教学目标与要求
掌握:血浆中几种重要蛋白质的性质及其临床应用;血清蛋白质电泳组分的临床分析;高尿酸血症和痛风的发生机制;血清总蛋白、清蛋白、蛋白电泳的检测方法。 熟悉:血浆蛋白质的种类及生理功能;原发性和继发性氨基酸代谢紊乱的概念;含硫氨基酸检测的临床意义。
了解:苯丙酮酸尿症、酪氨酸血症、嘌呤核苷酸代谢紊乱。
第一节 血浆蛋白质及其代谢紊乱
蛋白质是人体中含量和种类最多的物质,蛋白质占人体干重的45,,种类约有10万之多。几乎在所有的生理过程中蛋白质都起着关键作用。 血浆蛋白质是血浆固体成分中含量最多的一类化合物,目前已有所了解的血浆蛋白质约有500种。
血浆蛋白的IEF/SDS-PAGE电泳图谱
取一滴血浆在电泳板的左下角点样。
先在水平方向进行等电聚焦电泳(IEF),接着在垂直方向进行SDS-PAGE。 一、血浆蛋白质的种类
盐析法:将血浆蛋白质分为清蛋白和球蛋白两大类。
通过醋酸纤维膜电泳或琼脂糖凝胶电泳将血浆蛋白质分成清蛋白和α1、α2、β、γ-球蛋白等五个主要区带 。
二、血清蛋白质电泳组分的临床分析
(一)血清蛋白电泳的正常图谱 血清蛋白电泳(serum protein electrophoresis,SPE)正常图谱,由正极到负极可依次分为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白五个区带。
血清蛋白电泳的正常组分
各条区带中多个蛋白质组分可有重叠、覆盖;两区带之间也有少量蛋白质;某些蛋白质组份染色很浅。
用醋酸纤维素薄膜电泳测得血清各区带蛋白质的参考值:
清蛋白(Alb): 57,,68,、 35,52 g/L
α1球蛋白: 1.0,,5.7,、 1.0,4.0 g/L
α2球蛋白: 4.9,,11.2,、 4.0,8.0 g/L
β球蛋白: 7,,13,、 5.0,10.0 g/L
r 球蛋白: 9.8,,18.2, 、 6.0,13.0g/L 。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖(agarose):从琼脂(agar)中去掉杂质和能沉淀脂蛋白的琼脂果胶(agaropectin)后所得,是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质。
评价:电渗作用小,对蛋白质的吸附极微,分辩率和重现性均较好,电泳图谱清晰。 常用的浓度:0.5,1.0%。
商品化的琼脂糖凝胶板透明度好,散热均匀而且快,电泳重现性好,适当的条件可以保存半年。加之结合半干胶技术,电泳时可以不需要缓冲液,是目前自动化电泳系统最佳的介质。 (二)血清蛋白电泳的异常图谱
血清蛋白电泳异常图谱分型
血清蛋白电泳典型异常图谱
浆细胞病与M蛋白
1. 血清蛋白电泳异常图谱分型
2. 血清蛋白电泳典型异常图谱
3. 浆细胞病与M蛋白
正常血清蛋白电泳上显示的宽γ区带主要成分:免疫球蛋白。
发生浆细胞病(plasma cell dyscrasia)时,异常浆细胞克隆增殖,产生大量单克隆免疫
球蛋白或其轻链或重链片段,病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白,在蛋白电
泳时呈现一个色泽深染的窄区带,此区带较多出现在γ或β区,偶见于α区。 三、 血浆蛋白质及其异常分析
(一) 前清蛋白 (prealbumin,PA)
理化性质:
分子量5.4万,由肝细胞合成,其半衰期很
短,仅约12小时。
生理功能:
作为组织修补的材料和一种运载蛋白。
结合T4与T3,而对T3亲和力更大;PA与
视黄醇结合蛋白形成复合物,具有运载维
生素A的作用。
前清蛋白的临床评价
? 作为营养不良的指标,其评价标准是:PA 200mg/L,400mg/L为正常,100mg/L,150mg
,L轻度缺乏,50mg/L,100mg,L中度缺乏,,50mg,L严重缺乏。
?作为肝功能不全的指标,在反映肝功能的损害与恢复方面的敏感性优于清蛋白。
?在急性炎症、恶性肿瘤、创伤等任何急需合成蛋白质的情况下,血清PA均迅速下降,
PA是负性急性时相反应蛋白。
(二) 清蛋白 (albumin,Alb)
585个氨基酸残基组成
分子量66.2kD
含17个二硫键,是唯一不含糖的血浆蛋白质?~
肝实质细胞合成
半寿期19d~
血浆中含量最多的蛋白质
清蛋白的功能
(1)血浆中主要的载体蛋白:许多水溶性差的物质与清蛋白的结合而被运输,包括胆红素、长链脂肪酸、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇激素、金属离子(如Cu2+、Ni2+、Ca2+)、药物(如阿司匹林、青霉素等)。
(2)维持血浆胶体渗透压:血浆清蛋白丢失或浓度过低时,可引起水肿、腹水等症状。 (3)具有缓冲酸碱的能力
(4)重要的营养蛋白:清蛋白可以在不同组织中被细胞内吞而摄取,其氨基酸用于组织修补。因疾病等食物摄入不足或手术后病人常给予静脉清蛋白注射液。 血浆Alb作为营养指标的评价标准
,35g/L 正常
28g/L,34g/L 轻度缺乏
21g/L,27g/L 中度缺乏
,21g/L 严重缺乏
清蛋白的临床评价
低清蛋白血症:
Alb合成不足、
Alb的分布异常、
Alb过度丢失、
Alb分解代谢增加、
无清蛋白血症(analbuminaemia) 。
血浆Alb增高:少见
Alb的遗传性变异
由Alb含量估计其配体的存在形式和作用
(三) α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT或AAT)
394个氨基酸残基组成;分子量51kD;pI为4.8。
含糖10%,12%。
在醋纤膜电泳中位于α1区带。
主要由肝细胞合成,单核细胞、肺泡巨噬细胞和上皮细胞也能合成。
α1-抗胰蛋白酶的生理功能
作为蛋白酶的抑制物,作用于胰蛋白酶、糜蛋白酶、尿激酶、肾素、胶原酶、弹性蛋白酶、纤溶酶和凝血酶等,占血清中抑制蛋白酶活力的90%左右。
AAT抑制作用具明显的pH依赖性,最大活力处于中性或弱碱性,当pH?4.5时活性基本丧失。
α1-抗胰蛋白酶临床意义:?AAT缺陷:ZZ型、SS型甚至MS表型常伴有早年(20,30岁)出现的肺气肿。 ZZ表型可引起肝细胞损害。ZZ表型的新生儿中10,,20,在出生数周后易患肝炎,最后因活动性肝硬化致死。
低血浆AAT还可发现于胎儿呼吸窘迫综合征。
?急性时相反应时AAT增加。
(四)α1-酸性糖蛋白( α1- acid glycoprotein,AAG)
181个氨基酸残基组成
分子量约40kD ;pI为2.7,3.5
血浆中含糖量最高(达45%)、酸性最强的糖蛋白
典型的急性时相反应蛋白
主要在肝脏产生, 某些肿瘤组织也可产生
α1-酸性糖蛋白(AAG)的的生理功能
(1)AAG是主要的急性时相反应蛋白,在急性炎症时增高,与免疫防御功能有关。 (2)AAG可以结合利多卡因和心得安,在急性心肌梗塞时AAG升高,而干扰药物剂量的有效浓度。
α1-酸性糖蛋白(AAG)的临床评价
?主要作为急性时相反应的指标——风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死等一般增加3,4倍,3,5天时出现浓度高峰,AAG增高是活动性溃疡性结肠炎最可靠的指标之一。
?糖皮质激素增加,包括内源性的库欣综合征和外源性强的松、地塞米松等药物治疗时,可引起AAG升高。
?在营养不良、严重肝损害、肾病综合征以及胃肠道疾病致蛋白严重丢失等情况下,AAG降低。
?雌激素使AAG降低。
(五)结合珠蛋白 (haptoglobin,Hp)
一种急性时相蛋白和转运蛋白。
在电泳中位于α2区带。
由α与β链形成α2β2四聚体,α链有α1及α2两种,而α1又有α1F及α1S两种
遗传变异体,两种变异体仅为一个氨基酸残基不同。
结合珠蛋白的遗传表型
结合珠蛋白的功能
与红细胞中释出的自由形式存在的血红蛋白结合,运输血管内游离的血红蛋白(Hb)到网状内皮细胞降解,防止Hb从肾脏丢失而为机体有效地保留铁,并能避免Hb对肾脏的损伤。 每分子Hp可以结合两分子的Hb,结合后复合物在几分钟之内转运到肝细胞而被降解。 结合珠蛋白的临床评价
Hp下降:
?溶血性疾病,如溶血性贫血、输血反应、疟疾。 血管外溶血不会使Hp发生变化。
?严重肝病患者,其Hp合成减少。
Hp升高:属急性时相反应蛋白,当烧伤和肾病综合征情况下,血Hp常明显升高。 (六)α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin,α2-MG或AMG)
血浆中分子量最大的糖蛋白,约为725kD,含糖量约8%。
由肝细胞、单核细胞和星形细胞合成。
半寿期约5d。
α2-巨球蛋白的功能:能与多种离子和分子结合,特别是能与蛋白水解酶结合而影响这些酶的活性。
当酶处于复合物状态时,酶的活性部位没有失活,但不容易作用于大分子底物,分子量小的蛋白质则能被α2-MG-蛋白酶复合物所催化水解。
——α2-MG可选择性地保护某些蛋白酶的活性
α2-巨球蛋白的临床评价
不属于急性时相反应蛋白~~
α2-MG增高:低清蛋白血症,尤其是肾病综合征时,显著增高——可能是一种代偿机制以保持血浆胶体渗透压。妊娠期及口服避孕药时血浓度亦增高。
α2-MG降低:严重的急性胰腺炎和进展型前列腺癌治疗前。
(七)铜蓝蛋白(ceruloplasmin , Cp )
含铜的α2球蛋白,每分子结合6个,8个铜原子,由于含铜而呈蓝色
由1046个氨基酸残基组成
含糖约8%~9.5%
95%的血清铜存在于Cp中,其余5%呈可扩散状态
血循环中的Cp可认为是铜的无毒性代谢库
铜蓝蛋白的功能特征:?能调节铁的吸收和运输,对多酚及多胺类底物有催化其氧化的能力,具有亚铁氧化酶(可催化Fe2+氧化为Fe3+)及胺氧化酶的活性 。
?抗氧化作用,可防止组织中脂质过氧化物和自由基的生成,特别在炎症时具有重要意义 。 铜蓝蛋白的临床评价:Cp浓度减少:包括Wilson病、营养性铜缺乏和Menkes病(遗传性铜吸收不良)。
在营养不良、严重肝病及肾病综合征时往往下降。
属于急性时相反应蛋白:在妊娠、感染、创伤和肿瘤时血浆浓度增加。 在妇女妊娠期、口服避孕药时其含量有明显增加。
Wilson病的诊断标准
定义:Wilson病是一种常染色体隐性遗传病,即患者血浆Cp含量明显减少,血浆游离铜增加,铜沉积在肝可引起肝硬化,沉积在脑基底节的豆状核则导致豆状核变性,因而该病又称为肝豆状核变性。
Wilson病诊断标准:Cp下降,血清总铜浓度降低、游离铜增加和尿铜排泄增加,肝中铜的含量升高。
(八)转铁蛋白(transferrin, TRF )
分子量约79.5kD;pI 5.5,5.9;半寿期为7d
为单链糖蛋白,含糖量约6%
电泳位置在β区带
主要由肝细胞合成~~
能可逆地结合多价阳离子,每分子TRF可结合2个Fe3+
转铁蛋白的生理功能:负责运载消化管吸收的铁和由红细胞降解释放的铁。以TRF-Fe3+的复合物形式进入骨髓中,供成熟红细胞的生成。
转铁蛋白的临床评价:用于贫血的鉴别诊断——在缺铁性的低色素贫血时TRF水平增高,但铁的饱和度很低。
TRF在急性时相反应中含量往往降低。因此在炎症、恶性病变时常随着清蛋白、前清蛋白同时下降。
作为营养状态的一项指标,在营养不良及慢性肝脏疾病时下降。
(九)C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)
CRP是由肝细胞所合成的急性时相反应蛋白,含5个相同的亚单位,非共价地结合为盘形多聚体。
相对分子质量为115kD,140kD。
循环中的CRP半寿期约19h,电泳分布在慢γ区带,有时可以延伸到β区带 。 1、 C-反应蛋白的生理功能:结合多种细菌、霉菌及原虫等体内的多糖物质;在钙离子存在
下,可以结合卵磷脂和核酸。
结合后的复合体具有补体系统的激活作用,作用于C1q,引发对侵入细胞的免疫调理作
用和吞噬作用而表现炎症反应。
2、 C-反应蛋白的临床评价:第一个被认识的急性时相反应蛋白,是急性时相反应的一个极
灵敏指标。
结合临床病史监测疾病:如评估炎症性疾病的活动度。
监测系统性红斑狼疮、白血病和外科手术后并发的感染。
监测肾移植后的排斥反应。
3、 (1)CRP是炎症的一种敏感性指标
CRP参与局部或全身炎症反应
CRP具有与IgG和补体相似的调理和凝集作用,促进巨噬细胞的吞噬功能,刺激
单核细胞表面的组织因子表达及其它免疫调节功能。
CRP的高低与疾病的炎症反应程度关系密切。当有炎症存在时CRP会明显升高
血浆CRP的浓度没有昼夜波动,临床上检测血浆CRP可在一天中的任何时间进行。
血清CRP在感染发生后5~8h即开始升高,48h达到峰值。血浆半衰期19h,
高峰值可达正常的数百倍。随着感染控制它可在24~48h迅速下降,1周内恢复正
常。
CRP的水平和持续时间与感染程度呈正相关,CRP持续升高或再度升高提示
临床应重视病情的变化。
感染类型的鉴别
CRP在细菌与病毒感染的患者之间存在明显差异。
CRP在绝大多数病毒感染的血清浓度变化不大或不变——大多数病毒感染是在细胞内增殖,完整的细胞膜上缺乏暴露的磷脂蛋白质,故不能触发CRP的产生和结合。
直接创伤和多数细菌感染发生在细胞外,足以使细胞膜分离,暴露出胆碱磷酸和提拱CRP的附着点,通过IL-6将信息传递给肝,并刺激肝产生有活性的CRP。
在腺病毒和疱疹病毒等极少病毒感染时,CRP升高明显——与这些病毒感染症状严重,广泛地破坏组织,触发CRP的产生有关。
CRP对脑膜炎感染G+和G-的病原菌有一定鉴别意义——G+脑膜炎脑脊液(CSF)中CRP变化不明显;G-脑膜炎CSF中CRP明显升高,CSF与血清CRP比值升高。 病情的监测
系统性红斑狼疮(SLE)合并感染时大部分患者的CRP明显升高,在SLE活动时CRP大多正常或略高。
感染性肾积水和肾积脓患者的CRP水平明显升高,CRP最低值为30mg/L,而肾积脓的CRP值明显高于感染性肾积水,CRP水平随感染程度加重而升高。
疗效的判定
经抗生素治疗后CRP水平下降,提示治疗有效。——CRP可作为抗生素疗效观察的参考指标。
肺炎是老年人最常见的感染性疾病。在急性呼吸道感染早期,无病原学检测的条件下,其临床表现不典型,感染灶不明确,WBC和体温不高者,CRP可以预示其疾病严重程度,对老年人院内呼吸道感染提供辅助诊断。如对CRP实行动态监测,对指导临床及时使用抗生素更有价值。
(2) CRP和心血管疾病的因果关系
CRP浓度增高是导致心血管疾病直接因素,还是仅仅在动脉粥样硬化、血管的损伤、心肌的缺血或者坏死等非特异性刺激下,导致在急性期的一种反应性增高?
