范文一：浅谈影响大豆脂肪含量的因素

浅谈影响大豆脂肪含量的因素

——

驾参

我国已经加入WTO,大豆的进出..

吴茎骂嚣昊瀵大豆品质与国外大豆相比有很大差

蔷蒿镶要求在短时间内,把我国大豆的脂肪—

高我国大豆的脂驴含量,就要了解影囔

响大豆脂肪含量的因素.

含量主要受品种的遗传大豆脂肪含量主要受品种的遗传

翥~23.o22%-24%182398%太脂肪含量在这间高脂肪大.鼍I黟豆如垦农脂肪含需?

-羹条件选择适宜的高脂肪大豆品种进行一

薯大豆脂肪含量分析洪厣从全国各地大豆脂肪含量分析

IX

鬟艳肪度地含量低.大豆生育期间温度高,尉昼夜温差大,降雨量分布均匀适中.在,

差薯金提高.大豆初花后,光照时数地加也可辩兰

1…

纛三,栽培措施?,肥料.大豆植株氮,磷,钾含量鼍E

薹蠢锈密切关系,试验表明,增施磷肥可提高大豆脂肪含量,大豆既高

产又高脂肪

2

,

国,密度.栽培密度影响着群体的

2

地

25

一

纛.万株,大豆的脂肪含量最高.甏

大豆脂肪含量在大豆黄叶期达到最高值所以,高

草地螟发生为害与

综合防治技术措施

?杨双友徐金彪黄立功

一

,发生特点与为謇状

草地螟属鳞翅目螟蛾科,在黑龙江省一年发生2—3代,以老熟幼虫在

土中吐丝作茧越冬.越冬代成虫始见期为5月下旬,第一次高峰为6月上

旬,第二次高峰为6月中旬.成虫产卵前期4—5天,卵期4__6天,第一代

幼虫6月中旬始见.6月下旬进入为害盛期,幼虫共5龄.平均气温l8—

20?时,幼虫期一般20天左右,25?左右时,幼虫期约lO余天.一代成

虫7

月中旬至8月初为发生盛期;二代成虫于8月上旬至9月下旬发生,一般

危害不大.

成虫白天多潜伏在夏至草,益母蒿,灰菜等蜜源及藜科植物的杂草丛

中,受惊扰后,可做短距离飞迁,喜在傍晚和夜间活动,有趋光性.成虫取食

花蜜,性器官才能发育成熟,交尾,产卵.卵产于灰菜,猪毛菜,刺蓟等植物

的叶背面,距离地面8厘米处较多.卵单产或3—5粒多达l0余粒聚产,成

覆瓦状,每头雌蛾可产卵200余粒.幼虫很括泼,爬行很快,迁移性强,无假

死性,稍稍触动幼虫就向前或向后跳,或吐丝下垂落地后仍不停爬行.幼虫

有三次迁移,第一次由杂草上向大豆田或甜菜田迁移;第二次由大田边缘

向大田内部迁移;第三次由受害田向未受害田迁移.

二,防治措施

l,及时清除田间及地边杂草,消灭成虫产卵场所,减少田间卵量和幼

虫量,减轻危害.

2,挖沟,设置药剂隔离带

在未受害田或田间幼虫量未达到防治指标的地块周边挖沟,沟上宽

30厘米,下宽20厘米,深4o厘米,中间立一道高60厘米的地膜,纵向每隔

约l0米用木棍加固,或在地块周围设置4m5米宽的药带,以阻止地块外

的幼虫迁入危害.在某些龄期较大幼虫集中危害的地块,当药剂防治效果

不好时,也可在该地块四周挖沟或设置药带封锁.以防止扩散危害.

3,田间药剂防治

由于草地螟有集群迁移及暴食性的特点,因此,必须在幼虫3龄前防

治,即从卵孵化盛期后l0一l2天内为宜.幼虫在田间不均匀分布时,一般

不宜全田普治,应在认真调查的基础上实行挑治.这样既可以降低防治成

本,提高防治效果,又可以减轻对环境的污染.当田间幼虫密度大,且分散

危害时,应组织农户联防,进行大面积的统防统治.

4,药荆选用

宜选用高效,低毒,击到速度快且经济的药剂.用5%锐劲特悬浮剂每

亩30毫升或25%快杀灵乳油每亩30毫升,兑水30公斤喷雾.用80%敌

敌畏乳油每亩100毫升或90%敌百虫晶体每亩100克,兑水30公斤

喷雾.

5,综合防治

在成虫发生期应用高压汞灯,黑光灯等诱杀,平均防效可达70%左右.

此外,还可以在幼虫发生期应用徽孢子虫,轮枝菌等生物制荆及植物提取

剂,对人口稠密地区进行防治,以减少对人体和环境的危害.

(作者工作单位:海伦市农业技术推广中心

绥化市农业技术推广总站)

邮编:l5230ol52054

责任编辑:张晚红

范文二：影响运动员状态的因素

在国内客场比赛时, 相对于主队而言, 有多少支客队参赛, 就有多少客场。赴客场比赛, 运动员首先面对的就是旅途问题, 这其中有时将包括时差因素。我国统一使用 北京时间 , 从表面上看, 没有时差, 但是实际作息存在着时差。如重庆隆鑫队赴东北地区比赛, 作息时间要提前1 小时。按标准时区划分, 我国共跨东五区至东九区共五个时区, 但由于我国主要大城市都集中在东八区, 大多数比赛也都在这 些城市举行, 因此时差反应不明显 。由于主客场赛制的比 赛频率高, 运动员不可能有太多的时间消除疲劳。故对于旅 途、时差因素, 客队比主队更易产生消极的生理反应。

2. 2 气候因素

我国幅员辽阔, 南北气候条件不同, 温差大、季节性强。在国内的客场比赛中因客队所在地的不同, 气象存在着一定 的地域差异。以国内足球联赛为例, 在3~ 8 月期间, 南方赛 区( 以广东省为代表) 正处暑夏时节, 天气复杂多变, 高温、潮 湿、闷热、暴雨骤变而交错并存。对不善水战、高温耐受性较 差的北方球队会带来较大的影响。而到了深秋, 从南方炎热 地区来的运动员, 往往会因北方气候寒冷, 比赛时兴奋不起 来, 从而影响竞技能力的正常发挥, 甚至发生外伤事故。而 且随着赛季的进行, 气候条件是在不断变化的, 如这周在北 方比赛, 可能下周又去南方比赛。这种主客场气候变化频率可能很大。

客场的赛场环境, 尤其是客场场地( 如看台的位置, 场地 的特殊性等) 亦是影响我国运动员国内客场比赛的主要劣性环境因素。根据运动知觉理论, 运动知觉在一定程度上依赖 于周围环境结构, 熟悉的场地环境成为运动员时空判断的参照系, 而在不太熟悉的环境里, 由于作为时空判断的参照系列发生了变化, 因此建立正确的运动知觉必然要有一段适应过程。故对场地熟悉与否直接影响着运动员的技战术发挥。李可可、殷小川等人的研究均证明了这一点。李可可等人曾对我国男篮甲级队在客场比赛发挥不如主场的不适应原因进行分析, 将场 地湿度、灯光亮度、地板颜色、篮板和篮圈弹性等赛场环境视为影响客场成绩的重要因素 。殷小川的研究( 1998) 发现, 运动员在主场比赛与客场比赛时, 在对场地、设施的熟悉程 度的差异达0. 00 1 的显著水平 。谢红光( 1998) 调查结果 发现, 有74. 4% 的运动员认为对场地的熟悉有利于发挥技 术, 57. 7% 的运动员感到不适应场地而影响技术的发挥 。

