范文一：植物体内脯氨酸含量测定

植物体内脯氨酸的含量测定

植物细胞膜起调节控制细胞内外物质交换的作用，它的选择透性是其最重要的功能之一。当植物遭受逆境伤害时，细胞膜受到不同程度的破坏，膜的透性增加，选择透性丧失，细胞内部分电解质外渗。膜结构破坏的程度与逆境的强度、持续的时间、作物品种的抗性等因素有关。因此，质膜透性的测定常可作为逆境伤害的一个生理指标，广泛应用在植物抗性生理研究中。

当质膜的选择透性被破坏时细胞内电解质外渗，其中包括盐类、有机酸等，这些物质进入环境介质中，如果环境介质是蒸馏水，那么这些物质的外渗会使蒸馏水的导电性增加，表现在电导率的增加上。植物受伤害愈严重，外渗的物质越多，介质导电性也就越强，测得的电导率就越高（不同抗性品种就会显示出抗性上的差异。） 蛋白质 水分子

疏水端 脯氨酸 亲水端

脯氨酸是水溶性最大的氨基酸，具有很强的水合能力，其水溶液具有很高的水势。脯氨酸的疏水端可和蛋白质结合，亲水端可与水分子结合，蛋白质可借助脯氨酸束缚更多的水，从而防止渗透胁迫条件下蛋白质的脱水变性。因此脯氨酸在植物的渗透调节中起重要作用，而且即使在含水量很低的细胞内，脯氨酸溶液仍能提供足够的自由水，以维持正常的生命活动。正常情况下，植物体内脯氨酸含量并不高，但遭受水分、盐分等胁迫时体内的脯氨酸含量往往增加，它在一定程度上反映植物受环境水分和盐度胁迫的情况，以及植物对水分和盐分胁迫的忍耐及抵抗能力。 植物体内脯氨酸的含量可用酸性茚三酮法测定。在酸性条件下，脯氨酸和茚三酮反应生成稳定的有色产物，该产物在 520nm 有一最大吸收峰，其色度与含量正相关，可用分光光度法测定。该反应具有较强的专一性，酸性和中性氨基酸不能与酸性茚三酮试剂形成有色产物，碱性氨基酸对这一反应有干扰，但加入人造沸石（permutit ），在 PH 1~7 范围内振荡溶液可除去这些干扰的氨基酸（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸，精氨酸等 2 —氨基的氨基酸）。

[ 实验材料 ] 绿豆幼苗

[ 仪器设备 ] 分光光度计、水浴锅、天平、带塞试管、研钵、石英砂、漏斗、滤纸、玻棒、电导率仪、微波炉、移液管、试管、 50mL 小烧杯等

【试剂药品】

1 ．无离子水

2 ． 80% 乙醇。

3 ．酸性茚三酮试剂：称取 2.5g 茚三酮，加入 60mL 冰醋酸和 40mL 6mol/L 磷酸，于 70 ℃ 加热溶解，冷却后储于棕色试剂瓶中，4 ℃ 保存，两天内稳定。

4 ．脯氨酸标准母液：称取 10mg 脯氨酸溶于少量 80% 乙醇中，再用蒸馏水定容至 100mL, 成 100μg/L 母液。

5 ．人造沸石、活性碳等。

【实验步骤】 取绿豆种子，用水吸胀，萌动后加洗净的河沙覆盖，放在光照培养箱中培养（ 25 ℃ ，每天光照 12h ），当苗高 3~5cm 时，即可进行干旱 胁迫 处理。

? 一盆浇充足水分作为对照，另一盆干旱处理 24h 。

? 肉眼观察伤害症状。

? 取样和测定

测相对电导率：

每份取 2g （地上部分），剪成小段（ 1.0cm 左右），置小烧杯中，用去离子水洗三次，沥干，准确加入 20ml 去离子水，放置 1h, 摇匀 , 用 DDS -11A 电导率仪测得的电导率为 R 1 。将材料于微波炉中煮沸，彻底破坏材料的膜结构，冷却至室温后，测电导率 R 2 。

测脯氨酸含量：

1 ．脯氨酸标准曲线制作：吸取脯氨酸标准母液 0, 0.5, 1.25, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0, 15.0mL 分别放入 8 个 50mL 容量瓶中，分别加入蒸馏水定容至 50mL ，配成 0.0 ， 1.0 ， 2.5 ， 5.0 ， 10.0 ， 15.0 ， 20.0 ， 30.0μg/mL 的系列溶液。分别吸取上述各标准溶液 2mL ，冰醋酸 2mL ，茚三酮试剂 2mL ，加入到 10mL 带塞刻度试管中，塞上塞子，于沸水浴中加热 15 分钟，用分光光度计测定 520nm 的光密度值，以零浓度为空白对照。将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标制作标准曲线。