慢性感染引起的血浆CRP浓度增高,是引起心血管疾病的一个高危因素。 在纠正了其它危险因子的影响后,血浆CRP浓度的增高是心血管疾病独立的危险因子。 在炎症组织的局部如血管动脉粥样硬化处,心肌梗死区有CRP的沉积。
CRP与动脉粥样硬化
最近发现,CRP具有促动脉粥样硬化作用。
CRP刺激巨噬细胞表达细胞因子及组织因子,增加LDL的摄入,促进泡沫细胞形成;抑制骨髓源性内皮母细胞的存活和分化,加速内皮细胞凋亡,抑制血管新生;通过外周巨噬细胞刺激组织因子合成,促进炎症时血管内聚集和血栓形成。
已证实CRP通过与LDL和受损细胞膜或感染病原体的磷脂结合参与AS损伤中补体的激活。 补体系统的激活是引起AS炎症反应的因素之一,而CRP对其他炎症介质的致AS有放大作用。
CRP与心房颤动
CRP是发生心房颤动的重要独立危险因子。
CRP与脂蛋白结合,由经典途径激活补体系统,继而可产生大量终末复合物C5B-9,造成心肌细胞受损。
CRP可增强房颤患者心房的氧化损害并导致心房的结构改变,心房改变可导致复律后房颤早期高复发率。
CRP和冠心病的关系
CRP是冠心病的一种危险因子——在经冠状动脉造影证实为冠心病的患者血浆CRP的含量是正常人的2倍,而在心肌梗死的患者是正常人的4倍。
CRP和冠心病严重程度的关系——血浆CRP的水平与冠状动脉、脑动脉和周围动脉粥样硬化的存在和严重性有明显的相关性;与冠心病猝死有很强的相关性。
CRP与冠心病预后的关系——密切相关。在一定程度上,CRP在判断急性冠状动脉综合征患者的预后上较血浆肌钙蛋白T更具价值。
(3) CRP与妊娠糖尿病
GDM发生率约占孕妇3%~5%,该病易导致羊水过多、妊娠高血压病、巨大儿、死胎、新生儿呼吸窘迫综合征、低血钙及低血糖。
血清CRP的测定可作为GDM的产后随访的新指标。
(4)CRP 在生殖医学中的临床应用
在生殖医学中, 无 论是正常的卵巢排卵, 还是接受控制性促超排卵( COH) 治疗, 或是导致不孕不育和早产的感染因素无不与 CRP 等细胞因子密切相关。 CRP可产生对调节女性卵细胞发育、成熟、排卵以及受精、胚胎着床、妊娠过程起到重要作用的炎症因子。
CRP 成为预测早产风险的最佳指标, 使进一步提高新生儿活产率成为可能。
CRP对男性由于感染原因所致的不育提供更多的临床检测依据。
(5),-反应蛋白与高血压病的相关性
近年流行病学研究证实,高血压病患者存在血管壁炎症反应,炎症反应参与了高血压的发生发展, 两种疾病可通过炎症反应相联。
在 2004年颁布的《中国高血压防治指南》中将 CRP 列为高血压病的危险因素, 进一步明确了炎症在高血压病的发生、发展中的作用。
高敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)
健康人体中含量非常少,平均浓度大约1mg/L,常规CRP检测不能很好地反映出低水平的CRP浓度的变化。
特定(种)蛋白:特定蛋白(special protein):在机体内具有某种生理功能,疾病状态时又有着特定的病理生理意义的蛋白质。
PA ALB AAT AAG AMG Hp Cp TRF CRP…….
第二节 氨基酸代谢紊乱
原发性氨基酸代谢紊乱:由于参与氨基酸代谢的酶或其他蛋白因子缺乏而引起的遗传性疾病。
继发性氨基酸代谢紊乱:由与氨基酸代谢有关的器官(如肝、肾)出现严重病变而导致。 氨基酸血症(aminoacidemia):当酶缺乏出现在代谢途径的起点时,其作用的氨基酸将在血循环中增加。
氨基酸尿症(aminoaciduria):升高的氨基酸从尿中排出。
一、原发性氨基酸代谢紊乱
(一)苯丙酮酸尿症
苯丙酮酸尿症(phenyl ketonuria,PKU)是主要由苯丙氨酸羟化酶缺乏引起的常染色体隐性遗传病,因患儿尿液中排出大量的苯丙酮酸等代谢产物而得名。
苯丙氨酸的正常代谢
1. 苯丙氨酸的代谢紊乱
当出现遗传性苯丙氨酸羟化酶缺乏或不足时,苯丙氨酸不能正常转变成酪氨酸,在体
内蓄积,并可经转氨基作用生成苯丙酮酸等代谢产物。
2. 苯丙酮酸尿症的临床表现及治疗
PKU患者有智力缺陷。
PKU患者还表现有毛发和皮肤色素较正常人略浅。
患儿在出生后3月内就需用低苯丙氨酸膳食(如低苯丙氨酸的奶粉)治疗即饮食治疗。
治疗最少要坚持到10岁,甚至终生。
在停止饮食治疗前需作负荷试验。若脑电图正常 ,则可停止饮食治疗。
女性在幼时若治疗恰当,可正常生长发育。妊娠时,则应使用治疗本病的膳食,以免
因再发高苯丙氨酸血症而影响胎儿正常发育。
(二)酪氨酸血症
1. 酪氨酸的正常分解代谢和转变
2、 酪氨酸血症—— ?型(tyrosinemia?)
原因:酪氨酸分解途径中的延胡索酰乙酰乙酸水解酶活性降低。 该症可出现:
血和尿中酪氨酸水平增加;
血中甲硫氨酸浓度升高;
尿中排出大量多巴和其他酪氨酸代谢物。
I型酪氨酸血症又称肝肾型酪氨酸血症。
急性患者有肝大、肝细胞脂肪浸润或坏死,如未治疗,常在1岁前死于肝功能衰竭。
慢性患者可有肝纤维化、肝硬化、甚至发生肝癌,症状较轻,常在10岁前死亡。 3. 酪氨酸血症—— ?型( tyrosinemia ? )
原因:肝细胞液酪氨酸转氨酶缺乏。
血中和尿中酪氨酸水平升高,尿中酚酸和酪胺浓度增加。
?型病罕见。
与?型不同的是:血中甲硫氨酸不升高。
(三)含硫氨基酸代谢紊乱
1. 含硫氨基酸的正常代谢
Hcy 在细胞内代谢途径
(1)Hcy在蛋氨酸合成酶及维生素B12参与下,与5-甲基四氢叶酸合成蛋氨酸和四氢叶酸。
(2)Hcy在胱硫醚-β-合成酶及维生素B6参与下,与丝氨酸缩合成胱硫醚,进一步代谢。
(3)Hcy 在细胞内形成后排出至血浆参加循环。
在体内同型半胱氨酸以氧化形式与一般蛋白质结合,并循环于血液中。
正常情况下人体内Hcy浓度是非常低的,因为很快被体内的叶酸和维生素B12需求性甲硫氨酸合成酶所代谢而合成甲硫氨酸。
2. 同型半胱氨酸的代谢紊乱
(1)高同型半胱氨酸血症
Hcy合成和代谢途径及其相关的酶系统、叶酸、维生素B12和维生素B6的缺乏、亚甲基四氢叶酸还原酶 、甲硫氨酸合成酶、胱硫醚-β-合成酶的缺陷都可引起血浆高同型半胱氨酸血症。
血清叶酸和维生素B12水平与血浆Hcy水平呈负相关关系,叶酸和维生素B12的水平越低,血浆Hcy水平越高。
高同型半胱氨酸血症形成机制
营养因素:维生素B6、维生素B12和(或)叶酸的缺乏。
遗传因素:亚甲基四氢叶酸还原酶 、胱硫醚-β-合成酶的基因突变使酶活性降低等。 年龄:血浆Hcy水平随年龄增加而上升,且男性Hcy水平明显高于女性,45岁以上者升高的尤为明显。绝经前女性的Hcy浓度通常比男性低20%,绝经后则升至同龄男性的水平。
其他:种族、生活习惯(吸烟、饮酒、咖啡、高蛋氨酸饮食等)、地区、药物(氨甲喋呤、卡马西平、苯妥英钠等)和其他疾病(如慢性肾功能不全)等。 (2)同型半胱氨酸与心血管疾病
血液同型半胱氨酸增加时,心血管疾病的危险性也增加
(1)同型半胱氨酸内酯化合物形成:?可与反式视黄酸共同引起血小板的凝集;?引起血栓素(TXB2)的形成,从而促进血凝块的形成,引起临床上常见的梗塞性疾病;?与低密度脂蛋白形成复合体,随后被巨噬细胞吞噬,转变为泡沫细胞,堆积在动脉内参与形成粥样硬化斑块。
(2)同型半胱氨酸氧化:同型半胱氨酸会发生自发氧化,形成超氧化物和过氧化氢,因而导致内皮细胞的损伤和低密度脂蛋白的氧化,并可造成血管平滑肌持续性地收缩,引起缺氧,加速动脉粥样硬化。
二、继发性氨基酸代谢紊乱
主要发生在肝和肾疾患(蛋白质营养紊乱)以及烧伤等 的氨基酸代谢失衡。
(一) 肝功能衰竭和氨基酸代谢失衡
多数氨基酸如芳香族氨基酸(aromatic amino acids,AAA)、丙氨酸主要在肝脏降解,而支
链氨基酸(branched chain amino acids,BCAA)主要在肌肉、肾及脑中降解。
肝功能衰竭时,AAA在肝脏中的降解减少,引起血浆AAA浓度增高;BCAA在肌肉等组
织中的分解没有减少,相反因肝脏降解胰岛素减少致血浆胰岛素含量增高,促进BCAA进
入肌肉而降解增多,血浆BCAA浓度降低。
BCAA/AAA正常比值为3.0,3.5 ,慢性肝病时可降至 2左右;若此比值降至1左右,往往发生肝性脑病,肝昏迷时可降到0.77,0.71。这些AAA在脑组织中可形成假神经递质,是引起肝性脑病和肝昏迷的重要原因之一。
(二) 肾脏疾病
肾功能衰竭常有蛋白质营养紊乱,表现为血清中必需氨基酸浓度降低。 继发性肾性氨基酸尿:由于肾小管损害、肾近曲小管的功能障碍引起,如肾中毒、急性肾小管坏死等。某些肾脏疾病仅有肾小管重吸收氨基酸障碍而导致氨基酸尿;另一些病人则肾近曲小管的所有重吸收功能均受影响,如Fanconi综合征患者,除氨基酸尿外,还出现糖尿和高磷酸盐尿等。
第三节 核苷酸代谢紊乱
核苷酸是核酸的基本组成单位。
嘌呤核苷酸合成和分解中最多见的代谢紊乱是高尿酸血症,并由此导致痛风。 嘧啶核苷酸从头合成途径中的酶缺陷可引起乳清酸尿症。
一、嘌呤核苷酸的代谢
嘌呤核苷酸从头合成途径
合成原料: CO2、甲酰基、氨基酸等
合成场所: 肝细胞的胞液
合成过程: 包括两个阶段
?次黄嘌呤核苷酸(IMP)的合成
?腺苷酸(AMP)和鸟苷酸(GMP)的合成
嘌呤核苷酸补救合成途径
嘌呤核苷酸分解
二、高尿酸血症
人体内缺乏尿酸酶,尿酸无法再分解,通过肾脏排出体外。
体液尿酸浓度的高低取决于体内嘌呤合成量、食入量和尿酸排出量之间的平衡状态。
肾脏尿酸排泄减少或体内嘌呤来源过多均可导致高尿酸血症。
(一) 尿酸排泄
尿酸的排泄有四个步骤:
?血浆中的尿酸全部经肾小球滤过;
?在近端肾小管的起始部,滤过尿酸的98%被主动重吸收;
?在近端肾小管,尿酸的主动重吸收逐渐减少,而分泌到肾小管的尿酸量却逐渐增多,最后又达到滤过量的50%左右。
?在髓绊降支出现尿酸被动重吸收,重吸收量达滤过量的40%,44%。
——随尿排出的尿酸占滤过量的6%,10%,每天的总量约为2.4~3.0mmol。
当肾小球滤过率下降,或近端肾小管对尿酸的重吸收增加或(和)分泌功能减退时,便导致高尿酸血症。
(二) 高尿酸血症 (hyperuricemia
(1)由嘌呤合成代谢紊乱引起 体内80%尿酸来源于嘌呤的生物合成,嘌呤合成代谢紊乱可致高尿酸血症:
?次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺乏;
?PRPP合成酶亢进;
?葡萄糖-6-磷酸酶缺乏,引起葡萄糖-6-磷酸增多,并沿磷酸戊糖代谢途径转化成较多的PRPP,使嘌呤合成增多。
(2)嘌呤吸收增多 体内20%尿酸来源于食物中的嘌呤,摄入富含嘌呤食物过多可诱发痛风发作。
(3)嘌呤分解增加 在骨髓增殖性疾病等,有旺盛的细胞合成和分解,从而出现核酸分解亢进,嘌呤和尿酸生成增多。
(4)当肾小球滤过率下降,或近端肾小管对尿酸的重吸收增加或(和)分泌功能减退时。 三、痛风的发生机制
(一)痛风的概念
痛风(gout)是一组嘌呤代谢紊乱所致的疾病 ,由遗传性和(或)获得性的尿酸排泄减少和(或)嘌呤代谢障碍,导致高尿酸血症及尿酸盐结晶形成和沉积,从而引起特征性急性关节炎、痛风石、间质性肾炎,严重者呈关节畸形及功能障碍;常伴尿酸性尿路结石。
仅有高尿酸血症,即使合并尿酸性结石也不称之为痛风。
(二)尿酸结晶与痛风
当浓度>480μmol/L持久不降,如遇下列情况可使尿酸钠呈微小结晶析出:
?血浆清蛋白及α1、α2球蛋白减少;
?局部pH降低;
?局部温度降低。
第四节 血清蛋白质测定
一、血清总蛋白测定
(一) 方法学概述
凯氏定氮法:参考方法
双缩脲法:首选的常规方法
酚试剂法
紫外吸收法
染料结合法:氨基黑、丽春红、考马斯亮蓝、邻苯三酚红钼
(二) 双缩脲法:
测定原理:蛋白质分子含有众多的肽键(-CO-NH-),在碱性溶液中,与二价的铜离子作用发生双缩脲反应形成紫红色的络合物,且呈色强度在一定范围内与肽键数量即与蛋白含量成正比,经与同样处理的蛋白质标准液比较,即可求得蛋白质的含量。
方法学特点:
(1)特异性较高;重复性好,干扰少;由于使用单一稳定试剂,操作简单快速,便于自动化分析。