体育运动是人与大自然相互交融、相互作用所表现出来的一种文化活动，依赖于一定的社会条件和文化氛围，构成了体育运动的社会人文环境，可分为赛场环境、社会环境和国际环境。社

会环境和国际环境则决定了人们对竞技体育的态度以及左右着体育运动的发展，而赛场环境影响着运动员教练员的竞赛心理。一方面，运动竞赛的发生发展不仅与人自身有着内在本质的联系，而且受到人文环境的制约，创造和改善适宜的体育运动竞赛的赛场环境，将有利于运动员临场竞技水平的发挥并在比赛中取得良好的运动成绩；另一方面，体育能够影响赛场环境并促进赛场环境的改善。

影响运动员客场比赛的因素包括 旅途( 旅行) 、时差因素、气候因素、赛场环境因素、赛场气氛因素、裁判因素等。运动员可以通过认知训练、模拟训练的方法提高对客场环境的适应能力, 以达到在短时间内使客场环境对运动员的消极影响降低到最低限度的目的。

当比赛场地在自己的主场,参赛的运动员对场地的周边环境比较熟悉, 对天气、时差也比较适应,加上观众与迷友们的精神鼓励, 作为一名成熟的运动员来讲,更可借助这方面的有利条件, 在家乡父老面前较充分地表现自己的竞技水平; 而更多的运动员在这样的环境氛围中,竟会发挥自己的全部运动能量, 往往将心理的激情及运动技能技巧的把握,与观众及迷友的期望值形成正比。例如,各种球类比赛在这方面展现的比较明显和突出。这主要来自群体的内聚性的发挥。美国哥伦比亚大学心理学系教授 JL. 弗里德曼( Jonathan J. Freedman)曾说: 群体成员彼此的吸引力越大,群体对成员们的吸引力越大, 则成员们为群体目标做出的努力也就越大, 群众的内聚性也就越大。则成员们为群体目标做出的努力也就越大, 群众的内聚性也就越大。 所谓群体, 大则是一个国家、一个地区,小则一个单位、一个俱乐部或一个训练队。他们之间的向心力往往是不约而同的。它是产生共鸣心理的基础条件, 也就是内聚性形成的群体张力。除此以外, 还有运动员自身的品德意志修养、竞技水平程度, 也将在共鸣中发挥一定的主导作用。如果说运动员在赛场上所以能够超长地发挥自己的竞技水平,一般跟他的精神力有很大关系。这种精神力的锻铸是个较长期的过程。若没有一点民族精神, 没有一点敬业情操, 没有一点坚强的意志是不会产生这种精神力的。有的运动员,虽身带伤病, 但在强大精神力的支持下, 也取得了优异成绩。

在竞技体育运动过程中, 多数运动员抱着良好的愿望参加有目的的竞争, 这是积极情绪诱发的结果。但是, 愿望与竞争条件及周边环境不完全一致时,就会造成心理准备上的失助,严重时也会瓦解少数人的意志力或高昂的竞争情绪。曼德勒在自己的教科书中这样解释说: 瓦解和失助可能导致同一种情绪状

态。最后,如果失助是极端的或不断发展的, 它可能转为绝望和抑郁。 鉴于此, 这种逆反心理,将一直影响运动员情绪的稳定,甚至出现一些过激的言论或行为, 最终可能导致一场悲剧式的结局, 或人们不愿见到的处罚结果。

有时, 这种逆反心理,也会造成一种动力,促进运动员在比赛过程中的个人技能、技巧得以超常的发挥。美国著名田径运动员刘易斯说: 平时主要作好身体上的准备, 到比赛时就要花90% 的精力作好心理准备。有人说, 逆境出人才, 逆境出成绩,这话不无道理。你越说我不行, 越不注意我, 我越能表现出100% 的技能、技巧的发挥。一些弱队所以能战胜强队,一个有精神力的运动员,在前两次竞赛中成绩可能平平,到最后一次可能会拿到满分。

2 .1 自信训练法

加强运动员的心理稳定性。树立其自信心是为了使运动员心态时刻能保持在一个良好的状态, 这主要是在平时比赛和训练中引导运动员正确地看待成功与失败,消除他们因受不正确的胜负观念影响而造成的心理压力, 树立起他们的自信心。要让运动员懂得,成功的标准不仅仅停留在冠军身上,只要在赛场上大家是顽强拼搏的, 思想是高度重视的,技、战术上发挥出了自己应有的水准,这就是成功的表现。要通过多次的鼓励使运动员认识到他们有实力与别人去竞争,他们是最优秀的运动员。明白了这些道理,在意志品质、心理素质上就会取得成功。

2 . 2 干扰适应法

模拟实战演练,适应赛场气氛。在赛前训练中,应提倡多以实战演练的方法进行训练。人为地制造一些与比赛相似的气氛。如用广播、大声喧哗、喝倒采、故意出现大量裁判失误,饮食、场地、时间差等不适应的因素, 使运动员提早进入赛场气氛, 要有目的、有针对性地安排一些实力较强或实力相当的队伍进行友谊比赛。

2 . 3 自我调控法

引导运动员进行自我调节训练,进行自我暗示是形成良好竞赛心理状态的方法。笔者通过多年实践和研究总结出一套比较实用的自我调控训练法。在平时的训练过程中让学生学会用语言的刺激来自我暗示,在比赛紧张时通过一些肯定的语言来消 除自己的恐惧感, 如我一定会成功。我一定能打好这场球! 。通过一些调控性的语言来放松自己的神经,摆脱紧张情绪。? 学会调整注意,改变呼吸。还可采用自我医疗按摩, 通过运用各种手段和方法对自己的关节、穴位、肌肉进行一定的按摩来缓解紧张,放松肌肉。

2 . 4 情感交流法

教练员应经常与运动员谈心, 了解他们的思想动态、性格、习惯, 时刻对他们进行关心、教育、帮助, 增进相互理解,这样在比赛中运动员才能以愉快的心情接受教

练的指导和建议,并能从教练员的一些细小动作中得到安慰和理解,从而克服临场不良情绪的发生、发展。

范文三：影响稻谷脂肪酸值测定的因素

影响稻谷脂肪酸值测定的因素

摘 要:脂肪酸值是稻谷储存品质的判定指标之一，测定脂肪酸值时样品的粉碎细度，测定环境的温、湿度，滴定终点的判断等，都会影响测定结果的准确性。

关键词:稻谷;脂肪酸值;测定;因素

2006年11月2日国家质量监督检验检疫总局和中国国家标准化管理委员会联合发布了《谷物储存品质判定规则》，并于2006年12月1日开始实施。规则中将脂肪酸值作为谷物储存品质判定的一项重要指标，因此，脂肪酸值测定结果的准确性显得尤为重要。 粮食脂肪酸值是检验粮食中游离脂肪酸含量多少的量值，其检验结果以中和100g粮食试样中游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数来表示。由于粮食在储藏期间，受水分、温度等因素的影响，所含脂类物质水解会产生脂肪酸。而且在储藏中，脂肪水解比淀粉和蛋白质水解要快。有时尽管粮食的外观品质没有改变或无明显改变，但其脂肪酸值可能已经明显增加，导致粮食品质劣变。通过对脂肪酸值大小的测定，可判断粮食品质的变化情况，推断储藏方法是否得当。脂肪酸值是粮食品质变化的灵敏指标之一，测定粮食脂肪酸值已成为分析粮食品质的一种重要方法。对脂肪酸值的测定，我国目前采用的是GB/T20569-2006规范性附录《稻谷粮食脂肪酸值测定方法》。在测定中步骤较多，且以手工操作为主，持续时间较长，这就决定了测定结果会受诸多因素的影响。