2. 测定样品的脯氨酸含量

（ 1 ）提取脯氨酸：分别称取胚轴，每种处理各取三份，每份 0.3g 。剪碎，加入适量 80% 乙醇，少量石英砂，于研钵中研磨成匀浆。匀浆液全部转移至 25mL 刻度试管中，用 80% 乙醇洗研钵，将洗液移入相应的刻度试管中，最后用 80% 乙醇定容至刻度，混匀， 80 ℃水浴中提取 20 分钟。

(2 ）除去干扰的氨基酸： 向提取液中加入约 0.4g 的人造沸石和 0.2g 活性碳，强烈振荡 5 分钟，过滤，滤液备用。

（ 3 ）脯氨酸含量的测定： 分别吸取上述提取液 2mL 于刻度试管中，再取一支刻度试管，加入 2mL 80% 乙醇作为参比，分别向上述各试管中加入 2mL 冰醋酸和 2mL 茚三酮试剂，沸水浴中加热 15 分钟，冷却后在分光光度计测 520nm 处各样品的光密度，从标准曲线上查出每毫升被测样品液中脯氨酸的含量。

【实验 结果及计算 】

用下列公式计算相对电导率，表示质膜相对透性：

相对电导率（ % ） =R 1 /R 2 × 100%

样品中脯氨酸含量的计算 :

脯氨酸含量 (μg/g)=(c x v/a)/w 或

脯氨酸含量 (%)=[(c*v)/a]/w*10 6 ×100

其中， C ：由标准曲线上查得的脯氨酸微克数；

v ：提取液总体积（ mL ）

a ：测定液体积（ mL ）

w ：样品重（ g ）

注意事项：质膜相对透性的测定虽简单，但干扰因素多，测定时应注意以下问题：

? 取材的一致性，代表性。

? 器皿和用具要清洁。

? 测试条件要一致，如测试温度等要一致。

? 注意不同材料其适宜的浸泡时间均不相同。

范文二：植物体内游离脯氨酸含量的测定

好风光好风光恢复供货才

实验20 植物体内游离脯氨酸含量的测定

一、原理

当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。植株体内脯氨酸含量在—定程度上反映了植株体内的水分情况，因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。

用人造沸石在 pH 1~7 范围内振荡溶液，可除去干扰的氨基酸或使不与茚三酮反应(如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等)，脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应，其含量与颜色深浅成正相关，可用分光光度计测定。此法有专一性。 二、实验材料、试剂与仪器设备

(一)实验材料

植物叶片。

(二)试剂

? 80% 乙醇。

? 人造沸石。

活性炭。 ?

4 (茚三酮试剂:将 2.50 g 茚三酮于 60 mL 冰醋酸和 40 mL 6 mol/L 磷酸中，加热( 70 ?)溶解。试剂至少在 24 小时内稳定。

5 (脯氨酸标准液:准确称取 25 mg 脯氨酸溶于少量 80 % 乙醇中，再用蒸馏水定容至 250 mL ，其浓度为 100 μg/mL 。再取此液 10 mL ，用蒸馏水稀释至 100 mL ，即成 10 μg/mL 的脯氨酸标准液。

(三)仪器设备

分光光度计，水浴锅，移液管，容量瓶，冰醋酸，仪器药品，离心机，烧杯，研钵，试管，恒温水浴

三、实验步骤

吸取脯氨酸标准母液 0 、 0.2 、 0.4 、 0.8 、 1.2 、 1.6 、 2.0 mL 1 (绘制标准曲线

分别放入 7 支具塞刻度试管，分别加入蒸馏水至 2.0 mL, 其脯氨酸含量分别为 0 、 2.0 、 4.0 、 8.0 、 12.0 、 16.0 、 20.0 μg 。分别吸取上述标准溶液 2 mL ，加冰醋酸 2 mL, 茚三酮试剂 2 mL 加入试管中，混匀后加玻璃球塞，在沸水浴中加热 15 min 。用分光光度计于波长 515 nm 下进行比色测定，以零浓度为空白对照。将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标作标准曲线。

2. 植株样品液的提取 选取植株功能叶片 2 g ，用 3 mL 80 % 乙醇研磨(放少许石英砂)成浆状。用 80 % 乙醇洗研钵，将提取物和洗液置于试管中。 80 % 乙醇总量为 10 mL 。加盖置于黑暗中室温下提取 24 h ，或 80 ?恒温水浴中提取 20 min 。

将提取液在放有活性炭的滤纸上进行过滤，重复过滤一次，除去色素和残渣。将滤 液置于试管中，加其重量 1/5 的人造沸石强烈振荡 5 min 。将上层液在离心机上离心 10 min ，上清液备用。