(2)目前临床血清总蛋白定量的首选方法。
(3)并非完全特异,凡分子中含有两个或两个以上的酰胺基(—CO—NH2—),或与之相似基团的任何化合物,均可发生此反应。
(4)灵敏度较低。
(三) 凯氏定氮法
测定原理:蛋白质的含氮量较为恒定,平均为16%;即1克氮相当于6.25克蛋白质。因此只要测定样品中的含氮量,既可推算出样品中的蛋白含量。
方法学特点:
凯氏定氮法是建立各个具体方法时采用的参考标准方法。
本法过于繁琐,且不少蛋白质的含氮量并非16%,故临床上已不用
(四) 酚试剂法
测定原理:蛋白质与碱性硫酸铜作用形成铜—肽键络合物 ,后者和蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸共同作用使酚试剂中的磷钼酸—磷钨酸还原生成蓝色化合物(钼蓝和钨蓝混合物)。在一定条件下,蓝色深浅与蛋白质含量呈正比,籍此可做比色测定。
方法学特点:
(1)操作简便,重复性好,不需要复杂昂贵的设备,适合一般实验室使用。(2)本法具有较高的灵敏度,通常达10-60ug/ml,最低可测定0.2ug/ml以下的蛋白质,灵敏度较双缩脲法高100倍,较紫外分光光度法高100倍,因此可测定蛋白质含量较低的样品。 (五) 紫外吸收法
优点:简便而常用,因未加任何试剂和处理,可保留制剂的生物活性,多用于纯化
的蛋白质样品。
缺点:准确性不如双缩脲法,因而不能作为常 规方法广泛使用。 ?芳香族氨基酸280nm吸收峰:各种蛋白质中芳香族氨基酸的含量与比例不同而有较大差异;尿酸和胆红素在280nm附近有干扰,故该法的准确性和特异性有限;高度灵敏要稀释 。 ?肽键220,225nm强吸收峰: 灵敏,需要大量稀释 。
二、血清清蛋白测定
(一)方法学概述
染料结合法----溴甲酚绿(bromcresol green,BCG)法、溴甲酚紫(bromcresol purple, BCP)法。
BCP法比BCG法受其他血浆蛋白的干扰少,但灵敏度较低,且与非人源性清蛋白结合力相当弱,不适合于测定动物样本中的清蛋白,故BCP法临床应用较少。 电泳法
免疫法(免疫扩散法、免疫比浊法和RIA)
电化学测定法
(二)溴甲酚绿法测定血清清蛋白
原理:血清清蛋白(pI4.7)在pH4.2的缓冲液中带正电荷,在有非离子型表面活性剂存
在时,可与带负电荷的染料BCG结合形成蓝绿色复合物,其颜色深浅与清蛋白浓度成正比。
评价:灵敏度高、操作简便、重复性好,既可用作手工操作也可自动分析。
存在问题:试剂标准化、标准品的选用、反应时间等。
反应时间:要求血清清蛋白的测定在30s内完成(快反应),30s后球蛋白的非特异性反应增高。
第五节 血清蛋白质电泳分析
一、血清蛋白质电泳
原理:电泳利用血清蛋白质各种组分所带电荷性质、电荷数量以及相对分子质量的不同,在同一电场的作用下,各组分泳动的方向和速率也各不相同。因此,在一定时间内各组分泳动的距离也不同,从而达到分离鉴定的目的,然后经染色洗脱比色或扫描等方法求得血清各组分蛋白质的含量。
二 、免疫固定电泳
原理:免疫固定电泳包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个过程的操作。先利用电泳将蛋白质分离,再加入已知相应单价抗血清,当抗体与其区带中的单克隆免疫球蛋白结合后,便形成抗原,抗体复合物,从而被固定,通过漂洗和染色,呈现狭窄但浓染的区带。 第六节 血清氨基酸测定
氨基酸种类繁多,理化性质相似,并同时存在于各种生物样品中,因此检测各个氨基酸时必须先将它们分离再分别检测。40年代出现了离子交换树脂层析分离法;50年代末又出现了自动装置,随着技术的进步,分析一个样品的时间从一周减少到一小时左右,同时样品用量也从mmol减少到nmol,使灵敏度提高千、万倍,从而使全自动氨基酸分析仪在临床医学中发挥作用。
一、自动分析法——氨基酸自动分析仪
主要由五个部分组成,即色谱系统、检测系统、加样系统、控制系统、数据处理系统 70年代以后检测系统中的比色计有的被荧光计所取代。所用的荧光试剂是邻苯二醛,它可检出pmol水平的氨基酸,但亚氨基酸不发生反应,必须加入某些氧化剂(如次氯酸钠)后才发生荧光反应,使仪器结构复杂化
二 、氨基酸的纸层析和薄层层析
纸层析
优点:不需特殊设备、经济和操作简单,而且采集在滤纸上的标本可以邮寄。 缺点:灵敏度低、分辨率差和费时。 近几年纸层析已逐渐由速度快、分离效率高的薄层层析代替。
三、氨基酸的化学法测定
尿液总氨基酸量测定——磷酸铜试剂法
色氨酸测定
尿羟脯氨酸测定
四、氨基酸的酶法分析
苯丙氨酸测定
酪氨酸测定
支链氨基酸测定
谷氨酰胺测定
1、苯丙氨酸的酶法分析
2、支链氨基酸的酶法分析
3、谷氨酰胺的酶法分析
病 例 分 析
一、高蛋白血症(Hyperproteinaemia)
血浆总蛋白升高:血液浓缩或高r-球蛋白血症(单克隆或多克隆 ); 单克隆带可出现在球蛋白区的任何位置,通常在r区;多克隆型球蛋白的各部分均升高。
当发现血浆总蛋白升高,排除血液浓缩后,可通过电泳分析球蛋白组分。 如果是多克隆型,可通过临床特征和实验室检查(如:肝功能试验,结节病诊断实验,自身免疫性疾病诊 断试验等)来寻找病因。
如果是单克隆高γ-球蛋白血症,应进行球蛋白的免疫分 型(IgG,IgM,IgA等)。 高蛋白血症病案一女性病人72岁,因便秘、头及颈部疼痛入院,查体发现面容苍白、胸前区触痛,余无特殊体征。
1(初次实验室生化结果(血浆):
Urea 24.5mmol/L(3.0~8.0) Ca 2.95mmol/L (2.15~2.55)
PO4 1.42mmol/L(0.65~1.25) TP 124g/L(62~82)
Alb 28g/L (30~50)
2(分析评价
(1)初步诊断:肾功能不全;高钙血症(甲状旁腺功能亢进,或肿瘤,)。
(2)进一步检查:胸部X线检查发现肋骨和胸骨多处溶骨性病变(多发性骨髓瘤的特征性改变)。血清蛋白电泳和尿液蛋白检查结果:
蛋白质 Alb α1 α2 β γ 副蛋白(g/L)
30 4 9 7 — 43 参考范围 36~52 1~6 4~12 5~1 26~17 —
尿本周蛋白:阳性
3(最后诊断:多发性骨髓瘤。电泳谱显示了恶性异型蛋白血症的特征性改变:异性蛋白质>25g/L,γ-球蛋白降低,低白蛋白血症。
高蛋白血症病案二
29岁系统性红斑狼疮女性病人。
1(实验室生化结果:
(1)血浆 TP 90g/L(62~82)
Alb 39g/L(30~50) ALP 103U/L(30~120)
ALT 33U/L(<35) bili="">35)><20) (2)血清蛋白电泳="">20)>
蛋白质 Alb α1 α2 β γ 副蛋白(g/L)
39 4 6 8 33 —
参考范围 36~52 1~6 4~12 5~12 6~17 — (3)尿液本周蛋白:阴性
2(分析评价:典型的高多克隆γ-球蛋白血症图像。
正常白蛋白和血浆电解质,尿液本周蛋白阴性提示为良性多克隆γ-球蛋白血症。 二 、低蛋白血症(Hypoproteinaemia) 轻微的低蛋白血症(血浆蛋白浓度57~60g/L),通常没有临床症状,但继发性的低蛋白血症表现出明显的原发紊乱。无论是低球蛋白血症还是低白蛋白血症,总蛋白都可能是正常的
低清蛋白血症病案一 女性病人25岁,双侧踝关节水肿。
1(实验室生化结果:
(1)血浆
Ca 1.82mmol/L(2.15~2.55) PO4 1.25mmol/L(0.65~1.25)
TP 47g/L (62~82) Alb 25g/L (30~50)
ALP 58U/L(30~120) ALT 18U/L(<35)>35)>
Bili 10μmol/l(<20) chol="" 9.3mmol/l(6.5)="" (2)尿液:24小时尿蛋白4.="">20)><0.15)>0.15)>
2(分析评价:这是典型的肾病综合征图象:蛋白尿、低清蛋白血症和高胆固醇血症。 低清蛋白血症病案二
男性病人59岁,因非霍奇金病入院。
1(实验室生化结果:
(1)血浆
TP 54g/L (62~82) Alb 35g/L (30~50)
ALP 120U/L (30~120)
ALT 38U/L(<35) bili="" 19μmol/l="">35)><20)>20)><0.15)。>0.15)。>
2(分析评价:成人中等到严重的低球蛋白血症的最常见原因是继发于血液肿瘤的免疫球蛋白合成降低。
临床生物化学与生物化学检验重点难点
蛋白质与非蛋白含氮化合物的代谢紊乱 重点:
1、血浆蛋白质的生理功能。
2、血浆蛋白质的临床意义。
3、脏疾病时血浆蛋白质的变化。 难点:
1、血浆蛋白质的临床意义。
2、疾病时血浆蛋白质的变化。
小结:
1、血浆蛋白质的生理功能及临床意义。 2、主要疾病时血浆蛋白质的变化。 3、急性时相反应。
复习思考题:
1、名词解释
急性时相反应蛋白
急性时相反应
2、简答题
(1)简述血浆蛋白质的生理功能。 (2)简述肝脏疾病时血浆蛋白质的变化。 (3)试写各血浆蛋白质的英文缩写。 (4)简述各血浆蛋白质的临床意义。 肝胆疾病的生物化学诊断
重点
1、肝脏的生物转化反应
2、胆红素的正常代谢途径
3、黄疸的发生机制
难点
胆红素代谢紊乱与黄疸
小结
1、肝脏是生物转化的主要器官,其类型包括第一相反应和第二相反应
2、胆红素通过肝细胞摄取、转化和排泄,能及时清除血浆中的胆红素
3、当胆红素生成过多或肝细胞处理能力下降或排泄受阻时,引起黄疸。
复习思考题
1(举例阐述肝脏生物转化作用的反应类型。 2(简述胆红素的正常代谢。
3(简述溶血性黄疸、肝细胞性黄疸、阻塞性黄疸时的胆红素代谢。
重点
1、胆汁酸代谢及其异常
2、肝性脑病发生的生物化学机制
3、肝胆疾病的肝功能实验室检查
难点
肝胆疾病的肝功能实验室检查
小结
1、胆汁酸形成是肝脏清除胆固醇的主要方式 2、肝性脑病发生的学说有四种
3、实验室生化检测缺乏特异性
复习思考题
1、何谓胆汁酸的肠肝循环,有何生理意义, 2、肝性脑病发生的生物化学机制有哪些学说, 3、如何评价肝功能检验结果,
骨代谢异常的生物化学诊断
临床生物化学与检验-自考重点下载
蛋白质与非蛋白含氮化合物的代谢紊乱
清蛋白:运输游离脂肪酸、某些激素、胆红素、多种药物等。
急性时相反应(APR):(名词解释)血浆前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白浓度出现相应下降的炎症反应过
程称之为急性时相反应
前清蛋白(PA):(名词解释)在SPE(正常血清蛋白电泳)中显示在清蛋白前方故而得名,主要包括视
黄醇结合蛋白(RBP)和甲状腺素转运蛋白(TTR),两者均由肝脏合成。
前清蛋白(PA)的临床意义:属负性APP,作为肝功能不全的指标
触珠蛋白(Hp):(名词解释)又称结合珠蛋白,在SPE(正常血清蛋白电泳)中位于α区带,为ав222
四聚体。
触珠蛋白(Hp)临床意义中溶血性疾病,连续观察可用于监测溶血是否处于进行状态。 所有的缩写:急性时相反应(APR)、正常血清蛋白电泳(SPE)、前清蛋白(PA)黄醇结合蛋白(RBP)、
甲状腺素转运蛋白(TTR)、清蛋白(Alb)、а-抗胰蛋白酶(а-AT或AAT)、蛋白酶抑制物(Pi)、11
а-酸性糖蛋白(AAG)、触珠蛋白(Hp)、α-巨球蛋白(α-M或AMG)、铜蓝蛋白(Cp)、 122
转铁蛋白(Tf)、C-反应蛋白(CRP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)
转铁蛋白(Tf)用于贫血的鉴别诊断,缺铁性低血素贫血,转铁蛋白(Tf)代偿性合成增加 CRP是第一个被认识的APP
CRP主要用于结合临床监测疾病:?筛查微生物感染;?评估炎性疾病的活动度;?监测系统性红斑狼疮、
白血病和外科手术后并发的感染;?新生儿败血症和脑膜炎的监测;?监测肾移植后的排斥反应 蛋白质特有的结构或性质:?重复的肽链结构;?酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外光吸收;?