1 影响脂肪酸值测定的因素

1.1 样品的影响

1.1.1 样品的代表性

国标规定的扦样方法中扦样点的分布是一固定的模式，所扦取样品对测定脂肪酸值的真实性有一定的影响。例如粮堆发热、局部粮质过差或混有陈粮，这些部位如不在取样点上，则使测定的结果偏低。如在这些部位设置取样点过多，扦取的劣质粮样品数量多，则会引起测定结果的偏高。

1.1.2 样品的前处理

1.1.2.1 谷外糙米

对稻谷而言，如样品中混有一定量的谷外糙米，将会使测定结果偏高。因为失去外壳保护的糙米，其劣变速度比完整的稻谷粒高出许多倍，产生的游离脂肪酸也多。因此，稻谷样品中的谷外糙米应除去。 1.1.2.2 不完善粒

测定样品在粉碎前应该是除去杂质的，如在除杂的同时，将样品的部分不完善粒除去，就会使测定结果偏低。不完善粒易直接受温度、湿度、害虫和微生物的影响，产生的脂肪酸高。

1.1.2.3 粉碎细度

GB/T20569-2006规范性附录《稻谷粮食脂肪酸值测定方法》中规定，取混合均匀的样品，用实验砻谷机脱壳，取混合均匀的糙米约80g，用锤式旋风磨粉碎，粉碎后的样品一次通过CQ16(相当于40目)筛的应达95%以上。粉碎样品(筛上、筛下全部筛分范围的样品)经充分混

和后装入磨口瓶中备用。这里试样95%和100%通过40目筛都符合试样制备的要求，但粉碎样品95%通过40目筛和粉碎样品100%通过40目筛的测定结果是不同的。试样粉碎的细度越小，测定的脂肪酸值就越高。这是因为:其一，试样粉碎越细，接触空气中氧的面积就越大，试样就越容易氧化;其二，测定方法中规定的震荡提取时间是10min，在10min的震荡提取时间内，试样粉碎越细，提取试样中的脂肪酸就越容易，也越彻底。

1.2 测定环境条件的影响

1.2.1 温度

GB/T20569-2006规范性附录《稻谷粮食脂肪酸值测定方法》中规定，提取、滴定过程中的环境温度应控制在15?,25?。对其它测定环节没有温度要求。而在样品制备中，粉碎试样的环境温度高低不同，测定的脂肪酸值也不同。粉碎试样时环境温度越高，测定的脂肪酸值就越高，因为高温会加速粉碎试样的氧化，使试样测定脂肪酸值增高。提取、滴定的环境温度高，测得的脂肪酸值也高。其原因，一是温度升高，脂肪的氧化速度加快;二是温度升高，脂肪酸在乙醇中的溶解度增大;三是温度升高，会引起KOH-乙醇溶液浓度的减小。实验室温度在15?,25?，都符合测定要求，但同一试样，在15?下测定的脂肪酸值，与在25?下测定的脂肪酸值结果是有差异的。 1.2.2 湿度

GB/T20569-2006规范性附录《稻谷粮食脂肪酸值测定方法》中，对环境湿度没有作要求。但环境湿度对样品，特别是粉碎后细度很小的

样品是有影响的。环境的湿度大，样品与空气中水分接触的机会就大，样品的水解作用就会增强，脂肪酸值也会增高。

1.3 测定中操作的影响

1.3.1 滴定终点的判断

GB/T20569-2006规范性附录《稻谷粮食脂肪酸值测定方法》中，对滴定终点的判断规定，用氢氧化钾标准滴定溶液滴定至呈微红色，30s不消褪为止。操作时终点颜色的判断容易造成误差。因为肉眼对微红色终点的判断有一定的差异。操作者之间的视觉误差不可避免地会造成测定结果的偏差。

1.3.2 其它

试验中使用的计量器具，如天平、滴定管等，应是准确的;在测定每个样品时，滴定管装液的刻度应该在同一个起点，否则易造成误差。 2 脂肪酸值测定方法的探讨

通过上述分析发现，脂肪酸值的测定结果受到多种因素的影响。为保证测定结果的准确性，应进一步全面规范脂肪酸值的测定步骤、方法及测定条件。

2.1 扦样方法

为使扦取的样品更具有代表性，避免发热、局部品质过差粮不在扦样点上，或扦取的劣质粮样品数量多，造成测定结果偏差现象的发生，扦取测定脂肪酸值的试样时，应根据粮食的整体情况确定扦样方案。即正常的粮食，按扦样方法规定的扦样点扦样;对局部粮温异常或粮食品质过差的部位，应先估算其数量，然后根据估算的数量按比例扦

取样品。

2.2 规定粉碎设备及方法

为减少因试样粉碎细度的差异造成测定结果的偏差，可统一规定使用粉碎设备的技术要求和粉碎时间;或对试样粉碎细度做出更细化的要求，以减少样品对测定结果的影响。

2.3 规定测定温度、湿度

温度和湿度对脂肪酸值的测定有一定的影响。我国地域辽阔，南北方温度、湿度差异较大，即使在同一地区的不同季节也存在较大的温差。例如，新疆在夏季的空气相对湿度在40%,50%，而海南在最热月的空气相对湿度在74%,92%，再加上温度的差异，对脂肪酸值测定的影响是不可忽略的。为了使脂肪酸值测定结果更具有可比性，应统一规定试验全过程中的温度。当不能满足测定温度时，有条件的实验室，可以通过空调等调温设施，使实验室的温度满足要求。以减少温度的差异引起的测定误差。或者考虑在不同的测定温度给定一个校正值。考虑到在现有条件下实验室的湿度较难调到一个固定值，可对湿度也做给定校正值处理。

2.4 其它条件的控制

样品的提取时间长，测定的脂肪酸值高。测定中还应严格按规定提取时间。

肉眼对微红色终点的判断因检验人员的不同而有差异，造成测定结果偏差，因此滴定终点可规定参比色。

试验中使用的计量器具，如天平、滴定管等除定期送检外，在样品测

定前应进行校准，并形成制度，以减少误差。

综上所述，为了减少稻谷脂肪酸值的测定误差，扦取样品的方法应区分规定正常粮食的扦取，局部异常粮食的扦取。样品粉碎细度更细化规定。规定测定全过程的温度和湿度，对无法调到规定温、湿度要求的，可以通过给定校正值进行校正。对滴定终点的判断可以规定参比色。通过这样严格规定样品的扦样方法，测定步骤、方法及测定条件，使测定的脂肪酸值结果更具可比性。

参 考 文 献

[1] 陈无刚，尹光良，杨泽桂.影响粮食脂肪酸值测定因素的探讨[J].粮油仓储科技通讯，2008(4):45,47.

[2] 史淑娟，刘少川.关于谷类粮食中脂肪酸滴定终点判定问题探讨[J].粮食加工，2009(1):81,8

范文四：影响健康的四大因素-----脂肪、黏液、毒素、压力

影響健康的四大因素-----脂肪、黏液、毒素、壓力 只看到洗頭掉頭髮，有沒看到心臟血管開始在堵了？請認真看，救自己一命心臟血管開始在堵了

只看到洗頭掉頭髮，有沒看到心臟血管開始在堵了？請認真看，救自己一命心臟血管開始在堵了

健康是成功之本!