3. 样品溶液的测定 取 2 mL 上清液置于试管中，再加入 2 mL 冰醋酸和 2 mL 茚三酮试剂，加盖密封，在沸水浴上加热 15 min 。用 3 mL 80% 乙醇代替样品液作为对照。在分光光度计上测 515 nm 处各样品的吸光度，从标准曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。 四、结果计算

样品中脯氨酸含量的计算:

脯氨酸含量( μg/g ) =

式中: C ——由标准曲线上查得的脯氨酸的质量， μg 。

V T ——提取液总体积， mL 。

V 1 ——测定液体积， mL 。 W ——样品质量， g 。

[ 思考题 ]

植物体内游离脯氨酸测定有何意义,

范文三：植物体内游离脯氨酸含量的测定

实实20 植物游脯酸含量的实定 体内离氨

一、原理

当体内氨体内氨—体内植物缺水实的脯酸含量增加。植株脯酸含量在定程度上反映了植株的水分

情～因而可以作实植物缺水情的考性生理指实。 况况参

用人造沸石在 pH 1~7 范实振实溶液～可除去干实的基酸或使不实三实反实;如甘酸、谷内氨与氨氨

酸、天冬酸、丙酸、实酸、胱酸、丙酸、精酸等,～脯酸实三实实实呈实色反实～其含氨氨氨氨苯氨氨氨与

量实色深成正相实～可用分光光度实实定。此法有实一性。 与浅

二、实实材料、实实实器实实 与

;一,实实材料

植物片。 叶

;二,实实

? 80% 乙醇。

? 人造沸石。

? 活性炭。

4 ,实三实实实, 将2.50 g 实三实于 60 mL 醋酸和 冰40 mL 6 mol/L 酸中～加实; 磷70 ?,溶解。实实至少在 24 小实实定。 内

5 ,脯酸实准液,准取 氨确称25 mg 脯酸溶于少量 氨80 % 乙醇中～再用蒸实水定容至 250 mL ～其实度实 100 μg/mL 。再取此液 10 mL ～用蒸实水稀实至 100 mL ～成 即10 μg/mL 的脯酸实准液。 氨

;三,实器实实

分光光度实～水浴实～移液管～容量～醋酸～实器实品～心机～实杯～实～实管～恒水浴 瓶冰离研温

三、实实步实

1 ,实制实准曲实 吸取脯酸实准母液 氨0 、 0.2 、 0.4 、 0.8 、 1.2 、 1.6 、 2.0 mL 分实放入 7

支具塞刻度实管～分实加入蒸实水至 2.0 mL, 其脯酸含量分实实 氨0 、 2.0 、 4.0 、 8.0 、 12.0 、

16.0 、 20.0 μg 。分实吸取上述实准溶液 2 mL ～加醋酸 冰2 mL, 实三实实实 2 mL 加入实管中～混后加璃球塞～在沸水浴中加实 匀玻15 min 。用分光光度实于波实 515 nm 下实行比色实定～以零实度实空白实照。实定实果以脯酸实度实坐实～以吸光度实实坐实作实准曲实。 将氨横

2. 植株实品液的提取 实取植株功能片 叶2 g ～用 3 mL 80 % 乙醇磨;放少实石英砂,成实研

状。用 80 % 乙醇洗实～提取物和洗液置于实管中。 研将80 % 乙醇实量实 10 mL 。加盖置于黑暗中室下提取 温24 h ～或 80 ?恒水浴中提取 温20 min 。

将残将提取液在放有活性炭的实实上实行实实～重实实实一次～除去色素和渣。实 液置于实管中～加其重量 1/5 的人造沸石强烈振实 5 min 。上实液在心机上心 将离离10 min ～上液实用。 清

3. 实品溶液的实定 取 2 mL 上液置于实管中～再加入 清2 mL 醋酸和 冰2 mL 实三实实实～加盖密封～在沸水浴上加实 15 min 。用 3 mL 80% 乙醇代替实品液作实实照。在分光光度实上实 515

nm 实各实品的吸光度～实准曲实上求出实品溶液中脯酸含量。 从氨

四、实果实算

实品中脯酸含量的实算, 氨

脯酸含量; 氨μg/g , =

式中, C ——由实准曲实上实得的脯酸的实量～ 氨μg 。

V T ——提取液实实～ 体mL 。

V 1 ——实定液实～ 体mL 。

W ——实品实量～ g 。

[ 思考实 ]

植物游脯酸实定有何意实, 体内离氨

范文四：植物组织中游离脯氨酸含量的测定

植物体内游离脯氨酸含量的测定

一、原理

当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。植株体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植株体内的水分情况。因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。

l—7范围内振荡溶液，可除去干扰的氨基酸或使不与茚三 用人造沸石在pH

酮反应(如甘氨酸、谷氦酸、天冬氨酸、丙氨酸、绩氨酸、肮氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等)，脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应，其含量与颜色深浅成正相关，可用分光光度计测定。此法有专一性。