与色素结合的能力;?沉淀后借浊度或光折射测定。
凯氏定氮法:是公认的参考方法,目前用于标准蛋白质的定值和校正其他方法等,并适用于一切形态(固
体和液体)的样品。
双缩脲法是体液总蛋白测定的常规方法。
直接紫外吸收法常用于较纯的酶、免疫球蛋白等蛋白质测定。较纯的生物样品也常混有核酸
糖代谢紊乱
空腹血糖浓度在3.89—6.11mmol/L
(β)细胞所产生的多肽激素 胰岛素是由胰腺的胰岛B
胰高血糖素是胰岛素A(а)细胞分泌的一种多肽,促进肝糖原分解和糖异生,促进脂肪运动,分泌主要
受糖浓度调节
高血糖症:指空腹血糖浓度超过7.0mmol/L
糖尿病(DM)的定义和诊断标准:
糖尿病(MD)是一组由于胰岛素分泌不足或(和)胰岛素作用低下而引起的代谢性疾病,其特征是高
血糖症。
诊断标准:DM的典型症状(如多饮、多食、多尿和无原因体重减轻等),同时随机血糖浓度?11.1mmol/L
(200mg/dl);空腹血浆葡萄糖浓度(FPG)?7.0mmol/L(126mg/dl);口服葡萄糖耐量(OGTT)实
验中2h血浆葡萄糖浓度(2h-PG)?11.1mmol/L(200mg/dl)
口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的定义与做法:
定义:OGTT是在口服一定量葡萄糖后2h内做系列血浆葡萄糖浓度测定,以评价个体的血糖调节能力的
标准方法。
做法:?试验前3天,受试者每日食物中糖含量不低于150g,且维持正常活动,试验前应空腹10-16h。
?坐位取血后5min内饮入250ml含75g无水葡萄糖的糖水。?每隔30min取血1次,共4次,?采
血同时每隔1h留取尿液做尿糖测定。
口服葡萄糖耐量试验(OGTT)结合空腹血糖(FPG)可协助诊断糖尿病(DM)及相关状态:
?FPG正常(<6.1mmol>6.1mmol><7.8mmol 为正常糖耐量。="">7.8mmol>
?血浆FPG介于6.1-7.0mmol/L,2hPG<7.8mmol>7.8mmol>
?血浆FPG<7.0mmol ,?2hpg介于7.8-11.1mmol/l为糖耐量减退(igt)。="">7.0mmol>
?血浆FPG?7.0mmol/L,2hPG<11.1mmol 为糖尿病(dm)性糖耐量。="">11.1mmol>
口服葡萄糖耐量试验(OGTT)主要用于下列情况:
?诊断GDM; ?诊断IGT; ?有无法解释的肾病、神经病或视网膜病变,其随机血糖<7.8mmol>7.8mmol>
可用OGTT评价 ?人群筛查,以获取流行病学数据。
建议使用氟化钠-草酸钾混合物,利用氟化钠抑制烯醇化酶、防止糖酵解,草酸钾防止凝血 糖化蛋白的定义与特点:
定义:血液中的己糖(主要是葡萄糖)是可以将糖基连接到蛋白质的氨基酸残基上,生成糖化蛋白。
特点:这是一个缓慢的、不可逆的非酶促反应,可为较长时间段的血糖浓度提供回顾性评估,糖化蛋白
浓度主要用于评估血糖控制效果。
血红蛋白主要指HbA 1
糖化血红蛋白(GHb)反映的是过去6-8周的平均血糖浓度
果糖胺:是葡萄糖通过非酶促糖基化反应与其他蛋白(如清蛋白、膜蛋白、晶状体)结合形成的酮胺,称
果糖胺。
所有的糖化清蛋白都是果糖胺
果糖胺的特点:糖化清蛋白浓度反映的是近2-3周血糖的情况,在反映血糖控制效果上比GHb更敏感、更
及时。
糖尿病(DM)的实验室诊断指标包括:?血糖(包括空腹与随机)?口服葡萄糖耐量试验(OGTT) 糖尿病病程和疗效的实验室监控(解答)
DM慢性并发症的实验室监测指标包括:?血糖与尿糖;?糖化蛋白(如GHb与果糖胺);?尿蛋白(微
量清蛋白尿与临床蛋白尿)
DM是一个长期存在的疾病,因此必须对其进行监控,以观察疗效和疾病进程。GHb、果糖胺、AGE可反
映不同时间段中血糖的控制情况,慢性并发症还可通过尿素、肌酐和血脂水平等指标来加以监测。C
肽浓度水平能更好地反映胰岛B细胞功能。
多数人建议空腹血糖参考下限为2.78mmol/L(50mg/dl)
血浆脂蛋白及其代谢紊乱
血浆脂蛋白依据各种脂蛋白的水化密度及电泳迁移率的不同分为超速离心法和电泳法两类。
超速离心法根据脂血浆蛋白密度的不同,从低到高分为:乳糜微粒(CM)?极低密度脂蛋白(VLDL)?中间密度脂蛋白(IDL)?低密度脂蛋白(LDL)?高密度脂蛋白(HDL)
载脂蛋白(Apo)定义:脂蛋白中的蛋白部份称为载脂蛋白(Apo)。
功能:Apo在脂蛋白代谢中具有重要的生理功能,Apo构成并稳定脂蛋白的结构,修饰并影响与脂蛋白代谢有关的酶的活性。作为脂蛋白受体的配体,参与脂蛋白与细胞表面脂蛋白受体的结合及其代谢过程。
人血浆主要载脂蛋白的特征:
载脂蛋白 脂蛋白载体 功能
A? HDL,CM LCAT辅助因子激活其活性
A? HDL,CM 激活HTGL,抑制LCAT,稳定HDL
B100 VLDL,IDL,LDL 转运TG、TC,识别LDL受体
C? CM,HDL,VLDL LPL辅因子激活其活性
卵磷脂胆固醇酯酰转移酶(LCAT) 肝脂酶(HTGL) 甘油三酯(TG) 总胆固醇(TC)
脂蛋白脂肪酶(LPL) 低密度脂蛋白(LDL) 高密度脂蛋白(HDL)
MC:是运输外源性的TG
VLDLD:是运输内源性的TG
LDL:是由肝内向肝外转运TC
HDL:是由肝外向肝内转运TC
诊断酶学
酶催化化学反应的能力称为酶活性。
酶活性国际单位的定义:在特定的条件下,一分钟内使底物转变一微摩尔的酶量为一个国际单位。以IU-1表示(1IU=1цmol?min)
铜氧化酶(铜蓝蛋白)是血浆特异酶(单选)
非血浆特异酶分:外分泌酶(如胰淀粉酶AMS)和细胞酶(如转氨酶ALT,MAO)
血清酶变化的病理机制(简述题)
一、酶合成异常 1、合成减少 2、合成增多
二、酶释放增加 1、细胞内外酶浓度的差异 2、酶的相对分子量 3、酶的组织分布 4、酶在细胞内的定位和存在形式 5、细胞破坏
三、酶排出异常
血清酶的生理差异(多选)1、性别 2、年龄 3、进食 4、运动 5、妊娠等
为了计算酶活性浓度,必须根据线性反应期的反应速率才能准确计算出酶活性浓度,否则将导致误差。 (判断)当底物浓度【S】》Km时,则反应速率V?Vmax,一般酶测定时底物浓度最好为Km的10-20倍。 (填空)酶活性浓度测定方法,按反应时间分类:分为定时法和连续监测法
标本的采集、运输与保存的技术误差因素:(解答)
1、溶血 大部分酶在细胞内外浓度差异明显,且其活性远高于血清,少量血细胞的破坏就可能引起血清
中酶明显升高
2、抗凝剂 柠檬酸盐、草酸盐对CP、ChE均有抑制作用;EDTA还能抑制ALP;氟化物也可抑制ChE.故
用上述抗凝剂分离的血浆一般不宜做酶活性测定。肝素是黏多糖,对ALT、AST、CK、LD和ACP无影
响,适于急诊时迅速分离血浆进行测定,但可使γ-GT升高,使AMY降低,须加注意。 3、温度 血清清蛋白对酶蛋白有稳定作用,某些酶(如AST、γ-GT和ALP等)存在于清蛋白中可在室温
保存1-3天,而活性不受影响;有些酶极不稳定,如血清前列腺ACP,在37?放置1h,活性可下降
50%;大部分酶在低温中比较稳定,一般至少应在血清分离后的当天进行测定,否则应放冰箱冷藏。 免疫化学测定的优点:?灵敏度高 ?特异性高 ?能用于一些不表现酶活性的酶蛋白 ?特别适用于同工
酶的测定
通常把酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性浓度的酶称为工具酶。
共通反应途径:在临床生化检验中,许多项目的测定往往使用有工具酶的参与的类似的反应原理,即所
谓共通反应途径
最常用的两类分光光度法是:1、利用较高特异性的氧化酶产生过氧化氢(HO),再加氧化发色剂比色 22
2、利用氧化-还原酶反应使其连接到NAD(P)-NAD(P)H的正/逆反应后,直接通过分光光度法或其他
方法测定NAD(P)H的变化量。
在急性胰腺炎发病后2-3h淀粉酶(AMY)开始升高,多在12-24h达峰值,2-5h下降至正常
微量元素与维生素的代谢紊乱
微量元素系指占人体总重量万分之一以下每人每日需要量在100mg以下的元素
人体内必需的微量元素有:铁Fe,铜Cu,锰Mn,锌Zn,铬Cr等,
无害的有:钛Ti,钡Ba,铌Nb,锆Zr等
有害的有:镉Cd,汞Hg,铅Pb,铝Al等
地方性甲状腺肿:一般指碘缺乏所致甲状腺肿,以甲状腺代谢性肿大,不伴有明显甲状腺功能改变为特征。 地方性甲状腺肿的主要原因是缺碘
硒缺乏已被证实是发生克山病的重要原因
脂溶性维生素包括维生素A、D、E、K
维生素D缺乏所导致的骨质疏松症可见于老人
维生素B缺乏最典型的表现为神经系统和心血管系统的异常症状,统称为脚气病 1
叶酸缺乏的典型症状是巨幼红细胞性贫血
维生素C缺乏的典型症状是坏血病
体液平衡与酸碱平衡紊乱
+-+细胞外液的主要阳离子和阴离子为NA和Cl,而K却主要分布在细胞内液
影响血钾浓度的因素有:(多选)1、某种原因引起钾自细胞内移出时,则血钾增高;相反降低。 2、细胞外液受
稀释时,血钾降低,浓缩时,血钾增高 3、钾总量过多往往血钾过高,钾总量缺乏则常伴低血钾 4、体液酸碱
平衡紊乱 5、肾功能
引起低钾血症的原因:1、钾摄入不足 2、钾排出增多 3、细胞外钾进入细胞内 4、血浆稀释 标本分离前被冷藏,细胞内钾外移,使测定结果增高
钠、钾的测定方法:火焰光度法(FES)、离子选择电极法(ISE)、分光光度法、大环发色团法 P增加,氧解离曲线右移(血红蛋白与O的亲和力降低) 502
对血气分析标本的要求:
1、器材 动脉血标本收集最好用无菌的、含肝素的专用采血器
2、采集部位 可从任何部位采集静脉血或动脉血,目前大多采用桡动脉采血
3、样本采集 如准备采集桡动脉血,应注意采血前进行尺动脉功能试验
4、标本处理 收集标本的厌氧技术是让血液尽可能少与大气接触,采血完毕后,尽快送实验室监
测,如在15min内不能监测,将标本冰浴可稳定1h - 实际碳酸氢根(cHCO):22-27mmol/L 3
标准碳酸氢根(SBC):22-27mmol/L
肝胆疾病的生物化学诊断
胆红素在血液中主要以胆红素-血浆清蛋白复合物的可逆形式存在和运输
黄疸:是由于胆红素代谢障碍,血浆中胆红素含量增高,使皮肤、巩膜、黏膜等被染成黄色的一种病理变
化和临床表现。(正常人血清胆红素总量不超过17.2umol/L)
黄疸形成的机制:1、胆红素形成过多 2、肝细胞处理胆红素的能力下降 3、胆红素在肝外的排泄障碍 胆红素形成过多的原因:1、溶血性因素 先天性:红细胞膜、酶或血红蛋白的遗传性缺陷等
后天性:血型不合输血、睥亢、疟疾及各种理化因素等
2、非溶血性因素 恶性贫血、珠蛋白生成障碍等引起的无效造血
三种类型黄疸的实验室鉴别诊断:(答表)
类型 血液 尿液 粪便颜色
未结合胆红素 结合胆红素 胆红素 胆素原
正常 有 无或极微 阴性 阳性 棕黄色 溶血性黄疸 高度增加 正常或微增 阴性 显著增加 加深 肝细胞性黄疸 增加 增加 阳性 不定 变浅 梗阻性黄疸 不变或微增 高度增加 强阳性 减少或消失 变浅或陶土色 人类胆汁中存在的胆汁酸主要有:胆酸(CA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)、脱氧胆酸(DCA)和少量石胆酸(LCA)
等
按来源分为:初级胆汁酸(PBA)和次级胆汁酸(SBA)
在肝细胞内以胆固醇为原料合成的胆汁酸称为PBA,包括CA和CDCA
PBA在肠管中经肠菌酶作用形成SBA,包括DCA、LCA和UDCA
在肠道中约有95%胆汁酸(包括初级的和次级的,结合型和游离型)被重吸收
由肝脏分泌到肠道重吸收循环进行的过程称为“胆汁酸的肠肝循环”。其生理意义在与使有限量的胆汁酸
被反复利用,最大限度地发挥其促进脂类物质消化吸收的生理作用
血清酶检测按其与肝胆病变的关系分为三类:?反映肝实质细胞损伤为主的酶类,主要有ALT、AST和LDH
等,反映肝细胞损伤时以ALT最为敏感,而反映损伤程度时以AST较为敏感。?反映胆汁郁积为主
的酶类,主要有ALP、γ-GT和5?-NT等。?反映肝纤维化为主的酶类,主要有单胺氧化酶(MAO) 肝功能实验项目的选择原则:?选择3-5个项目 ?实验结果能够反映肝损伤情况 ?简便、易操作、
易标准化(方法) ?经济低,病人痛苦小
肾脏疾病的生物化学诊断
肾清除率:肾清除率表示肾脏在单位时间内(min)将多少量(ml)血浆中的某物质全部清除而由尿排出。 内生肌酐清除率测定是理想的清除实验,公式:C=(U×V)/PCrCrCr
