成兰紫色化合物。可以用比色法定量测定。 2试剂:
(1)磷酸缓冲液(pH.8.04)制备方法如下:
称磷酸二氢钾4.5350g。定容500ml
称NAHPO?12HO 11.9380g分别溶解定容500ml 242
取磷酸二氢钾10ml与磷酸氢二钠190ml混合即为pH8.04的缓冲液
(2)2%茚三酮溶液:
称茚三酮1g?溶于35ml热水?加入40mg氯化亚锡(SnCl?HO)搅拌过滤(作防腐剂)? 22
于冷暗处过夜?定容50ml
? 氨基酸标液
称干燥氨基酸(如异亮氨酸)0.2000g?溶解定容100ml?摇匀?吸10ml于另外100ml容量瓶
定容100ml,即得200Ug/ml标液
3操作方法:
(1)绘制标准曲线:
取7个25ml容量瓶,吸取标液 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0ml于7个25ml容量瓶,加水补充 至容积为4ml,然后加茚三酮和缓冲液各1ml,于水浴加热15分钟,冷却后定容25ml,静置
15分钟,在570nm下测消光值,绘制标准曲线。
(2)样品测定:
取样品5.00~10.0g(液体样5-10ml)?于烧杯中?加50ml水和活性碳约5g?加热过滤?用 30—40ml热水洗涤活性炭?吸澄清样液1~4ml?加茚三酮和缓冲液各1ml水浴加热15分钟, 冷却定容,静置15分钟于570nm下测定消光值,按下式计算氨基酸含量。 氨基酸含量(毫克/100克)=C/(W×1000)×100
C——从标准曲线上查得得氨基酸的量(Ug)
W——测定得样品溶液相当于样品的量(g)
注意事项:
茚三酮受阳光、温度、湿度、空气等影响易被氧化呈淡红或深红色,使用前要进行纯 化,方法如下:、
取10g茚三酮容于40ml热水中,加一克活性炭,摇匀静置30分钟,过滤,将滤液放入冰箱中
过滤,即出现兰色结晶,过滤,用2ml冷水洗涤结晶,置干燥皿中干燥,装瓶备用。 思考题:
1 试述蛋白质测定中,样品消化过程所必须注意的事项,消化过程中内容物颜色发生什么变化,为什么,
2 样品经消化进行蒸馏前,为什么要加入氢氧化钠,这时溶液发生什么变化,为什么,如果没有变化,说明什么问题,须采用什么措施,
3 硫酸铜及硫酸钾在测定中起了什么作用,
4 试述氨基酸态氮的测定原理。?
5 结果计算中为什么要乘上蛋白质系数,
实验:?水果中酸度的测定。
?糕点中和脂肪的测定。
范文四:蛋白质的性质实验(一)
蛋白质的性质实验(一)
蛋白质及氨基酸的呈色反应
一、目的
1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。 2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 二、呈色反应 (一)双缩脲反应 1.原理
尿素加热至180℃左右,生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物,此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键,其结构与双缩脲相似,也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。 双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。含有
一个肽键和一个—CS—NH2,—CH2—NH2,—CRH—NH2,—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团的物质以及
一切蛋白
质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应,但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。 2.试剂 3.操作
取少量尿素结晶,放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时,停止加热,尿素放出氨,形成双缩脲。冷后,加10%氢氧化钠溶液约1mL,振荡混匀,再加1%硫酸铜溶液1滴,再振荡。观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸铜,否则,生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
向另一试管加卵清蛋白溶液约1mL和10%氢氧化钠溶液约 2 mL,摇匀,再加1%硫酸铜溶液2滴,随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。
(二)茚三酮反应 1.原理
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外,所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此,虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应,但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中,应严防干扰物存在。
该反应十分灵敏,1∶1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应,是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步,第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛,水合茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
此反应的适宜pH为5~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同,酸度过大时甚至不显色。 2.试剂 3.操作
(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液mL,再各加 0.5 mL 0.1%茚三酮水溶液,混匀,在沸水浴中加热1~2分钟,观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
(2)在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液,风干后再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液,在微火旁烘干显色观察紫红色斑点的出现。 (三)黄色反应 1.原理
含有苯环结构的氨基酸,如酪氨酸和色氨酸,遇硝酸后,可被硝化成黄色物质,该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。反应式如下:
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸,所以有黄色反应,苯丙氨酸不易硝化,需加入少量浓硫酸才有黄色反应。 2.试剂
(1)鸡蛋清溶液 100 mL
将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1∶20混匀,然后用6层纱布过滤。 (2)大豆提取液 100 mL
将大豆浸泡充分吸胀后研磨成浆状再用纱布过滤。 (3)头发 (4)指甲
(5)0.5%苯酚溶液 50mL 3.操作
向7个试管中分别按下表加入试剂,观察各管出现的现象,有的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后,于室温下逐滴加入 10%氢氧化钠溶液至碱性,观察颜色变化。
(四)考马斯亮蓝反应 1.原理
考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中,其以游离态存在呈棕红色;当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。
它染色灵敏度高,比氨基黑高3倍。反应速度快,约在2分钟左右时间达到平衡,在室温一小时内稳定。在0.01~1.0mg
蛋白质范围内,
2.试剂
(1)蛋白质溶液(鸡蛋清∶水=1∶20)5 mL (2)考马斯亮蓝染液 300 mL
考马斯亮蓝G250100g溶于50 mL 95%乙醇中,加100mL85%磷酸混匀,配成原液。临用前取原液15 mL,加蒸馏水至100 mL,用粗滤纸过滤后,最终浓度为0.01%。 3.操作
取2支试管,按下表操作
思考题
通过本实验你掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法?它们的原理?