二、实验材料、试剂与仪器设备

1(实验材料

植物叶片。

2(试剂

(1)80,乙醇。

(2)人造沸石。

(3)活性炭。

(4)茚三酮试剂:将2.50 g茚三酮于60ml冰醋酸和40ml 6mol/L磷酸中,

?)溶解。试剂至少在24h内稳定。 加热(70

(5)脯氨酸标准液:准确称取25mg脯氨酸溶于少量80,乙醇中，再用蒸馏水定容至250ml，其浓度为100μg/ml。再取此液10ml，用蒸馏水稀释至100ml，即成l0μg/ml的脯氨酸标准液。

3(仪器设备

分光光度计，水浴锅,移液管，容量瓶，冰醋酸，仪器药品，离心机，烧杯，试管，恒温水浴。

1(绘制标准曲线

吸取脯氨酸标准母液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml分别放入7支具塞刻度试管，分别加入蒸馏水至2.0ml，其脯氨酸含量分别为O、2.0、4(0、8(0、12.0、16.0、20.0μg。分别吸取上述标准溶液2ml，加冰醋酸2ml，茚三酮试剂2ml加入试管中，混匀后加玻璃球塞，在沸水浴中加热15min。用分光光度计于波长515nm下进行比色测定，以零浓度为空白对照。将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标作标准曲线.

2(植核样品液的提取

选取植株功能叶片2g，用3ml 80,乙醇研磨(放少许石英砂)成浆状。用80,乙醇洗研体，将提取物和洗液置于试管中。80,乙醇总量为10ml。加盖置于黑暗中室温下提取24h，或80%恒温水浴中提取20min。

将提取液在放有活性炭的滤纸上进行过滤，重复过滤一次，除去色素和残渣。将滤液置于试管中，加其重量1/5的人造沸石强烈振荡5min。将上层液在离心机上离心10min，上清液备用。

3(样品溶液的测定

取2ml上清液置于试管中，再加入2ml的冰醋酸和2ml茚三酮试剂，加盖密封，在沸水浴上加热15mln。用3ml 80,乙醇代替样品液作为对照。在分光光度计上测515nm处各样品的吸光度，从标准曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。 四、结果计算

样品中脯氨酸含量的计算:

脯氨酸含量(μg/g)=C×V/W×VT1

式中:C—由标准曲线上查得的脯氨酸的质量，μg。

V—提取液总体积，ml。 T

W—样品质量，g。

V—测定液体积，ml。 1

范文五：实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定

实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定

植物在正常条件下，游离脯氨酸含量很低，但遇到干旱、低温、盐碱等逆境时，游离脯氨酸便会大量积累，并且积累指数与植物的抗逆性有关。因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。

【原理】

采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减少了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态(干或鲜样)限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nM处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。

【仪器与用具】

分光光度计；水浴锅；漏斗；20ml大试管；20ml具塞刻度试管9支；5～10ml滴管。

【试剂】

1、3%磺基水杨酸水溶液：3g磺基水杨酸溶于100mL蒸馏水中 2、甲苯

3、2.5%酸性茚三酮显色液：将 2.50 g 茚三酮于 60 mL 冰醋酸和 40 mL 6 mol/L 磷酸中，加热（ 70 ℃）溶解。（冰乙酸和6mol/L磷酸以3：2混合，作为溶剂配制，此液在4℃下2-3天有效）

4、脯氨酸标准液：准确称取25mg脯氨酸，蒸馏水溶解后定容到250ml，其浓度为100μg/mL。再取此液10ml，用蒸馏水稀释至100ml，即成10μg/mL的脯氨酸标准液。

【方法】

1、标准曲线制作

1）取7支具塞刻度试管按下表加入各试剂。混匀后在沸水中加热40min。

2）取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以0号管为对照在波长520nm下比色。

3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。

2、样品测定

1）脯氨酸提取 取不同处理的剪碎混匀小麦叶片0.2～0.5g(干样根据水分含量酌减)，分别置于大试管中，加入5ml 3％硝基水杨酸溶液，于沸水浴中浸提10min（提取过程中要经常摇动）。

2）萃取 取出试管冷却后，吸取上清液2ml于干净试管，加2ml冰乙酸和3ml显色液，于沸水浴中加热40min。取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质，静置待分层后，用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在分光光度计上520nm波长处比色，求得吸光度值。

3）结果计算

从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数。 脯氨酸[μg／g(干或鲜样)]＝（C×V/a）/ W 式中:

C:提取液中脯氨酸浓度(μg)，由标准曲线求得； V:提取液总体积(ml)； A:测定时所吸取的体积(ml)； W:样品重(g)。

【思考题】

1、植物体内游离脯氨酸测定有何意义？

2

、当改变萃取剂时，比色应做哪些改变，如何选择最适波长，如何选择最佳萃取剂？

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