血液中物质浓度的测定:(评价)通过对血液中某些物质浓度的测定,能在一定程度上反映肾脏的功能状
态;虽然敏感性和特异性不是很高,但检测简便,是临床常用的肾功能指标 血尿素浓度除受肾功能影响外,还受到蛋白质分解实际状况影响,故血肌酐测定较血尿素测定更能准确的
反映肾小球功能。
尿酸(SUA)增高可见于痛风
肾小管和集合管水、电解质调节功能检查:1、尿比重与尿渗量测定 2、昼夜尿比重试验 3、尿浓缩试
验和稀释试验 4、自由水清除率测定
肾小球性蛋白尿检查:(定义)由于肾小球滤过屏障损伤而产生的蛋白尿称为肾小球性蛋白尿
(特点)多为中高分子量蛋白,它们的出现或增多,对各类肾小球病变具有特异性
鉴别诊断价值
(临床意义)1、有助于肾小球病变的早期诊断 2、可推测肾小球病变的严重性
肾小管性蛋白尿检查:(定义)当近曲小管上皮细胞受损,对正常滤过的蛋白质重吸收障碍,尿中低分子
量蛋白质排泄增加,称为肾小管性蛋白尿
(特点)尿低分子量蛋白是一组能自由通过肾小球滤过膜而在肾近曲小管全部吸收
的蛋白。此组蛋白尿排量增加是肾近曲小管受损的标志。
(临床意义)1、尿液β-m升高是反映近端小管受损非常灵敏和特异的指标。 2
2、β-m清除率(C)是鉴别轻度肾小管损伤的良好指标。 2β2-m
3、C与C/C比值对于鉴别肾小管或肾小球损伤最有用。 β2-mβ2-mALB
4、血清β-m能较好地反映肾小球滤过功能。 2
肾脏疾病的生物化学实验室检查方法的选择是注意以下几点:
1、必须明确检查目的
2、按照所需检查的肾脏病变部位,选择与之相应的功能试验,方法应用由简到精、由易到难
3、欲分别了解左、右肾的功能时,需插入导尿管分别收集左、右肾尿液
4、在评价检查结果时,必须结合病人的病情和其他临床资料,进行全面分析,最后做出判断 尿素酶法(间接法):
1、酶耦联法 2、酚-次氯酸盐显色法(波氏法) 3、纳氏试剂显色法 蛋白尿主要由于肾小球毛细血管壁对蛋白质的通透性增加,肾小球滤过屏障发生异常所致。 低蛋白血症产生的原因:1、尿中清蛋白大量丢失;2、机体的其他部位清蛋白降解也增加。
心脏疾病的生物化学标志物
心肌损伤标志:1、主要或仅存在于心肌组织,在心肌中有较高的含量,可反映小范围的损伤;
2、能检测早期心肌损伤,且窗口期长;
3、能估计梗死范围大小,判断预后;
4、能评估溶栓效果
传统的心肌酶谱有:天门冬氨酸转氨酶(AST),由于敏感性不高,特异性较差,不主张AST用于急性心肌
梗死诊断;
乳酸脱氢酶(LD)及其同工酶(LD评价:LD同工酶测定可提高诊断特异性,有人认
为急性心肌梗死事不仅LD升高,往往还有LD相对降低,故LD/LD比例更敏1212
感和特异,LD/LD的敏感性为75%-86%,特异性为85%-90%) 12
肌酸激酶(CK)及其同工酶
CK的缺点:1、特异性较差,特别难以和骨骼肌疾病、损伤鉴别;2、在急性心肌梗死发作6h以前和36h
以后敏感度较低,只有CK-MB亚型可用于急性心肌梗死早期诊断;3、对心肌
微小损伤不敏感。
(填空)与钙结合的部份称肌钙蛋白C(TnC),含抑制因子部分称为肌钙蛋白I(TnI),与原肌球蛋白结
合的部分称为肌钙蛋白T(TnT)
心肌肌钙蛋白的评价:优点:1、由于心肌中肌钙蛋白的含量远多于CK,因而敏感度高于CK,不仅能检
测出急性心肌梗死病人,而且能检测微小损伤;
2、恰当选择肌钙蛋白特异的氨基酸序列作为抗原决定簇,筛选出的肌钙蛋
白抗体,其检测特异性高于CK;
3、有较长的窗口期,cTnT长达7d,cTnI长达10d,甚至14d,有利于诊断
迟到的急性心肌梗死和不稳定性心绞痛、心肌炎的一过性损伤;
4、双峰的出现,易于判断再灌注成功与否;
5、肌钙蛋白血中浓度和心肌损伤范围的较好的相关性,可用于判断病情轻
重,指导正确治疗。
缺点:1、在损伤发生6h内,敏感度较低,对确定是是否早期使用溶栓疗法价值
较小;
2、由于窗口期较长,诊断近期发生的再梗死效果较差 肌红蛋白到目前为止,是急性心肌梗死(AMI)发生后出现最早的可测标志物
在胸痛发作2-12h内,如肌红蛋白(Mb)阴性可排除急性心肌梗死。
肌红蛋白的评价:优点:1、在急性心肌梗死发作12h内诊断敏感性很高,有利于早期诊断,是至今出现
最早的急性心肌梗死标志物。
2、能用于判断再灌注是否成功
3、能用于判断再梗死
4、在胸痛发作2-12h内,肌红蛋白阴性可排出急性心肌梗死特异性。
缺点:1、特异性较差,但如结合碳酸酐酶?(CA?),可提高Mb诊断急性心肌梗死特
异性
2、窗口期太短,回降到正常范围太快,峰值在12h,急性心肌梗死发作后16h
后测定易见假阳性。
胃肠胰疾病的临床生物化学
消化性溃疡:是胃或十二指肠的黏膜缺损,是由于正常黏膜的防御能力下降或胃酸及胃蛋白酶等攻击因子
作用过强造成的。
血液淀粉酶和脂肪酶升高可见与急性胰腺炎
急性胰腺炎,血液、尿液中淀粉酶均增加。发病2h开始血清淀粉酶活性迅速上升,12-24h间达到最高峰,
3-4d降至正常(尿液12-24h开始升高,对胰腺炎后期诊断更有价值)
骨代谢异常的生物化学诊断
钙结合蛋白可作为钙的转运蛋白,在维持细胞内游离钙离子的生物活性上起重要作用。 不扩撒钙是指与蛋白质结合的钙;扩散该其中一部分与柠檬酸、重碳酸根等形成不解离的复合钙;另一部
分是发挥生理作用的离子钙(游离钙),约占总钙的45%
甲状旁腺素的调节作用:1、促进溶骨;2、促进钙的重吸收,抑制近曲小管及远曲小管对磷的重吸收,进
而降低血磷,升高血钙;3、促进高活性的1,25(OH)D的生成 23
1,25(OH)维生素D水平能负反馈地抑制25(OH)D-1a-羟化酶的活性,但正反馈地调节肾25(OH)2323
D-24-羟化酶的活成。 23
血磷水平亦可负反馈地调节25(OH)D-1a-羟化酶的活性 23
1,25(OH)维生素D的调节作用:1、对骨的直接作用是促进溶骨,与PTH协同作用,即加速破骨细胞23
的形成,增强破骨细胞活性,促进溶骨,亦通过促进肠管对钙、
磷的吸收,使血钙、血磷水平增高以利于骨的钙化;
2、促进肾小管上皮细胞对钙、磷的重吸收,其机制也是上调细胞内
钙结合蛋白的表达。
引起低钙血症的常见病原有:?底清蛋白血症,血清总钙降低,游离钙大多正常;?慢性肾功能衰竭
?甲状旁腺功能减退;?维生素D缺乏
反应骨形成的标志物与检测是骨性碱性磷酸酶(ALP)
反应骨吸收的标志物与检测是抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)
红细胞代谢紊乱
红细胞膜结构符合“流动镶嵌模型”理论
糖酵解途径即Embden-Meyerhof途径(EMP),是红细胞糖分解代谢的主要途径和能量来源 红细胞酶的缺陷、能量代谢障碍、膜结构功能状态的改变均与溶血密切相关
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏引起蚕豆病
触珠蛋白降低见于血管内溶血
β-地中海贫血时HbA减少(重症者可消失),HbA增高,HbF明显增加。 2
内分泌疾病的代谢紊乱
动态功能试验有助于确定内分泌疾病的病变部位与性质
在生长发育期GH(生长激素)过度分泌可致巨人症,而成年后GH过度分泌则可形成肢端肥大症 甲状腺激素为酪氨酸含碘衍生物
血清中T4>T3,活性T3>T4
原发性甲状腺功能低下是,T3、T4降低而TSH增高
肾上腺髓质激素是氨基酸衍生物
如果E(肾上腺素)升高幅度超过NE(去甲肾上腺素),则支持肾上腺髓质嗜铬细胞瘤的诊断 肾上腺皮质激素也称类固醇激素
神经疾病的代谢紊乱
实验结果表明:癫痫发作时患者血液及脑脊液诸佛乙酰胆碱含量显著增高,而多巴胺及其代谢产物显著降
低;精神分裂症病人血浆诸佛多巴胺的代谢产物升高,5-羟色胺含量亦降低。 帕金森病,DA(多巴胺)缺乏,
多巴胺减少,乙酰胆碱增多,则导致震颤、僵直和运动迟缓等一系列的症状
神经系统疾病的诊断内容主要包括:神经递质、蛋白质及酶学等,检测标本多采用脑脊液(填空) 正常成人CSF超过450mg/L,可见于感染、出血、占位性病变、蛛网膜粘连及多次电休克治疗等
妊娠的临床生物化学
人绒毛膜促性腺激素(名解):为胎盘内最重要的激素。
临床意义:hCG主要用于正常妊娠、滋养层疾病胡诊断及监护。血清hCH峰值在妊娠8-10周时出现 胎儿神经管缺陷测定母体AFP(甲胎蛋白)水平,可检出约90%的开放性神经管缺陷 妊娠16-18周时,孕妇均应该进行胎儿神经管缺陷和唐氏综合症胡筛查实验。
孕中期,母体血清AFP、hCG、游离E是孕中期筛查胎儿先天性缺陷最重要的三个指标 3
体液肿瘤标志物
本周蛋白已被确认为多发性骨髓瘤的标志,本周蛋白是肿瘤细胞分泌的免疫球蛋白qinlian轻链。 体液肿瘤标志物临床应用范围: 8 1、肿瘤的早期发现 生化标志最低检测限为10细胞,利用生化标志能在亚临床期较早地发
现肿瘤
2、肿瘤的鉴别诊断与分期 3、肿瘤的预后判断 4、肿瘤的疗效监测 5、肿瘤的复发预报
酶类肿瘤标志物,特异性不高,敏感性较高
酶类标志物的特点:?酶类存在广泛,肿瘤的发生、发展涉及全身多种酶类;?许多脏器在其损伤、炎症
和功能改变时都能引起酶的异常,因而总体来说酶类标志物特异性不高;?酶类标志物的敏
感性不高,但其地特异性限制了酶类标志物的应用,目前主要用于肿瘤治疗和预后监测;
?同工酶分析的应用提高了酶标志物的敏感性和脏器特异性;?目前临床上主要测定酶的活
性,酶的活性受多种因素影响和干扰,稳定性较差 。
PSA(前列腺特异抗原)有高度脏器特异性。
CA125是检测卵巢癌的指标
CA15-3、CA27-29、CA549与乳腺癌有关
自由基与代谢紊乱
机体中的抗氧化酶种类繁多,主要包括:超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧
化氢酶(CAT)和其他血红素蛋白过氧化物酶。
维生素E(VitE),也称生育酚。
蛋白质性具有抗氧化物质的有哪些:铜蓝蛋白(CP)、清蛋白结合的胆红素和维生素E
?型高脂蛋白血症:是由于脂蛋白脂肪酶(LPL)基因突变引起脂蛋白脂肪酶活性降低或缺乏,导致血清
甘油三酯显著增高的遗传性血脂代谢缺陷病。属常染色体隐形遗传
需进行血药浓度监测:实际工作中较常的有庆大霉素、苯妥英、地高辛等
在下列情况下不必进行血药浓度监测:1、有客观而简便的观察药物作用的指标,如降糖药等;2、有效血
药浓度范围大、毒性小,不需要给药方案个体化;3、短期服用、局部使用或不易吸收进入体
内的药物
血清及血浆是TDM(治疗药物监测)最常用的样品
在TDM(治疗药物监测)中常用的分析方法主要有三类:光谱分析法、色谱法、免疫化学法
常见的有紫外可见分光光度法,HPLL最常用
临床生物化学与检验-自考重点(1)
蛋白质与非蛋白含氮化合物的代谢紊乱
清蛋白 :运输游离脂肪酸、某些激素、胆红素、多种药物等。
急性时相反应(APR ) :(名词解释)血浆前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白浓度出现相应下降的炎症反应过 程称之为急性时相反应
前清蛋白(PA ) :(名词解释)在 SPE (正常血清蛋白电泳)中显示在清蛋白前方故而得名,主要包括视 黄醇结合蛋白(RBP )和甲状腺素转运蛋白(TTR ) ,两者均由肝脏合成。
前清蛋白(PA )的临床意义 :属负性 APP ,作为肝功能不全的指标
触珠蛋白(Hp ) :(名词解释)又称结合珠蛋白,在 SPE (正常血清蛋白电泳)中位于α2 区带,为а2в2
四聚体。
触珠蛋白(Hp )临床意义中 溶血性疾病,连续观察可用于监测溶血是否处于进行状态。
所有的缩写:急性时相反应(APR) 、正常血清蛋白电泳(SPE ) 、前清蛋白(PA )黄醇结合蛋白(RBP ) 、
甲状腺素转运蛋白(TTR ) 、清蛋白(Alb ) 、а1 -抗胰蛋白酶(а
1
-AT 或 AAT) 、蛋白酶抑制物(Pi) 、
а1 -酸性糖蛋白(AAG) 、触珠蛋白(Hp) 、α
2
-巨球蛋白(α
2
-M 或 AMG) 、铜蓝蛋白(Cp) 、
转铁蛋白(Tf) 、C-反应蛋白(CRP) 、血清淀粉样蛋白 A(SAA)
转铁蛋白(Tf) 用于贫血的鉴别诊断,缺铁性低血素贫血,转铁蛋白(Tf)代偿性合成增加
CRP 是第一个被认识的 APP
CRP 主要用于结合临床监测疾病:①筛查微生物感染; ②评估炎性疾病的活动度; ③监测系统性红斑狼疮、 白血病和外科手术后并发的感染;④新生儿败血症和脑膜炎的监测;⑤监测肾移植后的排斥反应 蛋白质特有的结构或性质 :①重复的肽链结构;②酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外光吸收;③ 与色素结合的能力;④沉淀后借浊度或光折射测定。