只看到洗頭掉頭髮，有沒看到心臟血管開始在堵了？請認真看，救自己一命很多人覺得當女孩子很麻煩，很不方便，但看完這篇文章，突然覺得當女生也是挺幸福的....

影響健康的四大因素-----脂肪、黏液、毒素、壓力。 我們先從脂肪探討起，假如你們家有女兒，你有沒有注意到她 幾歲開始發育？

我常常到學校去演講，現在的小學生平均在4年級就開始發育了， 大約是9歲10歲左右， 再回想我們這一代，那時的女孩子幾歲開始發育？

都是在國中以後13/14歲才開始發育的， 為什麼差一代差了那麼多提早了3至5年。這樣是不是遺傳？

我們西醫找不到原因通常就說它是遺傳。

現代的女孩這麼早就發育了，是不是好現象？不是啊！ 所以我們看現代的國中生 是不是臉上長了一大堆東西，一般家長以為這就是青春期，那為什麼你的小孩長而別的小孩不會長？ 我跟各位講，看到小孩子長東西，就馬上做兩點推論：

1.肝臟本來就幫我們人體過濾油脂的，然後從大便拉掉，對不對？ 但現在就是你們家長給他們吃了過多的脂溶性毒素，肝臟來不及過

濾了。

2.或是肝臟已經壞掉了，所以只好從皮膚作替代性的排除，否則油脂會進一步帶到腎臟破壞腎臟功能。

所以現在你們有沒有看報紙，有小孩8個月小小年紀就得到肝癌。 你們有沒有想 過為什麼？我跟各位講，你們給小孩吃了過多的脂溶性毒素了。

什麼叫作脂溶性毒素

就是所謂的飽和性脂肪酸，如動物的油脂，牛油、豬油..等。

還有一種油是大家都疏忽的，叫TFAS，或反式鍵結脂肪酸，它是什麼油呢？

就是我們一般所謂的氫化植物油、乳馬林或是人造奶油。 這種油存在於大部的西點與餅干裡頭。

還有我們去吃韓國烤肉時，旁邊放的那一塊奶油或是奶油餅裡 所包的都是這種油脂。

這種油在料理時好香喔，以前以為這種油比奶油還營養，結果幾十年下來，發現 不得了，發現它是經由加工處理過的，它的結構在化學上是呈反式的鍵結，它比真正的 奶油要毒上好幾百倍，Time雜誌在幾個月前就已經公布出來了，這種油在自然界是不存在的也就是說在自然情況下，人體是無法處理消化這種油脂的。

一吃下去馬上對肝臟產生傷害，而且還會破壞人體細胞膜，造成細胞的缺陷影響未來的複製與再生。

結果大家都不知道，你們家小孩愛吃麵包，臉上就長個麵包臉；更何況有些媽媽根本就不做飯的，整個家庭都是外食的，那你們想想，外面的自助餐或餐廳可不可能給你們弄什麼好油？

所以你們家小孩為什麼臉上長的花花綠綠的現在了解了吧！ 他的肝臟可能已經受到脂溶性毒素的傷害了。

要是你們家長還不把它當成一回事，那你們要注意啊！

油脂會堵塞毛囊， 男子年紀輕輕20幾歲就開始洗頭掉頭髮，開始要

迎接禿頂時代。

有些太太會問，那我和我的先生都吃一樣的東西， 為什麼只有我的先生會掉頭髮，而我不會？

那讓我們來探討男生和女生的生理結構有什麼不同，女生是不是每個月都有一次月經啊，女孩子每個月會藉由月經將脂溶性毒素排除體外， 所以當然只有你們的先生會掉頭髮。

而男孩的脂溶性無法由下面排除出去，就是所謂的雄性禿」。

而我們只看到洗頭掉頭髮，有沒看到心臟血管開始在堵了？腦血管在堵了？

這樣就知道了吧，為什麼現代人有這麼多的心臟病和腦中風。

再來，這些脂溶性毒素會堆積骨頭裡，慢慢造成所謂的退化性關節炎， 這些人只 要一稍微吃油脂，關節就開始痛、手就開始麻起來了，百試不爽。

再下去這些脂溶性的毒素會干擾到內分泌系統，你就會出會一大堆奇奇怪怪的毛病，包括糖尿病，所以爸爸糖尿病、兒子也有糖尿病，不要就以為是遺傳，是因為爸爸吃得油膩膩、兒子也跟著吃得油膩膩。 所以糖尿病患者只要將油脂的攝取量降低，很多病患的血糖都可以恢復正常。所以這種現象怎麼可以叫做遺傳呢？

所以光一個脂肪在我們的身體各部位不正常的堆積造成不同的病名， 你們從小有沒有告訴你，那些幫你開一些紅紅綠綠的葯的醫生 有沒有告訴你，沒有啊！

難怪他們的頭髮掉得比你先生的還多、臉色比你的先生還差，那就很奇怪了，為什麼 那些 醫師開出來的紅紅綠綠的東西，你們為什麼要吃。

【癌細胞是好細胞】

你知道一星期你最多可以吃多少雞蛋嗎？

你吃幾粒？你呢？答案原來是四粒。

醫師說時傳來一本台灣翻譯的醫學書籍，指著上面的例子。

「我從前肯定是超標的，早餐荷包蛋、午餐烚蛋、晚餐炒蛋，方便又有營養嘛。

因為從來沒有人告訴我，吃蛋無益。」 以上的獨白，出現在一個健康講座上，說話人是梅襄陽，台灣牙醫。

他每逢一三五看病，二四六做免費演講，宣傳健康飲食防癌之道。 聽他的演講，總覺得有濃厚的傳道意味。

癌細胞是好細胞面對荼毒生靈的流行飲食文化，他惡之如魔鬼。 演講中經常引述的 《如何從飲食防癌》、《新世紀飲食》、《別讓醫生殺了你》， 就是他的聖經。

多一 個人加入組成防「癌長鏈」民間組織，就是他的救贖。不為什麼，只因為他曾經受過此苦。

三十三歲那年，風華正茂的梅醫師（台灣是如此稱呼）證實患上肝癌，同時發現嚴重脂肪肝、腎臟抽痛、嚴重痛風。

只有 三公分 大的腫瘤，叫當時 八十公斤 約一七六磅重的小胖子吃盡苦頭。醫師也是人，他當時想的也是：「這些怎麼會發生在我身上？」 冷靜下來後，他檢視了生平所學，審查了個人的生活習慣。 六年來，從不斷的資料蒐集和整理當中，領悟到癌的真諦。 「癌細胞是什麼？是你的死敵？你錯了。」