范文五:探究实验:蛋白质的性质
探究蛋白质的性质实验
一、实验目的
通过本实验定性地了解蛋白质的主要功能性质。
实验准备:鸡蛋白溶液的配制:把一只鸡蛋的两端各扎一个小孔。从上面的孔吹气,使鸡蛋白从下面的孔流入量筒中。取5毫升蛋白,放入烧杯中,加30毫升蒸馏水,即成1:6的鸡蛋白胶体溶液。
二、实验步骤与实验方法
(一)、蛋白质的盐析
实验用品:鸡蛋白溶液、饱和硫酸铵或硫酸钠溶液、试管、胶头滴管等。 实验方法:
1、取一只试管注入2毫升的鸡蛋白溶液,慢慢的沿着试管壁加入2~4毫升饱和硫酸铵溶液,便有乳白色的沉淀析出。(为什么?因为盐析作用)
说明:向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐溶液后,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,只种作用叫做盐析。
2、将2毫升的带沉淀的溶液加入6~8毫升的蒸馏水中,沉淀逐渐溶解,证明盐析是个可逆过程。
实验结论:盐析出的蛋白质仍然可以溶解在水中,说明蛋白质盐析后并不影响原来蛋白质的性质。
(二)蛋白质的变性
实验用品:鸡蛋白溶液、硫酸铜、甲醛、酒精灯、试管夹等
实验方法:
1、 加热:取一只试管加入2毫升鸡蛋白,把试管放在酒精灯上加热,看到的现象是蛋白质凝结。把凝结的蛋白质放入盛有蒸馏水的试管中,凝结的蛋白不溶解。说明:蛋白质受热后会发生变性;受热作用下蛋白质的变性是不可逆的。
2、 加入重金属盐:取一只试管加入2毫升鸡蛋白,用滴管滴入重金属盐如硫酸铜,试管中的蛋白质凝结。把凝结的蛋白质放入盛蒸馏水的试管中,凝结的蛋白质不溶解。说明:在重金属盐的作用下的蛋白质的变性是不可逆的。
3、 加入有机化合物:取一只试管加入2毫升鸡蛋白,用滴管加入2毫升的甲醛溶液,看到的现象是试管中的蛋白质凝结。把凝结的蛋白质放入盛蒸馏水的试管中,凝结的蛋白质不溶解。
实验结论:蛋白质变性的条件是受热、重金属盐以及一些有机化合物如甲醛、苯甲酸等。
(三)、蛋白质的颜色反应
实验用品:鸡蛋白溶液、浓硝酸、酒精灯、试管、试管夹等。
实验方法:取一只试管加入1毫升的鸡蛋白溶液,用滴管滴入几滴浓硝酸,震荡,无明显现象,用酒精灯微热后,蛋白质凝结,变黄。
实验说明:浓酸能使蛋白质变性,且硝酸能使蛋白质变黄。此实验常用来验证蛋白质的存在。
问题思考:
1、 蛋白质的盐析和变性是否影响了原来蛋白质的性质?
2、 如何检验豆腐中蛋白质的存在?(滴加浓硝酸,看到豆腐呈现黄色,说明豆腐中的蛋白质和浓硝酸发生了颜色反应。)
3、 怎样区别棉线和毛线?(棉线的成分主要是纤维素,毛线的成分是蛋白质,用灼烧的方法可以鉴别纤维素和蛋白质,蛋白质灼烧有烧焦羽毛的气味。)