凯氏定氮法 :是公认的参考方法, 目前用于标准蛋白质的定值和校正其他方法等, 并适用于一切形态 (固 体和液体)的样品。
双缩脲法是体液总蛋白测定的常规方法。
直接紫外吸收法常用于较纯的酶、免疫球蛋白等蛋白质测定。较纯的生物样品也常混有核酸
糖代谢紊乱
空腹血糖浓度在 3.89—6.11mmol/L
胰岛素 是由胰腺的胰岛 B(β)细胞所产生的多肽激素
胰高血糖素 是胰岛素 A(а)细胞分泌的一种多肽,促进肝糖原分解和糖异生,促进脂肪运动,分泌主要 受糖浓度调节
高血糖症 :指空腹血糖浓度超过 7.0mmol/L
糖尿病(DM)的定义和诊断标准:
糖尿病(MD)是一组由于胰岛素分泌不足或(和)胰岛素作用低下而引起的代谢性疾病,其特征是高 血糖症。
诊断标准:DM 的典型症状 (如多饮、 多食、 多尿和无原因体重减轻等) , 同时随机血糖浓度≥11.1mmol/L (200mg/dl) ;空腹血浆葡萄糖浓度(FPG)≥7.0mmol/L(126mg/dl) ;口服葡萄糖耐量(OGTT)实 验中 2h 血浆葡萄糖浓度(2h-PG)≥11.1mmol/L(200mg/dl)
口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的定义与做法 :
定义:OGTT是在口服一定量葡萄糖后 2h 内做系列血浆葡萄糖浓度测定, 以评价个体的血糖调节能力的 标准方法。
做法:①试验前 3天, 受试者每日食物中糖含量不低于 150g,且维持正常活动, 试验前应空腹 10-16h。 ②坐位取血后 5min 内饮入 250ml 含 75g 无水葡萄糖的糖水。③每隔 30min 取血 1次,共 4次,④采 血同时每隔 1h 留取尿液做尿糖测定。
口服葡萄糖耐量试验(OGTT)结合空腹血糖(FPG)可协助诊断糖尿病(DM)及相关状态:
⑴FPG 正常(<6.1mmol )="" ,并且="">6.1mmol><7.8mmol>7.8mmol>
⑵血浆 FPG 介于 6.1-7.0mmol/L,2hPG<7.8mmol 为空腹血糖受损(ifg)="">7.8mmol>
⑶血浆 FPG<7.0mmol ,⑷2hpg="" 介于="" 7.8-11.1mmol/l为糖耐量减退(igt)="">7.0mmol>
⑷血浆 FPG≥7.0mmol/L,2hPG<11.1mmol>11.1mmol>
口服葡萄糖耐量试验(OGTT)主要用于下列情况 :
①诊断 GDM; ②诊断 IGT; ③有无法解释的肾病、 神经病或视网膜病变, 其随机血糖<7.8mmol ,="" 可用="" ogtt="" 评价="">7.8mmol>
建议使用 氟化钠-草酸钾 混合物,利用 氟化钠 抑制烯醇化酶、防止糖酵解, 草酸钾 防止凝血
糖化蛋白的定义与特点 :
定义:血液中的己糖(主要是葡萄糖)是可以将糖基连接到蛋白质的氨基酸残基上,生成糖化蛋白。 特点:这是一个缓慢的、 不可逆的非酶促反应,可为较长时间段的血糖浓度提供回顾性评估, 糖化蛋白 浓度主要用于评估血糖控制效果。
血红蛋白主要指 HbA
1
糖化血红蛋白 (GHb)反映的是过去 6-8周的平均血糖浓度
果糖胺:是葡萄糖通过非酶促糖基化反应与其他蛋白(如清蛋白、膜蛋白、晶状体)结合形成的酮胺,称 果糖胺。
所有的糖化清蛋白都是果糖胺
果糖胺的特点:糖化清蛋白浓度反映的是近 2-3周血糖的情况, 在反映血糖控制效果上比 GHb 更敏感、 更 及时。
糖尿病(DM)的实验室诊断指标包括:①血糖(包括空腹与随机)②口服葡萄糖耐量试验(OGTT)
糖尿病病程和疗效的实验室监控(解答)
DM 慢性并发症的实验室监测指标包括:⑴血糖与尿糖;⑵糖化蛋白(如 GHb 与果糖胺) ;⑶尿蛋白(微 量清蛋白尿与临床蛋白尿)
DM 是一个长期存在的疾病,因此必须对其进行监控,以观察疗效和疾病进程。GHb、果糖胺、AGE 可反 映不同时间段中血糖的控制情况,慢性并发症还可通过尿素、肌酐和血脂水平等指标来加以监测。C 肽浓度水平能更好地反映胰岛 B 细胞功能。
多数人建议空腹血糖参考下限为 2.78mmol/L(50mg/dl)
血浆脂蛋白及其代谢紊乱
血浆脂蛋白依据各种脂蛋白的水化密度及电泳迁移率的不同分为 超速离心法 和 电泳法 两类。
超速离心法根据脂血浆蛋白密度的不同,从 低到高 分为:乳糜微粒(CM)→极低密度脂蛋白(VLDL) →中间密度脂蛋白(IDL)→低密度脂蛋白(LDL)→高密度脂蛋白(HDL)
载脂蛋白(Apo) 定义 :脂蛋白中的蛋白部份称为 载脂蛋白 (Apo) 。
功能 :Apo在脂蛋白代谢中具有重要的生理功能,Apo 构成并稳定脂蛋白的结构,修饰并影响与脂蛋 白代谢有关的酶的活性。 作为脂蛋白受体的配体, 参与脂蛋白与细胞表面脂蛋白受体的结合及其代谢过程。 人血浆主要载脂蛋白的特征:
载脂蛋白 脂蛋白载体 功能
AⅠ HDL,CM LCAT 辅助因子激活其活性
AⅡ HDL,CM 激活 HTGL,抑制 LCAT,稳定 HDL
B100VLDL,IDL,LDL 转运 TG、TC,识别 LDL 受体
CⅡ CM,HDL,VLDL LPL 辅因子激活其活性
卵磷脂胆固醇酯酰转移酶(LCAT) 肝脂酶(HTGL) 甘油三酯(TG) 总胆固醇(TC)
脂蛋白脂肪酶(LPL) 低密度脂蛋白(LDL) 高密度脂蛋白(HDL)
MC:是运输 外源性 的 TG
VLDLD:是运输 内源性 的 TG
LDL:是由 肝内向肝外 转运 TC
HDL:是由 肝外向肝内 转运 TC
诊断酶学
酶催化化学反应的能力称为酶活性。
酶活性国际单位的定义:在特定的条件下,一分钟内使底物转变一微摩尔的酶量为一个国际单位。以 IU 表示(1IU=1цmol?min -1)
铜氧化酶(铜蓝蛋白)是血浆特异酶(单选)
非血浆特异酶分:外分泌酶(如胰淀粉酶 AMS)和细胞酶(如转氨酶 ALT,MAO)
血清酶变化的病理机制(简述题)
一、酶合成异常 1、合成减少 2、合成增多
二、酶释放增加 1、细胞内外酶浓度的差异 2、酶的相对分子量 3、酶的组织分布 4、酶在细胞内的 定位和存在形式 5、细胞破坏
三、酶排出异常
血清酶的生理差异(多选)1、性别 2、年龄 3、进食 4、运动 5、妊娠等
为了计算酶活性浓度,必须根据线性反应期的反应速率才能准确计算出酶活性浓度,否则将导致误差。 (判断) 当底物浓度【S】 》Km 时,则反应速率 V≌Vmax,一般酶测定时底物浓度最好为 Km 的 10-20倍。 (填空) 酶活性浓度测定方法,按反应时间分类:分为 定时法 和 连续监测法
标本的采集、运输与保存的技术误差因素 :(解答)
1、 溶血 大部分酶在细胞内外浓度差异明显, 且其活性远高于血清, 少量血细胞的破坏就可能引起血清 中酶明显升高
2、抗凝剂 柠檬酸盐、草酸盐对 CP、ChE 均有抑制作用;EDTA 还能抑制 ALP;氟化物也可抑制 ChE.故 用上述抗凝剂分离的血浆一般不宜做酶活性测定。肝素是黏多糖,对 ALT、AST、CK、LD 和 ACP 无影 响,适于急诊时迅速分离血浆进行测定,但可使γ-GT升高,使 AMY 降低,须加注意。
3、温度 血清清蛋白对酶蛋白有稳定作用,某些酶(如 AST、γ-GT和 ALP 等)存在于清蛋白中可在室温 保存 1-3天,而活性不受影响;有些酶极不稳定,如血清前列腺 ACP,在 37℃放置 1h,活性可下降 50%;大部分酶在低温中比较稳定,一般至少应在血清分离后的当天进行测定,否则应放冰箱冷藏。 免疫化学测定的优点:①灵敏度高 ②特异性高 ③能用于一些不表现酶活性的酶蛋白 ④特别适用于同工 酶的测定
通常把酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性浓度的酶称为 工具酶 。
共通反应途径 :在临床生化检验中,许多项目的测定往往使用有工具酶的参与的类似的反应原理,即所 谓共通反应途径
最常用的两类分光光度法是:1、利用较高特异性的氧化酶产生过氧化氢(H 2 O
2
),再加氧化发色剂比色
2、 利用氧化-还原酶反应使其连接到 NAD(P)-NAD(P)H的正/逆反应后, 直接通过分光光度法或其他 方法测定 NAD(P)H的变化量。
在急性胰腺炎发病后 2-3h 淀粉酶(AMY)开始升高,多在 12-24h 达峰值,2-5h 下降至正常
微量元素与维生素的代谢紊乱
微量元素系指占人体总重量万分之一以下每人每日需要量在 100mg 以下的元素
人体内必需的微量元素有:铁 Fe,铜 Cu,锰 Mn,锌 Zn,铬 Cr 等,
无害的有:钛 Ti,钡 Ba,铌 Nb,锆 Zr 等
有害的有:镉 Cd,汞 Hg,铅 Pb,铝 Al 等
地方性甲状腺肿:一般指碘缺乏所致甲状腺肿, 以甲状腺代谢性肿大, 不伴有明显甲状腺功能改变为特征。 地方性甲状腺肿的主要原因是缺碘
硒 缺乏已被证实是发生 克山病 的重要原因
脂溶性维生素包括维生素 A、D、E、K
维生素 D 缺乏所导致的骨质疏松症可见于老人
维生素 B
1
缺乏最典型的表现为神经系统和心血管系统的异常症状,统称为 脚气病
叶酸 缺乏的典型症状是 巨幼红细胞性贫血
维生素 C 缺乏的典型症状是 坏血病
体液平衡与酸碱平衡紊乱
细胞外液的主要阳离子和阴离子为 NA +和 Cl -,而 K +却主要分布在细胞内液
影响血钾浓度的因素有 :(多选) 1、某种原因引起钾自细胞内移出时,则血钾增高;相反降低。 2、细胞外液受 稀释时,血钾降低,浓缩时,血钾增高 3、钾总量过多往往血钾过高,钾总量缺乏则常伴低血钾 4、体液酸碱 平衡紊乱 5、肾功能
引起低钾血症的原因:1、钾摄入不足 2、钾排出增多 3、细胞外钾进入细胞内 4、血浆稀释
标本分离前被冷藏,细胞内钾外移,使测定结果增高
钠、钾的测定方法 :火焰光度法(FES) 、离子选择电极法(ISE) 、分光光度法、大环发色团法
P 50 增加,氧解离曲线右移(血红蛋白与 O
2
的亲和力降低)
对血气分析标本的要求 :
1、器材 动脉血标本收集最好用无菌的、含肝素的专用采血器
2、采集部位 可从任何部位采集静脉血或动脉血,目前大多采用桡动脉采血
3、样本采集 如准备采集桡动脉血,应注意采血前进行尺动脉功能试验
4、 标本处理 收集标本的厌氧技术是让血液尽可能少与大气接触, 采血完毕后, 尽快送实验室监 测,如在 15min 内不能监测,将标本冰浴可稳定 1h
实际碳酸氢根(cHCO
3
-):22-27mmol/L
标准碳酸氢根(SBC) :22-27mmol/L
肝胆疾病的生物化学诊断
胆红素在血液中主要以 胆红素-血浆清蛋白复合物 的可逆形式存在和运输
黄疸:是由于胆红素代谢障碍,血浆中胆红素含量增高,使皮肤、巩膜、黏膜等被染成黄色的一种病理变 化和临床表现。 (正常人血清胆红素总量不超过 17.2umol/L)
黄疸形成的机制:1、 胆红素形成过多 2、肝细胞处理胆红素的能力下降 3、 胆红素在肝外的排泄障碍 胆红素形成过多的原因:1、溶血性因素 先天性:红细胞膜、酶或血红蛋白的遗传性缺陷等
后天性:血型不合输血、睥亢、疟疾及各种理化因素等
2、非溶血性因素 恶性贫血、珠蛋白生成障碍等引起的无效造血
三种类型黄疸的实验室鉴别诊断:(答表)
类型 血液 尿液 粪便颜色 未结合胆红素 结合胆红素 胆红素 胆素原
正常 有 无或极微 阴性 阳性 棕黄色 溶血性黄疸 高度增加 正常或微增 阴性 显著增加 加深 肝细胞性黄疸 增加 增加 阳性 不定 变浅 梗阻性黄疸 不变或微增 高度增加 强阳性 减少或消失 变浅或陶土色 人类胆汁中存在的胆汁酸主要有:胆酸 (CA) 、鹅脱氧胆酸 (CDCA) 、脱氧胆酸 (DCA)和少量石胆酸 (LCA) 等
按来源分为:初级胆汁酸(PBA)和次级胆汁酸(SBA)
在肝细胞内以胆固醇为原料合成的胆汁酸称为 PBA,包括 CA 和 CDCA
PBA 在肠管中经肠菌酶作用形成 SBA,包括 DCA、LCA 和 UDCA
在肠道中约有 95%胆汁酸(包括初级的和次级的,结合型和游离型)被重吸收
由肝脏分泌到肠道重吸收循环进行的过程称为“胆汁酸的肠肝循环” 。其生理意义在与使有限量的胆汁酸 被反复利用,最大限度地发挥其促进脂类物质消化吸收的生理作用