在講座上，他神情並茂的為人人得而誅之的癌細胞辯護：

「它其實是你自己的細胞。你現在割它、電它、殺死它，通通都不對。 因為它之所以變成癌細胞，都是因為維護你，為了裹住體內過量的毒素，自我犧牲。」

我們身體有太多毒素 「你知道嗎？肝臟是我們身體的化工廠，所有脂肪類或脂溶性毒素，都要經過肝臟過濾。

太多毒素過濾不了，就會進入血液，然後從皮膚上排出來。

現在的小孩子到五六歲，臉上就花斑斑的，就是因為他們吃了太多質素欠佳的食物囉。」

聽著梅醫師這麼迫切的語氣，頓時讓人感到呼吸窒息，什麼！

現代人吃得實在太糟糕了！

身為癌症康復者的他，反而精神奕奕，比起很多四十新中年後生得多。 到底，他憑什麼走過來？「就是飲食。」

這六年來，他摒棄了從小到大至愛的蛋、奶、肉， 改吃地瓜湯、青菜、水果、素食營養粉等，只吃一頓正餐，經歷過兩次大排毒反應，硬是將嚴重的飲食不平衡校過來。

【排毒過程】

置諸死地而後生「當時咳了超過一個月，咳得胸痛肚痛，伴隨感冒發燒，吐出來的都是黃痰，黏黏的，很臭！」

他正色道：「千萬不能用藥去壓，多飲水，休息三五七天就好了。 你知道嗎？不論得什麼癌，到最後總是咳嗽，因為毒素變成黏液，要透過淋巴排出來。

但醫生一看，不得了，是急性肺炎，結果服了藥後，毒素反而被迫滯留體內。」 每一次講座，他都會講這個笑話：

「女孩子最幸福，你知道為什麼嗎？因為子宮是身體最大的排毒器官，每個月一次的出血，將不少積存的毒素帶走。

男孩子可慘了，沒有這個特殊通道， 滯留的毒素惟有走上頭頂，於是得頂上光溜溜的.」

真相，往往是笑中有淚的。

梅醫師防癌四部曲：

1.改變生活型態，不吃不該吃的東西

（高鹽、高油、高蛋白質的素食，也屬不該吃）

2.吃對東西，四低一高食物

（即低鹽、低糖、低脂肪、低蛋白質和高纖維）。

3.了解生命意義，啟動康復力。

4.邁向健康之路，坦然接受排毒。

范文五：脂肪干细胞定向分化的影响因素_相新新

脂肪干细胞定向分化的影响因素

相新新 赵 晶 李 茵 张炜真

(北京大学医学部基础医学院生理学与病理生理学系, 北京100191)

v

*

摘要 脂肪干细胞是一类由脂肪组织分离出来的间充质干细胞, 具有自我更新和多向分化潜能, 可长期自我更新并在特定的条件下分化形成多种终末细胞。本文总结近年来关于脂肪干细胞定向分化的研究成果、介绍脂肪干细胞的分离培养技术、影响脂肪干细胞成脂成骨定向分化能力的主要因素, 以及在各种终末分化细胞之间/转分化0的作用条件, 从而为寻找治疗肥胖的新靶点以及骨组织工程学提供新思路。关键词 脂肪干细胞; 分化中图分类号 Q254

D irec tionalD ifferentiation of A di p ose -D erived Ste m Cell X I A NG X i n -X in , Z HAO Ji n g , LI Y i n , Z HANG W e-i Zhen (Depart m ent of Phy sio logy and Patho phy siology, P eking University H ealt h S cience C enter , Be ijing 100191, Ch i na)

Abst ract Ad i p ose -derived ste m ce lls (ADSC s) are m esenchy m al ste m cells (MSCs) derived fro m ad-i pose tissue , w hich have the ab ility to sel-f rene w and d ifferentiate i n to m any types o f tissues . H ere w e

summ arize the recent advances in the research o fADSC s , intr oduce the m ethods ofADSCs iso lation and cu lture , and discusse the factors regu lati n g the adipo -d ifferentiati o n and osteo -differentiation of ADSC s . The present revie w w ill y ie l d nove l i n si g ht relevant to the t h erapeutic i n ter venti o n o f obesity and osteo -tis -sue engineeri n g . K ey w ords adipose -derived ste m ce lls ; differentiation 随着城市化进程加速, 肥胖在我国尤其是大城市发病率增长迅速, 目前已有两亿成年人超重, 六千万人肥胖。肥胖是一种由于长期的能量摄入超过能量消耗引起的脂肪组织过剩的疾病。尽管在成人阶段脂肪细胞数量保持恒定, 但这并非是最初的细胞保持一生, 而是一种细胞死亡与补充更新的动态平衡过程。然而, 在活体脂肪形成模型研究中提示, 成熟的脂肪细胞是一种终末分化的细胞, 只有有限的增殖和复制的能力。放射性示踪研究发现在人和啮齿类动物的脂肪组织中, 细胞的倍增速度约为6~15个月。以此推测, 脂肪组织中存在着干细胞群, 发挥着更新脂肪细胞的作用并且贯穿整个生命过程。本文就脂肪干细胞的分离培养及特性、分化能力的影响因素做简要介绍。

脂肪干细胞(ad i p ose -deri v ed ste m cells , AD-SCs) 是一种存在于脂肪组织中的间充质干细胞, 在皮下白色脂肪组织中约占细胞总量的10%~20%, 具有一般干细胞的特点, 即自我更新和多向分化潜能; 这种细胞群易于分离, 与骨髓间充质干细胞(肌等; 可以通过脂肪抽吸术或脂肪切除术获得, 在体

外培养可稳定扩增, 不易衰老, 免疫荧光及流式细胞仪检测显示这种多能干细胞大多数来源于中胚层。ADSC s 比B M SCs 更具备一些优势, 因脂肪组织分布广泛、容易获取、对病人创伤少、患者易于接受, 而且细胞群易于分离, 增殖速度快, 成为目前研究的新热点。ADSC s 作为间充质干细胞, 可以向内、中、外胚层细胞分化, 在不同诱导条件下的分化方向不同, 同样来源于中胚层的成骨细胞和脂肪细胞之间可能存在着某种联系。通过研究ADSC s 成脂成骨分化的影响因素, 可能找到治疗肥胖的新靶点以及骨组织工程学的新思路。

一、脂肪干细胞的分离和培养

ADSC s 最早是上世纪60年代Rodbell 和Jones 从脂肪组织中分离出来的。他们切碎鼠的脂肪垫, 经过充分仔细的冲洗以去除血细胞, 然后用胶原酶进行消化、离心, 进而从基质血管组分(stro m a l vascular fraction, SVF ) 中分化出成熟的脂肪细胞。

*v

国家自然科学基金(30971085, 30871194) 资助课题

SVF 是由多种细胞群组成, 除了ADSCs 细胞以外, 还包括循环血细胞、纤维母细胞和内皮细胞, 同样也有前体脂肪细胞或原始脂肪细胞。

一般而言, ADSCs 的分离是在分离脂肪组织后随即进行。但有报道称临床上脂肪抽吸术后的脂肪组织可以在室温下保存24h 而不影响有活力的AD-SCs 的获得率。将分离的脂肪组织在磷酸盐缓冲液(phosphate buffered sa line , PBS) 中充分清洗, 以去除毛发和油滴等; 然后将脂肪组织用眼科剪剪碎, 加入胶原酶在37e 水浴摇床消化30m i n , 用含有10%FBS 的DME M /F-12培养基终止消化, 细胞筛过滤后, 800rpm /mi n 预离心, 上清液2400rpm /mi n 离心得到的沉淀即为SVF , 其中含有ADSCs , 用含有10%胎牛血清(fetal bov i n e serum , FBS) 的D M E M /F -12培养基重悬细胞沉淀, 将单细胞悬液种植到培养瓶或培养板中, 37e , 5%C O 2孵箱孵育。

初分离的细胞接种4h 后开始贴壁, 24~48h 内细胞生长处于停滞期, 细胞形态呈小圆形, 细胞核居中, 可出现双核或多核。48h 后开始伸展生长, 呈纺锤形、多角形等改变。8天后可见细胞增长明显加快, 贴壁细胞出现梭形及纤维细胞状形态。与培养的B M SC s 在形态学上很难区分。