血清酶检测按其与肝胆病变的关系分为三类:①反映肝实质细胞损伤为主的酶类, 主要有 ALT、 AST 和 LDH 等,反映肝细胞损伤时以 ALT 最为敏感,而反映损伤程度时以 AST 较为敏感。②反映胆汁郁积为主 的酶类,主要有 ALP、γ-GT和 5′-NT等。③反映肝纤维化为主的酶类,主要有单胺氧化酶(MAO) 肝功能实验项目的选择原则 :①选择 3-5个项目 ②实验结果能够反映肝损伤情况 ③简便、易操作、 易标准化(方法) ④经济低,病人痛苦小
肾脏疾病的生物化学诊断
肾清除率:肾清除率表示肾脏在单位时间内(min)将多少量(ml)血浆中的某物质全部清除而由尿排出。
内生肌酐清除率测定是理想的清除实验,公式:C Cr =(U
Cr
×V)/P Cr
血液中物质浓度的测定:(评价)通过对血液中某些物质浓度的测定,能在一定程度上反映肾脏的功能状 态;虽然敏感性和特异性不是很高,但检测简便,是临床常用的肾功能指标
血尿素浓度除受肾功能影响外, 还受到蛋白质分解实际状况影响, 故血肌酐测定较血尿素测定更能准确的 反映肾小球功能。
尿酸(SUA)增高可见于痛风
肾小管和集合管水、电解质调节功能检查:1、尿比重与尿渗量测定 2、昼夜尿比重试验 3、尿浓缩试 验和稀释试验 4、自由水清除率测定
肾小球性蛋白尿检查 :(定义)由于肾小球滤过屏障损伤而产生的蛋白尿称为肾小球性蛋白尿
(特点)多为中高分子量蛋白,它们的出现或增多,对各类肾小球病变具有特异性 鉴别诊断价值
(临床意义)1、有助于肾小球病变的早期诊断 2、可推测肾小球病变的严重性
肾小管性蛋白尿检查 :(定义)当近曲小管上皮细胞受损,对正常滤过的蛋白质重吸收障碍,尿中低分子 量蛋白质排泄增加,称为肾小管性蛋白尿
(特点)尿低分子量蛋白是一组能自由通过肾小球滤过膜而在肾近曲小管全部吸收 的蛋白。此组蛋白尿排量增加是肾近曲小管受损的标志。
(临床意义)1、尿液β
2
-m 升高是反映近端小管受损非常灵敏和特异的指标。
2、β2 -m 清除率(C
β2-m
)是鉴别轻度肾小管损伤的良好指标。
3、C β2-m 与 C
β2-m
/C
ALB
比值对于鉴别肾小管或肾小球损伤最有用。
4、血清β
2
-m 能较好地反映肾小球滤过功能。
肾脏疾病的生物化学实验室检查方法的选择是注意以下几点 :
1、必须明确检查目的
2、按照所需检查的肾脏病变部位,选择与之相应的功能试验,方法应用由简到精、由易到难
3、欲分别了解左、右肾的功能时,需插入导尿管分别收集左、右肾尿液
4、在评价检查结果时,必须结合病人的病情和其他临床资料,进行全面分析,最后做出判断 尿素酶法(间接法) :
1、酶耦联法 2、酚-次氯酸盐显色法(波氏法) 3、纳氏试剂显色法
蛋白尿主要由于肾小球毛细血管壁对蛋白质的通透性增加,肾小球滤过屏障发生异常所致。
低蛋白血症产生的原因:1、尿中清蛋白大量丢失;2、机体的其他部位清蛋白降解也增加。
心脏疾病的生物化学标志物
心肌损伤标志:1、主要或仅存在于心肌组织,在心肌中有较高的含量,可反映小范围的损伤;
2、能检测早期心肌损伤,且窗口期长;
3、能估计梗死范围大小,判断预后;
4、能评估溶栓效果
传统的心肌酶谱有:天门冬氨酸转氨酶(AST) ,由于敏感性不高,特异性较差,不主张 AST 用于急性心肌 梗死诊断;
乳酸脱氢酶(LD)及其同工酶(LD评价:LD同工酶测定可提高诊断特异性,有人认
为急性心肌梗死事不仅 LD 1 升高, 往往还有 LD
2
相对降低, 故 LD
1
/LD
2
比例更敏
感和特异,LD 1 /LD
2
的敏感性为 75%-86%,特异性为 85%-90%)
肌酸激酶(CK)及其同工酶
CK 的缺点:1、特异性较差,特别难以和骨骼肌疾病、损伤鉴别;2、在急性心肌梗死发作 6h 以前和 36h 以后敏感度较低,只有 CK-MB 亚型可用于急性心肌梗死早期诊断;3、对心肌 微小损伤不敏感。
(填空) 与钙结合的部份称肌钙蛋白 C(TnC),含抑制因子部分称为肌钙蛋白 I(TnI) ,与原肌球蛋白结 合的部分称为肌钙蛋白 T(TnT)
心肌肌钙蛋白的评价 :优点:1、由于心肌中肌钙蛋白的含量远多于 CK,因而敏感度高于 CK,不仅能检 测出急性心肌梗死病人,而且能检测微小损伤;
2、恰当选择肌钙蛋白特异的氨基酸序列作为抗原决定簇,筛选出的肌钙蛋 白抗体,其检测特异性高于 CK;
3、有较长的窗口期,cTnT 长达 7d,cTnI 长达 10d,甚至 14d,有利于诊断 迟到的急性心肌梗死和不稳定性心绞痛、心肌炎的一过性损伤;
4、双峰的出现,易于判断再灌注成功与否;
5、肌钙蛋白血中浓度和心肌损伤范围的较好的相关性,可用于判断病情轻 重,指导正确治疗。
缺点:1、在损伤发生 6h 内,敏感度较低,对确定是是否早期使用溶栓疗法价值 较小;
2、由于窗口期较长,诊断近期发生的再梗死效果较差
肌红蛋白到目前为止,是急性心肌梗死(AMI)发生后出现最早的可测标志物
在胸痛发作 2-12h 内,如肌红蛋白(Mb)阴性可排除急性心肌梗死。
肌红蛋白的评价 :优点:1、在急性心肌梗死发作 12h 内诊断敏感性很高,有利于早期诊断,是至今出现 最早的急性心肌梗死标志物。
2、能用于判断再灌注是否成功
3、能用于判断再梗死
4、在胸痛发作 2-12h 内,肌红蛋白阴性可排出急性心肌梗死特异性。
缺点:1、特异性较差,但如结合碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ) ,可提高 Mb 诊断急性心肌梗死特 异性
2、窗口期太短,回降到正常范围太快,峰值在 12h,急性心肌梗死发作后 16h 后测定易见假阳性。
胃肠胰疾病的临床生物化学
消化性溃疡:是胃或十二指肠的黏膜缺损, 是由于正常黏膜的防御能力下降或胃酸及胃蛋白酶等攻击因子 作用过强造成的。
血液淀粉酶和脂肪酶升高可见与急性胰腺炎
急性胰腺炎, 血液、 尿液中淀粉酶均增加。 发病 2h 开始血清淀粉酶活性迅速上升, 12-24h 间达到最高峰, 3-4d 降至正常(尿液 12-24h 开始升高,对胰腺炎后期诊断更有价值)
骨代谢异常的生物化学诊断
钙结合蛋白可作为钙的转运蛋白,在维持细胞内游离钙离子的生物活性上起重要作用。
不扩撒钙是指与蛋白质结合的钙; 扩散该其中一部分与柠檬酸、 重碳酸根等形成不解离的复合钙; 另一部 分是发挥生理作用的离子钙(游离钙) ,约占总钙的 45%
甲状旁腺素的调节作用:1、促进溶骨;2、促进钙的重吸收,抑制近曲小管及远曲小管对磷的重吸收,进
而降低血磷,升高血钙;3、促进高活性的 1,25(OH) 2 D
3
的生成
1,25(OH) 2 维生素 D
3
水平能负反馈地抑制 25(OH)
2
D
3
-1a-羟化酶的活性,但正反馈地调节肾 25(OH)
2 D
3
-24-羟化酶的活成。
血磷水平亦可负反馈地调节 25(OH) 2 D
3
-1a-羟化酶的活性
1,25(OH) 2 维生素 D
3
的调节作用 :1、对骨的直接作用是促进溶骨,与 PTH 协同作用,即加速破骨细胞 的形成,增强破骨细胞活性,促进溶骨,亦通过促进肠管对钙、 磷的吸收,使血钙、血磷水平增高以利于骨的钙化;
2、促进肾小管上皮细胞对钙、磷的重吸收,其机制也是上调细胞内 钙结合蛋白的表达。
引起低钙血症的常见病原有:①底清蛋白血症,血清总钙降低,游离钙大多正常;②慢性肾功能衰竭 ③甲状旁腺功能减退;④维生素 D 缺乏
反应骨形成的标志物与检测是骨性碱性磷酸酶(ALP)
反应骨吸收的标志物与检测是抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)
红细胞代谢紊乱
红细胞膜结构符合“流动镶嵌模型”理论
糖酵解途径即 Embden-Meyerhof 途径(EMP) ,是红细胞糖分解代谢的主要途径和能量来源
红细胞酶的缺陷、能量代谢障碍、膜结构功能状态的改变均与溶血密切相关
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏引起蚕豆病
触珠蛋白降低见于血管内溶血
β-地中海贫血时 HbA 减少(重症者可消失) ,HbA
2
增高,HbF 明显增加。
内分泌疾病的代谢紊乱
动态功能试验有助于确定内分泌疾病的病变部位与性质
在生长发育期 GH(生长激素)过度分泌可致巨人症,而成年后 GH 过度分泌则可形成肢端肥大症
甲状腺激素为酪氨酸含碘衍生物
血清中 T4>T3,活性 T3>T4
原发性甲状腺功能低下是,T3、T4降低而 TSH 增高
肾上腺髓质激素是氨基酸衍生物
如果 E(肾上腺素)升高幅度超过 NE(去甲肾上腺素) ,则支持肾上腺髓质嗜铬细胞瘤的诊断
肾上腺皮质激素也称类固醇激素
神经疾病的代谢紊乱
实验结果表明:癫痫发作时患者血液及脑脊液诸佛乙酰胆碱含量显著增高, 而多巴胺及其代谢产物显著降 低;精神分裂症病人血浆诸佛多巴胺的代谢产物升高,5-羟色胺含量亦降低。
帕金森病,DA(多巴胺)缺乏,
多巴胺减少,乙酰胆碱增多,则导致震颤、僵直和运动迟缓等一系列的症状
神经系统疾病的诊断内容主要包括:神经递质 、蛋白质及酶学等,检测标本多采用 脑脊液 (填空) 正常成人 CSF 超过 450mg/L,可见于感染、出血、占位性病变、蛛网膜粘连及多次电休克治疗等
妊娠的临床生物化学
人绒毛膜促性腺激素(名解):为胎盘内最重要的激素。
临床意义 :hCG主要用于正常妊娠、滋养层疾病胡诊断及监护。血清 hCH 峰值在妊娠 8-10周时出现 胎儿神经管缺陷测定母体 AFP(甲胎蛋白)水平,可检出约 90%的开放性神经管缺陷
妊娠 16-18周时,孕妇均应该进行胎儿神经管缺陷和唐氏综合症胡筛查实验。
孕中期,母体血清 AFP、hCG、游离 E
3
是孕中期筛查胎儿先天性缺陷最重要的三个指标
体液肿瘤标志物
本周蛋白已被确认为多发性骨髓瘤的标志,本周蛋白是肿瘤细胞分泌的免疫球蛋白 qinlian 轻链。 体液肿瘤标志物临床应用范围:
1、肿瘤的早期发现 生化标志最低检测限为 108细胞,利用生化标志能在亚临床期较早地发 现肿瘤
2、肿瘤的鉴别诊断与分期 3、肿瘤的预后判断 4、肿瘤的疗效监测 5、肿瘤的复发预报
酶类肿瘤标志物,特异性不高,敏感性较高
酶类标志物的特点:①酶类存在广泛,肿瘤的发生、发展涉及全身多种酶类;②许多脏器在其损伤、炎症 和功能改变时都能引起酶的异常,因而总体来说酶类标志物特异性不高;③酶类标志物的敏 感性不高,但其地特异性限制了酶类标志物的应用,目前主要用于肿瘤治疗和预后监测; ④同工酶分析的应用提高了酶标志物的敏感性和脏器特异性;⑤目前临床上主要测定酶的活 性,酶的活性受多种因素影响和干扰,稳定性较差 。
PSA(前列腺特异抗原)有高度脏器特异性。
CA125是检测卵巢癌的指标
CA15-3、CA27-29、CA549与乳腺癌有关
自由基与代谢紊乱
机体中的抗氧化酶种类繁多,主要包括:超氧化物歧化酶(SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 、过氧 化氢酶(CAT)和其他血红素蛋白过氧化物酶。
维生素 E(VitE) ,也称生育酚。
蛋白质性具有抗氧化物质的有哪些:铜蓝蛋白(CP) 、清蛋白结合的胆红素和维生素 E
Ⅰ型高脂蛋白血症:是由于脂蛋白脂肪酶(LPL)基因突变引起脂蛋白脂肪酶活性降低或缺乏,导致血清 甘油三酯显著增高的遗传性血脂代谢缺陷病。属常染色体隐形遗传
需进行血药浓度监测:实际工作中较常的有庆大霉素、苯妥英、地高辛等
在下列情况下不必进行血药浓度监测:1、有客观而简便的观察药物作用的指标,如降糖药等;2、有效血 药浓度范围大、毒性小,不需要给药方案个体化;3、短期服用、局部使用或不易吸收进入体 内的药物
血清及血浆是 TDM(治疗药物监测)最常用的样品
在 TDM(治疗药物监测)中常用的分析方法主要有三类:光谱分析法、色谱法、免疫化学法
常见的有紫外可见分光光度法,HPLL 最常用
临床生物化学检验
临床生物化学检验:既是一门研究人体健康和疾病时的医学基础理论学科,又是一门应用各种技术和方法
检验机体健康和疾病的医学应用学科。
量值溯源:用参考测量程序或参考物质建立或验证常规检验结果的准确性。
实验室信息管理系统:是对实验室日常工作、科室管理、学科建设和实验发展等方面所产生及所需求的信
息,通过计算机收集、处理、存储、输送和应用的系统。
临床诊断试验:是指临床上用于确定或排除疾病的方法或项目。
临床生物化学诊断试验:是指临床生物化学实验室中用于疾病诊断、筛查和监测的方法或项目。 参考值区间:指所有参考值剔除离群值并补充数据后在95%的分布范围。
金标准:指当前为临床医学界公认的诊断某种疾病最可靠的诊断方法,可通过活检、尸检、外科手术、随
访等所作出的决定性诊断,又称确诊试验。
临界值:指划分诊断试验结果正常与异常的界值,又称阈值、分界值等。
医学决定水平:临床上按照不同病情给予不同处理的指标阈值。
ROC曲线:以真阳性率为纵坐标,假阴性率为横坐标,将相对应的各临界值连接起来的折线图。 国际单位(IU):是指在特定条件下,将1min 内能转化1umol底物的酶量定为一个国际单位。 定时法:是将酶与底物在特定条件下孵育一定时间后,用终止夜终止反应,通过化学或生物化学的方法测
出底物或产物的总变化量,除以时间后,计算出底物消耗速度或产物生成速度。 连续监测法:是将酶与底物在特定条件下孵育,每隔一定时间连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的
特征信号的变化,从而计算出每分钟的信号变化速率。
最适条件:是指能满足酶发挥最大催化效率所需的条件。
代谢物酶法分析技术:是指用酶法分析的方法来测定人体内的代谢物或代谢产物的技术。 酶法分析:是以酶为试剂测定酶促反应的底物、辅酶、辅基、激活剂或抑制剂,以及利用酶偶联法测定酶
活性的一类方法。
肿瘤标志物:是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中,由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或是由机体对肿瘤
反应而异常产生和升高的,反映肿瘤存在和生长的一类物质。
临床生物化学检验工作流程:检验前包括医生申请、患者准备、标本采集和标本验收
检验中包括标本处理、标本检测、数据确认和结果审核
检验后包括结果报告、标本保存、信息反馈和质量改进 检验项目类型:常规生化检验项目(包括:单个检验和组合检验)、急诊生化检验项目和特殊生化检验项目。 实验室外质量控制要素:医生申请(包括:针对性、敏感性和特异性、时效性、经济性)、患者准备(包括:
避免剧烈运动、选择合适的体位、在规定时间采血、保证正常饮食习惯、必要时停止
药物)、标本采集、标本运送和收检。
室内质量控制的目的是监控测定过程的精密度,室间质量评价室间质量比对是评价准确度的重要手段。 指控品的选择:要选择质量可靠,稳定性好,尽可能有与人血清一致的机制,添加物尽可能纯,一般应有
两个或三个不同浓度,价格低廉。
实验室信息系统管理流程:病人信息工作站、医生工作站、护士工作站、计费工作站、实验室工作站。 当临界值D向右移动,假阳性减少,假阴性增加,灵敏度降低,特异度增加。
诊断试验的准确性评价指标:灵敏度与漏诊率、特异度误诊率、准确度、正确指数、Kappa指数。(灵敏度
=1-漏诊率;特异度=1-误诊率)
有效性评价指标:预测值、流行率、似然比(似然比性质稳定,不因流行率的改变而改变。) 可靠性评价指标:变异系数或标准差、符合率。
影响诊断试验可靠性的因素主要是受试者的生物学变异和操作者的测量变异。
AUC的理论取值范围在1.0和0.5之间。大于0.5的情况下,AUC越接近于1,说明诊断效果越好。 AUC在0.5-0.7时有较低准确性,AUC在0.7-0.9有亿in个准确性,在0.9以上有较高准确性。AUC=0.5,
说明诊断方法完全不起作用。
LD是由H、M亚基组成的四聚体,有五种同工酶(LD2> LD1> LD 3>LD4> LD5)
CK是由M、B亚基组成的二聚体,有三种同工酶。
酶促反应进程:延滞期、线性期(零级反应期)、非线性期。
非线性期特点:随着反应时间延长,底物消耗越来越明显,酶促反应速度明显下降偏离线性而进入非线性
期。可逆反映增强、产物抑制增加、酶变性失活增加、酶聚合或解离增加都可造成进
入非线性期。
血清酶的来源:血浆固有酶,非血浆固有酶(来源方式:外分泌酶和细胞酶)
血清酶的去路:肾小球滤过从尿液中排出、网状内皮系统清除、血管内失活或灭活。 血清酶的生理差异:性别、年龄、饮食、运动、妊娠。
1u=16.67nkatal
酶活性测定的方法因素的影响:正向反应与逆向反应、监测底物或监测产物、底物启动模式与样品启动模
式。
激活剂多数是金属离子,可以是酶的活性中心。如:Mg 、Mn 、Ca离子等。重金属离子大多是酶的变性
剂。
ALP同工酶分为四型:肠型、生殖细胞型、胎盘型、非特异组织型。非特异组织型是在酶蛋白合成后,经
过不同形式的修饰和加工,形成的肝型、胆型、肾型、骨骼型等酶的多种形式。 IFCC推荐法测定酶的活性有:ALT、AST、CK、ADA。以LD做指示酶。
IFCC推荐法建议试剂中添加5磷酸吡哆醛,目的是使脱辅基的酶恢复活性。
CK是临床常用的诊断酶,多组合为心肌梗死酶谱。
AMP的作用既作为缓冲液又可看成底物,在推荐方法配方中,最终浓度接近1.0M,是所有酶活性测定方
法中的特例。
以NAD(P)H为指示系统的酶活性测定主波长应设置为:340nm.
在临床生物化学检验中,最常用的偶联指示系统有两个:脱氢酶指示系统和过氧化物酶指示系统。 酶偶联速率法测定代谢物时,根据动力学要求,辅助酶和指示酶应满足一级反应。
酶循环法具有的特点:灵敏度随反应时间的延长而提高;灵敏度随酶在扩增反应中的用量而提高;利用酶
对底物的特异性,使测定系统简化;利用四唑盐类的显色反应可实现比色测定。 Km值是酶的特征性常数,当反应温度、ph和离子种类及其强度等因素不变时,Km是一个定值,最适ph
不是酶的特征性常数。
衡量试剂酶纯度的主要指标有两个:酶的比活性和杂酶含量。
临床生物化学检验方法的分级:决定性方法(用于发展及评价参考方法和一级标准品)、参考方法(用于评
价常规方法和试剂盒,鉴定二级标准品)、常规方法。
标准物质的分级:一级标准品和二级标准品。
试剂盒的性能指标:当测定结果符合下列指标时表明在此浓度范围内溶液与吸光度变化呈良好线性关系:
r2大于等于0.995,候选试剂盒测定值Yi与回归线的相对偏差小于等于2%。 肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下,局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控,导致克隆性
异常增生而形成的新生物。
肿瘤的分类:良性肿瘤和恶性肿瘤。
外源性致癌物质:常见化学类致癌物包括:多环芳香烃、芳香胺、烷化剂、亚硝胺等。除化学类致癌物外,
放射性辐射和紫外线等物理因素,病毒和真菌等生物因素在肿瘤发生机制上也起重要
作用。
致癌物的只要致癌机制:肿瘤发生的整个过程分为:启动、促进、演进三个阶段。
肿瘤标志物的分类:根据肿瘤标志物的生物化学和免疫学特征分类:包括胚胎抗原类、糖类、激素类、酶
类、蛋白类、基因类及其他标志物
根据肿瘤标志物的来源分类:1.肿瘤组织产生:胚胎抗原、同工酶、激素、组织特异
性抗原、癌基因及其产物等;2.肿瘤与宿主相互作用后产生:血清铁蛋白、免疫复合
物、同工酶、肿瘤坏死因子等。
根据肿瘤标志物的分布分类:1.组织肿瘤标记物,位于细胞膜上火细胞内:激素受体、
CD抗原、蛋白酶、癌基因及抗癌基因等;2.血浆、血清肿瘤标记物:胚胎抗原、激肽、
酶、蛋白、糖蛋白等。
肿瘤标志物的临床应用:肿瘤的筛查、肿瘤的预后判断、肿瘤的疗效监测、常用肿瘤标志物的联合应用。 临床常用肿瘤标志物主要包括:胚胎性抗原肿瘤标志物、糖原抗原肿瘤标志物、激素肿瘤标志物、酶类肿
瘤标志物和蛋白类肿瘤标志物等。
胚胎性抗原肿瘤标志物:甲胎蛋白(AFP最大的作用是用于原发性肝癌临床辅助诊断及高危人群的筛查,
在转移性肝癌中,AFP值一般低于350-400ug/L,AFP也用于肝癌的治疗效
果及预后评估。)、癌胚抗原(血清CEA参考范围:成人<5ug 。)="">5ug><35000u>35000u><>
CA15-3(主要在乳腺癌、肺腺癌、胰腺癌等腺癌细胞表达,参考范围<25000)>25000)>
鳞状细胞癌抗原(SCCA是一种特异性很好的鳞状细胞癌肿瘤标志物,参
考范围<1.5ug>1.5ug>
考范围<>
围<20000u )="">20000u>
激素肿瘤标志物:人绒毛膜促性腺激素和儿茶酚胺类物质。
酶类肿瘤标志物:前列腺特异性抗原(PSA是目前可用于筛查的肿瘤标志物,可用于前列腺癌的早期辅助
诊断)、神经元特异性烯醇化酶(NSE是神经母细胞瘤和小细胞肺癌的最主
要的肿瘤标志物)、AFU(是溶酶体酸性水解酶,可催化含岩藻糖基的糖蛋
白和糖苷的分解代谢。测定血清AFU是辅助诊断原发性肝癌的一项有效指
标)、r-谷氨酰转肽酶。
肿瘤标志物的监测目前主要采用生物化学比色法和标记免疫学技术。标记免疫学技术根据示踪记的不同可
分为化学发光免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析、放射免疫分析、金
标记免疫分析。
EQA: 室间质量控制 CK: 肌酸激酶 AST: 门冬氨酸氨基转移酶 LD:乳酸脱氢酶
MD: 苹果酸脱氢酶 AK:腺苷酸激酶
ALP: 碱性磷酸酶 ACP:酸性磷酸酶
GGT: r-谷氨酰基转移酶 AMS: 淀粉酶 AMP: 2-甲基-2氨基-1-丙醇 ADA:腺苷酸脱氨酶
CHE: 胆碱酯酶 ALT: 丙氨酸氨基转移酶
PCHE: 拟胆碱酯酶 NAC:N-乙酰半胱氨酸
1.底物启动模式:样品先与部分试剂预孵育一定时间,部分消除某些内源性、外源性干扰及酶的副反应,然后加入这个底物启动待测酶酶促反应。
2.样品启动模式:指反应所需的试剂先混合在一起,然后加入样品,依靠样品中待测酶来启动酶促反应。
3.酶促偶联法:酶促反应的底物或产物如果没有直接检测的成分,将某一产物偶联到另一个酶促反应中,从而达到检测的目的的方法。
4.Trinder反应:代谢由氧化酶催化氧化生成的过氧化氢与4—氨基安替比林和酚或苯胺及其衍生物一起形成红色的
5.最适条件的概念及含义:1.合适的底物和最适底物浓度;2.理想的缓冲液种类和最适离子强度;3.反应液的最适pH;4.最适反应温度;5.合适的辅因子、激合剂浓度;6.若是酶偶联反应,还需确定酶和有助辅因子的用量;7.合理的测定时间;8.合适的样品与反应试剂的比例;9.足够的检测范围;10.尽管去除各种抑制剂等。
6.临床生化液体双试剂的特点:1.提高了抗干扰反应的能力;2.稳定性能优越;3.试剂组分高度均一
7.试剂盒的性质指标:
准确度、精密度、试剂空白吸光度、线性范围
试剂空白吸光度自变化、稳定性
8.临床生化液体双试剂盒的特点:
?提高了抗干扰反应的能力
?稳定性质优越
?试剂组分高度均一
9.治疗药物检测TDM的目的:
?为临床制定合理的给药方案
?对于出现药物过量或者中毒,可通过监测,明确诊断,筛选出中毒药物 ?确定患者是否按照医嘱服药提高用药依从性
10.实验室外质量控制要素中:患者准备:
?避免剧烈运动
?选择合适的体位
?在规定时间采血
?保持正常饮食习惯
?必要时停用药物
11.医生在项目选择时考虑的因素:针对性,敏感性和持续性,时效性,经济性 12.质控品的选择原则:
?要选择质量可靠,稳定性好,瓶间变异小的质控品且一次购买需要足量以减少做空图次数 ?尽可能有与人血清一致的基质,以减少基质效应
?添加物尽可能纯,反应速率尽量与人血清一致
?一般应有两个或三个不同浓度这样有利于在不同水平监测方法的性能 ?价格低廉,降低检测成本
13.准确性指标有:灵敏度,特异度,准确度
14.有效性指标有:似然比,流行率,预测值
15.可靠性指标有:变异系数,符合率
16.酶含量的表示方法:
?酶的活性浓度;?正常上限升高倍数ULN;
?酶蛋白的质量浓度
17酶纯度的指标:比活性、
18酶促反应进入非线性期的原因:
?底物浓度不足;?可逆反应增强;
?产物抑制增强;?酶变性失活增加 ?酶聚合或解离增加
19.检验方法分级:?决定性方法;?参考方法; ?常识方法
20.连续监测法的分类:
?以人工合成色素原多底物的连续监测 ?NAD(P)H的连续监测
?以Trinder反应为指标反应的连续监测 ?特俗反应类型的连续监测
21.试剂盒的性质指标:
准确度、精密度、试剂空白吸光度、线性范围 试剂空白吸光度自变化、稳定性
22.临床生化液体双试剂盒的特点:
?提高了抗干扰反应的能力
?稳定性质优越
?试剂组分高度均一
23.治疗药物检测TDM的目的:
?为临床制定合理的给药方案
?对于出现药物过量或者中毒,可通过监测,明确诊断,筛选出中毒药物
?确定患者是否按照医嘱服药提高用药依从性
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