间充质干细胞目前没有公认的特异性的表面标志。ADSCs 与B M SC s 的表面标记非常相似, K atz 等研究表明两种细胞均能够表达CD29、CD44、CD105、CD49b 和CD49e , 均不表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR 和CD133, 其中的差别在于ADSC s 表达CD49d 而不表达CD106, B M SCs 不表达CD49d 而表达CD106。此外, ADSC s 的表面标志蛋白还有HLA-ABC 、CD9、CD10、CD13、CD54、CD55、CD59、CD146和CD166。Rodeheffer 等把CD31(-)CD45(-)Ter119(-)CD29(+) Sca1(+) CD24(+) 的细胞作为ADSCs 的分选指标。流式细胞仪检测和免疫组化染色可以对ADSC s 的确认有辅助作用, 但是ADSC s 的鉴定主要还是在确认其多向分化能力方面。通过多系定向诱导, 并且检测确定诱导成功是鉴定ADSC s 的金标准。

二、ADSC s 细胞成脂分化的影响因素(一) 供体因素

1. 种属来源:ADSC s 可以从人、大鼠、小鼠、兔、猪及犬等哺乳动物的脂肪组织中分离培养。虽然不同种属来源的ADSC s 都具有自我更新和多向分化的能力, 但不同来源的ADSC s , 其分化能力有一定差别[2]

[1]

2. 组织部位:同一种属不同部位来源的ADSCs

成脂分化能力亦不同。Toyoda 等(2009) 报道, 人皮下脂肪组织来源的ADSCs 成脂能力优于网膜脂肪组织来源的ADSC s , 虽然它们的增殖速率相似。他们认为这种现象可能与皮下脂肪组织比网膜的脂肪组织更易发生炎症反应有关。

3. 年龄:年龄对ADSCs 成脂能力的影响有争议。Sh i 等(2005) 认为随着年龄的增长, 小鼠AD -SCs 的成脂能力逐渐降低。低龄小鼠的增殖速率和贴壁能力都要强于高龄鼠。但是, Zhu 等(2009) 认为年龄对人ADSC s 的成脂能力没有影响, 同时也不

[3]

影响ADSCs 的增殖能力。

4. 性别:Oga w a 等(2004) 的研究认为性别对ADSC s 的成脂能力有影响。他们认为雌性小鼠的成脂能力优于雄性小鼠。大量临床和流行病学研究资料显示性激素等类固醇激素在人脂肪组织的解剖学分布中起决定性作用。他们认为雄激素是一种抑制成脂的因素, 而雌激素则促进成脂。

5. 连续传代:Zhu 等(2008) 认为不同代数的ADSC s 细胞倍增时间没有明显的差别。而W all 等认为随着传代次数的增加, ADSCs 的生长速度下降, 倍增时间增加。在第十代之前, ADSCs 的成脂成骨能力是恒定的, 之后成脂能力下降, 成骨能力开始起主导地位

[4]

。这种/转分化0的机制, 有待于进

一步研究, 便于更好地了解ADSC s 的特性。6. 冷冻保存:ADSC s 绝大多数是由原代脂肪组织消化分离来, 某些研究和条件的限制需对原代ADSC s 冷冻保存, 那么复苏后的ADSC s 的生物学特性会有什么样的改变? Gonda 等(2008) 的研究结果显示, 液氮冷冻保存长达六个月后并不影响ADSCs 的增殖和成脂成骨分化能力, 但是成软骨能力明显增加。

(二) 分化诱导因子1. 表皮生长因子(epider m al gro w th factor , EGF):EGF 是一种单链多肽, 能够促进多种哺乳动物组织的增殖和分化。研究表明EGF 可提高冷冻保存后的人ADSC s 的增殖及成脂分化能力。而且培养后的ADSCs 表现出更强的胰岛素诱导的糖摄取能力及心房钠尿肽诱导的脂解作用

[5]

。

2. 成纤维生长因子(fi b rob last gro w th factor , FGF):FGF 是肝素结合生长因子家族的一员, 到目前为止, 共发现了二十多种成纤维生长因子, 其具有趋化性、血管生成效应及有丝分裂促进活性, 并且在分重

(2008) 认为FGF 能够促进人ADSCs 的增殖及成脂成骨分化能力, 他们认为FGF 的这种促成脂成骨分化能力源于FGF 促进细胞的增殖能力。Kakudo 等认为FGF 促进ADSCs 成脂分化是通过有丝分裂原激活蛋白激酶激酶/细胞外信号相关激酶(m itogen -acti v ated pro tein k i n ase k i n ase /ex tracell u lar si g na-l regu l a ted kinase , MEK /ERK)信号通路, 同时伴随着过氧化物酶体增殖物激活受体C (perox iso m e pro li-f erators activated receptor C , PPAR -C ) 基因表达的增加

[6]

3. 性别:Aksu 等(2008) 的研究表明男性ADSCs

的成骨分化能力优于女性, 具体机制不明。任何与性别及组织部位相关的微环境, 如激素、细胞营养状态都可能影响到ADSC s 的成骨分化。

4. 连续传代:如前所述, 连续传代对ADSCs 的影响具有争议。一般认为, 在第十代之后, 成脂能力下降, 成骨能力开始起主导地位

[4]

。

5. 冷冻保存:冷冻保存对ADSC s 成骨分化的影响与成脂分化相似。Liu 等(2008) 和Gonda 等(2008) 的研究结果都显示:液氮冷冻保存不影响ADSC s 的增殖和成骨分化能力。

(二) 分化诱导因子

1. 骨形成态蛋白(bone m orphogenetic pr o te i n , B M Ps):B MPs 是B -转化生长因子超家族的一员。它们参与调节细胞增殖、分化和凋亡, 因此在胚胎细胞的发育及图式形成(pattern for m ati o n) 中起重要作用。骨形成态蛋白多达20多种, 其中B M P2、4、6、7可以影响ADSCs 的成骨分化。有研究表明, B M P -2可以通过上调d ista-l less ho m eobox 5(D l x -5) 的表达, 导致骨特异的碱性磷酸酶或者是成骨诱导性的转录因子Runx2表达增加

[8]

。同EGF 一样, FGF 也能促进冷冻保存后的人

ADSCs 的增殖及成脂分化能力, 并且与EGF 有协同作用。

(三) 其他

1. 人腺病毒36亚型(Ad-36):Ad -36感染实验动物模型后引起肥胖, 有研究表明其与人类的肥胖症相关。Pasarica 等(2008) 研究表明Ad -36影响人ADSCs 的定向分化, 并促进成脂分化及脂质沉积。他们随后的研究表明, Ad -36促进成脂分化的能力是由于E4开放读码框基因产物通过磷脂酰肌醇-3激酶(phospho i n ositi d e 3ki n ase , PI 3K ) 的PDZ 蛋白结合区域上调了PI3K 信号通路而引起

[7]

。。L i n 等(2006, 2009) 研究

2. 绿色荧光蛋白(green fluorescent protei n , GFP):GFP 转基因鼠是在1997年生产出来的, 确认绿色荧光蛋白不需要复杂的操作, 而且对细胞培养也没有干扰, 因此为细胞移植实验提供了便利。Lin 等(2006) 的研究显示由GFP 转基因鼠分离得到的ADSCs 与非转基因鼠具有相同多向分化的潜能, 而且不影响绿色荧光蛋白的表达。同时用腺病毒载体携带的绿色荧光蛋白转染ADSC s , 不影响ADSCs 的分化能力。

三、ADSC s 细胞成骨分化的影响因素(一) 供体因素

1. 组织部位:不同于成脂分化, Peptan 等(2006) 认为内脏脂肪组织来源的干细胞的成骨分化能力优于皮下脂肪组织来源的干细胞。组织学染色显示是由于内脏的血管比皮下丰富, 促进了成骨分化。

2. 年龄:年龄对ADSC s 的成骨分化能力的影响存在争议。Sh i 等(2005) 认为年龄不影响人ADSCs 的成骨分化能力。但是Zhu 等认为年龄对ADSCs 的成骨分化能力的影响比较复杂, 在40~50岁之前成骨能力没有下降, 之后成骨能力下降, 时间界定不明显, 而且这种下降不仅仅是由于成骨前体细胞数

[3]

, 显示转染带有B M P4的腺病毒增加ADSCs 的成骨分化能力。

2. 自体富含血小板血浆或富含生长因子血浆(p late l e -t rich plas m a , PRP):PRP 是将全血进行离心所得到的含高浓度血小板的自体血浆, 体外激活后血小板脱颗粒释放出多种生长因子, PRP 作为生长因子的来源, 可刺激和加快骨的形成和软组织的愈合。有研究表明体外培养时, PRP 可促进人AD -SCs 增殖并诱导其向成骨细胞转化, 其可能机制为:PRP 中血小板源性生长因子(p latele-t deri v ed gro w th factor , PDGF) 、血管内皮生长因子(vasc u lar endothe -lial gro w t h factor , VEGF) 、转化生长因子-B (transfor -m i n g gro w t h factor -B , TGF -B ) 和表皮生长因子(ep-i der m al gro w th factor , EGF) 等各种生长因子协同作用刺激成骨前体细胞的有丝分裂, 增加成骨细胞数量, 促进其分泌形成细胞外基质(extrace llular m a -tri x , EC M )

[9]

。

3. 褪黑激素:褪黑激素在多种生理活动中发挥作用, 如睡眠、胃肠生理、免疫防御、心功能和解毒作用。褪黑激素在细胞增殖方面的作用依赖于其浓度及作用的细胞类型。Za m i n y 等对褪黑激素对AD -SCs 成骨分化的影响做了研究。他们的研究表明,

其可能的原因是由于褪黑激素抑制了ADSC s 的生

[10]

长增殖, 促进其发生凋亡。

(三) 其他

1. 拉伸应变:骨组织是有弹性的组织, 可以通过改变重量、形状及构造来感受和适应外来的机械刺激。H anson 等(2008) 的研究表明持续性和间歇性的周期拉伸应变均可增加ADSCs 的成骨能力, 而且间歇性的机械负重优于持续性的应变。与没有拉伸刺激的分化细胞相比, 细胞数目并没有差别, 只是向成骨方向分化的前体细胞增多。

2. 透明质酸:透明质酸影响细胞的粘附、迁移和增殖, 还影响间充质干细胞的分化, 对胚胎细胞的发育也有一定的影响。Chen 等(2007) 研究表明, 透明质酸可以保持长期培养ADSC s 的增殖和分化能力, 在培养皿表面预先包被一层透明质酸可以延长AD-SCs 的寿命和增强成骨分化能力。

3. 氧浓度:M a lladi 等(2006) 在研究ADSCs 向成软骨分化时, 考虑到软骨是无血管的组织, 而且在软骨内骨化时需要低氧的环境, 便就氧浓度对成骨成软骨分化的影响做了一些工作。其研究表明相对于大气中21%的氧浓度, 低氧(2%) 能够抑制ADSCs 的成骨分化, 可促进其向其它方向的定向分化。

4. N-[N-(3, 5-D ifluorophenacety l)-L -a lany l]-S-phenylg l y c i n e -t buty l ester (DAPT ):DAPT 是C -分泌酶的抑制剂, 通过阻止Notch 受体的清除而抑制N otch 信号通路。N otch 蛋白是单次跨膜受体, 决定胚胎发育及出生后细胞的结局。在经典的N otch 信号通路中, N otch 蛋白经历两次溶蛋白性裂解, 在第二次裂解后释放No tch 细胞内区域(notch i n trace ll u -lar do m ai n , N I CD ) 。N I CD 入核作为核转录辅助因子参与目的基因的转录。C -分泌酶复合体介导了N otch 的裂解和N I C D 的转位。DAPT 能够降低AD-SCs 的增殖能力, 增强由维生素D3诱导的成骨分化能力, 这种现象是由于DAPT 抑制了No tch /Hey1信号通路, 使Runx2的表达增加, 从而成骨能力得到

[11]

增强。

5. 钙离子:钙离子作为信号分子在各种生理活动中发挥着重要作用。通过改变培养基中钙离子的浓度而发现, 人ADSCs(hADSCs) 在8mM Ca 的培养基中增殖能力最强, 矿物质沉积也最多。这种现象是由于8mM 钙离子能够显著提高培养基中磷酸盐的浓度及磷酸盐/蛋白的比值, 从而使羟基磷灰石

[12]

2+

四、同时影响成脂和成骨分化的因素

目前, 对于同时影响ADSCs 成脂成骨分化的研究结果还不多, 特别是针对/转分化0的研究更是少之又少。

(一) 生长因子和受体

1. FGF :FGF 是肝素结合生长因子家族的一员, 具有趋化性、血管生成效应及促有丝分裂活性, 并且在早期分化和发育过程中起重要作用。R ider 等(2008) 认为FGF 能够促进人ADSC s 的增殖及成脂成骨分化能力, 他们认为FGF 的这种促成脂成骨分化能力是由于FGF 增加细胞的增殖能力。Kakudo 等认为FGF 促进人ADSCs 成脂分化是通过MEK /ERK 信号通路, 伴随着PP AR-C 基因表达增加

[6]

。

但是FGF 对ADSCs 成骨分化能力影响颇有争议。Quarto 等认为FGF -2不影响人ADSC s 的成骨分化, 但是抑制小鼠ADSCs 的成骨分化, 可能机制是抑制了B M PR -1B 的上调

[13]

。Kakudo 等也认为FGF -2

不影响人ADSC s 的成骨分化。由于研究对象的不同, FGF -2对ADSCs 成脂成骨转分化的影响还需要进一步的研究证实

[6]

。

2. 17-B 雌二醇(E2):雌激素对蛋白质代谢、脂肪代谢、骨骼代谢及水盐代谢都能发生作用, 还可促进生殖器官的细胞增殖和分化、加速蛋白质合成、促进生长发育。女性比男性更容易肥胖, 说明雌激素在ADSC s 的成脂分化中有重要作用。H ong 等研究了雌激素对ADSC s 成脂成骨分化的影响。研究表明17-B 雌二醇能够促进ADSC s 的成脂成骨分化, 促成骨分化的机制可能是通过上调一些细胞因子、前列腺素E2和成骨生长因子(B MPs 、TGF-B 、I G F) 实现的。由于缺少年龄和性别差别方面的研究, 雌二醇促进ADSCs 成脂成骨分化的机制还有待于进一步研究证实

[14]

。

3. To ll 样受体(TLRs):TLR s 在免疫系统中发挥主要作用, 尤其是在识别病原微生物体及其组分方面。在脂肪组织来源的干细胞中主要表达的是TLR-1、TLR -2、TLR-3、TLR-4、TLR -5、TLR-6和TLR-9。TLR 激动剂有鞭毛蛋白、粘多肽(PGN ) 、脂多糖(LPS) 、人工合成的双链RNA 类似物Poly I :C 及人工合成的CpG 寡脱氧核糖核酸(CpG-ODN ) 。Hw a Cho 研究表明, 上述激动剂中, ODN 影响人AD -SCs 的增殖, PGN 抑制ADSC s 的成脂分化能力, 而LPS 和PGN 通过激活ERK 信号通路增加ADSC s 的成骨分化能力。

4. 糖[15]

(2008) 的研究显示, GSK3抑制剂B I O 和LI CL 抑制人ADSCs 的增殖和成脂成骨分化能力, 但是具体的信号通路不明, 有待进一步的研究证实。5. PPAR C 和视黄醇类X 受体(reti n oid X recep -to , r RXR ):醋酸三丁基锡(tributy ltin , TB T ) 既是RXR 又是PP AR C 的激动剂。有研究表明从在胚胎期就暴露在外源TBT 环境下的小鼠脂肪组织获得的ADSCs 成脂能力增强, 成骨能力下降, 其机理是由于TBT 激活了成脂因子PPAR C , 从而使ADSCs 向脂肪细胞的分化加强。同理, PPAR C 的激动剂罗格列酮(rosig litazone) 也得到了相似的结果

(二) 细胞内信号通路

[16]

场所, 直到有分化信号的刺激, 它才脱离静止的状态。因此干细胞巢在维持干细胞的静止和抑制分化方面发挥着重要作用。目前对脂肪干细胞巢的研究比较少, 仅仅报道了ADSCs 在脂肪组织中的位置及来源。T ang 等认为白色脂肪组织祖细胞位于脂肪组织脉管系统的周细胞区域

[2]

。研究表明外周血

[19]

中的纤维细胞在脂肪组织单核细胞趋化因子-1作用下, 向脂肪组织趋化并可分化为脂肪细胞。此外, F l y nn 在构建hADSC s 的微环境方面做出了突出的贡献。其2010年的文章报道, 可以用一种脱细胞的脂肪组织(decell u larized ad i p ose tissue , DAT ) 为hADSC s 提供含有完整基底膜成分的EC M 作为诱导分化的微环境。通过吸脂手术获得的脂肪组织在经过反复的酶消化和极性溶剂萃取后, 尽可能的去除脂肪细胞及细胞碎片, 最大程度的保留基底膜, 获得的三维结构的细胞外基质骨架在没有外源激素诱导因子的情况下, 仍然可以使hADSC s 在较高水平表达LPL 、PPAR C 和CEBP 。

对骨髓间充质干细胞微环境的研究较多。在某些方面, 同是间充质干细胞的脂肪干细胞巢可以参考这方面的研究。Laschober 等(2009) 认为原代人骨髓间充质干细胞随供体年龄的增加或在应激状态下, 死亡细胞数目增加, 并伴随leptin 受体/CD295表达增加。DM i asc i o 等(2007) 则阐述了另一个脂肪因子脂连素(ad i p onectin) 对骨髓造血干细胞造血功能的影响。他们认为造血干细胞巢表达adiponec -tin , 造血干细胞可以表达adiponecti n 受体。Ad-i ponectin 激活p38MAPK 信号通路而增强造血干细胞的增殖并使其维持在一种功能不成熟状态。C a-l v i 等(2003) 研究表明甲状旁腺激素通过激活PTH /PTH rP 受体而使成骨细胞和N otch 配体japped 1(Jag 1) 数目增加, 并能使增加的造血干细胞维持在一定水平。表明成骨细胞在体内通过No tch 信号影响造血干细胞来调节造血干细胞巢。

ADSC s 所生存的环境) ) ) 干细胞巢对ADSCs 的生物特性, 特别是在维持ADSCs 自我更新和定向分化之间的平衡状态方面起到非常重要的作用。但目前这一方面的研究比较匮乏, 加大脂肪组织干细胞巢的研究有助于我们进一步了解ADSCs 。

五、结语

综上所述, ADSC s 的分化能力受多种因素的调节。不仅受供体因素和干细胞巢的调节, 还有各种分化诱导因子、生长因子和受体及细胞内信号通路[20]

。

1. W nt/beta-catenin 信号通路:W nt 是一种脂质修饰的糖蛋白, 它通过激活细胞表面的受体, 从而调节细胞信号转导通路, 影响细胞的活动。B -catenin 是CTNNB1基因的产物, 连接钙粘着糖蛋白类与肌动蛋白的细胞骨架, 是细胞粘附和迁移所必须的。W nt/beta-caten i n 信号通路主要通过调节B -catenin 的表达及亚细胞定位来影响细胞功能, 其对ADSCs 成脂成骨分化能力的影响存在争议。Hw a Cho 等(2006) 认为, 外源性的W nt3a 虽可促进人ADSCs 增殖速率, 但抑制成骨分化, 可能机制是通过上调B -caten i n 发挥作用的。有研究表明:激活W nt/beta-caten i n 信号通路能够抑制猪ADSC s 的成脂分化, 增强成骨分化的能力, 并认为这种/转分化0现象表明W nt/beta-caten i n 信号通路在ADSCs 定向分化的命

[17]

运结局上起部分作用。

2. 细胞外信号相关激酶(ERK ) 信号通路:ERK 是有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPKs) 超家族的一员, 是高度保守的Ser /Thr蛋白激酶。一系列胞外信号可激活ERK 进而激活其下游蛋白激酶, 从而调节许多重要的细胞功能, 例如表型修饰和基因修饰的转录调节等方面。ERK 信号通路在干细胞成骨分化方面的作用已明确。有研究表明ERK 的活化与人ADSC s 的成骨分化是平行的, 通过抑制ERK 上游激酶MEK1可以剂量依赖性抑制人ADSC s 的成骨分化。在地塞米松和M EK1特异抑制剂存在的情况下, ERK 能够促进人ADSC s 的成脂分化。研究认为这种转分化现象比较复杂, 还需要进一步的研究不同的信号通路和其他成骨分化液成分在转分化

[18]

中的作用。

(三) 干细胞巢(ste m cell niche) 干细胞巢即干细胞周围的微环境, 一般包括干细胞的相邻细胞、

ADSCs ; 皮下组织来源优于其他组织来源的ADSCs ; 雌性优于雄性; 随着年龄增长和传代次数增加, AD-SCs 的成脂能力下降; GSK3抑制剂和粘多肽抑制ADSCs 的成脂能力; EGF 、FGF 、和人腺病毒36亚型促进ADSC s 的成脂能力; 冷冻保存和绿色荧光蛋白对ADSCs 的成脂能力无影响。就ADSC s 的成骨分化能力, 内脏脂肪组织来源的干细胞的成骨分化能力优于皮下脂肪组织来源的干细胞; 年龄对人AD-SCs 成骨能力的影响有争议, 有研究者认为在40~50岁后成骨能力下降, 但ADSCs 在十代后成骨能力占据主导作用。B M Ps 、PRP 、LPS 、PGN 、17-B 雌二醇、透明质酸和拉伸应变可以增加ADSC s 的成骨分化能力。生理剂量的褪黑激素、低氧浓度和GSK3抑制剂抑制ADSCs 的成骨分化能力。

虽然对ADSCs 分化的研究已很多, 但是这些实验结果几乎都是在体外条件下获得的, 缺少体内研究数据。而且多数结果仅仅单独研究了ADSC s 的成脂分化能力或成骨分化能力, 对ADSCs /转分化0现象研究不多, 许多内在分子机制有待更进一步的研究。对于调控干细胞可塑性的基因和蛋白, 目前亦知之甚少, 很多基本问题还需要深入研究和探讨。

参

考

文

献

1 K atz A J , T holpady A, T ho l pady SS , et a. l C ell surface and

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